WO2006135280A1 - Derives n-acyles d'acides amines, composition pharmaceutique et son utilisation en tant que produits anti-allergiques, anti-anaphylactiques, anti-inflammatoires ou hypolipidemiques - Google Patents

Derives n-acyles d'acides amines, composition pharmaceutique et son utilisation en tant que produits anti-allergiques, anti-anaphylactiques, anti-inflammatoires ou hypolipidemiques Download PDF

Info

Publication number
WO2006135280A1
WO2006135280A1 PCT/RU2006/000311 RU2006000311W WO2006135280A1 WO 2006135280 A1 WO2006135280 A1 WO 2006135280A1 RU 2006000311 W RU2006000311 W RU 2006000311W WO 2006135280 A1 WO2006135280 A1 WO 2006135280A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
allergic
general formula
pharmaceutically acceptable
compound
salt
Prior art date
Application number
PCT/RU2006/000311
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Vladimir Evgenievich Nebolsin
Tatyana Alexandrovna Kromova
Galina Alexandrovna Zheltukhina
Violetta Leonidovna Kovaleva
Original Assignee
Otkrytoe Aktsionernoe Obschestvo 'otechestvennye Lekarstva'
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Otkrytoe Aktsionernoe Obschestvo 'otechestvennye Lekarstva' filed Critical Otkrytoe Aktsionernoe Obschestvo 'otechestvennye Lekarstva'
Priority to EP06757984.7A priority Critical patent/EP1905763B1/en
Priority to KR1020087001210A priority patent/KR101402855B1/ko
Priority to US11/917,598 priority patent/US8940780B2/en
Priority to CN2006800296822A priority patent/CN101243053B/zh
Priority to CA2612324A priority patent/CA2612324C/en
Priority to JP2008516776A priority patent/JP2008543830A/ja
Priority to EA200800054A priority patent/EA013057B1/ru
Publication of WO2006135280A1 publication Critical patent/WO2006135280A1/ru
Priority to US12/764,515 priority patent/US8318950B2/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/64—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms, e.g. histidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4172—Imidazole-alkanecarboxylic acids, e.g. histidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/14—Decongestants or antiallergics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D209/20—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals substituted additionally by nitrogen atoms, e.g. tryptophane

Definitions

  • the present invention relates to the field of bioorganic chemistry and relates to N-acyl derivatives of amino acids and their pharmaceutically acceptable salts, new methods for the synthesis of these compounds, as well as pharmaceutical compositions based on them and their use in medicine as anti-allergic, anti-inflammatory and lipid-lowering agents.
  • State of the art relates to the field of bioorganic chemistry and relates to N-acyl derivatives of amino acids and their pharmaceutically acceptable salts, new methods for the synthesis of these compounds, as well as pharmaceutical compositions based on them and their use in medicine as anti-allergic, anti-inflammatory and lipid-lowering agents.
  • 1st generation antihistamines penetrate the blood-brain barrier and are able to cause blockade of Hl receptors of central nervous system cells, which causes their undesirable sedative effect.
  • high concentrations of these drugs in the blood are required, which requires their administration in large doses.
  • a negative characteristic of these drugs is the rather frequent development of tachyphylaxis, the effect on the central nervous system, manifested in impaired coordination, dizziness, lethargy, and a decrease in the ability to concentrate.
  • first-generation antihistamines are still used, especially in situations where a very quick treatment effect is needed, for example, with anaphylaxis.
  • To first generation antihistamines include diphenhydramine (diphenhydramine), suprastin (chloropyramine), tavegil (clemastine), fencarol (chifenadine).
  • 2nd generation antihistamines have been widely used in allergy practice in recent years, because they do not have side effects inherent in 1st generation drugs.
  • 2nd generation drugs do not penetrate the blood-brain barrier, do not have sedative and hypnotic effects. They are characterized by a quick and prolonged antihistamine effect.
  • the second generation antihistamines include: clarithin (loratadine) zirtec (cetirizine), kestin (ebastine).
  • clarithin (loratadine) zirtec (cetirizine) cetirizine
  • kestin ebastine
  • clinical trials revealed side effects of these drugs, due to their interaction with other drugs or impaired metabolism by cytochrome P 450.
  • potentially sedative (cetirizine, loratadine) and potentially cardiotoxic (terfenadine, astemizole (ebastine)) effects were identified. 2nd generation antihistamines.
  • glucocorticosteroids are used, which have a powerful anti-allergic effect.
  • their use is accompanied by systemic manifestations in the form of Itsenko-Cushing's syndrome, hypertension, hyperglycemia, osteoporosis, etc. [Mashkovsky MD Medicinal preparations. / Medicine. Moscow. 1993.vol., P. 555].
  • Atherosclerosis is coronary heart disease, which comes first in the list of causes of death of the adult population of the planet.
  • a violation of lipid metabolism is recognized as one of the leading disorders in this disease, expressed in an increase in plasma cholesterol, including in the composition of low-density lipoproteins (JIPNP) and very low density (VLDL), called “atherogenic”, with a simultaneous decrease in the number of " antiatherogenic "high density lipoproteins (HDL).
  • JIPNP low-density lipoproteins
  • VLDL very low density
  • Lipid-lowering drugs that lower blood cholesterol and triglycerides can be used to treat and prevent diseases associated with lipid metabolism disorders.
  • the latter are characterized by an increase in triglycerides, total cholesterol (XC), cholesterol in the composition of low and very low density lipoproteins (LDL and VLDL) and a decrease in cholesterol in the composition of high density lipoproteins, in diseases such as atherosclerosis, obesity, coronary heart and brain disease , myocardial infarction, stroke, and which serve as a risk factor for the manifestation of diabetes and thrombosis.
  • XC total cholesterol
  • LDL and VLDL very low density lipoproteins
  • a decrease in cholesterol in the composition of high density lipoproteins in diseases such as atherosclerosis, obesity, coronary heart and brain disease , myocardial infarction, stroke, and which serve as a risk factor for the manifestation of diabetes and thrombosis.
  • statins inhibitors of cholesterol biosynthesis, for example zokora (simva
  • Preparations of this group at doses of 80 mg / day are quite effective, mainly in relation to lowering the level of total cholesterol in the blood, while they are inaccessible, expensive and are chemical compounds alien to the body.
  • their use may be accompanied by side effects: a change in liver function with an increase in blood transaminases, dyspepsia
  • ⁇ -glutamylhistamine has a pronounced antianaphylactic activity when using various animal species and methods of administration.
  • the results obtained indicate that in the mast cells of animals under the influence of ⁇ -glutamyl histamine the histamine content and its antigen-stimulated secretion significantly decrease.
  • glutaryl histamine on the severity of antigen-induced bronchospasm, a decrease in bronchospasm of more than 50% was shown compared with the control. This effect was manifested both in the oral and intratracheal methods of its administration in a low dose of 50 ⁇ g / kg.
  • Glutaryl histamine has the ability to reduce the manifestations of passive cutaneous anaphylaxis.
  • WO 99/01103 shows that when animals were given glutaryl histamine at doses of 50 and 500 mcg / kg, a significant decrease in the delayed-type hypersensitivity intensity was demonstrated.
  • glutaryl histamine in doses of 50 and 500 ⁇ r / kg also had some anticholesterolemic activity, reducing the total cholesterol content compared to animals with atherogenic load by 5-7%.
  • glutaryl histamine is its relatively high cost and low availability of the starting material for its production - histamine.
  • the specified substance is not effective enough in the above tests.
  • the inventors have identified some specific N-acyl derivatives of amino acids of the general formula (I) disclosed in the publication of international application WO 99/01133, but specifically in it not described, not obtained, and not characterized, with the exception of glutaryl-L-histidine methyl ester (XII).
  • the compounds of the present invention fall under the general formula (I) of the above international application.
  • this publication neither specific structural formulas of these compounds nor any physicochemical characteristics are given, nor methods for their preparation are described.
  • the compounds of the present invention fall within the general structural formula of the compounds disclosed in the publication of international application WO 03/072124 having an action inducing cell differentiation.
  • this publication does not describe a method for their synthesis and does not provide any physicochemical constants.
  • succinylhistidine is mentioned in an international publication WO 93/04690. This publication indicates that the addition of free imidazole or succinylhistidine accelerates the interaction of carnosine with dihydroxyacetone. Methods for the synthesis of succinylhistidine and its physicochemical constants are not given. The structural formula of succinyltryptophan is mentioned in the application of the United States
  • N ⁇ -Cycyninyl-L-tryptophan of methyl ester (XI) was characterized by physicochemical data: 1H-NMR, IR spectroscopy, mass spectrometry, melting point and elemental analysis data.
  • the aim of the present invention are new effective N-acyl derivatives of amino acids and their pharmaceutically acceptable salts with anti-allergic, anti-inflammatory and lipid-lowering effects in low doses and without side effects: effects, pharmaceutical compositions based on them, their use as more effective anti-allergic, anti-inflammatory and lipid-lowering drugs, as well as new methods for the synthesis of N-acyl derivatives of amino acids.
  • the inventors have developed a simple and effective method for the synthesis of compounds of general formula (I), which consists in the fact that the anhydride of glutaric or succinic acid in the form of a solid is added to an aqueous solution of an amino acid in the absence of an inorganic and organic base to obtain the target product with a rather high yield of 55- 60%
  • the inventors have also developed another method for the synthesis of compounds of general formula (I), including N-acyl derivatives of histidine and tryptophan, including the reaction in a two-phase system consisting of an aqueous solution of histidine or a salt of tryptophan and an acylating solution agent in a suitable organic solvent using excess acylating agent.
  • the present invention relates to new N-acyl derivatives of amino acids of the general formula I:
  • the present invention also relates to a method for producing N-acyl derivatives of amino acids of general formula I and their salts, comprising adding glutaric or succinic anhydride as a solid to an aqueous solution of an amino acid of general formula:
  • R 1 represents
  • the present invention further relates to a method for producing N-acyl derivatives of amino acids of general formula I and their salts, comprising reacting in a two-phase system with glutaric or succinic anhydride in a water-immiscible organic solvent with an aqueous solution of an amino acid of the general formula: NH 2 -CH-COOH CH 2
  • the present invention also relates to the use of compounds of the general formula I and their pharmaceutically acceptable salts as anti-allergic, anti-inflammatory and lipid-lowering agents.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition and an agent having anti-allergic, anti-anaphylactic and anti-inflammatory and lipid-lowering effects, containing an effective amount of a compound of general formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and also if a pharmaceutically acceptable carrier is required.
  • Another object of the invention is a method for the treatment of allergic diseases, including bronchial asthma, allergic rhinitis, pollinosis, seasonal rhinitis, perennial rhinitis, atopic dermatitis, psoriasis, urticaria, allergic (including anaphylactic) reactions to insect bites and drugs, cold allergies, allergic conjunctivitis, chronic obstructive pulmonary diseases, namely chronic obstructive bronchitis, emphysema, obliterating bronchitis, cystic fibrosis, as well as diseases, knitted with lipid metabolism disorders: atherosclerosis, obesity, ischemic heart and cerebral disease, myocardial infarction, stroke, comprising administering an effective amount of a compound of general formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • allergic diseases including bronchial asthma, allergic rhinitis, pollinosis, seasonal rhinitis, perennial rhinitis, atopic dermatitis
  • the synthesis of compounds of general formula I can be carried out in two ways.
  • the first method consists in gradually adding to the aqueous solution the amino acids of the general formula
  • R 1 represents
  • N ⁇ NH of glutaric or succinic anhydride as a solid followed by isolation of the desired product by ion exchange chromatography, preferably by passing the reaction mixture through a column of cation exchange resin and. subsequent crystallization from an aqueous solution.
  • the resulting crystals of the expected product are washed with a suitable solvent, preferably methanol.
  • a suitable solvent preferably methanol.
  • the main advantage of the proposed method is the absence of alkali in an aqueous solution of an amino acid, which prevents the inactivation of dicarboxylic acid anhydride as a result of hydrolysis.
  • the imidazole residue in the amino acid molecule can carry out acid-base autocatalysis of the amino acid amino acid acylation reaction. Quite high yields (55-60%) when using the proposed method are achieved, in particular, due to the gradual addition of dicarboxylic acid anhydride, taken in excess, and intensive mixing of the reaction mass.
  • Compounds of general formula I can also be prepared by an alternative method in a biphasic system, comprising adding glutaric or succinic anhydride in a water-immiscible organic solvent to an aqueous solution of an amino acid of the general formula:
  • R 1 represents
  • This method allows you to use the excess acylating agent, to achieve complete acylation of the ⁇ -amino group of the amino acid and the yield of the target product of about 70%.
  • an organic base is used - pyridine, which does not hydrolyze the anhydride, and, moreover, is known to be an acylation catalyst.
  • the use of pyridine avoids contamination of the final product with inorganic salts, which, together with the reaction product, remain in the aqueous layer.
  • Preferred water-immiscible organic solvents are butanol, ethyl acetate, chloroform.
  • Preferred solvents used to crystallize the target product are water-alcohol mixtures, in particular water-ethanol.
  • N-acylated derivatives of the amino acid esters of the invention can be obtained by the action of the corresponding internal dicarboxylic acid anhydrides on amino-free histidine or tryptophan esters in an organic or aqueous-organic medium. It is preferable to obtain compounds VI-XIII in a two-phase system using water-immiscible organic solvents: butanol, ethyl acetate, chloroform.
  • Compounds of general formula I can also be prepared as pharmaceutically acceptable salts by reaction, for example, with sodium hydroxide, potassium hydroxide, magnesium carbonate, lithium hydroxide, calcium carbonate by routine methods widely described in the literature.
  • the compounds of general formula I have anti-allergic, anti-inflammatory and lipid-lowering activity and can be used to treat allergic, anaphylactic, including diseases accompanied by inflammation, as well as impaired lipid metabolism.
  • the compounds of the present invention can be used to treat the following allergic diseases: bronchial asthma, allergic rhinitis, pollinosis, seasonal rhinitis, perennial rhinitis, atopic dermatitis, psoriasis, urticaria, allergic (including anaphylactic) reactions to insect bites and drugs , cold allergies, allergic conjunctivitis, chronic obstructive pulmonary diseases, namely chronic obstructive bronchitis, emphysema, bronchitis obliterans one of cystic fibrosis, as well as diseases related to lipid metabolism disorders, such as atherosclerosis, obesity, coronary heart disease and cerebral disease, myocardial infarction, stroke.
  • allergic diseases bronchial asthma, allergic rhinitis, pollinosis, seasonal rhinitis, perennial rhinitis, atopic dermatitis, psoriasis, urticaria, allergic (including anaphylactic) reactions to
  • the compounds of the present invention are administered in an effective amount that provides the desired therapeutic result.
  • bronchial asthma for the treatment of allergic diseases, including bronchial asthma, allergic rhinitis, hay fever, seasonal rhinitis, perennial rhinitis, atopic dermatitis, psoriasis, urticaria, allergic (including anaphylactic) reactions to insect bites and drugs, cold allergies, allergic conjunctivitis, chronic obstruction lung diseases, namely chronic obstructive bronchitis, emphysema, obliterating bronchitis, cystic fibrosis, and also diseases associated with impaired lipid metabolism, such as atherosclerosis, obesity, ischemic heart and cerebral disease, myocardial infarction, stroke, compounds of general formula I may be administered orally, topically, parenterally, intranasally, by inhalation and rectally in dosage unit formulations containing non-toxic pharmaceutically acceptable carriers.
  • oral administration means subcutaneous, intravenous, intramuscular or intrathoracic injection or infusion.
  • the compounds of the present invention can be administered to a patient in doses constituting from 0.01 to 10 mg / kg of body weight per day, preferably in doses of 0.05 to 5 mg / kg, one or more times per day.
  • compositions of the present invention contain a compound of general formula (I) in an amount effective to achieve the desired result, and can be administered in unit dosage forms (e.g., in solid, semi-solid or liquid forms) containing the compounds of the present invention as an active ingredient in a mixture with a carrier or excipient suitable for intramuscular, intravenous, oral, sublingual, inhalation, intranasal and intrarectal administration.
  • unit dosage forms e.g., in solid, semi-solid or liquid forms
  • the active ingredient may be included in the composition along with commonly used non-toxic pharmaceutically acceptable carriers suitable for the manufacture of solutions, tablets, pills, capsules, dragees, suppositories, emulsions, suspensions, ointments, gels and any other dosage forms.
  • binders can be used.
  • saccharides for example glucose, lactose or sucrose, mannitol or sorbitol, cellulose derivatives and / or calcium phosphates, for example tricalcium phosphate or calcium acid phosphate
  • binders can be used.
  • starch paste for example, corn, wheat, rice, potato starch, gelatin, tragacanth, methyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose and / or polyvinylpyrrolidone.
  • disintegrating agents such as the aforementioned starches and carboxymethyl starch, crosslinked polyvinylpyrrolidone, agar or alginic acid or a salt thereof, such as sodium alginate, can be used.
  • fluidity regulating and lubricating agents such as silica, talc, stearic acid and its salts, such as magnesium stearate or calcium stearate, and / or propylene glycol.
  • the core of the dragee is usually coated with a layer that is resistant to the action of gastric juice.
  • concentrated saccharide solutions may be used, which may optionally contain gum arabic, talc, polyvinylpyrrolidone, polyethylene glycol and / or titanium dioxide, and suitable organic solvents or mixtures thereof.
  • additives As additives, stabilizers, thickeners, colorants and perfumes can also be used.
  • hydrocarbon ointment bases such as white and yellow petrolatum (Vaselipum album, Vaselipum flavum), liquid paraffin (Oleum Vasellipi), white and liquid ointment (Uppuepum album, Uppuepum addin) can be used more dense consistency, such as paraffin wax and wax; absorbent ointment bases, such as hydrophilic petrolatum (Vaselipum hudrorhulisum), lanolin (Lapolipum), cold cream (Upgueptum lepeps); ointment bases, washable with water, such as hydrophilic ointment (Upgueptum hudrorxulum); water-soluble ointment bases, such as polyethylene glycol ointment (Upgueptum Glusolis Poluaythulpi), bentonite bases and others.
  • absorbent ointment bases such as hydrophilic petrolatum (Vaselipum hud
  • methyl cellulose sodium carboxymethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, polyethylene glycol or polyethylene oxide, carbopol can be used.
  • water-insoluble bases such as cocoa butter can be used; bases soluble in water or miscible with water, such as gelatin-glycerol or polyethylene oxide; combined bases - soap-glycerin.
  • the amount of active ingredient used in combination with a carrier may vary depending on the recipient being treated, on the particular route of administration of the drug.
  • the content of the active agent in them is 0.01- 5%.
  • diluents 0.9% sodium chloride solution, distilled water, novocaine solution for injection, Ringer's solution, glucose solution, specific additives for dissolution can be used.
  • their amount is 5.0-500 mg per unit dosage form.
  • Dosage forms of the present invention are obtained according to standard methods, such as, for example, mixing, granulating, dragee formation, dissolution and lyophilization.
  • the compounds of the present invention exhibit biological activity in doses two to three orders of magnitude lower compared with the known drugs used for comparison, with almost the same effectiveness, and for them there were no negative side effects and no contraindications for use.
  • the angles of optical rotation were measured on a Rekip Elmer 341 polarimeter (Sweden).
  • the melting point was determined on a Voetius instrument (Germany). Analytical HPLC was performed on a Sustem GoId instrument (Veskmap,
  • Ultrasphere ODS Veskmap 2x250 mm, 5 ⁇ m, elution with 0.1% TFA, elution rate 0.25 ml / min (1); elution rate 1 ml / min, detection at 220 nm, Luna-5 column “Pepomepech”, C 18 , 250x4.6 mm, elution with 25% acetonitrile in 0.05 M phosphate buffer (pH 3.0) (2).
  • N ⁇ -Glutaryltryptophan (III) To a suspension of 1.0 g (4.9 mmol) of tryptophan in 7 ml of water, a solution of 1 N NaOH (4.9 mmol) is added dropwise. To the resulting solution was added a solution of 0.56 g (4.9 mmol) of glutaric anhydride in 3 ml of ethyl acetate. The reaction mixture is stirred for 3 hours at room temperature in an argon atmosphere in the dark, left for 16 hours at + 4 °. The solvent from the reaction mixture was removed in vacuo. The resulting oily residue was dissolved in 30 ml of water with stirring, cooled to 0 °, a solution of 1 N HCl was added to pH 4.
  • the product was extracted with ethyl acetate (3x25 ml).
  • the combined ethyl acetate extract is cooled to 0 °, washed with water (4x25 ml) to pH 7, solution of 5% HCl (5 ml), water (4x25 ml) to pH7, dried over anhydrous Na 2 SO 4 for 1 hour.
  • the precipitate of Na 2 SO 4 is filtered off, washed with ethyl acetate, the solvent is removed in vacuo. A grayish solid residue is obtained, which is dried in vacuo. Yield 1.0 g (70%).
  • guinea pigs of both sexes weighing 600-800 g were used. Animals were immunized once with a mixture of ovalbumin 10 ⁇ g and
  • Blood was mixed with a 5% solution of EDTA-Na 2 2H 2 O (Sigma) in a ratio of 9: 1 and after 30 minutes it was gently centrifuged (12 minutes at 80 g). The supernatant was collected and centrifuged for 15 min at 500 g.
  • EDTA-Na 2 2H 2 O Sigma
  • a citrate-containing precipitating liquid (3) was added to the remaining blood cells in a proportion of 3:10 (thermostatted at 37 ° C for 30 min)
  • the leukocyte-rich supernatant was centrifuged for 7 min at
  • test For placing the test in a centrifuge tube (3 used tubes for each sample) were placed 300 ⁇ l of cell suspension, then 300 ⁇ l of saline solution of the test compound (or saline in the control of spontaneous and maximum degranulation) was added and incubated at 37 ° C for 15 min, then 300 ⁇ l of 1% saline solution was added OA in each tube (the same amount of saline was added to the control of spontaneous degranulation) and again incubated at 37 ° C for 10 min.
  • the working concentration of leukocytes is 10 4 / ⁇ l.
  • TPD (%) 1 - [(M cf (k) - M cf (exp.)] / [M cf (k) - M cf (OA)] x 100, where M cf (k) - average (over 3 -th samples) the number of basophils in the test of spontaneous degranulation;
  • bronchospasm was induced by aerosol administration of a resolving dose of ovalbumin (3 mg / kg in 1 ml of physiological solution).
  • ovalbumin 3 mg / kg in 1 ml of physiological solution.
  • the test compounds were administered intragastrically to guinea pigs for three days at doses of 10 ⁇ g / kg, 50 ⁇ g / kg and 150 ⁇ g / kg using a probe.
  • the studied compounds at a dose of 50 ⁇ g / kg were administered by inhalation (using a nebulizer) also for three days once a day.
  • the control group was administered physical. solution.
  • Ovalbumin was inhaled with a nebulizer 1 hour after the last injection of the substances and the duration (in seconds) and the intensity of the bronchospastic reaction of the animals were evaluated.
  • compound IV exhibits a significant protective effect with respect to the systemic anaphylactic ip vivo reaction.
  • Example 16 Antiallergic effect of compounds of the general formula I on the model of allergic rhinitis in guinea pigs
  • Guinea pigs were immunized according to a specific schedule for 1.5-2-x months (Nutc PA, Churh M.K. et al. 1988): initially, animals were immunized with intraperitoneal administration of ovalbumin at a dose of 10 mg / kg at a 7-day interval (twice ), then the pigs were inhaled using a nebulizing technique (Rari) a solution of ovalbumin in increasing concentration, starting from 0.1% to 1% with an interval of 4 days between inhalations.
  • a nebulizing technique Pre
  • ovalbumin The last dose of ovalbumin was introduced into the nasal passages using a micropipette. After 24 hours after the last administration of ovalbumin, a nasal rinse was taken (through a system of special tubes) and changes in the nasal mucosa were evaluated using a complex of methods: histological and cytological.
  • the studied compounds (0.1% solution) were administered daily as inhalations using a nebulizing technique for 6 days, antigen provocation (OA) was provoked on the 6th day of administration. A nasal wash was obtained one day after the provocation.
  • a model of allergic pneumonia in guinea pigs was used.
  • a bronchoalveolar lavage was taken (via a cannula inserted into the trachea) and changes in the bronchial mucosa were evaluated using a complex of methods: histological and cytological.
  • test compounds (0.1% r-p) were administered daily as inhalations using a nebulizer technique for 6 days, and antigen provocation (OA) was induced on the 6th day of administration.
  • Table 9 The test compounds (0.1% r-p) were administered daily as inhalations using a nebulizer technique for 6 days, and antigen provocation (OA) was induced on the 6th day of administration.
  • Inflammation in the lungs was induced by a single inhalation administration of Sephadex A-25 (hydrophilic powder with particle sizes from 20 to 80 ⁇ m) at a dose of 5 mg / kg using a dosing device, which is a laboratory analogue of the Cyclochaler inhaler (Research Institute of Pulmonology of the Russian Federation).
  • Lungs with trachea were removed from the chest cavity, and the macro was placed in a 2% aqueous solution of acetic acid. After 18-24 hours, the trachea, the main and lobar bronchi were dissected; by the method of point counting under a magnifying glass (UV.7), a morphometric assessment of the bulk density of lymphoid tissue associated with the bronchi was performed. The volumetric density of alveolitis and emphysema was determined by the method of point counting.
  • Bronchoalveolar lavage in rats and guinea pigs was obtained under hexenal anesthesia by twice washing the lungs through the trachea with 10 ml of physiological saline. Cell viability was determined in a trypan blue test.
  • a liquid of bronchoalveolar lavage (ALS) the absolute number of cells per 1 ml (cytosis) was determined using a Goryaev’s chamber.
  • smears from a sediment of ALS fluid obtained by centrifugation at 200 g for 10 minutes and then stained according to Romanovsky-Giemsa the endopulmonary cytogram was calculated (in percent) [Avtsyn A.P., Lukomsky G.I.,
  • the research results were processed by methods of variation statistics using t-student criterion.
  • Compound IV caused a distinct anti-inflammatory effect: the prevalence of alveolitis was significantly lower compared to the model group of animals; emphysema was practically not detected; infiltration of the interalveolar septa by neutrophils was not noted. By the level of cytosis and the number of neutrophils in BAL, the inflammatory process is also significantly less pronounced than in animals treated with Sephadex for 5 days.
  • Hyperlipidemia was caused by the oral administration of a cholesterol load - an oily suspension of cholesterol: olive oil (Acoresa, Spain) - 5 ml / kg of animal weight; cholesterol (Sigma, USA) - 1 g / kg of weight; sodium cholate (Sigma, USA) - 100 mg / kg of weight.
  • statins - “Mevacop” lovastatin
  • Merck Sharr & Dhp a drug from the group of statins - “Mevacop” (lovastatin) by Merck Sharr & Dhp in a dose of 40 mg / kg
  • a cholesterol suspension was administered in the morning daily for 10 days.
  • Serum levels of total cholesterol, triglycerides, and high-density lipoprotein cholesterol (JIPVP) were measured.
  • Low and very low density lipoprotein cholesterol was calculated by the difference between total cholesterol and HDL cholesterol.
  • the content of total cholesterol and triglycerides in blood serum was determined by the enzymatic method.
  • ⁇ -LP high density lipoproteins
  • a distinctive property of the monosodium salt of compound V was the ability to lower the level of total serum triglycerides, while the decrease in the level of total cholesterol, XC VLDL and the increase in HDL content was lower than that of the monosodium salt of compound III and the monosodium salt of compound IV.
  • the salts of compounds II, III, IV and V have increased lipid-lowering activity, compared with the activity of the compounds described in the publication of international application WO 99/01103, and compounds proposed in the present invention, including the ability to lower triglycerides, XC serum cholesterol, including in LDL and increase HDL cholesterol.
  • Example 19 Investigation of the hypolysidemic effect of the compounds of general formula (I) on the model of “endogenous” guinea pig hypercholesterolemia
  • the study was conducted on male guinea pigs (Agouti breed), with an initial weight of 304 ⁇ 25 g. The duration of the experiment was 31 days. Control group, 6 pigs - intact animals. The studied compounds were administered from the first day of the experiment (from the first day of the introduction of the fat load).
  • Test compound Animals of the experimental groups received the test compound and fat load daily for 31 days.
  • the studied compounds IV and V significantly reduced the level of total cholesterol only by the 31st day of the experiment by 33.9 and 37.8%, respectively. Moreover, they significantly reduced LDL cholesterol by 37.7 and 38%.
  • Figure 1 Change in total serum cholesterol under the influence of fat load and various doses (50-1500 ⁇ g / kg) of compound IV. Vertical thin lines indicate the standard deviation from the mean.
  • the advantage of the claimed compounds, in particular compounds IV is a wide range of effective doses, which ensures the breadth of its therapeutic effect. So, for example, compound GV almost equally effectively reduced the content of total cholesterol for 20 days in the range of doses from 50 to 1500 ⁇ g / kg, differing 30 times.
  • (I) have significant lipid-lowering activity, significantly improving lipid metabolism in serum and in the liver.
  • Paw volume was measured using a plethysmometer (Ugo Basile) 4 hours after the administration of carrageenin.
  • the effect of the therapeutic effect of the gel was evaluated by the degree of suppression of the inflammatory reaction in comparison with the intact left paw of this animal and the reaction of the paws of rats of the control (untreated) group.
  • the inhibition of the inflammatory reaction expressed as a percentage, was calculated by the formula.
  • a tablet form is prepared using the following ingredients:
  • the components are mixed and compressed to form tablets weighing 300 mg each.
  • Cocoa butter is the amount required to obtain a suppository. If necessary, it is possible to produce rectal, vaginal and urethral suppositories with appropriate excipients.
  • composition of the ointment is an example of the composition of the ointment:
  • An example of a gel composition A compound corresponding to the general formula (I) or 1-500 mg thereof pharmaceutically acceptable salt of carbopol 200 mg benzoyal alcohol 20 mg ethyl alcohol. 300 mg water to 10 g
  • a compound corresponding to the general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof 20-200 mg of lactose up to 1 g
  • the powder is placed in a special device (container) or in a gelatin capsule.
  • a special device container
  • a gelatin capsule E. Nasal Spray
  • composition of the spray is a mixture of the spray:
  • a compound corresponding to the general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof 0.5-50 mg preservative 10 mg purified water up to 5 ml

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

N-АЦИЛЫΪЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ АМИНОКИСЛОТ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ
И ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКИХ, ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКИХ СРЕДСТВ Описание
Настоящее изобретение относится к области биоорганической химии и касается N-ацильных производных аминокислот и их фармацевтически приемлемых солей, новых способов синтеза указанных соединений, а также фармацевтических композиций на их основе и применения в медицине в качестве противоаллергических, противовоспалительных и гиполипидемических средств. Предшествующий уровень техники
Как известно в настоящее время аллергические заболевания и нарушения липидного обмена весьма распространены, вследствие плохой экологической обстановки, изменения структуры питания и образа жизни населения. Поэтому проблема создания лекарственных средств для борьбы с этими патологиями, а также с воспалительными процессами, как правило, сопровождающими аллергию, продолжает оставаться актуальной.
Наиболее распространенной группой противоаллергических препаратов являются блокаторы Н^гистаминовых рецепторов. В настоящее время выделяют 2 поколения антигистаминных препаратов [Машковский М.Д. Лекарственные средства./ Москва: Новая волна. 2005. c.285].
Антигистаминные препараты 1-го поколения проникают через гематоэнцефалический барьер и способны вызывать блокаду Hl -рецепторов клеток центральной нервной системы, что обусловливает их нежелательный седативный эффект. Для достижения выраженного антигистаминного действия необходимы высокие концентрации этих препаратов в крови, что требует назначения их в больших дозах. Отрицательной характеристикой этих препаратов является довольно частое развитие тахифилаксии, влияние на ЦНС, проявляющееся в нарушении координации, головокружении, чувстве вялости, снижение способности концентрировать внимание. Несмотря на вышеуказанное, антигистаминные средства первого поколения по-прежнему применяются, особенно в тех ситуациях, когда необходим очень быстрый эффект от лечения, например, при анафилаксии. К антигистаминным препаратам первого поколения относятся димедрол (дифенгидрамин), супрастин (хлорпирамин), тавегил (клемастин), фенкарол (хифенадин).
Антигистаминные препараты 2-го поколения получили в последние годы широкое применение в аллергологической практике, поскольку не обладают побочными эффектами, присущими препаратам 1-го поколения. В частности, препараты 2-го поколения не проникают через гематоэнцефалический барьер, не имеют седативного и снотворного эффектов. Для них характерно быстрое и продолжительное антигистаминное действие. К антигистаминным средствам второго поколения относятся: кларитин (лоратадин) зиртек (цетиризин), кестин (эбастин). Однако проведенные клинические испытания выявили побочные действия и этих препаратов, обусловленные их взаимодействием с другими лекарственными средствами или нарушением их метаболизма цитохромом P 450. Таким образом, были выявлены потенциально седативные (цетиризин, лоратадин) и потенциально кардиотоксичные (терфенадин, астемизол (эбастин)) эффекты у антигистаминных средства 2-го поколения.
В некоторых случаях, например, при бронхиальной астме применяют глюкокортикостероиды, оказывающие мощное антиаллергическое действие. Однако их применение сопровождается системными проявлениями в виде синдрома Иценко-Кушинга, гипертензии, гипергликемии, остеопороза и др. [Машковский М.Д. Лекарственные cpeдcтвa./Meдицинa. Москва. 1993. т.l, c.565].
Особое значение в развитии аллергических заболеваний имеет патохимическая стадия аллергических реакций, которая в значительной степени определяется степенью активации клеток-мишеней аллергии 1-го порядка (базофилов и тучных клеток). Их важной особенностью является способность к накоплению и высвобождению под действием стимула (аллергена) биологически активных соединений, в первую очередь, гистамина. При IgE- и/или IgG- опосредованном ответе на антиген именно эти клетки определяют степень выраженности клинической картины немедленной аллергии [Паркер Ч.B./ Медиаторы: высвобождение и функции.// В кн.: Иммунология. Под редакцией У. Пола. M. Мир. 1989. т.З. c.170-247; Сhаkrаvаrtу N.K.// In: Тhе mаst сеll: Its rоlе iп hеаlth апd disеаsе. еd. J. Реруs. 1979. p.38-46].
Существует группа препаратов (кромогликат-натрия (динатриевая соль кромоглициевой кислоты), кетотифен, оксатомид, применяемых при бронхиальной астме и бронхоспастических состояниях, в основе действия которых лежит способность тормозить дегрануляцию тучных клеток и задерживать высвобождение из них медиаторных веществ, способствующих развитию бронхоспазма, аллергии и воспаления (брадикинина, гистамина). В качестве побочных эффектов могут наблюдаться раздражение слизистых оболочек, головная боль, отек гортани, кашель, удушье [Машковский М.Д. Лекарственные средстваУМосква: Новая волна. 2005. c.297].
Известно, что наиболее частым проявлением атеросклероза является ишемическая болезнь сердца, стоящая на первом месте в ряду причин смертности взрослого населения планеты. Одним из ведущих нарушений при данном заболевании признано нарушение липидного обмена, выражающееся в повышении содержания в плазме крови холестерина, в том числе в составе липопротеинов низкой (JIПНП) и очень низкой плотности (ЛПОНП), получивших название "атерогенных", с одновременным снижением количества "антиатерогенных" липопротеинов высокой плотности (ЛПВП).
Показано, что изменение содержания и соотношения липидов в плазме отражает их изменение в мембранных структурах паренхиматозных органов. Состав мембран клетки, например, микросомальных, прямо зависит от состава рациона экспериментальных животных [Wаdе А., Наrrеd W. // Fеdеr. Рrосt. 1976. vоl. 55. рр . 2475-2479]. Введение животным холестерина вызывает накопление его в мембранах клеток, уменьшая ее текучесть, что, в свою очередь, приводит к изменению функционального состояния ферментов [Вutеrs J.T.M., Zуssеt Т., Rеiсhеп J.//Biochem. Рhаrтасоl. 1993. vоl. 46. Iss 6. рр. 983-991].
Гиполипидемические средства, снижающие содержание холестерина и триглицеридов в крови, могут применяться для лечения и профилактики заболеваний, связанных с нарушениями липидного обмена. Последние характеризуются повышением содержания триглицеридов, общего холестерина (XC), холестерина в составе липопротеинов низкой и очень низкой плотности (ЛПНП и ЛПОНП) и снижением содержания холестерина в составе липопротеинов высокой плотности, при таких заболеваниях как атеросклероз, ожирение, ишемическая болезнь сердца и головного мозга, инфаркт миокарда, инсульт, и которые служат фактором риска манифестации сахарного диабета и тромбообразования. Известно клиническое применение так называемых статинов, ингибиторов биосинтеза холестерина, например зокора (симвастатин). Препараты данной группы в дозах 80 мг/день достаточно эффективны, главным образом в отношении понижения уровня общего холестерина в крови, при этом малодоступны, дороги и представляют собой чужеродные для организма химические соединения. Кроме того, их применение может сопровождаться побочными эффектами: изменением функций печени с повышением уровня трансаминаз в крови, диспепсией
[Машковский M. Д. Лекарственные средства/Медицина. Москва. 1993. т.l, c.463].
В связи с указанным выше актуальным является поиск новых эффективных противоаллергических и гиполипидемических средств, с альтернативными механизмами действия, способных проявлять активность в низких концентрациях и лишенных побочных эффектов. В этом отношении особый интерес представляют соединения, включающие остатки веществ природного происхождения, так как для них можно прогнозировать более низкую токсичность и частоту побочных эффектов.
В публикации международной заявки WO 99/01103 описано противоаллергическое и гиполипидемическое действие N-ацильных производных биогенных аминов, например, γ-глутамилгистамина, и его ближайшего аналога глутарилгистамина, которые наиболее близки по структуре и действию к заявляемым соединениям. В статье Кржечковская В. В., Желтухина Г.A., Небольсин В.Е. и др. Изучение антианафилактической активности и механизмов действия γ-L-глyтaмилгиcтaминa.//Пaтoгeнeз. 2003. Т.l. N°2. c.60-64 показано, что γ-глутамилгистамин обладает выраженной антианафилактической активностью при использовании различных видов животных и способов введения. Полученные результаты свидетельствуют о том, что в тучных клетках животных под действием γ-глутамилгистамина достоверно снижается содержание гистамина и его антиген- стимулированная секреция. В тесте по исследованию влияния глутарилгистамина на выраженность антиген-индуцированного бронхоспазма было показано снижение величины бронхоспазма более чем на 50% по сравнению с контролем. Данный эффект проявлялся как при пероральном, так и интратрахеальном способе его введения в низкой дозе - 50 мкг/кг. Глутарилгистамин обладает способностью снижать проявления пассивной кожной анафилаксии. В WO 99/01103 показано, что при введении животным глутарилгистамина в дозах 50 и 500 мкг/кг было продемонстрировано достоверное снижение интенсивности гиперчувствительности замедленного типа. Кроме того, глутарилгистамин в дозах 50 и 500 мкr/кг обладал также некоторой антихолестеринемимической активностью, снижая содержание общего холестерина по сравнению с животными с атерогенной нагрузкой на 5-7%.
Недостатком глутарилгистамина является его сравнительно высокая стоимость и малая доступность исходного сырья для его получения - гистамина. Кроме того, указанное вещество недостаточно эффективно в вышеперечисленных тестах. С целью расширения арсенала технических средств и создания более эффективного и доступного противоаллергического, противовоспалительного и гиполипидемического средства, авторами изобретения были выявлены некоторые специфические N-ацильные производные аминокислот общей формулы (I), раскрытой в публикации международной заявки WO 99/01133, но конкретно в ней не описанные, не полученные и не охарактеризованные, за исключением глутарил- L-гистидина метилового эфира (XII).
Так, под общую формулу (I) вышеуказанной международной заявки подпадают соединения настоящего изобретения. Однако в указанной публикации не приведены ни конкретные структурные формулы данных соединений, ни какие- либо физико-химические характеристики, а также не описаны способы их получения. Соединения настоящего изобретения подпадают под общую структурную формулу соединений, раскрытых в публикации международной заявки WO 03/072124, обладающих индуцирующим дифференцировку клеток действием. Однако, в данной публикации не описан способ их синтеза и не приведены какие-либо физико-химические константы.
Одно из соединений глутарилгистидин упоминается только в виде метилового эфира по С-концу Нis [Glt-His(OMe) (XII)] в патенте США 3963691, в качестве промежуточного соединения в синтезе пептида Glt-Нis-Тrр-Sеr-Туr-Glу- Lеu-Аrg-Рrо-Glу-роlу-Lуs. Кроме того в публикации международной заявки WO 99/01133 описан синтез глутарил-L-гистидина метилового эфира (XII) и приведены физико-химические характеристики: данные H-ЯMP-, масс- спектрометрии, ВЭЖХ.
Соединение сукцинилгистидин упоминается в публикации международной заявки WO 93/04690. В этой публикации указано, что добавление свободного имидазола или сукцинилгистидина ускоряет взаимодействие карнозина с дигидроксиацетоном. Методики синтеза сукцинилгистидина и его физико- химические константы не приведены. Структурная формула сукцинилтриптофана упоминается в заявке США
2005079515. В указанной публикации ни методики синтеза сукцинилтриптофана, ни его физико-химические константы не приведены.
В Бюллетене экспериментальной биологии и медицины, 1998, т.125. N°5, cтp.544-547 раскрыта дикалиевая соль N-cyкцинил-d,l-тpиптoфaнa, обладающая противоаритмической и противофибриллярной активностью , которая оказывает антиишемическое и антигипоксическое действие, стабилизирует показатели гемодинамики при острой ишемии миокарда.
В Justus liеbigs annalen dеr сhеmiе, 1966, Вапd 691. P.159-164 описан рацемический сукцинилтриптофан. В Теtrаhеdrоп, 2005, v.61, N24, P.919-926 приведены физико-химические характеристики сукцинил-L-триптофана и сукцинил-D-триптофана. Какие-либо сведение об их биологической активности отсутствуют.
В статье Jоsерh R. Vоtапо еt аl Iпhibitiоп оf dеохуhеmоglоbiп S роlуmеrizаtiоп bу biаrоmаtiс рерtidеs fоuпd tо аssосiаtе with thе hеmоglоbiп mоlесulе аt а рrеfеrrеd sitе, Вiосhеmistrу, 1977, v.16, N225, рр.5484-5491 упомянут сукцинил-L-триптофан и изучена его способность связываться с деоксигемоглобином.
В статье Dongmei H., Сhао W., Ming Z., Shiqi P. Sупthеsis апd апаlgеsiс асtivitу оf N,N'-dicarbonyltryptamines. Рrер. Вiосhет. & Вiоtесhпоl., 2000, V.ЗO(З), P.231-240 описан синтез Nα-cyкцинил-L-тpиптoфaнa метилового эфира (XI), исходя из метилового эфира триптофана и янтарного ангидрида в присутствии диметиламинопиридина, с последующей хроматографической очисткой целевого продукта. Nα-Cyкцинил-L-тpиптoфaнa метилового эфира (XI) охарактеризован физико-химическими данными: 1H-ЯMP-, ИК-спектроскопии, масс- спектрометрии, температурой плавления и данными элементного анализа. Глутарил-L-триптофан метиловый эфир (XIII) упоминается в статье
Raimondi S., Monti D., Раgпопi U.M., Rivа S. Glutаrуl асуlаsеs: Опе-rеасtiоп епzуmеs оr vеrsаtilе епапtiоsеlесtivе biосаtаlуsts? Аdv. Sупth. Саtаl. 2003. V.345(6-7). P.783- 789, где приведена только типичная методика синтеза, а из физико-химических констант - данные Η-ЯМР-спектроскопии. Соединение (XIII) было синтезировано с целью его исследования в качестве субстрата для глутарилацилазы.
Получение Nα-глyтapил-L-гиcтaминa описано в публикации международной заявки WO 99/01103 и представляет собой N-ацилирование биогенного амина глутаровым ангидридом в среде безводного N5N- диметилформамида. Кроме того, в публикации Гершкович A.A., Кибирев
B.K.//Xимичecкий синтез пептидов/Киев, Наукова думка, 1992, c.360 описан способ ацилирования аминокислот в водно-органической, сильно щелочной среде.
В Sоrm F., Рrаvdа Z. Рrоtеiпs апd аmiпо асids. X. Sупthеsis оf twо рерtidе analogs.//Chemicke Listу рrо Vеdu а Рruтуsl. 1951. V.45. P.423-425 описан способ синтеза сукцинилтирозина этилового эфира в смеси воды и этилацетата при соотношении (1:1), исходя из хлоргидрата этилового эфира тирозина и глутарового ангидрида в присутствии NaHCO3 для поддержания слабощелочного рН. Ацилирование ангидридами дикарбоновых кислот свободного гистидина в литературе не описано.
Целью настоящего изобретения являются новые эффективные N-ацильные производные аминокислот и их фармацевтически приемлемые соли, обладающие противоаллергическим, противовоспалительным и гиполипидемическим действием в низких дозах и не проявляющие побочных: эффектов, фармацевтические композиции на их основе, их применение в качестве более эффективных противоаллергических, противовоспалительных и гиполипидемических средств, а также новые способы синтеза N-ацильных производных аминокислот. Авторами изобретения разработан простой и эффективный способ синтеза соединений общей формулы (I), заключающийся в том, что ангидрид глутаровой или янтарной кислоты в виде твердого вещества прибавляют к водному раствору аминокислоты в отсутствие неорганического и органического основания с получением целевого продукта с достаточно высоким выходом 55-60%. Авторами изобретения также разработан еще один способ синтеза соединений общей формулы (I), в том числе N-ацильных производных гистидина и триптофана, включающий проведение реакции в двухфазной системе, состоящей из водного раствора гистидина или соли триптофана и раствора ацилирующего агента в подходящем органическом растворителе при использовании избытка ацилирующего агента.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым N-ацильным производным аминокислот общей формулы I:
HOOC-(CH2)n-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2
Ri где п равно 2 или 3; R1 представляет
Figure imgf000010_0001
и их фармацевтически приемлемым солям, обладающим противоаллергическим, противовоспалительным и гиполипидемическим действием.
Настоящее изобретение также относится к способу получения N-ацильных производных аминокислот общей формулы I и их солей, включающему прибавление ангидрида глутаровой или янтарной кислоты в виде твердого вещества к водному раствору аминокислоты общей формулы:
Figure imgf000010_0002
где R1 представляет
Figure imgf000010_0003
и необязательно, превращение целевого продукта в его соль.
Настоящее изобретение далее относится к способу получения N-ацильных производных аминокислот общей формулы I и их солей, включающему проведение реакции в двухфазной системе с ангидридом глутаровой или янтарной кислоты в несмешивающемся с водой органическом растворителе с водным раствором аминокислоты общей формулы: NH2-CH-COOH CH2
Ri где R1 представляет
Figure imgf000011_0001
и, необязательно, превращение целевого продукта в его соль. Настоящее изобретение относится также к применению соединений общей формулы I и их фармацевтически приемлемых солей в качестве противоаллергических, противовоспалительных и гиполипидемических средств.
Далее, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции и средству, обладающим противоаллергическим, антианафилактическим и противовоспалительным и гиполипидемическим действием, содержащим эффективное количество соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, а также, если требуется фармацевтически приемлемый носитель.
Еще одним объектом изобретения является способ лечения аллергических заболеваний, включающих бронхиальную астму, аллергический ринит, поллинозы, сезонный ринит, круглогодичный ринит, атопический дерматит, псориаз, крапивницу, аллергические (в том числе анафилактические) реакции на укусы насекомых и лекарственные препараты, холодовую аллергию, аллергический конъюктивит, хронических обструктивных заболеваний легких, а именно хронического обструктивного бронхита, эмфиземы, облитерирующего бронхита, муковисцидоза, а также заболеваний, связанных с нарушениями липидного обмена: атеросклероз, ожирение, ишемическая болезнь сердца и головного мозга, инфаркт миокарда, инсульт, включающий введение эффективного количества соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.
Детальное описание изобретения
Предпочтительные соединения общей формулы I представлены в таблице 1. Таблица 1
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0002
Синтез соединений общей формулы I может быть осуществлен двумя способами. Первый способ заключается в постепенном добавлении к водному раствору аминокислоты общей формулы
Figure imgf000013_0001
где R1 представляет
N^NH глутарового или янтарного ангидрида в виде твердого вещества, с последующим выделением целевого продукта ионообменной хроматографией, предпочтительно пропусканием реакционной смеси через колонку с катионитом и. последующей кристаллизацией из водного раствора. Полученные кристаллы целевого продукта промывают подходящим растворителем, предпочтительно метанолом. Главное преимущество заявляемого способа состоит в отсутствии щелочи в водном растворе аминокислоты, что препятствует инактивации ангидрида дикарбоновой кислоты в результате гидролиза. Кроме того, остаток имидазола в составе молекулы аминокислоты может осуществлять кислотно- основный аутокатализ реакции ацилирования аминогруппы аминокислоты. Достаточно высокие выходы (55-60%) при использовании заявляемого способа достигаются, в частности, благодаря постепенному прибавлению ангидрида дикарбоновой кислоты, взятого в избытке, и интенсивному перемешиванию реакционной массы.
Соединения общей формулы I также могут быть получены альтернативным способом в двухфазной системе, включающим добавление ангидрида глутаровой или янтарной кислоты в несмешивающемся с водой органическом растворителе к водному раствору аминокислоты общей формулы:
Figure imgf000014_0001
где R1 представляет
Figure imgf000014_0002
Данный способ позволяет использовать избыток ацилирующего агента, достичь полного ацилирования α-аминогруппы аминокислоты и выхода целевого продукта около 70%. Для поддержания необходимого рН вместо неорганической щелочи используют органическое основание - пиридин, который не гидролизует ангидрид, и, кроме того, как известно, является катализатором ацилирования. Использование пиридина позволяет избежать загрязнения конечного продукта неорганическими солями, которые вместе с продуктом реакции остаются в водном слое. Использованные подходы позволяют упростить отделение целевого продукта от непрореагировавших ангидрида и соответствующей аминокислоты и выделять целевой продукт простой кристаллизацией. Предпочтительными несмешивающимися с водой органическими растворителями являются бутанол, этилацетат, хлороформ.
Предпочтительными растворителями, используемыми для кристаллизации целевого продукта, являются водноспиртовые смеси, в частности, вода-этанол.
N-ацилированные производные эфиров аминокислот по изобретению (VI- XIII) можно получить действием соответствующих внутренних ангидридов дикарбоновых кислот на аминосвободные эфиры гистидина или триптофана в органической или водно-органической среде. Предпочтительным является получение соединений VI-XIII в двухфазной системе, с использованием несмешивающихся с водой органическими растворителями: бутанол, этилацетат, хлороформ.
Соединения общей формулы I могут быть также получены в виде фармацевтически приемлемых солей путем взаимодействия, например, с гидроксидом натрия, гидроксидом калия, карбонатом магния, гидроксидом лития, карбонатом кальция рутинными способами, широко описанными в литературе. Соединения общей формулы I обладают противоаллергической, противовоспалительной и гиполипидемической активностью и могут быть использованы для лечения аллергических, анафилактических, в том числе сопровождающихся воспалением заболеваний, а также нарушениями липидного обмена.
В частности, соединения настоящего изобретения могут быть использованы для лечения следующих аллергических заболеваний: бронхиальной астмы, аллергического ринита, поллинозов, сезонного ринита, круглогодичного ринита, атопического дерматита, псориаза, крапивницы, аллергических (в том числе анафилактических) реакций на укусы насекомых и лекарственные препараты, холодовой аллергии, аллергического конъюктивита, хронических обструктивных заболеваний легких, а именно хронического обструктивного бронхита, эмфиземы, облитерирующего бронхита, муковисцидоза, а также заболеваний, связанных с нарушениями липидного обмена, таких как атеросклероз, ожирение, ишемическая болезнь сердца и головного мозга, инфаркт миокарда, инсульт.
Соединения настоящего изобретения вводятся в эффективном количестве, которое обеспечивает желаемый терапевтический результат.
Для лечения аллергических заболеваний, включающих бронхиальную астму, аллергический ринит, поллинозы, сезонный ринит, круглогодичный ринит, атопический дерматит, псориаз, крапивницу, аллергические (в том числе анафилактические) реакции на укусы насекомых и лекарственные препараты, холодовую аллергию, аллергический конъюктивит, хронические обструктивные заболевания легких, а именно хронический обструктивный бронхит, эмфизему, облитерирующий бронхит, муковисцидоз, а таюке заболеваний, связанных с нарушениями липидного обмена, таких как атеросклероз, ожирение, ишемическая болезнь сердца и головного мозга, инфаркт миокарда, инсульта соединения общей формулы I могут быть введены перорально, местно, парентерально, интраназально, ингаляционно и ректально в виде стандартных лекарственных форм, содержащих нетоксичные фармацевтически приемлемые носители. Используемый в настоящем описании термин «пapeнтepaльнoe ввeдeниe» означает подкожные, внутривенные, внутримышечные или внутригрудные инъекции или вливания.
Соединения настоящего изобретения могут быть введены пациенту в дозах, составляющих от 0,01 до 10 мг/кг веса тела в день, предпочтительно в дозах от 0,05 до 5 мг/кг один или более раз в день.
При этом следует отметить, что конкретная доза для каждого конкретного пациента будет зависеть от многих факторов, включая активность данного используемого соединения, возраст, вес тела, пол, общее состояние здоровья и режим питания пациента, время и способ введения лекарственного средства, скорость его выведения из организма, конкретно используемую комбинацию лекарственных средств, а также тяжесть заболевания у данного индивида, подвергаемого лечению. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению содержат соединение общей формулы (I) в количестве, эффективном для достижения желаемого результата, и могут быть введены в виде стандартных лекарственных форм (например, в твердой, полутвердой или жидкой формах), содержащих соединения настоящего изобретения в качестве активного ингредиента в смеси с носителем или наполнителем, пригодным для внутримышечного, внутривенного, перорального, сублингвального, ингаляционного, интраназального и интраректального введения. Активный ингредиент может быть включен в композицию вместе с обычно используемыми нетоксичными фармацевтически приемлемыми носителями, пригодными для изготовления растворов, таблеток, пилюль, капсул, драже, суппозиториев, эмульсий, суспензий, мазей, гелей и любых других лекарственных форм.
В качестве наполнителей могут быть использованы различные вещества, такие как сахариды, например глюкоза, лактоза или сахароза, манит или сорбит, производные целлюлозы и/или фосфаты кальция, например, трикальций фосфат или кислый фосфат кальция, в качестве связующего компонента могут быть использованы, такие как крахмальная паста, например, кукурузный, пшеничный, рисовый, картофельный крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидон. При необходимости могут быть использованы разрыхляющие агенты, такие как вышеупомянутые крахмалы и карбоксиметилкрахмал, поперечно сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия.
Могут быть использованы необязательные добавки, такие как агенты, регулирующие текучесть, и смазывающие агенты, такие как диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота и ее соли, такие как стеарат магния или стеарат кальция, и/или пропиленгликоль.
Ядро драже обычно покрывают слоем, который устойчив к действию желудочного сока. Для этой цели могут быть использованы концентрированные растворы сахаридов, которые могут необязательно содержать аравийскую камедь, тальк, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, и подходящие органические растворители или их смеси.
В качестве добавок могут быть также использованы стабилизаторы, загустители, красители и отдушки.
В качестве мазевой основы могут быть использованы углеводородные мазевые основы, такие как вазелин белый и желтый (Vаsеliпum аlbum, Vаsеliпum flаvum), вазелиновое масло (Оlеum Vаsеliпi), мазь белая и жидкая (Uпguепtum аlbum, Uпguепtum flаvum), а в качестве добавок для придания более плотной консистенции, такие как твердый парафин и воск; абсорбтивные мазевые основы, такие как гидрофильный вазелин (Vаsеliпum hуdrорhуliсum), ланолин (Lапоliпum), кольдкрем (Uпguепtum lепiепs); мазевые основы, смываемые водой, такие как гидрофильная мазь (Uпguепtum hуdrорhуlum); водорастворимые мазевые основы, такие как полиэтиленгликолевая мазь (Uпguепtum Glусоlis Роlуаеthуlепi), бентонитовые основы и другие.
В качестве основы для гелей могут быть использованы метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, оксипропилцеллюлоза, полиэтиленгликоль или полиэтиленоксид, карбопол.
В качестве основы для суппозитория могут быть использованы основы, не растворимые в воде, такие как масло какао; основы, растворимые в воде или смешиваемые с водой, такие как желатино-глицериновые или полиэтиленоксидные; комбинированные основы - мыльно-глицериновые.
При приготовлении стандартной лекарственной формы количество активного ингредиента, используемого в комбинации с носителем, может варьироваться в зависимости от реципиента, подвергающегося лечению, от конкретного способа введения лекарственного средства.
Так, например, при использовании соединений настоящего изобретения в виде растворов для инъекций, содержание активного агента в них составляет 0,01- 5%. В качестве разбавителей могут быть использованы 0,9% раствор хлорида натрия, дистиллированная вода, раствор новокаина для инъекций, раствор Рингера, раствор глюкозы, специфические добавки для растворения. При введении в организм соединений настоящего изобретения в виде таблеток и суппозиториев их количество составляет 5,0-500 мг на стандартную лекарственную форму.
Лекарственные формы настоящего изобретения получают по стандартным методикам, таким как, например, процессы смешивания, гранулирования, формирование драже, растворение и лиофилизация.
Следует отметить, что соединения настоящего изобретения проявляют биологическую активность в дозах на два-три порядка ниже по сравнению с известными препаратами, использованными для сравнения, при практически одинаковой эффективности, и для них не выявлено отрицательных побочных действий и не обнаружено противопоказаний к применению. При этом при исследовании токсичности соединений настоящего изобретения в дозе 3000 мг/кг, перорально, не зарегистрировали гибели экспериментальных животных.
Детальное описание соединений настоящего изобретения, их получения и исследования фармакологической активности представлено в нижеследующих примерах, предназначенных для иллюстрации предпочтительных вариантов изобретения, и не ограничивающими его объем. Примеры синтеза N-ацильных производных аминокислот общей формулы (I)
Индивидуальность полученных соединений проверялась методом TCX на пластинках "Кiеsеlgеl 60 F254" "Меrсk" (Германия) в системах: метанол (1), хлороформ-метанол-аммиак (4:3:1) (2).
Хроматограммы проявляли хлортолидиновым реактивом, нингидрином, йодом по свечению в УФ-свете.
Углы оптического вращения измеряли на поляриметре "Реrkiп Еlmеr 341" (Швеция).
!H-ЯMP регистрировали на приборе "AMX-400 Вrukеr" (Германия).
Температуру плавления определяли на приборе "Воеtius" (Германия). Аналитическую ВЭЖХ проводили на приборе "Sуstеm GoId" ("Весkmап",
США): скорость элюции 0,25 мл/мин, детекция при 214 нм в условиях: колонка
Ultrаsрhеrе ODS "Весkmап" , 2x250 мм, 5 мкм, элюция 0,1%-нoй TFA, скорость элюирования 0,25 мл/мин (1); скорость элюции 1 мл/мин, детекция при 220 нм, колонка Luna-5 "Рhепоmепех", C18, 250x4,6 мм, элюция 25% ацетонитрила в 0,05 M фосфатном буфере (рН 3,0) (2).
Пример 1
Nα-Глyтapил-L-гиcтидин (IV) Методика А
К раствору 103,4 г (0,67 моль) гистидина в 400 мл воды добавляют 83,7 г (0,73 моль) глутарового ангидрида. Суспензию перемешивают 1 час, образующийся раствор упаривают до объема 150 мл, оставляют в холодильнике на 16 часов. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 150 мл метанола и сушат. Очистку проводят ионообменной хроматографией на смоле Пьюролайт в H+ форме, элюируя водой. Фракции, содержащие целевой продукт объединяют, упаривают до начала выпадения осадка и оставляют на 16 часов при +4°C. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 200 мл метанола и сушат до постоянного веса. Выход 98,8 г (55%). Rf 0,55 (1), 0,37 (2). TПЛ=222-224°C. [α]D 20+15, 95° (С 0,53, вода). [M+H]+ 270,1. 1H-ЯMP спектр (D2O), δ, м.д.: 1,60-1,80 (м, 2H, β-CH2-Glt), 2,10-2,25 (м, 4H, α,γ-CH2-Glt), 2,90-3,25 (м, 2H, β-CH2-His), 4,40-4,50 (м, IH, α-СН-Нis), 7,15 (с, IH, CH-4-Im), 8,50 (с, IH, CH-2-Im). Найдено, %: С 49,18; H 5,91; N 15,42. C11H15N3O5. Вычислено, %: С 49,07; H 5,62; N 15,61. Методика Б К суспензии 0,3 г (1,93 ммоль) гистидина в 5 мл воды при интенсивном перемешивании добавляют 0,44 г (3,86 ммоль) глутарового ангидрида, растворенного в 2,5 мл этилацетата. Перемешивают 2 часа, пиридином доводят рН до 7 и перемешивают еще 1 час. Этилацетатный и водный слой разделяют. Водный слой дважды промывают эфиром, эфирный слой отбрасывают. Воду удаляют в вакууме, остаток растворяют в минимальном количестве воды и добавляют этанол до начала выпадения белого осадка, оставляют при +40C на 20 ч. Осадок отделяют фильтрованием, сушат в вакууме. Выход 0,36 г (70%). Rf 0,56 (1), 0,35 (2). Tпл=219-221°C. [α]D 20=+ 15,71° (С 0,56, вода). [M+H]+ 270,1. 1H-ЯMP спектр (D2O), δ, м.д.: 1,40-1,55 (м, 2H, β-CH2-Glt), 1,90-2,0 (м, 4H, α, γ-CH2-Glt), 2,7-3,0 (м, 2H, β-CH2-His), 4,20-4,30 (м, IH, α-СН-Нis), 6,95 (с, IH, 4-CH-Im), 8,30 (с, IH, 2-CH-Im). ВЭЖХ в условиях: (1) - индивидуальный пик, время удерживания 14,55 мин. Найдено, %: С 49,07; H 5,65; N 15,65. C11H15N3O5. Вычислено, %: С 49,07; H 5,62; N 15,61. Пример 2 Nα-Cyкцинил-L-гиcтидин (V)
Синтез проводили в соответствии с методикой А, приведенной для соединения ГV. Выход 0,08 г (57%).
Rf 0,44 (l), 0,25 (2). TПл=179-181°C. [α]D 20=+30,71° (С 0,56, вода). [M]+ 255,2. tø-ЯМР спектр (D2O)5 δ, м.д.: 2,15-2,30 (м, 4H, (CH2)2-Suc), 2,75-2,95 (м, 2H, β-CH2-His), 4,25 (уш.с, IH, α-СН-Нis), 6,95 (с, IH, 4-CH-Jm), 8,25 (с, IH, 2-CH-Jm). Найдено, %: С 47,09; H 5,04; N 16,40. C10H13N3O5. Вычислено, %: С 47,06; H 5,13; N 16,46
Синтез проводили в соответствии с методикой Б, приведенной для соединения IV.
Выход 0,101 г (67%). Rf 0,45 (l), 0,27 (2). Tпл=178-180°C. [α]D 20=+30,8° (С 0,57, вода). ВЭЖХ в условиях (1) - индивидуальный пик, время удерживания 7,54 мин.
Найдено %: С 47,15; H 5,2; N 16,50. C10H13N3O5. Вычислено %: С 47,06; H 5,13; N 16,46.
Пример 3
Nα-Глyтapилтpиптoфaн (III) К суспензии 1,0 г (4,9 ммоль) триптофана в 7 мл воды прибавляют по каплям раствор 1 N NaOH (4,9 ммоль). К полученному раствору добавляют раствор 0,56 г (4,9 мммоль) глутарового ангидрида в 3 мл этилацетата. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре в атмосфере аргона в темноте, оставляют на 16 часов при +4°. Растворитель из реакционной смеси удаляют в вакууме. Полученный маслообразный остаток растворяют в 30 мл воды при перемешивании, охлаждают до 0°, добавляют раствор 1 N HCl до рН 4. Продукт экстрагируют этилацетатом (3x25 мл). Объединенный этилацетатный экстракт охлаждают до 0°, промывают водой (4x25 мл) до рН 7,pacтвopoм 5% HCl (5мл), водой (4x25 мл) до pH7, сушат над безводным Na2SO4 в течение 1 часа. Осадок Na2SO4 отфильтровывают, промывают этилацетатом, растворитель удаляют в вакууме. Получают серовытый твердый остаток, который сушат в вакууме. Выход 1,0 г (70%).
Rf 0,54 (1). Tпл=150-152°C. [α]D 20=+8,20° (С 0,5, метанол).
1EkHMP спектр (CD3OD), δ, м.д.: 1,75-1,84 (м, 2H, P-CH2-GIt), 2,15-2,30 (м, 4H, CC5Y-CH2-GIt), 3,30-3,40 (м, 2H, β-CH2-Trp), 3,80-3,90 (м, IH, α-СН-Тrр), 6,97 (т, J=7 Гц, IH, CH-6-Ind), 7,06 (т, J=7 Гц, IH, CH-7-Ind), 7,15 (д, J=7 Гц, IH, CH-2-Ind), 7,33 (д, J=7 Гц, IH, CH-5-Ind), 7,55 (д, J=7 Гц, IH, CH-8-Ind).
ВЭЖХ в условиях: (2) - индивидуальный пик, время удерживания 6,77 мин. Найдено, %: С 60,07; H 5,65; N 8,75. C16H18N2O5 Вычислено, %: С 60,37; H 5,7; N 8,8.
Пример 4
Nα~Cyкцинил-L~тpиптoфaн (II)
Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для соединения III. Выход 100,5 мг (67%).
Rf 0,63 (1).
[α]D 20:=+21,05o (С 0,6, вода).
1H-ЯMP спектр (DMSO-d6), δ, м.д.: 2,33-2,41 (м, 4H, α,β-CH2-Suc), 2,93-3,01 (м, IH, β-CH2-Trp), 3,10-3,16 (м, IH, β-CH2-Trp), 4,39-4,47 (м, IH, α-СН-Тrр), 6,93- 7,06 (м, 2H, CH-6,7-Ind), 7,11 (д, J=2,2 Гц, IH, CH-2-Ind), 7,30-7,32 (м, IH, CH-5- Iпd), 7,44-7,47 (м, IH, CH-8-Ind). [M]+ 304,3.
ВЭЖХ в условиях: (2) - индивидуальный пик, время удерживания 6,35 мин. Найдено, %: С 59,07; H 5,65; N 9,35. C15Hi6N2O5 Вычислено, %: С 59,21; H 5,3; N 9,21. Пример 5
Моно-натриевая соль Nα-глyтapил-L-гиcтидинa (IV) К раствору 1,0 г (3,7 ммoль) Nα-глyтapил-L-гиcтидинa в 15 мл воды при перемешивании и охлаждении до +50C прибавляют раствор 0,15 г (3,7 ммoль) NaOH в 20 мл воды. Раствор перемешивают 30 мин, растворитель удаляют в вакууме. К маслообразному остатку порциями добавляют бензол, растворитель удаляют в вакууме. Твердый остаток сушат над гранулированной щелочью. Выход 1,07 г (99,7%).
Tпл=208-210oC. [α]D 20=+16,27° (С 0,58, вода).
Найдено, %: С 45,25; H 5,51; N 14,52. C11H15N3O5Na. Вычислено, %: С 45,21; H 5,17; N 14,38. Пример 6
Моно-натриевая соль Nα-cyкцинил-L-гиcтидинa (V) Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для мононатриевой соли Nα-глyтapил-L-гиcтидинa (ГV) (пример 5).
Выход 1,06 г (97,0%). [α]D 20=+40,21° (С 0,48, вода).
Найдено, %: С 43,25; H 4,51; N 15,52. C10H13N3O5Na. Вычислено, %: С 43,17; H 4,71; N 15,10.
Пример 7
Моно-натриевая соль Nα-cyкцинил-L-тpиптoфaнa (II) Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для мононатриевой соли Nα-глyтapил-L-гиcтидинa (ГV) (пример 5). Выход 0,21 г (98,0%). Tпл=147-150°C. [α]D 20=+22,02° (С 0,39, вода). Найдено, %: С 55,25; H 4,51; N 8,32. C15H16N2O5Na. Вычислено, %: С 55,05;
H 4,93; N 8,56.
ВЭЖХ в условиях: (2) - индивидуальный пик, время удерживания 6,56 мин.
Пример 8
Моно-натриевая соль Nα-глyтapил-L-тpиптoфaнa (III) Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для мононатриевой соли Nα-rлyтapил-L-гиcтидинa (IV) (пример 5). Выход 0,1 I r (99,0%). Tпл=128-130°C. [α]D 20=+22,06° (С 0,34, метанол).
Найдено, %: С 56,15; H 5,21; N 8,22. C16H18N2O5Na. Вычислено, %: С 56,30; H 5,32; N 8,21.
ВЭЖХ в условиях: (2) - индивидуальный пик, время удерживания 6,96 мин. Пример 9
Ди-натриевая соль Nα~глyтapил-L-гиcтидинa (IV)
К раствору 1,0 г (3,7 ммoль) Nα-глyтapил-L-гиcтидинa в 15 мл воды при перемешивании и охлаждении до +50C прибавляют раствор 0,3 г (7,44 ммоль) NaOH в 15 мл воды. Раствор перемешивают 30 мин, растворитель удаляют в вакууме. К маслообразному остатку порциями добавляют бензол, растворитель удаляют в вакууме. Твердый остаток сушат над гранулированной щелочью. Выход 1,15 г (99,0%). [α]D 20=+l 1,92° (С 0,57, вода).
Найдено, %: С 41,25; H 4,51; N 13,52. C11H15N3O5Na2. Вычислено, %: С 41,91; H 4,80; N 13,3.
Пример 10
Ди-натриевая соль Nα-cyкцинил-L-гиcтидинa (V)
Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для ди- натриевой соли Nα-глyтapил-L-гиcтидинa (ГV) (пример 9). Выход 1,16 г (99,0%).
TПЛ=124-128°C. [α]D 20=+20,06° (С 0,67, вода).
Найдено, %: С 39,55; H 4,31; N 13,52. C10H13N3O5Na2. Вычислено, %: С 39,88; H 4,35; N 13,95. Пример 11
Ди-натриевая соль Nα-cyкцинил-L-тpиптoфaнa (II) Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для ди- натриевой соли Nα-глyтapил-L-гиcтидинa (IV) (пример 9).
Выход 0,56 г (97,7%). Найдено, %: С 51,35; H 4,31; N 8,22. C15H16N2O5Na2. Вычислено, %: С 51,43;
H 4,60; N 8,0. Пример 12 Ди-натриевая соль Nα-глyтapил-L-тpиптoфaнa (III)
Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для ди- натриевой соли Nα-глyтapил-L-гиcтидинa (IV) (пример 9). Выход 0,56 г (98.5%).
Найдено, %: С 52,55; H 4,71; N 7,52. C16Hi8N2O5Na2. Вычислено, %: С 52,75; H 4,98; N 7,69.
Пример 13
Nα-cyкцинил-L-гиcтидинa метиловый эфир К раствору 1,0 г (4,13 ммоль) гистидина метилового эфира в 5 мл
N,N-димeтилфopмaмидa при интенсивном перемешивании добавляют 5 мл воды и раствор 0,41 г (4,13 ммоль) янтарного ангидрида в 2,5 мл этилацетата. Перемешивают 2 часа при комнатной температуре. Этилацетатный и водный слой разделяют. Водный слой дважды промывают эфиром, эфирный слой отбрасывают. Воду удаляют в вакууме, остаток затирают с 10 мл гексана. Осадок отфильтровывают, сушат в вакууме. Выход 0,70 г (67%). Rf 0,38 (1). Tпл=171-173°C. 'Н-ЯМР спектр (DMSO-dб), δ, м.д.: 2,26-2,37 (м, 4H, α,β-CH2-Suc), 2,70 (с,
ЗН, -0-CH3), 2,76-2,87 (м, 2H, β-CH2-His), 4,33-4,45 (м, IH, α-CH2-His), 6,78 (с, IH, 4-CH-Im), 7,93 (с, IH, 2-CH-Im), 8,25 (д, J=7Гц, NН-амид.). [α]D 20=+l l,92° (С 0,57, вода).
По аналогичным типовым методикам получают также новые соединения общей формулы (I), приведенные в таблице 2.
Таблица 2 Строение и характеристики соединений общей формулы (I)
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000026_0001
Тесты на биологическую активность
Пример 14
Влияние соединений общей формулы I на аллергические реакции немедленного типа (тест индуцированной овальбумином (OA) дегрануляции базофилов крови иммунизированной морской свинки iп vitrо
Выделение лейкоцитов из крови морской свинки осуществляли по методу Фримеля [Иммунологические методы/Под ред. Г.Фримеля/ M., Медицина, 1987, cтp.222 в нашей модификации].
Для постановки теста использовали морских свинок обоего пола массой 600-800 г. Животных иммунизировали однократно смесью овальбумина 10 мкг и
100 мг гидроокиси алюминия на животное по Апdеrssоп [Апdеrsоп P. Апtigеп- iпduсеd brопсhiаl апарhulахis iп асtivеlу sепsitizеd geiпea-pigs.//Allergy. 1980. VoI.
35. P.63-71].
Под эфирным наркозом из сердца морской свинки отбирали 15 мл крови. Для выделения базофилов в составе лейкоцитарной взвеси использовали двойное осаждение клеток - посредством ЭДТА и с помощью цитрат-содержащей осаждающей жидкости.
Кровь смешивали с 5% раствором ЭДTA-Na2 2H2O ("Sigmа") в соотношении 9:1 и через 30 мин мягко центрифугировали (12 мин при 80 g). Надосадочную жидкость собирали и центрифугировали 15 мин при 500 g.
К оставшимся клеткам крови добавляли цитратсодержащую осаждающую жидкость (3) в пропорции 3:10 (термостатируется при 370C в течение 30 мин)
Обогащенную лейкоцитами надосадочную фракцию центрифугировали 7 мин при
100 g. К осадку лейкоцитов добавляли 0,85% раствор NaCl и концентрацию клеток доводили до 30x10 /мкл.
Постановка теста дегрануляции базофилов iп vitrо [Справочник по клиническим лабораторным методам исследования/Под ред. Е.А.Кост/ M., Медицина, 1975, стр. 130].
Для постановки теста в центрифужную пробирку (используется по 3 пробирки на каждую пробу) помещали 300 мкл клеточной взвеси, затем добавляли 300 мкл солевого раствора исследуемого соединения (или солевого раствора в контроле спонтанной и максимальной дегрануляции) и преинкубировали при 370C в течение 15 мин, затем добавляли по 300 мкл 1% солевого раствора OA в каждую пробирку (в контроль спонтанной дегрануляции добавляли солевой раствор в таком же количестве) и еще раз преинкубировали при 370C в течение 10 мин. Рабочая концентрация лейкоцитов составляет при этом 104/мкл. Из каждой пробирки отбирали пробы (100 мкл) в отдельные пробирки для оценки полной дегрануляции базофилов, а к оставшимся клеткам добавляли охлажденный солевой раствор (по 5 мл в каждую пробирку) для остановки реакции дегрануляции, затем центрифугировали 7 мин при 100 g, а из осадка готовили препараты для микроскопирования. Фиксацию и окраску препаратов проводили по методу Sеdеr еt аЦSеdеr R.А. еt аl. Моusе sрlепiс апd bопе mаrrоw сеll рорulаtiопs thаt ехрrеss high - аffmitу Fсε rесерtоrs апd рrоduсе iпterleukiп-4 аrе highlу епriсhеd iп bаsорhils.// Рrос.Nаtl.Асаd.USА, 1991, V.88, P.2835-2839].
Для выявления специфической зернистости базофилов использовали краситель 0,5% альциановый синий (рН 1,0), ядра докрашивали сафранином (0,1% раствор в 1% уксусной кислоте). Препараты использовали для оценки суммарного торможения дегрануляции. Торможение суммарной дегрануляции (ТГ) (%) рассчитывали по формуле: тг Jmax - экcпep.) χ l 00 (%) > гдe (тах-спонт.) mах - % дегранулированных базофилов при максимальной дегрануляции (OA) спонт. - % дегранулированных базофилов при спонтанной дегрануляции (контроль) экспер. - % дегранулированных базофилов после воздействия исследуемого соединения.
Оценка полной дегрануляции базофилов
Отобранные после постановки теста дегрануляции базофилов пробы (по 100 мкл) помещали в пробирки с красителем (0,5% альциановый синий, рН 1,0) в соотношении 1:1. Окрашивание производили при комнатной температуре не менее
50 мин. Подсчет количества окрашенных базофилов проводили с использованием камеры Фукса-Розенталя. Торможение полной дегрануляции (ТПД) базофилов рассчитывали по формуле:
TПД(%)=1 - [(M ср (к) - M ср (эксп.)] / [M ср (к) - M ср (OA)] х 100, где M ср (к) — cpeднee(пo 3-м пробам) количество базофилов в тесте спонтанной дегрануляции ;
M ср (OA) - среднее (по 3-м пробам) количество базофилов в тесте максимальной антиген-индуцированной дегрануляции;
M ср (эксп) - среднее (по 3-м пробам) количество базофилов в тесте дегрануляции после инкубации с исследуемым соединением.
Таблица 3
Торможение ОА-индуцированной дегрануляции базофилов крови иммунизированных морских свинок iп vitrо под воздействием соединений общей формулы I
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
(* - P < 0,001)
Данные таблицы 3 показывают, что по сравнению с глутарилгистамином соединение (IV) оказывает выраженное антианафилактическое действие, проявляющееся практически 100% торможением дегрануляции в тесте полной ОА-индуцированной дегрануляции базофилов крови активно иммунизированных морских свинок (реакция анафилаксии iп vitrо в безкальциевой среде). Значительный антианафилактический эффект соединения IV проявляется и в уменьшении количества дегранулированных клеток, особенно выраженном в концентрации 10"5 M (отсутствие дегранулированных клеток). Пример 15
Изучение влияния соединений общей формулы I на системную анафилаксию iп vivо
Использовали модель бронхоспазма у ненаркотизированных активно сенсибилизированных морских свинок с аэрозольным воздействием овальбумина в качестве антигена [Ковалева В. Л. "Методические указания по изучению бронхолитических, муколитических и противовоспалительных сред ств. //Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва. 2000. c.242-250]. Морских свинок сенсибилизировали овальбумином по методу Апdеrssоп
[Апdеrsоп P. Апtigеп-iпduсеd brопсhiаl апарhulахis iп асtivеlу sепsitizеd gеiпеа- pigs.//Allergy. 1980. VoI. 35. P. 63-71] и через 1-2 месяца после сенсибилизации индуцировали бронхоспазм аэрозольным введением разрешающей дозы овальбумина (3 мг/кг в 1 мл физ. раствора). В опытных группах морским свинкам в течение трех дней внутрижелудочно с помощью зонда вводили исследуемые соединения в дозах Ю мкг/кг, 50 мкг/кг и 150 мкг/кг. В другой серии экспериментов, исследуемые соединения в дозе 50 мкг/кг (в 1 мл физ. раствора) вводили ингаляционно (с помощью небуляйзера) также в течение трех дней 1 раз в сутки. Контрольной группе вводили физ. раствор. Через 1 час после последнего введения веществ ингалировали с помощью небулайзера овальбумин и оценивали длительность (в секундах) и интенсивность бронхоспастической реакции животных.
Таблица 4
Торможение системной анафилактической реакции морских свинок при ингаляционном введении соединения IV в дозе 50 мкг/кг
Figure imgf000030_0001
Таблица 5
Торможение системной анафилактической реакции морских свинок при внутрижелуд очном введении соединения ГV в дозах 10 и 150 мкг/кг (М±m)
Figure imgf000031_0001
* - P < 0,001
Результаты экспериментов, представленные в таблицах 4 и 5, показывают, что соединение IV при внутрижелудочном введении в дозах 10 и 150 мкг/кг и ингаляционном введении в дозе 50 мкг/кг проявило антианафилактическую активность. Ингаляционное введение вещества в дозе 50 мкг/кг блокировало развитие острой фазы бронхоконстрикторной реакции, которая, вызывая удушье, является причиной гибели животных. При внутрижелудочном введении соединения IV в дозах 10 мкг/кг и 150 мкг/кг был выявлен значительный протективный эффект в отношении антиген-индуцированного бронхоспазма.
Таким образом, соединение IV проявляет значительный протективный эффект в отношении системной анафилактической реакции iп vivо.
Пример 16 Противоаллергическое действие соединений общей формулы I на модели аллергического ринита у морских свинок Использована модель аллергического ринита у морских свинок. Морских свинок иммунизировали по определенной схеме в течение 1,5-2-x месяцев (Нutsоп P.A., Сhurсh М.К. еt аl. 1988): вначале животных иммунизировали внутрибрюшинным введением овальбумина в дозе Ю мг/кг с 7-дневным интервалом (дважды), затем свинкам ингалировали с помощью небуляйзерной техники (Раri) раствор овальбумина в возрастающей концентрации, начиная с 0,1% до 1% с интервалом в 4 дня между ингаляциями. Последнюю дозу овальбумина вводили в назальные ходы с помощью микропипетки. Через 24 часа после последнего введения овальбумина производили забор назального смыва (через систему специальных трубочек) и изменения в слизистой носа оценивали с помощью комплекса методов: гистологических и цитологических. Исследуемые соединения (0,1% раствор) вводили ежедневно в виде ингаляций с помощью небуляйзерной техники в течение 6 дней, на 6-й день введения вызывали провокацию антигеном (OA). Назальный смыв получали через сутки после провокации.
Таблица 6
Влияние соединения IV на цитоз (абсолютное количество клеток в 1 мкл) в назальном смыве
Figure imgf000032_0001
* - отличие от интактного контроля; ° - отличие от модели (° - P< 0,05; * - P < 0,01; ** - P< 0,001)
Таблица 7
Влияние соединения IV на показатели цитограммы (%) назального смыва морских свинок
Figure imgf000032_0002
* - отличие от интактного контроля; ° - отличие от модели (ринит) (° - P<0,05; **, oo - P<0,01; ***, °°° - P<0,001) Таблица 8
Влияние соединения ГV на абсолютное количество клеточных субпопуляций назального смыва морских свинок (в 1 мкл)
Figure imgf000033_0001
Примечание: * - отличие от интактного контроля; ° - отличие от модели (* - P<0,05; **,°° - P<0,01; *** -P<0,001)
Из данных таблиц 5-7 следует, что в условиях моделирования аллергического ринита соединение IV значительно подавляет эозинофильное воспаление. Это подтверждается снижением до нормы абсолютного и относительного количества эозинофилов, а также существенным снижением цитоза в назальном смыве.
Пример 17
Противоаллергическая активность соединений общей формулы I на модели аллергического воспаления легких у морских свинок
Использована модель аллергического воспаления легких у морских свинок.
Иммунизация животных аналогична той, которая описана в примере 7.
Через 24 часа после последнего введения овальбумина производили забор бронхоальвеолярного смыва (через канюлю, вставленную в трахею) и изменения в слизистой бронхов оценивали с помощью комплекса методов: гистологических и цитологических.
Исследуемые соединения (0,1% р-р) вводили ежедневно в виде ингаляций с помощью небулайзерной техники в течение 6 дней, на 6-й день введения вызывали провокацию антигеном (OA). Таблица 9
Влияние соединения ГV на цитоз (абсолютное количество клеток в lмкл) в бронхоальвеолярном смыве
Figure imgf000034_0001
* P<0,01 - отличие от интактного контроля
Таблица 10
Влияние соединения ГV на абсолютное количество клеточных субпопуляций бронхоальвеолярного смыва морских свинок (в 1 мкл)
* - отличие от интактного контроля; °- отличие от модели (* , ° - P<0,05; ** - P<0,01)
Из данных таблиц 9 и 10 следует, что соединение IV в условиях модели аллергического воспаления легких существенно ингибирует воспалительный процесс, что проявляется уменьшением цитоза, снижением содержания ключевой клетки аллергического воспаления - эозинофилов, резким снижением нейтрофилов, а также уменьшением числа лимфоцитов. Пример 18
Изучение противовоспалительного действия соединений общей формулы I на модели воспаления легких у крыс, индуцированного сефадексом Модель сефадекс-индуцированного (6-дневного) воспаления легких у крыс В опытах были использованы крысы-самцы породы Вистар с массой тела
270-300 г.
Воспаление в легких индуцировали однократным ингаляционным введением сефадекса A-25 (гидрофильного порошка с размерами частиц от 20 до 80 мкм) в дозе 5 мг/кг с помощью дозирующего устройства, являющегося лабораторным аналогом ингалятора "Циклохалера" (НИИ пульмонологии РФ).
Методика ингаляционного введения сефадекса и фармакологических веществ
Крысам с помощью оригинального дозирующего устройства для ингаляционного введения сухих порошков, под эфирным наркозом вводили сефадекс A-25 в дозе 5 мг на 1 кг массы тела. Крысы Вистар после введения сефадекса A-25 быстро выходили из наркоза и внешне каких-либо особенностей в поведении, характере дыхания у них не отмечалось. Вещества в виде сухого порошка вводили ингаляционно в дозе 500 мкг/кг через 1 час после введения сефадекса, затем в течение 5 дней подряд ежедневно 1 раз в день в одни и те же утренние часы. Контроль представлен 2 группами: группой интактных животных, группой крыс, которым ингаляционно однократно ввели сефадекс.
Результаты терапевтического действия фармакологических веществ на развитие воспалительного процесса в легких оценивали через 6 суток после аэрозольного воздействия сефадекса с помощью морфологических и морфометрических показателей (объемная плотность эмфиземы и альвеолита). Методы, использованные в работе Гистологические
Проводили гистологическое исследование легких, окрашенных гематоксилином и эозином. Морфометрические
Готовили гистологические срезы легких толщиной 4-5 мкм, в которых подсчитывали число нейтрофилов в межальвеолярных перегородках, а также оценивали объемную плотность альвеолита и эмфиземы с помощью сетки Автандилова [Автандилов Г.Г., Введение в количественную патологическую мopфoлoгию.//M.: Медицина. 1980. с. 203]. Также проводили морфометрическое исследование лимфоидной ткани легких. С этой целью макропрепараты легких фиксировали по методу Веiпепstосk еt аl [Вiепепstосk J., Jоhпsоп N., Реrеу D.Y.Е. Вrопсhiаl lуmрhоid tissuе 1. Моrрhоlоgiс characteristics//Lab. Iпvеst. 1973. v.28 р.693-
698.] Легкие с трахеей извлекали из грудной полости, и макропрепарат помещали в 2% водный раствор уксусной кислоты. Через 18-24 часа трахею, главный и долевые бронхи рассекали; методом точечного счета под лупой (Ув.7) проводили морфометрическую оценку объемной плотности лимфоидной ткани, ассоциированной с бронхами. Методом точечного счета определяли объемную плотность альвеолита и эмфиземы.
Цитологические
Бронхоальвеолярный смыв у крыс и морских свинок получали под гексеналовым наркозом путем двукратного промывания легких через трахею 10 мл физиологического раствора. Жизнеспособность клеток определяли в тесте с трипановым синим. В жидкости бронхоальвеолярного смыва (БАС) с помощью камеры Горяева определяли - абсолютное число клеток в 1 мл (цитоз). В мазках из осадка жидкости БАС, полученного с помощью центрифугирования при 200 g в течение 10 минут и затем окрашенных по Романовскому-Гимзе, подсчитывали эндопульмональную цитограмму (в процентах) [Авцын A.П., Лукомский Г.И.,
Романова Л.К. и соавт. Эндопульмональная цитoгpaммa.//Coв. мед. 1982. N°7. c.8-14].
Результаты исследований обработаны методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента.
Таблица 11
Показатели цитоза бронхоальвеолярного смыва крыс Вистар после аэрозольного воздействия сефадекса A-25 и лечения фармакологическими агентами (М±m)
Цитоз Абсолютное количество клеток в 1 мкл БАЛ
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000037_0001
Примечание: * - отличие от интактного контроля
Таблица 12
Показатели клеточного состава бронхоальвеолярного смыва крыс Вистар после аэрозольного воздействия сефадекса A-25 и лечения исследуемого соединения (M + m)
Цитоз Абсолютное количество клеток различных субпопуляций в 1 мкл БАЛ
Figure imgf000037_0002
Примечание: * - отличие от интактного контроля (P<0,05)
Гистологическое исследование легких
Соединение IV вызвало отчетливое противовоспалительное действие: распространенность альвеолита была достоверно ниже по сравнению с модельной группой животных; эмфизема практически не выявлялась; не отмечена инфильтрация нейтрофилами межальвеолярных перегородок. По уровню цитоза и количеству нейтрофилов в БАЛ воспалительный процесс также значительно менее выражен, чем у животных, получавших сефадекс в течение 5 дней.
Таким образом, весь комплекс использованных экспериментальных моделей свидетельствует о значительной противоаллергической, антианафилактической и противовоспалительной активности соединений общей формулы I, проявляемой как в тестах iп vitrо, так и при моделировании аллергической и воспалительной патологии iп vivо.
Пример 19
Исследование гиполипидемического действия соединений общей формулы (I) модели гиперхолестеринемии крыс
Исследование проводили на крысах-самцах Вистар массой 200+20 г. Гиперлипидемию вызывали пероральным введением холестериновой нагрузки — масляной суспензии холестерина: оливковое масло (Асоrsа, Испания) - 5 мл/кг веса животных; холестерин (Sigmа, USA) - 1 г/кг веса; холат натрия (Sigmа, USA) - 100 мг/кг веса.
В качестве препарата сравнения использовали препарат из группы статинов - «мeвaкop» (ловастатин) фирмы Меrсk Shаrр & Dоhп в дозе 40 мг/кг. Холестериновую суспензию вводили утром ежедневно в течение 10 дней. Исследуемые соединения (в дозе 500 мкг/кг) и препарат сравнения (в дозе 40 мг/кг) вводили животным вместе с холестериновой суспензией в течение 10 дней. Все животные получали стандартный брикетированный корм. Животные были разбиты на следующие группы: «Koнтpoль» - интактные животные (n=6);
«Xoлecтepин» — крысы, получавшие реr оs холестериновую нагрузку (n=10);
«Лoвacтaтин» - крысы, получавшие реr оs холестериновую нагрузку и ловастатин (n=10);
«coeдинeниe ГV» - крысы, получавшие реr оs холестериновую нагрузку и исследуемое соединение IV (n=10). Образца крови брали на 5, 8, 10 день эксперимента.
Статистическую обработку гиполипидемического действия исследуемых веществ проводили по отношению к группе «xoлecтepин» (таблица 13).
Таблица 13
Содержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и печени крыс, получавших в течение 10 дней реr оs оливковое масло, холестерин и соединение ГV одновременно с холестериновой нагрузкой
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
* - p<0,l ** - p<0,05
*** -p<o,oi
Введение соединения IV в дозе 500 мкг/кг приводило к достоверному снижению общего холестерина сыворотки на 19,5%, печени — на 22,7%, холестерина ЛНП на 29,8%, триглицеридов печени на 19%. Соединение глутарилгистамин, снижая содержание общего холестерина лишь на 9%, оказывал влияние только на JШНП и ЛПОНП (липопротеинов низкой и очень низкой плотности), что показано в публикации международной заявки WO 99/01103, и, очевидно, менее эффективен, чем соединение IV, в аналогичном биологическом эксперименте.
Ниже приведены результаты исследований других заявленных соединений. Экспериментальные группы включали:
1) «Xoлecтepин» - получавшие в течение 10 дней реr оs масляную суспензию холестерина;
2) «coeдинeниe ГV» - крысы, получавшие реr оs масляную суспензию холестерина и исследуемое соединение IV; 3) «coeдинeниe IV - Шa» - крысы, получавшие реr оs масляную суспензию холестерина и исследуемую моно-натриевую соль соединения ГV;
4) «coeдинeниe ГV - 2Na» - крысы, получавшие реr оs масляную суспензию холестерина и исследуемую ди-натриевую соль соединения ГV;
5) «coeдинeниe V - Шa» — крысы, получавшие реr оs масляную суспензию холестерина и исследуемую моно-натриевую соль соединения V;
6) ((соединение III - Шa» - крысы, получавшие реr оs масляную суспензию холестерина и исследуемую моно-натриевую соль соединения III;
7) ((соединение II - lNa» - крысы, получавшие реr оs масляную суспензию холестерина и исследуемую моно-натриевую соль соединения II;
8) "Sim" - крысы, получавшие реr оs масляную суспензию холестерина и симвастатина;
9) контроль - интактные крысы до начала эксперимента.
На 10-й день опыта образцы крови брали после декапитации животных. Перед декапитацией животные голодали 12 часов.
В сыворотке крови измеряли содержание общего холестерина, триглицеридов, холестерина липопротеидов высокой плотности (JIПВП). Холестерин липопротеидов низкой и очень низкой плотности рассчитывали по разности общего холестерина и холестерина ЛВП. Содержание общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови определяли ферментативным методом.
Определение содержания холестерина в липопротеидах высокой плотности (α-ЛП) проводили методом осаждения ЛНП и ЛОНП фосфорновольфрамовой кислотой и ионами магния. Статистическая обработка
Данные в таблицах представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверность различий между группами «xoлecтepин» и ((препарат... » оценивали по двухвыборочному t-тесту Стьюдента. Вероятность ошибки (р) указана в графах таблицы. Данные о влиянии исследуемых соединений на содержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови крыс, получавших холестериновую нагрузку, представлены в таблицах 14-21. Таблица 14
Экспериментальная гиперхолестеринемия
Figure imgf000041_0001
Десятидневное введение крысам масляной суспензии холестерина привело к достоверному увеличению содержания общего холестерина в сыворотке в 2,3 раза, триглицеридов в 1,9 раза. При развитии индуцированной гиперлипидемии холестерин ЛПВП снижался на 15%. Холестерин ЛПНП+ЛПОНП возрастал в 5 раз. Триглицериды ЛНП+ЛОНП возрастали в 2,3 раза.
Таблица 15
Содержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс на 5-й день эксперимента
Figure imgf000041_0002
Триглицериды 88,3+4,8
110,8+7,1 120,б±8,9 106,6+6,2 108,9+6,9
Сыворотка p=0,013
Таблица 16
Содержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс на
8-й день эксперимента
Figure imgf000042_0001
Таблица 17
Содержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс на 10-й день эксперимента
Figure imgf000042_0002
Figure imgf000043_0001
Таблица 18
Развитие гиперхолестеринемии у подопытных животных в группе «Xoлecтepин»
Figure imgf000043_0002
Десятидневное введение крысам масляной суспензии холестерина привело к достоверному увеличению содержания общего холестерина в сыворотке в 1,7 раза, триглицеридов в 1,6 раза (таблица 18). Холестерин ЛПВП снижался на 28% с исходных 66,7 до 48 мг/100 мл при развитии индуцированной гиперлипидемии. Холестерин ЛПНП+ЛПОНП возрастал в 4,4 раза с 22,5 до 99 мг/100 мл.
Таблица 19
Содержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс, на 5-й день эксперимента
Figure imgf000044_0001
Таблица 20
Содержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс, на 8-й день эксперимента
Figure imgf000045_0001
Таблица 21
Содержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс, на
10-й день эксперимента
Figure imgf000045_0002
Figure imgf000046_0001
Введение животным моно-натриевой соли соединения III достоверно снижало общий холестерин (XC) сыворотки на 29% и холестерин фракций ЛПОНП+ЛIШП — на 40%, но не изменяло уровень XC антиатерогенньrх ЛПВП и общих триглицеридов сыворотки. Полученные результаты свидетельствуют о том, что моно- и ди-натриевые соли превосходили соединение IV по динамике действия на общий холестерин сыворотки и холестерин ЛПНП + ЛПОНП и другие показатели липидного обмена. В то время как к 10-му дню опыта достоверное и сравнимое снижение упомянутых показателей происходило под действием всех упомянутых выше соединений и препарата сравнения "Зокор" (симвастатин), соли соединения IV начинали действовать на более ранних сроках эксперимента (на 5 и 8 день). Обе натриевые соли соединения IV повышали ЛПВП уже к 5 дню эксперимента, в то время как соединение IV повышало этот показатель лишь к 8 дню. Препарат сравнения симвастатин не оказывал влияния на холестерин ЛПВП. Кроме того, ди-натриевая соль соединения IV снижала уровень общих триглицеридов сыворотки на 5 и 10 дни эксперимента.
Отличительным свойством моно-натриевой соли соединения V явилась способность снижать уровень общих триглицеридов сыворотки, в то время как снижение уровня общего холестерина, XC ЛПОНП и повышение содержания ЛПВП было ниже, чем у моно-натриевой соли соединения III и моно-натриевой соли соединения IV.
Таким образом, соли соединений II, III, IV и V обладают повышенной гиполипидемической активностью, по сравнению с активностью соединений, описанных в публикации международной заявки WO 99/01103, и соединений, предложенных в настоящем изобретении, включающей способность снижать уровень триглицеридов, XC холестерин сыворотки, в том числе в ЛПНП и повышать холестерин ЛВП.
Пример 19 Исследование гиполишiдемическоrо действия соединений общей формулы (I) на модели «эндoгeннoй» гиперхолестеринемии морских свинок Исследование проводили на морских свинках самцах (порода Агути), исходной массой 304±25 г. Продолжительность эксперимента 31 день. Контрольная группа, 6 свинок - интактные животные. Изучаемые соединения вводили с первого дня эксперимента (с первого дня введения жировой нагрузки).
Животные экспериментальных групп ежедневно на протяжении 31 дня получали реr оs исследуемое соединение и жировую нагрузку. Исследуемое соединение в указанных ниже дозах вводили в виде водного раствора (0,5 мл на животное); жировую нагрузку - смесь свиной жир/предварительно прогретое кукурузное масло, 4:1 по объему, из расчета 5 мл/кг веса через 0,5 часа после введения исследуемого вещества. Экспериментальные группы:
1) «кoнтpoль» - интактные животные;
2) «жиp» - животные, получавшие только жировую нагрузку; 3) «coeдинeниe ГV» - животные, получавшие жировую нагрузку + соединение ГV в дозе 500 мкг/кг веса;
4) «coeдинeниe V» - животные, получавшие жировую нагрузку + соединение V в дозе 500 мкг/кг.
Данные о содержании холестерина и триглицеридов в сыворотке крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения, представлены в таблицах 22-25.
Таблица 22
Содержание общего холестерина в сыворотке крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000048_0001
Статистическая обработка проводилась с помощью однофакторного дисперсионного анализа.
Таблица 23
Содержание общих триглицеридов в сыворотке крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения
Figure imgf000048_0002
Таблица 24
Содержание общего холестерина на 31-й день во фракциях липопротеидов сыворотки крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения
Figure imgf000048_0003
Таблица 25
Содержание общих триглицеридов на 31-й день во фракциях липопротеидов сыворотки крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения
Figure imgf000049_0002
Исследуемые соединения IV и V значительно снижали уровень общего холестерина только к 31 дню эксперимента на 33,9 и 37,8% соответственно. При этом они достоверно снижали холестерин ЛПНП на 37,7 и 38%.
Figure imgf000049_0001
ДНИ
Фиг.1. Изменение общего холестерина сыворотки под влиянием жировой нагрузки и различных доз (50-1500 мкг/кг) соединения IV. Вертикальными тонкими линиями указано стандартное отклонение от среднего значения. Преимуществом заявляемых соединений, в частности соединения IV, является широкий диапазон действующих доз, что обеспечивает широту его терапевтического действия. Так, например, соединение ГV практически одинаково эффективно снижало содержание общего холестерина в течение 20 дней в интервале доз от 50 до 1500 мкг/кг, отличающихся в 30 раз. Таким образом, заявляемые соединения, соответствующие общей формуле
(I), обладают значительной гиполипидемической активностью, существенно улучшая показатели липидного обмена в сыворотке крови и в печени.
Пример 20 Исследование противовоспалительного действия соединений общей формулы (I) на модели каррагенинового отека лапы крысы
Эксперименты выполнены на белых аутбредных крысах самцах массой 250 г. Общее число животных в эксперименте 12.
Модель каррагенин-индуцированного отека по методу Wiпtеr еt аl. (Wiпtеr еt аl. Studiеs оf thе mеdiаtоrs оf thе асutе iпflаmmаtоrу rеsропsе iпduсеd iп rаts iп diffеrепt sitеs bу саrrаgеепап апd tuфentine.//J.Phamacol. 1971. V.104. P.15-29). В правую лапу крысы субплантарно вводили 1% раствор каррагенина (SERVA) 0,1 мл. Животные рассаживались в индивидуальные камеры. Гель (1%), содержащий исследуемое вещество, наносили на лапу 3 раза: непосредственно после введения каррагенина, через 1 и 2 часа. Измерение объема лап проводили помощью плетизмометра (Ugо Ваsilе) через 4 часа после введения каррагенина. Эффект терапевтического воздействия геля оценивали по степени угнетения воспалительной реакции в сравнении с интактной левой лапой данного животного и реакцией лап крыс контрольной (нелеченой) группы. Торможение воспалительной реакции, выраженное в процентах, рассчитывали по формуле. разность х 100 Прирост объема = объем лев. лапы прирост объема (oпыт) х 100
Торможение = 100- прирост oбъeмa(кoιпpoль)
Исследуемые соединения VI и XIII в виде 1% геля вызвали торможение отека на 44% и 40%, соответственно, а препарат сравнения диклофенак (1% гель) - 62%. Примеры лекарственных форм Пример 21
A. Таблетированная форма
Таблетированную форму получают, используя приведенные ниже ингредиенты:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 1 - 150 мг
Крахмал картофельный 20-50 мг
Магния стеарат 3 мг
Аэросил 1 мг
Лактоза до 300 мг
Компоненты смешивают и прессуют для образования таблеток весом 300 мг каждая.
Б. Суппозитории Пример состава суппозитория:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 1-100 мг
Масло какао количество, необходимое для получения суппозитория. При необходимости возможно изготовление ректальных, вагинальных и уретральных суппозиториев с соответствующими наполнителями.
B. Мази
Пример состава мази:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 1-500 мг
Вазелин Ю г
Мази изготавливают по общеизвестной технологии. Г. Гели
Пример состава геля: Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его 1-500 мг фармацевтически приемлемая соль карбопол 200 мг бензшiовый спирт 20 мг этиловый спирт . 300 мг вода до 10 г
Д. Сухой порошок для ингаляций
Пример состава порошка:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 20-200 мг лактоза до 1 г
Порошок помещают в специальное устройство (контейнер) или в желатиновую капсулу. E. Назальный спрей
Пример состава спрея:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 1 ,5- 150 мг очищенная вода до 15 мл
E. Глазные капли
Пример состава капель:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 0,5-50 мг консервант 10 мг очищенная вода до 5 мл
E. Раствор для инъекций Пример состава раствора для инъекций:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 0,2-20 мг вода для инъекций 2 мл

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. N-ацильные производные аминокислот общей формулы (I)
HOOC-(CH2)n-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2 Ri где п равно 2 или 3; и Ri представляет
Figure imgf000053_0001
R2 = H5 -CH35 -C2H5 и их фармацевтически приемлемые соли, при условии, что соединение общей формулы (I) не является сукцинил-L- триптофаном, сукцинил-D-триптофаном и cyкцинил-D5L-тpиптoфaнoм и его дикалиевой соль, Nα-cyкцинил-L-тpиптoфaнoм метиловым эфиром, Nα-глyтapил-L- гистидином метиловым эфиром, Nα-глyтapил-L-тpиптoфaнoм метиловым эфиром.
2. Соединение по п.l, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой моно- или динатриевую соль.
3. Способ получения N-ацильных производных аминокислот общей формулы (I)
HOOC-(CH2)n-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2
Ri где п равно 2 или 3 ; и Ri представляет
Figure imgf000053_0002
или их фармацевтически приемлемых солей, включающий прибавление ангидрида глутаровой или янтарной кислоты в виде твердого вещества к водному раствору аминокислоты общей формулы:
Figure imgf000054_0001
или ее соли, где R1 представляет
N^NH и, необязательно, превращение целевого продукта в его соль.
4. Способ получения N-ацильных производных аминокислот общей формулы I
HOOC-(CH2)II-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2
Ri где п равно 2 или-3; и R1 представляет
Figure imgf000054_0002
или их солей, включающий проведение реакции в двухфазной системе ангидрида глутаровой или янтарной кислоты в несмешивающемся с водой органическом растворителе с водным или водно-органическим раствором аминокислоты общей формулы:
Figure imgf000054_0003
или ее соли, или
Figure imgf000054_0004
гдеR2 представляет -CH3, -C2H5, аR1 представляет
Figure imgf000055_0001
и, необязательно, превращение целевого продукта в его соль.
5. Фармацевтическая композиция, обладающая противоаллергической, антианафилактической, противовоспалительной и гиполипидемической активностью, включающая N-ацильные производные аминокислот общей формулы (I)
HOOC-(CH2)n-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2
Ri где правно 2 или 3; и R1 представляет
Figure imgf000055_0002
или их фармацевтически приемлемые соли в эффективном количестве и фармацевтически приемлемые добавки.
6. Применение N-ацильных производных аминокислот общей формулы (I)
HOOC-(CH2)n-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2
Ri где п равно 2 или 3; и R1 представляет
Figure imgf000055_0003
или их фармацевтически приемлемых солей для получения лекарственного средства, обладающего противоаллергической, антианафилактической, противовоспалительной и гиполипидемической активностью.
7. Применение N-ацильных производных аминокислот по п.6 для получения лекарственного средства для снижения антигензависимой секреции гистамина, дегрануляции базофилов, а также регулирования содержания эозинофилов, нейтрофилов и лимфоцитов.
8. Применение N-ацильньгх производных аминокислот по п.б для получения лекарственного средства для облегчения симптомов бронхиальной астмы, аллергического ринита, поллинозов, сезонного и круглогодичного ринита, аллергического воспаления легких, атопического дерматита, псориаза, крапивницы, аллергических (в том числе анафилактических) реакций на укусы насекомых и лекарственные препараты, холодовой аллергии, аллергического конъюктивита.
9. Применение N-ацильных производных аминокислот общей формулы (I)
HOOC-(CH2)n-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2 R1 где п равно 2 или 3; и R1 представляет
Figure imgf000056_0001
или их фармацевтически приемлемых солей, при условии, что соединение общей формулы (I) не является дикалиевой солью cyкцинил-D5L-тpиптoфaнa для получения лекарственного средства для облегчения симптомов атеросклероза, ожирения, ишемической болезни сердца и головного мозга, инфаркта миокарда, инсульта.
10. Лекарственное средство, обладающее противоаллергической, антианафилактической, противовоспалительной и гиполипидемической активностью, включающее N-ацильные производные аминокислот общей формулы (I)
HOOC-(CH2)n-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2 Rl где п равно 2 или 3 ; и R1 представляет
Figure imgf000057_0001
или их фармацевтически приемлемые соли.
11. Способ лечения аллергических, анафилактических заболеваний, в том числе заболеваний, сопровождающихся воспалением, гиперлипидемией, гиперхолистеринемией, включающий введение млекопитающему эффективного количества соединения общей формулы (I)
HOOC-(CH2)II-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2 Ri где п равно 2 или 3; и Ri представляет
Figure imgf000057_0002
или его фармацевтически приемлемой соли.
12. Способ по п.11 лечения бронхиальной астмы, аллергического ринита, поллинозов, сезонного и круглогодичного ринита, аллергического воспаления легких, атопического дерматита, псориаза, крапивницы, аллергических (в том числе анафилактических) реакций на укусы насекомых и лекарственные препараты, холодовой аллергии, аллергического конъюнктивита.
13. Способ лечения атеросклероза, ожирения, ишемической болезни сердца и головного мозга, инфаркта миокарда, инсульта, включающий введение млекопитающему эффективного количества соединения общей формулы (I)
HOOC-(CH2)n-CO-NH-CH-COOR2 (I)
CH2 Ri где п равно 2 или 3; и Ri представляет
Figure imgf000058_0001
или его фармацевтически приемлемой соли, при условии, что соединение общей формулы (I) не является дикалиевой солью cyкцинил-D,L-тpиптoфaнa.
PCT/RU2006/000311 2005-06-15 2006-06-15 Derives n-acyles d'acides amines, composition pharmaceutique et son utilisation en tant que produits anti-allergiques, anti-anaphylactiques, anti-inflammatoires ou hypolipidemiques WO2006135280A1 (fr)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP06757984.7A EP1905763B1 (en) 2005-06-15 2006-06-15 N-acylic aminoacid derivatives, method for the production thereof, pharmacological composition and the use in the form of anti-allergic, anti-inflammatory and hypolipidemic agents
KR1020087001210A KR101402855B1 (ko) 2005-06-15 2006-06-15 Ｎ-아실계 아미노산 유도체, 이의 생산방법, 약리학적조성물 및 항알러지제, 소염제 및 저지질혈제 형태에서의용도
US11/917,598 US8940780B2 (en) 2005-06-15 2006-06-15 N-acylic aminoacid derivatives, method for the production thereof, pharmacological composition and the use in the form anti-allergic, anti-inflammatory and hypolipidemic agents
CN2006800296822A CN101243053B (zh) 2005-06-15 2006-06-15 N-酰基氨基酸衍生物、其制备方法、药物组合物及其作为抗变应性、抗炎和降血脂药物的用途
CA2612324A CA2612324C (en) 2005-06-15 2006-06-15 N-acyl derivatives of amino acids, a process for preparation thereof, a pharmaceutical composition and use thereof as antiallergic, anti-inflammatory and hypolipidemic agents
JP2008516776A JP2008543830A (ja) 2005-06-15 2006-06-15 アミノ酸のｎ−アシル誘導体、その製法、薬理組成物および抗−アレルギー性、抗−炎症性および抗−脂血性薬剤としてのその使用
EA200800054A EA013057B1 (ru) 2005-06-15 2006-06-15 N-ацильные производные аминокислот, способ их получения, фармацевтическая композиция и применение в качестве противоаллергических, противовоспалительных и гиполипидемических средств
US12/764,515 US8318950B2 (en) 2005-06-15 2010-04-21 N-acyl amino acid derivatives, a method for the preparation thereof, a pharmaceutical composition and use thereof as anti-allergic, anti-inflammatory and hypolipidemic agents

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2005118635/04A RU2335495C2 (ru) 2005-06-15 2005-06-15 N-ацильные производные аминокислот, их фармацевтически приемлевые соли, фармацевтическая композиция и применение в качестве гиполипидемических средств
RU2005118635 2005-06-15

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US11/917,598 A-371-Of-International US8940780B2 (en) 2005-06-15 2006-06-15 N-acylic aminoacid derivatives, method for the production thereof, pharmacological composition and the use in the form anti-allergic, anti-inflammatory and hypolipidemic agents
US12/764,515 Division US8318950B2 (en) 2005-06-15 2010-04-21 N-acyl amino acid derivatives, a method for the preparation thereof, a pharmaceutical composition and use thereof as anti-allergic, anti-inflammatory and hypolipidemic agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006135280A1 true WO2006135280A1 (fr) 2006-12-21

Family

ID=37502176

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2006/000311 WO2006135280A1 (fr) 2005-06-15 2006-06-15 Derives n-acyles d'acides amines, composition pharmaceutique et son utilisation en tant que produits anti-allergiques, anti-anaphylactiques, anti-inflammatoires ou hypolipidemiques

Country Status (10)

Country Link
US (2) US8940780B2 (ru)
EP (1) EP1905763B1 (ru)
JP (2) JP2008543830A (ru)
KR (1) KR101402855B1 (ru)
CN (1) CN101243053B (ru)
CA (1) CA2612324C (ru)
EA (1) EA013057B1 (ru)
RU (1) RU2335495C2 (ru)
UA (1) UA94586C2 (ru)
WO (1) WO2006135280A1 (ru)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2010050516A1 (ja) * 2008-10-29 2012-03-29 株式会社カネカ Ｌ−アミノ酸の製造方法
CN103288741A (zh) * 2013-05-24 2013-09-11 华南农业大学 一种组胺半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用
CN104119277A (zh) * 2014-07-16 2014-10-29 华南农业大学 一种直接针对组胺的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用
US8912185B2 (en) 2008-03-19 2014-12-16 Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostyu “Pharmenterprises” Use of glutaric acid derivatives or the pharmaceutically acceptable salts thereof as anti-arrhythmic agents

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010064958A2 (ru) * 2008-12-01 2010-06-10 Закрытое Акционерное Общество "Мастерклон" Ингибиторы протеинкиназы с, обладающие противовоспалительным, противоаллергическим и противоастматическим действием
UA115431C2 (ru) * 2011-10-11 2017-11-10 Общєство С Огранічєнной Отвєтствєнностью "Валєнта-Інтєллєкт" Применение глутарилгистамина для лечения заболеваний дыхательных путей
CN102757388B (zh) * 2012-07-04 2015-05-20 四川百利药业有限责任公司 一种高纯度英加韦林的制备方法
RU2518314C2 (ru) * 2012-08-30 2014-06-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Способ и средство активации irf-3 для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых (+) phk-содержащими вирусами
JP6741572B2 (ja) * 2013-03-15 2020-08-19 モジュラー ジェネティクス， インコーポレイテッド アシルアミノ酸の生成
RU2665688C2 (ru) * 2013-04-12 2018-09-04 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Производные бисамидов дикарбоновых кислот, их применение, фармацевтическая композиция на их основе, способы их получения
JP2016530930A (ja) * 2013-08-05 2016-10-06 マンカインド コーポレイション 通気装置及び方法
RU2628800C2 (ru) * 2014-03-12 2017-08-22 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Амидные соединения, способы получения, применение в качестве средств для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых рнк-содержащими вирусами
CN104230833B (zh) * 2014-10-07 2016-01-20 张远强 含腈基的四氮唑乙酸类化合物、其制备方法及用途
US11371066B2 (en) 2015-07-13 2022-06-28 Modular Genetics, Inc. Generation of acyl alcohols
RU2665638C1 (ru) * 2017-05-24 2018-09-03 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Амидное соединение и его применение в качестве средства для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых рнк-содержащими вирусами
CN110031583B (zh) * 2018-12-29 2022-01-18 浙江工业大学 分离测定n-琥珀酰色氨酸对映异构体的液相色谱方法
EP3977990A4 (en) * 2019-05-24 2023-06-14 Stemdr Inc. COMPOSITION FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF ASTHMA, RHINITIS OR CONJUNCTIVITIS, COMPRISING AN N-ACYLAMINE ACID AS ACTIVE INGREDIENT
BR112021023536A2 (pt) * 2019-05-24 2022-02-01 Stemdr Inc Composição para prevenir ou tratar asma, rinite ou conjuntivite, compreendendo n-acilaminoácido como ingrediente ativo

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999001103A2 (fr) * 1997-07-04 1999-01-14 Vladimir Evgenievich Nebolsin Derives de peptides, sels de ces derives acceptables sur le plan pharmaceutique, procede de production de ces derives, utilisation de ces derniers et composition pharmaceutique
WO2003072124A1 (fr) * 2002-02-28 2003-09-04 Vladimir Evgenievich Nebolsin Methode d'induction de differentiation cellulaire

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5561110A (en) 1991-09-09 1996-10-01 Peptide Technology Limited Method for the treatment of the complications and pathology of diabetes

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999001103A2 (fr) * 1997-07-04 1999-01-14 Vladimir Evgenievich Nebolsin Derives de peptides, sels de ces derives acceptables sur le plan pharmaceutique, procede de production de ces derives, utilisation de ces derniers et composition pharmaceutique
WO2003072124A1 (fr) * 2002-02-28 2003-09-04 Vladimir Evgenievich Nebolsin Methode d'induction de differentiation cellulaire

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ADVANCED SYNTHESIS & CATALYSIS, vol. 345, no. 6+7, 2003, pages 783 - 789 *
DATABASE CAPLUS [online] RAIMONDI S. ET AL.: "Glutaryl acylase: One reaction enzymes or versatile enantioselective biocatalysts", XP003005512, retrieved from STN Database accession no. (2003:499950) *
GALENKO-YAROSHEVSKII P.A. ET AL: "Antiarrhythmic activity of befol, suphan, mexidol, and T3-146 in combination with some antiarrhythmics", BULLETIN OF EXPERIMENTAL BIOLOGY AND MEDICINE, vol. 125, no. 5, 1 May 1998 (1998-05-01), pages 483 - 486, XP008096955 *
GALENKO-YAROSHEVSKY P.A. ET AL.: "Protivoaritmicheskaya aktivnost befola, sulfana, meksidola i T3-146 v sochetanii s nekotorymi antiaritmikami", BJULLETEN EXPERIMENTALNOI BIOLOGII I MEDITSINY, vol. 125, no. 5, 1998, pages 544 - 547, XP008096952 *
JURSIC B.S. ET AL.: "Cyclodextrin assisted enantiomeric recognition of benzo[b]isoquinoline-1,3-dione derived amino acids", TETRAHEDRON, vol. 61, no. 4, 2005, pages 919 - 926, XP004695339 *
ROSENKRANZ H.J. ET AL.: "Synthese von Tuboflavin, 4-Athylcanthin-6-on und Canthin-6-on", JUSTUS LIEBIGS ANNALEN DER CHEMIE, vol. 691, 1966, pages 159 - 164, XP008074615 *
VOTANO J.R. ET AL.: "Inhibition of deoxyhemoglobin S polymerization by biaromatic peptides found to associate with the hemoglobin molecule at a preferred site", BIOCHEMISTRY, vol. 24, 1985, pages 1966 - 1970, XP003004991 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8912185B2 (en) 2008-03-19 2014-12-16 Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostyu “Pharmenterprises” Use of glutaric acid derivatives or the pharmaceutically acceptable salts thereof as anti-arrhythmic agents
JPWO2010050516A1 (ja) * 2008-10-29 2012-03-29 株式会社カネカ Ｌ−アミノ酸の製造方法
JP5744521B2 (ja) * 2008-10-29 2015-07-08 株式会社カネカ Ｌ−アミノ酸の製造方法
CN103288741A (zh) * 2013-05-24 2013-09-11 华南农业大学 一种组胺半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用
CN103288741B (zh) * 2013-05-24 2015-09-30 华南农业大学 一种组胺半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用
CN104119277A (zh) * 2014-07-16 2014-10-29 华南农业大学 一种直接针对组胺的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用
CN104119277B (zh) * 2014-07-16 2016-08-17 华南农业大学 一种直接针对组胺的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CA2612324C (en) 2014-12-30
US20100267962A1 (en) 2010-10-21
JP2008543830A (ja) 2008-12-04
KR20080039872A (ko) 2008-05-07
JP5836995B2 (ja) 2015-12-24
EA013057B1 (ru) 2010-02-26
RU2005118635A (ru) 2006-11-20
US8940780B2 (en) 2015-01-27
US8318950B2 (en) 2012-11-27
US20080319040A1 (en) 2008-12-25
EP1905763A4 (en) 2008-08-27
CN101243053B (zh) 2012-08-08
EP1905763B1 (en) 2019-05-08
RU2335495C2 (ru) 2008-10-10
CN101243053A (zh) 2008-08-13
KR101402855B1 (ko) 2014-06-03
JP2013151551A (ja) 2013-08-08
UA94586C2 (ru) 2011-05-25
EA200800054A1 (ru) 2008-06-30
CA2612324A1 (en) 2006-12-21
EP1905763A1 (en) 2008-04-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2006135280A1 (fr) Derives n-acyles d&#39;acides amines, composition pharmaceutique et son utilisation en tant que produits anti-allergiques, anti-anaphylactiques, anti-inflammatoires ou hypolipidemiques
EP3383377B1 (en) Compounds and methods for inhibiting production of trimethylamine
KR101742179B1 (ko) 3-아미노-1-프로판설폰산을 전달하기 위한 방법, 화합물, 조성물 및 비히클
UA70301C2 (ru) Производные пептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения, применение и фармацевтическая композиция
RU2238932C2 (ru) Нитратные соли и фармацевтическая композиция на их основе
WO2001064646A2 (en) Hydrazones and analogs as cholesterol lowering agents
EP4306517A1 (en) Triazole derivative, preparation method therefor, and application thereof
EP1856102B1 (en) Medicaments for alzheimer
CZ363198A3 (cs) Inhibitory produkce s-CD23 a sekrece TNF
KR101090850B1 (ko) Ｈｓｃ７０ 저해제로서의 이미다졸 유도체와 그 약학적 조성물
CA2582087A1 (en) Process for preparing amorphous atorvastatin hemi-calcium by dissolving the salt in an organic solvent which is a mixture of an alcohol and a ketone and/or an ester and removing the solvent
KR0135723B1 (ko) 신규한 에스큘레틴 유도체 및 약학 조성물
RU2378284C2 (ru) Способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты)
RU2406727C2 (ru) Фармацевтическая композиция, содержащая n-ацильные производные аминокислот, и их применение в качестве противоаллергических, антианафилактических и противовоспалительных средств
EP3522878B1 (en) Methods for inhibiting conversion of choline to trimethylamine (tma)
CA2470037C (en) Prodrugs to d-prolines
JPH03506029A (ja) ピラゾロ―ピロロ―ピリミジン―ジオン類
AU2019411556A1 (en) 2-Fluorinated bile acids for the treatment of neurodegenerative diseases
JP2003335680A (ja) Ａｃａｔ−１阻害剤
CN108276354B (zh) Tlr4/md2抑制剂及其在抗炎药物中的应用
CN117624015A (zh) 一种取代靛红-褪黑激素衍生物及其制备方法和应用
CN1060465C (zh) 一种抗过敏、抗哮喘和抗炎症的新药
JPS6253963A (ja) 肝疾患治療剤
NZ521857A (en) Watersoluble prodrugs of propofol

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200680029682.2

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WD Withdrawal of designations after international publication

Designated state(s): RU

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2612324

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/a/2007/016197

Country of ref document: MX

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2008516776

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 82/KOLNP/2008

Country of ref document: IN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2006757984

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200800054

Country of ref document: EA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1020087001210

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11917598

Country of ref document: US

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
WD Withdrawal of designations after international publication

Designated state(s): RU