WO2007097010A1 - Ｆｋｉ−２３４２物質およびその製造法 - Google Patents

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Hiroshi Tomoda
Satoshi Omura
Rokuro Masuma
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The Kitasato Institute
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    • C12P7/6436—Fatty acid esters

Definitions

  • the death rate by cause of death in Japan in 2004 was “cancer”, and one in three people It has been reported that “cancer” will occur in a lifetime, and one in four people will die from “cancer”. Cancer is currently the leading cause of death in Japan.
  • anticancer drugs currently used in clinical practice are metabolites such as 5-FU, alkylating agents such as cisbratin, bleomycin and mitomycin, depending on the mode of action and its origin. It is classified into anticancer antibiotics such as.
  • alkylating agents and pile cancer antibiotics which have the effect of damaging cellular DNA and killing cells, can be surely effective even when the action time is short, when reaching a certain concentration. Attacks on normal cells are inevitable, and adverse drug reactions such as anemia due to organ damage and bone marrow damage, vomiting, and hair loss occur.
  • the present invention is an FK 1-2342 substance represented by the general formula [I] having an action of specifically inhibiting the G 2 tick point of a cell or each represented by the general formulas [H] to [W].
  • FK I-2342 A to F substances are provided.
  • the present invention is a culture of a microorganism belonging to the genus Aspergillus and having the ability to produce the above-mentioned general formula [I], specifically, FK1-2342 substance represented by [I] to [W].
  • the present invention provides a method for producing FK1-2342 substance, which accumulates FK1-2342 substance in a culture and collects FKI1-2342 substance from the culture.
  • the present invention also provides an Aspergillus niger FK 1-2342 strain.
  • the substance producing fungus j) belongs to Aspergillus but is not particularly limited as long as it has the ability to produce FK I-2 3 4 2 substance of the present invention.
  • Aspergillus niger FK 1-2-3 4 2 strain newly isolated from the soil of Nagasaki city by the present inventors.
  • the bacteriological properties of this strain are as follows.
  • the conidial stalk grows straight from the basal hyphae, and its length is 1 00 0—2 0 0 0 x 8. 8—16 zm, and an inverted T-shaped podocyte is formed at the base.
  • the tip of the conidia pattern swells from a spherical shape to a subspherical shape, forming a apex with a diameter of 3 2.5-50.
  • Aspergilla is double-row, consisting of metre (7—9 x 3.5-5 Jim) and ampoule type filar (5.5—8 x 3—4 m). Aspergillar covers the entire summit.
  • Conidia are formed from the tip of the phialide and become chained as the culture time elapses. The conidia were spherical to subspherical, brown to black, 3-4 / m in size, and the surface was rough.
  • an antifoaming agent such as liquid paraffin, animal oil, vegetable oil, silicone oil, or surfactant may be added as necessary.
  • the medium may be liquid or solid as long as it contains the above-mentioned nutrient sources. Usually, it is better to use a liquid medium for culture. In the case of small-scale production, culture using a flask is preferable. . In order to industrially produce the target substance in large quantities, it is preferable to carry out aeration and agitation culture in the same manner as other fermentation products.
  • Solubility in solvents Soluble in methanol, black mouth form and ethyl acetate, insoluble in water
  • Proton and carbon nuclear magnetic resonance spectra hydrogen and carbon chemical shifts measured using a 30 MHz nuclear magnetic resonance spectrometer manufactured by Norrian in heavy-cloned form.
  • the (p pm) value is as shown below. However, s is a singlet, t is a triplet, m is a multiplet, and J value is a coupling constant.
  • FK I-2342 B was obtained as a result of detailed examination of various physicochemical properties and spectrum data of FK I-2342 B substance. The substance was determined to have a chemical structure represented by the following formula [H].
  • Proton and carbon nuclear magnetic resonance spectra Hydrogen and carbon chemical shifts measured with a 30 MHz nuclear magnetic resonance spectrometer (Np. pm) Values are as shown below. However, s is a singlet, t is a triplet, m is a multi-lett, and J value is a coupling constant. Position of carbon Chemical shift of carbon (ppm) Chemical shift of hydrogen (ppm)
  • FK I— 2 3 4 2 has an IC 50 (bleo) of 1.2 gZm 1 to 1 0 0 ⁇ gZm 1 whereas IC 50 (col) is 1 0 z gZm l to 2 0 0 ⁇ gZm l
  • G2 phase stopping action G chuck point
  • FK I-2 3 4 2 D 5 and E 5 IC 5 . (Ble 0) was measured as 25 gZm 1 and 1.2 gZm 1 respectively
  • IC 50 (col) was measured as 1 75 5 g and 10 g / 1 between these two concentrations. Are 7 and 8 times different, respectively. Both substances are very selective G 2 check It became clear that it was inhibited.

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Description

明細書
FK I - 234 2物質およびその製造法 技術分野
本発明は、 細胞が DNA障害を受けたときにそれを修復する機構である。 具体 的には DNAに傷害を与える杭がん剤存在下 G 2チェックボイントを特異的に阻 害することで DNA障害型の抗がん剤のがん細胞特異性を高め、 副作用を軽減す る新規化合物 FK 1 - 2 34 2物質およびその製造法に関する。 背景技術
20 0 1年の厚生労働書の資料によると、 日本において平成 1 6年 （20 0 4 年） の死因別にみた死亡率は 「がん」 が死因のトップを占め、 3人に 1人がその 一生のうちに 「がん」 にかかり、 4人に 1人が 「がん」 により亡くなると報告さ れている。 現在がんはわが国の死因の第一位を占めている。 がんに対する化学療 法に関しては、 現在臨床で用いれている抗がん剤は、 作用様式やその由来などに より、 5— FUなどの代謝拮抗剤、 シスブラチンなどのアルキル化剤、 ブレオマ イシンやマイトマイシンなどの抗がん性抗生物質などに分類されている。 これら の中で、 細胞の DN Aに損傷を与え細胞を殺す作用を持つアルキル化剤や杭がん 性抗生物質は、 ある一定の濃度に達すると作用時間が短くても確実に効果を示す が、 正常細胞への攻撃も避けられず、 臓器障害や骨髄障害による貧血、 嘔吐、 脱 毛といつた薬物有害反応が生じる。
また、 近年がんの研究が盛んに行われるようになり、 様々なことが明らかとな つてきている。 特に正常細胞とがん細胞では D N A修復機構が異なることが明ら かとなり DN Aに障害が生じた場合、 正常細胞では G 1チェックポイントと G 2 チェックポイントによって DNAが修復されるが、 がん細胞では多くの場合、 G 2チヱックポイントのみに依存して DNA修復している。 このことから、 DNA に障害を与える抗がん剤存在下 G 2チェックボイントを特異的に阻害することが できれば、 がん細胞のみが DN Aを修復できなくなり細胞死へと誘導されると考 えられる （Suganumaら、 Cancer Research, 23巻 p.5887-5891 1999年） 発明の開示
かかる実情において、 杭がん剤のがん細胞への特異性を高める薬剤を提供する ことはがん治療において有用であると考える。 すなわち、 抗がん剤のがん細胞へ の特異性を高める薬剤は、 DN A障害性の抗がん剤や放射線によるがん治療にお いて、 その作用を増強させ、 副作用が軽減されることが期待できる。
本発明者らは微生物の生産する代謝産物について種々研究を続けた結果、 新た に土壌から分離した FK 1 - 2342菌株の培養液中に、 G 2チヱックポイント を阻害することにより DNA傷害型の杭がん剤のがん細胞特異性を高める物質 （ 以下 G 2チェックポイント阻害物質と称す） が生産されることを見い出した。 次 いで、 該培養液から活性物質を分離、 精製した結果、 後述の一般式 [ I] 、 具体 的には式 [H] — [VII] で示される化学構造を有する物質を見い出した。 これら [I] ― [VII] で示される物質は従来全く知られていないこから、 本物質を FK 1 - 2342 A物質、 F K I - 234、2 B物質、 F K I - 2342 C物質、 F K 1 - 2342 D物質、 FK I— 2342 E物質および FK 1 - 2342 F物質と 夫々称することとし、 その総称を FK 1 - 2342物質と称することとした。 本発明では、 このようながん細胞と正常細胞の DNA修復機構の違いに着目し、 既存の杭がん剤のがん細胞への特異性を高めることを可能とした FK 1 -234 2物質およびその製造法を提供することを目的としている。
本発明は上述したような知見にもとづいて完成されたものであり、 下記一般式 [I]
Figure imgf000003_0001
(式中 nは 1〜3、 Ri は CH3 —または CH3 CH2 一、 R2 は CH3 は H—） で表される FK 1 - 2342物質を提供するものである。
また本発明は、 一般式 [I] で表される化合物において、 n、 R, 、 R2 が夫 々下記
n R. R2 化合物番号
FK I一 2 34 2 A 1 CH3 一 CH3 一 [I]
FK I一 2 34 2 B 2 CH3 ― H- [1]
FK I一 2 34 2 C 2 CH3 CH2 - H- [IV]
FK I - 2 34 2 D 2 CH3 ― CH3 - [V]
FK I - 2 34 2 E 3 CH3 ― H- [VI]
FK I - 2 34 2 F 1 CH3 CH2 - H- [ ] で表される FK 1 - 2342 A〜F物質を提供するものである。
更に本発明は、 細胞の G 2チ ックポイントを特異的に阻害する作用を有する 一般式 [ I ] で表される FK 1 - 2342物質または一般式 [H] 〜 [W] で夫 々表される FK I— 2342 A〜F物質を提供するものである。
また、 本発明は、 一般式 [ I ] で表される FK 1 - 2342物質、 または一般 式 [I！] 〜 [W] で表される FK 1 - 2342 A〜F物質を作用させることによ る、 がん細胞の G 2チェックボイントを特異的に阻害する方法を提供するもので のる。
また、 本発明は、 ァスペルギルス属に属し、 前述の一般式 [I] 、 具体的には [I] 〜 [W] で表される FK 1 - 2342物質を生産する能力を有する微生物 を培地に培養し、 培養物中に FK 1 - 2342物質を蓄積せしめ、 該培養物から FK I - 2342物質を採取する FK 1 - 2342物質の製造法を提供するもの である。
また、 本発明は、 ァスペルギルス属に属し、 前述の一般式 [ I] 、 具体的には [I] 〜 [W] で表される FK 1 - 2342物質を生産する能力を有するァスぺ ルギルス 二ガー （Aspergillus niger)FK 1 - 2342またはその変異株であ る FK I— 2342物質の製造法を提供するものである。
また、 本発明は、 ァスペルギルス 二ガー （Aspergillus niger)FK 1 - 23 42菌株を提供するものである。 前記の一般式 [ I ] 、 具体的には式 [H] 〜 [VE] で表される新規 FK I一 2 3 4 2物質を生産する能力を有する微生物 （以下 「FK I — 2 3 4 2物質生産菌 j と称する） はァスペルギルスに属するが、 本発明の FK I— 2 3 4 2物質生産 能を有するものであればよく、 特に制限されることはない。 本発明の FK I — 2 3 4 2物質を生産するために使用される菌株の好適な一例としては、 本発明者ら によって長崎市の土壌より新たに分離されたァスペルギルス 二ガー （Aspergil lus niger)FK 1 - 2 3 4 2株が挙げられる。 本菌株の菌学的性状を示すと以下 のとおりである。
1. 形態的特徴
本菌株は、 ッァペック ，イーストエキス寒天培地、 麦芽汁寒天培地、 ショ糖 2 0 %入りッァぺック ·ィーストエキス寒天培地などで良好に生育し、 各寒天培地 での分生子の着生は良好であつた。
ッァぺック ·ィーストエキス寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡で観察する と、 菌糸は無色で隔壁を有していた。 分生子柄は基底菌糸より直生し、 その長さ は、 1 0 0 0— 2 0 0 0 x 8. 8— 1 6 zmで基部には逆 T字型の足細胞を生じ る。 分生子柄の先端は、 球形から亜球形に肥大し、 直径 3 2. 5 - 5 0 の頂 囊を形成する。 ァスペルギラは、 複列性で、 メ トレ （7— 9 x 3. 5 - 5 Jim) とアンプル型のフィアラィド （ 5. 5— 8 X 3— 4 m) からなる。 ァスペルギ ラは頂囊の全体を覆う。 フィアライドの先端からは分生子が形成され、 培養時間 の経過とともに連鎖状となる。 分生子は、 球形から亜球形、 褐色から黒色、 大き さ 3— 4 / mで表面は粗面であった。
2. 培養性状
各種寒天培地上で、 2 5°C、 7日間培養した場合の肉眼的観察結果を次表に示 す。 培地 培地上の生育状態 コロニー表面 コロニー裏面 可溶性
(コロニーの直径） の色調 の色調 色素 ッァぺック ·ィ一ストエキス寒天培地
良好 (62-65 mm)
ビロード状〜粉状 黒褐色 薄黄色 なし 周辺平滑 麦芽汁寒天培地
良好 （42-45 隱）
ビロード状〜粉状 黒褐色 薄黄色 なし 周辺平滑
2 0 %ショ糖ッァぺック .ィーストエキス寒天培地
良好 （70- 75画）
ビロード状〜粉状 黒褐色 薄黄色
周辺平滑 なお、 本菌株はッァペック ·イーストエキス寒天培地、 5°Cで 1 4日間培養し たが、 生育しなかった。 3 7°Cでは、 良好な生育を示し、 分生子の着生も良好で あつ 7 o
3. 生理的性状
1 ) 最適生育条件
本菌株の最適生育条件は、 pH 3〜8、 温度 2 4〜 4 1 °Cである。
2) 生育の範囲
本菌株の生育範囲は、 pH 2〜9、 温度 1 4〜4 3. 5°Cである。
3) 好気性、 嫌気性の区別
好気性
4 · t ^侖 上記 FK 1 - 2342株の形態的特徴、 培養性状及び生理的性状に基づき、 既 知菌種との比較を試みた結果、 本菌株はァスペルギルス 二ガー （Aspergillus niger)属に属するー菌株と同定し、 ァスペルギルス ·二ガー FK I— 2342と 命名した。 国際寄託
本菌株はァスペルギルス 二ガー FK 1 - 2342 (Aspergillus niger FKI- 2342) として、 特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約 に基づき、 日本国千葉県木更津市かずさ鎌足 2丁目 5番 8号 （郵便番号 292 - 08 1 8) に所在する独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託セン 夕一 (Incorporated Administrative Agency National Institute of Technology and Evalution NITE Patent Microorganisms Depositary (NPMD)) に 2006年 2月 1 3日に寄託され、 受領番号 N I TE ABP- 1 95が付与された。
本発明で使用される FK 1 - 2342物質生産菌としては、 前述のァスペルギ ルス 二ガー FK I— 2342菌株が好ましい例として挙げられるが、 菌の一般 的性状として菌学上の性状は極めて変異し易く、 一定したものではなく、 自然的 にあるいは通常行われる紫外線照射、 X線照射または変異誘導体、 例えば N—メ チルー N' —二トロ一 N—二トロソグァ二ジン、 2—ァミノプリンなどを用いる 人工的変異処理にに容易に変異するものである。 これらの処理より取得できる人 ェ的変異株は勿論、 細胞融合株、 遺伝子操作株、 自然変異株も含め、 ァスペルギ ルス 二ガー （Aspergillus niger ) に属し、 前記の式 [H] 〜 [W] で表され る F K I— 2342物質を生産する能力を有する菌株はすべて本発明に使用する ことができる。
本発明を実施するに当たっては、 先ずァスペルギルス 二ガーに属する FK I - 2342物質生産菌を培地に培養することにより行われる。 上記 FK 1 -23 42物質生産に適した栄養源としては、 微生物が同化し得る炭素源、 消化し得る 窒素源、 さらに必要に応じて無機塩、 ビタミン等を含有させた栄養培地が使用さ れる。 上記の同化し得る炭素源としては、 グルコース、 フラクトース、 マルト一 ス、 ラクトース、 ガラクトース、 デキストリン、 澱粉などの糖類、 大豆油等の植 物性油脂類が単独または組み合わせて用いられる。
消化し得る窒素源としては、 ペプトン、 酵母エキス、 肉エキス、 大豆粉、 綿実 粉、 コーン ' スティ一プ ' リカ一、 麦芽エキス、 カゼィン、 アミノ酸、 尿素、 ァ ンモニゥム塩類、 硝酸塩類などが単独または組み合わせて用いられる。 その他必 要に応じてリン酸塩、 マグネシウム塩、 カルシウム塩、 ナト リウム塩、 カリウム 塩などの塩類、 鉄塩、 マンガン塩、 銅塩、 コバルト塩、 亜鉛塩などの重金属塩類 ゃビ夕ミン類、 その他 F K I— 2 3 4 2物質の生産に好適なものが適宜に添加さ れる。
培養するに当たり、 発泡の激しいときには、 必要に応じて液体パラフィ ン、 動 物油、 植物油、 シリコン油、 界面活性剤などの消泡剤を添加してもよい。 上記の 培養は、 上記栄養源を含有すれば、 培地は液体でも固体でもよいが、 通常は液体 培地を用い、 培養するのがよい、 少量生産の場合にはフラスコを用いる培養が好 適である。 目的物質を大量に工業生産するには、 他の発酵生産物と同様に、 通気 攪拌培養するのが好ましい。
培養を大きなタンクで行う場合は、 生産工程において、 菌の生育遅延を防止す るため、 はじめに比較的少量の培地に生産菌を接種培養した後、 次に培養物を大 きなタンクに移して、 そこで生産培養するのが好ましい。 この場合、 前培養に使 用する培地および生産培養に使用する培地の組成は、 両者とも同一であってもよ いし、 必要があれば両者を変えてもよい。
培養を通気攪拌条件で行う場合は、 例えばプロペラやその他機械による攪拌、 ファメン夕一の回転または振とう、 ポンプ処理、 空気の吹き込み窓、 既知の方法 が適宜使用される。 通気用の空気は、 滅菌したものを使用する。
培養温度は、 本 F K I - 2 3 4 2物質生産菌が本 F K 1 - 2 3 4 2物質を生産 する範囲内で適宜変更し得るが、 通常は 2 0〜3 0 °C、 好ましくは 2 7 °C前後で 培養するのがよい。 培養 p Hは、 通常 5〜8、 好ましくは 7前後で培養するのが よい。 培養時間は、 培養条件によっても異なるが、 通常は 4〜7日程度である。 このようにして得られた F K 1 - 2 3 4 2物質は、 培養菌体および培養濾液に存 在する。 培養物から目的とする F K 1 - 2 3 4 2物質を採取するには、 全培養物 をアセ トンなどの水混和性有機溶媒で抽出し、 抽出液を減圧下有機溶媒で留去後 、 続いて残渣を酢酸ェチル等の水不混和性有機溶媒で抽出することによって行わ れる。
上記の抽出法に加え、 脂溶性物質の採取に用いられる公知の方法、 例えば吸着 クロマトグラフィー、 ゲル濾過クロマトグラフィー、 薄層クロマトグラフィー、 遠心向流分配クロマトグラフィー、 高速液体クロマトグラフィ一等を適宜組み合 わせ、 あるいは繰り返すことにより、 FK I— 2 34 2物質を分離、 精製するこ とができる。 本発明の FK 1 - 23 4 2物質の理化学的性状について説明する。
FK I - 2 34 2 A物質
( 1 ) 性状 ：黄色シロップ状
(2) 分子式： C H!sOe
HRFAB-MS (m/z) [M + H] + 計算値 24 5. 1 0 2 5 実測値 24 5. 1 0 24
( 3 ) 分子量： 24 4
FAB-MS (m/z) [M+ ] 24 4を実则
(4) 紫外部吸収スぺク トル： メタノール溶液中で測定
Ama x (ε) 20 3 nm (ε 6, 0 0 0 )
(5) 赤外部吸収スぺク トル：臭化カリウム （KB r) 錠剤法で測定
レ ma x 34 5 0、 29 5 6、 1 73 5、 1 4 3 8、 1 2 6 1、 1 2 0 7 cm-1
( 6) 比旋光度： [«] 。 26 = + 1. 8 (c = 0. K Me OH)
(7) 溶剤に対する溶解性： メタノール、 クロ口ホルムや酢酸ェチルに可溶、 水 に不溶
(8) プロ トン及びカーボン核磁気共鳴スペク トル：重クロ口ホルム中で、 ノくリ アン社製 3 0 0 MHz核磁気共鳴スぺク トロメータを用いて測定した水素及び炭 素の化学シフ ト （p pm) 値は下記に示すとおりである。 ただし、 sはシングレ ッ ト、 tはトリプレッ ト、 mはマルチブレッ ト、 J値は結合定数を示す。 炭素の位置 炭素の化学シフト（ppm) 水素の化学シフト（ppm)
C一 1 1 7 0. 8
C一 2 1 3 7. 4
C一 3 4 6. 1 3. 5 0 ( 1 H, t, J= 7. 0 Hz)
C一 4 3 0. 4 1. 7 2 ( 1 H, m)
1. 9 6 ( 1 H， m)
C一 5 2 2. 7 1. 6 2 (2H, m)
C一 6 3 3. 6 2. 3 4 (2H， t, J = 7. 0 Hz)
C一 7 1 7 3. 7
C一 8 1 2 9. 5 5. 8 8 ( 1 H, s)
6. 5 1 ( 1 H, s)
C一 9 1 7 3. 3
C一 1 0 5 2. 2 3. 6 9 (3 H, s)
c - 1 1 5 1. 2 3. 6 6 (3H, s) 以上のように、 FK I— 2 34 2 A物質の各種理化学的性状やスぺクトルデ一 夕を詳細に検討した結果、 FK I— 234 2 A物質は下記式 [I] で表される化 学構造であることが決定された。
COOH
Figure imgf000010_0001
FK I - 2 34 2 B物質
( 1 ) 性状 ：黄色シロップ状
(2) 分子式： C12H1806
HRF AB-MS (m/z) [M + H] + 計算値 25 9. 1 1 8 2 実測値 25 9. 1 1 8 3
( 3 ) 分子量 : 2 5 8 FAB-MS (m/z) [M+ ] 2 5 8を実測
(4) 紫外部吸収スぺク トル： メタノール溶液中で測定
Ama x (ε) 2 0 4 nm ( ε 8, 9 0 0 )
( 5) 赤外部吸収スぺク トル：臭化カリウム （KB r) 錠剤法で測定
ma x 3 4 8 2、 2 9 5 2、 1 7 3 1、 1 7 1 6、 1 4 3 8、 1 2 0 9 cm-1
( 6) 比旋光度： [ひ] 。 26 =— 1. 7 (c = 0. 1. Me OH)
( 7) 溶剤に対する溶解性： メタノール、 クロ Dホルムや酢酸ェチルに可溶、 水 に不溶
( 8) プロトン及び力一ボン核磁気共鳴スペク トル：重クロ口ホルム中で、 バリ アン社製 3 0 0 MHz核磁気共鳴スぺク トロメータを用いて測定した水素および 炭素の化学シフト （p pm) 値は下記に示すとおりである。 ただし、 sはシング レッ ト、 tはトリプレッ ト、 mはマルチブレッ ト、 J値は結合定数を示す。 炭素の位置 炭素の化学シフト（ppm) 水素の化学シフト（ppm)
C一 1 1 7 1. 5
C一 2 1 3 7. 5
C一 3 4 6. 8 3. 4 6 ( 1 H, t, J = 7. 0 Hz)
C一 4 3 0. 3 1. 7 1 ( 1 H, m)
1. 9 2 ( 1 H, m)
C- 5 2 7. 2 1. 3 2 (2H, m)
C一 6 2 9. 0 1. 3 2 (2H, m)
C - 7 2 4. 9 1. 6 1 (2H, m)
C - 8 3 4. 2 2. 3 1 (2H, t, J= 7. 5 Hz)
C一 9 1 7 4. 6
一 1 0 1 2 9. 9 5. 8 6 ( 1 H, s)
6. 5 1 ( 1 H, s)
- 1 1 1 7 9. 2 C- 1 2 5 1. 8 3. 66 ( 3 H, s) 以上のように、 FK I— 2342 B物質の各種理化学的性状やスぺクトルデー 夕を詳細に検討した結果、 FK I— 2342 B物質は下記式 [H] で表される化 学構造であることが決定された。
Figure imgf000012_0001
FK I - 2342 C物質
(1) 性状 ：黄色シロップ状
(2) 分子式： C13H2cOs
HRFAB-MS (m/z) [M + H] + 計算値 273. 1 33 8 実測値 273. 1 335
( 3 ) 分子量： 272 '
FAB-MS (m/z) [M+ ] 272を実測
(4) 紫外部吸収スぺク トル： メタノール溶液中で測定
Amax (e) 20 1 nm (£ 7, 700 )
(5) 赤外部吸収スぺク トル：臭化力リウム （KB r) 錠剤法で測定
レ max 3448、 293 1、 1 73 1、 1 71 6、 1 26 1、 802 c m— 1
(6) 比旋光度： [ ] D 26 =— 6. 0 (c = 0. K MeOH)
(7) 溶剤に対する溶解性： メタノール、 クロ口ホルムや酢酸ェチルに可溶、 水 に不溶
(8) プロトン及び力一ボン核磁気共鳴スペク トル：重クロ口ホルム中で、 バリ アン社製 300 MHz核磁気共鳴スぺク トロメータを用いて測定した水素および 炭素の化学シフ ト （p pm)値は下記に示すとおりである。 ただし、 sはシング レッ ト、 tはトリブレツ ト、 mはマルチプレツ ト、 J値は結合定数を示す。. 炭素の位置 炭素の化学シフ ト（ppm) 水素の化学シフト（ppm)
C一 1 1 7 1. 2
C一 2 1 3 7, 3
C一 3 4 6. 8 3. 3 7 ( 1 H, t， J = 7. 5 Hz)
C一 4 2 9. 8 1. 6 7 ( 1 H, m)
1. 8 6 ( 1 H, m)
C一 5 2 7 1. 2 8 (2H, m)
C - 6 2 8. 7 1. 2 8 (2H， m)
C一 7 2 4. 7 1. 5 6 (2H, m)
C一 8 3 4. 2 2. 2 4 (2H， t， J = 7. 5Hz)
C一 9 1 7 3. 9
C一 1 0 1 2 9. 7 5. 7 8 ( 1 H， s)
6. 4 5 ( 1 H, s)
C一 1 1 1 7 9. 0
C一 1 2 6 0. 3 4. 0 5 (2H, q， J = 7. 0Hz)
C一 1 3 1 4. 2 1. 1 8 (3H， t, J = 7. OHz) 以上のように、 FK I— 2342 C物質の各種理化学的性状やスぺクトルデ一 夕を詳細に検討した結果、 FK I— 2342 C物質は下記式 [IV] で表される化 学構造であることが決定された。
COOH
Figure imgf000013_0001
FK I - 2342 D物質
(1) 性状 ：黄色シロップ状
(2) 分子式： C13H2。06 HRFAB-MS (m/z) [M + H] + 計算値 27 3. 1 3 3 8 実測値 2 7 3. 1 34 2
( 3 ) 分子量： 2 72
FAB-MS (m/z) [M+ ] 272を実測
(4) 紫外部吸収スぺク トル： メタノール溶液中で測定
Ama x (ε) 2 0 2 nm (ε 1 7, 0 0 0)
(5) 赤外部吸収スぺク トル：臭化カリウム （KB r) 錠剤法で測定 ;
ma x 34 5 5, 29 5 2、 2 8 6 1、 1 73 7、 1 4 3 8、 1 20 7 cm"1
( 6) 比旋光度： [ひ] 。 26 = + 3. 0 (c = 0. 1 , Me OH)
(7) 溶剤に対する溶解性： メタノール、 クロ口ホルムや酢酸ェチルに可溶、 水 に不溶
( 8) プロトン及びカーボン核磁気共鳴スペク トル：重クロ口ホルム中で、 ノく リ アン社製 3 0 0 MHz核磁気共鳴スぺク トロメータを用いて測定した水素および 炭素の化学シフ ト （p pm) 値は下記に示すとおりである。 ただし、 sはシング レッ ト、 tはトリプレッ ト、 mはマルチブレッ ト、 J値は結合定数を示す。 炭素の位置 炭素の化学シフト（ppm) 水素の化学シフト（ppm)
C一 1 1 7 0. 8
C一 2 1 3 7. 7
C一 3 4 6. 0 3. 4 3 ( 1 H, t, J= 7. 0 Hz)
C一 4 3 0. 8 1. 6 3 ( 1 H, m)
1. 8 4 ( 1 H, m)
C一 5 2 6. 9 1. 28 (2H, m)
C - 6 2 8. 6 1. 28 (2H, m)
C一 7 2 4. 5 1. 5 6 (2H, m)
C一 8 3 3. 8 2. 24 (2H, t， J= 7. 0 H z)
C一 9 1 7 4. 2 C- 1 0 1 28. 8 ( 1 H,
( 1 H,
C 1 1 1 73 6
C 1 2 5 2 0 (3H,
C 1 3 5 1 4 (3H, 以上のように、 FK I— 23 42 D物質の各種理化学的性状やスぺク トルデー 夕を詳細に検討した結果、 FK I— 234 2 D物質は下記式 [V] で表される化 学構造であることが決定された。 [V]
Figure imgf000015_0001
FK I - 2 34 2 E物質
( 1 ) 性状 ：黄色シロップ状
(2) 分子式： C14H22〇6
HRFAB-MS (m/z) [M + H] + 算値 28 7. 1 4 9 5 実測値 2 8 7. 1 4 9 8
( 3 ) 分子量： 28 6
FAB-MS (m/z) [M+ ] 28 6を実測
(4) 紫外部吸収スぺク トル： メタノール溶液中で測定
Ama X (ε) 1 9 8 nm ( ε 1 2, 9 0 0 )
(5) 赤外部吸収スぺク トル：臭化力リウム （KB r ) 錠剤法で測定
レ ma x 34 8 2、 2 9 3 3、 2 8 5 7、 1 7 1 6、 1 4 3 8、 1 2 0 3 cm"1
( 6) 比旋光度： [ひ] 。 26 = + 4. 9 (c = 0. 1. Me OH)
(7) 溶剤に対する溶解性： メタノール、 クロ口ホルムや酢酸ェチルに可溶、 水 に不溶
(8) プロ トン及びカーボン核磁気共鳴スペク トル：重クロ□ホルム中で、 バリ アン社製 3 0 0 MHz核磁気共鳴スぺクトロメータを用いて測定した水素および 炭素の化学シフト （P Pm) 値は下記に示すとおりである。 ただし、 sはシング レッ ト、 tはトリプレッ ト、 mはマルチブレッ ト、 J値は結合定数を示す。 炭素の位置 炭素の化学シフト（ppm) 水素の化学シフト（ppm)
C一 1 1 7 0. 9
c - 2 1 3 7. 3
C一 3 4 7. 0 3. 4 1 ( 1 H, t, J= 7. 0 H z
C一 4 2 9. 7 1. 7 3 ( 1 H, m)
1. 9 2 ( 1 H， m)
C一 5 2 7. 2 1. 3 1 (2H, m)
C一 6 2 8. 9 1. 3 1 (2H， m)
C一 7 2 9. 0 1. 3 1 (2H, m)
C- 8 2 9. 0 1 - 3 1 (2H, m)
C一 9 2 4. 9 1. 6 1 (2H, m)
C一 1 0 2 4. 1 2. 3 0 (2H, t, J= 7. 5 Hz
C一 1 1 1 7 4. 4
C一 1 2 1 2 9. 5 5. 8 4 ( 1 H, s)
C - 1 3 1 7 8. 5 6. 5 2 ( 1 H, s)
C一 1 4 5 1. 5 3. 6 7 (3H， s) 以上のように、 FK I _ 234 2 E物質の各種理化学的性状やスぺクトルデー 夕を詳細に検討した結果、 FK I— 234 2 E物質は下記式 [W] で表される化 学構造であることが決定された。
Figure imgf000016_0001
FK I - 2 34 2 F物質
( 1 ) 性状 ：黄色シロップ状
(2) 分子式： C H^Os
HRFAB-MS (m/z) [M + H] + 計算値 24 5. 1 0 2 5 実測値 24 5. 1 0 34
(3) 分子量： 24 4
FAB-MS (m/z) [M+ ] 24 4を実測
(4) 紫外部吸収スぺク トル： メタノール溶液中で測定
λ m a X ( ε ) 1 9 9 nm ( ε = 1 1 , 0 0 0 )
(5) 赤外部吸収スぺク トル：臭化カリウム （KB r) 錠剤法で測定
ma x 34 4 2、 2 9 5 6、 1 7 1 6、 1 4 4 4、 1 24 3、 1 20 3 cm-1
(6) 比旋光度： [ひ] 。 26 = _ 3. 1 (c = 0. l、 Me OH)
(7) 溶剤に対する溶解性： メタノール、 クロ口ホルムや酢酸ェチルに可溶、 水 に不溶
(8) プロトン及びカーボン核磁気共鳴スペク トル：重クロ口ホルム中で、 ノくリ アン社製 3 0 0 MHz核磁気共鳴スぺク トロメータを用いて測定した水素および 炭素の化学シフ ト （p pm) 値は下記に示すとおりである。 ただし、 sはシング レッ ト、 tはトリプレッ ト、 mはマルチブレッ ト、 J値は結合定数を示す。 炭素の位置 炭素の化学シフ ト（ppm) 水素の化学シフト（ppm)
C一 1 1 7 1. 3
C - 2 1 3 6. 8
C - 3 4 7. 0 3. 4 2 ( 1 H, t, J = 7. 0 Hz)
C - 4 2 9. 0 1. 8 0 ( 1 H, m)
1. 9 8 ( 1 H, m)
C一 5 2 2. 7 1. 6 8 (2H, m)
C一 6 3 3. 8 2. 34 (2H, m) C- 7 1 73. 2
C一 8 1 30. 2 (1 H,
( 1 H,
C一 9 1 78. 7
C一 1 0 60. 4 (2H, 0Hz) C- 1 1 1 4. 2 (3H, 0 Hz) 以上のように、 FK I— 2342 F物質の各種理化学的性状やスぺクトルデー 夕を詳細に検討した結果、 FK I— 2342 F物質は下記式 [W] で表される化 学構造であることが決定された。
COOH
Figure imgf000018_0001
FK I - 2342物質の生物学的性状について説明する。
がん細胞を用いた杭がん剤処理による G 2期停止活性測定方法は菅沼らの方法 (Cancer Research, 23巻， 5887-5891 ページ， 1999年) に従った。
1. J υ r k a t細胞を用いた G 2チェックポイント阻害活性
細胞培養及び評価方法
ヒトリンパ腫由来の Ju r k a t細胞は、 75 cm3 培養フラスコを用いて R PM I 1 640培地 （RPMI1640 (IWAKI 社） 500 m lに非動化した牛胎児血清 (JRH Bioscience社） 50m lとぺニシリ ン （ 1 0000単位 Zm 1 ) ストレ ブトマイシン （1 OmgZm 1 ) 混液 （インビトロジヱン社） 5mlを加えた培 地で培養した。 J u r k a t細胞を 1 000 r p m、 1 0分間遠心後、 ァスピレ 一ターで上清を除き、 RPM I 1 640培地で細胞数が 5 x 1 05 cells/mlとな るように調整し、 これに b l e omy c i n (日本化薬社） あるいは c o 1 c h i c i n e (Sigma社） を最終濃度がそれぞれ 40〃Mまたは 0. 5 Mとなる ように細胞懸濁に添加した。 この懸濁液は、 あらかじめ FK I— 2342 A物質 〜F物質を添加し風乾させた 9 6穴マルチプレート （Corning 社、 米国） の各ゥ エルに 2 0 0〃1 ( 1 X 1 05 c e 1 1 s /w e l l ) 加えられ、 3 7でで 2 0 時間培養した。
F A C Sによる細胞周期測定法
2 0時間培養後の細胞を 1 0 0 0 r pm、 1 0分間遠心し、 ァスピレーターで 上清を除いた。 K r i s h a n' s r e a g e n t (trisodium citrate (Wako 社） 500 ng, IGEPALCA-630 (Sigma社） 1.5 ml. ribonuclease A(Sigma社） 10 mg と propidium iodide (Sigma 社） 25 mg と滅菌水 500 mlに溶解したもの） を各 w e l 1に 2 0 0 m加えた後、 アルミホイルで遮光し、 振とう機で軽く振とうし ながら室温で 1時間放置して DNAを染色した。 細胞周期の測定は F ACS C a 1 i b e r (Becton Dickinson社） を使用し、 細胞 1 0， 0 0 0個を計測する ことで s u b G l、 G l、 S、 G 2ZM期の細胞の割合を解析ソフトゥヱァ C e 1 1 Qu e s tを用いて算出した。 活性
FK I - 2 3 4 2 A物質〜 F物質の実験結果を G 2 ZM期の細胞を指標にして 求めた。 B 1 e omy c i n処理によって G 2期に停止した細胞数を 1 0 0 %と したときその G 2期の細胞数を 5 0 %にする薬剤濃度を I C5。 (bleo) 、 同様に c 0 1 c h i c i n e処理によって M期に停止した細胞数を 5 0 %にする薬剤濃 度を I C50 (col)として算出し、 その G 2期細胞に対する特異性も選択性として 第 1表に示した。
このように FK I— 2 3 4 2物質は I C50 (bleo) は 1. 2 gZm 1〜 1 0 0〃 gZm 1に対し I C50 (col)は 1 0 z gZm l〜2 0 0〃 gZm l と測定さ れ、 杭がん剤による G 2期停止作用 （Gチャックポイント） を選択的に阻害する ことが明らかとなった。 特に、 FK I— 2 3 4 2 D物質及び E物質の I C5。（ble 0)はそれぞれ 2 5 gZm 1及び 1. 2 gZm 1 と測定されたのに対し、 I C 50 (col)は 1 7 5〃 g及び 1 0 g/ 1 と測定され、 この両濃度間にはそれぞ れ 7倍および 8倍の差が認められ、 両物質は非常に選択的に G 2チェックボイン ト阻害することが明らかとなった。
第 1表 （ J u r k a t細胞の場合） compound IC50 ( zg/ml) selectivity
bleomycin colchicine
A 1 00 200 2
B 1 00 200 2
C 1 00 200 2
D 25 1 75 7
E 1. 2 1 0 8
F 1 00 200 2
2. HCT- 1 1 6細胞を用いた G 2チヱックボイント阻害活性
細胞培養及び評価方法
ヒト大腸癌由来の HCT— 1 1 6細胞は、 McCoy' s 5 A培地 （McCoy' s5 A ( インビトロジヱン社） 500 mlに非動化した牛胎児血清（FBS) 500 mlとぺニシ リン（10000単位）/ストレプトマイシン（10 mg/ml) 5 ml を加えた培地） を用いて 75 cm2 の培養フラスコ （Corning社、 米国） に 1. 5 x i 05 e e l I s m 1に調整した細胞液 1 5m 1とに、 0. 5%C02 、 37°Cで培養し、 3日後 に継代を行った。
24穴マルチプレート （ IWAK I社、 日本国） に HCT— 1 1 6細胞が 1. 5 x i 05 c e l l s/m lになるように調整し、 各ゥエル 500 n 添加し、 37°C、 24時間培養した。 その後、 培地を除去し、 Mc Coy' s 5 A培地で 調製した 27〃1^のゎ l e omy c i nあるいは 0. 5〃Mの c o l c h i c i n eを各ゥエルに 250 1 添加し、 さらに、 0. 5 %DMS 0に溶解させた F K I— 2342 A物質〜 F物質を 250 1 添加した （最終濃度 bleomycin 13 / M、 colchicine 0.25 M、 0.25%DMS 0) 。 そのプレートを 0. 5%C02 、 3 7 °Cで 2 4時間培養した。 培養後、 上清は 1. 5m 1のエツペンドルフチュ ーブに回収し氷上に保存した。 プレート上の細胞は、 t r y p s i n-EDTA 溶液 1 5 0 / 1 を添加し、 3 7°C、 1 0分間培養することで剝離させた。 細胞を 剝離させた後ただちに 3 0 0〃1 の培地を加えて t r y p s i nを失活させ、 こ れを氷上で保存しておいた上清と混和した。 1 0 0 0 r pm、 1 0分間遠心後、 上清をァスピレーターで除き 2 0 0 1 の K r i s h a n' s r e a g e n t を加え、 氷上で 1時間静置した後 F ACSを用いて測定を行った。
F A C Sによる細胞周期測定法
細胞周期の測定は F ACS C a 1 i b e r (BectonDickinson 社） を使用し 、 細胞 1 0, 0 0 0個を計測することで、 s u b G 1、 G 1、 S、 G 2ZM期の 細胞の割合を解析ソフトウエア c e l l Qu e s tを用いて算出した。 活性
FK I 2 3 4 2 A物質〜 F物質の実験結果を G 2ZM期の細胞を指標にして求 めた。 B 1 e omy c i n処理によって G 2期に停止した細胞数を 1 0 0 %とし たとき、 その G 2期の細胞数を 5 0 %にする薬剤濃度を I C5。 （bleo) 、 同様に c 0 1 c h i c i n e処理によって M期に停止した細胞数を 5 0 %にする薬剤濃 度を I C50 (col)として算出し、 その G 2期細胞に対する特異性も選択性として 第 2表に示した。
FK I - 2 3 4 2物質の I C50 (bleo) は 2 / gZm 1〜 1 2 0〃 gZm 1に 対し、 I C50 (col)は 2 0 g/m 1〜 1 2 0〃 g/m 1 と測定され、 G 2チェ ックボイントを選択的に阻害した。 これらのうち、 特に FK 1 - 2 3 4 2 D物質 及び E物質の I C5e (bleo) はそれぞれ 2 5 g/ 1及び 2 g/m 1を測定 されたのに対し、 I C50 (col)は 1 0 0 g/m 1及び 2 0 g/m 1及と測定 され、 この両濃度比 （IC5。（col)/[C5。（bleo)) には 4倍および 1 0倍の差が認め られ、 両物質とも G 2チェックボイントを非常に選択的に阻害することが明らか となった。
以上、 FK I — 2 3 4 2 A物質〜 F物質はヒトリンパ腫由来の J u r k a t細 胞およびヒト大腸由来の HCT— 1 1 6細胞の両細胞において選択的に G 2チェ ックポイントを阻害することが明らかとなった。 またその活性と選択性は、 FK 1 - 2 34 2 E物質が優れたものであった。
第 2表 （HCT - 1 1 6細胞の場合） compound IC5o ( g/ml) selectivity
bleomycin colchicine IC5o(col)/IC5o(bleo)
A 1 20 1 8 0 1. 5
B 1 20 1 8 0 1. 5
C 1 2 0 1 8 0 1. 5
D 25 1 0 0 4
E 2 20 1 0
F 1 0 0 1 8 0 2
発明を実施するための最良の形態
以下に実施例をあげて本発明を説明するが、 本発明はこの実施例のみに限定さ れるものではない。
実施例
培養
種培養は 5 0 Om l三角フラスコ 2本にそれぞれ 1 0 0m lの G P培地 （グル コース 2 %、 ィ一ストエキス 0.2 %、 gS04 · 7H20 0.05 ¾ , ポリぺプトン 0.5 %、 KH2P04 0.1 %およびァガ— 0.1 %) を入れ、 高圧蒸気滅菌後、 L c Α培地 （ グルコース 0.1 %、 KH2PO4 0.08 %、 K2HP04 0.02 %、 MgS04 · 7H20 0.02 KC1 0.02 %、 NaN03 0.2 %、 イーストエキス 0.02 % およびァガー 1.5 %) で保 存した FK I— 2 3 4 2株を一白金耳接種し、 27°Cで 3日間振遨培養した。 本 培養は 3 0 L jar farmenter ( ITSUWA 社、 日本国） 1基を用いて 2 0 Lの培地 を仕込み、 これに種培養液を終濃度 1 %となるように植菌した。 培養条件は培養 濃度を 27°C、 培養日数を 6日間とし、 回転数 250 r pm、 通気量 1 0 LZm i nで通気攪拌培養した。 単離精製
7日間生産培養した培養液 20 Lを等量のアセトンで抽出し、 減圧濾過後ァセ トンを留去した。 これを 20 Lの酢酸ェチルで 2回抽出し、 その酢酸ェチル層を 無水硫酸ナトリウムで脱水後、 減圧乾固することで、 褐色油状物質 20. 4 gを 得た。 これらを少量のクロ口ホルムに溶かし、 シリカゲルを用いたカラムクロマ トグラフィ一 （80 g、 39 i.d. x 1 80 mm) を行った。 溶出はクロ口ホルム 一メタノール溶媒系で段階溶出 (各溶媒量 50 Om K クロ口ホルム ： メタノー ル = 1 00 : 0、 1 00 : 1、 75 : 1、 50 : 1、 25 : 1、 1 : 1、 0 : 1
00) し、 活性をクロ口ホルム ： メタノール = 50 : 1の溶出画分 （F 4) に確認したため、 この画分を減圧濃縮し、 褐色油状物質 579 mgを得た。
更にこれをメタノールに溶解させ、 高速液体クロマトグラフィー （HPLC) を用いて以下の条件で精製を行った。 カラムは、 センシユー科学社製 PEGAS
1 L OD S ( 20 i.d. X 250 mm) を用い、 溶媒はァセトニトリル （ 0. 0 5%TFA含有） 濃度を 20%から 55%へ 50分間上昇させた。 また、 8. 0 m 1 /m i nの流速において 2 1 0 n mの波長で検出を行った。 FK I— 234
2 D物質、 FK I— 2342 E物質および FK 1— 2342 F物質はそれぞれ 4 0. 8分、 42. 0分および 24. 0分のピークを示したため繰り返し分取した 。 そのァセトニトリル水溶液を水層にまで減圧下で濃縮し、 酢酸ェチルにて抽出 を行い、 濃縮乾固することで FK 1 - 2342 D物質を 1 5. Omg、 FK I一 2342 E物質を 3. 89mg、 FK I - 2342 F物質を 6. 36mg得た。 また、 F r. 4— 1、 F r . 4一 2、 F r . 4— 3はさらに液体クロマトグラ フィーを用いて精製を行った。 F r. 4— 1の精製には、 カラムにセンシユー科 学社製 PEGAS I L 〇DS ( 20 i.d. X 25 Omm) を用い、 流速は 8. 0 m IZm i n、 溶媒は 30%ァセトニトリル （0. 05%H3 P04 含有） 水溶 液、 検出は 2 1 O nmの波長で行った。 その結果 1 7分に溶出したピークを繰り 返し分取し、 ァセトニトリル水溶液を水層にまで減圧下で濃縮後、 酢酸ェチルに て抽出を行ない、 濃縮乾固することで FK 1 - 2 3 4 2 A物質を 7. 3 5mg得 た。
次に F r. 4— 2の精製にセンシユー科学社製 PEGAS I L ODS (4. 6 i.d. X 2 5 0 mm) カラムを用い、 流速は 1. Om 1 Zm i n、 溶媒は 3 5 % ァセトニトリル （0. 0 5 %H3 P O4 含有） 水溶液、 検出は 2 1 0 nmの波長 で行った。 その結果 7. 2分に溶出したピークを繰り返し分取し、 ァセトニトリ ル水溶液を水層にまで減圧下で濃縮後、 酢酸ェチルにて抽出を行ない、 濃縮乾固 することで FK I — 2 3 4 2 B物質を 4 7. 5mg得た。
最後に F r. 4— 3の精製には、 センシュ一科学社製 PEGAS I L ODS ( 2 0 i.d. x 2 5 0 mm) カラムを用い、 流速は 8. 0 m 1 /m i n, 溶媒は 3 0 %ァセトニトリル （ 0. 0 5 %U3 P 04 含有） 水溶液、 検出は 2 1 0 nmの 波長で行った。 その結果 2 4分に溶出したピークを繰り返し分取し、 ァセトニト リル溶液を水層にまで減圧下で濃縮後、 酢酸ェチルにて抽出を行ない、 濃縮乾固 することで FK I— 2 3 4 2 C物質を 7. 3 6mg得た。 産業上の利用分野
本発明は、 ァスペルギルス属に属し、 一般式 [ I ] で表される FK 1 - 2 3 4 2物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、 培養物中に FK 1 - 2 3 4 2物質を蓄積せしめ、 該培養物から FK 1— 2 3 4 2物質を採取することを含 む、 FK I — 2 3 4 2物質である。 得られた FK 1 — 2 3 4 2物質はがん細胞を 特異的に阻害すため、 DN A傷害性の抗がん剤や放射線による治療において、 そ の作用を増強させ、 副作用が軽減されることが期待される。

Claims

1. 一般式 [ I ]
Figure imgf000025_0001
請
(式中、 は CH3 —または CH3 CH2 一、 R2 は CH3 —または H ―、 n は 1〜3を示す） で表される、 FK I— 2342物質。
の
2. —般式 囲
Figure imgf000025_0002
で表される FK I - 2342 A物質 c
3. 一般式
Figure imgf000025_0003
で表される FK 1 - 2342 B物質 <
4. 一般式
Figure imgf000025_0004
で表される FK 1 - 2342 C物質。
Figure imgf000026_0001
で表される FK 1 - 2342 D物質。
6. 一般式
Figure imgf000026_0002
で表される FK 1 -2342 F物質。
8； FK I - 2342 A物質を作用させることによるがん細胞の G2チェ ックポイントを特異的に阻害する方法。
9. DNAに傷害を与える抗がん剤の存在下に FK 1 -2342 A物質を 作用させる請求の範囲 8記載の方法。
1 0. FK I - 2342 B物質を作用させることによるがん細胞の G2チェ ックボイントを特異的に阻害する方法。
1 1. DN Aに傷害を与える杭がん剤の存在下に FK I - 2342 B物質を 作用させる請求の範囲 1 0記載の方法。
1 2. FK I— 2342 C物質を作用させることによるがん細胞の G.2チェ ックポイントを特異的に阻害する方法。
1 3. DNAに傷害を与える抗がん剤の存在下に FK 1 -2342 C物質を 作用させる請求の範囲 1 2記載の方法。
1 4. FK I— 2342 D物質を作用させることによるがん細胞の G 2チェ ックボイントを特異的に阻害する方法。
1 5. DNAに傷害を与える抗がん剤の存在下に FK 1 - 2342 D物質を 作用させる請求の範囲 1 4記載の方法。
1 6. FK I— 2342 E物質を作用させることによるがん細胞の G 2チェ ックボイントを特異的に阻害する方法。
1 7. DNAに傷害を与える抗がん剤の存在下に FK 1 -2342E物質を 作用させる請求の範囲 1 6記載の方法。
1 8. FK I— 2342 F物質を作用させることによるがん細胞の G 2チェ ックボイントを特異的に阻害する方法。
1 9. DN Aに傷害を与える抗がん剤の存在下に FK 1 - 2342 F物質を 作用させる請求の範囲 1 8記載の方法。
20. ァスペルギルス属に属し、 一般式 [ I ] で表される FK 1 - 2342 物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、 培養物中に FK 1 - 234 2物質を蓄積せしめ、 該培養物から FK 1 - 2342物質を採取することを含む 、 FK I - 2342物質の製造法。
2 1. ァスペルギルス属に属し、 式 [I] 〜 [VII] で表される FK I— 23 42A、 B、 C, D、 Eおよび Zまたは F物質を生産する能力を有する微生物を 培地に培養し、 培養物中に FK I— 2342 A、 B、 C、 D、 Eおよぴ または F物質を蓄積せしめ、 該培養物から FK I— 2342 A、 B、 C, D、 Eおよび または F物質を採取することを含む、 FK I— 2342 A、 B、 C. D、 Eお よぴノまたは F物質の製造法。
22. ァスペルギルス 二ガー （Aspergillus niger)N I TE ABP— 1
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