JP5504441B2 - ミトコンドリア融合促進剤 - Google Patents
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Description
大豆を機械的に割砕し、篩にかけて大豆胚芽を80重量%含有する大豆原料を得た。これを搾油工程における常法で行われるヘキサン抽出を行った後、さらに70%含水エタノールを加えて70℃、30分間攪拌した。その後、ろ過して、残渣を回収した。残渣を100℃の減圧下で40分間、熱処理し、濃縮大豆胚芽蛋白質画分を得た。
大豆を機械的に割砕し、篩にかけて大豆胚芽を48重量%含有する大豆原料を得た。これを搾油工程における常法で行われるヘキサン抽出により脱脂し、大豆胚芽蛋白質画分を得た。また、脱脂後の熱の掛け方により、NSIが50よりも高いものと、50以下のものとの2種類を得た。この方法で得られた大豆胚芽蛋白質の全窒素分析を行ったところ、総蛋白質含量は43重量%であった。イソフラボン含量、サポニン含量は共にアグリコン体換算で0.9%以上であった。
出発の大豆胚芽部分を約5重量%以下含有する大豆原料から、調製例1と同様のヘキサン抽出及び含水アルコール抽出により、低胚芽率濃縮大豆胚芽蛋白を得た。
1.濃縮大豆胚芽蛋白質分解物の調製
上記調製例1で得た濃縮大豆胚芽蛋白質を0.5g採取後、10mL PBSに懸濁し、1.5mL エッペンドルフチューブに1mLずつ分注したサンプルを得た。
酵素1:主にGln、Ser、Thr、Metのカルボキシル側を加水分解するAspergillus oryzae由来の蛋白質分解酵素(商品名;ウマミザイム)100mg/mlPBS
酵素2:主にGln、Ser、Met、Sysのカルボキシル側を加水分解するAspergillus oryzae由来の蛋白質分解酵素(商品名:プロテアーゼM)100mg/mlPBS
酵素3:主にArg、Ala、Lys、Phe、Leuのカルボキシル側を加水分解するRhizopus oryzae由来の蛋白質分解酵素(商品名:ペプチダーゼR)100mg/mlPBS
また、酵素1〜3に代えてPBSを上記サンプル1mLに対し10μL加えた対照を用意した(比較例2)。
上記酵素処理又は未処理サンプルのミトコンドリア融合活性の測定を、特許文献5に記載の方法に準じて、以下の手順で行った。10% Fetal bovine serum、グルコース、カナマイシン及びビオチンを含むDulbecco‘s Modified Eagle Mediumからなる基礎培地中で、未分化の3T3−L1前駆脂肪細胞(preadipocytes)をコンフルエントになるまで培養した。これを3T3−L1 preadipocytes(Day 0)としてミトコンドリア形態観察に供した。
サイズ:係数
顆粒状:−1
1−3μmのチューブ :1
3−5μmのチューブ: 2
5μm以上のチューブ:3
5μm以上かつ高密度:5
でカウントした。融合の度合いを細胞数に占める割合でスコア化した。コントロール(PBS)のミトコンドリアの状態を1として、添加物の効果を数値化した。表1に、大豆胚芽の酵素処理によるミトコンドリア融合活性を示す。
上記酵素処理サンプル及び酵素未処理サンプルの細胞内脂肪滴量の測定を以下の手順で実施した。3T3−L1 preadipocytes(Day 0)を基礎培地に0.25mM 3−イソブチル−1−メチルキサンチン、1μMデキサメタゾン、及び2μMインシュリンを含む分化誘導培地中で約2日間培養し、さらに2μMインシュリンを含む分化誘導培地中で約14日間培養して脂肪細胞に分化させ、3T3−L1 adipocytes(Day 16)を作製した。
サイズ:係数
直径2μm未満:1
直径2〜5μm:2
直径5μm以上:3
でカウントした。コントロール(PBS)の脂肪滴量を1として、添加物の効果を数値化した。
1.脱脂大豆胚芽蛋白質分解物の調製
実施例1、4及び5において、濃縮大豆胚芽蛋白質を調製例2で得た脱脂大豆胚芽に替えた以外は前記実施例と同様の操作を行って、脱脂大豆胚芽蛋白質分解物を得た。また、酵素1に代えてPBSを上記サンプル1mLに対し10μL加えた対照を用意した(比較例3及び4)。
上記サンプルのミトコンドリア融合活性及び細胞内脂肪滴量の測定を、実施例1と同じ手順で行った。結果を表3に示す。
1.低胚芽率濃縮大豆蛋白質分解物の調製
実施例1〜7において、濃縮大豆胚芽蛋白質を調製例3で得た低胚芽率大豆胚芽に替えた以外は前記実施例と同様の操作を行って、低胚芽率濃縮大豆胚芽蛋白質分解物を得た。また、酵素1〜3に代えてPBSを上記サンプル1mLに対し10μL加えた対照を用意した(比較例5)。
上記サンプルのミトコンドリア融合活性及び細胞内脂肪滴量の測定を、実施例1と同じ手順で行った。結果を表4及び5に示す。
1.濃縮大豆胚芽蛋白質分解物の調製
大豆を機械的に割砕し、篩にかけて大豆胚芽分を80重量%含有する大豆原料を得た。これを搾油工程における常法で行われるヘキサン抽出を行った後、さらに70%含水エタノールを加えて70℃、30分間攪拌した。その後、ろ過して、残渣を回収した。残渣を100℃の減圧下で40分間、熱処理し、濃縮大豆胚芽蛋白質画分を得た。この濃縮大豆胚芽蛋白質を酵素1のPBS溶液に懸濁し、50℃、96時間反応を行った。95℃、20分で酵素を失活させた後、これの不溶物を除去した。水道水で希釈して、大豆胚芽分解物の2重量%溶液(以下、大豆胚芽分解物混入水という)を調製した。
実験動物としてC57BL/6JJcl株マウス(4週齢)を日本クレアから購入し、1週間飼育した後、実験に使用した。マウスは、以下の4群(各群5匹)、
SD群:通常食を与え、通常水を飲水させる群
SD+DP群:通常食を与え、大豆胚芽分解物混入水を飲水させる群
HF群:高脂肪食を与え、通常水を飲水させる群
HF+DP群:高脂肪食を与え、大豆胚芽分解物混入水を飲水させる群
を用意した。
上記大豆胚芽分解物2重量%の希釈水を、各群マウス5匹に自由飲水させた。1週間後、体重と内臓脂肪量を測定した。マウスへの投与試験結果を表6に示す。
Claims (6)
- 大豆胚芽が30重量%以上占め、水溶性窒素指数が50以下の大豆原料を蛋白質分解酵素によって分解した蛋白質分解物を有効成分として含むミトコンドリア融合促進剤。
- 前記蛋白質分解物は、分子量3,000以下の画分を含むことを特徴とする、請求項1に記載のミトコンドリア融合促進剤。
- 前記蛋白質分解物は、分子量3,000以下の画分からなることを特徴とする、請求項1に記載のミトコンドリア融合促進剤。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載のミトコンドリア融合促進剤を用いた抗肥満剤。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載のミトコンドリア融合促進剤を用いた筋増強剤。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載のミトコンドリア融合促進剤を用いた体重増加剤。
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