WO2008116385A1 - Caffeoyl quinic acid derivatives containing nitrogen, and preparation method, pharmaceutically composition and usage thereof - Google Patents

Description

咖啡酰奎宁酸含氮衍生物及其制备方法和其药物组合物及用途 技术领域

本发明涉及咖啡酰奎宁酸衍生物及其制备方法，以及包含该咖啡 酰奎宁酸衍生物的其药物组合物，及其在制备用于治疗或预防病毒疾 病药物的应用。 背景技术

病毒是一类严重危害人类健康威胁人类生命的病原体，如流行性 感冒病毒、 艾滋病病毒、 SARS病毒、 乙肝病毒等， 具有高度的传染 性。对这些病毒的防治主要是抗病毒疫苗， 但由于这些病毒容易发生 变异， 常规疫苗尚不能有效的预防及阻止其爆发和流行。大多数的病 毒对抗生素类化学药不敏感， 目前已成为医学界的一大难题。医用外 源性干扰素、 白细胞介素 - 2 等能抑制病毒复制， 提高机体细胞免疫 功能， 治疗前景良好， 但费用昂贵， 且大量使用尚有一定不良反应。 而中医药临床防治具有独特效果，毒副作用小，药源丰富，价格低廉， 能调节整体免疫功能， 抑制病毒复制， 阻止病毒致细胞病变， 改善临 床症状， 在治疗病毒感染性疾病上应用广泛， 显示出了独特的优势。 近年来很多人从不同的角度和方向对中药抗病毒做了不同的研究。

咖啡酰奎宁酸类化合物广泛存在中草药、 水果、 蔬菜等植物中。 二咖啡酰奎尼酸（Dicaffeoylquinic acid, DCQA), 也称二咖啡酰奎宁 酸，是奎尼酸的二咖啡酸酯。二咖啡酰奎尼酸作为一种药理活性成分， 其作用范围较广泛， 具有抗病毒 （CN1087608 ; EP 1008344； US6331565; US20020111382), 抗氧化 (CN1136434； 孙燕荣， 董俊 兴等， 军事医学科学院院刊， 2002， 26 ( 1 )： 39 )、 提高免疫功能 (CN1136434 ). 抗肝损伤 （CN1476842; 孙燕荣， 董俊兴等， 军事 医学科学院院刊， 2002， 26 ( 1 )： 39)、抗诱变（ Yoshimoto M.， et al., Biosci Biotechnol Biochem, 2002， 66(11)： 2336) 等作用， 在病毒感 染、 心血管疾病 （ CN1136434 ; CN1381236； CN1462620； KR2002085507 ) 等方面有一定疗效， 对于乙肝病毒 （CN1087608; EP 1008344； US6331565 )、 艾滋病毒 （CN1087608 ; EP1008344； US6331565 ) 冠状病毒感染 （CN1449751 ), 二咖啡酰奎尼酸也有治 疗作用。 也有人将其用于化妆品 （EP577516; US5445816)。

呼吸道合胞病毒肺炎 (respiratory syncytial virus pneumonia)简称 合胞病毒肺炎， 是一种小儿常见的间质性肺炎， 多发生于婴幼儿。 由 于母传抗体不能预防感染的发生， 出生不久的小婴儿即可发病， 但新 生儿较少见。国外偶有院内感染导致产科医院新生儿病房爆发流行的 报道。 到目前为止， 对 RSV感染的研究有一定的进展， 但还没有特 异有效的治疗和预防方案。目前唯一允许用于化学疗法的药物主要是 利巴韦林（ribavirin),还有金刚垸胺及盐酸阿比朵儿。其它的如单抗： 人类单克隆抗体 palivizumab ( Synagis ) 和静脉用免疫球蛋白

(RSV-IGIV) 已经注册使用， 疗效虽好， 但其治疗一个周期所需的 费用很高， 不能普遍应用于临床。 发明内容

本发明的目的正是为了提供新型的咖啡酰奎宁酸衍生物及其制 备方法， 以弥补上述不足。

本发明的另一目的还提供包含治疗有效量的上述化合物或其盐 或其水合物， 以及药学上可接受的载体的药物组合物。

另外，本发明再一目的还提供在制备用于治疗或预防病毒疾病的 所述化合物或其盐或其水合物的药物中的应用。

根据本发明， 下述通式（I)所述的化合物或其盐或其水合物为， 08000562

(I) 式中： R为 NH₂;

或任意单取代或双取代的 d-C₆的直链或支链的垸胺基； 或任意取代的 C₃-C₆的环垸胺基；

或任意取代的 d-C₆的芳香胺基；

或四氢吡咯基；

或哌啶基；

Q" Q₂， （¾， Q₄为 H或如下式 (II)所述的基团， 且 Q_P Q₂， Q₃， Q₄不同时为 H或 Q₂, Q₃, Q₄不同时为如下式 (II)所述的基团。

Π) 其中， 所述 R为氨基、 甲氨基、 二甲氨基、 乙氨基、 异丙氨基、 四氢吡咯基、 哌啶基、 苯胺基、 苄胺基、 对甲苯胺基、 环丙胺基。

通式 （I) 所述的化合物或其盐或其水合物包括如下化合物： 当 R为环丙胺基时， 包括式 (1-1)、 (1-2)、 (1-3)、 (1-4)、 (1-5) 及 (1-6) 等 6个化合物。

当 R为四氢吡咯基时，包括式（2-1) (2-2)、（2-3)、（2-4)、 (2-5) 2-6)等 6个化合物。

(2-5) (2-6) 当 R为甲氨基（NHCH₃)时，包括式（3-1 )、（3-2)、（3-3)、 (3-4) (3-5)、 (3-6)及 (3-7) 等 7个化合物。

根据本发明，还提供了一种药物组合物， 其包含治疗有效量的至 少一种如上所述的化合物或其盐或其水合物，以及药学上可接受的载 体或赋形剂。 其中， 所述药物组合物为片剂、 胶囊剂、 丸剂、 口服液 体制剂、 颗粒剂、 散剂、 注射剂、 植入剂或外用制剂。

通常，本发明的化合物以治疗有效量，通过所接受的起类似效用 的药剂给药方式中任何一种给药。 适宜的剂量范围通常为每天 lOmg-lOOOmg, 优选每天 200mg。这取决于众多因素， 比如， 治疗疾 病的严重性、对象的年龄及其健康状况、所使用化合物的效力、给药 途径和形式、给药针对的症状以及有关医师的喜好和经验。治疗这种 疾病的领域中的普通技术人员将能够在不经过多的实验并且依据个 人知识和本发明的公开内容的情况下，确定本发明的化合物对于给定 疾病的治疗有效量。

可以将本发明的化合物与一种或多种常规的药学上可接受的载 体或赋形剂放入药物组合物或单位剂量形式中。药物组合物或单位剂 量形式可以包括常规比例的常规成分，含或不含另外的活性化合物或 元素，并且单位剂量形式可以含有或将采用的预定每日剂量范围相应 的任何适宜有效量的活性成分。 药物组合物的采用形式可以是片剂、 胶囊剂、 丸剂、 口服液体制剂、 颗粒剂、 散剂、 注射剂、 植入剂或外 用制剂。

根据本发明，进一步提供了制备如上所述的化合物或其盐或其水 合物的方法， 其中所述方法包括以下步骤-

( 1 ) 由式 4奎宁酸与 R反应生成式 3化合物；

(2)再由式 3与式 Π反应生成通式 I的化合物

II 式中： R为 NH₂;

或任意单取代或双取代的 - 的直链或支链的烷胺基； 或任意取代的 C₃-C₆的环烷胺基；

或任意取代的 C C₆的芳香胺基；

或四氢吡咯基；

或哌啶基；

当 R为环丙胺基， 四氢吡咯基及甲氨基时，相关化合物的按照如 下的合成路线 （流程一和流程二） 和合成工艺进行：



3- 3 R=NHCH3 流程二 上面， 除 R为环丙胺基， 四氢吡咯基及甲氨基外， 当 R为其它 基团时， 例如 NH₂、 任意单取代或双取代的的 d-C₆的直链或支链的 烷胺基、任意取代的 C₃-C₆的环烷胺基、任意取代的 C_rC₆的芳香胺、 哌啶基， 其相关化合物的合成工艺按照如上所述的方法进行。

将奎宁酸 （4) 和环己酮在酸 （如 TSOH, 硫酸等） 催化下和用 甲苯回流分水反应使得奎宁酸的 3a,4a-羟基形成缩酮保护， 同时 1β 位的羧基和 5β位的羟基形成内酯结构得到化合物 （5 )。 奎宁酸的 3a 位， 4a位羟基除了可以用环己酮形成缩酮保护外， 还可以用丙酮形 成缩酮的形成加以保护；用有机胺类，如环丙胺、甲胺等对化合物（5 ) 的内酯结构进行开环， 从而使得 la位的羧基转化为酰胺结构得到化 合物（6)，化合物（7)及化合物（8)等，所用溶剂可为 THF、 MeOH、 EtoAc等，反应温度 40〜80°C ;在酸性条件下，去除化合物（6)、（7)、 (8) 的 3a，4a缩酮保护基， 得到化合物 （9)、 （10) 及 （11 ) 等， 反 应温度为室温〜 60°C ; 接下来的反应是化合物 （9)、 （10) 及 （11 ) 等和 0-烯丙基咖啡酰氯的成酯反应， 所用溶剂可以为 THF、 EtOAc、 CH₂C1₂，CHC1₃等， 所用碱可以为 Et₃N， 吡啶， K₂C0₃等， 反应温度为 -5°C〜5°C ; 可制得化合物 （12 ) 〜化合物 （20) 等； 最后一步是去 烯丙基保护， 由于烯丙基醚对一般的酸碱都是很稳定的， 因此， 不能 在这些条件下去除烯丙基保护基。

但用 Rh(PPh₃)₃Cl / DABCO / EtOH和 Pd(PPh₃)₄/ Morpholine I THF 等脱烯丙基的条件可以很容易的脱去化合物（12 ) 〜 （20)等的烯丙 基结构得到各目标化合物。

根据本发明，还提供一种在制备用于治疗或预防病毒疾病如上所 述的化合物或其盐或其水合物的药物中的应用。其中， 所述病毒为呼 吸道合胞病毒、 艾滋病病毒、 乙肝病毒。

本发明的优点与效果：提供咖啡酰奎宁酸的新衍生物， 用于治疗 或预防病毒疾病， 尤其在呼吸道合胞病毒及乙肝病毒， 具有安全高效 低毒的特性。其中， 化合物（2-1 )的体外抗呼吸道合胞病毒检测 IC₅。 二 1.37 g/ml 具体实施方式

以下将结合实施例具体说明本发明，本发明的实施例仅用于说明 本发明的技术方案， 并非限定本发明。 实施例 1、 化合物（5) 的合成

将化合物 （4) 奎宁酸 （100g)， 甲苯 （2L)， 环己酮 （167ml)， TsOH ( lg) 回流分水反应 15h， 冷却到室温， 过滤， 干燥， 得类白色 固体粉未 132g化合物 （5 )。

Ή-NMR (d-DMSO) :1.348〜1.702(m，10H)， 1.848(dd,J=3.2,17.6,lH), 2.173(m,2H), 2.326(d,J=9,lH), 3.28(s,lH), 4.234(d,J=6.4,lH), 4.433(m,lH), 4.475(q,lH), 6.013(s,lH); [M+1]⁺:255 _Q 实施例 2、 化合物 （6) 的合成

上述化合物（5 ) (5g)、 环丙胺 （6ml)及 DME (75ml) 回流反 应 5.5h，蒸去溶剂。用柱层析分离，洗脱剂为氯仿和甲醇，蒸去溶剂， 干燥， 得类白色固体粉末 4.7g化合物 （6)。 [M+l]⁺: 312 实施例 3、 化合物 （7) 的合成

化合物 (5 ) (5g)， 四氢吡咯 (2ml),爾 (50ml)回流反应 6.5h， 蒸去溶剂，用柱层析分离纯化，洗脱剂为乙酸乙酯和丙酮，蒸去溶剂， 干燥， 得淡黄色固体 5.3g化合物（7)。 [M+l]⁺: 326。 实施例 4、 化合物 （8) 的合成

将化合物 （5 )溶于 THF ( 100ml) 中， 在回流温度下， 通甲胺 气体 4h， 蒸去溶剂， 得油状物（9.4g)化合物（8)。 此油状物可以直 接进行接下的反应。

^-NMRCd-DMSO): 1.335(d,J=4.8, 2H), 1.442〜 1.760(m，10H), 2.011(dd,J=19.2, 5.2, 1H), 2.595(d,J=4.4,3H), 3.762(m,2H), 4.301(m,lH), 4.937(dd，J=15.2， 3.8, lh), 5.152(s,lH), 7.705(q,J=13.6, 4.4, 1H)；

实施例 5、 化合物 （9) 的合成

将化合物（6) (3g)、 甲醇（30ml)及 1M HC1 ( 10ml)室温搅拌 反应 2h，减压蒸去溶剂，用异丙醇重结晶，干燥，得淡黄色固体 1.48g 化合物 （9)。 [M+l]⁺: 232。 实施例 6、 化合物 （10) 的合成

将化合物（7) (3g)，甲醇（30ml)及 1M HCK 10ml)室温搅拌 ， 减压蒸去溶剂， 用柱层析纯化， 洗脱剂为 CHC1₃和 NaOH, 得白色固 体 2g化合物 （10)。 [M+l]⁺: 246ο 实施例 7、 化合物 （11 ) 的合成

将化合物 (8) (8.5g)、 甲醇 (85ml), 1M HC1 (25ml)室温搅拌 4h， 蒸去溶剂， 用乙醇重结晶， 过滤、 干燥、 得白色粒状固体 5.5g 化合物 （11 )。

'H-NMRCd-DMSO): 1.681(m,4H), 2.594(d,J=5.2,3H), 3.228 (t,J=8.1H)_: 3.727(m,lH), 3.953(s,lH), 4.608(d，J=4.4，lH)， 4.837(d,J=5.2,lH), 5.109(d,J=3.2,lH), 5.419(s,lH), 7.727(d,J=4.4,lH); [M+l]+:206。 实施例 8、 化合物 （1-1) 的合成

将化合物 (9) (2.53g)、 吡啶 (35ml)和 CH₂C1₂ (48ml)加入三 口瓶中液中。 在氩气保住下， 并将温度控制在 0〜5°C， 滴加 0-二烯 丙基咖啡酰氯 （ 由 7.4g 咖啡酸制得， 制法参考文献 Can丄 Chem,75， 1997, 1783-94) 的 CH₂C1₂ (52ml) 溶液， 滴加后再反 应 20min， 用 lmHCl水溶液调 pH至 3〜4。 再用饱和 NaCl水溶液将 CH₂C1₂层洗至中性， 无水 MgS0₄干燥。 过滤， 蒸去溶剂， 得油状物， 此油状物用柱层析纯化， 洗脱剂为乙酸乙酯和石油醚。 蒸去溶剂， 得 油状物 1.17_g

将此油状物用 THF(82ml)溶解， 加吗啉 （5.7ml ) 及催化量的 Pd(PPh₃)_4> 回流下反应 lh， 将反应液冷却到室温。 将反应液用含 1M HC1的饱和 NaCl溶液洗 pH3〜4。再用饱和 NaCl将 THF层洗至中性， 无水 MgS0₄干燥、 过滤， 将 THF蒸去， 得油状物， 用柱层析纯化， 洗脱剂为氯仿、 甲醇及甲酸， 将溶剂蒸去， 干燥， 得淡黄色固体粉末 0.38g化合物 ( 1-1 )。

'H-NMR(d-DMSO):1.158(y=14.4,lH), 1.69O-2.055(m,7H), 22 6-2330(m,lH), 3.309(d,J=6.8,2H), 3.710(d,J=6,2H), 4.075(m,2H), 4.831(dd,J=10.8,2.8,lH), (i-e)嗨 W 、01 ^¾^ HI'8 =f'p)608'A '(ΗΓ9ΐ=Γ'Ρ)ΐ657. '(HI's)"£ '(Η 8=ί'Ρ)εεΓ '(HlV8=f'P) 00'A '(HI'9I=i'P)8IS'9 '(Ηΐ'ΐ") 00·9 '(ΗΖ' 9' I=i'P)S6£'S

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'H-NMR(d-DMSO): 1.162〜 1.242(m, 1 H), 1 · 1846〜 2.131 (m，5H)， 2.629(d,J=4，3H), 4,015(q，lH), 4.330(s,lH), 4.959(d,J=9.2,lH), 5·383〜 5.634(m,lH), 6.161(t,J=14.4,29.2,2H), 6.731(q,3H), 7.060(t,J=34.4,2H), 7.809(d,J=4.8,lH); [m+l]⁺:530 实施例 11、 化合物 （3-4) 的合成

将化合物 （17) ( 1.34g), THF (21ml), 吗啉 （7ml) 及催化量 的 Pd(pph₃)₄在氩气保护下回流 lh， 冷却到室温。 用 ImHCl的饱和 NaCl溶液洗 THF层， 直到 pH值 3〜4， 再用饱和 NaCl洗 THF层至 中性； 无水 MgS0₄干燥， 过滤， 蒸去溶剂， 得油状物。 此油状物用 柱层析纯化， 洗脱剂为 CH₃C1、 甲醇及甲酸。 蒸去溶剂， 干燥， 得泡 沫状固体粉末化合物 （3-4)。

'H-NMRCd-DMSO): 1.756-1.967(m,4H), 2.621(dJ=4.4,3H), 3.276(d3,6H), 4.141- .199(m,lH), 4.816(cU=12，lH)， 5.346~5.468(m3H), 6.178(d(y=22,6.4^H), 6.628~6.785(m,2H), 6.925(t,J=15.6,2H), 7.020(s,2H), 7.879(d,J=4.8,lH); [m+l]+:530 实施例 12、 化合物 （3-5) 的合成

将化合物 （20) (0.5g), THF (56ml), 吗啉（2ml)及催化量的 Pd(pph₃)₄回流 0.5h，冷却到室温。用 ImHCl的饱和 NaCl溶液洗 THF 层， 直到 pH值 3〜4， 再用饱和 NaCl洗至中性； 无水 MgS0₄干燥， 过滤， 将溶液蒸去， 得油状物。 用柱层析纯化， 洗脱剂为 CH₃C1、 甲 醇及甲酸。 得淡黄色固体粉末化合物 （3-5 )。

'H-NMRCd-DMSO): 1.785-1.983(m,4H), .69(d，J=4，3H)，4.066(q， 1H)_: 4.177(s,lH), 4.626(t,J=9.6,lH), 6.317(d,J=16，lH)， 6.807(d，J=4,lH), 7.005(d,J=8,lH), 7.088(s,lH), 7.521(d,J=8,lH), 7.879(d,J=4.4，lH)， 8.216(s,lH); [M+l]+:367 实施例 13、 化合物 （1-3) 的合成

将化合物 （6) (0.4g) , DMAP(O.lg), 用 CH₂Cl₂(10ml)溶解， 加 吡啶 （6ml) ，室温下滴加 O-二烯丙基溴咖啡酰氯的 CH₂C1₂ ( 16 ml) 溶液， 滴加定后再反应 lh， 用 2M HC1将 pH调到 3左右， 室温再搅 拌 2h， 滤去不溶物， 分液， CH₂C1₂层用饱和 NaCl水溶液洗至中性， 无水 MgS0₄干燥、 过滤， 蒸去 CH₂C1₂得油状物， 此油状物用柱层析 纯化， 洗脱剂为乙酸乙酯和石油醚， 得固体 0.56g 化合物 （1-3 )。

实施例 14、 化合物 （3-7) 的合成

将化合物（11 )溶于吡啶 （6ml)及二氯甲烷（10ml), 温度控制 在 0〜5°C滴加 0-二烯丙基咖啡酰氯的 CH₂Cl₂(10ml)溶液， 滴加完毕 后反应 20min， 力 Q lmlHCl中止。 CH₂C1₂用 lmlHC 冼至 pH为 4， 再 用饱和 NaCl洗至 pH为 7， 无水 MgS0₄干燥过滤， 浓缩， 得油状物， 用柱层析纯化。 洗脱剂为乙酸乙酯和石油醚。

将上述化合物 (9.3g)， THF ( 150ml), 吗啉 （45ml) 及催化量的 Pd(pph₃)₄在氩气保护下回流 lh，冷却到室温。用 ImHCl的饱和 NaCl 溶液洗 THF层， 直到 pH值 3〜4， 再用饱和 NaCr冼 THF层至中性； 无水 MgS0₄干燥， 过滤， 蒸去溶剂， 得油状物。 此油状物用柱层析 纯化， 洗脱剂为 CH₃C1、 甲醇及甲酸。 蒸去溶剂， 干燥， 得泡沬状固 体粉末化合物 （3-7)。

'H-NMRCd-DMSO): 1.959(d,lH,J=12) ， 2.089(t，2H,J=10) ， 2.310(m,lH), 2.673(s,3H), 5.151(m, 1H), 5.515(m,2H), 5.635(m,lH), 6.101(m，2H), 6.302(d,lH，J=4), 6.666(m，9H), 7.377(m,3H), 7.822(d，lH，J=5.2)， 7.846( s，lH)， 8.220( s, 1H)， 9,411 ( s,6H) ; [M+l]⁺:706. 实施例 15、 对体外抗呼吸道合孢病毒（RSV)抑制作用

对以上制备得到的部分化合物进行了体外抗呼吸道合孢病毒 (RSV) 实验， 以 Hep-2细胞（人喉癌细胞）为病毒宿主， 测定样品 抑制呼吸道合孢病毒 （RSV) 弓 I起 Hep-2细胞病变程度， 72小时观 察细胞病变程度，用 Reed-Muench法分别计算样品对呼吸道合孢病毒 (RSV) 的半数抑制浓度 （IC₅o) 以及样品对 Hep-2细胞的最大无毒 浓度 （TC_Q) 和半数有毒浓度 （TC_5Q)。 测试材料和方法：

病毒株： RSV, Long株

样品处理：样品临用前溶于 DMSO配成适当浓度，用培养液作 3 倍稀释， 共 8个稀释度。

阳性对照药： 利巴韦林 （RBV)

测试方法： Hep-2细胞种 96孔培养孔， 24小时后分别感染呼吸 道合孢病毒 （RSV) (200TCID50感染量） 吸附 4小时， 弃病毒液， 按以上稀释度加入样品， 同时设阳性药细胞对照孔， 正常细胞对照孔 和病毒对照孔， 72小时观察细胞病变程度 （CPE)， 用 Reed-Muench 法分别计算样品对呼吸道合孢病毒 （RSV) 半数抑制浓度 （IC₅o) 以 及样品对 Hep-2细胞的最大无毒浓度（TC_Q)和半数有毒浓度（TC₅₀)。

具体数据见表 1。 表 1: 体外抗呼吸道合孢病毒（RSV)抑制作用

注： RBV为对照品， 利巴韦林 实施例 16、 对体外抗 HIV-1 ΙΠΒ/Η9病毒抑制作用

对以上制备得到的部分化合物进行了体外抗 HIV- 1 IIIB/H9实验， 用 MT-4细胞培养，采用 CPE法测定对细胞的毒性，采用测定细胞培 养上清 P24抗原方法测定化合物对 HIV-1 IIIB的抑制作用，分别得到 样品的半数抑制浓度 （IC_5Q) 以及样品的半数有毒浓度 （TC₅₀)。 测试材料和方法：

病毒株： mv-i niB病毒株

细胞： T淋巴细胞 MT-4

样品处理： 样品临用前溶于 DMSO配成适当浓度， 细胞培养液 配制。 阳性对照药： 齐多夫定 （AZT)

fflV-1 P24抗原检测试剂盒： 用荷兰 BioMerieux公司产品。 测试方法： 用 CPE法测定药物对细胞的毒性（TC_5Q和 TC_Q)， 将 2X10⁵细胞 /ml lOOul接种于 96孔细胞培养板内， 同时分别加 3倍稀 释的样品或阳性药齐多夫定的 8个浓度的药液 lOOul, 每个稀释度重 复 3孔， 设细胞对照组。 置 37°C、 5%C0₂饱和湿度培养箱内培养， 加药后第 4天 （96小时） 观察细胞 CPE， 记录细胞病变情况， 计算 TC₅₀和 TC₀。

用 ELISA 方法测定 fflV-1 P24 抗原， MT-4 细胞计数后以 100TCID50病毒量感染细胞， 37°C、 5%C0₂饱和湿度培养箱内吸附 1.5小时。 以 2X10⁵ /ml浓度接种 96孔培养板， lOOul/孔。加入稀释药 物 lOOul/孔。 37°C、 5%( 0₂饱和湿度培养箱内培养 4天 （96小时）。 取细胞上清液， 进行 1 : 3000稀释。 按 HIV-1 P24抗原试剂盒提供的 操作步骤测定 HIV-1 P24滴度， 加药组与病毒对照组比较， 计算样品 的半数有效浓度 （IC_5Q)。

具体数据见表 2。 表 2: 体外抗 HIV-1 IIIB H9病毒抑制作用

注- AZT为对照品， 齐多夫定 实施例 17、 对体外抗乙型肝炎病毒（HBV) DNA病毒抑制作用 对以上制备得到的部分化合物进行了体外抗乙型肝炎病毒 (HBV) DNA实验， 在乙型肝炎病毒（HBV) DNA克隆转染人肝癌 细胞（Hep G2) 的 2.2.15细胞系中， 研究对细胞毒性和对 HBV DNA 分泌的抑制效果。 分别得到样品的半数抑制浓度 （IC₅₍₎) 以及样品的 半数有毒浓度（TC_5Q)， 在 2.2.15细胞培养内对 HBV DNA的抑制率。 测试材料和方法：

病毒株：乙肝炎病毒（HBV)DNA克隆转染人肝癌细胞（Hep G2) 的 2.2.15细胞系。

样品处理： 样品临用前溶于 DMSO配成适当浓度， 4°C保存， 使 用时用 2.2.15细胞培养液配成所需浓度。

阳性对照药： 拉米夫定 （3TC)

测试方法：样品配成 20mg/ml母液，用 2.2.15细胞培养液配成所 需的浓度， 然后用培养液从 200ug/ml开始 5倍稀释共 8个浓度， 加 入 96孔细胞培养板， 每浓度 3孔， 每 4天换同浓度药液， 设无药物 细胞对照组， 以观察细胞病变为指标， 8天显微镜下观察细胞病变， 完全破坏为 4; 75%为 3; 50%为 2; 25%为 1 ; 无病变为 0。 计算每 浓度药液平均细胞病变程度和抑制率。按用 Reed-Muench法分别计算 半数有毒浓度 （IC₅。）， 最大无毒浓度 （TC。）。 各浓度组药液的及细 胞对照组的 2.2.15细胞按分子克隆实验技术方法提取 HBV DNA、 各 样品斑点杂交、 放射自显影、 测量各杂交点的 IOD值或 OD值后， 计算抑制率。

具体数据见表 3。 表 3: 体外抗乙型肝炎病毒（HBV) DNA病毒抑制作用

注： 3TC为对照品， 拉米夫定。

本发明通过上面的实施例进行举例说明， 但是， 应当理解， 本发 明并不限于这里所描述的特殊实例和实施方案。在这里包含这些特殊 实例和实施方案的目的在于帮助本领域中的技术人员实践本发明。任 何本领域中的技术人员很容易在不脱离本发明精神和范围的情况下 进行进一步的改进和完善，因此本发明只受到本发明权利要求的内容 和范围的限制，其意图涵盖所有包括在由所附权利要求所限定的本发 明精神和范围内的备选方案和等同方案。

Claims

权 利 要 求 书

1、 下述通式 （I) 所述的化合物或其盐或其水合物为:

(I)

式中： R为 NH₂，

或任意单取代或双取代的 C_rC₆的直链或支链的烷胺基， 或任意取代的 C₃-C₆的环垸胺基，

或任意取代的 C_rC₆的芳香胺基，

或四氢吡咯基，

或哌啶基；

Qi, Q₂， Q₃， Q₄为 H或如下式 (II)所述的基团， 且 Q_P Q₂， Q₃ Q₄不同时为 H或 Q Q₂, Q₃, Q₄不同时为如下式 (II)所述的基团。

2、 根据权利要求 1所述的化合物或其盐或其水合物， 其特征在 于， 所述 R为氨基、 甲氨基、 二甲氨基、 乙氨基、 异丙氨基、 四氢吡 咯基、 哌啶基、 苯胺基、 苄胺基、 对甲苯胺基、 环丙胺基。

3、 根据权利要求 1或 2所述的化合物或其盐或其水合物， 其特 征在于， 所述化合物为下列式 （1-1 )、 （1-2)、 （1-3 )、 （1-4)、 （1-5 )、

( 1-6)、 （2-1 )、 （2-2)、 （2-3 )、 （2-4)、 （2-5)、 （2-6)、 （3-1 )、 （3-2)、 (3-3 )、 （3-4)、 （3-5 )、 (3-6) 和 (3-7) 的化合物：

4、 一种药物组合物， 其包含治疗有效量的至少一种如权利要求 1〜3所述的化合物或其盐或其水合物， 以及药学上可接受的载体或赋 形剂。

5、 根据权利要求 4所述的药物组合物， 其特征在于， 所述药物 组合物为片剂、 胶囊剂、 丸剂、 口服液体制剂、 颗粒剂、 散剂、 注射 剂、 植入剂或外用制剂。

6、 一种制备如权利要求 1〜3中任一所述的化合物或其盐或其水 合物的方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步骤- ( 1 ) 由式 4奎宁酸与 R反应生成式 3化合物;

4 3

(2) 再由式 3与式 II反应生成通式 I的化合物

式中： R为 ΝΗ₂;

或任意单取代或双取代的 C_rC₆的直链或支链的烷胺基； 或任意取代的 C₃-C₆的环垸胺基；

或任意取代的 C_rC₆的芳香胺基；

或四氢吡咯基；

或哌啶基。

7、 权利要求 1~3中任一所述的化合物或其盐或其水合物在制备 用于治疗或预防病毒疾病的药物中的应用。

8、 根据权利要求 7所述的应用， 其特征在于， 所述病毒为呼吸道合 胞病毒、 艾滋病病毒、 乙肝病毒。