CN106831932A - 一种从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法，主要步骤包括碱醇提取、高醇溶解、絮凝剂澄清、活性炭脱色等工艺除去大量的脂溶性杂质及水溶性杂质，进而根据五种假马齿苋皂甙的分子量采用膜分离手段将其进一步细分离，有机试剂洗涤纯化，从而将这五种成分液相含量总和提高至85％以上，避免了产品收率低、树脂分离工艺复杂等缺点。该发明工艺成本低，周期短，可操作性强，产品回收率2.2％左右，质量稳定，适用于工业化生产。

Description

一种从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法
技术领域
本发明涉及一种从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法。
背景技术
假马齿苋为玄参科植物假马齿苋Bacopa monnieri(L.)Wettst的全草，又名白花猪母菜。在印度使用假马齿苋滋补大脑、改善记忆和智力，如焦虑、认知低下、精神不集中等已有3000年的历史，目前用于治疗精神病和癫痫。假马齿苋促进记忆的主要化学成分是假马齿苋皂苷A和假马齿苋皂苷B，它们最重要的作用是提高认知、记忆功能，以及镇静抗焦虑和抗惊厥抗癫痫等生物活性。在我国主要分布于福建、台湾、广东、云南和四川等地。
假马齿苋药材中含量最高的为假马齿苋皂苷A，其中主要有Bacopaside Ⅰ(简称Baco Ⅰ，分子量979)、Bacopaside Ⅱ(简称Baco Ⅱ，分子量929)、Bacoside A3(简称BacoA3，分子量929)、Bacopasaponin C(简称Baco C，分子量899)以及Bacopasaponin C isomer(简称Baco Ci，分子量899)，它们的母核结构类似，苷元均为jujubogenin(酸枣仁苷元)或pseudojujubogenin(伪酸枣仁苷元)，并且Baco Ⅱ和Baco A3、Baco C和Baco Ci互为同分异构体。本专利分离纯化后检测的假马齿苋皂甙含量均指这5个成分的液相含量总和。
专利CN 1303098 C提到了一种制备假马齿苋皂甙的方法，原料乙醇提取，大孔树脂分离，RP-18低压柱或HPLC高效液相色谱纯化，得到3种假马齿苋皂甙，分别为Baco Ⅰ、Baco C和Baco D。该专利采用多歩柱层析的方法进行纯化，周期长、成本高、不适用于工业化生产。
专利CN 1833692 B也提到了一种假马齿苋皂甙的制备方法，原料采用40-80％乙醇提取，浓缩后再经大孔吸附树脂纯化，直接采用10-95％乙醇洗脱，或先用10-60％乙醇洗脱，再用60-95％乙醇洗脱，可将假马齿苋皂甙含量提高到20-80％(以假马齿苋皂苷A计)。该专利通过树脂纯化，工艺周期长、试剂损耗大、且有效成分回收率低(80％含量的产品，回收率仅1.17％)，不利于工业化生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法，主要解决了现有技术中工艺复杂、收率低且不适合工业化生产的问题。
本发明的解决技术问题的技术方案是：所提供的从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法，包括以下步骤：
步骤1 碱醇提取
将原料假马齿苋粉碎，采用原料质量3-5倍量且质量浓度为10％-30％乙醇溶液提取，浓缩干燥提取液，粉碎，所得样品备用；所述乙醇溶液内含乙醇溶液质量0.3％-0.8％的氢氧化钠、碳酸钠、氧化镁或氨水中任意一种；
步骤2 料液澄清
向步骤1所得样品中加入质量5-10倍量质量浓度为90％-95％乙醇溶液，搅拌，过滤，减压浓缩，再加入絮凝剂搅拌，过滤，收集滤液，然后向滤液中加入活性炭脱色，再过滤，继续收集滤液；所述絮凝剂是质量浓度为0.8％-1.2％的阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂或复合离子絮凝剂；
步骤3 膜分离
将步骤2所得的滤液通过超滤膜过滤，收集透过液，然后将透过液用纳滤膜过滤，收集浓缩液，浓缩干燥后即得假马齿苋皂甙粗品；
所述超滤膜的截留分子量为2000～3000或3000～5000中的一种；所述纳滤膜的截留分子量为400～500或500～600中的一种；
步骤4 纯化
将步骤3所得的假马齿苋皂甙粗品粉碎，加入质量1-2倍量的有机溶剂溶解，过滤，收集不溶物进行干燥，即得的假马齿苋皂甙；所述有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中的一种或任意多种组合。
上述步骤1的优选方案是：将原料假马齿苋粉碎，采用原料质量3-5倍量且质量浓度为10％-30％乙醇溶液提取两次，合并提取液并浓缩干燥，粉碎过80目筛，所得样品备用；所述乙醇溶液内含乙醇溶液质量0.3％-0.8％的氢氧化钠、碳酸钠、氧化镁或氨水中任意一种(假马齿苋原料中含有有机酸类及Monnieraside等酸性物质，假马齿苋皂甙结构中的缩酮在酸性条件下不稳定，因此加碱增加其稳定性)。
上述步骤2的优选方案是：向步骤1所得样品中加入质量5-10倍量质量浓度为90％-95％乙醇溶液，搅拌溶解，过滤，减压浓缩至液体体积的1/10-1/5，再加入絮凝剂搅拌，过滤，收集滤液，然后向滤液中加入活性炭脱色，再过滤，继续收集滤液；
所述絮凝剂是质量浓度为0.8％-1.2％的阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂或复合离子絮凝剂；所述活性炭的型号为767活性炭、320活性炭、303活性炭或HB-F活性炭中的一种或任意多种的混合。
上述步骤2中絮凝剂与浓缩后液体的质量比为0.03-0.05:1；所述活性炭和絮凝剂澄清后滤液的质量比为0.01-0.03。
上述步骤4的优选方案是：将步骤3所得的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛，加入质量1-2倍量的丙酮溶解，过滤，收集不溶物进行干燥，即得假马齿苋皂甙。
本发明的优点：
本发明通过碱醇提取、高醇溶解、絮凝剂澄清、活性炭脱色等工艺除去大量的脂溶性杂质及水溶性杂质，进而根据上述5种假马齿苋皂甙的分子量采用膜分离手段将其进一步细分离，有机试剂洗涤纯化，从而将这5种成分液相含量总和提高至85％以上，避免了树脂分离等复杂工艺，成本低，周期短，可操作性强，产品回收率2.2％左右，质量稳定，适用于工业化生产。
具体实施方式
实施例1：
100Kg假马齿苋原料粉碎，加入500Kg 10％乙醇80℃提取2次，每次2h，合并提取液减压浓缩干燥，粉碎过80目筛。
向上述粉碎过筛后的样品中加入165Kg 90％乙醇，常温搅拌溶解2次，每次1h，过滤，合并两次溶解液，减压浓缩至无醇，浓缩至原体积的1/10，加入1.55Kg质量浓度为1.2％的阳离子絮凝剂搅拌30min，过滤，收集滤液，再加入0.30Kg 767型活性炭脱色30min，过滤，收集滤液。
将上述得到的滤液采用截留分子量为3000～5000的超滤膜进行过滤，收集透过液，然后将此透过液再采用截留分子量为400～500的纳滤膜进行过滤，收集浓缩液，减压浓缩后干燥得到假马齿苋皂甙粗品。
将上述得到的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛。加入3.5Kg二氯甲烷常温搅拌溶解2次，每次20min，过滤，收集不溶物干燥，共得到该产品1.5Kg，液相检测总含量为85.7％。
实施例2：
100Kg假马齿苋原料粉碎，加入500Kg 10％乙醇(内含0.3％NaOH)80℃提取2次，每次2h，合并提取液减压浓缩干燥，粉碎过80目筛。
向上述粉碎过筛后的样品中加入200Kg 90％乙醇，常温搅拌溶解2次，每次1h，过滤，合并两次溶解液，减压浓缩至无醇，浓缩至原体积的1/10，加入1.92Kg质量浓度为1.2％的阳离子絮凝剂搅拌30min，过滤，收集滤液，再加入0.37Kg 767型活性炭脱色30min，过滤，收集滤液。
将上述得到的滤液采用截留分子量为3000～5000的超滤膜进行过滤，收集透过液，然后将此透过液再采用截留分子量为400～500的纳滤膜进行过滤，收集浓缩液，减压浓缩后干燥得到假马齿苋皂甙粗品。
将上述得到的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛。加入5.3Kg二氯甲烷常温搅拌溶解2次，每次20min，过滤，收集不溶物干燥，共得到该产品2.31Kg，液相检测总含量为86.4％。
实施例3
100Kg假马齿苋原料粉碎，加入300Kg 30％乙醇(内含0.8％MgO)80℃提取2次，每次2h，合并提取液减压浓缩干燥，粉碎过80目筛。
向上述粉碎过筛后的样品中加入90Kg 95％乙醇，常温搅拌溶解2次，每次1h，过滤，合并两次溶解液，减压浓缩至无醇，浓缩至原体积的1/5，加入0.98Kg质量浓度为0.8％的阴离子絮凝剂搅拌30min，过滤，收集滤液，再加入0.95Kg 303型活性炭脱色30min，过滤，收集滤液。
将上述得到的滤液采用截留分子量为3000～5000的超滤膜进行过滤，收集透过液，然后将此透过液再采用截留分子量为500～600的纳滤膜进行过滤，收集浓缩液，减压浓缩后干燥得到假马齿苋皂甙粗品。
将上述得到的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛。加入2.7Kg乙酸乙酯常温搅拌溶解2次，每次20min，过滤，收集不溶物干燥，共得到该产品2.25Kg，液相检测总含量为87.3％。
实施例4
100Kg假马齿苋原料粉碎，加入400Kg 30％乙醇(内含0.5％Na2CO3)80℃提取2次，每次2h，合并提取液减压浓缩干燥，粉碎过80目筛。
向上述粉碎过筛后的样品中加入140Kg 92％乙醇，常温搅拌溶解2次，每次1h，过滤，合并两次溶解液，减压浓缩至无醇，浓缩至原体积的1/8，加入1.32Kg质量浓度为1％的复合离子絮凝剂搅拌30min，过滤，收集滤液，再加入0.61Kg 320型活性炭脱色30min，过滤，收集滤液。
将上述得到的滤液采用截留分子量为2000～3000的超滤膜进行过滤，收集透过液，然后将此透过液再采用截留分子量为400～500的纳滤膜进行过滤，收集浓缩液，减压浓缩后干燥得到假马齿苋皂甙粗品。
将上述得到的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛。加入3.8Kg丙酮常温搅拌溶解2次，每次20min，过滤，收集不溶物干燥，共得到该产品2.19Kg，液相检测总含量为88.7％。
实施例5
100Kg假马齿苋原料粉碎，加入500Kg 20％乙醇(内含0.5％NaOH)80℃提取2次，每次2h，合并提取液减压浓缩干燥，粉碎过80目筛。
向上述粉碎过筛后的样品中加入115Kg 95％乙醇，常温搅拌溶解2次，每次1h，过滤，合并两次溶解液，减压浓缩至无醇，浓缩至原体积的1/6，加入1.3Kg质量浓度为1％的阳离子絮凝剂搅拌30min，过滤，收集滤液，再加入0.64Kg HB-F型活性炭脱色30min，过滤，收集滤液。
将上述得到的滤液采用截留分子量为2000～3000的超滤膜进行过滤，收集透过液，然后将此透过液再采用截留分子量为500～600的纳滤膜进行过滤，收集浓缩液，减压浓缩后干燥得到假马齿苋皂甙粗品。
将上述得到的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛。加入4Kg丙酮常温搅拌溶解2次，每次20min，过滤，收集不溶物干燥，共得到该产品2.2Kg，液相检测总含量为93.2％。
实施例6
100Kg假马齿苋原料粉碎，加入400Kg 10％乙醇(内含0.6％氨水)80℃提取2次，每次2h，合并提取液减压浓缩干燥，粉碎过80目筛。
向上述粉碎过筛后的样品中加入170Kg 93％乙醇，常温搅拌溶解2次，每次1h，过滤，合并两次溶解液，减压浓缩至无醇，浓缩至原体积的1/7，加入1.4Kg质量浓度为0.8％的复合离子絮凝剂搅拌30min，过滤，收集滤液，再加入0.44Kg HB-F型活性炭脱色30min，过滤，收集滤液。
将上述得到的滤液采用截留分子量为2000～3000的超滤膜进行过滤，收集透过液，然后将此透过液再采用截留分子量为400～500的纳滤膜进行过滤，收集浓缩液，减压浓缩后干燥得到假马齿苋皂甙粗品。
将上述得到的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛。加入4.7Kg乙酸乙酯常温搅拌溶解2次，每次20min，过滤，收集不溶物干燥，共得到该产品2.25Kg，液相检测总含量为86.6％。
实施例7
实施例6得到的假马齿苋粗品粉碎，过80目筛。加入4.7Kg丙酮常温搅拌溶解2次，每次20min，过滤，收集不溶物干燥，共得到该产品2.18Kg，液相检测总含量为91.7％。

Claims (5)

1.一种从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1碱醇提取
将原料假马齿苋粉碎，采用原料质量3-5倍量且质量浓度为10％-30％乙醇溶液提取，浓缩干燥提取液，粉碎，所得样品备用；所述乙醇溶液内含乙醇溶液质量0.3％-0.8％的氢氧化钠、碳酸钠、氧化镁或氨水中任意一种；
步骤2料液澄清
向步骤1所得样品中加入样品质量5-10倍量质量浓度为90％-95％乙醇溶液，搅拌，过滤，减压浓缩，再加入絮凝剂搅拌，过滤，收集滤液，然后向滤液中加入活性炭脱色，再过滤，继续收集滤液；所述絮凝剂是质量浓度为0.8％-1.2％的阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂或复合离子絮凝剂；
步骤3膜分离
将步骤2所得的滤液通过超滤膜过滤，收集透过液，然后将透过液用纳滤膜过滤，收集浓缩液，浓缩干燥后即得假马齿苋皂甙粗品；
所述超滤膜的截留分子量为2000～3000或3000～5000中的一种；所述纳滤膜的截留分子量为400～500或500～600中的一种；
步骤4纯化
将步骤3所得的假马齿苋皂甙粗品粉碎，加入质量1-2倍量的有机溶剂溶解，过滤，收集不溶物进行干燥，即得的假马齿苋皂甙；所述有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中的一种或任意多种组合。
2.根据权利要求1所述的从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法，其特征在于，所述步骤1具体是：将原料假马齿苋粉碎，采用原料质量3-5倍量且质量浓度为10％-30％乙醇溶液提取两次，合并提取液并浓缩干燥，粉碎过80目筛，所得样品备用；所述乙醇溶液内含乙醇溶液质量0.3％-0.8％的氢氧化钠、碳酸钠、氧化镁或氨水中任意一种。
3.根据权利要求1或2所述的从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法，其特征在于，所述步骤2具体是：向步骤1所得样品中加入样品质量5-10倍量质量浓度为90％-95％乙醇溶液，搅拌溶解，过滤，减压浓缩至液体体积的1/10-1/5，再加入絮凝剂搅拌，过滤，收集滤液，然后向滤液中加入活性炭脱色，再过滤，继续收集滤液；
所述絮凝剂是质量浓度为0.8％-1.2％的阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂或复合离子絮凝剂；所述活性炭的型号为767活性炭、320活性炭、303活性炭或HB-F活性炭中的一种或任意多种的混合。
4.根据权利要求3所述的从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法，其特征在于：所述步骤2中絮凝剂与浓缩后液体的质量比为0.03-0.05:1；所述活性炭和絮凝剂澄清后滤液的质量比为0.01-0.03。
5.根据权利要求1所述的从假马齿苋中提取分离假马齿苋皂甙的方法，其特征在于，所述步骤4具体是：将步骤3所得的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛，加入质量1-2倍量的丙酮溶解，过滤，收集不溶物进行干燥，即得的假马齿苋皂甙。
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