WO2006097043A1

WO2006097043A1 - Extrait de bacopa monnieri et son procede de preparation et d'utilisation

Info

Publication number: WO2006097043A1
Application number: PCT/CN2006/000394
Authority: WO
Inventors: Mingfu Yang; Yunxiu Huang; Yuping Lei
Original assignee: Chengdu Wagott Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2005-03-15
Filing date: 2006-03-14
Publication date: 2006-09-21
Also published as: CN1833692B; CN1833692A

Description

一种假马齿苋提取物及其制备方法和用途所属技术领域

本发明涉及一种假马齿览提取物，具体地说，是以天然药材假马齿苋为原料的提取物，含有该提取物的制备方法和用途，属药物领域。

背景技术

假马齿苋为玄参科假马齿苋 Bacopa monninera的全草，是印度一种传统草药。具有清热解毒、消炎退肿之效，治疗赤目痢疾、目赤肿痛、皮肤红肿等，是印度有名的安神和增进记忆的药物。

目前，关于假马齿苋的报道有：杨消锋、宋纯清，天然产物研究中的人工产物，药学学报， ₁₉99， 34 (12) 公开了 "印度草药假马齿苋的醇提取物能明显改善小鼠的认知能力，提高小鼠的记忆力，其活性成分是多种萜类皂苷混合物……，该文献仅仅综述了假马齿苋提取物的药效，没有活性成分的药效证明试验，也没有详细的提取物制备工艺；假马齿苋中新三萜 bacosine的止痛作用，中草药， 1998年 5期，公开了假马齿苋中三萜类化合物的止痛作用。现代研究认为假马齿苋为一种 "adaptogen", 具有原样双向调节作用，抗应激反应，可以帮助调节人体对抗环境压力的能力，引导回复至正常的健康状态。 D. Rai et al等研究了假马齿笕提取物对急性刺激（AS)和慢性刺激（CS)模型大鼠的影响，结果发现：提前 45分钟服用以假马齿苋皂苷为主要成分的提取物，将会明显改善 AS引起的一系列反应，如胃溃疡指数、肾上腺重量、血糖水平的升高，天冬氨酸转氨酶活性、丙氨酸转胺酶活性和肌酸激酶活性的增高、以及脾重量的降低。长期刺激实验表明：假马齿苋提取物低剂量时，将会使胃溃疡指标下降和天冬氨酸转氨酶活性下降，并趋于 1έ¥。高剂量时将会使胃溃疡指数、肾上腺重量下降，以及使天冬氨酸转氨酶和肌酸激酶活性下降并趋于正常。所以假马齿苋提取物有舒缓压力的作用，是一种环境荷尔蒙的调理素、适应原。另有报道假马齿苋为钙离子阻滞剂，对平滑肌有解痉作用；也有人将假马齿苋的提取物和其它成分相混合制成各种剂型，用于改善更年期妇女因雌激素减少引起的各种不适，也用于美容护肤等方面。

现有的文献主要是其化学成分特别是三萜皂苷结构的鉴定上。关于假马齿苋皂苷的提取工艺如下：干燥假马齿苋用水或醇提，采用溶剂法分离纯化或者使用硅胶柱层析技术分离纯化。以下面两篇专利为代表- 第一篇是： WO2004060267-A2 爾认本提取分离方法如下：水或有机溶剂提取、干燥、非极性溶剂脱去脂肪性物质、至少用一种有机溶剂提取残留物，水萃取、真空干燥有机层，硅胶柱层析分离，水或有机溶剂洗脱，得到皂苷 A+B含量为 80-100%的产物，经色谱进一歩分离 A和曰。

第二篇是： WO2004054599-A1，提取皂苷 A+B含量为 20~30%的提取物。

正已烷脱脂，滤渣烘干，丙酮提取（除去非 BACOSIDE成分和色素物质)、甲醇提取滤渣、浓缩提取液、将浓缩物加到丙酮里搅拌，过滤，水溶解滤渣，正丁醇萃取、浓缩干燥正丁醇液，水溶解干燥物、添加无毒稳定剂（如 e -环糊精)，搅拌 1.5小时、喷雾干燥。

以上两篇专利，第一篇主要是提取成分单一、纯度较高的产品，可用作标准品用；第二篇制备皂苷 A+B含量为 20〜30°/。的提取物。两篇专利均采用了较多的有机溶剂。

此外，假马齿苋的提取方法，文献报道还有：先用水提，弃去水提液，再用 90% 的乙醇提取两次。再用丙酮提取。以 BACOSIDE A计， BACOPA中 BACOSIDES的含量为 50-60%。（Adaptogenic effect of Bacopa monniera (Brahmi),D. Rai et al. I PharmacoIogy，Biochemistry and Behavior 75 (2003) 823—830。）该提取工艺用丙酮分离精制，使用了丙酮等对人体有危害的有机溶剂，不利大工业生产操作，成本高。发明内容

本发明的技术方案是提供一种假马齿苋提取物，本发明的另一技术方案是提供了该提取物的制备方法和用途。

本发明提供了一种假马齿苋提取物，其中，假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10%〜80%。

BACODSIDE A 由以下成分组成：

Bacoside A₃、 bacopaside II、 bacopaside X、 bacopasaponin C,结构如下： bacoside A3: 苷元为酸枣仁皂苷元，糖链为：

3-0- β - D-吡喃葡萄糖基 -(1一► 3) - 0- [a-L-呋喃阿拉伯糖基 -（1一 ^ 2) ]-0- ( β -D - 吡喃葡萄糖基）

bacopaside II：苷元为：伪酸枣仁皂苷元，糖链为：

3 - 0- a- L -呋喃阿拉伯糖基-（I 2) - [ 0 - D -吡喃葡萄糖基- (1 3) ] - β -D吡喃葡萄糖基

bacopaside X：苷元为：酸枣仁皂苷元，糖链为： 3-0- a -L-呋喃阿拉伯糖基-（1 _► 2) - [ β -D-吡喃葡萄糖基- (1一► 3) - ] - α - L吡喃阿拉伯糖基

Bacopasaponin C:

苷元为：伪酸枣仁皂苷元，糖链为： 3- O-β- D-吡喃葡萄糖基 -（1一 [ a-L-呋喃阿拉伯糠基 - (1- 2) ] - a- L吡喃阿拉伯糖基

Bacopaside X

Bacopasaponin C

进一歩地，假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10%〜 40%。优选地，假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 BacosideA计，占提取物的 10%〜 30%。进一歩优选地，假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 20% ±0.04。

或，进一歩地，假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 40%〜70%。优选地，假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 50%±0. 1。

其中，假马齿苋来源于玄参科植物假马齿苋 Bacopa monnieri L.的全草。

本发明假马齿苋提取物是由下述方法提取：取干燥假马齿苋 Bacopa monnieri L. 的全草， 40%〜80%乙醇提取，提取液直接浓缩干燥即得假马齿苋提取物；或将提取液浓缩后，大孔吸附树脂吸附，再用 10%~95%乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，即得。

本发明还提供了制备该假马齿苋提取物的方法，它包括如下步骤- a、称取假马齿苋 Bacopa monnieri L.的全草，加入 40%〜80%乙醇提取，提取液浓缩，得浓缩液；

b、用大孔吸附树脂法对浓缩后的提取液进行纯化和精制，以 10-95%乙醇为洗脱液，收集洗脱液，干燥，即得。

其中，步骤 b所述的乙醇洗脱是：用 60~95%的乙醇洗脱。进一歩地，步骤 b所述的乙醇洗脱是：先用 10%~60%的乙醇洗脱，再用 60%~9^%乙醇洗脱。

其中，洗脱可按如下两种方法操作：（1)直接用 60~95%的乙醇洗脱。（2)先用 10%~60%的乙醇洗脱，至洗脱液颜色明显变浅时，再用 60%~95%乙醇洗脱。本发明还提供了所述的假马齿苋提取物在制备抗抑郁和具有益智的药物中的用途。

本发明还提供了一种药物组合物，它是含有有效量的假马齿苋提取物为原料，加入药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂是口服制剂、注射剂。

本发明还提供了该药物组合物在制备抗抑郁的药物中的用途。其中，所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10%〜80%。优选地，所述的药物中假马齿宽提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，为 10〜40%。进一歩优选地，所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，为 20%±0.04。

本发明还提供了该药物组合物在制备益智药物中的用途。其中，所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10%〜 80% 。优选地，所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，为 40~70%。进一歩地优选地，所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，为 50%±0. 1。

其中，所述的制剂是口服制剂、注射剂。假马齿苋提取物或假马齿苋提取物加上药用辅料组成的医学上可接受的各类制剂。如片剂、胶囊、软胶囊、颗粒、注射剂等。本发明所用的辅料为制药工程中常用的辅料如固体制剂所用的辅料：糊精、淀粉、淀粉衍生物、羧甲基纤维素、蔗糖、硫酸钙、硬脂酸镁、乳糖、微精纤维素、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、等。液体制剂所用的辅料如：水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、等。

本发明假马齿苋提取物可以是 10~30%的低含量产品，也可以是 60~80%的高含量产品，且不同规格的假马齿苋提取物具有不同的功效。在原料的生产工艺中，无需对产品进行脱脂，采用树脂吸附除杂，生产过程中的处理量大，且能够经过活化重复使用，节约了成本，所涉及的有机溶剂只有乙醇，减少了有机溶剂对操作人员和生产管道的损害。本发明假马齿苋提取物与其它方式制备所得的提取物相比，成本低、药效显著，可控性强，质量稳定。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图 1 小鼠跳台试验——各组小鼠跳台潜伏期（24小时记忆保持）均数点图（S) 图 2 小鼠跳台试^ 各组小鼠跳台潜伏期（长期记忆保持）均数点图（S) 图 3 抗抑郁药物筛选——强迫小鼠游泳试验（第 9天）小鼠不动时间均数点图（S) 图 4 抗抑郁药物筛选一强迫小鼠游泳试验（第 15天）小鼠不动时间均数点图（S) 具体实施方式

实施例 1 本发明假马齿苋提取物的制备

350g假马齿宽干燥全草，用 80%乙醇回流提取三次，用量分别是 10、 8、 6倍，每次提取 1小时，将三次提取液过滤合并浓缩，干燥，得产品 60.6g, Bacoside A的重量百分含量为 10.5%。

实施例 2 本发明假马齿宽提取物的制备

200 假马齿宽干燥全草，用 40%乙醇回流提取三次，用量分别是 10、 8、 6倍，每次提取 1小时，将三次提取液过滤合并浓缩至无醇，大孔吸附树脂吸附， 7J洗至无色，先用 10%的乙醇洗脱，再用 95%的乙醇洗脱，浓缩 95%乙醇洗脱液，干燥，得产品 3.4g， Bacoside A的重量百分含量为 21.11%。

实施例 3 本发明假马齿苋提取物的制备

60kg全草原料，用 70%乙醇回流提取二次，用量分别是 10、 10倍，每次提取 1 小时，过滤并合并滤液，滤液浓缩上柱，水洗至无色时，用 95%乙醇 120L洗脱，喷雾干燥洗脱液得 200_g产品， Bacoside A的重量百分含量： 31.1% 。

实施例 4 本发明假马齿苋提取物的制备

350g假马齿苋干燥全草， 80%乙醇回流提取三次，用量分别为： 8、 8、 6倍，每次提取 1.5小时，将三次提取液过滤合并浓缩至 600ml，大孔吸附树脂吸附，先用水洗至无色，再用 600ml 10%的乙醇洗脱，然后用 1000ml 95%的乙醇洗脱。浓缩干燥 95% 乙醇洗脱液，得干粉 6g。 Bacoside A的重量百分含量 43.24%。

实施例 5 本发明假马齿宽提取物的制备

350_g假马齿苋干燥全草， 80%乙醇回流提取三次，用量分别为： 8、 8、 6倍，每次提取 1.5小时，将三次提取液过滤合并浓缩至 600ml, 先用 40% 600ml乙醇洗脱，再用 1000ml95%乙醇洗脱，浓缩干燥 95%乙醇活化液，得产品 5.6_g。 Bacoside A的重量百分含量： 50.37 %。

实施例 6 本发明假马齿苋提取物的制备

350g假马齿苋干燥全草，用 80%乙醇回流提取三次，用量分别是 10、 8、 6倍，每次提取 1小时，将三次提取液过滤合并浓缩至无醇，大孔吸附树脂吸附，水洗至无色，先用 30%的乙醇洗脱，再用 95%的乙醇洗脱，浓缩 95%乙醇洗脱液，干燥。得产品 5.8g， BacosideA的重量百分含量为 60.8%。

实施例 7 本发明假马齿苋提取物的制备

350_g假马齿苋干燥全草，用 70%乙醇回流提取三次，用量分别是 10、 8、 6倍，每次提取 1小时，将三次提取液过滤合并浓縮至无醇，大孔吸附树脂吸附，水洗至无色，先用 30%的乙醇洗脱，再用 95%的乙醇洗脱，浓缩 95%乙醇洗脱液，干燥。得产品 5g， BacosideA的重量百分含量为 72.5%。

实施例 8本发明假马齿苋提取物的制备

350 假马齿苋全草，用 70%乙醇回流提取三次，用量分别是 10、 8、 6倍，每次提取 1小时，将三次提取液过滤合并浓缩至无醇，大孔吸附树脂吸附，水洗至无色，先用 30%的乙醇洗脱，再用 90%的乙醇洗脱，浓缩 90%乙醇洗脱液，干燥。得产品 4.1g, BacosideA的重量百分含量为 79.1%。

实施例 9 假马齿苋提取物检测方法

实施例 1-8制备的提取物的质量控制方法如下：

仪器与试剂：

HP 1100四元泵； HP 1100色谱柱恒温箱； HP 1100检测器；对照品纯度≥97%；仪器用水为重蒸水；实验用水为重蒸馏水；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

色谱条件：

色谱柱： Inertsil ODS 150 X 4.6mm 5um

流动相：

柱温： 30°C ;流速： 1.0ml/min;检测波长： 205nm;进样量： 20ul;灵敏度： 0.01AUFS。溶液制备：

1、标准溶液的制备

精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的 Bacoside A₃、 bacopaside II、 bacopaside X、 bacopasaponin C的对照品适量，加甲醇制成每 lml各含 0. 15mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2、供试品溶液的制备分别精密称定两份样品 lOOmg于两个 50ml容量瓶中，加约 40ml的分析甲醇，于超声波中超声溶解，放冷至室温后，定容至刻度，摇匀后用 0.45um微孔滤膜过滤，即得。

样品测定：

取供试品注入液相色谱中，记录出峰面积，按外标法进行计算。

本产品 bacoside A的含量是以 Bacoside A₃、 bacopaside II、 bacopaside X、 bacopasaponin C的总量来计。

实施例 10本发明药物组合物的制备

按重量百分比称取下列物料：实施例 1制备的本发明假马齿苋提取物 60%，加入微精纤维素 20%、甜菊糖苷 5°/。、淀粉 10%，硬脂酸镁 0.8%, 羟丙纤维素 4.2%,充分混匀后制粒，按所需剂量包装即得颗粒剂。

按实施例所得的颗粒剂，按所需剂量分装于空胶壳中，即得胶囊剂。

按实施例所得的颗粒剂，直接压片，薄膜包衣，即得片剂。

上述提取物 30_g，加注射用水，在无菌条件下完全溶解，分别经过玻砂过滤器 G3、 G6，灌封于安瓿中，灭菌 100°C30min，得 1000支。

采用所述的不同规格的提取物，可制备成不同规格的药学上常用的制剂。

以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。

试验材料与方法-

1、受试样品- 按实施例 1-8所述的方法制备的假马齿苋提取物，以 Bacoside A计：

A: 21.11% B: 50.37% C: 72.50%

2、本发明药物供试品的剂量设置及配制（供试品按实施例的方法制备：对应样品分别是实施例 2， 5， 7)

表 1 供试品剂量设置及配制

剂量配制浓度

组别 (mg/kg) ig. (mg/nil)

A 低剂量组 30 1. 5

中剂量组 60 3. 0

高剂量组 120 6. 0

B 低剂量组 30 1. 5

中剂量组 60 3. 0

高剂量组 120 6. 0

C 低剂量组 30 1. 5

中剂量组 60 3. 0

高剂量组 120 6. 0 以上供试品均密封、常温贮存。 3、阳性对照品及配制

盐酸丙米嗪，批号： 050401, 规格： 25mg/片，由上海医药集团有限公司生产。按人临床用量，依照体表面积换算成小鼠 H用剂量，临用时用纯水配制成 0. 75mg/inl。

脑复康（吡拉西坦片），批号： 040302，规格： 0.4g/片，由广东康博通药业实业有限公司生产。按人临床用量，依照体表面积换算成小鼠日用剂量，临用时用纯水配制成 50mg/ral。

以上阳性对照品均密封、常温贮存。

4实验动物及其管理

4. 1实验动物

品系： KM小鼠等级：一级重量： 24- 30g

性别：雄性动物数： 288只

供应单位：成都中医药大学实验动物研究中心

许可证号： SCXK (川） 2004-11

4.2实验动物的饲养管理： 4.2. 1动物房：

一级动物房，四川省实验动物使用许可证号： 006号，

温度 ·. 18- 25Ό 相对湿度： 50-70%

通风情况：全新风光照条件： 12/12明暗交替

4.2.2饮水：纯水，四川省天然药物研究所制。

纯水制备装置：反渗透离子交换系统，研究所仪器编号： 117。

4.2.3饲料：全价鼠颗粒伺料，购自四川省实验动物专委会养殖场。

5、主要实验仪器：

标准小鼠游泳池（水缸高 30cm,长 30cm, 30cm)

小鼠跳台试验箱， DTT- 2型，中国医学科学院药物研究所

秒表等

5、主要实验试剂

东莨菪碱，批号： 4A18004, 规格： 0.3mg/ml, 上海禾丰制药有限公司。试验例 1 本发明药物益智作用的筛选试验一小鼠跳台试验

小鼠捡疫合格后，计算机 (PEMS2. 1软件）完全随机分组法将小鼠分成 12组，分别为空白对照组（生理盐水组)，阳性（脑复康）对照组、模型对照组及本发明药物三个受试品的高、中、低剂量组，每组 12只小鼠，分笼常规词养。每天灌胃给相应组药物（给药体积为 0. 2ml/10g) 1次。 7天后，进行跳台训练。训练前 45min每组小鼠再灌胃给药 1次，训练前 30min，除空白对照组外，其它各组小鼠 ip东茛菪碱 2. 5mg/kg，空白对照组 ip相同体积的生理盐水。注射后 lOniin, 将受试动物放入反应箱中适应 3min, 然后立即通以 36V交流电，训练 5πΰη，记录动物受到电击的次数，以此作为学习成绩。取出动物后常规喂养。 24小时后重作测验（24小时记忆保持测验)，记录受电击的动物次数，第一次跳下平台的潜伏期和 3rain内的错误总数。 6天后再重复上述试验（长期记忆保持测验)，记录数据并进行统计学分析。

1. 1益智作用的筛选试验——小鼠跳台试验

结果见表 2、 3及图 1、 2。

表 2 益智药物筛选——小鼠跳台试验 (24小时记忆保持）结果, T+sd 组别剂量 C mg/kg) 动物数错误次数 (次）电击次数 (次）小鼠跳台潜伏

ig- (只）期（S) 空白对照组生理盐水 12 0. 17±0. 39** 0. 17士 162. 3 ±47. 9**

0. 39**

模型对照組生理盐水 12 1. 33±0. 65 1. 42±0. 79 47. 5±61. 0 阳性（脑复康）对照组 50 11 0. 64±1. 29* 1. 45±1. 81 147. 8土 61. 3* 本发明药物 A-低剂量组 30 10 0. 50 ±0. 97** 0. 8±0. 79 128. 8±82. 5 本发明药物 A-中剂量组 60 12 0. 33 ±0. 49** 0. 83 ±0. 72 126. 8±81. 0 本发明药物 A-高剂量组 120 12 0. 75 ±0. 97 1. 50± 1. 51 101. 9±84. 1 本发明药物 B-低剂量组 30 12 0. 25 ±0. 45** 0. 5±0. 67* 148. 6 ±72. 5* 本发明药物 B-中剂量组 60 12 0. 00 ±0. 00** 0. 58±0. 9 180. 0±0. 0** 本发明药物 B-高剂量组 120 11 0. 45 ±0. 93** 0. 64±0. 67 137. 7±73. 4 本发明药物 C-低剂量组 30 12 0. 33 ±0. 65** 1. 08±1. 31 140. 6 ±72. 3 本发明药物 C-中剂量组 60 12 0. 58 ±0. 67* 0. 67 ±0. 65 116. 6±75. 9 本发明药物 C-高剂量组 120 12 0. 50 ±0. 67** 1. 17 ±1. 47 111. 2±74. 0 注：采用 SPSS11. 0 One-way A OVA- LSD- TUKEY分析。

"*" 表示与模型对照组比较， p<0. 05; "**"表示与模型对照組比较， p<0. 01 表 3 益智药物筛选——小鼠跳台试验（长期记忆保持）结果， Γ土 sd

(mg/kg) 动物数小鼠跳台潜伏期组别昔误次数 (次） ϋ击次数（次）

ig. (只） (s) 空白对照组生理盐水 12 0. 42 ±1· 44 0. 58 ±1. 44 165. 1±51. 4** 模型对照組生理盐水 11 0. 45 ±0. 69 1. 10 ±0. 94 115. 7±75. 4 阳性（脑复康）对照组 50 11 0. 00 ±0. 00 0. 09±0. 31** 180. 0+0. 00** 本发明药物 A-低剂量組 30 9 0. 00 ±0. 00 0. 11 ±0. 33** 163. 1±50. 7* 本发明药物 A-中剂量组 60 12 0. 17±0· 58 0. 25 ±0. 62** 165. 8 ±49. 1** 本发明難 A-高剂量组 120 12 0. 00 ±0. 00 0. 09±0. 30** 180. 0±0. 0** 本发明药物 B-低剂量组 30 11 0. 08 ±0. 29 0. 08 ±0. 29** 166. 0±48. 5** 本发明药物 B-中剂量组 60 12 0. 00±0. 00 0. 00+0. 00** 180. 0±0. 0** 本发明药物 B-高剂量组 120 11 0. 00 ±0. 00 0. 09+0. 30** 180. 0±0. 0** 本发明药物 C-低剂量组 30 12 0. 00±0· 00 0. 08 ±0. 29** 180. 0±0. 0** 本发明药物 C-中剂量组 60 11 0. 09 ±0. 30 0. 18 ±0. 60** 168. 1±39. 5** 本发明药物 C-高剂量组 120 12 0. 58 ±0. 67 0. 83 ±0. 94 122. 7±71. 2 注：采 HI'SPSSll. O One-way ANOVA- LSD分析。

"*"表示与模型对照组比较， p〈0. 05； "**"表示与投:型对照组比较， p<0. 01 小鼠跳台试验共评测跳台潜伏期、错误次数及电击次数三个指标，其中以潜伏期为主要指标，能客观准确判断小鼠的记忆能力，其它两项为次要指标，其判断主观性相对较大，评价的效率较低，故作为次要指标。

实验结果表明：小鼠跳台试验 24小时记忆保持能力测试结果中，采用 SPSS11. 0 One- way ANOVA- LSD- TUKEY进行数据分析，空白对照组与模型对照组比较，小鼠错误次数、电击次数及跳台潜伏期各指标均有极显著差异（P<0.01); 同时，在小鼠错误次数、跳台潜伏期两项指标上，阳性（脑复康）对照组与模型对照组比较有显著性差异 (ρ<0. 05) ,说明该实验模型成立，实验评价系统可靠（参见表 2)。而本发明药物三个受试样品中， 50.37%低剂量（30mg/kg)组与模型对照组比较，有显著性差异（p<0.05)； 50. 37%中剂量(601¾/1¾)组与模型对照组比较，有极显著差异（p〈0. 01)。由此可见，在本实验条件下，三个受试样品中，受试样品 B-50. 37%在 24小时记忆保持能力的测试中，保持小鼠记忆，提高智力方面较其它两样品具有更突出的功效。

在长期记忆保持能力测试中，采用 SPSS11.0 One-way ANOVA- LSD进行数据分析，以小鼠跳台潜伏期为参考，实验系统仍然成立（参见表 3)。本发明药物供试品各剂量组中，除 C一高剂量组（120mg/k_g)外，与模型对照组比较均有极显著差异（ρ〈0.01) , 说明各样本在 1 天给药后对小鼠跳台的长期记忆保持均有促进作用。

综上所述， 50.37%对小鼠近期及中长期的记忆保持作用，较其它各样品功效更为明显。

试验例 2 本发明药物抗抑郁筛选试验——强迫小鼠游泳试验（获得性绝望模型）小鼠检疫合格后，计算机（PEMS2. 1软件）完全随机分组法将小鼠分成 12组，分别为空白对照组（生理盐水组），阳性（脑复康）对照组、模型对照组及本发明药物三个受试品的高、中、低剂量组，每组 12只小鼠，分笼常规词养。每天灌胃给相应组药物（给药体积为 0.2ral/10g) 1次。试验检测前 2天，给予造模小鼠强迫 lOmin的游泳训练，每天一次。试验前小鼠禁食不禁水 16h。评测前 30min再灌胃给药 1次后，将单只小鼠放入游泳池水中，游泳 6min，记录后 4min内小鼠累计不动的时间（第 9天试验）。 (不动是指小鼠在水中停止挣扎，或动物呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面）， 7天后再重复上述试验 1次（第 15天试验)。记录数据并进行统计学分析。

对实验结果用 SPSS统计软件进行方差分析及 X²检验。

结果见表 4、 5，图 3，图 4。抗抑郁药物筛选一强迫小鼠游泳试验（第 9天）结果 ,Γ土 sd 组别剂量 (mg/kg) ig. 动物数（只）小鼠不动时间（s〉空白对照组等体积生理盐水 10 1.5±2.8** 模型对照组等体积生理盐水 10 32.4 ±30.3 阳性（丙米嗪）对照组 0.75 10 6.8±3.9* 本发明药物 A-低剂量组 30 10 25.7 ±25.1 本发明药物 A-中剂量组 60 10 15.1±22.5 本发明药物 A-高剂量组 120 10 7.0±12.9* 本发明药物 B-低剂量组 30 10 28.1±29.0 本发明药物 B-中剂量组 60 10 34· 4 ±18.6 本发明药物 B-高剂量组 120 10 3.2±5.6* 本发明药物 C-低剂量组 30 10 67.3 ±38.9# 本发明药物 C-中剂量组 60 10 33.1±29.2 本发明药物 C-髙剂量组 120 9 18.2±25.4

注：为减小数据的离散性，各組数据分别去除最高和最低值后进行统计学处理，故每组动物样本数比实际样本减少 2个。采用 SPSS11.0 One-way ANOVA- LSD分析。

. "*"表示与模型对照组比较， p<0.05; "**"表示与模型对照组比较， p<0.01； "# "表示与模型对照组比较， p〈0.05, 但其均值大于模型对照组。

表 5 抗抑郁药物筛选——强迫小鼠游泳试验（第 15天）结果， IT土 sd 组别剂量 (mg/kg) ig. 动物数（只）小鼠不动时间（S) 空白对照组等体积生理盐水 10 61.3±42.8** 模型对照组等体积生理盐水 10 122.5 ±40.6 丙米嗪（阳性）对照组 0.75 10 98.1±48.7 本发明药物 A-低剂量组 30 . 10 82.2 ±35.3* 本发明药物 A-中剂量组 60 10 117.6±34.3 本发明药物 A-高剂量组 120 10 36.3 ±32.0** 本发明药物 B-低剂量组 30 10 88.9 ±28.9 本发明药物 B-中剂量组 60 10 128.8±46.3 本发明药物 B-高剂量组 120 10 81.4±48.4* 本发明药物 C-低剂量组 30 10 115.6±45.4 本发明药物 C-中剂量组 60 10 89.1±32.9 本发明药物 C-高剂量组 120 8 80.8 ±39.9* 注：为减小数据的离散性，各组分别去除最高和最低值样本后进行统计学处理。采用 SPSS11.0

One-way ANOVA- LSD分析。

"*"表示与模型对照组比较， p<0.05; "**"表示与模型对照组比较， p<0.01。

实验结果表明：小鼠强迫游泳试验第 9天测试结果中，采用 SPSS11.0 One-way ANOVA- LSD进行数据分析，空白对照组、阳性（盐酸丙米嗪）对照组分别与模型对照组比较，有极显著和显著性差异（p<0.01和 p<0.05)，说明该实验模型成立，实验评价系统可靠（参见表 4)。而 21.11%, 50.37%高剂量 (120mg/kg)组与模型对照组比较，有显著性差异（p〈0.05), 其它各样本剂量组与模型对照组比较无差异。由此可见，在本实验条件下，三个受试样品中， 21.11%与 50.37%在 120mg/kg的每天連续灌胃给药剂量的条件下，第 9天的测试中，显示出具有对抗小鼠获得性绝望模型状态的作用。

第 15天的测试中，采用 SPSS11.0 One-way ANOVA- LSD进行数据统计学分析：空白对照组与模型对照组比较有极显著性差异（_P〈0. 01 )，而阳性对照品（盐酸丙米嗪）虽然有缓解小鼠绝望抑郁状态的趋势，但本次试验数据组间无统计学意义（参见表 5)，这可能与丙米嗪自身的药效学特点有关。本发明药物供试品各剂量组中， 21. 11%低剂量组、 50. 37%髙剂量组、 72. 50%髙剂量组与模型对照组比较有显著差异（p<0. 05); 21. 11%髙剂量组与模型对照组比较有极显著差异（p<0. 01)。由此说明各受试样品在一定的给药剂量及一定的给药时间的前提下均有对抗小鼠抑郁状态的作用，其中 21. 11% 高剂量给药时，似乎更具有较长时间稳定的对抗小鼠绝望性抑郁症状的药效学作用，因此本发明药物三个样品中，抗抑郁功能筛选以 21. 11%为优。

综上试验可知，本发明药物三个样品均有一定的促进模型小鼠智力、抗抑郁功能，但功效优劣不尽相同。

在益智方面：对 24小时记忆保持功能方面， 50. 37%在 30mg/kg时起效， 30mg/kg 一 60rag/kg的剂量范围内，有量效关系，且起效量似乎尚有下降的空间；长期记忆保持方面，该样品三剂量组均显示出良好的药效学作用，其中中、高剂量组小鼠潜伏期均达到 3min以上，未出现明显犯错误现象，与阳性对照药脑复康相比，使用剂量较低，疗效更明确。且 24小时及长期记忆保持能力两次评测结果基本一致，说明本发明药物促进小鼠记忆能力的有效性，同时也间接说明了该试验研究的可重复性。

在抗抑郁方面：本次试验条件下，实验系统成立。研究发现，在第 9天试验评测中， 21. 11%、 50. 37%高剂量组均能有效对抗因强迫游泳而造成的小鼠绝望抑郁模型，其药效学作用与盐酸丙米嗪相当。在第 15天的测评中， 21. 11%仍保持较好的抗抑郁作用，低剂量组也显示出具有一定的抗抑郁效果，高剂量组与模型组比较有极显著性差异，该样品呈现出一定的时效关系，此剂量下疗效似乎更优于丙米嗪对照组。 50. 37% 高剂量组仍保持与第 9天测试时一样的作用强度。两次评测结果基本一致，也证实了该研究的可靠性。

综上所述，益智作用：最佳药效样品： 50. 37%

抗抑郁作用：最佳药效样品： 21. 11%

根据《中国药典》 2005年版二部附录 XIX A中第七项下，原料药和制剂的含量测定，范围应为测试浓度的 80%- 120%; 制剂含量均匀度检査，范围应为测试浓度的 70%-130%。认为本实验中益智作用的最佳药效样品范围是： 50%±0. 1，抗抑郁的最佳药效样品范围是： 20%±0. 04。

主要参考文献

[1]谢秀琼主编，中药新制剂开发与应用，人民卫生出版社， 1994

[2] 徐叔云等主编，药理实验方法学，第三版，人民卫生出版社， 2001

[3] 李仪奎主编，中药药理实验方法学，上海科学技术出版社， 1991

Claims

权利要求书

1、一种假马齿苋提取物，其特征在于：假马齿笕总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10%〜80%。

2、根据权利要求 1所述的假马齿苋提取物，其特征在于：假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10°/。〜40%。

3、根据权利要求 2所述的假马齿苋提取物，其特征在于：假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10%〜30%。

4、根据权利要求 3所述的假马齿苋提取物，其特征在于：假马齿苋总皂昔的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 20% ±0.04。

5、根据权利要求 1所述的假马齿苋提取物，其特征在于：假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 40%〜70%。

6、根据权利要求 5所述的假马齿苋提取物，其特征在于：假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 50% ± 0. 1。

7、根据权利要求 1〜6任一项所述的假马齿苋提取物，其特征在于：假马齿苋来源于玄参科植物假马齿苋 Bacopa monnieri L.的全草。

8、根据权利要求 1〜7任一项所述的假马齿苋提取物，其特征在于：它是由下述方法提取：取干燥假马齿苋 Bacopa monnieri L.的全草， 40%〜80%乙醇提取，提取液直接浓缩干燥即得假马齿苋提取物；或将提取液浓缩后，大孔吸附树脂吸附，再用 10%~95%乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，即得。

9、一种制备权利要求 1〜8任一项所述的假马齿苋提取物的方法，它包括如下步骤：

a、称取假马齿苋 Bacopa monnieri L.的全草，加入 40%〜80%乙醇提取，提取液浓缩，得浓缩液；

b、用大孔吸附树脂法对浓缩后的提取液进行纯化、精制，以 10-95%乙醇为洗脱液，收集洗脱液，干燥，即得。

10、根据权利要求 9所述的制备假马齿苋提取物的方法，其特征在于：歩骤 b所述的乙醇洗脱是：用 60~95%的乙醇洗脱。

11、根据权利要求 9所述的制备假马齿苋提取物的方法，其特征在于：步骤 b所述的乙醇洗脱是：先用 10%~60%的乙醇洗脱，再用 60%~95%乙醇洗脱。

12、权利要求 1~4任一项所述的假马齿苋提取物在制备抗抑郁的药物中的用途。

13、权利要求 1、 5、 6所述的假马齿苋提取物在制备具有益智的药物中的用途。

14、一种药物组合物，它是含有有效量的权利要求 1〜8任一项所述的假马齿苋提取物为原料，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

15、根据权利要求 14所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是口服制剂、注射剂。

16、权利要求 14或 15所述的药物组合物在制备抗抑郁的药物中的用途。

17、根据权利要求 16所述的用途，其特征在于：所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总阜苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10%〜80%。

18、根据权利要求 17所述的用途，其特征在于：所述的药物中假马齿宽提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，为 10〜40%。

19、根据权利要求 18所述的用途，其特征在于：所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，为 20%±0.04。

20、权利要求 14或 15所述的药物组合物在制备益智药物中的用途。

21、根据权利要求 20所述的用途，其特征在于：所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，占提取物的 10%〜80%。

22、根据权利要求 21所述的用途，其特征在于：所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂昔的重量百分含量以 Bacoside A计，为 40〜70%。

23、根据权利要求 22所述的用途，其特征在于：所述的药物中假马齿苋提取物含假马齿苋总皂苷的重量百分含量以 Bacoside A计，为 50%±0. 1。