WO2005123935A1 - 治療に有用な産物の生産法およびシステム - Google Patents

Abstract

　治療に有用な遺伝子産物（例えば、Ｈｓｐ７２、ＨＬＡなど）を生産するのに適切な技術を提供すること。 　本発明は、治療に有用な遺伝子産物を生産する方法であって、Ａ）該遺伝子産物を生産する能力を有する生産体を提供する工程；Ｂ）該生産体を、該生産体のドナーの温熱治療効果を最大に発揮させるための処置温度に供する工程；およびＣ）該生産体から、該遺伝子産物を得る工程、を包含する、方法および関連するシステムに関する。Ｂ工程では、特に、生体の酸化還元電位（ｐＨ）を参酌することで最大効果が得られることが明らかになった。 

Description

療に有用な 物の 産法および ステム

術分野

０００1 、治療に有用な 物の 術に関する。

０００2 来、癌の治療には外科 療、放射線 法、 療法 が用 られて たが、 これらは ずれも人体の 織に対して損傷を与える 療方法であるため 、ドナ に対してダメ ジを与える。また、 等の難 感染症では、適切な治療 法が無 のが現状である。これに対し、近年、正常 胞やウイ スの 受性の差を利用して、患部を C～43Cに して、正常 胞を守りながら 胞 やウイ スを さ る ( イ サ ア)が 療方法として注 目されて る。また、放射線 法や 療法に温熱 法を併用することで、その 果が高まることが確認されて る。そして、その 果には、 の 伝子 物が関与することが予測されて る。

０００3 、 2 3 26 35 ( )、 2 3 26 38

( 2)、 2 299798 ( 3)に て、全身に転 移す 等の難 感染症に適応でき、ドナ を必要以上の高温に すこ とな 部体温を治療 度に短時間に昇 して精度 長時間保持し、正常 胞に 対して に治療できる 熱治療 置を提供した。

０００4 これらの 熱治療に用 る 、温熱治療に関与する の 伝子 物の 産に有用であることが予測された。

０００5 し しながら、ドナ の 熱治療 果を最大に発揮さ るための ドナ の

、ドナ に 異な て 、さらに同一ドナ に ても、 する 可能性があるが、従来では、一般的

とされる 囲に設定した治療 度で実施して た。

０００6 そのため、ドナ にと て 熱治療 果が上がらな ば り 、ドナ の 力を消 耗する 点があ た。 えば、ドナ の 度が最適な処置 低 場 合には、効果が上がらずまたドナ の 間が長 なり、処置 りも高 場 合には、逆に 球などが増えるなど まし な 点があ た。また、ある場合に は、

とされる 囲で処置しても、 が変性、壊死、または崩 壊するなどの 害な効果すら観察されることも報告されて る。

０００7

遺伝子 物を生産するのに温熱治療に一般に用 られて る 度 を用 ても、必ずしも 率で生産されな 例が少な らずある。 て、治療に好 まし 遺伝子 物を生産するのに適切な技術の 供が待たれて た。

1 2 3 26 35

2 2 3 26 38

3 2 299798 報

発明の

明が解決しよ とする課題

０００8 上記の 点を解消するためになされたものであり、その 的とするところ は、治療に有用な遺伝子 ( えば、 s 72 s O s 27 s 47 s 4 s 6 s g s 73 s など)を生産するのに適切な技術を提 供することである。

題を解決するための

０００9 、温熱治療 果を最大に発揮さ るための 度を用 ることに 、治療に有用な遺伝子 物を生産することができることを見出したことに 上 記 題を解決した。

００1０ て、 、以下を提供する。

００11 の 面にお て、 、治療に有用な遺伝子 物を生産する方法であ て、

) 伝子 物を生産する能力を有する生産体を提供する工程

) 産体を、 産体のドナ の 熱治療 果を最大に発揮さ るための 度に供する工程であ て、 、 産体の 位または に基 て決定される、工程

C) 産体 ら、 伝子 物を得る工程、 を包含する、方法を提供する。

００12 の 態にお て、前記 伝子 、 s 72 s s 27 s 47 s 4 s 6 s g s 73および s らなる より選択さ れる。

００13 の 態にお て、前記 伝子 、 s 72である。

００14 の 態にお て、前記生産体は、細胞、組織、 または生物体である ００15 の 態にお て、前記生産体は、血液または ン 液を含む。

００16 の 態にお て、前記生産体は、人工 産体である。

００17 の 態にお て、前記生産体は、前記 伝子 物を ドする核酸 列 を含む。

００18 の 態にお て、前記生産体は、前記 伝子 物を ドする核酸 列 を用 て 換された細胞を含む。

００19 の 態にお て、前記 伝子 、配列 、配列 3、配列

5、配列 7、配列 9、配列 、配列 3、配列 5、配列 7、配列 9、配列 2 または配列 23に記載の 列により ドされる。 ００2０ の 態にお て、前記 、前記ドナ の

aドナ の s 72の 能、

b)ドナ の 圧の 化、

。ドナ の 、

d)ドナ の 量、

e)ドナ の

f ドナ の の 、および

ドナ の 中の ン 、

らなる より選択される生体 化をさらに基にして決定される。

００21 の 態にお て、前記 伝子 物を得る工程は、ア ィ ティ 製を 用 ることにより 成される。

００22 の 態にお て、前記ア ィ ティ 、抗体を用 る。 ００23 の 態にお て、前記 度を特定する工程をさらに包含する。 ００24 の 態にお て、前記 定の際に、以下

aドナ の s 72の 能、

b)ドナ の 圧の 化、

。ドナ の 、

d)ドナ の 量、

e)ドナ の

f ドナ の の 、および

ドナ の 中の ン 、

らなる より選択される生体 化を観測する工程をさらに包含する。

００25 別の局面にお て、 、 明の 法により 産される遺伝子 物に関す る。

００26 他の局面にお て、 、治療に有用な遺伝子 物を生産する ステムであ て、

) 伝子 物を生産する能力を有する生産体

) 産体を、 産体のドナ の 熱治療 果を最大に発揮さ るための 度に供する手段であ て、 、 産体の 位または に基 て決定される、手段および

C) 産体 ら、 伝子 物を得るための 段、

を包含する、方法を提供する。

００27 の 態にお て、 明の ステムは、 ) 度を特定する手 段をさらに備える。

００28 明の ステムの の 態にお て、前記 伝子 、 s 72 s O s 27 s 47 s 4 s 6 s g s 73および s らなる より選択される。

００29 明の ステムの の 態にお て、前記 伝子 、 s 72である ００3０ 明の ステムの の 態にお て、前記生産体は、細胞、組織、 または生物体である。

００3 明の ステムの の 態にお て、前記生産体は、血液または ン 液を含む。

００32 明の ステムの の 態にお て、前記生産体は、人工 産体である ００33 明の ステムの の 態にお て、前記生産体は、前記 伝子 物を ドする核酸 列を含。

００34 明の ステムの の 態にお て、前記生産体は、前記 伝子 物を ドする核酸 列を用 て 換された細胞を含む。

００35 明の ステムの の 態にお て、前記 伝子 、配列 、 配列 3、配列 5、配列 7、配列 9、配列 、配列 3、配列 5、配列 7、配列 9、配列 2 または配列 23に記載の 列 により ドされる。

００36 明の ステムの の 態にお て、前記 、前記ドナ の aドナ の s 72の 能、

b)ドナ の 圧の 化、

。ドナ の 、

d)ドナ の 量、

e)ドナ の

f ドナ の の 、および

ドナ の 中の ン 、

らなる より選択される生体 をさらに基にして決定される、請求 6に記載の ステム。

００37 明の ステムの の 態にお て、前記 伝子 物を得る手段は、ア フィ ティ 段を含む。

００38 明の ステムの の 態にお て、前記ア ィ ティ 、 前記 伝子 物に対して特異 な抗体を含む。 ００39 明の ステムの の 態にお 、前記 定する手段は、前記生産体 の 位または を測定する手段である。

００4０ 明の ステムの の 態にお 、前記 定する手段は、以下

aドナ の s 72の 能を測定する手段、

b)ドナ の 圧の を測定する手段、

c)ドナ の を測定する手段、

dドナ の 量を測定する手段、

e)ドナ の を測定する手段、

f)ドナ の の を測定する手段、および

ドナ の 中の ン を測定する手段、

らなる より選択される生体 を観測する手段をさらに備える。

００41 明の の その他の目的 および 、以下の 明の 施の 態の 細な説明 ら一層明ら となる。

明の

００42 、治療に有用な遺伝子 物を、天然における形態で、正常な形態で、従 来にな ほど 率で生産する 術を提供する。このよ 技術は、治療 体また は 療に使用する医薬を生産する上で有用である。 て、大腸菌などのドナ 来ではな 胞にお 発現さ る場合によ に、余分な などを含まな こ と ら、有効である確率が高 、安全性も高 。

００43 下に、 明の ま 実施 態を示すが、当業者は 明の および 野における周知 術 らその 態などを 施することができ、 明が奏する作用および 果を容易に理解することが認識される きである。

００44 A ( )は、温熱処置による C 関関係の 果を示す。ここで は、横軸に各 の値を ・ 位にとり、 には CO ( )および 値を示 す。これらの値は、 S ( 薬品工業)を用 た。 では、左側に O および 側に を示す。 されるよ に 値が上がると が上昇し 下がると が上昇して た。 理的な とされる7・ 35～7・ 4 にお てこれらは 抗して た。

B ( ) 、温熱処置による C の 関関係の 果を示す。ここで は、横軸に各 の値を ・ 位にとり、 には CO ( )および の値を示 す。これらの値は、 S ( 薬品工業)を用 た。 では、左側に O および 側に を示す。 されるよ に、 値が上がると が上昇し、下がると が上昇して た。 理的な とされる7・ 35～7・4 にお てこれらは 抗して た。

2 2は、被験 ( )の 度とそのときの の 関関係を示す。ここでは 、横軸に各 ( )を示し、 に対応する を示す。 されるよ に、直腸 度が上昇するほど、 が上昇し、生理的 呼ばれる7・ 35～7・45、特に治療 呼ばれる7・4 ～7・45は、 Cにお てほぼ 実に達成されることが明ら にな た。

3 3は、被験 ( )の 度とそのときの の 関関係を示す。ここでは 、横軸に各 ( )を示し、 に対応する を示す。 されるよ に、直腸 度が上昇するほど、 が上昇し、生理的 呼ばれる7・ 35～7・45、特に治療 呼ばれる7・4 ～7・45は、 Cにお てほぼ 実に達成されることが明ら にな た。

4 4は、 明の 熱処置による、白血球上のC 4 C 8 C 6 C 2 、C 56の の を示す。左は、平均 量を示し、右は、 性細胞 ( )を示す。

5 5は、 ン 表面の クラス1の の 動を示す。 験では、被験 に、麻酔を 酔薬 ランダム 用量27 1)を使用して、呼吸を自発 入さ た。 全身で、水温は C 後で行 た。 2・ 5 間で あ た。 C( )を6 持し、 さ た。 および ン 球の発 現の 子を左上 ら処置前、処置 後、 間後、24 間後、3 後、 間後を示 す。 されるよ に、処置により、クラスの が処置 後 ら7 日にお て発現 が維持されて た。

6 6は、 5の の サンプ ( 間を含む)に関するタン ク 現の S S にて電気 真を示す。 ント としてラット 、脳を、左 ら順番に処置前、処置 後、 間後、24 間後、3 後、 間後を示す。なお、 上段は、 C プラスによ て 露した結果を示し、下段は 5 露した結 果を示す。 されるよ に、 SPはほぼ一定の 現を示し、 SP72 SP73 SP 6 は、 間後も高 発現を示して た。 て、治療タン ク質の高 現が実現し たことを示す。

7 7は、 ン 表面の クラス1の の 動を示す。 験では、被験 Wに、麻酔を 酔薬 ランダム 用量27 1)を使用して、呼吸を自発

入さ た。 全身で、水温は C 後で行 た。 2・ 5 間 であ た。 C( )を6 持し、 さ た。 および ン 球の 発現の 子を左上 ら処置前、処置 後、 間後、24 間後、3 後、 間後を 示す。 されるよ に、処置により、クラスの が処置 後 ら7 日にお て発 現が維持されて た。

8 8は、 7の の サンプ ( 間を含む)に関するタン ク 現の S S にて電気 真を示す。 ント としてラット 、脳を、左 ら順番に処置前、処置 後、 間後、24 間後、3 後、 間後を示す。なお、 上段は、 C プラスによ て 露した結果を示し、下段は 5 露した結 果を示す。 されるよ に、 SPはほぼ一定の 現を示し、 SP72 SP73 SP 6 は、 間後も高 発現を示して た。 て、治療タン ク質の高 現が実現し たことを示す。

テキスト

( 列の )

明にお て使用される s 72の 列を示す。

2 明にお て使用される s 72のア ノ 列を示す。

3 明にお て使用される の 列を示す。

4 明にお て使用される のア ノ 列を示す。 5 明にお て使用される s Oの 列を示す。

6 明にお て使用される s Oのア ノ 列を示す。 7 明にお て使用される s 27の 列を示す。

8 明にお て使用される s 27のア ノ 列を示す。

9 明にお て使用される s 4 の 列を示す。

明にお て使用される s 4 のア ノ 列を示す。

明にお て使用される s 47の 列を示す。

2 明にお て使用される s 47のア ノ 列を示す。

3 明にお て使用される s 6 の 列を示す。

4 明にお て使用される s 6 のア ノ 列を示す。 5 明にお て使用される s 7 の 列を示す。

6 明にお て使用される s 7 のア ノ 列を示す。 7 明にお て使用される s 73の 列を示す。

8 明にお て使用される s 73のア ノ 列を示す。 9 明にお て使用される s g の 列を示す。

2 明にお て使用される s g のア ノ 列を示す。 2 明にお て使用される s g 8の 列を示す。

22 明にお て使用される のア ノ 列を示す。 23 明にお て使用される s の 列を示す。

24 明にお て使用される s のア ノ 列を示す。 明を実施するための 良の

下に本 明を、必要に応じて例示の により 載する。 明細書の 体に わたり、単数形の ( えば、英語の a 、 a 、 e など)は、特に言及 しな 限り、その 数形の 念をも含むことが理解される きである。 て、単数形 の 、特に言及しな 限り、その 数形の 念をも含むことが理解される きで ある。また、本明細書にお て使用される用語は、特に言及しな 限り、 野で 通常用 られる意味で用 られることが理解される きである。したが て、他に定義 されな 限り、本明細書中で使用される全ての および 学技術 、 明の する分野の 業者によ て一般的に理解されるのと同じ意味を有する。 盾する場合、本明細書( 義を含めて)が優先する。 ００47 下に提供される実施 、 明のよりよ 理解のために提供されるものであ り、 明の 以下の 限定される きでな ことが理解される。 て、 当業者は、本明細書中の 載を参酌して、 明の 囲内で 行 ことが できることは明ら である。

００48 ( )

( 化学)

明細書にお て使用される用語タ ク 、 ポリ 、 オリ および は、本明細書にお て同じ意味で使用され、任意の さのア ノ酸 のポ およびその 変体を 。このポ は、 であ ても分岐して ても よ 、環状であ てもよ 。ア ノ酸は、天然のものであ ても 然のものであ ても よ 、改変されたア ノ酸であ てもよ 。この はまた、複数の 鎖の複 合体 とアセン され得るものを包含する。この はまた、天然または人工的に 改変されたア ノ ポ も 含する。そのよ な改変としては、例えば、ジス ィ 成、グ 、 、アセチ 、 ン または任意の他の操作もし は改変( えば、標識 分との 合体化)。この 義にはまた、例えば、ア ノ酸の または2 上のアナ グを含む ( えば、 然のア ノ酸などを含む)、 ペプ ( えば、ペプ イド)および 野にお て 知の他の改

される。

００49 明細書では、ア ノ および塩基配列の 、同一性および相同性の 、配列 ツ である s を用 てデ ォ ラメ タを用 て 出 される。

００5０ 明細書にお て、 ア ノ は、天然のものでも 然のものでもよ 。 導体 ア ノ またはア ノ アナ グ とは、天然に存在するア ノ とは異なるがもとの ア ノ 同様の 能を有するものを 。そのよ な 導体ア ノ およびア ノ ア ナ グは、 野にお て 知である。

００51 然のア ノ とは、天然のア ノ酸の 性体を意味する。 然のア ノ 酸は、グリ 、アラ 、 リ 、 イ 、イソ イ 、セリ 、メチオ 、 オ ン、 アラ ン、 ン、ト プト ァン、 ステイン、プ ン、ヒス ジン、アス ラギン 、アス ラギン、グ タ ン 、グ タ ン、 グ タ ン 、ア ギ ン、オ チン、および である。特に示されな 限り、本明細書で てのア ノ酸は 体であるが、 体のア ノ酸を用 た形態もまた 明の 囲内にあ る。

００52 明細書にお てア ノ 変体 とは、天然のア ノ酸ではな が、天然のア ノ 酸の物性および または機能に類似する分子を 。ア ノ 変体としては、例え ば、 アラ ンの ジ ( ラ 、メタ 、オ ト位など)にア キ 、 、 ト 基などが結合したもの、 チオ ン、カナ 、2 メチ グ タ ン などが挙げられる。 明では、ア ノ 変体は、 ア ノ およびア ノ

を包含することがあることが理解される。

００53 明細書にお て ア ノ とは、タン ク で通常は天然に見出されな ア ノ酸を意味する。 ア ノ酸の例として、ノ イ ン、 ラ ト アラ ン、 アラ ン、 ラ オ アラ ン、3 ア ノ 2 ベ ンジ プ ピオン 、 ア ギ ンの または および アラ ンが 挙げられる。

００54 ア ノ酸は、その 般に公 3 号 、または P C oc e ca o e ca e Co sso により される 号の ずれ により、本 明細書中で言及され得る。 ク オ も同様に、一般に認知された ドによ り言及され得る。

００55 その ドは以下のとおりである。

ア ノ

3

a アラ ン

C s C ステイン

s アス ラギン

G グ タ ン

P e アラ ン

G G グ ン s

e ソ イ ン

s ジン

e イ ン

e オ ン

s アス ラギン

Po P プ リ

G Q グ タ ン

R ア ギ ン

Se S セ ン

ト オ ン a ン

W ト プト ァン 「

s アス ラギン又はアス ラギン G グ タ ン又はグ タ ン Xaa 又は他のア ノ 。

a ン

ン

c ト ン

チ ン ン又は ンプ ン

チ ン 又は ト ンピ ジン 又は ア ノ ン又はチ ン s ン又は ト ン

又はチ クラ

b ン又は ト ン又はチ ン

d ン又は ン又はチ ン

ン又は ト ン又はチ ン

ン又は ン又は ト ン

ン又は ン又は ト ン又はチ ン 、不明、または他の塩 。

明細書にお て、 応する ア ノ または核酸とは、それぞれあ

子または ク オ 子にお て、比較の 準となる または ク オ における所定のア ノ 同様の 用を有する 、ある は有することが 予測されるア ノ または核酸を 、特に 子にあ ては、活性 の 様の 置に存在し 性に同様の 与をするア ノ酸を 。 えば、ある ク オ のアンチセンス 子であれば、そのアンチセンス 子の 定の 分に対応 する における同様の 分であり得る。 明の の 合、ヒトの

子における特定の 列が使用されるが、他の種の動物の 子に おける特定の 列にお て、 明の に対応する部分が 応するア ノ に相当することが理解される。

明細書にお て、 応する 伝子とは、ある種にお て、比較の 準となる種 における所定の 伝子と同様の 用を有する 、または有することが予測される遺伝 子を 、そのよ 作用を有する遺伝子が複数 在する場合、進化学的に同じ 源を有するものを 。 て、ある遺伝子の 応する遺伝子は、その 伝子の

であり得る。 えば、 ウス 子に対応する遺伝子は、ヒト

子である。

明細書にお て、 ラグメント とは、全長の または ク オ ( さが )に対して、 ～ までの さを有する または ク オ を 。 ラグメントの さは、その 的に応じて、 更することができ、例え ば、その さの 限としては、ポ の 合、 3、4、 5、6、 7、 8、 9、 5 2 、 25 3 4 5 およびそれ以上のア ノ酸が挙げられ、ここの 体的に 挙して な 数で表される長さ( えば、皿など)もまた、下限として適切であり得る。また 、ポ ク オ の 合、 5、6、 7、8、 9 5 2 25 3 4 5 75 およびそれ以上の ク オ が挙げられ、ここの 体的に 挙して な 数で表 される長さ( えば、皿など)もまた、下限として適切であり得る。 明では、生体 子として または ク オ などが使用される場合、所望の ( えば、細胞 果など)が達成される限り、このよ グメ もまた、全長のも のと同様に使用され得ることが理解される。

００6０ 明細書にお て、ポ および ク オ の さは、上述のよ にそ れぞれア ノ または核酸の 数で表すことができるが、上述の 絶対的なもの ではな 、同じ 能を有する限り、上限または加減としての の 、その 数 の (または例えば )のものも含むことが意図される。そのよ 意 図を表現するために、本明細書では、個数の前に を付けて表現することがある。 し し、本明細書では、 のあるなしはその数値の 釈に影響を与えな ことが理 解される きである。

００61 明細書にお て 物学的 とは、ある ( えば、ポ またはタ ン ク )が、生体 にお て有し得る活性のことを 、 の 能を発揮する活 性が される。 えば、ある 子がアンチセンス 子である場合、その 物学的 、対象となる核酸 子 の 合、それによる発現 制などを包含する。 えば、 ある 子が 素である場合、その 物学的 、その 性を包含する。別の 例では、ある 子が ガンドである場合、その ガンドが対応する セプタ の 合 を包含する。そのよ 生物学的 、 野にお て 知の 術によ て 定することができる。

００62 明細書にお て使用される用語ポ ク オ 、 オ ク オ および は、本明細書にお て同じ意味で使用され、任意の さの ク オ のポ を 。この はまた、 導体オ ク オ または 導体ポ ク オ を含む。 導体オリ ク オ または 導体ポリ ク オ とは、 ク オ の 導体を含むか、または ク オ 間の結合が通常とは異なるオ または ク オ を 、互換 に使用される。そのよ オ ク オ として具体的には、例えば、2 メチ ボ ク オ 、オ ク オ 中の ン ステ 合が ト 合に変換された 導体オ ク オ 、オ ク オ 中の ン ステ 合が 3 P5

デ ト 合に変換された 導体オ ク オ 、オ ク オ 中の ボ ン ステ 合とが 合に変換された 導体オ ク オ 、 オ ク オ 中の がC 5プ ピ で 換された 導体オ ク オ 、オ ク オ 中の がC 5 アゾ ウ で 換さ れた 導体オ ク オ 、オ ク オ 中の ト ンがC 5プ ピ ト ンで 換された 導体オ ク オ 、オ ク オ 中の ト ンが ジン ト ン(P e o az od ed C os e)で 換された 導体 オ ク オ 、 中の ボ 2 プ ピ ボ 換された 導体オ ク オ およびオ ク オ 中の ボ 2 メトキ トキ ボ 換された 導体オ ク オ などが例示される。他にそ ではな と 示されなければ、特定の はまた、明示 に示された配列 同様に、その に改変された改変体( えば、縮重 ドン 換体)および相補 列を包含するこ とが企図される。 体的には、縮重 ドン 換体は、 またはそれ以上の選択された( または、す ての) ド の3 目の 置が混合 および またはデオキ イノ ン 換された配列を作成することにより 成され得る( a ze 、 cec cd Res 9 5 8 ( 99 ) s a 、J o C e 26 26 5 26 8( 985) osso o Ce Pobes 89 98( 994))

明細書にお て、 は、核酸、オ ク オ 、および ク オ 互換 能に使用され、c 、ゲノム などを含む。

、環状( えば、環状ベクタ 、プラス など)または ( えば、PC )で 提供され得る。 明細書では、核酸および 、用語 伝子の 念に含ま れ得る。ある遺伝子配列を ドする核酸 はまた、 スプライス 異体( 変体) を包含する。 様に、核酸により ドされた特定のタン ク質は、その スプラ イス 変体により ドされる 意のタン ク質を包含する。その名が示唆するよ に スプライス 異体 は、遺伝子の スプライ ングの産物である。

、最初の 、異なる(別の) スプライス産物が異なる を ドするよ にスプライスされ得る。スプライス 異体の するが、 キソンの スプライ ングを含む。 み過し により同じ 由来 する別の もまた、この 義に包含される。スプライ ング 応の 意の ( 態のスプライス産物を含む)がこの 義に含まれる。

００64 明細書にお て、 伝子とは、遺伝 質を規定する 子を 。 色体 上に一定の 配列して る。タン ク質の 造を規定するものを構造 伝 子と 、その 現を左右するものを調節 伝子(たとえば、プ タ ) 。 明細書では、遺伝子は、特に言及しな 限り、構造 伝子および 伝子を包含 する。 明細書では、 伝子は、 ポ ク オ 、 オ ク オ および ならびに またはタン ク 、 ポ 、 オ および を指すことがある。 明細書にお てはまた、 伝子 は、遺伝子によ て発現されたポ ク オ 、 オ ク オ および ならびに また は タン ク ポ 、 オ および を包含する。 業 者であれば、遺伝子 物が何たる はその 況に応じて理解することができる。 明の 伝子 、このよ 遺伝子 指すことが理解される。

００65 明細書にお て遺伝子( えば、核酸 、ア ノ 列など)の 同性 とは、 2 上の遺伝子配列の、互 に対する同一性の 度を 。 て、ある2 の 伝 子の 同性が高 ほど、それらの 列の 一性または類 高 。 2 類の 伝 子が相同性を有する 否 は、配列の 接の 、または核酸の スト ンジ ン な条件下での イ ダイゼ ョン法によ て調 られ得る。 2 の 伝子配列を 直接 較する場合、その 伝子配列 列が、代表的には少な とも5 一である場合、好まし は少な とも7 。 一である場合、より好まし は少な とも 8 9 95 96 97 98 または99。 一である場合、それらの 伝 子は相同性を有する。 明細書にお て、遺伝子( えば、核酸 、ア ノ 列 など)の とは、上記 同性にお て、保存 換をポジテイ ( )とみな した場合の、 2 上の遺伝子配列の、互 に対する同一性の 度を 。 て、 換がある場合は、その 換の 在に応じて同一性と とは異なる 。また、保存 換がな 場合は、同一性と とは同じ 値を示す。

００66 明細書では、ア ノ および塩基配列の 、同一性および相同性の 、配列 ツ である S を用 て オ ト ラメ タを用 て 出 される。

００67 明細書にお てタ ネ タ は、遺伝子のタン ク質を ドする 域の 流に位置し、 が に転写される際の転 の 結、ポリ 列の 加に関 与する配列である。タ ネ タ は、 の 定性に関与して遺伝子の に影響を及ぼすことが知られて る。

００68 明細書にお てプ タ とは、遺伝子の の 位を決定し、また その 度を直接的に調節する 上の領域を 、通常 ポ メラ ゼが結合 して転写を始める 基配列である。したが て、本明細書にお てある遺伝子のプ タ の きを有する部分をプ タ と 。プ タ の 、 通常、推定タン ク ド 域の キソンの 流約2 b 内の 域であること が多 ので、 ソ トウ アを用 てゲノム 基配列 タン ク ド 域を予測すれば、プ モ タ 域を推定することはできる。 プ タ 、構造 伝子ごとに変動するが、通常 伝子の 流にあるが、これらに限定さ れず、構造 伝子の 流にもあり得る。 まし は、推定プ タ 、第一 キソン 始点 ら上流約2 b 内に存在する。 明細書では、例えば、 7 プ タ などを使用することができる。

００69 明細書にお て ン ンサ とは、 目的遺伝子の 率を高めるために用 られる配列を 。そのよ ン ンサ は 野にお て 知である。 ン ンサ は複数個 られ得るが られてもよ し、用 な ともよ 。

００7０ 明細書にお て 能に連結された( ) とは、所望の 列の ( ) がある ( えば、プ タ 、 ン ンサ など)または

列の に配置されることを 。プ タ が遺伝子に作動 能に連結 されるためには、通常、その 伝子のすぐ 流にプ タ が配置されるが、必ず しも隣接して配置される必要はな 。 ００71 明細書にお て、核酸 子を細胞に導入する 、どのよ 技術でもよ 、 例えば、形質 換、形質 入、トランス ク ョンなどが挙げられる。 そのよ

子の 、 野にお て 知であり、 、慣用されるものであり、 例えば s be ・ ( 988) C e Po ocos oec a oo W e e o Sa b oo J ( 987) oec a Co

abo a o a a 2 d d およびその Cod S abo abo a o Pess Cod S abo 、別冊 伝子

社、 997などに記載される。 伝子の 、ノ ザン ット、ウ スタン ット 析のよ 本明細書に記載される方法または他の周 術を用 て確認することができる。

００72 また、ベクタ の 法としては、細胞に を導入する上述のよ 方法であ れば ずれも ることができ、例えば、トランス ク ョン、形質 入、形質 換な ど( えば、 ン ウム 、 ポソ ム 、 キストラン 、 クト ポ ョン 、 ティク ガン( 伝子 )を用 る方法など)が挙げられる。

００73 明細書にお て遺伝子に て言及する場合、 クタ または み換え クタ とは、 目的の ク オ 列を目的の と移入さ ることができる クタ を 。そのよ クタ としては、 、 母、動物 、植物 、 、動物 および 体などのドナ 胞にお て自立 可能、 または 色体中 の みが可能で、 明の ク オ の 適した位 置にプ タ を含有して るものが例示される。 クタ の 、ク ングに 適した クタ をク ングベクタ と 。そのよ ク ングベクタ は通 常、制限 位を チ ク ング 位を含む。そのよ 制限 および チ ク ング 、 野にお て 知であり、当 業者は、 目的に合わ て 択して使用することができる。そのよ 技術は、本 明細書に記載される文献( えば、 Sa b oo 、 )に記載されて る。

００74 明細書にお て ベクタ とは、構造 伝子およびその 現を調節するプ タ に加えて の メントがドナ の で作動し得る状態で連 結されて る核酸 列を 。 メントは、好まし は、タ ネ タ 、薬剤 性 伝子のよ 選択 カ および、 ン ンサ を含み得る。 ( えば、動 物)の ベクタ のタイプおよび 用される調節 メントの 類が、ドナ ま たはタン ク に応じて変わり得ることは、当業者に周知の 項である。 ００75 明細書にお て 換体 とは、形質 換によ て作製された細胞などの の 部または一部を 。 換体としては、 、 母、動物 、植 物 、 胞などが例示される。 換体は、その 象に依存して、形質 、形質 、形質 ドナ などとも われる。 明にお て れる細胞は、形質 換体であ てもよ 。

００76 明にお て遺伝子操作などにお て 使用される場合、原 としては sc e c a S a ac s 、 e bac e Co ebac e c obac e 、Pse do o as などに属する 、例えば sc e c a Co X e sc e c a Co X 2 sc e c a Co が例示される。

００77 明細書にお て遺伝子 (たとえば、 現、タン ク )の

または は、例えば、 の 定および 疫学的 定方法を含む 切な方 法を用 て 成され得る。 子生物学的 定方法としては、例えば、ノ ザン ッ ト 、 ト ット またはPC 法などが例示される。 疫学的 定方法としては、 例えば、方法としては、 イク タイタ プ トを用 る S 、 、蛍光 、ウ スタン ット 、免疫 色法などが例示される。また、定量 法とし ては、 S または 法などが例示される。ア イ( えば、 ア イ、プ テインア イ)を用 た遺伝子 法によ ても行われ得る。 ア イに て は、 ( 編、細胞 学別冊 イク ア イ 最新PC )に広 され て る。プ テインア イに ては、 a Ge e 2 2 ec 2 S 526 32に詳述されて る。 伝子 現の としては、上述に加えて、 PC C 、 SCP 、免疫 、 o b d ステム、インビ 訳などが挙 げられるがそれらに限定されな 。そのよ なさらなる分析 、例えば、ゲノム ・ ラボ・ ア 、編集・ (2 2)などに記載さ れており、本明細書にお てそれらの はす て参考として 用される。 ００78 明細書にお て 変体 とは、もとの または ク オ などの 質に対して、一部が変更されて るものを 。そのよ 改変体としては、置換 変体、付加 変体、欠 変体、短縮( ca ed) 変体、対立 伝子 異体な どが挙げられる。このよ 改変体もまた、所望の 的を達成することができる限り、 明の 子として使用することができる。 伝子(a e e)とは、同一 伝子座に属し、互 に 別される遺伝 改変体のことを 。 て、 伝 子 異体 とは、ある遺伝子に対して、対立 伝子の 係にある改変体を 。その よ 対立 伝子 異体は、通常その 応する対立 伝子と同一または非常に類似 の 配列を有し、通常はほぼ同一の 物学的 性を有するが、まれに異なる生 物学的 性を有することもある。 相同体または グ( o o o ) とは、ある種 の中で、ある遺伝子とア ノ ベ または ク オ ベ で、相同性( まし は 6 上の相同性、より好まし は、 8 上、85 上、 9 上、 95 上 の相同性)を有するものを 。そのよ 種相同体を取得する方法は、本明細書の 載 ら明ら である。 オ グ(o o o ) とは、オ ガス 伝子(o o o o s e e)とも 、二 の 伝子がある共通 先 らの に由来する遺伝 子を 。 えば、多重 伝子構造をも グ ビン 伝子 ァ を例にとると 、ヒトおよび ウスの グ ビン 伝子は であるが ヒトの グ ビ ン 伝子および グ ビン 伝子は グ( 伝子 生じた遺伝子)であ る。オ は、分子系統 の 定に有用である。オ は、通常別の種にお てもとの と同様の 能を果たして ることがあ 得ること ら、 明の 療に有 用な遺伝子の もまた、 明にお て有用であり得る。

００79 明細書にお て、ポリ または ク オ の 換、付加または

とは、もとの または ク オ に対して、それぞれア ノ酸もし はそ の 、または ク オ もし はその 、置き換わること、付け加わること または取り除 れることを 。このよ 換、付加または の 、 野 にお て 知であり、そのよ 技術の としては、部位 変異 術などが 挙げられる。 換、付加または 、 上であれば任意の数でよ 、そのよ 数は、その 換、付加または を有する改変体にお て目的とする機能( えば、 生、細胞 生など)が保持される限り、多 することができる。 えば、そのよ 数は、 または数個であり得、そして好まし は、全体の さの2 内、 内、また 下、5 下、25 下などであり得る。

００8０ ( 療に有用な遺伝子 )

明細書にお て 療に有用な遺伝子 とは、身体が治癒するにお て、正 の働きをすることが知られる 意の 伝子 物を 。そのよ 遺伝子 物としては 、例えば、 ョックタ ク ( s )( えば、 s 72 s O s 27 s 47 s 4 s 6 s g ( えば s g または s g B) s 73 s など)、ヒトの 織適合 伝子複合体(MHC)( )などを挙げることができるが それらに限定されな 。

００81 明細書中で使用される場合、 s とは、 ョックタン ク質を指す。 s は、 細胞や個体が平常温度より高 度変 を受けた時に合成が誘導されるタン ク の 称である。 表的な s としては、 s 72 外に、例えば、 s 7 s O s 27 s 47 s 4 s 6 s g ( s g または s g 8) s 73および s 、 キチンおよび s 26などが挙げられるが、これらに限 定されな 。 ョックタン ク または s は、細胞・ ある は個体が生理 的 度より5～ C ( ョッ )にさらされたとき、合成が誘導される一群の タン ク質を 。スト スタン ク質の代表的な例で、大腸菌 ら 物、高等 椎動 物に たるす ての 物に共通すると われて る。 s にその

位の 字を付して表記し、例えば 表的な分子 7万の熱 ョックタン ク質は s 7 称する。この では、厳密には、一の まで 記することがある。 ョック タン ク質は高温ば りでな 、重金属、 タノ 、酸素欠乏など、各種の 胞に 対するスト スによ ても合成が誘導される。 をはじめとするスト スは細胞のタン ク質を変性さ 、不溶性 形成して細胞に 命的な障害を与えるが、 ョッ クタン ク質はこの害を除 能を有する。 用機序 ら次の2タイプに分けられる。 ( ) 常な構造をも タン ク質に結合し、沈澱 成を防ぐと同時にその 生を補助 するタ ク 。 s 7 (大 では a s 6 (G o がこれにあたる。 (2 ) タン ク質を選択的に分解する酵素 タン ク 。 物に共通に見ら 、変性タン ク質に結合し分解の 識となる キチン、その 識によ てタン ク質を分解するプ テ など。 ョックタン ク質を ドする遺伝子の 、 ョッ によ て活性 された ( ea S oc ac o S )のはた らきによ て起こる。この 転写 ベ の 節によるものが主であるが、 ベ の 構も関与してはたらき、短時間に大量に合成され 胞に蓄積することもある。 また、 ョックタン ク質のも タン ク質の再生を補助する機能は、平常時 の 胞にと ても必須であり、したが てこれを ドする遺伝子はス スがな ても 発現する必要があるものが多 と われる。 の ョックタン ク質の遺伝子は の 程で重複 タイプを示し、同一機能をも タン ク質を ドして てもあ る遺伝子は ョッ によ てはじめて発現が誘導され、別の遺伝子は恒常的に発 現して る。

明細書にお て ョックタン ク質は、分子 とも 。タン ク質はア ノ酸の直 ポ であるが、 りたたまれて のタン ク質に特有の 体的な 構造をとる。この りたたみを 助するタン ク質を ヤ ン 呼ぶ。タン ク質がそのよ 作用を示 ば、その 質を、 ン 作用 。

は、 りたたみの 成したタン ク とは相互 ず、また、その 分とはな らな 。 は、変性して るタン ク質に結合し、変性タン ク しが 集して本来の りたたみの 路 ら不可逆 に脱落してしま のを防ぐことで、正し りたたみの 率をあげて る、 考えられて る。 としては、例えば、 s OO(C ) s g ( G) s 7 ( a ) s 6 (G o ヤ )、 s 4 ( )、 s (G o S C O)など、 のグ プが 挙げられるがそれらに限定されな 。その は ョックタン ク質であり、特に言 及しな 限り本明細書にお て重複して使用され得る。 高温にさらされて、タ ン ク質が変性し ると、増産された がこれに結合して 集を防ぐ。また 、タン ク質が輸送されて膜を通過するときは、伸びた 状の形で輸送されるので、 ヤ ンが結合してあら じめタン ク質をひきのばす。この 合には、 りたたみ 進ではな 、そ 時停止であるが、これも 作用に含めることができる s 6 および s 7 などの 用には、 Pが必要である。 s 6 は非常に広範 種類のタン ク質の折りたたみを補助できるが、一方、 s 47のよ に ラ ゲン にのみはたら もある。 のな でも、と に s 6 は重要であり、 す ての 物の 胞に存在し、この である。

００83 明細書にお て s 72 とは、配列 ( )および 2(ア ノ ) に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 72の ( え ば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使用され得ることが 理解される。

００84 明細書中で使用される場合、 とは、ヒト 血球 指す。

、クラス1 原とクラス11 原の2群に大別される。クラス1 原としては、例えば、

C Gなどが挙げられる。クラ ス1 、ほとんどす ての 上に発現して る。クラス1 、細胞 で 産生される 複合体を形成し、その 合体を、C 8 性細胞 胞 の 容体に提示する。クラス11 原としては、例えば、

Q Pなどが挙げられる。クラス11 、 ク ァ ジ、 、活性 、 、胸腺上 胞などの 上でのみ発現し、外来 をC 4 胞に提示する。クラス11 、抗原 示の ほ にも胸腺での 胞の正の選 および負の選択にも関与して ることが で ある。 は、ヒトの 織適合 伝子複合体で、 6 色体 上に 8c の さの 域にわた て 在する遺伝子 域にある。これまでに、 、 、C、 P Qの な とも6 伝子座ある は 域が同 されて る。

、 、C 伝子はそれぞれ、 、 、C ドする。 伝子ともき わめて高度な を示し、数十種の 伝子が存在する。 P、 Q 域には、 ( a )の と 鎖の構 伝子座が存在し、通 常は同一 域内の と 伝子 士が結合して ( P Q )を作る。 P Q 域には一 ず の および 鎖の機能的遺伝子が存在 するが、 域には一 の 伝子と少な とも三 の 伝子が同 され て る。これらの 伝子座にも、多 の 伝子が存在する。 、 、C、 P Q 伝子座の 定の 伝子の 合 の セットを ( a o Pe)とよぶ。したが て、一人の は父親および 親に由来す る二 の タイプを有することになる。 伝子座の 定の 伝 子 には強 均衡が存在し、一定の 団中に特定の タイプが高 度で認められる。特に、 伝子座間の 均衡および 伝子座に おける対立 伝子の 度には、著明な人種差の 在することがわ て る。また、 伝子の 定の 伝子と、 の 因不明の との間に統 計 にきわめて有意な相関が認められ( えば 27 強直 髄炎)、その 因との 係を利用して、疾患の 断に用 ることが可能である。 表的な遺伝子 配列としては、配列 3および (それぞれ、核酸およびア ノ )を挙げること ができるがそれらに限定されな 。

００85 明細書にお て s とは、配列 5( )および 6(ア ノ ) に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 Oの ( え ば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使用され得ることが 理解される。

００86 明細書にお て s 27 とは、配列 7( )および 8(ア ノ ) に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 27の ( え ば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使用され得ることが 理解される。

００87 明細書にお て s 4 とは、配列 9( )および (ア ノ ) に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 4 の ( え ば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使用され得ることが 理解される。

００88 明細書にお て s 47 (C P2とも )とは、配列 ( )および

(ア ノ )に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 s 47 ( えば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使 用され得ることが理解される。

００89 明細書にお て s 6 とは、配列 3( )および 4(ア ノ )に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 6 の えば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使用され得ること が理解される。

００9０ 明細書にお て s O とは、配列 ( )および (ア ノ )に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 7 の ( えば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使用され得ること が理解される。

００9 明細書にお て s 73 とは、配列 7( および 8(ア ノ )に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 73の ( えば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使用され得ること が理解される。

００92 明細書にお て s g とは、配列 ( s g および

2 (ア ノ s g 、ならびに配列 2 ( s g 8)および 22(ア ノ 、に代表的に示される ョックタン ク質を 。 明細書では、 s g の ( えば、分子 など)を有する限り、上記 列 の 変体もまた使用され得ることが理解される。

００93 明細書にお て s とは、配列 23( )および 24(ア ノ

)に代表的に示される ョックタン ク 。 明細書では、 の ( えば、分子 など)を有する限り、上記 列の 変体もまた使用され得るこ とが理解される。

００94 明細書にお て 産体 とは、遺伝子 物を生産することができ の 部または一部ある はその 産物を 。そのよ 例としては、細胞、組織、 または生物体を挙げることができるがそれらに限定されな 。ある は、人工 産物の としては、例えば、 、形質 換した細胞、組織、 または生物体 などを挙げることができるがそれらに限定されな 。 まし は、このよ 生産体は、 天然に存在する状態で提供され得る。 て、例えば、 、血液、 ン 液なども 明の 産体として使用することができることが理解される。

００95 明細書にお てドナ は、 明の 産体が 来する 。ドナ は、血液 を有する生物であれば、どのよ 生物であ ても ることができる。 まし は、 椎動物が用 られ、より好まし は、 ( えば、 、 類 など)が用 られる。さらに好まし は、 が用 られる。最も好まし は が用 られる。

００96 明細書にお て または イ サ ア とは、対象となる被験 ( または生産体)または被験 (または生産体)の をその 体の 常温度より高 状態を一定期間 持することにより、被験 (または生産体)または被験 (または生 産体)の 療を行 または ステムを 。このよ 法には、 ( 、 ックなど)、 ( 外線など)、高周波( 短波など)、 ( 浴など)を利 用して らだを温める 療などが含まれる。

。 、生体の を容 易に約 ・ 上( 位では 6 ) 動さ ることができる らである。

００97 明細書にお て 化還元 とは、ある系における電子のやり取りの際に発 生する電位のことである。 明細書では、特に生体の ( えば、末梢血などの )の 位を タ 象とすることができる。 の 、本明細書 にお て 電位 とも 、本明細書にお て 能に使用され得る。 質 の 子の 出しやすさ、ある は受け取りやすさを定量的に評価する 度でもある。

ボ ト(V)を用 る。 明では、生体( 、特に細胞 面上、細胞 )の 位が重要であり、これは、末梢 の 位または を測定するこ とによ て決定することができる。

００98 このよ 測定には、 S ( 学薬品工業)などの 販の 置を用 ること によ て実現され得る。

００99 明細書にお て酸化還元 、 一対一対応すること ら、交換 能に使 用される。 化還元 7 が 7 35に対応し、 O・ の 、

位では 5・ 94 ( 6 )の 相当すること ら、 ずれの値を用 ても、 明を実施することができる( えば、 7 35は、 64 に 当し、 7 45は、 76 に 当する。)。

０1００ 明では、 象となる生体の 位が判明すると、 に 算して 7・4 満の 、病的状態であること ら、標準 な 法を与え( えば、 直腸 またはその等 4Cの 療を例えば6 与える)、その 果、酸 位が、処置前に対して、 に 算して ・ 昇する場合は、その 療を 続け、上昇が鈍 場合は、温度を上昇さ る 、時間を長 する の ずれ をさ ることを検討する。さらに 療を続け、 に 算して ・ 上の上 をもたら す場合には、その 件を次回 ら採用してもよ 。ある は、直腸 またはその等 を約 ・ 5C みで測定し、その際の または 位を測定し、最大の 果が得られる 度を採用しても良 。 、 が 5の 囲の し 能でな たこと ら、その 壮大である。

０1０1 位が治療にお て重要であることは、 明にお て初めて見出された理論で ある。 下に 単に説明する。

０1０2 物のゲノムおよび 、電位を作り出す ステムと え、ゲノム( )は、電 位 ネ ギ に変換し、タン ク質を作り出す。ここでは、 ネ ギ は、 位 ら と移動する。

０1０3 の 、 6 の 胞 ら 成されて る。 の 胞に ゲノムが 存在し、 6 の 胞には 6 の 同じタイプのゲノムが存在することに なる。 6 あ ても、ゲノムは1 類し な 。

０1０4 が病気( )になれば、 ( )を治すタン ク ( 伝子 ) が必要 となる。タン ク質は、遺伝子にし 作れな 。ヒトが疾患に ると、ヒト 体の 伝子 が作り出すタン ク ( 気を治すタン ク )にし ( )は な ことに なる。

０1０5 どのよ にして病気を治すために必要なタン ク質を遺伝子が 生するの と 点に ては、遺伝子がタン ク質を産生する仕組みが分 れば、病気を治すこと ができることに ながる ことである。

０1０6 ( )とは、何ら のスト スによ て遺伝子が 生するタン ク質の異常が 引き起こされ、その 常によ て引き起こされた身体の 態であると定義付けることが できる。 言すれば、病気( )とは、遺伝子が作り出すタン ク質の産生の 常 によ て、発症する ことができる。

０1０7 伝子は、なぜ 気を引き起こすタン ク質を産生するの 点に て、以 下のよ に考察することができる。 伝子がタン ク質を産生するには ネ ギ が 要である。これを本明細書にお てタン ク ネ ギ 。 伝子の ネ ギ 量が低 と、 伝子 タン ク質が 生される。このタン ク質 は、 わゆる病気( )タン ク質であると える。このよ メカ ズムを利用して、 生産体の タン ク質の生産を最適 することが可能になることを初めて見出した ０1０8 明では、 究した結果、恒常 伝子の タン ク (ホメオ スタ ス と、 伝子 タン ク ( 気を治すために必 要なタン ク 、約 8 )とが存在することを明ら にした。ここで、生体の

、 7 が な 位であり、 75 が な 胞質 位である。ここで、電位の 、その の きさに関して 。

０1０9 気の は、 (または電位)であり 性になり、電位低下による ネ ギ 態にあると える。

０11０ 方、 気な は、高 (または電位)となり、電位の 昇による ネ ギ 態にあると える。このよ 気な は、有用な治療タン ク質を生産 する 然性が高 。

０111 位を 態に分けると 下のよ になる

7 胞質 75

75 ～ g ( 絶対 が高 ほど 果が高 よ である。) 胞質 75

化すると、この 、低 なる。

０112 このよ 治療 位では、治療に適したタン ク質の生産が冗 されて ることが予 期される。

０113 明では、 者の 位とタン ク との 係に着目し、効率よ 治療を 行 ことに成功した。す ての 、 身の 伝子が 生するタン ク質に よ てし 、治すことができな ことを 見出した。

０114 ( )は、遺伝子が 生するタン ク質の異常により発症する。そのよ 発 症メカ ズムは、電位の によ て説明できる。タン ク質を産生するには、産生 ネ ギ が必要であり、低 位の 合には、細胞 位が約 7 となり、 胞質 位が約 75 となる。

０115 ここで、 明によ て実際に治療タン ク質の発現が冗 、その 果関連する 治癒した例である S( (または生産体))に て説明す る。ここでは、 答電位 論と称する。

０116 答電位に て、ウイ ス 感染 (C 4 ク ア ジ )内の電位が約 7 ～ 74 の 件により、 の 抑制されること が明ら にな た。

０117 では、直腸 またはその等 Cのとき、末梢 7・ 35であり、細胞

7 であり、細胞質 75 である。ここで電位 約 5 である。 法により、直腸 またはその等 を約 Cに上昇さ 、末梢 が 7・ 6にな た場合、そのときの 、 O 25の 動が約 4 75 に相当すること ら、 84 75 であると える。このとき、細胞 電 位は、 75 のままである。すると、電位 、 9・ 75 (外の方が イナス の が高 )となる。 またはその等 が約39 4Cになり、末梢 が 7・ 55とな たとき、同様に計算すると、細胞 8 8 であり、細 胞 電位は 75 である。すると、その 6・ 8 である。このよ に ギ を与えることにより、恒常 タン ク質の産生が誘導され、免疫 態が元 に戻る。その 果、C 4の値が4 ( 的状態) ら8 に回復した例が見られた。 ０118 明にお て、これらのデ タを参酌して、温熱 法を与えることができる。

明では、生体 電位を 位と呼ばれる範囲に戻すことを念頭に、治療 ( の 位が 75 )であるので、それより絶対 が高 75 ～ g などを与えることによ て、治癒されることが明ら にな た。

０119 記の 定の 合、ヒトでは直腸 またはその等 Cの ネ ギ を 与えることができる 化還元 位の差が約9・ 75 とな たのに対して、 39 4Cの ときは、 6・ 8 にとどま た。 て、 Cの方がこの (または生産体)に と ては良 ことが分 る。なお、この 合、与えた温熱 法の ( 身浴、半身 浴)、長さ( )は、同じ 件であ たが、同様にして最適な電位を決定することが できる。 ０12０ 位と細胞 電位との 異が重要なのは、細胞 に電位を発生さ る源で ある ト ンド アが存在することにある。

０121 ゲノム中の遺伝子によ て産生されるタン ク質の量は、核と細胞 の によ て産生された ネ ギ の量に比例してタン ク質の量 能とが決定される。こ のとき、例えば、先天性免疫不全 伝子を持 細胞では、その 伝子が発現する発 現 位の 態にあると える。このよ 電位を参酌して、生産体のタン ク質の生 産量を制御することが 明によ て初めて 能にな た。

０122 このよ に、体温 電位(P )との 係に てまとめると、ゲノム産 タン ク質の 量とは、温度に比例して るのではな 、電位(P )に比例して変化し、従 て治療 に直結するのは電位(P )であることが明ら にな た。 を さ るためには、 O Oもまた役割を担 ており、 ン とが

2 関係しており、

2 2 2 とが関係して変化することが明ら にな た。このよ に、遺伝子が 生するタン ク 質は、電位 によ て生じる ネ ギ によ て産生されることが分 る。

０123 際の 置では、処置前の より ・ 上( ・ ～ ・ 3 度、約 ・ 5 上がることは希であるが、その方が好ま 上昇するよ 条件を探索し(特に、 がより上昇して ることが好まし )、その 件により以後 療を行 ことが好ま 。 位で測定する場合は、 7 35が 7 に等価であること、 のO・ の

5・ 94 の 化に とを考慮して、 出することができる。

０124 明にお て られる 法の ラメ タ 法では、ガス 、血球 化学、疾病 カ 、S O、 および 量などを参酌することができ る。

０125 明細書にお て、 ガス とは、血液などの 中のガス( えば、酸素 、二酸化炭素など)の ( えば、 による)を測定することを 。

０126 明細書にお て、血球 化学では、 ン ( えば、 ン 、 ン 球など)、血小板、赤血球などを測定することができる。

０127 明細書にお て使用される カ は、 野にお て の 意の カ ( えば、ガン カ など を使用するこ ができる。

０128 明細書にお て S 2 または とは、動脈 液中の を 。 病者の 態を観察するために用 られる。

０129 明の または ステムの の 態では、処置は、前記 (または 生産体)の が処置前の より少な とも ・ 5 値になるまで 続される。 を上げることにより 常な生体 に戻すことによ て、生体が健常 態を取り戻す らである。 対位の 、被験 (または生産体)の が7・ 35～7・45であること

が、治療 況に応じてこの は変動し得る。より好まし は、この は、7 4 ～7・45の 囲内であり得るがそれに限定されな 。

０13０ 明の または ステムの の 態では、処置は、前記 (または 生産体)の が処置前の より少な とも ・ 値になるまで 続される。 来 の 療法では、 をO・ 動さ ることは不可能であり、通常例えば、 5の 囲内( えば、恒常 が7・4の 7・ 35～7・45の 囲内を変動する)の 動し あり得な た らであり、 明では、これを超えた治療法が可能であること が示されたことになる。また、このよ ・ を超える変動によ て、 (また は生産体)などの できな た をも 置することが可能とな た。

０131 これまで、治療に有用なタン ク質を生産する 来方法では、生体の

位または を考慮することは であ た。そのため、効率よ 、確実な治療を提 供することができな た。 明では、治療 果と生体の 位とが直接 関連することが示されたこと ら、確実な治療を (または生産体)に提供するこ とが可能にな た。特に、従来の 熱治療では、治 たり らな たりした例があ たり、 S (または生産体)のよ に治らな た例が存在した。 明では 、生体の 位に基 て治療を行 ことによ て確実に生体の 態を 回復さ ること( ン 球の増加など)ができるよ にな たこと ら、従来 確定また は不能であ た 患の 高度の 率で行 ことが可能とな た。

０132 明の または ステムの の 態では、処置は、前記 (または 生産体)の 位が処置前の酸 位より 5 が高 なるま で 続される。

０133 明の または ステムの の 態では、処置は、前記 (または 生産体)の 位が ～ の間になるまで 続される。 ０134 明の または ステムの の 態では、温熱 またはその 、被験 (または生産体)の またはその等 を低 とも39 Cに上昇さ る ことまたは手段を包含する。

０135 明の または ステムの の 態では、温熱 またはその

、被験 (または生産体)の またはその等 39 Cに少な とも 持することまたは手段を包含する。

０136 明の または ステムの の 態では、温熱 法にお て、前記 前の直 またはその等 と温浴との間の温度差が5C であることを 特徴とする。

０137 明によ て、上述のよ 処置するにお て、従来の 物療法によるあ らゆる 害が回避された。また、温熱治療が最適化されるので、従来 実には し な た 疫不全症候群などの 可能にな たことは従来 術では不可能で あ た または困難であ た格別の 果と える。

０138 明の 態に る 熱処置 ステムの 成では、温熱処置 ( )と して、被験 (または生産体)の 外の 身を Wに さ るための

、 Wを加熱するための 槽を別に備える2 を採用して る。 、 Wの 度を計測する センサ 、温度 (C)として、被験 (または 生産体)の ( えば、直腸 またはその等 )を計測する直腸 またはその 等 センサとを備える。 、 Wを加熱するヒ タ 、 Wを 却する冷却 ァン 、温度センサ 、水位センサとを備える。 要に応じて、

位または の ( えば、 S )が 着され得る。さらに、必要な場合、 他の ラメ タ( えば、ガス 、血球 、疾病 カ 、 S O、 および 量など)を測定する手段が 着され得る。ここで、S Oは95 上に 持 満にな た場合は、酸素 スクなどを与えて酸欠にならな

。 通常 2 3 度に 囲に収まるが、 5 を超えた場合は、

。 ０139 明では、末梢 を測定すれば、同時に相関する 中の O O と の 心温との によ て、それぞれの の 温度(または処置 )を することができる。

０14０ および 化還元 (または )は、 自然 に関連する。 と は自己を修復する機能のことを 。 物が疾患に する発熱することが多 が、 その 不明であ た。し し、 明によ て、修復 能に治療タン ク

ド ゲノムおよび 伝子が関与しており、その 、修復をどのよ に 行えばよ 、およびそのために必要なタン ク質がどの ら 質量で必要であるの を生体が判定することによ て行われる。これらは、ゲノム 報に基 て行われ 得る。 タン ク質の発 、その 度によ て決定され、これは、温度およ び 化還元 位または によ て決定される。 すれば、疾患が治癒すると ことは、発熱 態にお て治療タン ク質の発現が冗 して ることの 返しである ことなのである。 冷えてなることが多 、疾患 態のままでは は発熱が な 。これには、最適な処置 度により被験 を処置することにより タン ク質を 発現さ ることが必要であると える。

０141 明では、体温 免疫が相関すること、体温 免疫 (

位に基 )は相関すること、体温 免疫 と O 相関すること、 体温 免疫 とSO Pが相関することが明ら にな た。これらのメカ ズムに基 て、治療タン ク質を効果的に産生することが可能となる。 ０142 、通常 Cにて 在し、末梢 ( )は 7 35～7・4 に たれて る 。 ( えば、 C)に上昇した場合、末梢 は、 7 35 ら7・ 35に 上昇し、末梢 度が上昇する。 Cに達すると遺伝子機能が冗 、タン ク 生能が冗 される。

０143 スト スに されると、細胞 全が生じる。 全が生じると、 体温 下が生じ、末梢 も低下する。よ て、ゲノムの 能性タン ク ・ 体も低下する。その 果、病態になる。 態になると、天然では発熱 象が 起き、治療タン ク質の発現が冗 され、細胞が正常に戻る。これらの 察に基 て実際に処置 度を および 度を元に決定して処置を行 、治療タン ク ( えば、 s 2 またはその等 などの 現が冗 したことが確 められ た。 ０144 般に 。

、細胞の 37・ 5Cは、 7 4 ～7・45に 。

対応し、37・ Cは、 7・ 3 5～7・4 に対応し、温度36 5Cは、 7 3 ～7・ 35に対応する。

０145 明細書中で使用される場合、 (セットポイント も ) とは、 a)ドナ の s 72 s O s 27 s 47 s 4 s 6 s 9 s 73および s などのタン ク質の発 能、b)ドナ の 圧の 化、c)ドナ の 、d)ドナ の 量、e)ドナ の f ドナ の

の 、 ドナ の 中の ン 数などの 化がドナ の 液 中にお て生じる、ドナ の 指す。 は、一般的には、ヒトでは、 39 C OCの 囲にあり、それぞれの および 体の 康状態に依存して異なる 。このドナ の 、例えば、 、 下、直腸、皮下 部、動脈 、 および 道などにお て 定され得る。ドナ の 、好まし は、 および にお て 定され得、最も好まし は、直腸にお て 定され得る。

０146 ドナ を に して と、処置 度前後にお て、以下のよ が生じ る。

０147 s 72の 、体温が処置 度に到るまで 第に増加し、体温が処置 度 に達すると、その プラト に達する。 、 および 、体温が 処置 度に到るまで 第に増加し、処置 度を超えると生命 持に危険な数値とな るので一般に好まし な 。 または 、処置 度に向 て最 適 され、それを超えると、最適値 ら外れる。 の 、体温が処置 度 に到るまで 第に増加し、その その 、プラト に達する。

０148 インビ で上記 ラメ タが する 度と、インビ で上記 ラメ タが す る 度とがほぼ一致して ることが、予想外にもわ た。 て、インビ での ラメ タ をわざわざ 察する必要がな 。ドナ の 度を特定することは 、ドナ ら採取した 血球をインビ で温度を可変にすることにより産生さ れる、 s 72または 、細胞の きさ、細胞の 度を指標として行われる。

０149 ( 血球における s 72および の 現を検出および する セイ 血球における s 72 s O s 27 s 47 s 4 s 6 O、 s g s 73 s などの 、従来のウ スタン ット 、 S ア タイム PC 、ノ ザン ット法などを使用することによ て、検出およ び することが可能である。このために必要な 、当業者によ て 易に決定されるが、好まし は、8X ～ X である。 血球 上での 、従来の CS 、蛍光 微鏡などを使用することによ て、検出および することが可能である。このために必要な 、当業 者によ て 易に決定されるが、好まし は、 5X ～ X である。

０15０ ドナ の 度を特定する手段( )は、制御 ( )に直接 続して、 ア タイムでドナ の 度の 号を制御 するよ にしてもよ 、ある は制御 分離し、または間接的に処置 度の 号を制御 するよ にしてもよ 。

０151 ドナ の 度を特定するための プ グラムは、例えば、以下の点を留意し て作成される。

０152 チヤン ( ) 体温の差が大き 場合は、 、チヤン ( ) 体温の差が 、さ 場合は、 遅 設定する。

０153 またはその等 の 昇が急に速 なるポイント( 表 らの 度と 血液 環による 上昇が一致する ) ら、比熱の さ 度制御に切り替える。 ０154 度より少し ( えば、 目的 またはその等 42 OCの 合、湯 4 8C)を維持する。この 、 たまり( ) 果の 用であ る。 4 8Cであるが、直腸 またはその等 42 OCになる。

０155 、体表面 度 ら 温 の 度差による放熱の ( )と、直腸 ま たはその等 の (2)との ランスを考慮する。 低 設定する場 合は、速度(2)が速度( )より高 ときである。 間の に れて速度( ) 速度( 2)の ランスが、 衡 ら逆転することになる。この 、速度( )を抑えるために してもよ し、 逆転しな よ (2)を強めてお てもよ 。

０156 このよ に、チヤン ( ) 体温の差を基に、速度( ) 速度(2)の ランスを 計算により調節して、温度調節をする。

０157 体機構の 始 ら、治療 了までの 連の 作を説明すると、例えば 、次のよ になる。

０158 はじめに、 ドナ の 熱治療 果を最大に発揮さ るための ドナ の

度を特定する。ドナ の 度を特定する手段( )が、ドナ ら採取した

血球をインビ で温度を可変にすることにより産 が変動する s 72また

。この 合、具体的には、ドナ の (2 3 1)を採取し、温度を変えることにより、 s 72の が大き する点を、 ドナ の (セットポイント も )とする。このよ にして、ドナ の

件を決定し( まりインビ の プ グラムの 成ができる)、この 果 の ョンに基 て、上記 置を制御する。

０159 明細書にお てタン ク 産体は、 訳に必要なセットの および

を翻訳するための ( 的には、 ボソ ム またはそれを 含む ソ ム)ならびに他の調 子を含む。

０16０ 明細書にお て とは、 野にお て通常 用される意味と同じ意味 で用 られ、伝子 の ク オ 列を相補 として写しとる反応を 。 この 、通常、生体 ( )で行われるが、必要な材料が存在する限り、 でも行われ得る。そのよ には、 野にお て ポ メラ ゼおよびその および または調節 子、ならびに必要 な ク オ などを含み得る。なお、転写の逆の反 ( を 型とする

)は、本明細書にお て 転写 。

０161 明細書にお て とは、タン ク質の生合成または人工合成の際に、 上の塩基配列を読みと てその 報に対応するア ノ酸を選びだし 鎖を形 成して 過程を 。 もまた、通常、生体 ( )で行われるが、必要な材 料が存在する限り、 でも行われ得る。そのよ 、本明細書にお てタン ク 成系 と 。 で行われる場合は、 は ソ ム 結 合 その 上の ドン(3 )にそれぞれ 応した構造をも ア ノ

によ て ア ノ酸は順次 結される。 、細胞 ら取り出した および他の必要なア ノ酸などを含み、これらの系は試験管内で行われ得る。 ０162 明細書にお て、物質( えば、細胞、核酸またはタン ク質などの 物学的 )の とは、その 物学的 子が天然に存在する生物体の 内の他の物 ( えば、 または 有物質である場合、 または 有物質 外の 子、ある は、 目的とする または 有物質 外の または 有物 質 である場合、核酸 外の および目的とする核酸 外の 列を含む タン ク質である場合、タン ク 外の および目的とするタン ク 外のア ノ 列を含むタン ク質など) ら実質的に分離または精製されたものを 。 離された、 または 有物質には、 明の 製方法によ て精 製された または 有物質が含まれる。したが て、単離された または 有物質は、化学的に合成した または 有物質を包含する。 ０163 明細書にお て、物質( えば、 、核酸またはタン ク質などの 物学的

)の とは、その 質に天然に随伴する 子の な とも一部を除去すること を 。したが て、精製および 、その 態が一部 する。したが て、通常 、精製された物質( えば、 または 有物質のよ 生物学的 )におけ るその 質の 、その 質が通常 在する状態よりも高 (すなわち されて る)が、天然に随伴する 子が低減されて る限り、濃縮されて な 状態も の 念に包含される。

０164 明細書にお て物質( えば、 または 有物質のよ 生物学的

)の とは、その 質が濃縮前に試料に含まれて る含有量よりも高 濃度に 上昇さ る行為を 。 て、濃縮もまた、精製および 離と、その 念が一部 する。したが て、通常、濃縮された物質( えば、 または 有物質のよ 生物学的 )は、その 質が通常 在する状態における不純 の 有量は低 減されて るが、 目的とする物質の 有量が増加して る限り、ある特定の が 増加して てもよ 、 されて な 状態も の 念に包含される。

０165 ( を用 る場合のタン ク質の製 )

明の 療に有用な遺伝子 物を生産する能力を有する生産体、ある は、 要に応じて治療に有用な遺伝子 物を ドする を組み込んだ え体ベク タ を保有する動物 胞などに由来する形質 換体を、通常の 法に従 て 培養し、 明のタン ク質を生成 積さ 、 明の より 明のタン ク 質を採取することにより、 明のタン ク または タン ク質を製造することがで きる。

０166 明の 産体を 地に する方法は、ドナ 来の 胞の 用 られる 通常の 法に従 て ことができる。 胞を する 地としては、 明の 物 が資 得る 、窒素 、無機 含有し、形質 換体の 養を 率的に 行える 地であれば 地、合成 地の ずれを用 てもよ 。

０ 67 としては、それぞれの 生物が資 し得るものであればよ 、グ ス、 ラクト ス、スク ス、これらを含有する 、デンプンある はデンプン 水分解 の 、 、プ ピオン の 機酸、 タノ 、プ ノ 等のア 類を用 ることができる。

０168 としては、アン ア、塩化アン ウム、 アン ウム、 アン

ウム、 ン アン ウム等の各種無機酸または有機酸のアン ウム 、その

質、ならびに、ペプトン、 キス、 キス、 ンスチ プ カ 、カゼイ ン 水分解 、大豆粕および大豆粕 水分解 、各種 およびその

用 ることができる。

０169 としては、 ン カ ウム、 ン カ ウム、 ン グネ ウム、 グネ ウム、 ナト 、 、 ンガン、 、炭酸カ ウム 等を用 ることができる。 、 または深部 の 件下で行 。

０17０ 、通常であれば 5～4 Cが適して るとされて るが、 明では、 生産体のドナ の 熱治療 果を最大に発揮さ るための (セットポイント )に設定することが重要である。この 度に本 明の 産体を維持することによ て、予想外に、 、遺伝子 物の 産能力が向上することが示された。 えば、その 上の水準としては、 Cにおける2 ～ 、 程度ある は遺 伝子 物によ ては、 が すなわち、発現して な ものが発現するよ列になるよ なものもある。 、通常5 ～7 間である。 養中 は、 3・ ～9・ に保持する。 の 、無機ある は有機の 、ア カ 、 、炭酸 ウム、アン ア等を用 て 。また 養中 要に応じて、アン ンまたは サイク ン等の抗生物質を 地に添加してもよ 。

０171 定の 態にお て、プ タ を用 る場合、プ タ として

プ タ を用 た発現ベクタ で 換した微生物を するときには、 必要に応じてインデ サ を 地に添加してもよ 。 えば、 acプ タ を用 た発現ベクタ で 換した微生物を するときには ソプ ピ j

ド等を、 プ タ を用 た発現ベクタ で 換し た微生物を するときにはインド アク 地に添加してもよ 。

０172 えば、動物 胞を用 る場合、本 明の 胞を する 、一般に使用さ れて る P 64 e Jo a Of e e ca edca ssoc a o 99 5 9( 967) a eの Sce ce 22 5 ( 952) oo 8 396( 959) 99 P oceed s Of e So ce o e oo ca edc e 73 ( 95 ) またはこれら 地に

添加した が用 られる。

０173 、通常 6～8、25～4 C 5 C 2 等の 件下で ～7

。また 養中 要に応じて、 ナ イ ン、ペ ン、スト プト イ ン等の抗生物 質を 地に添加してもよ 。

０174 、 または生物体を用 る場合でも、温度以外は、通常そのよ 組織、 または生物体が生育する条件を用 、生産体のドナ の 熱治療 果を最大に 発揮さ るための (セットポイント)に設定することによ て生産を達成するこ とができる。この 度に本 明の 産体を維持することによ て、予想外に、 、遺伝子 物の 産能力が向上することが示された。 えば、その 上の水 準としては、 Cにおける2 ～ 、 程度ある は遺伝子 物によ ては 、 が (すなわち、発現して な ものが発現するよ列になるよ なものもある。

０175 (タン ク質の精 および )

明の 療に有用な遺伝子 物を生産する能力を有する生産体の また は必要に応じて治療に有用な遺伝子 物を ドする核酸 列で 換された 形質 換体 ら、 明のタン ク質を単離または精製するためには、 野で 周知 用の 常の 素の または精製法を用 ることができる。 えば、 の 療に有用な遺伝子 物が生産体の に本 明のタン ク質が分泌される 場合には、その を遠心 の 法により 理し、可溶性 を取得する。 その 溶性 分 ら、 出法、 による 、有機 による 、 チ ア ノ チ ( ) Se a ose O P 75( ) 脂を用 た イオン ク トグラ ィ 、S e a ose (P a aca)等の樹脂を用 た イオン ク トグラ ィ 、 ァ ス、 ァ ス等の樹脂を用 た ク トグラ ィ 、分子 用 た 法、ア ィ ティ ク トグラ ィ 、ク ト ォ ング 、

の の 法を用 、精製 を得ることができる。

０176 明の 療に有用な遺伝子 物が生産体 に溶解 態で 積する場合には、 を遠心 離することにより、 の 胞を集め、その 胞を洗浄した後に 、超音波 、 ンチプ ス、 ントンガウ ン ナイザ 、ダイ 等によ り細胞を破砕 、 出液を得る。その 出液を遠心 離することにより 得られた 清 ら、 出法、 による 、有機 による 、 チ ア ノ チ ( ) Se a ose O P 75( ) 脂を用 た イオン ク トグラ ィ 、S e a ose (P a a ca)等の樹脂を用 た イオン ク トグラ ィ 、 ァ ス、

ァ ス等の樹脂を用 た ク トグラ ィ 、分子 用 た 法、ア ィ ティ ク トグラ ィ 、ク ト ォ ング 、

の の 法を用 るこ 産体 に不溶体を形成して発現 した場合は、同様に細胞を回収後 、遠心 離を〒 ことにより得られた

より、通常の 法により 明のタン ク質を回収後、そのタン ク質の不溶体を タン ク で可溶 する。この 液を、タン ク を含まな ある はタン ク の 度がタン ク質が変性しな 程度に希薄な溶液に希釈、 ある は 、 明のタン ク質を正常な立体構造に構成さ た後、上記 同 様の 製法により を得ることができる。

０177 また、通常のタン ク質の精製方法U・ a Sade e ods z o1 o 83 458 に準じて精製できる。 ０178 さらに、 明のタン ク 身に対する 体を用 た テイ ク トグラ することもできる。 明のタン ク質は、 の U・ o oec a 6 29 34 Sce ce 242 62 64 J oc e 6 6 68( 99 ) に準じて、 o ・ を用 てを生産することができる ０179 製した 明のタン ク質の構 、タン ク 化学で通常用 られる方 法、例えば 伝子ク ングのためのタン ク ( 野久 、東京 同人発行、 993 )に記載の 法により実施 能である。 明のタン ク質の生 、そのタン ク質に応じ、 の 定法に準じて 定することができる。 ０18０ ( 明細書にお て られる一般 )

明細書にお て使用される 、 ではな と具体的に指示しな 限り、 野の 囲内にある、 イク イクス、微細 工、有機 、生 、遺伝子工学、分子生物学、微生物学、遺伝 および 連する分野における周知 術を使用する。そのよ 技術は、例えば、以下に 挙した文献および 明細 書にお て他の場 お て引用した文献にお ても十分に説明されて る。

０181 工に ては、例えば Ca be S・ ( 996) e Sce ce a d ee Of c oeec o c ab ca o O fo d e s Pes s Za P・ ( 996) c o c oa a ab ca o Pac ca G de o Se co d c o Pocess Se co d c o Se ces ado ・J・ ( 97) da e as Of c ofab ca o C C 5 Pes a o d P ( 997) a dboo Of c o o a c o ac c o b ca o c o o a などに記載されており、これらは本明細書に お て関連する部分が参考として 用される。

０182 明細書にお て られる分子生物学的手法、生 的手法、微生物学的手 法は、 野にお て 知であり 用されるものであり、例えば、 a a s ・ e a ( 989) oec a Co abo a o a a Cod S aboおよびそ 3 d d (2 ) s be ・ e a eds C e Po oco s oec a oo Jo W e So s c 58(2 ) s ・ ( 99 ) PC Po ocos G de o e ods a d ca o s cade c Pess s ・ e a ( 995) PC S a e es cade c Pes S s J・J e a ( 999) PC ca o s Po oco s o c o a Ge o cs cade c Pess a ・J ( 985) O o ceo de S es s Pac ca oac Pess Ga ・J ( 9 ) O o ceo de S es s Pac ca oac Pess c s e ( 99 ) O o ceo des a d ao es P ac ca oac Pess da s ・ e a ( 992) e oc e s Of e cec cds C a a a S aba o a Z e a ( 994) d a ced O a c C e s Of cec cds We e ac b G・ e a ( 996) cec cds C e s a d o o O fo d e s Pess e a so G・ ( 996) oco a e ec es cade c Pess e od z oo 2 2 247 cade c Pess 994 伝子

社、 997などに記載されており、これらは本明細書にお て関連する部分( 部で あり得る)が参考として 用される。

０183 (I ・ 品など、およびそれを用 る 療、予防な

の 面にお て、 、医薬および 粧品に関する。この および 、薬学的に受容 能な などをさらに含み得る。 明の 含まれる 薬学的に受容 能な としては、 野にお て の 意の 質が挙げ られる。

０184 そのよ 適切な処方 または 学的に受容 能な としては、

、保存 、着色 、風味料、および 、乳 、懸濁 剤、 、 イラ 、増 量 、 、送達 ク 、希釈 、 および または 学的アジ ント げられるがそれらに限定されな 。 表的には、 明の 、単離された多能 性 細胞、またはその 変体もし は誘導体を、 上の生理的に受容 能な ア、 または とともに含む の 態で投与される。 えば、適切 な は、注射 水、生理的 、または人工 脊髄液であり得、これらには、 達のための に一般的な他の物質を補充することが可能である。 ０185 明細書で使用される受容 能な ア、 または安定 剤は、 ピ ン トに対して 性であり、そして好まし は、使用される 薬量および 度にお て 性であり、そして以下が挙げられる ン 塩、ク ン 塩、または他の有機酸アス ビン 、 ト ポ タン ク ( えば、血清ア ン、ゼラチンまたは免疫グ ン) 水性ボ ( えば、ポ ドン) ア ノ ( えば、グ ン、グ タ ン、アス ラギン、ア ギ ンまたは ジン) ノサッカ 、 サッカ および他の炭 (グ ス、 ンノ ス、または キスト ンを含む) ト ( えば、 ) ア ( えば、 ン ト または ト ) イオン( えば、ナト ウム) ならびに ある は イオン ( えば、 ee 、プ (P o c)またはポ チ ング (P G))

０186 示の 切な としては、中性 塩水、または ア ン 混合された生理 塩水が挙げられる。 まし は、その 、適切な ( えば、スク ス)を用 て として処方される。他の標 な ア、希 釈 および 所望に応じて まれ得る。他の例 な組成 、 7 8・ 5の s または 4 5・ 5の を含み、これらは、さらに、 ト またはその 切な代替 を含み得る。

０187 明の 、経口 または に投与され得る。ある は、 明の 、静脈 または皮下で投与され得る。 身投与されるとき、 明にお て使用 される医薬は、発熱 質を含まな 、薬学的に受容 能な水溶液の 態であり得る 。そのよ 学的に受容 能な組成 の 、 、等 性、安定性などを考慮 することにより、当業者は、容易に行 ことができる。 明細書にお て、投与 、経口投与、非 口投与( えば、静脈 与、筋肉 与、皮下 与、皮 与 、粘膜 与、直腸 与、 与、患部 の 与、皮膚 与など)であり得る 。そのよ 投与のための 、任意の 態で提供され得る。そのよ 製 態としては、例えば、 剤、注射 、徐 が挙げられる。

０188 明の 、必要に応じて生理学的に受容 能な ア、 または ( 局方 4 またはその 新版、 。 o s P a "。。 。"1 Sce ces 8 d o ・ Ge a o ed ac P b s Co a 99 などを参照) 、所望の 度の 度を有する とを混合することに よ て、凍結 されたケ キまたは水溶液の 態で調製され 存され得る。

０189 明の 法にお て使用される 物の量は、使用目的、対象 ( 類 、重 度など)、ドナ の 齢、体重、性別、既往 、細胞の または 類などを 考慮して、当業者が容易に決定することができる。 明の 法を (また はドナ )に対して施す 度もまた、使用目的、対象 ( 類、重 度など)、ドナ の 齢、体重、性別、既往 、および 過などを考慮して、当業者が容易に 決定することができる。 度としては、例えば、毎日 月に ( えば、 間に 月に )の 与が挙げられる。 間 月に 回の投与を、経過を見

。

０19０ 明が 品として使用されるときもまた、当局の 定する規制を しながら 品を調製することができる。

０191 ( )

明の 、農薬の 分としても ることができる。 として処 方される場合、必要に応じて、農学的に受容 能な ア、 または安定 剤 などを含み得る。

０192 明の 、農薬として使用される場合は、 草剤( トなど)、殺 虫・ (ダイア など)、殺菌 ( ゾ など)、植物 長調整 ( 、 ク ラゾ など)、 虫剤( 、 など)、 ( 、 キサイドなど)、誘引 ( 、オイ ノ など)、 ( 、ク オ など)、 色素( 、食用 号など)、肥料( 、 素など)などもまた 要に応じて混合され 得る。

０193 ( ・ )

はまた、保健・ 品分野にお ても利用することができる。このよ 場合、 上述の 薬として られる場合の を必要に応じて考慮す きである。 特に、特定 品のよ 機能性食品・ 康食品などとして使用される場合には、 。

０194

実施 態を実施 として説明する。 下に提供される実 施 、 明のよりよ 解のために提供されるものであり、 明の 以 下の 限定される きでな ことが理解される。 て、当業者は、本明細書中 の 載を参酌して、 明の 囲内で ことができることは明ら であ る。

０ 95 明細書にお 引用された、科学文献、特許、特許 願などの 、そ の 体が、 体的に記載されたのと同じ程度に本明細書にお 参考として 用される。

０196 上のよ に、

実施 態を用 明を例示してきたが、 、この 態に限定して解釈される きものではな 。 、特許 求 の 囲によ てのみその 囲が解釈される きであることが理解される。 業者は、 明の 体的な ま 実施 態の 載 ら、 明の および 識に 基 等価な 囲を実施することができることが理解される。 明細書にお 引 用した特許、特許 および文献は、その 体が具体的に本明細書に記載さ れて るのと同様にその 容が本明細書に対する参考として 用される きであるこ とが理解される。

０197 下、実施 により、 明の 成をより 細に説明するが、 はこれに限定 されるものではな 。 下にお 使用した試薬類は、特に言及した場合を除 、 和光 、Po e a ら市販されて るものを使用した。

０198 ( による s ( ョックタン ク ) 生法～ s の ・ 製 法)

( s 7 に対する ノク ナ 体の )

GS Ge e so S s e ( e s a osce ce )を 、G S タン ク (GS s 72)を作製する。 s 72 C を G X クタ ライゲ ョン 、作製したプラス で大腸 ( Co 2 を形質 換する。 その 、 目的のプラス を持 ク ンを選択する。この 択した大腸 養し、 現を確認する。 、ノ ザン ット 析などの 意の の 法を用 る。 的のGS タン ク質を( 下のドナ 胞の 順に準じて) 、 GS 体結合カラ にて精製する。 製したGS タン ク質を上記 の ac o Xa を用 て 、再度 GS カラ に け、素通り画 ( s 72)を得る。。この よ にして作製した s (「 s )( 2を含む)をアジ ント 共に、 ウス( ab c ウス 性、 日本ク ア) に投与・ (3～4 )する。 体価 s 7 を用 た S 、 Wes e bo により 価する。 S およびウ スタン 、テイングは、P o e a ら市販されるキットを用 て ことができる。 ０199 度、 s を用 て、boosした ウス ら 出した 、 (ヒ ンサイ ンス ンク ら入手 ) 合さ る。 合した細胞を、限界 により選択をする。

０2００ s イ ド を s テイングされた96ウ イク タイタ プ トを用 てスク ングする。 択した イ ド を ウス に投与 し、増殖さ 、大量の 水を得る。 水に 量の アン ウムを 加えて、抗体 を沈澱さ る( )。

０2０1 体をプ テイン ある は タ ンカラ を用 て精製する。 製した 体をC で活性 したSe a ose beads 反応さ 、抗体を結合さ る。これ を、 s 体結合ア テイ カラ として使用する。

０2０2 ・ s ・ )

( s 72の を指標とする 度の )

(または生産体)から 4 1 した。 o e ( co ed P a a S Oso o a )によ て、末梢血 ら 核球を分離した。

個の末 核球を ((株) 、 S に含ま れる)中に溶解した。この 液を C ら始めてゆ り した。 ・ 5Cごとに、こ の 液 らア トを取り出した。 り出した ア ト ら、 (株) 、

S によ てタン ク質を抽出し、 s 72 S (S ess e o ec oo es 、 ド 、カナダ を用 る S によ て s 72の を定量した。 s 72の が増加 ら減少に転じた温度を、この (または 産体)を温熱治療する際の処 度とした。すなわち、この 度にお て、 s 72の 最大であ た。

０2０3 ( の を指標とする 度の )

(または生産体) ら 4 1 した。 o e ( co ed P a a s Oso o a )によ て、末梢血 ら 核球を分離した。

個の末 核球を 4 C 8 C 6 C 56 57に対する 体と、 体で二重 色し、 CS 析によ て、それぞれの 団に て、 の を定量した。この (または生産体)の インビ で した場合の の が増加 ら減少に転じた温度を、この (または生産体)を温熱治療する際の処 度とした。すなわち、この 度に お て、 の 最大であ た。

０2０4 (ドナ の 標を用 る 度の )

な (4 6C 23 ( 身浴)、47 ( 身浴))を与えたときの (または生産体)の 下の 報も 集した。

０2０5 の (または )

ガス カ ( 在する場合)

S O 。

０2０6 記のほ 、以下の ラメ タに関して、 (ヒト) ら の 報を得た aドナ の s 72の 能、

b)ドナ の 圧の 化、

。ドナ の 、

d)ドナ の 量、

e)ドナ の

f ドナ の の 、および

ドナ の 中の ン 。

０2０7 これらの 、処置 、以下の 件で めた。 ０2０8 大原則 の (または )の 。 下の 件も必要に応じて利 用した。

０2０9 aドナ の s 72の 大の を誘導する

b)ドナ の 圧の 圧が上昇し始める

c)ドナ の 昇した が減少し始める

d)ドナ の 大した 量が減少し始める

eドナ の ドナ の の ( または下降 がプラト に 達する時の温

f)ドナ の の 面上で最大発現 を示す )ドナ の 中の ン 大の ン 数の 加を示す

( 度での 産体の )

記のよ にして得た 、 では、 C、 2では、38 5C 3では、39 5Cであ た。これらの 度を厳密に 持する ステムを用 て、 の 体 ら取り出した、 ン および 液を処理した。

０21０ 験として、 Cおよび4 Cで一律 たもののほ 、38 5Cが処置 度 のものに て、 Cある はその逆のものを行 た。

０211 ( )

ン および 5 ず 、以下の 理に供する。この量は適 更することができ、以下の 理もスケ アップおよびダウ することができることが 理解される。

０212 C a s s C 7 4 5 aC チン プスタチン 2 ダイズイン ア ノフ メチ ス オ ド(P S ) を加える( 8

1の 合で)。 られた 合物を超音波 ( 、5 ) 、 細胞を 一に破壊する。

０213 られた 合物を超 ( OO )する。

０2 4 さらに、 する( 45 アサイズ イ タ 。

０215 液を、上記のよ にして調製した イカラム( s 体結合ア カラム)にアプライする。

０216 を C a s s C 7 4 ( 5

aC P S )にて する。 28 の (O )

28０で する。

０217 2 2・ 5に s を する。

０218 s C 8・ に 、中和する。

０219 和した ン 対して十分に透 する(4Cにて)。 換 を繰り返す。これにより、精製 を得る。

０22０ 製した量を計測すると、それぞれの 度では、 Cおよび4 Cに比 、 s

72が 以上 加して た。また、38 5Cが処置 度のものでは、 Cで 養 した場合は、生産量が半減する。 度が39 Cのものを、38 5Cで 養した 場合には3 。に生産量が減少する。 て、処置 度に生産体を維持することが遺 伝子 物の 産に重要であることが理解される。

０221 ( 2 、 および 物体における実施 )

より 核球を、 ン プ ( 4545 S ed POC s 、 オス 、ノ ウ イ)を用 て、分離および 取した後、または 織を ゲナ ゼ 理して、 質細胞を得る。この 胞を、実施 にお て決定した 度で加 して s 72の の 加を誘導する。 ント 験として、実施 で記載 される他の温度での 験も行 。

０222 タン ク質の誘 、 ノク ナ 体を結合さ たア ィ ティ カラ により、 分離および 製を行 、定量する。

０223 製を、実施 に記載されるのと同様に行 、精製した量を計測すると、それぞ れの 度では、 Cおよび4 Cに比 、 s 72の が増加することが分 る。

０224 ( 3 熱処置による COの 関関係、および ・ の 関関 係の )

に記載されるよ に、被験 の 熱処置の 件を決めた。

０225 および女性それぞれ9名の被 に て、 明の 熱処置による、 COおよび ・ の 関関係を求めた。

０226 の に て、血液の がある にな たときの Oと の 係に て、デ タを採り、それぞれをプ ットした。その 代表 として男性の 果を 図 に示す。ここでは、横軸に各 の値を ・ 位にとり、 には CO ( ) および の値を示す。これらの値は、 S ( 薬品工業)を用 た。 では、左側に O

が上昇し、下がると Oが上昇して た。 理的な とされる7・ 35～7・4 にお てこれらは 抗して た。

０227 次に、 の に て、直腸 度とそのときの との 関関係を求めた。

2に ( )の 度とそのときの の 関関係を、 3に ( )の 度とそのときの に てのデ タをまとめたグラ を示す。ここで は、横軸に各 ( )を示し、 に対応する を示す。 されるよ に、直 腸 度が上昇するほど、 が上昇し、生理的 呼ばれる7・ 35～7・45、特に治 療 呼ばれる7・4 ～7・45は、 Cにお てほぼ 実に達成されることが明ら にな た。

０228 ( 4 熱処置による各種 タン ク質の動 )

に記載されるよ に、被験 の 熱処置の 件を決めた。これらに基 て、白血球上のC 4 C 8 C 6 C 2 C 56の を実施 に記載の プ ト に準じて決定した。その 果を図4に示す。 されるよ に、温熱処置 、 の タン ク質の発現が上昇して ることが明ら にな た。

０229 また、 ン 表面の クラス1の の 動を観察した。 験では、被験 に、麻酔を 酔薬 ランダム 用量27 1)を使用して、呼吸を自発 入さ た。 全身で、水温は C 後で行 た。 2・ 5 間で あ た。 C( )を6 持し、 さ た。 果を図5に示す。 5は、 および ン 球の発現の 子を左上 ら処置前、処置 後、 間後、24 間後、 3 後、 間後を示す。 されるよ に、処置により、クラスの が処置 後 ら7 日にお て発現が維持されて た。

０23０ タン ク 現の 子をS S にて電気 した。 SPに ての 石は実施 に基 行 た。その 果のS S の 真を図6に示す。

ント としてラット 、脳を、左 ら順番に処置前、処置 後、 間後、24 間後、 3 後、 間後を示す。なお、上段は、 C プラスによ て 露した結 果を示し、下段は 5 露した結果を示す。 されるよ に、 SPはほぼ一定の 現を示し、 SP72 SP73 SP6 は、 間後も高 現を示して 。 て、治療タン ク質の高 現が実現したことを示す。

０23 様の 験を他の被 Wで行 た クラスの および SP の 果をそれぞれ、 7および 8に示す。 7 ら明ら なよ に、処置により、別の被 でも、クラスの が処置 後 ら7 日にお 発現が維持されて 。 8 ら明ら なよ に、別の被 でも、 SPはほぼ一定の 現を示し、 SP72、 SP73 SP6 は、 間後も高 現を示して 。 て、治療タン ク質の高 現が実現したことを示す。

０232 ( 5 )

に記載される ク オ を含む クタ (PG X)を用 、 e a またはC O 胞を形質 換し、ある は生体 伝子 入さ た。この 換体を、実施 同様に処置 度にて培養する。

０233 上のよ に、

実施 態を用 明を例示してきたが、 、この 態に限定して解釈される きものではな 。 、特許 求 の 囲によ てのみその 囲が解釈される きであることが理解される。 業者は、 明の 体的な ま 実施 態の 載 ら、 明の および 識に 基 等価な 囲を実施することができることが理解される。 明細書にお 引 用した特許、特許 および文献は、その 体が具体的に本明細書に記載さ れて るのと同様にその 容が本明細書に対する参考として 用される きであるこ とが理解される。

上の利用 ， ０234 明により、医薬、農薬、食品などで使用され得る、治療に有用なタン ク ( えば、 s 72 を、 率で簡便に 造することができるよ にな た。 て、その 、 の 野に及ぶことが理解される。

Claims

求の

療に有用な遺伝子 物を生産する方法であ て、

) 伝子 物を生産する能力を有する生産体を提供する工程

) 産体を、 産体のドナ の 熱治療 果を最大に発揮さ るための 度に供する工程であ て、 、 産体の 位または に基 て決定される、工程および

C) 産体 ら、 伝子 物を得る工程、

を包含する、方法。

2 伝子 s 72 s O s 27 s 47 s 4 s 6 s g s 73および s らなる より選択される、請求 に記載の 。3 伝子 、 s 72である、請求 に記載の 。

4 記生産体は、細胞、組織、 または生物体である、請求 に記載の 。5 記生産体は、血液または ン 液を含む、請求 に記載の 。

6 記生産体は、人工 産体である、請求 に記載の 。

7 記生産体は、前記 伝子 物を ドする核酸 列を含む、請求 に記載の 。

8 記生産体は、前記 伝子 物を ドする核酸 列を用 て 換された細 胞を含む、請求 に記載の 。

9 伝子 、配列 、配列 3、配列 5、配列 7、配列 9 、配列 、配列 3、配列 5、配列 7、配列 9、配列 2 または配列 23に記載の 列により ドされる、請求 に記載の 。 ０ 、前記ドナ の

aドナ の s 72の 能、

b)ドナ の 圧の 化、

。ドナ の 、

d)ドナ の 量、

e)ドナ の

ドナ の の 、および )ドナ の 中の ン 、

らなる より選択される生体 化をさらに基にして決定される、請求 に記載の 。

伝子 物を得る工程は、ア ィ ティ 製を用 ることにより 成される、請 求 に記載の 。

2 ア ィ ティ 、抗体を用 る、請求 記載の 。

3 度を特定する工程をさらに包含する、請求 に記載の 。

4 定の際に、以下

aドナ の s 72の 能、

b)ドナ の 圧の 化、

。ドナ の 、

d)ドナ の 量、

e)ドナ の

f ドナ の の 、および

ドナ の 中の ン 、

らなる より選択される生体 を観測する工程をさらに包含する、請求 3に 記載の 。

5 に記載の 法により 産される遺伝子 。

6 療に有用な遺伝子 物を生産する ステムであ て、

) 伝子 物を生産する能力を有する生産体

) 産体を、 産体のドナ の 熱治療 果を最大に発揮さ るための 度に供する手段、 、 産体の 化還元 位または に基 て決定される、手段および

C) 産体 ら、 伝子 物を得るための 段、

を包含する、方法。

7 ) 度を特定する手段をさらに備える、請求 6に記載の ステム。8 伝子 s 72 s O s 27 s 47 s 4 s 6 s g s 73および s らなる より選択される、請求 6に記載の テム。

9 伝子 、 s 72である、請求 6に記載の ステム。

2０ 記生産体は、細胞、組織、 または生物体である、請求 6に記載の ステム 2 記生産体は、血液または ン 液を含む、請求 6に記載の ステム。

22 記生産体は、人工 産体である、請求 6に記載の ステム。

23 記生産体は、前記 伝子 物を ドする核酸 列を含む、請求 6に記載の ステム。

24 記生産体は、前記 伝子 物を ドする核酸 列を用 て 換された細 胞を含む、請求 6に記載の ステム。

25 伝子 、配列 、配列 3、配列 5、配列 7、配列 9 、配列 、配列 3、配列 5、配列 7、配列 9、配列 2 または配列 23に記載の 列により ドされる、請求 6に記載の ステム。26 、前記ドナ の

aドナ の s 72の 能、

b)ドナ の 圧の 化、

。ドナ の 、

d)ドナ の 量、

e)ドナ の

f ドナ の の 、および

ドナ の 中の ン 、

らなる より選択される生体 をさらに基にして決定される、請求 6に記載の ステム。

27 伝子 物を得る手段は、ア テイ 段を含む、請求 6に記載の ステム。

28 ア テイ 、前記 伝子 物に対して特異 な抗体を含む、請 求 27に記載の ステム。

29 定する手段は、 産体の 位または を測定する手段である、 7に記載の ステム。

3０ 定する手段は、以下

aドナ の s 72の 能を測定する手段、

b)ドナ の 圧の を測定する手段、

c)ドナ の を測定する手段、

d)ドナ の 量を測定する手段、

e)ドナ の を測定する手段、

f)ドナ の の を測定する手段、および

ドナ の 中の ン を測定する手段、

らなる より選択される生体 を観測する手段をさらに備える、請求 7に記載 の ステム。