WO2008121021A1 - Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины - Google Patents

Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины Download PDF

Info

Publication number
WO2008121021A1
WO2008121021A1 PCT/RU2008/000176 RU2008000176W WO2008121021A1 WO 2008121021 A1 WO2008121021 A1 WO 2008121021A1 RU 2008000176 W RU2008000176 W RU 2008000176W WO 2008121021 A1 WO2008121021 A1 WO 2008121021A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
extract
dihydroquercetin
wood
mixture
solvent
Prior art date
Application number
PCT/RU2008/000176
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Nikolay Eduardovich Nifantiev
Dmitri Vladimirovich Yashunsky
Vladimir Mikhailovich Menshov
Yury Evgenievich Tsvetkov
Dmitri Evgenievich Tsvetkov
Original Assignee
Nikolay Eduardovich Nifantiev
Dmitri Vladimirovich Yashunsky
Vladimir Mikhailovich Menshov
Yury Evgenievich Tsvetkov
Dmitri Evgenievich Tsvetkov
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nikolay Eduardovich Nifantiev, Dmitri Vladimirovich Yashunsky, Vladimir Mikhailovich Menshov, Yury Evgenievich Tsvetkov, Dmitri Evgenievich Tsvetkov filed Critical Nikolay Eduardovich Nifantiev
Priority to EP08753884A priority Critical patent/EP2143435B1/en
Priority to CN200880010627A priority patent/CN101678057A/zh
Priority to AT08753884T priority patent/ATE552840T1/de
Priority to CA2682143A priority patent/CA2682143C/en
Priority to US12/450,417 priority patent/US20100286255A1/en
Priority to EA200901320A priority patent/EA016246B1/ru
Publication of WO2008121021A1 publication Critical patent/WO2008121021A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/13—Coniferophyta (gymnosperms)
    • A61K36/15—Pinaceae (Pine family), e.g. pine or cedar
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/075—Ethers or acetals
    • A61K31/085—Ethers or acetals having an ether linkage to aromatic ring nuclear carbon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Definitions

  • the present invention relates to the field of high-tech wood-chemical wood processing.
  • the invention provides a method for isolating valuable physiologically active compounds from tree wood, including extracts enriched in lignans and flavonoids (lignan-flavonoid complexes), as well as separated lignans and flavonoids intended for subsequent use in the preparation of dietary supplements and chemical-pharmaceutical products.
  • the level of technology including extracts enriched in lignans and flavonoids (lignan-flavonoid complexes), as well as separated lignans and flavonoids intended for subsequent use in the preparation of dietary supplements and chemical-pharmaceutical products.
  • Lignans and flavonoids belong to the class of phenolic compounds contained in different parts of plants, for example, in coniferous wood. Chemical extracts containing derivatives of lignans and flavonoids and preparations based on them are widely used in medicine and cosmetics, the food industry, as agrochemical preparations in the production of plant products, as well as in other areas.
  • One of the compounds of interest related to lignans is secoisolariciresinol (CEKO).
  • CEKO secoisolariciresinol
  • DHA dihydroquercetin
  • DHA DHA has been widely studied in research laboratories to determine the areas of its practical use. In Russia, DHA is most widely used in a number of biologically active drugs (for example, Kapilap, Flukol, and others) and some foods, which is associated with high antioxidant, hepatoprotective, immunostimulating, antimicrobial, and other practically beneficial properties of this connections.
  • a growth and development regulator for agricultural crops has been created, commercialized under the commercial designation Lariksin (RF patent X ° 2229213; RF patent
  • SECO is also a very promising drug for practical use, especially for the production of medicinal and biologically active drugs, as well as functional foods, due to the antioxidant, anti-inflammatory, phytoestrogenic, antimicrobial, and other beneficial properties of this compound.
  • a pharmaceutical composition WOO ⁇ / 020254
  • CEKO isolated from the plant Stereosperitis retopatitis
  • functional foods WO02 / 080702
  • hepatoprotective, anti-cancer drugs US 2006/0035964
  • other drugs including CEKO
  • knotty zones and branches of coniferous trees contain significant amounts of phenolic compounds [V. Nolmbom, S. Eskermap, P. Eklupd, J. Nemmipg, L. Nisula, M. Reupapep, R. Sjoholm, A. Supdberg, K. Supdberg, S. Willf ⁇ g, «Knots tgees Ip - A pew rish sourse ° F lignans» , Rhuthoshetistr ⁇ Reviws 2: 331-340, 2003.).
  • the disadvantages of the described method include the following technical limitations.
  • the proposed conditions are designed to single out a single target product, a representative of the lignan class of 7-hydroxymatayrene (“HMR”).
  • HMR 7-hydroxymatayrene
  • the wood of coniferous trees usually contains more than one component related to phenolic compounds, and such components do not belong only to the class of lignans.
  • wood also contains representatives of the class of flavonoids, as well as lignan derivatives, which have great practical value.
  • the economic feasibility of processing the specified type of wood raw material requires the development of methods for the simultaneous extraction of compounds of different classes, such as lignans and flavonoids, for their further use.
  • the polar solvent used in this method is generally defined by indicating the dielectric constant (which must be greater than 3 at 25 ° C).
  • These technically important solvents such as diethyl ether, chloroform and methylene chloride (their dielectric permeabilities are 4.34, 4.70 and 8.9, respectively) correspond to the specified dielectric constant, in which DHA is very soluble, which does not allow the use of these solvents for the extraction of DHA .
  • the present invention is to develop a method of separation of phenolic compounds from wood, devoid of these disadvantages.
  • the use of the proposed method opens up broad prospects for the production of a wide range of dietary supplements, chemical and pharmaceutical products and other products.
  • the ground wood of the knotted zone is extracted with a non-layered mixture of an organic solvent with water, with an organic solvent content of 50-75%, to obtain an extract containing SKO and DHA, the extract is processed to remove the solvent to obtain the final mixture containing SKO and DHA.
  • Washing the ground wood of the knot zone with alkane as in the well-known method [US 2004/0199032 of October 7, 2004], or with a current of CO 2 (including under supercritical fluid extraction) allows only the simplest low molecular weight organic molecules to be extracted from the wood pulp compounds that do not affect the efficiency of extraction of a mixture of DHA and SECO in the experimental conditions of the present invention.
  • the resulting mixture containing SECO and DHA is further subjected to selective extraction and crystallization, to isolate purified target compounds.
  • the extract containing secoisolaricizininol and dihydroquercetin is further processed to remove non-polar components, the supernatant is removed, and the resulting residue is chromatographed on a layer of silica gel, followed by removal of the eluate, obtaining a dry mixture of secoisolaricrizinol and dihydroquercetin.
  • coniferous wood can be used as wood, preferably larch (Larix), in particular, Siberian larch (Larih sibirivic ⁇ ) and Dahurian (Larih dahiri ⁇ ) and fir ⁇ Abies), in particular, Siberian fir (Abies sibiriri), and “white pears” are used as the knotty zone of wood.
  • the highest extraction efficiency of SECO and DHA is achieved using mixtures of organic solvent and water, and lower in pure organic solvent.
  • solubility is lower in pure water (not shown in Fig. 3-8), in which the target compounds have a very limited solubility (dissolution in water requires heating). Therefore, the most important property of the used organic solvent according to this invention is its ability to mix with water in the range of these ratios, giving a homogeneous mixture with the required dissolving activity.
  • the analysis of solvents according to this invention shows that their polarity is characterized by a dielectric constant value from 10 to 40 at 25-30 ° C.
  • Acetone can be used as an organic solvent, while its content in a mixture with water is from 50 to 75%, preferably from 60% to 70%.
  • isopropyl alcohol can be used as an organic solvent, while its content in a mixture with water is from 50 to 75%, preferably from 60% to 70%.
  • organic solvent for example ethyl alcohol, satisfying the above characteristics, and the solvent content in a mixture with water ranges from 50 to 75%, preferably from 60% to 70%.
  • the key advantage of the present invention is to provide an effective simultaneous extraction from the pulp both the compound of a number of lignans and the flavonoid compound of practical interest for use as a mixture or after separation.
  • the advantage over the known method is also the ease of isolating the target compounds of the present invention, which does not require special drying of the extracted wood (in a known method, freeze drying), grinding frozen wood pulp and washing with alkane before extraction with an aqueous-organic mixture.
  • the outputs of DHA in the conditions of this invention correspond to the best known methods of obtaining this compound from natural objects (for example, according to the methods described in the following sources: Nifantiev E.E.,
  • FIG. 1 shows the chromatogram of an extract from sawdust “white” of larch knots
  • FIG. 2 shows the chromatogram of the extract from sawdust of “black” knots
  • FIG. 3 shows the results of the extraction of the knot mass (“white scars”) of larch with acetone and water-acetone mixtures, the weight amounts of DHA and SECO in the extracts are shown
  • FIG. 4 shows the results of the extraction of the knot mass (“whiteness”) of larch with acetone and water-acetone mixtures, the total weight of the extracts after evaporation of the solvent is shown
  • FIG. 1 shows the chromatogram of an extract from sawdust “white” of larch knots
  • FIG. 2 shows the chromatogram of the extract from sawdust of “black” knots
  • FIG. 3 shows the results of the extraction of the knot mass (“white scars”) of larch with acetone and water-acetone mixtures, the weight amounts of DHA and SECO in the extracts are shown
  • FIG. 5 shows the results of the extraction of the knotty mass (“whiteness”) of larch with acetone and water-acetone mixtures, the content of DHA and SECO in the evaporated acetone and water-acetone extracts is shown
  • FIG. 6 shows the results of the extraction of the knot mass (“whiteness”) of larch by isopropanol and water-isopropanol, the weight amounts of DHA and SECO in the extracts are shown
  • FIG. 7 shows the results of the extraction of the knot mass (“whiteness”) of larch by isopropanol and water-isopropanol, the total weight of the extracts after evaporation of the solvent is shown
  • the extracts enriched with lignans and flavonoids are widely used for the production of dietary supplements and chemical-pharmaceutical products of various types.
  • the corresponding biological activity of the lignan-flavonoid complexes is determined by the content of lignified and flavonoid components in them, as demonstrated by the examples below, which do not limit the scope of the invention.
  • the antioxidant properties of lignan-flavonoid complexes are determined by the total content of lignan (CEKO) and flavonoid (DHA) components in them.
  • Table 1 demonstrates the antioxidant properties of DHA, CEKO, as well as their complexes, extracted from the Knotwood larch mass according to this invention (the description of the experiment is given in Example 18). From Table 1, it can be seen that equimolecular amounts of DHA and SECO exhibit the same antioxidant activity, as do lignan-flavonoid complexes containing the same total amount of lignified (CEKO) and flavonoid (DHA) components in them.
  • CEKO isolated lignan component
  • Table 2 shows the extragenic activity of CEKO, as well as the complexes of CEKO and DHA, extracted from the Knot of larch according to this invention (the experiment is described in Example 19).
  • drugs containing the same amount of CEKO the same proliferative effect is observed (experiment with MCF-8 cells), as well as the ability to competitively inhibit the similar effect of the natural hormone - estradiol.
  • Standard portions (10 g) of the crushed mass of “white” larch knots were subjected to extraction in 100 ml of acetone or water-acetone mixtures of different composition at room temperature for 24 hours.
  • the extracts were separated by filtration through a glass filter (> H ° 3) and evaporated to dryness.
  • FIG. 3-5 shows the weight amounts of DHA and SECO in extracts (Fig. 3), the total weight of extracts after evaporation of the solvent (Fig. 4), as well as the content of DHA and SECO in one stripped off acetone and water-acetone extracts (Fig. 5).
  • FIG. 3-5 shows the weight amounts of DHA and SECO in extracts (Fig. 3), the total weight of extracts after evaporation of the solvent (Fig. 4), as well as the content of DHA and SECO in one stripped off acetone and water-acetone extracts (Fig. 5).
  • Analysis of the chromatograms suggests that the extraction with mixtures with an acetone content in the range from 50% to 75%, in particular from 60% to 70%, achieves the most effective extraction of DHA and SECO. With an increase in the content of acetone in the extractant over 75%, or with a decrease below 50%, the content of DHA and SECO in the extract decreases.
  • Example 3 Extraction of the knot mass of larch by isopropyl alcohol and water-isopropanol mixtures and chromatographic analysis of the components of the extracts.
  • FIG. 6-8 show the weight amounts of DHA and SECO in extracts (Fig. 6), the total weight of extracts after evaporation of the solvent (Fig. 7), as well as the content of DHA and SECO in one stripped off isopropyl and water-isopropanol extracts (Fig. 8 ).
  • Analysis of the chromatograms and data on the total weight of the extracts suggests that the extraction with mixtures with an isopropanol content in the range from 50% to 75%, in particular from 60% to 70%, achieves the most effective extraction of DHA and SECO.
  • Extraction of crushed larch knots was performed with 70% aqueous acetone, as described in Example 5.
  • a sample of the obtained product weighing 5 g was added a mixture of ethyl acetate-petroleum ether (1: 2, 10 ml) and stirred at 50 ° C, the temperature was brought to room temperature and the supernatant was separated by decantation (or by filtration through paper or glass filter).
  • the residue obtained was chromatographed on a layer of silica gel, eluting with a mixture of DHA and SECO with methyl tertiary butyl ether (100 ml).
  • the eluate was evaporated to dryness to obtain 1.45 g of a powder, which according to HPLC (under the conditions described in Example 1) was a mixture of DHA and SECO in a ratio of about 1: 1 with a purity of 75% or more.
  • spent and selection of mixtures of CEKO and DHA specified purity when processing organic extracts of the knotty mass of other aqueous-organic mixtures of this invention, for example, formed from the products obtained in Examples 2, 7, 8 and 15-17.
  • the ratio of CEKO and DHA in the excreted product is determined by their content in the feedstock.
  • aliphatic or aromatic compounds for example, individual alkanes, petroleum ether, toluene and others can be used as hydrocarbon solvents.
  • Organic compounds can be used as a polar solvent. characterized by dielectric constant values from 4 to 25 at 25-30 ° C. For example, you can use a mixture of ethyl acetate and petroleum ether in a 1: 2 ratio.
  • extracts of CEKO and DHA of the indicated purity were extracted during the processing of the organic extracts of the knotty mass by other water-organic mixtures according to this invention, for example, formed from the products obtained in Examples 2, 7, 8 and 15-17.
  • the ratio of CEKO and DHA in the excreted product is determined by their content in the feedstock.
  • Extraction of crushed larch knots was performed with 70% aqueous acetone, as described in Example 5.
  • a sample of the obtained product weighing 5 g was stirred for 10-60 minutes with heating not higher than 5O 0 C with 10-30 ml of a mixture of hydrocarbon solvent and a more polar solvent with dielectric constants from 4 to 25 at 25-30 ° C
  • Technologically available aliphatic or aromatic compounds, such as individual alkanes, petroleum ether, toluene, and others, can be used as a hydrocarbon solvent.
  • the amount of the polar component taken depends on the value of its dielectric constant.
  • a dielectric constant of from 20 to 25 10% is taken up, while with a dielectric constant of 15 to 20, 20% is taken, while at a dielectric constant from 10 to 15, 30% is taken, and at dielectric permeability from 4 up to 10 is taken 40% -ab.
  • a mixture of ethyl acetate and petroleum ether in a ratio of 1: 2 can be used according to the indicated solvent characteristics.
  • extracts of CEKO and DHA of the indicated purity were extracted during the processing of the organic extracts of the knotty mass by other water-organic mixtures according to this invention, for example, formed from the products obtained in Examples 2, 7, 8 and 15-17.
  • the ratio of CEKO and DHA in the excreted product is determined by their content in the feedstock.
  • Extraction of crushed larch knots was performed with 70% aqueous acetone as described in Example 5. 50 ml of water was added to a 5 g sample of the obtained product and boiled for 1 hour with stirring, the hot solution was separated from the oily residue, the solution was brought to room temperature and extracted chloroform (8x30 ml). The organic phase was separated, dried and evaporated to dryness to give 670 mg of raw CEKO with a purity of 75% or more (determined by HPLC under the conditions described in Example 1).
  • Example 13 Production of DHA with a purity of 95-97% or more.
  • DHA with a purity of 95-97% or more was obtained by recrystallization of the raw material (Example 12).
  • a sample of DHA (0.48 g) obtained under the conditions of Example 12 was dissolved in 5 ml of deaerated water at 70-80 ° C, the resulting solution was cooled to 4 ° C, and the mixture was kept until the end of crystallization.
  • the precipitated crystals were filtered and dried in vacuo to yield 0.31 g of DHA of the indicated purity, which was monitored by HPLC under the conditions described in Example 1.
  • CEKO with a purity of 95-97% and more was obtained by recrystallization of raw (Example 12).
  • a sample of CEKO (660 mg) obtained under the conditions of Example 12 was dissolved in 7 ml of diethyl ether at 30 ° C, the solution was cooled to 4 ° C, and the mixture was kept until the end of crystallization.
  • the precipitated crystals were filtered and dried in vacuo to give 405 mg of SECO of the indicated purity controlled by HPLC under the conditions described in Example 1.
  • Yeast cells were separated from the medium by centrifugation, washed twice with water, and incubated with hydrogen peroxide and antioxidants in an aqueous suspension (OD 0.1-0.15) for 1 hour with occasional shaking. Then, appropriate dilutions were made and the yeast was sown on an agarized glucose-peptone medium, cultured for 2 days at 30 ° C, and then the number of grown colonies and the survival of the S. serus visiae cells were counted (Table 1). Table 1. The effect of antioxidants on the survival of cells of S.êterevisiae when exposed to hydrogen peroxide
  • Example 19 A comparative study of the proliferation of human breast cancer cell MCF-7 when exposed to estradiol, CEKO and CEKO containing extracts.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)

Abstract

Предложен способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины. В предложенном способе измельченную древесину сучковой зоны экстрагируют нерасслаивающейся смесью органического растворителя с водой, при содержании растворителя 50-75%, с получением экстракта, содержащего секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, обрабатывают экстракт для удаления растворителя с получением конечной смеси, содержащей секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин. В другом варианте выполнения измельченную древесину сучковой зоны экстрагируют нерасслаивающейся смесью органического растворителя с водой, при содержании растворителя 50-75%, с получением экстракта, содержащего секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, обрабатывают экстракт для удаления растворителя с получением смеси, содержащей секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, которую подвергают избирательной экстракции и кристаллизации с выделением секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина. В еще одном варианте выполнения измельченную древесину сучковой зоны экстрагируют нерасслаивающейся смесью органического растворителя с водой, при содержании растворителя 50- 75%, с получением экстракта, содержащего секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, затем экстракт обрабатывают для удаления неполярных компонентов, удаляют надосадочную жидкость, а полученный остаток хроматографируют на слое силикагеля с последующим удалением элюата, получая сухую смесь секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина. Предлагается также применение секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина в качестве компонентов биологически активных добавок и химико- фармацевтических изделий.

Description

I
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СЕКОИЗОЛАРИЦИРЕЗИНОЛА И ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА ИЗ ДРЕВЕСИНЫ.
Область техники.
Настоящее изобретение относится к области высокотехнологичной лесохимической переработки древесины.
В изобретении предложен способ выделения из древесины деревьев ценных физиологически активных соединений, включая обогащенные лигнанами и флавоноидами экстракты (лигнан-флавоноидные комплексы), а также разделенных лигнанов и флавоноидов, предназначенных для последующего использования при получении биологически-активных добавок и химико- фармацевтических изделий. Уровень техники.
Лигнаны и флавоноиды относятся к классу фенольных соединений, содержащихся в различных частях растений, например в древесине хвойных пород деревьев. Содержащие производные лигнанов и флавоноидов химические экстракты и изготавливаемые на их основе препараты находят широкое применение в медицине и косметике, пищевой промышленности, в качестве агрохимических препаратов при производстве растениеводческой продукции, а также в других областях. Одним из представляющих интерес соединений, относящихся к лигнанам, является секоизоларицирезинол (CEKO). В качестве представителя класса флавоноидов в способе по данному изобретению получают дигидрокверцетин (ДГК), для обозначения которого в литературе часто используют синоним - таксифолин.
Figure imgf000003_0001
ДГК
Figure imgf000003_0002
ДГК достаточно широко изучался в исследовательских лабораториях для выяснения областей его практического использования. В России ДГК наиболее широко применяется в составе целого ряда биологически активных препаратов (например, препараты «Kaпилap», «Флyкoл» и др.) и некоторых продуктов питания, что связано с высокими антиоксидантным, гепатопротекторным, иммуностимулирующим, противомикробным и другими практически полезными свойствами этого соединения. Так, на основе ДГК, выделяемого из опилок лиственницы сибирской и даурской, создан регулятор роста и развитии сельскохозяйственных культур, коммерциализация которого проводится под коммерческим обозначением «Лapикcин» (патент РФ X°2229213; патент РФ
Figure imgf000004_0001
CEKO также представляет собой весьма перспективный препарат для практического использования, особенно для производства лекарственных и биологически активных препаратов, а также функциональных продуктов питания, благодаря антиоксидантным, противовоспалительным, фитоэстрагенным, противомикробным и другим полезным свойствам этого соединения. Так, известна фармацевтическая композиция (WOOЗ/020254) на основе CEKO (выделен из растения Stеrеоsреrтит реrsопаtит), а также функциональные продукты питания (WO02/080702), гепатопротекторные, противораковые препараты (US 2006/0035964) и другие препараты, включающие CEKO.
Известно, что сучковые зоны и ветки хвойных пород деревьев содержат значительные количества фенольных соединений [В. Ноlmbоm, С. Есkеrmап, P. Еkluпd, J. Неmmiпg, L. Nisulа, M. Rеuпапеп, R. Sjоhоlm, А. Suпdbеrg, К. Suпdbеrg, S. Willfδг, «Knots iп tгееs - А пеw riсh sоurсе оf lignans», Рhуtосhетistrγ Rеviеws 2: 331-340, 2003.). Авторами настоящего изобретения, однако, было экспериментально установлено, что предпочтительным сырьем для выделения представляющих интерес соединений в промышленном производстве являются только так называемые «бeлыe» сучки, то есть сучки, несущие живые ветки (см. Пример 1 ниже). Получение фенольных соединений из сучковых зон древесины известно
[см. патентную публикацию US 2004/0199032 от 7.10.2004]. В указанной публикации раскрыт способ выделения фенольных соединений из содержащей сучковые зоны древесины, в котором выполняют экстракцию измельченной древесины сучковой зоны полярным растворителем с последующим выделением веществ из экстракта.
К недостаткам описанного способа можно отнести следующие технические ограничения. Предложенные условия разработаны для выделения одного целевого продукта, представителя класса лигнанов 7-гидpoкcимaтaиpeзинoлa («HMR»). Однако древесина хвойных деревьев содержит обычно не один компонент, относящийся к фенольным соединениям, причем такие компоненты относятся не только к классу лигнанов. Кроме них в древесине содержатся и представители класса флавоноидов, также как и производные лигнанов, имеющие большую практическую ценность. Экономическая целесообразность переработки указанного типа древесного сырья требует разработки способов одновременного извлечения соединений разных классов, например лигнанов и флавоноидов, для их дальнейшего использования. Однако оказалось, что указанный известный способ [US 2004/0199032 от 7.10.2004] является мало эффективным для одновременного выделения лигнанов в смеси с флавоноидами, которые имеют отличный от лигнанов профиль растворимости в органических растворителях. Другим недостатком известного способа является необходимость подготовки древесины для экстракции, включающей стадии промывки алканом для удаления летучих компонентов, а также последующую сушку, в том числе для удаления содержащейся в древесине воды, присутствие которой видимо снижает экстрагирующую способность растворителя.
Применяемый в указанном способе полярный растворитель определен обобщенно, посредством указания на константу диэлектрической проницаемости (которая должна быть больше 3 при 25°C). Указанным величинам диэлектрической проницаемости, например, отвечают такие технологически важные растворители, как диэтиловый эфир, хлороформ и хлористый метилен (их диэлектрические проницаемости 4.34, 4.70 и 8.9, соответственно), в которых ДГК очень мало растворим, что не позволяет использовать указанные растворители для экстракции ДГК.
В известном способе (US 2004/0199032 от 7.10.2004) также отмечено, что в качестве полярного растворителя можно применять смесь aцeтoн:вoдa, однако 8 000176
выбранное соотношение (95:5 oб.%) компонентов смеси не позволяет получить представляющий интерес ДГК с достаточным выходом (см. Пример 2 ниже).
Задачей настоящего изобретения является разработка способа выделения фенольных соединений из древесины, лишенного указанных недостатков. Использование предложенного метода открывает широкие перспективы для производства широкого спектра биологически-активных добавок, химико- фармацевтических изделий и других продуктов.
Поставленная задача решается настоящим изобретением. В способе по изобретению измельченную древесину сучковой зоны экстрагируют нерасслаивающейся смесью органического растворителя с водой, при содержании органического растворителя 50-75%, с получением экстракта, содержащего CEKO и ДГК, обрабатывают экстракт для удаления растворителя с получением конечной смеси, содержащей CEKO и ДГК. Промывка измельченной древесины сучковой зоны алканом, как в известном способе [US 2004/0199032 от 7.10.2004], или током CO2 (в т.ч. в условиях сверхкритической флюидной экстракции) позволяет только извлечь из древесной массы простейшие низкомолекулярные большей частью малополярные органические соединения, что не влияет на эффективность экстракции смеси ДГК и CEKO в экспериментальных условиях настоящего изобретения. В другом варианте выполнения изобретения полученную смесь, содержащую CEKO и ДГК, дополнительно подвергают избирательной экстракции и кристаллизации с выделением очищенных целевых соединений.
В другом варианте выполнения изобретения экстракт, содержащий секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, дополнительно обрабатывают для удаления неполярных компонентов, удаляют надосадочную жидкость, а полученный остаток хроматографируют на слое силикагеля с последующим удалением элюата, получая сухую смесь секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина.
При этом в способах по данному изобретению в качестве древесины можно использовать древесину хвойных пород деревьев, предпочтительно, лиственницы (Lаriх), в частности, лиственницы сибирской (Lаriх sibiriсά) и даурской (Lаriх dаhиriсά) и пихты {Аbiеs), в частности, пихты сибирской (Аbiеs sibiriсά), а в качестве сучковой зоны древесины используют «бeлыe cyчки».
Как следует из данных, приведенных в Примерах 2 и 3, наибольшая эффективность извлечения CEKO и ДГК достигается при использовании смесей органического растворителя и воды, а в чистом органическом растворителе она ниже. Также, растворимость ниже и в чистой воде (не показано на Фиг. 3-8), в которой целевые соединения имеют весьма ограниченную растворимость (растворение в воде требует нагревания). Поэтому важнейшим свойством используемого органического растворителя по данному изобретению являются его способность смешиваться с водой в диапазоне указанных соотношений, давая гомогенную смесь с требуемой растворяющей активностью. Анализ растворителей по данному изобретению показывает, что их полярность характеризуется величиной константы диэлектрической проницаемости от 10 до 40 при 25-30 °C. В качестве органического растворителя могут использовать ацетон, при этом его содержание в смеси с водой составляет от 50 до 75%, предпочтительно от 60% до 70%.
В другом варианте выполнения в качестве органического растворителя могут использовать изопропиловый спирт, при этом его содержание в смеси с водой составляет от 50 до 75%, предпочтительно от 60% до 70%.
В других вариантах выполнения в качестве органического растворителя могут использовать и другие растворители, например этиловый спирт, удовлетворяющие указанным выше характеристикам, при этом содержание растворителя в смеси с водой составляет от 50 до 75%, предпочтительно от 60% до 70%.
Ключевым преимуществом настоящего изобретения является обеспечение эффективного одновременного извлечения из древесной массы как соединения ряда лигнанов, так и флавоноидного соединения, представляющих практический интерес для использования их в виде смеси или после разделения. Преимуществом перед известным способом является также и простота выделения целевых соединений по настоящему изобретению, не требующая специальной отсушки экстрагируемой древесины (в известном способе применяют лиофильную сушку), измельчения замороженной древесной массы и промывания алканом перед экстракцией водно-органической смесью.
Выходы ДГК в условиях данного изобретения соответствуют лучшим известным способам получения данного соединения из природных объектов (например, по способам, описанным в следующих источниках: Нифантьев Э.E.,
Коротеев M.П., Казиев Г.З., Уминский A.A. «Cпocoб выделения дигидpoквepцeтинa» //Патент РФ JV° 2180566, 2001 г.; Нифантьев Э.E., Коротеев
M.П., Казиев Г.З., Волков Г.A., Гатаулин Р.Ш. «Cпocoб комплексной переработки древесины лиcтвeнницы» //Патент РФ JЧ° 2233858, 2003 г.). Выход CEKO в условиях данного изобретения существенно превышает таковой при экстракции из других известных природных источников, например из растений
Stеrеоsреrтит реrsопаtит - 0.03% (WO 03/020254), Саrissа еdиlis - 0.0004%
[Рhуtосhетistrγ, 22 (1983) 749], Uпiреrиs сhiпепsis - 0.00245% [Рhуtосhетistrу, 31
(1992) 3659].
Ниже приведены примеры, не ограничивающие рамки изобретения, снабженные сопроводительными чертежами, на которых: на Фиг. 1 показана хроматограмма экстракта из опилок «бeлыx» сучков лиственницы, на Фиг. 2 приведена хроматограмма экстракта из опилок «чepныx» сучков, на Фиг. 3 приведены результаты экстракции сучковой массы («бeлыe cyчки») лиственницы ацетоном и водноацетоновыми смесями, показаны весовые количества ДГК и CEKO в экстрактах, на Фиг. 4 приведены результаты экстракции сучковой массы («бeлыe cyчки») лиственницы ацетоном и водноацетоновыми смесями, показан общий вес экстрактов после упаривания растворителя, на Фиг. 5 приведены результаты экстракции сучковой массы («бeлыe cyчки») лиственницы ацетоном и водноацетоновыми смесями, показано содержание ДГК и CEKO в упаренных ацетоновом и водноацетоновых экстрактах, на Фиг. 6 приведены результаты экстракции сучковой массы («бeлыe cyчки») лиственницы изопропанолом и водно-изопропанольными, показаны весовые количества ДГК и CEKO в экстрактах, на Фиг. 7 приведены результаты экстракции сучковой массы («бeлыe cyчки») лиственницы изопропанолом и водно-изопропанольными, показан общий вес экстрактов после упаривания растворителя, на Фиг. 8 приведены результаты экстракции сучковой массы («бeлыe cyчки») лиственницы изопропанолом и водно-изопропанольными, показано содержание ДГК и CEKO в упаренных изопропаноловом и водно- изопропаноловых экстрактах.
Обогащенные лигнанами и флавоноидами экстракты (лигнан- флавоноидные комплексы), как и лигнаны и флавоноиды после разделения, имеют широкое применение для получения биологически-активных добавок и химико-фармацевтических изделий разных типов. При этом, соответствующая биологическая активность лигнан-флавоноидных комплексов определяется содержанием в них лигнанного и флавоноидного компонентов, что демонстрируют приведенные ниже примеры, не ограничивающие рамки изобретения.
Так, антиоксидантные свойства лигнан-флавоноидных комплексов определяются суммарным содержанием в них лигнанного (CEKO) и флавоноидного (ДГК) компонентов. Таблица 1 демонстрирует антиоксидантные свойства ДГК, CEKO, а также их комплексов, экстрагируемых из сучковой массы лиственницы согласно данному изобретению (описание эксперимента дано в Примере 18). Из Таблицы 1 видно, что эквимолекулярные количества ДГК и CEKO проявляют одинаковую антиоксидантную активность, как и лигнан- флавоноидные комплексы, содержащие то же суммарное количество в них лигнанного (CEKO) и флавоноидного (ДГК) компонентов. Это позволяет использование лигнан-флавоноидных комплексов наряду с их разделёнными лигнанным (CEKO) и флавоноидным (ДГК) компонентами при производстве антиоксидантных химико-фармацевтических изделий и биологически-активных добавок, связанных с лечением и профилактикой сердечно-сосудистых 2008/000176
8
заболеваний и инфекционых поражений, корректировкой липидного обмена, укреплением иммунного статуса и других.
Важнейшая сфера применения образующихся по данному изобретерию лигнан-флавоноидных комплексов и выделенного лигнанного компонента (CEKO) является использование при получении химико-фармацевтических изделий и биологически-активных добавок, предназначенных для профилактики и лечения эстраген опосредованных процессов. При этом известно, что CEKO, как и ДГК, обладают низкой эстрагенной активностью, однако под действием ферментативной системы микрофлоры CEKO претерпевает превращение в энтеролактон (ENL), обладающий эстрагенной активностью. Это и определяет применение содержащим CEKO продуктам, как биологического предшественника ENL, а также может использоваться для получения химико-фармацевтических изделий и биологически-активных добавок, предназначенных для профилактики и лечения эстраген опосредованных процессов, связанных с онкологическими заболеваниями, развитием гиперплазии, нарушениями здоровья женщин, в том числе вызванных менопаузой.
В качестве примера, не ограничивающего рамки настоящего изобретения, в Таблице 2 показана эстрагенная активность CEKO, а также комплексов CEKO и ДГК, экстрагируемых из сучковой массы лиственницы согласно данному изобретению (описание эксперимента дано в Примере 19). При использовании препаратов, содержащих одинаковое количество CEKO, наблюдается одинаковый пролиферативный эффект (эксперимент с клетками MCF-8), а также и способность конкурентно ингибировать аналогичный эффект природного гормона - эстрадиола.
Пример 1.
Хроматографический анализ компонентов экстрактов массы «бeлыx cyчкoв» и
«чepныx cyчкoв» и хроматографический анализ компонентов экстрактов.
Экстракцию образцов измельченной массы (для корректного сопоставления экспериментальных данных в этом и последующих примерах приведены результаты экстракции частиц толщиной до 1 мм, проходящие через сито с размером каналов диаметром 3 мм) «бeлыx» и «чepныx» сучков лиственницы сибирской (Lаriх sibiriса, далее лиственницы), несущих живые и мертвые ветки, проводили 70%-вoдным ацетоном при комнатной температуре в течение 24 часов (соотношение образец - растворитель 1:10). Аликвоты растворов (10 мкл) анализировали посредством ВЭЖХ [Э.Е. Нифантьев, М.П. Коротеев, Г.З. Казиев, В.К. Вельский, A.И.Cтaш, А.А. Грачев, В.М. Меньшов, Ю.Е. Цветков, Н.Э. Нифантьев, "К вопросу об идентификации флавоноида дигидрокверцетина.", ЖОХ, 76 (2006) 161-163] на колонке Ultrаsрhеге ODS (5 мкм, 4.6 мм х 25 см; Весkmап) в системе ацетонитрил (20%) - вода, содержащей 1 мл/л трифторуксусной кислоты при скорости потока 0.8 мл/мин с использованием УФ- детектора (254 нм). Количественная характеристика содержания ДГК и CEKO в экстрактах проводилась по калибровочным кривым, полученным при хроматографическом анализе аналитически чистых образцов ДГК и CEKO.
Анализ хроматограмм экстрактов (Фиг. 1, 2) свидетельствует о содержании ДГК и CEKO в «бeлыx» сучках в количестве 1,2% и 1,7% от общего веса, соответственно, а в «чepныx» сучках присутствуют только следы CEKO, а содержание ДГК составляет лишь около 0,5% от общего веса. Эти данные указывают на то, что масса «бeлыx» сучков является предпочтительным сырьем для выделения ДГК и CEKO.
Пример 2
Экстракция сучковой массы лиственницы ацетоном и водноацетоновыми смесями и хроматографический анализ компонентов экстрактов.
Стандартные порции (10 г) измельченной массы «бeлыx» сучков лиственницы подвергали экстракции в 100 мл ацетона или водно-ацетоновых смесях разного состава при комнатной температуре в течение 24 часов. Экстракты отделяли фильтрованием через стеклянный фильтр (>Г° 3) и упаривали досуха.
Навеску сухого остатка (25 мг) растворяли в 10 мл ацетонитрила и анализировали посредством ВЭЖХ как описано выше в Примере 1 для определения содержание
ДГК и CEKO в исходном образце сучковой массы с использованием хроматографических характеристик заведомо чистых образцов ДГК и CEKO.
Результаты экспериментов суммированы на Фиг. 3-5, на которых показаны весовые количества ДГК и CEKO в экстрактах (Фиг. 3), общий вес экстрактов после упаривания растворителя (Фиг. 4), а также содержание ДГК и CEKO в упаренных ацетоновом и водноацетоновых экстрактах (Фиг. 5). Анализ хроматограмм свидетельствует о том, что при экстракции смесями при содержании ацетона в интервале от 50% до 75%, в особенности от 60% до 70%, достигается наиболее эффективное экстрагирование ДГК и CEKO. При увеличении содержания ацетона в экстрагенте свыше 75%, либо при снижении ниже 50% содержание ДГК и CEKO в экстракте снижается. Кроме этого, при экстрагировании смесями с содержанием воды свыше 50% наблюдается увеличение общей массы экстракта за счет извлечения из сучковой массы нецелевых компонентов, в особенности хорошо растворимых в водных средах производных углеводов и других соединений, что в дальнейшем усложняет очистку ДГК и CEKO.
Пример 3 Экстракция сучковой массы лиственницы изопропиловым спиртом и водно- изопропанольными смесями и хроматографический анализ компонентов экстрактов.
Экстракцию стандартных порций (10 г) измельченной массы «бeлыx» сучков лиственницы проводили в 100 мл изопропилового спирта или водно- изопропанольными смесями разного состава при комнатной температуре в течение 24 часов. Экстракты сначала обрабатывали, а затем анализировали с помощью ВЭЖХ, как описано в Примере 2.
Результаты экспериментов суммированы на Фиг. 6-8, на которых показаны весовые количества ДГК и CEKO в экстрактах (Фиг. 6), общий вес экстрактов после упаривания растворителя (Фиг. 7), а также содержание ДГК и CEKO в упаренных изопропиловом и водно-изопропанольных экстрактах (Фиг. 8). Анализ хроматограмм и данных по общему весу экстрактов свидетельствует о том, что при экстракции смесями при содержании изопропанола в интервале от 50% до 75%, в особенности от 60% до 70%, достигается наиболее эффективное экстрагирование ДГК и CEKO. При увеличении содержания изопропанола в экстрагенте свыше 75%, либо при снижении ниже 50%, содержание ДГК и CEKO в экстракте снижается. Кроме этого, при экстрагировании смесями с содержанием воды свыше 50% наблюдается увеличение общей массы экстракта за счет извлечения из сучковой массы нецелевых компонентов, в особенности производных углеводов, что в дальнейшем усложняет очистку ДГК и CEKO.
Пример 4
Исследование кавитационной дезинтеграции сучковой массы в воде с последующей экстракцией органическими растворителями.
300 г измельченных сучков лиственницы подвергали кавитационной обработке в 10 л воды при 95°C по способу, описанному в патенте РФ N° 2180566, опубликованном 20.03.2002, и патенте РФ N° 2233858, опубликованном 10.08.2004. Образующуюся смесь охлаждали до комнатной температуры, нерастворимые компоненты отделяли фильтрованием или центрифугированием (2 часа при 2000 об/мин). Попытки проэкстрагировать фильтрат, представляющий собой устойчивую эмульсию, с помощью несмешивающихся с водой растворителей различной полярности (алканы, ароматические соединения, эфиры, хлорированные растворители) не привели к успеху, так как не достигалось образование слоев органической и водной фаз, даже при добавке в смеси растворов NaCl и алифатических спиртов, что обычно способствует разделению слоев при экстракции водных растворов. Таким образом, способ выделения ДГК и CEKO из сучковой массы, включающий на первом этапе кавитационную дезинтеграцию в воде, на практике не является эффективным.
Пример 5
Экстракция сучковой массы лиственницы 70%-ным водным ацетоном. 1 кг измельченных сучков лиственницы подвергали экстракции 5 л 70%- ного водного ацетона при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 87 г порошкообразного сырца смеси ДГК и CEKO. По данным ВЭЖХ (анализ проводился в условиях, описанных в Примере 1), в полученном продукте содержится 9,8 г ДГК и 14,3 г CEKO.
Пример 6 Экстракция сучковой массы лиственницы.
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. К образцу полученного продукта весом 5 г прибавляли 50 мл воды и кипятили 1 час при перемешивании, горячий раствор отделяли от маслообразного остатка, упаривали досуха и получали 1 ,8 г обогащенного ДГК и CEKO продукта-сырца, содержащего 23% ДГК (414 мг) и 32% CEKO (576 мг) (по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1).
Пример 7 Экстракция сучковой массы лиственницы 70%-ным водным изопропанолом.
1 кг измельченных сучков лиственницы подвергали экстракции 5 л 70%- ного водного изопропанола при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 83 г порошкообразного продукта-сырца, содержащего 7,4 г ДГК и 12,2 г CEKO (по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1).
Пример 8
Экстракция сучковой массы лиственницы 70%-ным водным этанолом.
0.1 кг измельченных сучков лиственницы подвергали экстракции 720 мл 70%-нoгo водного этилового спирта при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 7,12 г порошкообразного продукта-сырца, содержащего 655 мг ДГК и 810 мг CEKO (по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1).
Пример 9
Получение смеси CEKO и ДГК в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% и более.
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. К образцу полученного продукта весом 5 г прибавляли смесь этилацетат-петролейный эфир (1:2, 10 мл) и перемешивали при 50 0C, температуру доводили до комнатной и надосадочную жидкость отделяли декантацией (или фильтрованием через бумажный или стеклянный фильтр). Полученный остаток хроматографировали на слое силикагеля, элюируя смесь ДГК и CEKO метилтретбутиловым эфиром (100 мл). Элюат упаривали досуха, получая 1,45 г порошка, представляющего по данным ВЭЖХ (в условиях, описанных в Примере 1) смесь ДГК и CEKO в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% или более. Аналогично проводили и выделения смесей CEKO и ДГК указанной чистоты при обработке органических экстрактов сучковой массы другими водно-органическими смесями по данному изобретению, например, образующимися из продуктов, полученных в Примерах 2, 7, 8 и 15-17. При этом соотношения CEKO и ДГК в выделяемом продукте определяется их содержанием в исходном сырье.
Пример 10.
Получение смеси CEKO и ДГК в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% и более. Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. Образец полученного продукта весом 5 г перемешивали 10-120 минут при нагревании не выше 5O0C с 10-30 мл смеси углеводородного растворителя и более полярного растворителя, взятых в таком соотношении, что при проведении тонкослойной хроматографии на стандартных пластинках с силикагелем величины хроматографической подвижности (Rf) CEKO и ДГК находятся в интервале 0-0.05. После окончания перемешивания температуру смеси доводили до комнатной, и надосадочную жидкость отделяли декантацией (или фильтрованием через бумажный или стеклянный фильтр). Полученный остаток хроматографировали на слое силикагеля, элюируя смесь ДГК и CEKO метилтретбутиловым эфиром (100 мл). Элюат упаривали досуха, получая 1,45 г порошка, представляющего по данным ВЭЖХ (в условиях, описанных в Примере 1) смесь ДГК и CEKO в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% или более.
В качестве углеводородного растворителя могут использовать технологически доступные алифатические или ароматические соединения, например индивидуальные алканы, петролейный эфир, толуол и другие. В качестве полярного растворителя могут использовать органические соединения, характеризующиеся величиной константы диэлектрической проницаемости от 4 до 25 при 25-30 °C. Например, можно использовать смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 1 :2.
Аналогично проводили и выделения смесей CEKO и ДГК указанной чистоты при обработке органических экстрактов сучковой массы другими водно- органическими смесями по данному изобретению, например, образующимися из продуктов, полученных в Примерах 2, 7, 8 и 15-17. При этом соотношения CEKO и ДГК в выделяемом продукте определяется их содержанием в исходном сырье.
Пример 11.
Получение смеси CEKO и ДГК в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% и более.
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. Образец полученного продукта весом 5 г перемешивали 10-60 минут при нагревании не выше 5O0C с 10-30 мл смеси углеводородного растворителя и более полярного растворителя с величиной константы диэлектрической проницаемости от 4 до 25 при 25-30 °C В качестве углеводородного растворителя могут использовать технологически доступные алифатические или ароматические соединения, например индивидуальные алканы, петролейный эфир, толуол и другие. Количества взятого полярного компонента зависит от величины его диэлектрической проницаемости. Так, при диэлектрической проницаемости от 20 до 25 берется 10%-oб., при диэлектрической проницаемости от 15 до 20 берется 20%-oб., при диэлектрической проницаемости от 10 до 15 берется 30%-oб., а при диэлектрической проницаемости от 4 до 10 берется 40%-oб. Например, в соответствие с указанными характеристиками растворителей можно использовать смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 1 :2.
После окончания перемешивания температуру смеси доводили до комнатной и надосадочную жидкость отделяли декантацией (или фильтрованием через бумажный или стеклянный фильтр). Полученный остаток хроматографировали на слое силикагеля, элюируя смесь ДГК и CEKO метилтретбутиловым эфиром (100 мл). Элюат упаривали досуха, получая 1,45 г порошка, представляющего по данным ВЭЖХ (в условиях, описанных в Примере 1) смесь ДГК и CEKO в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной или более 75%.
Аналогично проводили и выделения смесей CEKO и ДГК указанной чистоты при обработке органических экстрактов сучковой массы другими водно- органическими смесями по данному изобретению, например, образующимися из продуктов, полученных в Примерах 2, 7, 8 и 15-17. При этом соотношения CEKO и ДГК в выделяемом продукте определяется их содержанием в исходном сырье.
Пример 12
Получение образцов CEKO и НТК чистотой, равной 75% и более.
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. К образцу полученного продукта весом 5 г прибавляли 50 мл воды и кипятили 1 час при перемешивании, горячий раствор отделяли от маслообразного остатка, температуру раствора доводили до комнатной и экстрагировали хлороформом (8x30 мл). Органическую фазу отделяли, сушили и упаривали досуха, получая 670 мг сырца CEKO с чистотой, равной 75% или более (определено ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1). Оставшуюся после экстракции водную фазу экстрагировали этилацетатом (3x30 мл), экстракты объединяли, высушивали и упаривали досуха, получая 481 мг сырца ДГК с чистотой, равной 75% или более (определено ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1). Аналогично проводили и выделения смесей CEKO и ДГК указанной чистоты при обработке органических экстрактов сучковой массы другими водно-органическими смесями по данному изобретению, например, образующимися из продуктов Примеров 2, 7, 8 и 15-17. При этом соотношения CEKO и ДГК в выделяемом продукте определяется их содержанием в исходном сырье.
Пример 13 Получение ДГК чистотой 95-97% и более.
ДГК чистотой 95-97% и более получали перекристаллизацией сырца (Пример 12). Например, образец ДГК (0.48 г), полученный в условиях Примера 12, растворяли в 5 мл деаэрированной воды при 70-80°C, охлаждали образующийся раствор до 4°C и выдерживали смесь до окончания кристаллизации. Выпавшие кристаллы отфильтровали и высушили в вакууме, получив 0.31 г ДГК указанной чистоты, контролируемой по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1. Данные спектра 13C ЯМР (δ, м.д.; DMSOd6; Вrukег WM-250, 62,9 MHz): 71.6 (СЗ), 83.1 (C2), 95.0 (C8), 96.0 (C6), 100.5 (ClO), 115.2 (C5'), П5.4 (C2'), П9.5 (Cl'), 145.0 (C4'), 145.8 (СЗ'), 162.6 (C9), 163.4 (C5), 166.8 (C7), 197.9 (C4).
Пример 14
Получение CEKO чистотой 95-97% и более.
CEKO чистотой 95-97% и более получали перекристаллизацией сырца (Пример 12). Например, образец CEKO (660 мг), полученный в условиях Примера 12, растворяли в 7 мл диэтилового эфира при 30°C, раствор охлаждали до 4°C и выдерживали смесь до окончания кристаллизации. Выпавшие кристаллы отфильтровали и высушили в вакууме, получив 405 мг CEKO указанной чистоты, контролируемой по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1. Данные спектра 13C ЯМР (δ, м.д.; DMSO-d6; Вrukег WM-250, 62,9 MHz): 34.0 (C3,3'), 42.5 (C2,2'), 55.5 (OMe), 60.3 (cl,Г), 113.0 (C6,6'), 115.0 (C9,9'), 121.1 (C5,5'), 132.2 (C4,4'), 144.3 (C7,7'), 147.2 (C8,8').
Пример 15 I
Экстракция сучковой массы пихты сибирской (Аbiеs sibiriса).
100 г измельченных сучков пихты подвергали экстракции 0.5 л 70%-нoгo водного ацетона при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 733 мг порошкообразного сырца смеси ДГК и CEKO. По данным ВЭЖХ (анализ проводили в условиях, описанных в Примере 1), в полученном продукте содержится 7 мг ДГК и 91 мг CEKO.
Пример 16
Экстракция сучковой массы пихты сибирской (Аbiеs sibiriса). U2008/000176
17
100 г измельченных сучков пихты подвергали экстракции 0.5 л 70%-нoгo водного изопропанола при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 655 мг порошкообразного сырца смеси ДГК и CEKO. По данным ВЭЖХ (анализ проводили в условиях, описанных в Примере 1), в полученном продукте содержится 6 мг ДГК и 77 мг CEKO.
Пример 17
Экстракция сучковой массы пихты сибирской (АЫеs sibiriсά). 100 г измельченных сучков пихты подвергали экстракции 0.5 л 70%-нoгo водного этилового спирта при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 725 мг порошкообразного сырца смеси ДГК и CEKO. По данным ВЭЖХ (анализ проводили в условиях, описанных в Примере 1), в полученном продукте содержится 6 мг ДГК и 71 мг CEKO.
Пример 18
Антиоксидантные свойства ДГК, CEKO и их комплексов.
Антиоксидантная активность ДГК, CEKO, а также их комплексов, полученных в условиях Примеров 6 и 7, проводилась по известному методу [DJ. Jаmiеsоп "Sассhаrотусеs сеrеvisiае hаs distiпсt аdарtivе rеsропsеs tо bоth hуdгоgеп реrохidе апd mепаdiопе" J. Васtеriоl., 174 (1992) 6678-6681] на дрожжях Sассhаrотусеs сеrеvisiае BKM Y-1173. Дрожжи выращивались до середины логарифмической стадии роста на среде Ридер, содержащей 2% глюкозы, дрожжевой экстракт и минеральные соли. Клетки дрожжей отделяли от среды центрифугированием, два раза промывали водой и инкубировали с перекисью водорода и антиоксидантами в водной суспензии (ОDбоо 0.1-0.15) в течение 1 часа при периодическом встряхивании. Затем делались соответствующие разведения и дрожжи высевали на агаризованную глюкозо-пептонную среду, культивировали в течение 2 сут при 30 0C, а затем подсчитывали число выросших колоний и выживаемость клеток S.сеrеvisiае (Таблица 1). Таблица 1. Влияние антиоксидантов на выживаемость клеток S.сеrеvisiае при воздействии перекиси водорода
Figure imgf000020_0001
* Порог точности счета колоний - 1%.
** Указана суммарная концентрация ДГК и CEKO в растворе.
Пример 19 Сравнительное исследование пролифирации клеток рака молочной железы человека MCF-7 при воздействии эстрадиола, CEKO и CEKO содержащих экстрактов.
Сравнительное исследование пролифирации клеток рака молочной железы человека MCF-7 при воздействием эстрадиолом, CEKO и CEKO содержащих экстрактов проводили по известному методу [H. Аdlегсrеutz, Y. Моusаvi, "Епtеrоlасtопе апd еstrаdiоl iпhibit еасh оthеr's ргоlifеrаtivе еffесt on MCF-7 bгеаst сапсеr сеlls iп сulturе", J. Stеrоid. Вiосhет. MoI. Вiоl. 41 (1992) 615-619]. Для оценки эстрогенной активности препаратов, содержащих CEKO, IM растворы последних в этаноле (концентрация указана на содержащийся в растворе CEKO) добавлялись к культуре клеток с достижением 1 мкМ конечной концентрации по CEKO. В каждом опыте по пролиферации 17β-эcтpaдиoл использовался в качестве позитивного стандарта для оценки эстрогенной активности и добавлялся также в виде этанольного раствора для достижения конечной 1 нМ концентрации. 6
19
Для оценки антиэстрогенной активности растворы 17β-эcтpaдиoлa и тестируемого препарата CEKO, среди которых использовались препараты, полученные в условиях Примеров 6, 7 и 14, добавлялись к клеточной культуре одновременно. Клеточная пролиферация оценивалась путем подсчета количества клеток на счетчике Колтера, полученные результаты суммированы в Таблице 2. В контрольном эксперименте (см. опыт 1 в Таблице 2) добавлялся этанол, но без лигнана. В каждых условиях проводились 5 измерений.
Таблица 2. Исследование эстрогенной и антиэстрогенной активности препаратов, содержащих CEKO, на культуре клеток MCF-7 (см. Пример 19).
Figure imgf000021_0001
Показанные примеры приведены лишь с целью иллюстрации и не ограничивают рамки настоящего изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ.
1. Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины, в котором измельченную древесину сучковой зоны экстрагируют нерасслаивающейся смесью органического растворителя с, водой, при содержании растворителя 50-75%, с получением экстракта, содержащего секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, обрабатывают экстракт для удаления растворителя с получением конечной смеси, содержащей секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют древесину лиственницы (Lаriх).
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют древесину пихты (Аbiеs).
4. Способ по п. 1-3, отличающийся тем, что в качестве сучковой зоны древесины используют «бeлыe cyчки».
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют ацетон.
6. Способ по п. 1 , отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют изопропиловый спирт.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют этиловый спирт.
8. Способ по любому из п. 1, 5-7, отличающийся тем, что содержание органического растворителя в смеси с водой составляет от 60% до 70%.
9. Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины, в котором измельченную древесину сучковой зоны экстрагируют нерасслаивающейся смесью органического растворителя с водой, при содержании растворителя 50-75%, с получением экстракта, содержащего секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, обрабатывают экстракт для удаления растворителя с получением смеси, содержащей секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, которую подвергают избирательной экстракции и кристаллизации с выделением секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что используют древесину лиственницы (Lаriх).
11. Способ по п. 9, отличающийся тем, что используют древесину пихты (Аbiеs).
12. Способ по п. 9-11, отличающийся тем, что в качестве сучковой зоны древесины используют «бeлыe cyчки».
13. Способ по п. 9, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют ацетон.
14. Способ по п. 9, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют изопропиловый спирт.
15. Способ по п. 9, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют этиловый спирт.
16. Способ по любому из п. 9, 13-15, отличающийся тем, что содержание органического растворителя в смеси с водой составляет от 60% до 70%.
17. Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины, в котором измельченную древесину сучковой зоны экстрагируют нерасслаивающейся смесью органического растворителя с водой, при содержании растворителя 50-75%, с получением экстракта, содержащего секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, затем экстракт обрабатывают для удаления неполярных компонентов, удаляют надосадочную жидкость, а полученный остаток хроматографируют на слое силикагеля с последующим удалением элюата, получая сухую смесь секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что используют древесину лиственницы (Lаriх).
19. Способ по п. 17, отличающийся тем, что используют древесину пихты (Аbiеs).
20. Способ по п. 17-19, отличающийся тем, что в качестве сучковой зоны древесины используют «бeлыe cyчки».
21. Способ по п. 17, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют ацетон.
22. Способ по п. 17, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют изопропиловый спирт.
23. Способ по п. 17, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют этиловый спирт.
24. Способ по любому из п. 17, 21-23, отличающийся тем, что содержание органического растворителя в смеси с водой составляет от 60% до 70%.
25. Применение секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина в качестве компонентов биологически активных добавок и химико-фармацевтических изделий.
PCT/RU2008/000176 2007-03-29 2008-03-26 Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины WO2008121021A1 (ru)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08753884A EP2143435B1 (en) 2007-03-29 2008-03-26 Method for extracting secoisolariciresinol and dihydroquercetin from wood
CN200880010627A CN101678057A (zh) 2007-03-29 2008-03-26 从木材提取开环异落叶松树酯酚和二氢栎精的方法
AT08753884T ATE552840T1 (de) 2007-03-29 2008-03-26 Verfahren zur extraktion von secoisolariciresinol und dihydroquercetin aus holz
CA2682143A CA2682143C (en) 2007-03-29 2008-03-26 Method for extracting secoisolariciresinol and dihydroquercetin from wood
US12/450,417 US20100286255A1 (en) 2007-03-29 2008-03-26 Method for extracting secoisolariciresinol and dihydroquercetin from wood
EA200901320A EA016246B1 (ru) 2007-03-29 2008-03-26 Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007111534/15A RU2359666C2 (ru) 2007-03-29 2007-03-29 Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины (варианты)
RU2007111534 2007-03-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2008121021A1 true WO2008121021A1 (ru) 2008-10-09

Family

ID=39808511

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2008/000176 WO2008121021A1 (ru) 2007-03-29 2008-03-26 Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20100286255A1 (ru)
EP (1) EP2143435B1 (ru)
CN (1) CN101678057A (ru)
AT (1) ATE552840T1 (ru)
CA (1) CA2682143C (ru)
EA (1) EA016246B1 (ru)
RU (1) RU2359666C2 (ru)
WO (1) WO2008121021A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2454410C1 (ru) * 2011-05-24 2012-06-27 Учреждение Российской академии наук Институт химии и химической технологии Сибирского отделения РАН (ИХХТ СО РАН) Способ получения дигидрокверцетина
RU2588969C2 (ru) * 2012-02-02 2016-07-10 Лда Аг Способ получения таксифолина из древесины

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2536241C2 (ru) * 2011-07-05 2014-12-20 Общество с ограниченной ответственностью "СуперАгро" Способ выделения полифенольных соединений класса стильбенов пиносильвина и метилпиносильвина из отходов переработки сосны
US20130245251A1 (en) * 2012-03-17 2013-09-19 Flavitpure, Inc. Method for isolating dietary fiber arabinogalactan and arabinogalactan in combination with flavonoid dihydroquercetin (taxifolin) from conifer wood species or hardwood including butt logs and bark
RU2510268C1 (ru) * 2012-11-14 2014-03-27 ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "Медресурс" Средство для лечения эстрогензависимых опухолей
EP2925336B1 (en) * 2012-11-30 2022-10-12 Harmonic Pharma Natural compounds for use in the treatment of beta-2 adrenergic receptor related diseases
CZ306700B6 (cs) * 2014-12-05 2017-05-17 Výzkumný ústav potravinářský Praha, v.v.i. Způsob výroby lignanů pro potravinářské účely extrakcí ze suků jehličnanů
CZ305794B6 (cs) * 2015-04-20 2016-03-16 Výzkumný ústav potravinářský Praha, v.v.i. Způsob úpravy dřevních suků s přesně regulovanou strukturou drtě pro výrobu lignanů a zařízení k provádění tohoto způsobu, s využitím v potravinářské výrobě
EP3426273B1 (en) * 2016-03-11 2021-04-21 Harmonic Pharma Sublingual compositions comprising natural extracts and uses thereof
CN113185485B (zh) 2021-05-10 2022-03-04 合肥立方制药股份有限公司 一种二氢槲皮素的半合成方法
CN113214210B (zh) 2021-05-10 2022-03-04 合肥立方制药股份有限公司 一种二氢槲皮素的制备方法

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2088256C1 (ru) * 1996-12-02 1997-08-27 Тюкавкина Нонна Арсеньевна Средство для комплексной терапии заболеваний "диквертин" и способ его получения
RU2154967C1 (ru) * 1999-01-27 2000-08-27 Шачнев Юрий Дмитриевич Биологически активная добавка "биоскан-с" и способ ее получения
RU2180566C1 (ru) 2001-01-18 2002-03-20 Нифантьев Эдуард Евгеньевич Способ выделения дигидрокверцетина
WO2002080702A1 (en) 2001-04-04 2002-10-17 Unilever N.V. Use of lignans in foods
WO2003020254A1 (en) 2001-07-27 2003-03-13 Council Of Scientific And Industrial Research Pharmaceutical composition comprising (-)-secoisolariciresinol
RU2229213C2 (ru) 2002-07-09 2004-05-27 Чекуров Виктор Михайлович Способ регулирования роста зерновых культур
RU2233858C1 (ru) 2003-01-23 2004-08-10 Нифантьев Эдуард Евгеньевич Способ комплексной переработки древесины лиственницы
US20040199032A1 (en) 2001-06-06 2004-10-07 Bjarne Holmbom Method for isolating phenolic substances or javabiones from wood comprising knotwood
RU2256328C1 (ru) 2004-02-04 2005-07-20 Красноярский государственный аграрный университет Способ обработки зерновых культур препаратом лариксин
US20060035964A1 (en) 2002-07-24 2006-02-16 Shigetoshi Kadota Hypoglycemic agent, liver protecting agent and anticancer agent containing lignans originating in hongdoushan
RU2288582C2 (ru) * 2002-05-14 2006-12-10 Общество с ограниченной ответственностью "Алсико-Агропром" (ООО "Алсико-Агропром") Способ получения биологически активного препарата

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002098830A1 (en) * 2001-06-06 2002-12-12 Bjarne Holmbom A method for isolating phenolic substances or juvabiones from wood comprising knotwood
FI116727B (sv) * 2003-11-12 2006-02-15 Arbonova Ab Oy Ny användning för kvistnötsextrakt

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2088256C1 (ru) * 1996-12-02 1997-08-27 Тюкавкина Нонна Арсеньевна Средство для комплексной терапии заболеваний "диквертин" и способ его получения
RU2154967C1 (ru) * 1999-01-27 2000-08-27 Шачнев Юрий Дмитриевич Биологически активная добавка "биоскан-с" и способ ее получения
RU2180566C1 (ru) 2001-01-18 2002-03-20 Нифантьев Эдуард Евгеньевич Способ выделения дигидрокверцетина
WO2002080702A1 (en) 2001-04-04 2002-10-17 Unilever N.V. Use of lignans in foods
US20040199032A1 (en) 2001-06-06 2004-10-07 Bjarne Holmbom Method for isolating phenolic substances or javabiones from wood comprising knotwood
WO2003020254A1 (en) 2001-07-27 2003-03-13 Council Of Scientific And Industrial Research Pharmaceutical composition comprising (-)-secoisolariciresinol
RU2288582C2 (ru) * 2002-05-14 2006-12-10 Общество с ограниченной ответственностью "Алсико-Агропром" (ООО "Алсико-Агропром") Способ получения биологически активного препарата
RU2229213C2 (ru) 2002-07-09 2004-05-27 Чекуров Виктор Михайлович Способ регулирования роста зерновых культур
US20060035964A1 (en) 2002-07-24 2006-02-16 Shigetoshi Kadota Hypoglycemic agent, liver protecting agent and anticancer agent containing lignans originating in hongdoushan
RU2233858C1 (ru) 2003-01-23 2004-08-10 Нифантьев Эдуард Евгеньевич Способ комплексной переработки древесины лиственницы
RU2256328C1 (ru) 2004-02-04 2005-07-20 Красноярский государственный аграрный университет Способ обработки зерновых культур препаратом лариксин

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Indol-3-Karbinol Perechen dannykh", 2004, pages 1 - 2, Retrieved from the Internet <URL:http://www.vitashop.ru/c7126/pid6902> [retrieved on 20080616] *
B. HOLMBOM ET AL.: "Knots in trees - A new rich source of lignans", PHYTOCHEMISTRY REVIEWS, vol. 2, 2003, pages 331 - 340, XP008104241, DOI: doi:10.1023/B:PHYT.0000045493.95074.a8
D. J. JAMIESON: "Saccharomyces cerevisiae has distinct adaptive responses to both hydrogen peroxide and menadione", J. BACTERIOL., vol. 174, 1992, pages 6678 - 6681
E.E. NIFANT'EV ET AL., METHOD OF COMPLEX PROCESSING OF LARCH WOOD
E.E. NIFANT'EV ET AL.: "To the Problem of Identification of Dihydroquercetin Flavonoid", ZH. ORG. KHIM., vol. 76, 2006, pages 161 - 163, XP019301278
H. ADLERCREUTZ; Y. MOUSAVI: "Enterolactone and estradiol inhibit each other's proliferative effect on MCF-7 breast cancer cells in culture", J. STEROID. BIOCHEM. MOL. BIOL., vol. 41, 1992, pages 615 - 619, XP023550104, DOI: doi:10.1016/0960-0760(92)90393-W
PHYTOCHEMISTRY, vol. 22, 1983, pages 749
PHYTOCHEMISTRY, vol. 31, 1992, pages 3659

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2454410C1 (ru) * 2011-05-24 2012-06-27 Учреждение Российской академии наук Институт химии и химической технологии Сибирского отделения РАН (ИХХТ СО РАН) Способ получения дигидрокверцетина
RU2588969C2 (ru) * 2012-02-02 2016-07-10 Лда Аг Способ получения таксифолина из древесины

Also Published As

Publication number Publication date
CA2682143A1 (en) 2008-10-09
EA200901320A1 (ru) 2010-02-26
EP2143435B1 (en) 2012-04-11
ATE552840T1 (de) 2012-04-15
CN101678057A (zh) 2010-03-24
EA016246B1 (ru) 2012-03-30
EP2143435A4 (en) 2010-09-01
CA2682143C (en) 2012-10-09
US20100286255A1 (en) 2010-11-11
EP2143435A1 (en) 2010-01-13
RU2359666C2 (ru) 2009-06-27
RU2007111534A (ru) 2008-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2008121021A1 (ru) Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины
CN101787061B (zh) 曲札茋苷在制备防治心脑缺血疾病制剂中的应用及其制备方法
Rahman et al. Antimalarial activity of extracts of Malaysian medicinal plants
Zhang et al. Microwave assisted extraction of flavonoids from cultivated Epimedium sagittatum: Extraction yield and mechanism, antioxidant activity and chemical composition
Abuga et al. In vitro antibacterial effect of the leaf extract of Murraya koenigii on cell membrane destruction against pathogenic bacteria and phenolic compounds identification
WO2007098471A2 (en) Parthenolide free bioactive ingredients from feverfew (tanacetum parthenium) and processes for their production
KR100545723B1 (ko) 솔라눔속 식물의 수용성 추출물, 그 제조방법, 및 그수용성 추출물을 함유하는 약제학적 조성물
Abdallah et al. Determination of phenolics and flavonoids of some useful medicinal plants and bioassay-guided fractionation substances of Sclerocarya birrea (A. Rich) Hochst stem (bark) extract and their efficacy against Salmonella typhi
WO2009107959A2 (ko) 상동나무 지상부로부터 유용 플라보노이드 다량 함유 획분과 신규 플라보노이드 물질의 분리 방법
KR20110048401A (ko) 신선초 녹즙 부산물로부터 칼콘 고함유 추출물 제조방법
CN110724121B (zh) 铁皮石斛叶中的一种联苄类衍生物及其制备方法和用途
Farooq et al. Isolation of bioactive components from Calotropis procera plant latex-A review
Khan et al. Determination of chemical composition, total flavonoid content, total phenolic content and antioxidant capacity of various crude extracts of Manihot esculenta crantz leaves
Songca et al. A biflavonoid and a carotenoid from Rhus leptodictya: isolation, characterization and antibacterial properties
KR101866478B1 (ko) 유기용매를 이용한 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 추출물의 제조방법
KR20070078167A (ko) 감귤에서 나리루틴을 분리하는 방법
Issa et al. Antiplasmodial and DPPH radical scavenging effects in extracts from Acacia macrostachya (Mimosaceae) DC
JP2004256426A (ja) 抗腫瘍剤
JP2005068081A (ja) 発癌予防剤
CN113087752B (zh) 一种具有抗氧化活性的黄酮糖苷及其制备方法和应用
Osman et al. THE EFFECT OF EXTRACTION CONDITIONS ON ANTIOXIDANT ACTIVITY OF Bougainvillea PLANT
RU2257909C1 (ru) Концентрат побегов черники и композиции на его основе, обладающие геропротекторной активностью
Pessoaa et al. Extraction of propolis using supercritical carbon dioxide
KR100416120B1 (ko) 천연물로부터 분리한 신규 리그난계통의 항종양 물질
RU2068269C1 (ru) Способ получения средства, обладающего антисклеротической и желчегонной активностью

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200880010627.8

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08753884

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2682143

Country of ref document: CA

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2008753884

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 6913/DELNP/2009

Country of ref document: IN

Ref document number: 200901320

Country of ref document: EA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12450417

Country of ref document: US