WO2008028410A1 - Utilisation de fucoïdane de faible masse moléculaire dans la préparation d'un médicament destiné au traitement de maladies cardio-vasculaires et cérébrovasculaires - Google Patents

Utilisation de fucoïdane de faible masse moléculaire dans la préparation d'un médicament destiné au traitement de maladies cardio-vasculaires et cérébrovasculaires Download PDF

Info

Publication number
WO2008028410A1
WO2008028410A1 PCT/CN2007/002620 CN2007002620W WO2008028410A1 WO 2008028410 A1 WO2008028410 A1 WO 2008028410A1 CN 2007002620 W CN2007002620 W CN 2007002620W WO 2008028410 A1 WO2008028410 A1 WO 2008028410A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
molecular weight
low molecular
fucoidan sulfate
sulfate
fucoidan
Prior art date
Application number
PCT/CN2007/002620
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Shouzhu Hao
Original Assignee
Beijing Century Biocom Pharmaceutical Technology Co., Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Century Biocom Pharmaceutical Technology Co., Ltd. filed Critical Beijing Century Biocom Pharmaceutical Technology Co., Ltd.
Publication of WO2008028410A1 publication Critical patent/WO2008028410A1/zh
Priority to US12/397,428 priority Critical patent/US20090170810A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/02—Algae
    • A61K36/03—Phaeophycota or phaeophyta (brown algae), e.g. Fucus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/2027—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • CN1616494A uses natural seaweed sulfate polysaccharide as raw material, and adds ascorbic acid and hydrogen peroxide to seaweed sulfuric acid sugar solution to control the reaction temperature, and the temperature degradation time is 0.5-3 hr, and then dialysis or ultrafiltration, and concentrated under reduced pressure to obtain 4-100 KDa.
  • Low molecular weight seaweed sulfated polysaccharide product CN 1670028 A, CN1392160A, and CN1197674A respectively disclose the preparation of seaweed polysaccharide by flocculation or the like. In the present invention, the disclosure of the above invention is hereby incorporated by reference in its entirety.
  • the fucoidan sulfate may be derived from kelp, or may be wild brown algae, wakame, sarcophagus, squirrel, sea bream, kelp, phytoplankton or fucus. It is preferably derived from kelp.
  • the content of the low molecular weight fucoidan sulfate is ⁇ 50%, preferably ⁇ 70%, more preferably ⁇ 90%, most preferably ⁇ 95%.
  • the content of fucoidan sulfate in the unit preparation may be from 1 mg to 1000 mg, preferably from 10 mg to 800 mg, more preferably from 20 mg to 500 mg, most preferably from 20 mg to 300 mg, most preferably from 30 mg to 100 ⁇ m.
  • dialysis is generally employed to remove ions and small molecules from the solution. Ultrafiltration separation methods have also been employed to exclude substances of lower molecular weight. In some cases, enzymatic digestion can be employed to remove brown algae starch and protein mixed in the extract.
  • Feury et al. (Fleury N and Lahaye M. Studies on by-products from the industrial extration of alginate 2. Chemieal structure analysis of iucans from the leach-water. J Appl Phycol, 1993, 5: 605-610) in the study of French alginate Industrial by-products use glucanase and alcalase to remove brown algae starch and protein. Separation of brown algae starch and fucoidan sulfate can also be carried out by an ion exchange resin method because the former is electrically neutral and the latter is in the form of polycation.
  • the method for decomposing fucoidan sulfate to prepare low molecular weight fucoidan sulfate can be as follows:
  • Free radical oxidative degradation For example, the product obtained by the degradation of hydrogen peroxide by heparin has a higher degree of sulfation and a lower cost, and has a greater application value.
  • the crude product was redissolved in water, and the water-soluble alginate was removed by precipitation with 20% ethanol in the presence of 0.05 mol/L MgCl 2 .
  • the filtrate was dialyzed, concentrated and precipitated with 75% ethanol, and dried to obtain purified fucoidan sulfate.
  • the seaweed was pulverized and soaked in a 3.7% formaldehyde solution overnight, and then distilled water was added for boiling water extraction.
  • the extract was filtered with diatomaceous earth, and the filtrate was dialyzed against tap water for one day, then dialyzed against distilled water for one day, and the dialysate was concentrated and ethanol was added thereto.
  • the concentration was 75% precipitated, and the precipitate was dried to obtain crude fucoidan sulfate.
  • the crude product was redissolved in water, and the water-soluble alginate was removed by precipitation with 20% ethanol in the presence of 0.05 mol/L MgCl 2 , and the filtrate was dialyzed and concentrated to 75 % B.
  • the alcohol is precipitated, and after purification, purified fucoidan sulfate is obtained.
  • Four seaweed fucoidan sulfates were prepared according to the above method. The chemical composition analysis is shown in the following table:
  • sample A (kD) Fucose galactose xylose glucose sea bream 26.5 14.8 980 20.8 1.00 0.24 0.05 0.04 Sargassum 25.4 17.0 650 22.6 1.00 0.24 0.03 Holly leaf sargasso 13.3 12.5 588 20.8 1.00 0.35 0.16 0.08 Kelp 28.8 30.2 250 31.2 1.00 Preparation of 0.36 low molecular weight fucoidan sulfate (hereinafter referred to as "sample A”)
  • the product had a number average molecular weight of 25 KD, a peak molecular weight of 30 KD, and a weight average molecular weight of 34 kD.
  • the method was determined by high performance gel permeation chromatography (HPGPC). Chemical composition analysis results: fucose content 28.8%, sulfate content 29.1%.
  • Example 2 Preparation of low molecular weight fucoidan sulfate injection
  • Healthy adult mongrel dogs weighing 12-20kg, both male and female, grouped, 6 in each group.
  • the control group was given an equal volume of 0.9% NS
  • the positive drug group was given Shuxuening 4 mg/kg
  • the experimental group A and B samples were respectively set to 4, 16 mg/kg two dose groups, all of which were administered intravenously.
  • the left coronary artery and the aortic root were separated, and an electromagnetic flowmeter probe was placed to measure coronary blood flow and aortic flow.
  • the limbs are connected to the limb lead, and the standard ⁇ lead ECG is measured to calculate the heart rate.
  • the femoral vein was separated and an intravenous cannula was placed for administration.
  • the above indicators are recorded simultaneously in the multi-channel recorder. After the operation, it was stable for 15 minutes, and the indexes of 3, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, and 240 minutes before and after the drug were recorded.
  • Arterial and coronary sinus blood were taken before, and at 45, 60, 90, 120, 180, and 240 minutes after administration, and blood oxygen levels were measured by an oximeter (Connie-158, manufactured in the United States).
  • the secondary indicators are calculated: mean arterial pressure, cardiac index, heart rate index, left ventricular work index, total peripheral resistance, coronary resistance, myocardial oxygen consumption, myocardial oxygen consumption index, myocardial oxygen uptake rate, myocardial Blood flow, etc.
  • the measured values and percentage change values of the experimental data were compared with the control group, and statistical analysis was performed between the groups by t test.
  • the unstained infarcted myocardium was weighed and divided by the total heart weight and ventricular weight to obtain the infarct size as a percentage of total heart weight and ventricular weight. All experimental data were expressed as mean ⁇ standard deviation (; ⁇ ), and t-test was used to determine the significance difference between groups.
  • sample A the 16 mg/kg dose group after injection was measured from 15-180 min for the ischemic range of the dog, which was significantly different from the blank control group, and the corresponding change rate was significantly inhibited from 30-150 ⁇ .
  • ICR mice male and female, were randomly divided into blank control group, positive control group, sample A 200, 100, 50 mg-kg- 1 , sample B 400, 200, 100, 50 mg'kg- 1 dose group.
  • the mice in the drug-administered group were administered with the tail vein l Ornl ⁇ g- 1 , and the positive control group was injected with nimodipine SmgAg- 1 in the tail vein.
  • the model group was given normal saline, 15 minutes after the drug, and the head was broken with a large scissors. The time of mouth gasping, the number of breaths, and the amount of brain water in the mice were compared between groups.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途 技术领域
本发明涉及低分子量褐藻多糖硫酸酯的制药用途，特别涉及低分子量褐藻多糖硫 酸酯在制备治疗心脑血管疾病药物方面的用途。 背景技术
褐藻多糖硫酸酯是一类硫酸化多糖， 存在于褐藻中， 首先由 Kylin在 1913年用 稀酸从掌状海带中提取出来。 Kylin将提取物水解后分离出 L-岩藻糖， 他将这种多糖 命名为 focoidin，现根据多糖的命名原则一般定名为 fticoidan,中文名称为墨角藻多糖、 岩藻多糖、 岩藻聚糖、 岩藻聚糖硫酸酯、 褐藻糖胶或褐藻多糖硫酸酯。 现在人们对褐 藻多糖硫酸酯的组成有较为清晰的了解， 它是一类化学组成和结构非常复杂的多糖， 以岩藻糖和硫酸基为主， 随着藻的种类不同还含有半乳糖、木糖、糖醛酸等其他成分。 海带 Fucoidan由岩藻糖、 半乳糖、 木糖、 葡萄糖醛酸、 阿拉伯糖等单糖组成。 以岩藻 糖和半乳糖为主， 岩藻糖与半乳糖大概在 3: 1。
褐藻多糖硫酸酯化学结构非常复杂，不同褐藻中分离到的褐藻多糖硫酸酯其结构 有很大差异。到目前为止，对来源于墨角藻（Fucus vesiculosus)和泡叶藻（Ascophyllum nodosum)的褐藻多糖硫酸酯的结构研究最多，墨角藻褐藻多糖硫酸酯主要以 α ( 1→3 ) 糖苷键连接，硫酸化主要发生在 C4位。对泡叶藻褐藻多糖硫酸酯的多项研究都表明其 中存在大量的 α ( 1→3 ) 和 α ( 1→4) 糖苷键。 此外还有几种褐藻褐藻多糖硫酸酯的 结构被报道。 昆布 （Ecklonia kurome) 褐藻多糖硫酸酯主要为 α ( 1→3 ) 连接， 硫酸 化在 C4位。 来源于枝管藻 （Cladosiphon okamuranus) 和绳藻 （Chorda filum) 的褐藻 多糖硫酸酯主链均为 α ( 1→3 ) 的岩藻糖， 硫酸化在 C4位， 而且， 二者均有少量的 2-0-乙酰化。
Figure imgf000003_0001
墨角藻、 泡叶藻褐藻多糖硫酸酯结构
Figure imgf000004_0001
Figure imgf000004_0002
关于海带褐藻多糖硫酸酯的结构，多数的研究资料表明海带褐藻多糖硫酸酯主要 是以 α-(1→3)连接的 L-岩藻糖组成， 硫酸化发生在 C4或 C2位， 而且部分研究显示存 在部分 (1→2)连接的 L-岩藻糖作为侧链。 与上图中绳藻褐藻多糖硫酸酯结构有相似之 处。 但绳藻中有部分乙酰基。 而且不同取代基团所占的比例也不一样。 当然分子中还 存在半乳糖、 木糖、 鼠李糖等单糖， 半乳糖可能参与了主链的组成， 而木糖、 鼠李糖 等是以侧链的形式存在。
已有多篇文献公开了褐藻多糖硫酸酯以及低分子量褐藻多糖硫酸酯的制备方法 及其制药用途。 日本专利昭 46-2248采用十六垸氯化吡啶或十六垸三甲基溴化铵与褐 藻多糖硫酸酯反应成季胺盐复合物， 再利用该复合物对盐的溶解度差异， 用乙醇、 甲 醇和离子交换树脂处理， 纯化除去褐藻胶、 中性多糖和其它杂质， 而得到比较纯化的 褐藻多糖硫酸酸酯。 CN1129109A则公开了由干海带浸泡、数次过滤、 二次乙醇提取、 一次乙醇洗涤、 配合调节 PH范围等的碱凝析法。 CN1344565A则公开了另一种制备 方法， 包括原料预处理、 控温搅拌浸提、 离心、 浓缩、 乙醇沉淀、 无水乙醇脱水等步 骤。 CN1517356A则将岩藻聚糖硫酸酯配制成水溶液， 加入过氧化氢、 次氯酸或亚硝 酸及其盐， 将所得混合溶液加热， 用截留分子量 3000-5000的膜超滤， 得到岩藻聚糖 硫酸酯低聚糖。 CN1560086A则公开了一种高硫酸根含量岩藻聚糖硫酸酯的制备方法， 用热水或酸水浸提褐藻， 制得含褐藻聚糖硫酸酯的提取液， 将该提取液浓缩至多糖的 重量百分数为 2-10%， 调 PH5-8, 加入壳聚糖溶液搅拌， 离心或过收集沉淀， 将沉淀 用于 5-10倍盐溶液提取 2-4次， 离心或过滤收集清液， 将该清液透析或超滤脱盐。 CN1616494A以天然海藻硫酸多糖为原料， 将海藻硫酸糖溶液中加入抗坏血酸和过氧 化氢，控制反应温度，恒温降解时间为 0.5-3hr，再透析或超滤，减压浓缩，制得 4-100KDa 的低分子量海藻硫酸多糖产物。 另外， CN 1670028 A、 CN1392160A、 CN1197674A也 分别公开了采用絮凝等方法制备海藻多糖。 在本发明中， 以上发明公开的内容均被全 文引入本文作为参考。
此外，以上发明还公开了褐藻多糖硫酸酯以及低分子量褐藻多糖硫酸酯具有抗凝 血、 提高免疫力、 抗肿瘤、 抗菌素病毒、 降血糖、 抗辐射、 抑制腹水瘤等活性， CN1547478A则公幵了其在治疗粘连、 关节炎和牛皮癣中的用途。 但尚未有文献表明 低分子量褐藻多糖硫酸酯在治疗冠心病及脑中风等疾病方面的用途。
发明内容
本发明的目的是提供低分子量褐藻多糖硫酸酯在治疗心脑血管疾病方面的用途。 其中的心脑血管疾病包括但不限于冠心病和脑中风， 其中， 冠心病包括但不限于在临 床上常见的无症状型冠心病、心绞痛型冠心病、心肌梗死、 心律失常、猝死型冠心病， 脑中风包括但不限于在临床上常见的脑出血、 脑梗塞等。
另一方面，本发明提供了含低分子量褐藻多糖硫酸酯的药物组合物。所述组合物 中包含治疗有效量的低分子量褐藻多糖硫酸酯和至少一种药学上可接受的辅料。 该组 合物的给药方式可以是但不限于经静脉注射、 口服、 肌肉、 皮下、 皮肤表面、直肠内、 局部注射等方式给药， 其剂型可以但不限于是注射液、 冻干粉针剂、 注射微球、 脂质 体、 片剂、 胶囊剂、 水剂、 散剂、 糊剂、 喷雾剂、 颗粒剂、 软胶囊、 滴丸剂、 凝胶剂、 贴片、 膏剂等， 其中优选注射液和冻干粉针剂。 本领域技术人员根据现有技术以及制 剂领域的公知常识可方便地制备出所需剂型。
本发明中的低分子量褐藻多糖硫酸酯，是指将褐藻多糖硫酸酯通过某种合适的方 式 （降解方式包括但不限于酸降解法、 碱降解法、 酶降解法、 物理降解法、 自由基氧 化降解法等） 降解而制得的硫酸化多糖或寡糖类物质， 其分子量较未降解褐藻多糖硫 酸酯分子量低， 具体的分子量（Da)范围可以是 8000〜 100000，优选是 8000〜60000， 更优选是 8000〜12000以及 20000〜40000。褐藻多糖硫酸酯可以来源于海带， 也可以 是野生褐藻马尾藻、 裙带菜、 羊栖菜、 鼠尾藻、 海黍子、 昆布、 泡叶藻或墨角藻。 优 选来源于海带。
本发明的组合物中， 低分子量褐藻多糖硫酸酯的含量≥50%， 优选为≥70%， 更优 选为≥90%, 最佳是≥95%。 单位制剂中褐藻多糖硫酸酯的含量可以是 lmg〜1000mg， 优选 10mg〜800mg， 更优选 20mg〜500mg， 最优选 20mg〜300mg， 最佳是 30mg〜 l OOmgo
在本发明的具体实施方式中，低分子量褐藻多糖硫酸酯可以降低心肌梗塞的程度 和范围， 减少心肌梗塞的面积。 其中， 优选的褐藻多糖硫酸酯的分子量范围为 8KD-12KD和 20KD-40KD, 最优选为 20KD-40KD。
在本发明的另一具体实施方式中，低分子褐藻多糖硫酸酯可以减轻缺血再灌后的 脑水肿， 降低颅内压， 改善脑部微循环， 使 SOD的生成增加， 并同时降低 LDH的活 力。 其中， 优选的褐藻多糖硫酸酯的分子量范围为 8KD-12KD和 20KD-40KD, 最优 选为 8KD-12KD。
本发明的褐藻多糖硫酸酯可以按以下方式提取和纯化、 分级：
1. 提取
褐藻多糖硫酸酯可以用水、稀酸或氯化钙溶液提取，然后向提取液中加入氢氧化 铅、氢氧化铝、 乙醇或季胺盐类阳离子表面活性剂， 都可使褐藻多糖硫酸酯沉淀出来， 为了减少色素、蛋白质等的溶出，提取之前可以先以高浓度醇类或甲醛溶液处理藻体。
近年来也陆续有人采用微波提取、 超声波提取以及高分子絮凝沉淀提取等方法。
2 纯化
制备的粗褐藻多糖硫酸酯通常会含有部分水溶性褐藻胶、蛋白质、褐藻淀粉、色 素等， 需要进一步纯化， 纯化方法有以下几种： 乙醇重沉淀： 西出英一（西出英一等， 日本水産学会誌， 1982， 48 ( 12)： 1771 ) 对热水提取的粗褐藻多糖硫酸酯水溶液在 0.05M MgCl2存在时， 以 20%乙醇沉淀除去 作为杂质的水溶性褐藻胶。 王作芸、 赵学武 （王作芸. 赵学武. 铜藻的褐藻糖胶、 褐 藻淀粉和褐藻胶的分离及提纯. 水产学报. 1985; 9(1)： 71 ) 在研究铜藻中褐藻多糖 硫酸酯时，将制得的粗褐藻多糖硫酸酯溶于水后，先后以 4M CaCl2和 30% 乙醇沉淀去 除褐藻胶， 然后用 80%乙醇沉出纯化的褐藻多糖硫酸酯。
季胺盐类沉淀法： 利用阳离子表面活性剂如十六垸基氯化吡啶 (CPC)或十六垸基 三甲基溴化铵 (CTAB)能与高分子电解质产生沉淀的性质使褐藻多糖硫酸酯沉淀下来。
在提取和纯化过程中， 为除去溶液中的离子和小分子物质一般都采用透析的方 法。 也有人采用超滤分离方法以排除分子量较小的物质。 有时为除去混杂在提取液中 的褐藻淀粉和蛋白质， 可采取酶消化法。 Feury等 （Fleury N and Lahaye M. Studies on by-products from the industrial extration of alginate 2. Chemieal structure analysis of iucans from the leach-water. J Appl Phycol, 1993,5 :605-610)在研究法国褐藻胶工业的 副产品时就采用葡聚糖酶和 alcalase来清除其中的褐藻淀粉和蛋白质。分离褐藻淀粉和 褐藻多糖硫酸酯还可以采用离子交换树脂法， 因为前者是电中性的， 而后者为多聚阴 离子形式。
3 分级
由于褐藻多糖硫酸酯化学组分相当复杂，对制备出的粗褐藻多糖硫酸酯的色谱和 电泳检查一般都呈现不均一性， 因此人们逐步使用分级方法将混杂的多糖分成不同级 分以进行深入研究常用的分级方法有两种： 一种是乙醇分级沉淀， 即利用不同的乙醇 浓度沉淀出不同的级分， 另一种是层析法， 利用凝胶过滤柱层析和离子交换层析进行 分级。 离子交换层析法能将多糖分成荷电性不同的级分， 凝胶过滤层析法则将多糖按 照分子量大小进行分级。 还可以采用超滤技术对褐藻多糖硫酸酯进行分级。
将褐藻多糖硫酸酯降解从而制备低分子量褐藻多糖硫酸酯的方法则可采用以下 几种：
1.酸降解，在酸性条件下， 酸性溶液能引起多糖中糖苷键的断裂，使多糖降解为低 分子片段。 控制酸的浓度、 温度及时间可获得不同分子量大小的降解产物。 多糖降解 产品分子量分布较难控制,硫酸根含量变化较大。
2.碱解法,在碱性条件下，往往引起酸性多糖的改性及硫酸根的脱落，影响产品的活 性,因此不适用于海藻硫酸多糖。 3.酶解法，酶解法是利用专一性糖苷酶通过开裂多糖中的某一糖苷键来达到降解 的目的。 酶降解反应因其高度的专一性、 高效性以及降解条件及过程易于控制， 无副 反应等， 在多糖降解中已逐渐受到重视。但由于酶的专一性强，因此不具有广泛的适用 性，而且酶生产周期长，容易失去活性， 成本高。 这些缺点都使得该法目前无法推广应 用。
4.物理降解法,包括超声波和微波等方法。 这两种方法由于能耗高，仪器设备条件 要求高，样品处理量小,目前无法应用于工业生产。 超声波辐射的结果表明， 无论辐射 时间长短， 解聚分子量有个低限； 而且， 解聚物具有相当窄的分子量分布，
5. 自由基氧化降解 例如以过氧化氢降解法肝素所得产物的硫酸化程度较高，成 本较低， 具有较大的应用价值。
另外，本文中所引用专利公开的提取方法以及由这些方法制备的产品也可以被本 领域技术人员任意地采用。
在本发明的一个具体实施方式中，低分子褐藻多糖硫酸酯是采用以下制备方法制 备： 将海带粉碎后以甲醛溶液浸泡过夜， 添加蒸馏水沸水提取， 提取液以硅藻土助滤 过滤， 滤液先以自来水流水透析一天， 然后以蒸馏水透析一天， 将透析液浓缩， 加乙 醇至浓度为 75 %沉淀，沉淀干燥得粗褐藻多糖硫酸酯。将粗品重溶于水，在 0.05mol/L MgCl2存在下 20%乙醇沉淀除去水溶性褐藻胶， 滤液透析、 浓缩后 75 %乙醇沉淀， 干 燥后即得到纯化的褐藻多糖硫酸酯。 取,适量海带褐藻多糖硫酸酯， 溶于蒸馏水中； 向 该溶液中加入适量抗坏血酸和过氧化氢， 混合均匀， 在室温下搅拌反应， 对反应液进 行透析和超滤， 将超滤液进行减压浓缩， 将浓缩液冷冻干燥。
以下通过具体实施方式对本发明进行进一步说明。这里想要指出的是，下面的具 体实施方式仅用来说明本发明， 本领域技术人员在理解本发明精神的前提下， 可以根 据本技术领域的现有技术和公知常识对本发明进行相应变换， 这些技术方案均落入本 发明的范围之内。
具体实施方式
实施例 1 褐藻多糖硫酸酯的制备
将海藻粉碎后以 3.7%甲醛溶液浸泡过夜，然后添加蒸馏水沸水提取，提取液以硅 藻土助滤过滤， 滤液先以自来水流水透析一天， 然后以蒸馏水透析一天， 将透析液浓 缩， 加乙醇至浓度为 75%沉淀， 沉淀干燥得粗褐藻多糖硫酸酯。 将粗品重溶于水， 在 0. 05mol/L MgCl2存在下 20%乙醇沉淀除去水溶性褐藻胶， 滤液透析、 浓缩后 75 %乙 醇沉淀， 干燥后即得到纯化的褐藻多糖硫酸酯。 按照上述方法制备四种海藻褐藻多糖 硫酸酯， 其化学组分分析如下表所示：
峰位分
岩藻糖 硫酸根 灰分 单糖摩尔比率 海藻 子量
( % ) ( % ) ( % )
(kD) 岩藻糖 半乳糖 木糖 葡萄糖 海黍子 26.5 14.8 980 20.8 1.00 0.24 0.05 0.04 鼠尾藻 25.4 17.0 650 22.6 1.00 0.24 0.03 冬青叶马尾藻 13.3 12.5 588 20.8 1.00 0.35 0.16 0.08 海带 28.8 30.2 250 31.2 1.00 0.36 低分子量褐藻多糖硫酸酯的制备 （以下简称为"样品 A")
称取 150g海带褐藻多糖硫酸酯， 溶于 10L蒸馏水中配成浓度为 1.5%的溶液； 向 该溶液中加入抗坏血酸和过氧化氢， 使它们的浓度分别达到 30mmol/L， 混合均匀， 在室温下搅拌反应 2小时， 反应完毕后， 对反应液进行透析和超滤， 将超滤液进行减 压浓缩， 再将浓缩液冷冻干燥； 制得低分子量褐藻多糖硫酸酯 A， 分子量范围为 8KD-12KD。 该产物的数均分子量 8.5kD， 峰位分子量 9.6KD, 重均分子量 11KD, 测 定方法采用高效凝胶渗透色谱（HPGPC)法。 化学组分分析结果： 岩藻量 28.3 %， 硫 酸根含量 28.7%。 低分子量褐藻多糖硫酸酯的制备 （以下简称为 "样品 B")
称取 150g海带褐藻多糖硫酸酯， 溶于 10L蒸馏水中配成浓度为 1.5%的溶液； 向 该溶液中加入抗坏血酸和过氧化氢， 使它们的浓度分别达到 5mmol/L， 混合均匀， 在 室温下搅拌反应 2小时， 反应完毕后， 对反应液进行透析并超滤， 将超滤液进行减压 浓缩， 再将浓缩液冷冻干燥； 制得低分子量褐藻多糖硫酸酯 B， 分子量范围为 20KD-40KD。 该产物的数均分子量 25KD, 峰位分子量 30KD, 重均分子量 34kD， 测 定方法采用高效凝胶渗透色谱 （HPGPC ) 法。 化学组分分析结果： 岩藻糖含量 28.8 % , 硫酸根含量 29.1 %。 实施例 2 低分子量褐藻多糖硫酸酯注射剂的制备
取低分子量褐藻多糖硫酸酯 50g， 加入注射用水 500ml， 甘露醇 50g， 调 PH值 至 7.0， 分装， 冷冻干燥。 实施例 3 低分子量褐藻多糖硫酸酯片剂的制备
取低分子量褐藻多糖硫酸酯 50g， 加入微晶纤维素， 聚乙烯吡咯垸酮， 混合， 加 入适量水， 制软材， 制粒， 干燥。 粒子加入交联羧甲基纤维素钠、 硬脂酸镁， 混合， 压片， 每片含低分子量褐藻多糖硫酸酯 10-200mg。 实施例 4低分子量褐藻多糖硫酸酯对心肌缺血的保护作用
对麻醉开胸犬血流动力学及心肌耗氧的影响
健康成年杂种犬若干只， 体重 12-20kg， 雌雄兼用， 分组， 每组 6只。 对照组给 予等容量 0.9%NS，阳性药组给舒血宁 4mg/kg,实验组 A、 B样品分别设为 4、 16mg/kg 二个剂量组， 均采用静脉注射给药。
以戊巴比妥钠 30mg/kg i.v.麻醉， 背位固定， 颈部皮肤切开， 气管插管， 连接电 动呼吸机，分离右颈动脉，连接 AP-601G放大器，测定血压。分离股动脉，连接 AP-601G 放大器， 进行心室内插管， 测定左室内压， 舒张期末压， 并经微分处理器 EQ-601G测 定左室内压最大变化速率（±dP/dt max)。 于左侧第四肋间施幵胸术， 暴露心脏， 剪开 心包， 做心包术。 分离冠状动脉左旋支和主动脉根部， 放置电磁流量计探头， 测定冠 脉血流量和主动脉流量。 四肢连接肢体导联， 测定标准 Π导心电图， 计算心率。 分离 股静脉，做静脉插管，以备给药。上述各指标同步记录于多导记彔仪。术毕，稳定 15min， 记录给药前及药后 3、 5、 10、 15、 20、 30、 45、 60、 90、 120、 150、 180、 240min诸 指标。 于给药前及药后 45、 60、 90、 120、 180、 240min取动脉、 冠状静脉窦血， 以 血氧仪 （康尼 -158， 美国生产） 测定血氧含量。 并根据公式， 计算二级指标： 平均动 脉压、 心脏指数、 心搏指数、 左室作功指数、 总外周阻力、 冠脉阻力、 心肌耗氧量、 心肌耗氧指数、 心肌氧摄取率、 心肌血流量等。 实验数据实测值和变化百分率值与对 照组比较， 进行组间 t检验统计分析。
对实验性心肌梗塞犬的影响
杂种犬若干只， 同上随机分组， 每组 6只， 以戊巴比妥 30mg/kg iv麻醉。 背位 固定， 颈部皮肤切开， 气管插管， 连接 SC-3 型人工呼吸机， 分离冠状动脉左前降支 下 1/3处， 穿线以备结扎， 造成心肌梗塞， 用多点湿布式吸附法标测 EECG, 标测点 32个， 分正常区 （对照点）， 梗塞边缘区和梗塞中心区， 术毕， 稳定 15min。 同时自 股静脉取血， 测心肌三酶 AST, CPK和 LDH值， 做为给药前值， 结扎冠状动脉 15min 后， 待 ST段明显升高， 既为模型成立。 经股静脉给药， 对照组给予等容量 0.9%NS， 阳性药组对照组给予舒血宁 4mg/kg， 实验组分别给予试药二个剂量组， 记录正常、 结 扎和给药后 3、 5、 10、 15、 20、 30、 45、 60、 90、 120、 150、 180、 240、 300、 360min EECG, 以 ST段升高总 mV数表示∑-ST， 以 ST段升高 >2mV的导联数为 N-ST。 记 录 360min后， 第二次取血测心肌三酶。 实验结束后， 取下心脏， 称全心重， 沿冠状 沟剪去大血管根部和心房， 称左心室重。将左心室均匀地横断切成 5〜6片， 置于硝基 四氮唑兰 （N-BT)染液中， 在 37'C恒温水浴箱中染色 15min。 梗死区不着色， 非梗死 区被 NBT染为蓝色。 剪去各心肌片被染色非梗死区心肌， 把未染色的梗死心肌称重， 除以全心重和心室重分别得到梗死范围占全心重和心室重的％。所有实验数据以均值± 标准差 （；^ ) 表示， 应用 t检验判断组间均数差异显著性。
实验结果
对于样品 A， 注射给药后 16mg/kg剂量组从 10-150min对犬缺血程度测定值， 与 空白对照组比较有显著性差异， 变化率有明显的抑制趋势， 4mg/kg剂量组无明显作 用。 表明样品 A大剂量时对犬缺血程度有一定的改善作用。
对于样品 B， 注射给药后 16mg/kg剂量组从 3-240min对犬缺血程度测定值， 与 空白对照组比较有显著性差异，变化率有明显的抑制趋势； 4mg/kg剂量组从 60-240min 对犬缺血程度测定值， 与空白对照组比较有显著性差异， 相应变化率从 60-150min有 显著性的抑制作用。 表明样品 B对犬缺血程度有一定的抑制作用。
对于样品 A， 注射给药后 16mg/kg剂量组从 15-180min对犬缺血范围测定值， 与 空白对照组比较有显著性差异， 相应的变化率从 30-150πύη有显著的抑制作用。
对于样品 Β， 注射给药后 16mg/kg剂量组从 3-240min对犬缺血范围测定值， 与 空白对照组比较有显著性差异，相应的变化率从 30-180min有显著的抑制作用 ; 4mg/kg 剂量组从 60-240min对犬缺血范围测定值， 与空白对照组比较有显著性差异， 相应变 化率从 120-180min有显著性的抑制作用。
从实验结果可以看出，海带低分子量褐藻多糖硫酸酯可以降低心肌梗塞的程度和 范围， 减少心肌梗塞的面积。
具体实验结果见表 1-6。 /s/uiz-oosld i
66·3Ε干 ·3Ζ- 干 '6- 09 ετ38Ό£- £V ZTL96Z-
6 9£ £^£ \ 6ε· 干 εε·9ΐι *irmZ. '00I *Ζ0·6ε¾Γ06 *0Υίί ίΖί6
LZL9fLVZ OYIL WI- 6t'69干 6Ζ/6- 08'"干 9- ^'οε干 8ε'9ΐ- 9£'l3干 8"l-
01 $¾9"6εΐ 80'6S干 ·6Π 9S'6S干 £8'8£l SO'Zi LVLZl ε8 ε干 ε8·οει 89' 干 wow
6£'9£TWe- #ε?·6ΐτεΓ9$- m'SlT86O?-
99· "干 εε'εοι 8 ε干 εε'οοι *06"9£TZ.rZ,6 ♦so' e^oo'^ *"9·οζ干 εε·6Δ **90'Ζ·1干 OS'8乙 *½-£ ¾9'06 **90'6ΖΤΖ,9"68
oi7干％·ε- 08'6 ri- 9L'L L£0- LS'Z^9Y9- 6 6£ 6 ζ- 16'9奸06'0_
S8'£S干 £8 91 Ζ.δ Ζ,τεΠΖ.1 6e"8m9'09l Z_6'09干 £8'0 1 6LSL^L9'\L\ 干 00· Ι
09£ οοε on 081 os ι 06 09
(uiui)
/.ΓΖ£τ£6-63- ιπε干 8ε · SrZ£干 98W- 88'εζ干 εο·9- 干 36 9£'53Τ8Γ9- %
**/.S' l¾9"£6 **66·"干 £8·96 *ει·6ε干 οο·9π 02'£9=F00"S£l w干 o oel 乙 6'is干 εε'ΐ 091 ν¾α
5Γ9乙干 Κ·9- 99 3Τ6ΠΙ- LVLZ^LVil- •K干 £6'S- %
S iS干 £8·(Μ 9£'
Figure imgf000012_0001
干 00'8£l 干 £8·(Μ €9"6mi'£Sl εΓ89τεε$9ΐ 0
Μίο ιτςγρς- #99 1干 16Ά- #S6' 干 9S'6£- #69·οζ干 εε·9ε- 917·ΖΖ干 9ε ζ- i/Οε干 99·8· Z.6"03=F86'9- %
***88'SIT00-S8 **"·εζ干 o 干" ·επ *l£'eZ¾9'Sll ZVSL^LVZ l 干 £8'68I 干 £8S6l 0
60·6乙干 ΙΓλ- 0S'9£干 Ζ8·0· 86·ΐε干 06·9£干 £17·乙- % .6·$ε¾9Ό 1 Z \S^L9'ZL\ 干" ·081 奸 OS'981 \ 0P^£VL9\ 09· £9干 00.981 -
ΟΖ SI 01 ς z (¾l/3ui)
隨
(uiui) 畺^
(9=u's干 Χ)(Λ '丄 s-2) m ^^mwwmi v 喜 ¾ ι挲
/s/u麵 O iiz-oosld o oozAV 6I干 89·8 - "ΌΖ干 90·ΙΖ· # '61干 £- # 8·9乙干 ε- •91干 00 1 917 干 Ο SI
Figure imgf000013_0001
**8S"£T00"£l ** , m9"3l
Ι £Ι干 68·ΙΙ· 6C-92W3l- is'/ 干 εο·8· 86'ΐετζ.ε·/.- 88·6Ζ干 8 干 6S'8- WSZ^ZVL-
80'm9'Z-l s/s干 εε·8ΐ I'S干·Γ61 S9'扦 0081 £9£干 00.81
干 96·% -
Figure imgf000013_0002
概 ο·6ΐ干 κ·εε-
W杆 OO'W 80·ε干 εε· *οι·ε干 00· ***06·ζ干 οο'ει ***ε8·ε干/ <9τι ***09·ε干 ε8·π
WL\f\S S\- 干 £8'8- 干 '9- 8ε·81干 6£Ί- i9'w干 εε·ο
6Γ£干" ·8Ι 6Z.-m8'6l O' =F£8'6l 干 OO'O 干 ε8·οζ ςζττζνιζ
09C οοε OPZ 081 OS I 031 06 09
Figure imgf000013_0003
οΐ7'9ζ干 ' οε- 爾 Ή干 88·οε- 68 Ζ干 80·6Ζ- 8"I干 10'U- 6Γ£Ι干 18 - %
*6S't "干 OS l **■ 干 os'ei **St7"e¾9"£l ISX=F0S'Z.I 0Γε干 εε· ·Ζ干 00·81 ·Ζ干乙 9·6Ι 0'9l ν¾α
LYQZ Q X 18SIT0I - ½·Ζ.ΙΤ99 Ι-
Figure imgf000013_0004
εετι干i/οι- 89·Π干 19S- % 干 ΟΟΌΖ £干 £8·61 80'S干 88· 9S 干 00·6Ι ZYV^LYQZ 0
#ZVL\ ZVPZ- #SZ/9I干 ΙΓΙΖ- 8^'8ΐτε9· .Ι- l干 Z /SI_ /.6'UTSS %
*8ΐ ^干 ε8·ςι 乙 Γ£干乙 9'9I 883=F0S"9l W 干 0S'9l ΔΓΖ干 OS'61 0 •u干 ει·8- 9 干 肌 I干 6 · O/6干 68'S- ίζτ ίνο- % ·6'ε干 ε8'6ΐ 干 £8·0乙 98 ¾ΐΌΖ: π·ε干 干 OS'lZ -
0£ OZ 51 01
(u!ui) S(f^ 喜^
(9=u'sTX)(^'is-N) ¾¾MH¾T9r^¥ Sl/H ^ V ^邈！ ¾ 邈¾喜士^¾ Z挲
表 3 低分子量褐藻多糖硫酸酯 B药对心肌梗死犬缺血程度的影响 （∑-ST，Mv)(X±s，n=6)
剂量 给药后 (min)
组别
(mg kg) 结扎 3 5 10 15 20 30 45 对照组 - 186.00±63.60 182.50±47.62 167.33±40.71 186.50±45.72 180.17±58.45 173.67±51.72 172.50±52.51 160.67±35.
% 6.44±43.27 -2.43±36.90 5.03±25.18 1.14±31.98 -0.82±36.50 -1.02±34.45 -7.21±29.09 舒血宁 4.0 195.83±55.89 189.83±92.59 182.17±78.42 146.33±48.13 1 15.67±23.31 * 1 13.17±15.74* 97.50±23.17** 85.00±15.8
% -6.98±20.97 -8.66±30.77 -24.36±22.46 -36.33±20.69# -39.56±12.95# -47.91±14.66# -54.15±12.0 样品 B 4.0 191.67±37.53 197.50±59.10 176.67±49.36 170.50±48.72 164.67±42.46 168.83±42.92 147.33±36.94 131.00±39.
% 1.57± 14.42 -7.52±19.68 -12.09士 10.98 -13.12±21.30 -1 1.07±20.43 -22.62± 14.75 -31.32士 16.4 样品 B 16.0 140.17±51.78 1 16.00±45.54* 104.50±48.56* 1 17.17±31.73* 109.17±34.42* 1 15.83±35.01 * 92.83±28.72** 89.33±24.0
% -15.47±19.72 -22.67±26.70 -13.45±1 1.00 -17.55±31.24 -12.84±29.79 -29.21±29.34 -32.73±18.9
给药后 （min)
60 90 120 150 180 240 300 360
175.00±55.68 171.67±75.79 170.83±60.97 163.50±49.94 160.67±48.39 171.33±70.57 166.17±64.44 164.83±57.
2.40±48.24 -0.90±46.91 -1.75±41.95 -5.29士 39.29 -5.46±42.57 -0.37±47.76 -1.24±49.80 -3.96±40.7
89.67士 29.06** 90.67±23.24* 78.50±17.06** 79.33±20.61 ** 94.00±34.05* 97.17±36.90* 100.33±34.48 103.33±37.
-53.33±1 1.82# -50.98±15.48# -56.13±19.53# -54.67±23.30# -45.77±32.33 -43.64±36.39 -44.08士 31.33 -41.78±35.
107.50±36.49* 95.50±38.95 98.50±38.26* 97.50±36.96* 88.33±47.82* 90.17±49.83* 107.17±44.58 106.67±41.
-44.01±15.97# -50.63±15.52# -49.15±13.88# -48.63±18.91# -51.46±32.26 -51.63±30.57 -42.1 1±30.55 -42.12±29.3
84.83±21.66** 84.33±29.64* 82.17±31.33* 88.17±33.1 1 * 91.50±44.63* 93.33±45.35* 99.17±33.14 109.33±37.
-34.67±25.19 -36.73±23.45 -40.71±13.93 -36.25±14.10 -35.92±19.17 -33.93±15.55 -27.21±14.88 -20.50±18.1 与生理盐水组比较， *P<0.05**P<0.01 ***P<0.001, 与生理盐水组变化百分率比较 #P<0.05,##P<0.01
表 4 低分子量褐藻多糖硫酸酯 B药对心肌梗死犬缺血范围的影响 （N-ST，点) (X±s，n=6)
剂量 给药后 (min)
组别
(mg kg) 结扎 3 5 10 15 20 30 45 对照组 - 21.50±2.95 21.50±3.21 20.83±3.25 20.17±3.13 20.17±2.86 19.83±2.64 20.83±2.64 19.83±3.97
% -0.13±3.27 -3.24±5.10 -5.89±9.70 -5.59±12.07 -7.47±6.52 -2.91±4.62 -8.13±1 1.1 舒血宁 4.0 19.50±2.17 19.50±2.07 16.50±4.14 16.50±2.88 16.67±3.27 15.83±2.48* 15.17±2.71 ** 12.83±3.55
% 0.55±1 1.97 -15.77±17.84 -14.44±18.47 -13.39±22.25 -17.63±18.48 -21.21±16.75# -34.13±17.1 样品 B 4.0 19.33±2.88 18.00±4.00 17.83±5.04 17.67±5.57 18.83±3.97 17.50±5.05 16.50±5.32 15.67±3.05
% -7.69±9.52 -9.18±14.34 -10.07±19.92 -3.31±8.64 -10.88±15.40 -16.03±18.79 -19.80±19. 样品 B 16.0 18.67±1.51 17.17±2.64* 14.17±5.15* 15.67±3.72* 15.50±12.07 15.83±2.64* 14.67±3.56** 14.00±2.68
% -8.35±8.51 -24.18±25.19 -15.90±18.41 -16.83±18.60 -14.84±14.36 -21.24±19.34# -24.55±16.
给药后 （min)
60 90 120 150 180 240 300 360
21.33±2.25 20.83±1.94 20.00±2.90 19.83士 2.04 19.83±2.79 19.33±2.25 17.83±2.48 18.17±3.19
0.33±14.61 -1.39土 18.38 -5.22±21.49 -6.71±13.25 -6.71±15.43 -8.83±14.59 -15.51±17.04 -14.35±16.
12.83±3.60*** 12.67±3.83*** 13.33±3.72** 13.00±2.90*** 14.50±2.35** 15.00±3.10* 14.33±3.08 14.00±4.52
-33.53±19.03## -35.08±18.85# -32.12±15.12# -33.62±10.78## -25.79±6.94# -22.89±15.13 -25.76±19.42 -26.96±28.
15.33±5.32* 14.83±5.19* 13.00±5.02* 12.83±5.53* 12.17±5.19** 12.67±5.96* 13.00±5.48 13.33±4.37
-21.47±21.78 -23.86±21.82 -33.90±20.10# -34·59±23·44# -37.89±21.91# -35.63±26.17 -34.1 1±22.90 -32.46±15.
12.83±4.12** 12.50±4.09** 12.33±2.73*** 1 1.00±4.15*** 1 1.83±5.42** 12.67±5.89* 13.83±3.76 12.83士 5.38
-31.15±21.48# -32.92±21.67# -33.85±14.20# -40.98±21.92## -36.84±27.06# -32.74±28.1 1 -25.97±18.49 -31.30±27.
表 5 低分子量褐藻多糖硫酸酯 A对心肌梗死犬心肌梗死面积的影响 （X±s,n=6) 组别 MM 梗死 /全心 (％) 梗死 /左心 (％) 生理 盐水组 一- 14.75±1.73 21.67±2.42
舒血宁 4.0mg/kg 1 1.74±1.66* 17.43±2.28* 样品 A 4.0mg/kg 12.63±1.06* 18.30±1.61 * 样品 A 16.0mg/kg 1 1.12±1.85** 16.66士 2.70** 表 6 低分子量褐藻多糖硫酸酯 B对心肌梗死犬心肌梗死面积的影响 （X±s,n=6)
组别
Figure imgf000016_0001
梗死 /全心(％) 梗死 /左心(％) 生理 盐水组 14.75±1.73 21.67±2.42
舒血宁 4.0mg/kg 1 1.74±1.66* 17.43±2.28* 样品 B 4.0mg/kg 1 1 29±0.83** 17.26±1.49** 样品 B 16.0mg/kg 9.32±0.41 *** 15.33±1.08*** 实施例 5 低分子量褐藻多糖硫酸酯对实验性脑缺血的保护作用
实验方法
对小鼠断头张口呼吸时间、 呼吸次数及脑水含量的影响
ICR小鼠，雌雄各半， 随机分组， 分别为空白对照组、 阳性对照组、 样品 A 200、 100、 50 mg-kg-1 , 样品 B 400、 200、 100、 50 mg'kg—1剂量组， 给药组小鼠分别经尾静 脉 l Ornl^g-1给药，阳性对照组尾静脉注射尼莫地平 SmgAg—1,模型组给以生理盐水，药后 15min,用大剪刀断头，记录小鼠张口喘气时间、 呼吸次数及脑水含量， 进行组间比较。
脑含水量测定：取全脑,称其湿重后在 100°C烤箱中烤干 24h，取其平均值计算脑含 水量:脑含水量(％)= (湿重 -干重湿重） χΐοο%， 脑指数： 脑指数 =脑湿重（g) /体重（g) χ 100%。
对颈总动脉结扎再灌注引起的小鼠脑缺血的影响
实验分组： 假手术组和模型组 （分别给予等体积的生理盐水）， 阳性对照组 （尼 莫地平 2mg'kg ) , 样品 A ( 200、 100、 50 mg-kg"1 ) , 样品 B ( 200、 100、 50 mg-kg 1 ) , 给药容积为 10ml/kg。
动物模型建立： 将分好组的小鼠， 分别尾静脉注射受试物、尼莫地平或生理盐水 15min后， 3.5%水合氯醛麻醉， 将小鼠仰位固定， 分离左右两侧颈总动脉， 分离迷走 神经，于双侧颈总动脉下穿入 4号手术线，拉紧丝线固定，使得血流阻断约 5min, 5min 后松开丝线， 使血流复灌 lOmin, 如此反复 3次， 制成小鼠缺血再灌注模型， 于最后 一次复灌后， 将小鼠处死， 取脑。 假手术组只分离两侧颈总动脉， 不牵拉丝线。 实验结果
对小鼠断头张口呼吸时间、 呼吸次数、 脑指数和脑水含量的影响
对小鼠断头后呼吸时间和呼吸次数的影响：样品 A在 200 mg/kg剂量时与空白对 照组比较， 能显著延长呼吸时间 （P<0.01 )， 并能显著增加断头后小鼠的呼吸次数 (P<0.01 ); 样品 B 在 100mg/kg 时能显著延长小鼠的呼吸时间，剂量在 400、 100、 50mg/kg时能显著增加小鼠的呼吸次数 （P<0.05 )。 结果见表 7。
对脑指数和脑水含量的影响： 本次试验中， 样品 A200mg/kg、 100mg/kg脑指数 和脑水含量均降低， 与空白对照组比较产生显著差异（PO.05或 P<0.01 )， B400mg/kg 可显著降低脑水含量（PO.05 ), 说明样品八、 B可以减轻缺血再灌后的脑水肿， 降低 颅内压， 改善脑部微循环， 结果见表 8。
对颈总动脉结扎再灌注引起的小鼠脑缺血的影响
本次实验中， 模型组的 LDH水平较假手术组有显著性升高， SOD水平显著下降 (P<0.01 )，表明造模后出现了脑细胞死亡的缺血症状，尼莫地平能使 SOD生成增加， 同时使 LDH的活力降低， 样品 A200 mg/kg、 100 mg/kg能使 SOD的生成增加， 并同 时降低 LDH的活力 （PO.05或 P<0.01 )， B200 mg/kg能显著降低 LDH的活力、 增加 SOD的生成 （P<0.05 )。 结果见表 9。
表 7低分子量褐藻多糖硫酸酯对断头小鼠呼吸时间和呼吸次数的影响
剂量 动物数 呼吸时间 呼吸次数 组别
(mg/kg) (只） ( S) (次） 空白对照 - 10 15.9±2.6 11.9±3.1 尼莫地平 2 10 23.8±3.2** 17.0±3.2** 样品 A 200 10 22.9±2.5** 16.8士 3.1 " 样品 A 100 10 18.7士 2.8* 13.9±1.5* 样品 A 50 10 14.9±3.2 12.6±2.4 样品 B 400 10 17.4±1.8 14.8±2.1 * 样品 B 200 10 17.5±1.3 12.7±2.2 样品 B 100 10 18.1±2.0* 14.6±1.7* 样品 B 50 10 17.3±3.0 15.3士 3.2* 表 8低分子量褐藻多糖硫酸酯对断头小鼠脑水含量的影响 剂量 动物数 脑指数 脑水含量 组别
(mg/kg) (只） (%) (%) 空白对照 - 10 1.59±0.12 80.6±2.4 尼莫地平 2 10 1.40±0.14** 75.8±1.0** 样品 A 200 10 1.39±0.10** 75.1±0.9** 样品 A 100 10 1.48±0.07* 78.5±1.6* 样品 A 50 10 1.54士 0.15 81.3士1.8 样品 B 400 10 1.48±0.16* 78.5±1.6* 样品 B 200 10 1.54±0.13 80.1±2.7 样品 B 100 10 1.59±0.11 80.U1.7 样品 B 50 10 1.57士 0.12 79.9士 1.6 表 9低分子量褐藻多糖硫酸酯对缺血小鼠脑 LDH和 SOD含量的影响 剂量 动物数 LDH SOD 组别
(mg/kg) (只） (U/mg) (U/mg) 空白对照 - 10 10.3±1.7 163.87±13.08 模型对照 - 10 32.1±8.7## 123.37士12.96## 尼莫地平 2 10 11.3±6.6** 144.77±21.61 * 样品 A 200 10 18.7士 8.6 151.54±15.90** 样品 A 100 10 22.9±8.3* 145.56±27.31 * 样品 A 50 10 27.9±6.0 128.11±36.83 样品 B 200 10 23.1±9.1 * 143.82士 26.85* 样品 B 100 10 24.7±9.3 138.81士 27.55 样品 B 50 10 29.9±11.5 139.75±33.98

Claims

权利要求
1 . 低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途， 所述的 低分子量褐藻多糖硫酸酯是将褐藻多糖硫酸酯通过降解而制得的硫酸化多糖或寡糖 类物质， 所述的心脑血管疾病选自冠心病、 脑中风。
2. 根据权利要求 1 的用途， 其中所述的冠心病选自无症状型冠心病、 心绞痛型 冠心病、 心肌梗死、 心律失常、 猝死型冠心病中的一种或几种。
3. 根据权利要求 1的用途， 其中所述的脑中风选自脑出血、 脑梗塞。
4. 根据权利要求 1〜3中任一项权利要求的用途， 其中所述的低分子量褐藻多糖 硫酸酯来源于褐藻多糖硫酸酯， 该褐藻多糖硫酸酯来源于海带。
5.根据权利要求 4的用途，其中所述的低分子量褐藻多糖硫酸酯分子量为 8000〜 100000。
6.根据权利要求 5的用途,其中所述的低分子量褐藻多糖硫酸酯分子量为 8000〜 60000。
7.根据权利要求 6的用途，其中所述的低分子量褐藻多糖硫酸酯分子量为 8000〜
8. 根据权利要求 6 的用途， 其中所述的低分子量褐藻多糖硫酸酯分子量为 20000〜40000。
9. 根据权利要求 1 的用途， 其中的低分子量褐藻多糖硫酸酯的剂型为注射剂、 口服制剂、 局部给药制剂或鼻腔给药制剂。
10. 根据权利要求 1的用途， 其中的降解方式选自酸降解法、 碱降解法、 酶降解 法、 物理降解法、 自由基氧化降解法中的一种或几种。
PCT/CN2007/002620 2006-09-04 2007-08-31 Utilisation de fucoïdane de faible masse moléculaire dans la préparation d'un médicament destiné au traitement de maladies cardio-vasculaires et cérébrovasculaires WO2008028410A1 (fr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/397,428 US20090170810A1 (en) 2006-09-04 2009-03-04 Methods of treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases with low molecular weight fucoidan

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200610127925.8 2006-09-04
CN200610127925 2006-09-04
CN200610140395.0 2006-12-08
CN2006101403950A CN1985847B (zh) 2006-09-04 2006-12-08 低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US12/397,428 Continuation US20090170810A1 (en) 2006-09-04 2009-03-04 Methods of treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases with low molecular weight fucoidan

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2008028410A1 true WO2008028410A1 (fr) 2008-03-13

Family

ID=38182874

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2007/002620 WO2008028410A1 (fr) 2006-09-04 2007-08-31 Utilisation de fucoïdane de faible masse moléculaire dans la préparation d'un médicament destiné au traitement de maladies cardio-vasculaires et cérébrovasculaires

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20090170810A1 (zh)
CN (1) CN1985847B (zh)
WO (1) WO2008028410A1 (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1985846B (zh) * 2006-09-04 2011-08-31 北京世纪博康医药科技有限公司 褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途
CN1985847B (zh) * 2006-09-04 2011-10-05 北京世纪博康医药科技有限公司 低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途
US10590207B2 (en) 2010-11-23 2020-03-17 DuPont Nutrition USA, Inc. Process for isolating fucoidan and laminarin from live, harvested seaweed
JP5950656B2 (ja) * 2012-04-02 2016-07-13 株式会社マルハチ村松 ＮＦ−κＢ阻害剤
CN103230411B (zh) * 2013-05-20 2015-10-28 首都医科大学 褐藻多糖硫酸酯在制备预防和/或治疗糖尿病心肌病药物中的应用
CN105131147B (zh) * 2015-10-09 2017-08-15 中国科学院海洋研究所 一种褐藻多糖硫酸酯的降解方法
CN105663154B (zh) * 2016-01-18 2020-06-30 首都医科大学 褐藻多糖硫酸酯在制备预防和/或治疗下肢外周动脉血管病的产品中的应用
CN105617355A (zh) 2016-01-29 2016-06-01 徐宝贞 一种用于治疗心脑血管疾病的药物
CN106852934A (zh) * 2017-01-06 2017-06-16 许勇男 一种治疗偏头痛药物组合物
EP3830139A4 (en) 2018-07-27 2022-04-27 Arc Medical Devices, Inc. HIGHLY PURIFIED FUCAN FOR THE TREATMENT OF FIBROUS ADHESIONS
CN110917208B (zh) * 2019-12-27 2021-02-12 浙江医院 硫酸化甘露葡萄糖醛酸六糖在防治动脉粥样硬化中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005095427A1 (ja) * 2004-04-02 2005-10-13 Takara Bio Inc. 血栓症の予防又は治療のための組成物
CN1985847A (zh) * 2006-09-04 2007-06-27 北京世纪博康医药科技有限公司 低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040043961A1 (en) * 2000-07-13 2004-03-04 Hua-Kang Wu Drugs or cosmetics

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005095427A1 (ja) * 2004-04-02 2005-10-13 Takara Bio Inc. 血栓症の予防又は治療のための組成物
CN1985847A (zh) * 2006-09-04 2007-06-27 北京世纪博康医药科技有限公司 低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN1985847B (zh) 2011-10-05
CN1985847A (zh) 2007-06-27
US20090170810A1 (en) 2009-07-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2008028410A1 (fr) Utilisation de fucoïdane de faible masse moléculaire dans la préparation d&#39;un médicament destiné au traitement de maladies cardio-vasculaires et cérébrovasculaires
WO2008031332A1 (fr) Utilisation du fucoïdane pour préparer des médicaments destinés à traiter des maladies cardio-vasculaires et cérébro-vasculaires
KR101182917B1 (ko) 인삼 2차 배당체를 함유하는 의약 조성물, 그의 제조 방법및 용도
US8686053B2 (en) Alginic acid with low molecular weight, its salts, uses, preparative methods, pharmaceutical compositions and foods
CN102670864B (zh) 治疗心脑血管疾病和糖尿病的抗氧化功能的药物组合物
CN106344595B (zh) 褐藻胶寡糖及其衍生物在制备治疗疼痛药物中的应用
JP2017529835A (ja) 希少ジンセノサイドを高含量で含有する、山参もしくは高麗人参を含む高麗人参類の抽出物または高麗人参類の形成層由来植物幹細胞もしくはその抽出物の製造方法
CN101658525B (zh) 用于抗血栓性疾病的药物组合物及其制备方法和用途
WO2019124363A1 (ja) ポリ硫酸ペントサン及びポリ硫酸ペントサンを含む医薬
JP2002538214A (ja) 心血管疾病治療用薬剤組成物及びその製造方法
CN106806358A (zh) 一种参麦雾化吸入用溶液制剂及其制备方法
CN101306014B (zh) 低分子量褐藻多糖硫酸酯在糖尿病肾病药物制备中的用途
CN101152223B (zh) 杨树叶酚类提取物在制备治疗心律失常的药物中的应用
CN101028437A (zh) 一种防治心脑血管疾病的中药有效部位组合物及制备方法
CN109758497B (zh) 用于慢性心力衰竭的中药组合物、药物及其制备方法和应用
CN101032534B (zh) 救必应总皂苷的制备方法及应用
CN102973657B (zh) 芩暴红止咳合剂及其制备方法
WO1997022628A1 (fr) Inhibiteur d&#39;epaississement de la membrane intravasculaire
CN100496481C (zh) 一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法
CN107496510B (zh) 一种青钱柳胶囊及其制备方法
JP2021512998A (ja) 分離された白茅根多糖及びその用途
CN105748553A (zh) 一种活血消肿解毒的中药组合物及其制备方法
CN1935154A (zh) 褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途
CN103110659A (zh) 海参硫酸多糖在制备抗ii型糖尿病药物或制品中的应用
CN101176772B (zh) 一种由蒲黄与红花制成的药物组合物

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 07800837

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 07800837

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1