WO2006093166A1

WO2006093166A1 - 米ペプチドを含む酵素処理物、およびそれを含有する生理活性作用改善組成物

Info

Publication number: WO2006093166A1
Application number: PCT/JP2006/303794
Authority: WO
Inventors: Tetsuya Kariya; Kenji Ozeki; Yumi Minami; Atsushi Koyama; Takako Ishimoto; Makoto Kakiuchi; Koji Kato; Takuo Tsuno
Original assignee: Tsuno Food Industrial Co., Ltd.
Priority date: 2005-02-28
Filing date: 2006-02-28
Publication date: 2006-09-08

Abstract

　本発明は米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液で抽出した抽出物にプロテアーゼとペプチダーゼを組み合わせて作用させて得られる生理活性作用を有する酵素処理物を提供することを目的とする。また、本発明の酵素処理物は、抗酸化活性、ショ糖分解酵素抑制活性、脂質代謝改善作用などの生理活性作用を有するので、本発明の酵素処理物を含む組成物は、生理活性作用改善組成物、機能性飲食品組成物、化粧料組成物、飼料組成物として有用である。　

Description

明細書

米ペプチドを含む酵素処理物、およびそれを含有する生理活性作用改善組成物

技術分野

[0001] 本発明は米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液で抽出した抽出物にプロテア一ゼとぺプチダーゼを組み合わせて作用させて得られ、ペプチド混合物を含有することを特徴とする酵素処理物、およびそれを含有する生理活性作用改善組成物、機能性食品組成物、化粧料組成物、飼料組成物に関する。

背景技術

[0002] 従来より、タンパク質は空腸内の酵素により完全にアミノ酸に分解された後、吸収されるものと考えられていた力タンパク質の一部はペプチドとして吸収されることが分かり、現在ではタンパク質の 2Z3までがペプチドとして吸収されること、更にペプチドの吸収系の方が遊離アミノ酸の吸収機構より速やかであることが実証されている。近年ペプチドの生体に及ぼす影響についての研究が盛んに行われるようになり、ぺプチドの高栄養価、ペプチド供給源としての利用効率向上といった機能面が重視され、ペプチドを利用した栄養素などの開発が食品分野で話題となっている。

[0003] 植物性タンパク質としては大豆起源のものが多ぐそのペプチドに関しても利用例は多ぐその機能性などの報告も多い。例えば抗酸ィ匕物質として大豆タンパク質をべプシン分解して得られる特定のペプチド (特許文献 1)、コングリシニン 7S成分とダリシニン 11S成分とを別々に加水分解して得られるペプチド (特許文献 2)などがある。小麦起源のタンパク質の利用例も多ぐそのペプチドに関しても各種の機能性が報告されて!/ヽる。小麦起源のタンパク質を酵素分解したグルタミンペプチドに消ィ匕器粘膜の増殖を促進させる機能があり（特許文献 3)、また小麦起源のタンパク質を加水分解して得られるペプチドには養殖魚に見られる連鎖球菌症に対する抗菌性が向上する報告がある (特許文献 4)。

[0004] 本発明者らが開発した米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液で抽出した抽出物は、米糠タンパク質を豊富に含有し、該米糠タンパク質は栄養価の面でも優れた植物性タンパク質であるが、その酵素処理物や生理機能については未だ明らかにされていない。

特許文献 1：特開平 9 - 157292号公報

特許文献 2：特開 2000 - 204369号公報

特許文献 3 :特開平 10- 101576号公報

特許文献 4：特開平 9 - 84528号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0005] 本発明は米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液で抽出した抽出物にプロテア一ゼとぺプチダーゼを組み合わせて作用させて得られるペプチド混合物を含有し、生理活性作用を有する酵素処理物を提供することを目的とする。また、本発明は前記酵素処理物を含有する生理活性作用改善組成物、機能性飲食品組成物、化粧料組成物または飼料組成物を提供することを目的とする。

課題を解決するための手段

[0006] 上記課題を解決するために、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液で抽出した抽出物にプロテア一ゼとぺプチダーゼとを組み合わせて作用させることにより、分子量範囲 200〜20000のペプチドを豊富に含む酵素処理物を得、その酵素処理物が抗酸化活性、ショ糖分解酵素抑制活性、脂質代謝改善作用などの生理活性作用を有することを見いだした。本発明者らは、これら知見に基づき更に研究を進め、本発明を完成するに至った。

[0007] すなわち、本発明は、

[1] 米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液で抽出した抽出物にプロテア一ゼとぺプチダーゼを組み合わせて作用させて得られ、ペプチド混合物を含有することを特徴とする酵素処理物、

[2] ペプチド混合物の主要部が分子量範囲 200〜20000のペプチドであることを特徴とする前記 [ 1 ]記載の酵素処理物、

[3] 中性乃至弱アルカリ性溶液の pHが 6. 5〜12であることを特徴とする前記 [1] または [2]に記載の酵素処理物、 [4] 前記 [1]〜 [3]のヽずれかに記載の酵素処理物を含有することを特徴とする生理活性作用改善組成物、

[5] 生理活性作用改善組成物が、抗酸化組成物、ショ糖分解酵素阻害組成物または脂質代謝改善組成物であることを特徴とする前記 [4]記載の組成物、

[6] 抗酸化組成物が、炎症、虚血性疾患、アレルギー、白内障、中風、心筋梗塞または癌を予防または治療するための組成物であることを特徴とする前記 [5]記載の組成物、

[7] ショ糖分解酵素阻害組成物が、食後過血糖を抑制するための組成物であることを特徴とする前記 [5]記載の組成物、

[8] 脂質代謝改善組成物が、高脂血症を予防または治療するための組成物であることを特徴とする前記 [5]記載の組成物、

[9] 生理活性作用改善組成物が、糖尿病、高血圧または肥満を予防または治療するための組成物であることを特徴とする前記 [4]記載の組成物、

[10] 生理活性作用改善組成物が機能性飲食品組成物であることを特徴とする前記 [4]記載の組成物、

[11] 酵素処理物が抗酸ィ匕活性を有するものであることを特徴とし、抗酸化活性のために用いられる旨の表示を付した前記 [10]記載の組成物、

[12] 酵素処理物がショ糖分解酵素阻害活性を有するものであることを特徴とし、ショ糖分解酵素阻害活性のために用いられる旨の表示を付した前記 [10]記載の組成物、

[13] 酵素処理物が脂質代謝改善作用を有するものであることを特徴とし、脂質代謝改善作用のために用いられる旨の表示を付した前記 [10]記載の組成物、

[14] 前記 [ 1]〜 [3]のヽずれかに記載の酵素処理物を含有することを特徴とする化粧料組成物、および

[15] 前記 [ 1]〜 [3]のヽずれかに記載の酵素処理物を含有することを特徴とする飼料組成物、

に関する。

また、本発明は、 [16] 前記 [ 1]〜 [3]の、ずれかに記載の酵素処理物を哺乳動物に投与することを特徴とする、生理活性作用を改善する方法、

[17] 生理活性作用の改善が、患者の酸化に起因する疾患を予防または治療するものであることを特徴とする前記 [16]記載の方法、

[18] 酸ィ匕に起因する疾患が、炎症、虚血性疾患、アレルギー、白内障、中風、心筋梗塞または癌であることを特徴とする前記 [ 17]記載の方法、

[19] 生理活性作用の改善が、ショ糖分解酵素の阻害または脂質代謝の改善であることを特徴とする前記 [16]記載の方法、

[20] ショ糖分解酵素の阻害が、食後過血糖の抑制であることを特徴とする前記 [1 9]記載の方法、

[21] 脂質代謝の改善が、高脂血症の予防または治療であることを特徴とする前記 [19]記載の方法、および

[22] 生理活性作用の改善が、糖尿病、高血圧または肥満の予防または治療であることを特徴とする前記 [16]記載の方法。

に関する。

また、本発明は、

[23] 生理活性作用改善組成物を製造するための前記 [1]〜[3]のいずれかに記載の酵素処理物の使用、

[24] 生理活性作用改善組成物が、抗酸化組成物、ショ糖分解酵素阻害組成物または脂質代謝改善組成物であることを特徴とする前記 [23]記載の使用、

[25] 抗酸化組成物が、炎症、虚血性疾患、アレルギー、白内障、中風、心筋梗塞または癌を予防または治療するための組成物であることを特徴とする前記 [24]記載の使用、

[26] ショ糖分解酵素阻害組成物が、食後過血糖を抑制するための組成物であることを特徴とする前記 [24]記載の使用、

[27] 脂質代謝改善組成物が、高脂血症を予防または治療するための組成物であることを特徴とする前記 [24]記載の使用、および

[28] 生理活性作用改善組成物が、糖尿病、高血圧または肥満を予防または治療するための組成物であることを特徴とする前記 [23]記載の使用、

に関する。

発明の効果

[0010] 本発明に係る酵素分解物は、抗酸化活性、ショ糖分解酵素抑制活性または脂質代謝改善作用などの生理活性作用を有する。抗酸化活性は、生体内の酸ィ匕によりもたらされる、例えば炎症、虚血性疾患、アレルギー、白内障、中風、心筋梗塞または癌などを抑制し得る。ショ糖分解酵素抑制（阻害)活性は、糖質の吸収を遅らせるので食後の血糖値の上昇を抑制し得る。脂質代謝改善作用は、脂質代謝異常が引き起こす生活習慣病 (例えば、糖尿病、高脂血症、高血圧、肥満など)や神経変性疾患などを抑制し得る。このため本発明に係る酵素分解物を含有する組成物は、抗酸化活性、ショ糖分解酵素抑制（阻害)活性または脂質代謝改善作用を有する生理活性作用改善組成物、機能性飲食品組成物、化粧料組成物、飼料組成物として有用である。また、本発明に係る酵素分解物は生理活性作用改善組成物などの添加剤として有用である。

また、本発明の酵素処理物は大豆ペプチドが有するような苦みがないか抑制されている。このため飲食品に配合されても、飲食品の風味を損ない難いので、種々の飲食品に添加、配合し得る。

また、本発明に係る酵素分解物の原材料となる米糠は、古くから食されてきた米から生成されるので安全に使用し得る。

また、本発明に係る酵素分解物は、精米後のいわば廃棄物である米糠を原料とするので、廃棄物の有効利用にもなり得る。

図面の簡単な説明

[0011] [図 1]図 1は、酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチドの分子量範囲を測定した結果を示す。図中、上から酵素処理物 1、酵素処理物 2、大豆ペプチド、チトクロ一ムじ、および L—カルノシンを示す。（実施例 7)

[図 2]図 2は、酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチドの SOD様活性を測定した結果を示す。（実施例 9)

[図 3]図 3は、酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチドの抗酸化活性をロダン鉄法で測定した結果を示す。（実施例 10)

[図 4]図 4は、酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチドの抗酸化活性を TBA 法で測定した結果を示す。（実施例 11)

[図 5]図 5は、酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチドのショ糖分解酵素活性阻害率を測定した結果を示す。（実施例 12)

発明を実施するための最良の形態

[0012] 本発明は、米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液で抽出した抽出物 (以下、米糠抽出物と略称することもある。）にプロテア一ゼとぺプチダーゼを組み合わせて作用させて得られ、ペプチド混合物を含有することを特徴とする酵素処理物に関する。以下、本発明の酵素処理物につき説明する。

[0013] 本発明の酵素処理物の原材料として使用される米糠としては、玄米を精米などして得られる米糠が挙げられる。また該米糠は、米糠であれば特に限定されず、例えば米糠力ゝら油分を抽出した後に得られる脱脂米糠なども含まれる。経済性、保存性、操作性などの点から、脱脂米糠が好ましい。

[0014] 米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液を用いて抽出することにより抽出物（以下、単に米糠抽出物ということもある。）を得ることができる。中性乃至弱アルカリ性溶液としては、例えば水 (例えば、精製水、蒸留水、水道水など)、塩類 (例えば塩ィ匕ナトリウムなど)の溶液、食品素材調製用に使用可能なアルカリ溶液、食品素材調製用に使用可能な有機溶剤 (例えば、エタノールなど)またはそれらを適宜組み合わせた溶媒（例えば 5〜90容量％のエタノール含有中性乃至弱アルカリ性溶液など）が挙げられる。中性乃至弱アルカリ性溶液の pHは約 6. 5〜 12力 S好ましく、約 6. 5〜： L 1がより好ましぐ約 7. 0〜： L 1がさらに好ましぐ約 7. 5〜10がとりわけ好ましぐ約 7. 5〜9が特に好ましい。アルカリとしては、例えば水酸ィ匕ナトリウム、水酸ィ匕カリウムなどが挙げられる。上記において、溶液として水溶液が好ましい。

[0015] 米糠カゝら抽出物を得るには、例えば米糠と中性乃至弱アルカリ性溶液を混合し、混合液を得る。米糠と中性乃至弱アルカリ性溶液との配合割合としては、例えば米糠 1 質量部に対して中性乃至弱アルカリ性溶液約 5〜50質量部、好ましくは約 5〜20質量部、さらに好ましくは約 8〜15質量部などが挙げられるが、特に限定されない。米糠タンパク質を例えば中性乃至弱アルカリ性水溶液で抽出する場合、米糠と上記 P

Hに調整した中性乃至弱アルカリ性水溶液とを前記配合割合で混合してもよぐ米糠と水とを前記配合割合で混合して、例えば約 10〜30質量％の水酸ィ匕ナトリウム水溶液や水酸ィ匕カリウム水溶液などで上記 pHに調整してもよ、。米糠と中性乃至弱アルカリ性溶液との混合は、米糠を均一に混合するため攪拌、振とうなどを行なうことが好ましい。

[0016] 次に、混合液中の米糠カゝら米糠タンパク質を含む中性乃至弱アルカリ性溶液に可溶化する成分 (以下、米糠タンパク質等という）を該溶液に抽出する。抽出温度は、約 0〜50°Cが好ましぐ約 0〜40°Cが特に好ましい。前記抽出温度には室温も含まれる。抽出時間は、特に限定されず通常、約 0. 5〜： LOO時間、好ましくは約 0. 5〜2 4時間、さらに好ましくは約 0. 5〜5時間である。抽出方法としては、例えば、静置法、攪拌法、振とう法またはカラム溶出法などが挙げられるが、攪拌法または振とう法などが好ましい。

[0017] 次に、可溶化された米糠タンパク質等を含む抽出液を米糠から分離する。抽出液を分離する方法としては、例えば、遠心分離法、濾過法、減圧膜濾過法、加圧膜濾過法または静置デカント法などが挙げられるが、好ましくは、遠心分離法である。

[0018] 分離された米糠タンパク質等を含む抽出液は、所望により濃縮または乾燥などすることができる。前記米糠タンパク質等を含む米糠抽出液の濃縮の方法としては、例えば（1)米糠タンパク質等を含む抽出液に有機溶媒を添加して析出する米糠タンパク質等を含む米糠抽出物を採取する方法；（2)米糠タンパク質等を含む抽出液の pH を弱酸性に調整して析出する米糠タンパク質等を含む米糠抽出物を採取する方法などが挙げられる。米糠タンパク質等を含む抽出液に有機溶媒を添加する方法としては、例えばエタノールやアセトンなどを約 50〜70容量⁰ /₀となるように抽出液に添カロして米糠タンパク質等を含む米糠抽出物を沈殿させて、沈殿を分離し取得する方法などが挙げられる。また、米糠タンパク質等を含む抽出液の pHを弱酸性に調整する方法としては、米糠タンパク質等を含む抽出液に無機酸類などを添加して抽出液の pHを弱酸性に調整して米糠タンパク質を含む米糠抽出物を沈殿させて、沈殿を分離し取得する方法などが挙げられる。無機酸類としては、特に限定されないが、例えば塩酸や硫酸などが挙げられる。 pHは約 2. 5〜6. 0とするのが好ましぐ約 3. 5〜5 . 5がより好ましい。また、米糠タンパク質等の濃縮の方法には、前記の他、例えばトリクロ口酢酸、スルホサリチル酸または硫酸アンモ-ゥムなどの添カ卩によって抽出液から米糠タンパク質等を含む米糠抽出物を沈殿させる公知の方法なども含まれる。これによつて分離し取得された沈殿は、米糠タンパク質の含有量が高ぐ抽出物として好ましい。

[0019] 生成した沈殿を分離する方法としては、例えば、遠心分離法、膜濾過法、濾過助剤を用いる濾過法などが挙げられる。遠心分離法により沈殿を分離する場合は、例えば、遠心分離器を用いて、約 100rpm〜30, OOOrpm、好ましくは約 500rpm〜3, 0 OOrpmで約 1分〜 1時間、遠心分離を行なうのが好ましい。あるいは、工業的規模で連続的に遠心分離を行う場合には、バスケット型遠心分離機、ディスク型遠心分離機、シャープレス型遠心分離機またはスクリューデカンタなどを用いて遠心分離を行うのが望ましい。膜濾過法により沈殿を分離する場合の膜としては、例えばセルロース膜や限外濾過膜などが挙げられる。膜濾過法による分離は、一定圧力（例えば、約 0 . 1〜1. OMPaなど)条件下で実施することができる。またセライトなどの濾過助剤を用いて濾別することもできる。乾燥方法としては、自然乾燥、加熱乾燥、噴霧乾燥、減圧常温乾燥、真空乾燥または凍結乾燥などが挙げられるが、噴霧乾燥または凍結乾燥が好ましい。また、後述する酵素処理を沈殿分離直後に行うのであれば、前記乾燥工程を省略することができる。

[0020] また、上記沈殿を分離した上清も、本発明における米糠抽出物に包含される。該上清も濃縮または乾燥などされるのが好まし、。濃縮または乾燥する方法としては上記した方法などが挙げられる。

[0021] 上記により得られる米糠抽出物は、米糠タンパク質の含有割合が高いものが好ましい。該タンパク質の含有量は、例えばケルダール法などにより測定できる。抽出物における米糠タンパク質の含有割合は、約 5質量％以上が好ましぐ約 10質量％以上力り好ましぐ約 20質量％以上がさらに好ましぐ約 40質量％以上が特に好ましい

[0022] 次、で、得られた抽出物に、プロテア一ゼとぺプチダーゼを組み合わせて作用させてペプチド混合物を含有する本発明の酵素処理物を得ることができる。プロテアーゼは、タンパク質分解酵素ともいい、その例としてタンパク質のペプチド結合の加水分解を触媒する酵素などが挙げられる。ぺプチダーゼの好ましい例として、比較的低分子量のペプチドのペプチド結合を加水分解する酵素が挙げられる。

[0023] 本発明に使用されるプロテアーゼとしては、特に制限はなぐ例えば酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはアルカリ性プロテアーゼなどの中力適宜選択できる。前記プロテアーゼの起源に特に制限はなぐ植物、動物組織または微生物のいずれであってもよい。酸性プロテアーゼとしては、例えば Aspergillus niger, Aspergi llus saitoi、 Rhizopus niveusまたは Rhizopus delemarなどの微生物由来酸'性プロテアーゼが好ましく挙げられる。中性プロテアーゼとしては、例えばパパイヤもしくはパイナップルなどの植物由来中性プロテアーゼ、ブタゃゥシの脾臓などの動物組織由来中'性プロテア一で、または Aspergillus oryzae ^ Aspergillus sojea、 Baci llus sub tills ^ Bacillus stearothermophilusもし \ i¾Bacillus amyloliquefaci ensなどの微生物由来中性プロテアーゼなどが好ましく挙げられる。アルカリ性プロテ ~~ゼとしては、 f列は Aspergillus oryzae ^ Aspergillus melleus、 Bacillus s ubtilis、 Bacillus licheniformis、 Bacillus alcalophilus、 Bacillus lentus、 Ba cillus amyloliquef aciens ^ Bacillus thermoproteolyticus、 Streptomyces g riseus、 Rizomucor miehei、 Rizomucor pusillus Lindtまたは Kluyveromyc es lactisなどの微生物由来アルカリ性プロテアーゼなどが好ましく挙げられる。中でも、 Aspergillus nigerまたは Aspergillus oryzaeなどの糸状菌（微生物）由来のプロテアーセ、 Bacillus subtilisまたは Bacillus thermoproteolyticusなどの糸田菌（微生物）由来のプロテアーゼがより好ましぐ Aspergillus niger由来の酸性プロテアーゼまたは Bacillus subtilis由来の中性プロテアーゼが更に好まし!/、。

プロテアーゼは、前記した植物、動物組織または微生物などから公知の方法で抽出、精製してもよぐ市販のプロテアーゼなどを使用してもよい。

プロテアーゼは 1種単独でまたは 2種以上を組み合わせて使用することができる。

[0024] 本発明に使用されるべプチダーゼとしては、特に制限はなぐ植物、動物組織または微生物由来のぺプチダーゼが挙げられ、例えば小麦もしくはアーモンドなどの植物由来ぺプチダ ~~ゼ、 Aspergillus niger、 Aspergillus oryzae、 Aspergillus s ojea、 Aspergillus melleus、 Bacillus subtilis、 Bacillus thermoproteolytic us、 Achromobactor lyticus、 Rhizopus oryzae、 Lactococcus lactisもしくは Yeastなどの微生物由来べプチダーゼまたはブタ脾臓、ブタ腸、ブタ腎臓、ゥシ脾臓などの動物組織由来べプチダーゼなどが挙げられる。中でも、 Aspergillus nigerもしくは Aspergillus oryzaeなどの糸状菌（微生物）由来ぺプチダーゼ、 Bacillus s ubtilisもしくは Bacillus thermoproteolyticusなどの細菌（微生物）由来ぺプチダ一で； ^好まし、 Aspergillus nig er¾しくは Aspergillus oryzae由来のへプチターゼがより好ましい。

[0025] また、本発明に使用されるぺプチダーゼには、アミノぺプチダーゼ、カルボキシぺプチダーゼ、ジぺプチダーゼ、トリべプチダーゼまたはグリコべプチダーゼなども包含される。

ぺプチダーゼは、前記した植物、動物組織または微生物などから公知の方法で抽出、精製してもよぐ市販のぺプチダーゼなどを使用してもよい。

ぺプチダーゼは 1種単独でまたは 2種以上を組み合わせて使用することができる。

[0026] 米糠抽出物にプロテア一ゼとぺプチダーゼを組み合わせて作用させる方法としては、まずプロテアーゼを作用させて力ぺプチダーゼを作用させる方法が好まし!/、。プロテアーゼを作用させる方法に特に制限はないが、米糠抽出物に、水とプロテアーゼを加え、 pHおよび温度をプロテア一ゼの至適 pHおよび至適温度に調整し、一定時間作用させる方法が好ましい。前記水としては、例えば精製水、蒸留水、水道水、湧き水などが挙げられるがこれらに限定されない。至適 pHは、用いるプロテアーゼにより異なる力酸性プロテア一ゼの至適 pHは、通常約 2. 0〜6. 4であり、約 2. 5 〜5. 5力 S好ましく、約 2. 5〜5. 0がより好ましい。中性プロテア一ゼの至適 pHは、通常約 6. 5〜7. 9であり、約 6. 8〜7. 5が好ましい。アルカリ性プロテア一ゼの至適 p Hは、通常約 8. 0〜11であり、約 8. 5〜10が好ましい。至適温度は、通常約 20〜6 5°Cであり、約 45〜60°Cが好ましい。至適 pHおよび至適温度は、使用するプロテアーゼに即して適切な pHおよび温度を上記範囲力適宜選択するのが好ま U、。具体的には、例えば Aspergillus niger由来の酸性プロテアーゼであるスミチーム AP (新日本化学工業株式会社製)を使用する場合、その至適 pHとしては約 3で、至適温度としては約 60°Cが好ましぐ Aspergillus niger由来の酸性プロテアーゼであるオリエンターゼ 20A (エイチビィアイ株式会社製)を使用する場合、その至適 _PHとしては約 2. 5で、至適温度としては約 55°Cが好ましぐ Bacillus subtilis由来の中性プロテアーゼであるオリエンターゼ 90N (エイチビィアイ株式会社製）の至適 pHとしては約 7で、至適温度としては約 55°Cが好ましい。

プロテア一ゼの添力卩量は米糠抽出物 1質量部に対して約 1Z10000〜1Z10質量部が好ましぐ約 iZiooo〜iZio質量部がより好ましいが、これに限定されるものではない。

プロテアーゼを作用させる時間は、特に制限はないが、通常約 0. 5〜48時間、好ましくは約 1〜24時間である。

ぺプチダーゼを作用させる方法に特に制限はないが、上記プロテアーゼを作用させた後の溶液に、ぺプチダーゼを加え、その混合物の pHおよび温度をぺプチダーゼの至適 pHおよび至適温度に調整し、一定時間作用させる方法が好ましい。前記プロテアーゼを作用させた後の溶液は、プロテアーゼを作用させた後の溶液を約 75 〜100°Cに加熱して溶液中のプロテアーゼを失活させた後の溶液であってもよい。至適 pHは、用いるぺプチダーゼにより異なる力通常約 5. 0〜9. 0力 S好ましく、約 6 . 5〜8. 0がより好ましい。至適温度は、通常約 20〜65°Cであり、約 45〜60°Cが好ましい。至適 pHおよび至適温度は、使用するぺプチダーゼに即して適切な pHおよび温度を上記範囲から適宜選択するのが好ましい。具体的には、例えば Aspergillu s niger由来べプチダーゼであるスミチーム LP50D (新日本化学工業株式会社製）を使用する場合、その至適 pHとしては約 7. 5で至適温度としては約 50°Cが好ましく、スミチーム LPL (新日本ィ匕学工業株式会社製)を使用する場合、その至適 pHとしては約 6で至適温度としては約 50°Cが好ましぐスミチーム FP (新日本化学工業株式会社製)を使用する場合、その至適 pHとしては約 6. 2で至適温度としては約 52°Cが好ましい。

ぺプチダーゼの添加量は、米糠抽出物 1質量部に対して約 1Z10000〜1Z10質量部が好ましぐ約 1Z1000〜1Z10質量部がより好ましいが、これに限定されるものではない。

ぺプチダーゼを作用させる時間は、特に制限はないが、通常約 0. 5〜48時間、好ましくは約 1〜24時間である。

[0028] ぺプチダーゼを作用させた後、ぺプチダーゼ処理した溶液中のプロテアーゼおよび Zまたはべプチダーゼを失活させるのが好ましい。失活は、ぺプチダーゼを反応させた後の溶液 (以下、酵素処理液という。）を約 75〜： LOO°Cで約 5分〜 2時間、好ましくは約 10分〜 1時間加熱処理することにより実施できる。または、約 110°C〜150 °Cで約 1秒〜 15分間、好ましくは約 125°C〜145°Cで約 5秒〜 30秒間、加圧加熱処理することにより失活させる事ができる。次いで、プロテアーゼおよびべプチダーゼを失活させた後の酵素処理液は、濃縮、乾燥させるのが好ましい。濃縮、乾燥は公知の手段を用いることができ、例えば、自然乾燥、加熱乾燥、噴霧乾燥、減圧常温乾燥、真空乾燥または凍結乾燥などが挙げられるが、噴霧乾燥または凍結乾燥が好ましぐ必要に応じて乾燥前に減圧濃縮することで、より効率よく乾燥を行う事ができる。

[0029] 本発明の酵素処理物は、ペプチド混合物を含有する。該ペプチド混合物は、分子量範囲約 200〜20000、好まし <は約 200〜 10000のペプチド力含まれる。ぺプチド混合物中のペプチドの分子量範囲は、例えば SDS— PAGE (ドデシル硫酸ナトリゥム一ポリアクリルアミドゲル電気泳動）または高速液体クロマトグラフィーなどで測定できる。

本発明の酵素処理物は、それに含まれるペプチドの分子量範囲から、市販の大豆ペプチドよりも低分子のペプチドを豊富に含むペプチド混合物を含有し得る。

[0030] 本発明の酵素処理物は、種々の生理活性を有する。該生理活性としては、例えば抗酸ィ匕活性、ショ糖分解酵素阻害活性または脂質代謝改善作用などが挙げられる。

[0031] 本発明の酵素処理物は、少なからず水溶性成分を含有する。水溶性成分の含有率は、酵素処理物に対して約 5質量％以上である。

[0032] 本発明の酵素処理物は、通常、水分を約 0. 5〜15質量％含有し得る。水分は、公知の方法、例えば、常圧加熱乾燥法、カールフィッシャー法などにより測定できる。本発明の酵素処理物の灰分は、約 5〜35質量％であり、好ましくは約 7〜20質量

%である。灰分の測定は、公知の方法、例えば強熱残分を測定することなどにより実施できる。

[0033] 本発明の酵素処理物のペプチド含量は、約 15〜90質量％であるのが好ましい。

ペプチド含量は、公知の方法、例えば酵素処理物を硫酸過酸化水素分解後、小型反射式光度計などを用いて測定し得る。

本発明の酵素処理物のアミノ酸分析による総アミノ酸組成は、ァスパラギン酸を約 1 0〜20モル⁰ /₀、グルタミン酸を約 10〜25モル⁰ /₀、グリシンを約 5〜17モル⁰ /₀、セリンを約 2〜8モル⁰ /₀、ァラニンを約 6〜14モル⁰ /₀、スレオ-ンを約 2〜6モル⁰ /₀、プロリンを約 1〜7モル⁰ /₀、ノリンを約 2〜10%、メチォニンを約 0. 1〜4モル⁰ /₀、イソロイシンを約 1〜6モル⁰ /₀、ロイシンを約 1〜10モル⁰ /₀、フエ-ルァラニンを約 0. 1〜7モル⁰ /₀ 、ヒスチジンを約 1〜4モル⁰ /₀、トリプトファンを約 0〜3モル⁰ /₀、リジンを約 1〜7モル⁰ /₀ およびアルギニンを約 2〜 10モル％含有しうる。アミノ酸分析は、公知の方法で測定することができる。具体的には、例えば、酵素処理物を酸 (例えば、塩酸など)加水分解、アルカリ（例えば、水酸ィ匕ナトリウムなど)加水分解または過ギ酸処理後、該加水解物または過ギ酸処理物をアミノ酸自動分析装置などに付することにより測定し得る

[0034] 本発明の酵素処理物は、熱分析において吸熱反応と発熱反応を示し得る。酵素処理物の熱分析における吸熱反応を示す温度帯は、 1箇所以上存在することが好ましぐ特に 1. 5mgの分析で 2uV以上の信号を示す温度帯は、約 1〜5箇所存在することがより好ましい。発熱反応を示す温度帯は、 1箇所以上存在することが好ましぐ特に 1. 5mgの分析で 2uV以上の信号を示す温度帯は、約 1〜5箇所存在することがより好ましい。

[0035] 抗酸化活性は、生体内における一重項酸素、ヒドロキシラジカルや過酸ィ匕水素などの活性酸素の消去活性が含まれる。過剰な活性酸素は、生体内の正常な細胞、細胞膜ゃ DNAを攻撃したり、脂質を酸化させる。攻撃された細胞などや酸化されて生成される過酸化脂質は種々の病気、例えば炎症、虚血性疾患、アレルギー、白内障、中風、心筋梗塞または癌などを誘発したり、前記症状を悪化させ得る。本発明の酵素処理物は、抗酸化活性を有するので、該酵素処理物を含有する本発明の組成物は前記症状の予防または治療剤として使用し得る。また、本発明の機能性飲食品組成物は、抗酸化活性を有する酵素処理物を含有するので、抗酸化活性のために用いることができ、過剰な活性酸素などにより誘発される病気や症状などを抑制し、改善し得る。

抗酸化活性は、公知の方法、例えばロダン鉄法、 TBA (チォバルビツール酸)法、シトクロム C法、 NBT (ニトロブルーテトラゾリゥム）法、ェピネフリン法または亜硝酸法などにより測定し得る。

[0036] ショ糖分解酵素は、ショ糖のブドウ糖と果糖の結合部分を切断する酵素を、、、スクロースおよびインベルターゼなどが含まれる。ショ糖分解酵素が阻害されると、二糖類から単糖類への分解が阻害されるので、糖類の消化吸収が阻害され、例えば食後の血糖値の上昇を抑制し得る。このため、本発明の酵素処理物を含有する組成物は、ショ糖分解酵素によってもたらされる食後の血糖値の上昇抑制剤、特に糖尿病患者における食後過血糖の抑制剤として使用し得る。また、本発明の機能性飲食品組成物は、ショ糖分解酵素阻害活性を有する酵素処理物を含有するので、例えば糖尿病患者における食後過血糖の抑制または改善に好ましく用いることができる。

ショ糖分解酵素阻害活性の測定方法としては、公知の方法、例えばショ糖と小腸粗酵素とを反応させ、生成するグルコース量を測定する方法や、ショ糖をグルコースとフラタトースに加水分解するインベルターゼの反応速度を測定する方法などが挙げられる。

[0037] 脂質代謝改善作用としては、高脂血症の改善作用などが挙げられ、例えば LDLコレステロールの低下と HDLコレステロールの上昇、および HDLコレステロール Z総コレステロール比の改善などを内容とする血清総コレステロールの低下あるいは上昇抑制作用、ならびに肝臓コレステロール、肝臓トリグリセリドまたは血中トリグリセリドの低下あるいは上昇抑制作用などが含まれる。このため、本発明の酵素処理物を含有する組成物は、例えば動脈硬化症、心疾患、脳血管性疾患などの虚血性疾患の危険因子となる高脂血症、あるいは糖尿病、高血圧または肥満などの予防または治療剤として使用し得る。また、本発明の機能性飲食品組成物は、脂質代謝改善作用を有する酵素処理物を含有するので、例えば高脂血症、糖尿病、高血圧または肥満などの改善に好ましく用いることができる。脂質代謝改善作用は、後記する実施例の記載の方法などにより測定できる。

[0038] 本発明に係る酵素処理物は、 1日あたりの摂取量力例えば、約 0. 05〜40g、好ましくは約 0. 2〜： LOgとなるように生理活性作用改善組成物または機能性飲食品組成物などに配合されることが好ましい。

[0039] 本発明の係る生理活性作用改善組成物は、ヒトのほか、ヒト以外の哺乳動物（例えば、サル、ゥシ、ゥマ、ブタ、ヒッジ、ィヌ、ネコ、ラット、マウス、チンパンジー等）にも適用できる。

[0040] 本発明に係る生理活性作用改善組成物は、種々の製剤形態に製造し得る。組成物の製剤形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、坐剤などの固形剤、またはシロップ剤、注射剤などの液剤などが挙げられる。顆粒または錠剤として製造する場合には、例えば賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロースなど）、滑沢剤 (ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウムなど)または結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、カルメロース液、アラビアゴム液、ゼラチン液、アルギン酸ナトリウム液など)などを用いることにより任意の剤形を製造することができる。また、顆粒剤または錠剤には、適当なコーティング剤 (ゼラチン、白糖、ァラビアゴム、カルナパロウなど)または腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、カルボキシメチルェチルセルロースなど）などで剤皮を施してもよ！、。

[0041] カプセル剤として製造する場合には、適当な賦形剤、例えば流動性と滑沢性を向上させるためのステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルクまたは軽質無水ケィ酸など、また加圧流動性のための結晶セルロースや乳糖などの他、上記崩壊剤などを適宜添加したものを均等に混和または粒状もしくは粒状としたものに適当なコーティング剤で剤皮を施したものを充填するカゝ、適当なカプセル基剤（ゼラチンなど）にグリセリンまたはソルビトールなどカ卩えて塑性を増したカプセル基剤で被包成形することもできる。これらカプセル剤には必要に応じて、着色剤、保存剤 [二酸化ィォゥ、パラベン類 (パラォキシ安息香酸メチル、パラォキシ安息香酸ェチル、パラォキシ安息香酸プロピル）]などを加えることができる。カプセル剤は通常のカプセルの他、腸溶性コーティングカプセル、胃内抵抗性カプセルまたは放出制御カプセルとすることもできる。腸溶性カプセルとする場合、腸溶性コーティング剤でコーティングした化合物または化合物に上記の適当な賦形剤を添加したものを通常のカプセルに充填または、カプセル自身を腸溶性コーティング剤でコーティング、もしくは腸溶性高分子を基剤として成形することができる。

坐剤として製造する場合には坐剤基剤 (例えばカカオ脂、マクロゴールなど)を適宜選択して使用することができる。

[0042] シロップ剤として製造する場合、例えば安定剤 (ェデト酸ナトリウムなど）、懸濁化剤

(アラビアゴム、カルメロースなど）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖など)または芳香剤などを適宜選択して使用することができる。

[0043] 注射剤として製造する場合、医薬上許容される添加物、例えば等張化剤 (塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリコールなど）、緩衝剤（リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クェン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸緩衝液、ィプシロンアミノカブロン酸緩衝液など）、保存剤 (パラォキシ安息香酸メチル、ノラオキシ安息香酸ェチル、パラォキシ安息香酸プロピル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化べンザルコ-ゥム、デヒドロ酢酸ナトリウム、ェデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂など）、増粘剤（ヒドロキシェチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなど）、安定化剤（亜硫酸水素ナトリウム、チォ硫酸ナトリウム、ェデト酸ナトリウム、クェン酸ナトリウム、ァスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルェンなど)または pH調整剤 (塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など)などを適宜添加した溶液に溶解または分散することによって製造することができる。

上記シロップ剤または注射剤における添加剤の添加量は、添加する添加剤の種類、用途などによって異なる力添加剤の目的を達成し得る濃度を添加すればよぐ等張化剤は、通常、浸透圧が約 229〜343mOsmとなるよう、約 0. 5〜5. 0質量％を添加する。また、緩衝剤は約 0. 01〜2. 0質量％程度、増粘剤は約 0. 01〜： L 0質量％程度、安定化剤は約 0. 001〜1. 0質量％程度添加する。 pH調整剤は、適宜添加し、通常 pH約 3〜9、好ましくは約 4〜8になるように添加する。 [0044] 本発明に係る機能性飲食品組成物は、酵素処理物をそのまま服用する形態であつてもよく、また所望により通常食品に用いられる種々の添加剤を配合し、公知の方法で粉末、錠剤、顆粒剤、カプセル剤または液剤などの形態に製剤化してもよい。錠剤や顆粒剤には、糖衣を施してもよい。

添加剤としては、例えば栄養強化剤（例えば、ローヤルゼリー、ビタミン、プロテイン、レシチン、ミネラル、アミノ酸など）、賦形剤（例えば、セルロース、乳糖、デン粉、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビトール、アルギン酸など）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（HPC)、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC)、デン粉など )、増粘剤（例えば、ぺクチン、グァーガム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ァルギン酸ナトリウムなど）、乳化剤（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、レシチンなど）、着色料 (例えば、ルティン脂肪酸エステル、ゥコン色素、カラメル、カロテンなど）、香料 (例えば、バニラ香料、力-香料など）、調味料 (例えば、 L—グルタミン酸ナトリウム、グリシン、 5，ーリボヌクレオチドニナトリウム、乳清ミネラルなど）、保存剤（例えば、ソルビン酸など)または酸化防止剤（例えば、ァスコルビン酸など）などが挙げられる力これらに限定されない。

[0045] 本発明に係る機能性飲食品組成物は、例えばビスケット、クッキー、ケーキ、キャンデー、チョコレート、チューインガム、和菓子などの菓子類;パン、麵類、ごはん、豆腐もしくはその加工品；発酵食品；発泡酒、焼酎、清酒、薬用酒などのアルコール飲料；みりん、食酢、醤油、味噌、ドレッシングなどの調味料；ヨーグルト、ハム、ベーコン、ソ一セージ、マヨネーズなどの畜農食品；かまぼこ、揚げ天、はんぺんなどの水産食品；スープや味噌汁などの汁物類;果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料、茶、コーヒー、ミルク、ココアなどの飲料などの形態であってもよ、。

[0046] 本発明に係る化粧料組成物は、上記した生理活性作用を有する酵素処理物を含有するので、例えば美肌効果や美白効果を発揮し得る。

本発明に係る化粧料組成物において、酵素処理物は、化粧料組成物に対して、例えば、約 0. 01〜： LO質量％、好ましくは約 0. 01〜2質量％となるように化粧料組成物中に配合されることが好ま、。

[0047] また、本発明に係る飼料組成物は、上記した生理活性作用を有する酵素処理物を含有するので、飼料を食餌する動物、家禽類または魚類における、例えば活性酸素などに起因する病気 (例えば、炎症など)や高脂血症などを抑制し得る。

本発明に係る飼料組成物において、酵素処理物の 1日あたりの飼料に対する摂取率は、例えば、約 0. 001-1. 5質量％、好ましくは約 0. 005-0. 3質量％となるように、酵素処理物が飼料組成物中に配合されることが好ま、。

[0048] 以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限られるものではない。なお、以下の実施例において％は特に明記しない場合、質量％を示す。

実施例 1

[0049] 脱脂米糠 3kgに水 30Lをカ卩え、 25%水酸化ナトリウム水溶液にて pHを 8. 5に調整しながら室温で 1時間撹拌した。その後、遠心分離（1, 500rpm X 30秒間）で抽出液と残渣に分離した。抽出液に 36%塩酸をカ卩えて pH3. 0に調整し、室温にて 1時間撹拌した。その後、遠心分離 (3, OOOrpm X 1分間）にて沈澱を分離し、凍結乾燥により乾燥した。得られた凍結乾燥品を米糠抽出物 1とした。

米糠抽出物 1の収量は 240gで、収率は 8. 0%であった。

米糠抽出物 1の成分分析を、日本食品標準成分表分析マニュアル (科学技術庁資源調査会食品成分部会編）に従って測定した。その結果、米糠抽出物 1の成分は、水分 2. 6gZl00g (常圧加熱乾燥法）、タンパク質 62gZl00g (ケルダール法）、脂質 4. SgZlOOg (酸分解法)、灰分 7. 4gZl00g (直接灰化法)、糖質 17. 7g/10 Og (他の組成より算出）、食物繊維 4. 6gZl00g (酵素重量法)およびナトリウム 98m gZlOOg (原子吸光度法)であった。

[0050] また、米糠抽出物 1のアミノ酸組成を、アミノ酸自動分析システム Prominence (株式会社島津製作所製)を用いて測定し、米糠抽出物 1、粉末状大豆タンパクおよび粉末状小麦タンパクのアミノ酸スコア一を比較した (表 1)。なお、粉末状大豆タンパクおよび粉末状小麦タンパクのアミノ酸組成は改定日本食品アミノ酸組成表を引用した。米糠抽出物 1は大豆タンパク質に匹敵する栄養価の高いタンパク質を含有することが分力つた。

[0051] [表 1] アミノ酸スコア一

[0052] 米糠抽出物 1 (タンパク質含量 62%) 300gに 1. 8Lの水とオリエンターゼ 90N (エイチビィアイ株式会社製） 1. 5gをカ卩え、 pH7、 55°Cで一晩プロテアーゼ処理した。次 V、で、プロテアーゼ処理した溶液にスミチーム FP (新日本化学工業株式会社製） 1. 5gを加え、 pH6. 2、 52°Cでー晚ぺプチダーゼ処理を行なった。ぺプチダーゼ処理後、酵素（プロテアーゼおよびべプチダーゼ)処理液を 80°Cで 30分間加熱し、酵素を失活させた。酵素失活後、酵素処理液を凍結乾燥し、酵素処理物の粉末 311gを得た（酵素処理物 1；ペプチド含量 60〜70%)。

実施例 2

[0053] 脱脂米糠 3kgに水 30Lをカ卩え、 25%水酸化ナトリウム水溶液にて pHを 8. 5に調整しながら室温で 1時間攪拌した。その後、遠心分離（1, 500rpm X 30秒間）で抽出液と残渣に分離した。抽出液に 36%塩酸をカ卩えて pH3. 0に調整し、室温にて 1時間攪拌した。その後、遠心分離 (3, OOOrpm X 1分間）にて沈殿を分離し、上清を凍結乾燥により乾燥した。得られた凍結乾燥品を米糠抽出物 2とした。

米糠抽出物 2の収量は 390gで、収率は 13%であった。

米糠抽出物 2 (300g)に 1. 8Lの水とスミチーム AP (新日本ィ匕学工業株式会社製） 1. 5gを加え、 pH3、 60°Cでー晚プロテアーゼ処理した。次いで、プロテアーゼ処理した溶液にスミチーム FP1. 5gを加え、 pH6. 2、 52°Cでー晚ぺプチダーゼ処理を行なった。ぺプチダーゼ処理後、酵素（プロテアーゼおよびべプチダーゼ）処理液を 80 °Cで 30分間加熱し、酵素を失活させた。酵素失活後、酵素処理液を凍結乾燥し、酵素処理物の粉末 310gを得た (酵素処理物 2；ペプチド含量 30〜35%)。

実施例 3

[0054] 酵素処理物 1と酵素処理物 2、対象として大豆ペプチド 100 (株式会社ファイン製）の食味試験を行った。食味試験は、 10名の健康ボランティアで行い、苦味'えぐ味' 旨味を観察し、苦味，えぐ味を感ずれば— 1点、旨味を感ずれば 1点を与えた。 8名の合計を和した結果を表 2に示した。高得点の方が、食味が良好と判断した。酵素処理物 1および酵素処理物 2は大豆ペプチド 100 (株式会社ファイン製)よりも苦味やえぐ味が少なぐ旨味があることが分力つた。

[0055] [表 2] 食味試験

実施例 4

[0056] 酵素処理物 1と酵素処理物 2の溶解性試験を行った。酵素処理物 1 (0. Olg)または酵素処理物 2 (0. lg)に精製水またはアルカリ水溶液 10mLをカ卩えて攪拌し、遠心分離後の沈殿物の乾燥重量を測定し、溶解率を測定した。

酵素処理物 1は酵素処理物 2に比較して溶解しにくく水には懸濁する性質があるが、酵素処理物 2は水に対して溶解しやすい（表 3)。

[0057] [表 3] 溶解率（ 2 0 °C，％)

実施例 5

[0058] 酵素処理物 1と酵素処理物 2について水分と灰分を測定した。水分は日本薬局方（乾燥減量試験法)、灰分は日本薬局方 (強熱残分試験法)を用いた。

酵素処理物 1の水分は 10. 5%、灰分は 8. 2%、酵素処理物 2の水分は 12. 8%、灰分は 12. 2%であった。

実施例 6

[0059] 酵素処理物 1と酵素処理物 2の熱分析を行った。熱分析は示差熱重量同時測定装置 TGZDTA6200 (セイコーインスツルメンッ株式会社製)で測定した。熱分析における昇温条件は、 30〜300。Cは 30。CZ分、 300〜500。Cは 2。CZ分、 500〜70 0°Cは 10°CZ分となるよう設定した。

結果、酵素処理物 1は 70〜80°C付近と 250〜350°C付近で吸熱反応を示し、 450 〜500°C付近で発熱反応を示した。また、酵素処理物 2は 130〜150°C付近および 220〜270。C付近に吸熱反応を示し、 470〜520。C付近および 730〜770。C付近に発熱反応を示した。

実施例 7

[0060] 酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチド 100 (株式会社ファイン製)の分子量分布を高速液体クロマトグラフィーで測定した。高速液体クロマトグラフィーは以下の条件で実施した。分子量マーカーとして、チトクローム C (分子量 12327 ;和光純薬株式会社製)および L一力ルノシン (分子量 226. 24；和光純薬株式会社製)を用いた。

その結果を図 1に示した。

[0061] 高速液体クロマトグラフィーの条件：装置：高速液体クロマトグラフィー (日本分光株式会社製）カラム： Asahipak GS620H, 520H (30°C)

検出： 220nm(40°C)

条件：流速 0. 8mLZ分

移動相： 0. 01%SDS/0. 2M NaCl/リン酸ナトリウム緩衝液 (pH6. 8) サンプル濃度: 0. lwt% [調製溶液 (移動相）]

実施例 8

酵素処理物 1、酵素処理物 2のアミノ酸分析を行った。アミノ酸分析は、アミノ酸自動分析システム Prominence (株式会社島津製作所製)を用いた。その結果を表 4に示した。

[表 4]

酵素処理物のアミノ酸組成

酵素処理物 1 酵素処理物 2

総アミノ酸（モ W) 遊離アミノ酸 (モル« 総アミノ酸 (モル «

ァス /、°ラキ'ン酸 13 9 2 9 16.4

スレ才ニン 3 9 4. 5 4.3

セリン 5 7 2. 9 3.7

ク'ルタミン酸 14 0 10. 2 19.9

フ。口リン 4. 9 1. 8 3.6

ク'リシン 9. 7 2. 2 13.9

ァラニン 9. 2 7. 2 11.7

シスチン 0. 0 0. 7 0.0

Λ*リン 6. 5 9. 9 4.5

メチ才ニン 1. 5 2. 6 2.2

イソ!]イシン 3. 4 5. 6 2.2

ロイシン 6. 9 22. 2 2.9

チロシン 1. 9 3. 4 0.9

フ I二ルァラニン 4. 0 6. 3 1.7

ヒスチシ'ン 2. 7 2. 9 2.1

トリトフアン 0. 0 0. 0 0.5

リシ'ン 4. 6 5. 1 4.0

アルキ'ニン 7. 2 9. 9 5.5 実施例 9

酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチド 100 (株式会社ファイン製)をぺプチド含量が 1%となるように蒸留水に溶解し、被検液とした。スーパーォキシドジスムターゼ (SOD)様活性を、 SODテストヮコー（和光純薬工業株式会社製)を用い NBT 還元法にて測定した。 SOD様活性はジホルマザン形成の減少の程度を、阻害率として求めた。ブランクは被検液の代わりに蒸留水を用いた。盲検は、本検における酵素液の代わりに 0.1Mリン酸緩衝液 (pH8.0)を用いた。

[数 1]

{(Ab 1一 Ab 1 b 1 ) - (As _As b 1 )}

SOD活性（阻害率％) = X 1 00

(Ab 1 -Ab 1 b 1 )

As:本検、被検液の吸光度

Abl:本検、ブランクの吸光度

Asbl:盲検、被検液の吸光度

AbM:盲検、ブランクの吸光度

その結果を図 2に示した。酵素処理物 1の SOD様活性が一番強ぐ次に酵素処理物 2の SOD様活性が強力つた。本発明の酵素処理物 1および酵素処理物 2は、大豆ペプチドよりも活性酸素消去活性がはるかに強ぐ抗酸ィ匕活性を持つ機能性素材であることが分力つた。

実施例 10

酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチド 100 (株式会社ファイン製)をぺプチド含量が 1%となるように蒸留水に溶解し、被検液とした。ロダン鉄法により抗酸ィ匕活性の測定を行った。すなわち、酵素処理物 1、酵素処理物 2または大豆ペプチドの水溶解溶液 0. lmLに、 75%エタノーノレ 4.7mL、 30%チォシアン酸アンモ-ゥム 0 . lmLおよび 0.02M FeCl—3.5%塩酸 0. lmLを加え攪拌し、 3分後に 500nm

2

における各溶液の吸光度を測定した。ブランクは被検液の代わりに蒸留水を用いた

[数 2]

(被検液の吸光度）

ロダン鉄生成抑制率（％) = 1 00 X 1 00

(ブランクの吸光度）その結果を図 3に示した。ロダン鉄法により抗酸ィ匕活性は、酵素処理物 2が一番強ぐ次に酵素処理物 1が強力つた。本発明の酵素処理物 1および酵素処理物 2は、大豆ペプチドよりもロダン鉄法による抗酸ィ匕活性がはるかに強ぐ強い抗酸ィ匕活性を持つ機能性素材であることが分力つた。

実施例 11

[0065] 酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチド 100 (株式会社ファイン製)をぺプチド含量が 1%となるように蒸留水に溶解し、被検液とした。チォバルビツール酸 (TB A)法により抗酸化活性の測定を行った。すなわち、酵素処理物 1、酵素処理物 2または大豆ペプチドの水溶解溶液 0. 2mLに、 Fe (II)溶液（ImM FeSO · 7Η Ο, 1

4 2 mM EDTA) 0. 2mLおよび過酸化水素 0. 2mLと lOmMデォキシリボース 0. 2m Lを加え、 37°Cで 2時間反応を行った。反応後の溶液に、 ImMトリクロ口酢酸 lmLおよび l%TBAlmLをカ卩え、 100°Cで 10分間加熱した。室温まで冷却後に 532nmにおける各溶液の吸光度を測定した。ブランクは被検液の代わりに蒸留水を用いた。

[数 3]

(サンプルの吸光度）

T B A生成抑制率（％) = 1 0 0 - X 1 0 0

(プランクの吸光度）その結果を図 4に示した。酵素処理物 1および酵素処理物 2はほぼ同等の TBA活性値を示した。本発明の酵素処理物 1および酵素処理物 2は、大豆ペプチドよりも強ぐ抗酸ィ匕活性を持つ機能性素材であることが分力つた。

実施例 12

[0066] 酵素処理物 1、酵素処理物 2および大豆ペプチド 100 (株式会社ファイン製)をぺプチド含量が 1%となるように蒸留水に溶解し、被検液とした。以下に示す調製方法を示すラット小腸粗酵素を用いて被検液のスクラーゼ活性阻害率（ α—ダルコシダーゼ活性阻害率)を測定した。

ラット小腸粗酵素の調製方法： Rat intestinal acetone powder (シグマ社製）〖こ 10倍容の 0. 2Mリン酸緩衝液 (pH6. 0)を加え、 8000rpm、 30分間の遠心分離後、得られた上清をラット小腸粗酵素とした。

スクラーゼ活性阻害率の測定方法:被検液 0. 5mLに、 2%ショ糖 1. 5mL、0. 5M リン酸緩衝液 (ρΗ6. 0) 0. 5mLおよびラット小腸粗酵素液 0. 5mLを加え、 37°Cで 1 時間反応させた。反応後、各溶液中におけるグルコース生成量をグルコース ellテストヮコ一 (和光純薬工業株式会社製)により測定した。阻害率は被検液の代わりに蒸留水を添加して同様に操作して得られた値をブランクとし、そのブランク値を基準に以下の計算式より導き出した。

[数 4]

活性阻害率（％) = IOO—BZAX 100

A：ブランクのグルコース生成量、 B：被検液のグルコース生成量

[0067] その結果を図 5に示した。酵素処理物 2はショ糖を分解するスクラーゼ活性抑制効果が最も高ぐ酵素処理物 1もその活性抑制効果が大豆ペプチドよりも高いことが分かった。従って本発明の酵素処理物 1および酵素処理物 2は、大豆ペプチドよりもショ糖分解酵素活性抑制効果があり、糖尿病対応食品素材として有用であることが分かった。

実施例 13

[0068] 飲食品材料に酵素処理物 1または 2を配合し、定法に従って飲食品を製造した。製造した飲食品を 10人のパネラーが試食した。酵素処理物 1または 2を配合して製造した飲食品の両者をともに美味しいと 10人のパネラーが判断した飲食品の配合例を以下に示す。ウーロン茶やコンソメスープでは酵素処理物 2が透明に溶解した。

[0069] クッキー（30個分）

薄力粉： lOOg

ベーキングパウダー：小さじ 2

卵： 1個

バター： 80g

牛乳：大さじ 2

砂糖: 20g

酵素処理物 1または 2: lg

[0070] アプリコットチーズケーキ（18cm丸型一台分）

クリームチーズ： 200g バター： 30g

薄力粉: 30g

卵： 2個

レモン汁：大さじ 1

グラニュー糖: 60g

酵素処理物 1または 2 :4g

アプリコットジャム：適量

[0071] 抹茶ミルク（2人前）

抹茶:小さじ 2

熱湯： 200mL

牛乳： 150mL

グラニュー糖： 20g

酵素処理物 1または 2 : 3g

[0072] 野菜スープ（2人前）

水： 350mL

固形コンソメ： 1個

キャベツ： 2枚

ニンジン： 2cm

タマネギ： 1/4個

酵素処理物 1または 2 : 3g

[0073] ウーロン茶（一人前）

ウーロン茶： 200mL

酵素処理物 1または 2 : lOOmg

実施例 14

[0074] 飲食品材料に酵素処理物 1または 2を配合し、定法に従って飲食品を製造した。製造した飲食品を 10人のパネラーが試食した。 10人のパネラーが酵素処理物 2の方が酵素処理物 1に比べやや美味しいと判断した飲食品の配合例を示す。下記飲料では酵素処理物 2が透明に溶解した。 [0075] リンゴ酢ドリンク（一人前）

リンゴ酢：小さじ 2

ハチミツ：小さじ 2

冷水： 190mL

酵素処理物 1または 2 : lOOmg

[0076] 発泡酒

発泡酒： 350mL缶（一缶）

酵素処理物 1または 2 : 175mg

[0077] チューハイ

レモンチューハイ： 350mL缶（一缶）

酵素処理物 1または 2 : 175mg

実施例 15

[0078] 脂質代謝改善作用

実験動物：

4週齢の LETO (Long Evans Tokushima Otsuka)雄性ラット（大塚製薬株式会社から分与)を 10日間予備飼育し、表 5の飼料を与えてさらに 3週間飼育した (各群 5〜6匹)。なお、飼料中のタンパク質含量は 20%となるようにノーマル群およびコントロール群の飼料はカゼインで調製し、酵素処理物 1投与群の飼料は、カゼインおよび酵素処理物 1のペプチド含量で調製した。

[0079] [表 5]

飼料組成

肝臓脂質：

表 5の飼料で 3週間飼育後、ラットをエーテル麻酔下で解剖し、肝臓を採取した。肝臓は肝臓の 10倍量のトリス'塩酸緩衝液 (pH7. 4)と共にホモジネートした。ホモジネ一ト液カも Folch法で脂質を抽出し、コレステロール E—テストヮコー（和光純薬株式会社製)を用いて、コレステロール含量を測定した。同様に、中性脂肪はトリグリセライド E—テストヮコー (和光純薬株式会社製)で測定した。

結果を表 6に示す。各群ともに飼料摂餌量および体重に差は認められな力つた力コントロール群 (B群)の肝臓重量比 (肝臓 (g) Z体重 (g) )、肝臓総コレステロールおよび肝臓中性脂肪は、ノーマル群 (A群）に比較して各値が有意に上昇した。酵素処理物 1投与群 (C群）における肝臓重量比および肝臓中性脂肪量はノーマル群 (A群 )に比較して意差な上昇が認められたが、両値ともコントロール群 (B群)より有意に低ぐ脂質代謝が改善されていることが分力つた。

[0081] [表 6] 肝臓脂質

数字は、平均値土標準偏差を示す。

数字の右肩のアルファべットは、有意差（P < 0 . 0 5 ) 検定の結果を示し、 aは A群（ノ一マル群）に対する有意差を示し、 bは B群（コント口一ル群）に対する有意差を示す。

[0082] 血清脂質：

飼育後解剖し、採血した。血液から血清を採取し、コレステロール E—テストヮコー（和光純薬株式会社製)およびトリグリセライド Έ—テストヮコー（和光純薬株式会社製）を用いて、血清コレステロールと血清中性脂肪を分析した。

結果を表 7に示す。コントロール群 (B群）の血清中性脂肪は、ノーマル群 (A群）に比較して有意に上昇した。酵素処理物 1投与群 (C群)では、血清コレステロールおよび中性脂肪は有意に減少し、 V、ずれもコレステロールを負荷して!/、なゾーマル群 ( A群)よりも低値を示した。本結果から、本発明の酵素処理物は、血中脂質を著しく低下させる機能を有することが分力た。

[0083] [表 7] 血清脂質

数字は、平均値土標準偏差を示す。

数字の右肩のアルファべットは、有意差（Pぐ 0 . 0 5 ) 検定の結果を示し、 aは A群（ノ一マル群）に対する有意差を示し、 bは B群（コントロール群）に対する有意差を示す。産業上の利用可能性

本発明に係る酵素分解物は、生理活性作用を有する組成物として、医薬、機能性飲食品、化粧料、飼料として有用である。

Claims

請求の範囲

[I] 米糠を中性乃至弱アルカリ性溶液で抽出した抽出物にプロテア一ゼとぺプチダーゼを組み合わせて作用させて得られ、ペプチド混合物を含有することを特徴とする酵素処理物。

[2] ペプチド混合物の主要部が分子量範囲 200〜20000のペプチドであることを特徴とする請求の範囲第 1項記載の酵素処理物。

[3] 中性乃至弱アルカリ性溶液の pHが 6. 5〜12であることを特徴とする請求の範囲第

1項または第 2項に記載の酵素処理物。

[4] 請求の範囲第 1項〜第 3項のいずれかに記載の酵素処理物を含有することを特徴とする生理活性作用改善組成物。

[5] 生理活性作用改善組成物が、抗酸化組成物、ショ糖分解酵素阻害組成物または脂質代謝改善組成物であることを特徴とする請求の範囲第 4項記載の組成物。

[6] 抗酸化組成物が、炎症、虚血性疾患、アレルギー、白内障、中風、心筋梗塞または癌を予防または治療するための組成物であることを特徴とする請求の範囲第 5項記載の組成物。

[7] ショ糖分解酵素阻害組成物が、食後過血糖を抑制するための組成物であることを特徴とする請求の範囲第 5項記載の組成物。

[8] 脂質代謝改善組成物が、高脂血症を予防または治療するための組成物であることを特徴とする請求の範囲第 5項記載の組成物。

[9] 生理活性作用改善組成物が、糖尿病、高血圧または肥満を予防または治療するための組成物あることを特徴とする請求の範囲第 4項記載の組成物。

[10] 生理活性作用改善組成物が機能性飲食品組成物であることを特徴とする請求の範囲第 4項記載の組成物。

[II] 酵素処理物が抗酸ィ匕活性を有するものであることを特徴とし、抗酸ィ匕活性のために用いられる旨の表示を付した請求の範囲第 10項記載の組成物。

[12] 酵素処理物がショ糖分解酵素阻害活性を有するものであることを特徴とし、ショ糖分解酵素阻害活性のために用いられる旨の表示を付した請求の範囲第 10項記載の組成物。

[13] 酵素処理物が脂質代謝改善作用を有するものであることを特徴とし、脂質代謝改善作用のために用いられる旨の表示を付した請求の範囲第 10項記載の組成物。

[14] 請求の範囲第 1項〜第 3項のいずれかに記載の酵素処理物を含有することを特徴とする化粧料組成物。

[15] 請求の範囲第 1項〜第 3項のいずれかに記載の酵素処理物を含有することを特徴とする飼料組成物。

[16] 請求の範囲第 1項〜第 3項のいずれかに記載の酵素処理物を哺乳動物に投与することを特徴とする、生理活性作用を改善する方法。

[17] 生理活性作用の改善が、患者の酸ィ匕に起因する疾患を予防または治療するものであることを特徴とする請求の範囲第 16項記載の方法。

[18] 酸ィ匕に起因する疾患が、炎症、虚血性疾患、アレルギー、白内障、中風、心筋梗塞または癌であることを特徴とする請求の範囲第 17項記載の方法。

[19] 生理活性作用の改善が、ショ糖分解酵素の阻害または脂質代謝の改善であることを特徴とする請求の範囲第 16項記載の方法。

[20] ショ糖分解酵素の阻害が、食後過血糖の抑制であることを特徴とする請求の範囲第 19項記載の方法。

[21] 脂質代謝の改善が、高脂血症の予防または治療であることを特徴とする請求の範囲第 19項記載の方法。

[22] 生理活性作用の改善が、糖尿病、高血圧または肥満の予防または治療であることを特徴とする請求の範囲第 16項記載の方法。

[23] 生理活性作用改善組成物を製造するための請求の範囲第 1項〜第 3項のいずれかに記載の酵素処理物の使用。

[24] 生理活性作用改善組成物が、抗酸化組成物、ショ糖分解酵素阻害組成物または脂質代謝改善組成物であることを特徴とする請求の範囲第 23項記載の使用。

[25] 抗酸化組成物が、炎症、虚血性疾患、アレルギー、白内障、中風、心筋梗塞または癌を予防または治療するための組成物であることを特徴とする請求の範囲第 24項記載の使用。

[26] ショ糖分解酵素阻害組成物が、食後過血糖を抑制するための組成物であることを特徴とする請求の範囲第 24項記載の使用。

[27] 脂質代謝改善組成物が、高脂血症を予防または治療するための組成物であることを特徴とする請求の範囲第 24項記載の使用。

[28] 生理活性作用改善組成物が、糖尿病、高血圧または肥満を予防または治療するための組成物あることを特徴とする請求の範囲第 23項記載の使用。