WO2004103391A1 - 肝臓中の脂質代謝促進剤、肝臓中の脂質代謝促進健康食品及びその有効成分であるペプチド混合物の製造法 - Google Patents

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protein
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Nobuhiro Fukuta
Masanobu Sakono
Nobuko Iritani
Toshihiro Nakamori
Hitoshi Furuta
Michihiro Sugano
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Fuji Oil Co Ltd
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Definitions

  • liver lipid metabolism promoter liver lipid metabolism promoting health food, and peptide mixture as active ingredient thereof
  • the present invention provides a liver lipid metabolism promoting agent, a liver lipid metabolism promoting health food and a peptide mixture as an active ingredient thereof.
  • the liver is the largest among human organs and corresponds to about 1/50 of body weight. Its physiological functions are extremely diverse and play a central role in carbohydrate, protein metabolism, and lipid / energy metabolism, and are indispensable for maintaining the life of living organisms, such as storage of substances, detoxification, hematopoiesis, and blood coagulation. There are many.
  • the lipid metabolism function assigned to the liver cells is deeply linked to the lipid metabolism function in the body, and one of the causes is a decrease in the lipid metabolism function of the liver and further dysfunction, resulting in hyperlipidemia, hypertension, and dysfunction.
  • Diseases such as pulse sclerosis, obesity, fatty liver, diabetes and hypertension are caused.
  • To improve the dysfunction of lipid metabolism in the liver it is considered important to promote lipid metabolism and reduce the concentration of lipid accumulated in cells.
  • Lipid metabolism improvers derived from some proteins and their hydrolysates are already known. It is known that vegetable proteins, particularly soy protein, are superior to animal proteins in terms of the effect of proteins on improving lipid metabolism. As for these protein hydrolysates (peptides), the following are known, including those derived from proteins and proteins, and their functions and effects are various.
  • JP-A-52-83816 new polypeptide
  • JP-A-04-149137 diet
  • JP-A-06-211690 feeding for casein-derived blood lipid suppression
  • JP-A-11-80006 JP Lipid Absorption Inhibitor
  • JP-A-2000-264845 Fish-Derived Cholesterol-Lowering Agent
  • JP-A-2000-228967 Lipid Metabolism Processed Food
  • JP-A 2001-2577 Disived from Royal Jelly
  • JP-A-2001-57868 material for improving fat metabolism derived from wastewater of livestock processing
  • JP-A-2001-57869 material for improving obesity and diet
  • JP-A-2001-58955 JP-A-08-157389 a therapeutic agent for hypertriglyceridemia
  • JP-A-09-157290 cholesterol-reducing peptide
  • JP-A-09-255698 Peptides inhibiting blood triglyceride concentration increase
  • lipid metabolism improving agent has an effect of lowering the fat content and the amount of lipid droplets in the liver. This is due to a decrease in the fat content absorbed and a decrease in the serum fat content, which is not an effect of altering the lipid metabolic activity itself in the liver.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 04-149137 (diet) is known as a proteolyzed low molecular weight peptide, which is composed mainly of dipeptide and tripeptide, and thus has an inhibitory effect on fat accumulation and weight reduction. It is said that it has an effect on suppressing the increase in lipid metabolism in the liver.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 10-203994 discloses that a peptide having a molecular weight of 500-5000 derived from a soybean protein hydrolyzate has an effect of increasing neutral fat in blood and HDL-cholesterol. As mentioned, it promotes fatty acid metabolism in the liver.
  • soybean protein is a food material which has excellent nutritional properties among vegetable proteins, has various physiological activities recently, and is attracting attention as a physiologically functional agent.
  • soybean protein has an effect of suppressing obesity
  • the mechanism of lowering the body fat percentage is known to be due to the suppression of the activity of fatty acid biosynthetic enzymes in the liver (Iriya J. Nutr., 126, 380, 1996), and it is not known which component in soy protein is the active ingredient.
  • the present applicant has continuously studied the physiological action of soybean protein hydrolyzate (peptide mixture), particularly on lipid metabolism. For example, as disclosed in Japanese Patent Publication No.
  • soybean protein hydrolyzate (oligopeptide mixture) suppresses a rise in blood cholesterol, and is disclosed in Japanese Patent Application Laid-Open Nos. 1-269456 and 3-272694.
  • peptide promotes lipid metabolism in the liver and improves lipid concentration in the liver.
  • the fact that the triglyceride content in the liver of a soybean protein hydrolyzate is reduced is described only in the cited data in JP-A-4-51872. It is presumed that soybean protein and its hydrolyzate contain components that suppress the activity of liver fatty acid biosynthetic enzymes, but it has not yet been determined which components exert their effects. Power, ivy.
  • JP-A-2002-212097 discloses a lipid metabolism-improving agent for a milk-derived basic peptide fraction, which is produced using a cation exchanger, and has a glutamic acid + aspartic acid content of 30%. The following is different from the present invention. There is no known lipid metabolism promoter in the liver that does not feel bitter and has a high acidic amino acid content as in the present invention.
  • the present invention promotes lipid metabolism in the liver, and improves or prevents lifestyle-related diseases associated with abnormal lipid metabolism in the liver. Aimed to provide.
  • the present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and obtained a finding that a peptide mixture rich in acidic amino acids (glutamic acid-aspartic acid) and having a large ratio promotes lipid metabolism in the liver.
  • the present invention is a lipid metabolism-promoting agent in liver comprising a hydrophilic peptide and a peptide mixture in which 30 to 70% by weight of amino acids constituting the hydrophilic peptide are acidic amino acids as an active ingredient.
  • Proline in the constituent amino acids of the hydrophilic peptide is preferably 5% or less of all the amino acids.
  • a protein having an average molecular weight of 200-10 000, an acidic amino acid of 30 70% by weight (hereinafter referred to as “%”), a basic amino acid of 10% -30%, and a branched amino acid in the total amino acid composition.
  • a liver lipid metabolism promoter containing as an active ingredient a peptide mixture containing 15.0% or less of chain amino acids, 9.0% or less of aromatic amino acids, and 5.3% or less of proline is preferable.
  • the present invention also provides a method for producing a peptide mixture, which comprises decomposing a protein with one or more proteolytic enzymes and treating the resultant with a hydrophobic resin.
  • the protein is preferably soy protein.
  • As the hydrophobic resin a styrenedibutylbenzene resin is preferable.
  • the present invention is also a health food which promotes lipid metabolism in the liver, comprising a peptide mixture comprising a hydrophilic peptide, wherein 30 to 70% by weight of the constituent amino acids of the hydrophilic peptide is an acidic amino acid as an active ingredient.
  • Proline in the constituent amino acids of the hydrophilic peptide is preferably 5% or less of the total amino acids. More specifically, it is an enzymatically decomposed product of a protein, having an average molecular weight of 200-10000, an acidic amino acid content of 30-70% by weight (hereinafter referred to as "%"), a basic amino acid content of 10% -30%, and a branched amino acid. Healthy foods that promote lipid metabolism in the liver and contain a peptide mixture containing 15.0% or less of chain amino acids, 9.0% or less of aromatic amino acids, and 5.3% or less of proline as active ingredients are preferred.
  • the present invention provides an oligopeptide mixture that promotes hepatic lipid metabolism and inhibits hepatic fatty acid biosynthesis, resulting in abnormal hepatic triglyceride concentration, resulting in obesity, hypertriglyceridemia, and fat. Prevents lifestyle-related diseases such as liver, diabetes or hypertension, coronary artery disease, cerebral artery disease, chronic nephritis, nephrosis, cirrhosis, obstructive jaundice, etc. It is now possible to apply it to pharmaceuticals.
  • the liver lipid metabolism promoter of the present invention will be described. Lipids in this liver
  • the metabolism promoter is composed of a hydrophilic peptide, and contains, as an active ingredient, a peptide mixture in which 30 to 70% by weight of the constituent amino acids of the hydrophilic peptide are acidic amino acids. What is important here is that the lipid metabolism-promoting peptide mixture in the liver contains no water-insoluble fraction and is composed of hydrophilic amino acids, and that the proportion of acidic amino acids is high.
  • hydrophilic amino acids As hydrophilic amino acids, glycinin (Gly), serine (Ser), threonine (Thr), cystine (Cys), asparagine (acid) (Asp), glutamine (acid) (Glu), lysine (Lys), S is the force that arginine (Arg) and histidine (His) are raised.
  • the ratio of acidic amino acids in the amino acids constituting the hydrophilic peptide is 0% by weight (hereinafter simply referred to as%), preferably 35 55%. It is.
  • the acidic amino acid include asparagine, aspartic acid, gnoretamine, and gnoretamic acid. Glutamine and glutamic acid are preferred.
  • the proline content be 5% or less, preferably 3% or less, particularly 1% or less from the viewpoint of inhibiting the synthesis of fatty acids. More specifically, it is an enzymatically decomposed product of a protein, having an average molecular weight of 200-10000, an acidic amino acid content of 30-70% by weight (hereinafter referred to as "%"), a basic amino acid content of 10% -30%, and a branched amino acid.
  • % acidic amino acid content of 30-70% by weight
  • a lipid metabolism promoter in the liver containing, as an active ingredient, a peptide mixture containing 10.5% or less of chain amino acids, 8.0% or less of aromatic amino acids, and 5% or less of proline is suitable.
  • the average molecular weight of this peptide mixture contributes to the effect of promoting lipid metabolism in the liver.
  • the lower the gastrointestinal absorption rate the faster it can be.
  • it can be 500 3000.
  • a small amount of the peptide mixture is preferably 35% or less, preferably 10% or less.
  • the effect of promoting lipid metabolism in the liver is not known, but in the present invention, the basic amino acids are 10% 30%, the branched-chain amino acids are 15.0% or less, and the aromatic amino acids are 9.0% or less. Desirably.
  • the smaller the content of hydrophobic amino acids the more favorable the branched chain amino acids and aromatic amino acids. The above range is preferable.
  • the promotion of lipid metabolism in the liver of the present invention is to suppress the biosynthesis of fatty acids in the liver. That in the liver, a series of enzymes der synthesize fatty acids from Asechiru CoA Acety Bok and oA-carboxylase, Fatty acid synthase ⁇ ATPcitrate-lyase, inhibit the enzymatic activity of such Malic enzyme ⁇ Glucose-6-phosphate dehydrogenase, and
  • Acety is a lipid metabolism that suppresses the expression of mRNAs such as CoA_carboxylase and Fatty acid synthase, and has the effect of reducing the triglyceride and cholesterol content accumulated in the liver.
  • the peptide mixture for improving lipid metabolism in liver of the present invention can be used as a pharmaceutical or health food for preventing or treating diseases based on the suppression of fatty acid synthesis.
  • the lipid metabolism promoter in the liver used as a medicament can be contained as an oligopeptide mixture in an amount of 0.01% or more, preferably 0.1% or more. If it is less than 0.01%, it is difficult to realize a substantial effect.
  • the daily intake or dosage is appropriately 0.1 mg / kg / day or more, preferably 1 mg / kg / day or more, more preferably 10 mg / kg / day or more as an oligopeptide mixture. 0. If less than lmg / kg / day, the effect may not be observed.
  • a health food that promotes lipid metabolism in the liver as a health food exerts the same effect at the same content and intake of the peptide mixture.
  • the liver lipid metabolism promoter and the liver lipid metabolism promoting health food of the present invention significantly promote liver lipid metabolism, and thus, have abnormal liver lipid metabolism, specifically, It can be used as an agent or food for the purpose of preventing or improving obesity, hypertriglyceridemia, fatty liver, diabetes or hypertension caused by abnormal triglyceride concentration.
  • it can be used as a solution or as a raw material for concentrated liquids, freeze-dried products and spray-dried products, depending on the form of oral nutritional food, tube nutritional food, etc.
  • Foods include a wide variety of foods, such as beverages, frozen desserts, tablets, and confectionery. It can also be used as a health food as capsules or tablets that are not in the form of ordinary food.
  • the mixture of peptides for promoting lipid metabolism in the liver according to the present invention converts soybean protein with an enzyme.
  • the power that can be obtained by disassembling S As the soy protein used in the present invention, soy milk, concentrated soy protein, isolated soy protein, defatted soybean, soy whey protein, or the like can be used as an inexpensive material. Among them, isolated soy protein is preferable.
  • the concentration of the soybean protein solution to be subjected to the enzyme treatment is suitably 1% by weight to 30% by weight, preferably 515% by weight, more preferably 812% by weight.
  • a low concentration does not hinder enzymatic degradation, but is not preferred because it reduces productivity. If the concentration of the soybean protein solution is too high, the polymerization of the once hydrolyzed protein hydrolyzate will be strong, so a large amount of enzyme will be required to sufficiently decompose it, which is not preferable.
  • proteolytic enzyme used in the present invention may be an exoprotease or an endoprotease alone or in combination, and may be of animal, plant or microbial origin. Specifically, serine proteases (trypsin, chymotrypsin, animal-derived subtilisin, carboxypeptidase, etc.), thiol proteases (plant-derived papain, fusin, bromelain, etc.), carboxy proteases (animal-derived pepsin, etc.) ) Can be used.
  • serine proteases trypsin, chymotrypsin, animal-derived subtilisin, carboxypeptidase, etc.
  • thiol proteases plant-derived papain, fusin, bromelain, etc.
  • carboxy proteases animal-derived pepsin, etc.
  • Protin FN derived from Aspergillus oryzae (manufactured by Daiwa Kasei Co., Ltd.), Streptomyces “actinase” derived from Griseus (manufactured by Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.), and “ Alcalase “(manufactured by Novozymes Japan Ltd.) and” Protin A “(manufactured by Daiwa Kasei Co., Ltd.) derived from Bacillus subtilis.
  • enzymes containing endoprotease include “proteases 3” (manufactured by Amano Pharmaceutical Co., Ltd.) and “Protin AC-10” (manufactured by Daiwa Kasei Co., Ltd.).
  • An example of the proteolytic enzyme is “Proteases 1 ⁇ ” (manufactured by Amano Pharmaceutical Co., Ltd.).
  • the hydrolysis conditions of the present invention vary somewhat depending on the type of protease used, but generally, an amount sufficient to hydrolyze soybean protein in the action pH range and the action temperature range of the protease is used. Preferably, it is used.
  • a salt-restricted diet eg, a tube feeding diet
  • the pH is 510, preferably pH 6-9
  • the salt by neutralization is used. It is preferable because the generation of can be reduced.
  • Means for separating and removing insoluble degradation products from the enzyme-decomposed solution of soybean protein may be by filtration means such as filter press or membrane separation, but most preferably a method of using both centrifugation and membrane separation.
  • filtration means such as filter press or membrane separation, but most preferably a method of using both centrifugation and membrane separation.
  • the pH must be adjusted to increase the cohesion of insoluble substances. 4-6.2, preferably 4.5-5. This is because insoluble matter including undegraded matter tends to aggregate around the isoelectric point of soybean protein.
  • salts or hydroxides such as chlorides and sulfates of calcium magnesium in the decomposed solution, alkaline earth metal compounds, or protein coagulants such as sodium polyacrylate, alginic acid, chitin chitosan, etc. Separation can be enhanced even if squeezed.
  • the hydrophobic component is adsorbed on a hydrophobic adsorbent such as polystyrene beads, whereby the hydrophilic component is recovered.
  • Suitable hydrophobic adsorbing resin materials include, for example, Amberlite XAD (registered trademark) made of organonone earth, Levatit OC (registered trademark) manufactured by Bayer, and Diaion (registered trademark) manufactured by Mitsubishi Kasei.
  • a styrene-vinylinolebenzene-based resin for example, HP-20, HP-21, SP-825, SP-206, SP-207, SP-800 (all are registered trademarks, Acrylic resins (HP1MG, HP2MG (both are registered trademarks, manufactured by Mitsubishi Kasei Corporation), etc.), phenolic resins (S874, S861 (both are registered trademarks, Sumitomo Chemical ( Etc.) are suitable.
  • the resin can be brought into contact with a soybean protein enzyme digestion solution.
  • This contact method does not matter even in a batch process or a continuous column process.
  • the amount of the hydrophobic adsorbent used is about 0.5 to 100 times the weight of the dry weight of the soybean protein hydrolyzate, and more preferably about 260 times the weight. If the amount of the adsorbent is small, the hydrophobic amino acid cannot be sufficiently adsorbed, and if the amount is too large, the yield of the other oligopeptide mixture decreases.
  • the mixture can be filtered with a filter that can pass water-insoluble polymer components but cannot pass resin.
  • the soybean protein hydrolyzate is used in an amount of 1 part by weight of dry matter. 2 to 200 parts by weight, more preferably about 25 to 100 parts by weight, of the soybean protein hydrolyzate solution as a hydrophobic adsorbent, and a linear velocity at which the contact time with the hydrophobic adsorbent is 5 minutes or more. It can be. At this time, the concentration of the soybean protein hydrolyzate is preferably 2 to 50%, more preferably 10 to 30%.
  • 0.53N sodium hydroxide or about 1090% of organic solvent can be used. Ethanol, methanol, isopropanol, acetone, etc. are used as the organic solvent. It can be used about 120 times the capacity of the material.
  • soybean protein peptide mixture solution obtained as described above can be used as it is or after being concentrated depending on the intended use. However, usually, it is sterilized and then subjected to powder drying by freeze-drying or the like. It can be used in the state.
  • the peptide mixture obtained by the above method is hydrolyzed to analyze the amino acid composition.
  • the composition of the hydrophilic amino acid is higher and the composition of the hydrophobic amino acid is lower.
  • the hydrophilic amino acids especially, the content of glutamic acid, which is an acidic amino acid, is high, and the content of aspartic acid tends to be high next.
  • the content of basic amino acids and other hydrophilic amino acids does not change much.
  • the hydrophobic amino acid content is reduced, but the proline is particularly reduced, and the higher the decrease, the lower the levels of phenylalanine, leucine, isoleucine and tyrosine.
  • the peptide thus prepared is characterized by having a good flavor and little browning even after long-term storage.
  • the peptide powder obtained above was prepared in a 10% aqueous solution, and the mixture was kept at 7 ° C for about 1 hour.
  • the mixture was treated in a batch system with the biosynthetic adsorbent HP-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.), and passed through a 1-micron filter paper to remove the resin, and the treatment liquid was freeze-dried.
  • the weight of the dried peptide was 1, 2, 4, 8, 16 and 32 times the weight of the dried peptide, and the resin was treated.
  • the average molecular weight of the peptide mixture obtained by the above method is 700 (gel filtration method using HPLC), the average molecular weight of the peptide after fractionation is 700 800, and the molecular weight tends to increase slightly as the resin ratio increases. It was in the direction.
  • Example 1 The lyophilized product obtained in Example 1 was hydrolyzed with 6N hydrochloric acid at 110 ° C. for 24 hours, and then its amino acid composition was analyzed with an amino acid analyzer (L-8500, manufactured by Hitachi, Ltd.). The results are shown in Table 1.
  • Example 2 Test on cultured cells Part 1 / Measurement of mRNA amount of fatty acid synthase
  • Rat hepatocytes obtained by the collagenase method were plated with WE medium (20 mM glucose, 10-7 M Insulin) for 5 hours, and then the samples were added. Change the medium in the morning and evening and after 24 hours Total RNA was extracted and the amount of mRNA was measured. WE medium is 2.04g start as amino acid, XI, X4, X8tt0.2g / L.
  • Rat hepatocytes obtained by the collagenase method were plated with WE medium (20 mM glucose, 10-7 M Insulin) for 5 hours, and the samples were added. The medium was changed in the morning and evening, and harvested after adjusting for 48 hours. After homogenizing the hepatocytes, the enzymatic activity after 105,000 X g supernatant was measured. WE medium is 2.04 g / L as amino acid, start, XI, X4, X8 is 0.2 g / L 0
  • mice Male Sprague-Dawley (SD) rats (4 weeks old, weighing 70-80 g) were purchased from Kudo Co., Ltd. (Kumamoto). After 6-10 days of preliminary breeding, they are divided into four groups: casein group, soy protein group, soy protein enzyme digestion (starting material), and resin fraction of soy protein enzyme digest (X32 above) as shown below. Food for 4 weeks. The temperature of the breeding room was maintained at 22-24 ° C and the light period was from 7:00 to 19:00. Feed and deionized water were given ad libitum. After two weeks of feeding, rats were sacrificed by decapitation and ingested liver and adipose tissue. In addition, adipose tissue ingested fat around the kidney and epididymis. Rats weighing 130-140 g
  • a lipid metabolism-improved beverage having the composition shown in Table 5 below was produced.
  • the flavor of the produced beverage was good, and the flavor did not deteriorate even after storage at room temperature for one year, and there was no problem such as precipitation.

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Abstract

　本発明は肝臓での脂質代謝を促進し、肝臓での脂質代謝異常と関連する生活習慣病などを改善あるいは予防すべく、そのための有効な肝臓内脂質代謝促進剤或いは健康食品を提供することを目的とした。 　そして、親水性ペプチドからなり、この親水性ペプチドの構成アミノ酸の３０～７０重量％が酸性アミノ酸であるペプチド混合物を有効成分とする肝臓内の脂質代謝促進剤または健康食品を完成した。 　また、蛋白質を、一種以上の蛋白質分解酵素により分解し、疎水性樹脂で処理することを特徴とするペプチド混合物の製造法である。

Description

明 細 書
肝臓中の脂質代謝促進剤、肝臓中の脂質代謝促進健康食品及びその 有効成分であるペプチド混合物の製造法
技術分野
[0001] 本発明は、肝臓中の脂質代謝促進剤、肝臓中の脂質代謝促進健康食品及びその 有効成分であるペプチド混合物を提供するものである。
背景技術
[0002] 肝臓はヒトの臓器の中で最大のものであり、体重の約 50分の 1に相当する。その生 理機能の内容は極めて多岐に渡り、糖質、タンパク質代謝、脂質'エネルギー代謝の 中心的役割を演じ、更に物質の貯蔵、解毒、造血、血液凝固など生体の生命維持に 必要不可欠なものが多い。
[0003] 肝臓細胞が担当する脂質代謝機能は体内の脂質代謝機能と深く連動しており、肝 臓の脂質代謝機能低下、更に機能不全が原因の一つとなり、高脂血症、高血圧、動 脈硬化、肥満、脂肪肝、糖尿病および高血圧などの疾患がもたらされる。この肝臓で の脂質代謝機能不全を改善するためには、脂質代謝を促進し、細胞内に蓄積される 脂質濃度を低下させることが重要であると考えられている。
[0004] 近年、食品中に含有される成分の疾病予防および治療効果が注目されており、前 記の循環器系の疾患に対しても、食品成分による予防および治療効果を得られるも のの開発が期待されている。
[0005] レ、くつかの蛋白質やその加水分解物（ペプチド）を由来とする脂質代謝改善剤はす でに知られてレ、る。蛋白質の脂質代謝改善効果にぉレ、ては動物性蛋白質より植物 性蛋白質、特に大豆蛋白が優れていることが知られている。これらたんぱく質の加水 分解物（ペプチド）に関しては、以下のようにレ、ろレ、ろな蛋白由来の物が知られてレヽ るし、その作用効果もさまざまである。
[0006] まず、大豆蛋白質の加水分解物以外の脂質改善剤として、例えば、特開昭
52-83816号公報（新規ポリペプチド）、特開平 04-149137号公報 (ダイエット剤）、特 開平 06-211690号公報 (カゼイン由来の血中脂質抑制用摂食物）、特開平 11-80006 号公報（脂質吸収抑制剤）、特開 2000-264845号公報 (魚由来のコレステロール降下 剤）、特開 2000-228967号公報 (脂質代謝加工食品）、特開 2001-2577号公報（ローャ ルゼリー由来の脂質代謝改善剤）、特開 2001-57868号公報 (畜産加工廃液由来の脂 質代謝改善用素材)、特開 2001-57869号公報 (肥満改善及びダイエット食用素材)、 特開 2001-58955号公報（生理活性ペプチド放性製剤）、特開平 08-157389号公報（ 高トリグリセリド血症治療剤）、特開平 09-157290号公報 (コレステロール低減化ぺプチ ド）、特開平 09-255698号公報 (血中トリグリセリド濃度上昇抑制ペプチド）、特開平 07-188284号公報（血中トリグリセリド濃度上昇抑制ペプチド）などが知られている。
[0007] 一方蛋白質を加水分解したペプチドにも脂質代謝を改善する効果に関してはいろ いろと知られている。例えば、特開平 5-87052号公報では、脂質代謝改善剤におい て肝臓中の脂肪含量および脂肪小滴量を低下させる効果があるとしているが、これ は有効成分である低分子ペプチドがリパーゼ活性を抑えるため吸収される脂肪含量 が低下し、血清中の脂肪含量が低下するために生じるためであり、肝臓内での脂質 代謝活性自体を変化させる効果ではなレ、。
また、蛋白加水分解した低分子ペプチドでは、例えば、特開平 04-149137号公報（ ダイエット剤）が知られているが、これはジペプチド及びトリペプチドを主成分とするも ので脂肪蓄積抑制作用、体重増加抑制作用に関して述べられているが肝臓の脂質 代謝改善効果にっレ、ては述べられてレ、なレ、。
また生理活性用組成物として特開平 10-203994号公報の中で大豆蛋白分解物由 来の分子量 500— 5000のペプチドに血液中の中性脂肪ならびに HDL-コレスレロー ルを増加させる効果のあることを述べているが、肝臓中の脂肪酸代謝を促進するぺ プチドについては知られていなレ、。
[0008] 大豆蛋白質は植物性蛋白質の中で栄養性が優れてレ、るだけでなぐ近年では様 々な生理活性が見出され、生理機能剤としても注目される食品素材である。大豆蛋 白質に関しては肥満を抑制する効果があることは知られているが、その体脂肪率を 下げるメカニズムに関しては肝臓での脂肪酸生合成酵素の活性が抑えるためである と知られている（入谷ら J.Nutr.，126,380, 1996)、し力し、大豆蛋白質中のどの成分が 有効成分であるかは知られていない。 [0009] 本出願人は継続して大豆蛋白加水分解物 (ペプチド混合物）の生理作用、特に脂 質代謝に関する研究を行ってきた。例えば、特公平 7-025796号公報に開示するよう に大豆蛋白加水分解物 (オリゴペプチド混合物）が血中コレステロールの上昇を抑制 すること、特開平 1-269456号公報ゃ特開平 3-272694号公報に開示するようにコレス テロールや中性脂肪の代謝に関与することを開示してきた。しかし、体内の脂質代謝 のなかでも肝臓内の脂質代謝を促進し、肝臓内の脂質濃度を改善するペプチドに関 しては明らかではなかった。また、大豆蛋白酵素分解物に関して肝臓内のトリグリセリ ド含量が低下することは特開平 4-51872において引用データで述べられているにとど まってレ、る。大豆蛋白質およびその酵素分解物中には肝臓の脂肪酸生合成酵素の 活性を抑える成分が含まれていることは類推されるが、どのような成分が効果を発揮 するか特定するには至っていな力、つた。
[0010] 近年、加水分解したペプチドをさらに精製し機能成分を分画する試みがなされてい る。たとえば、特開平 07-188284号公報ではイオン交換樹脂 +限外ろ過、さらには逆 相クロマトにより分画された疎水性アミノ酸含量の高い画分に血中 TG上昇抑制作用 示すことが知られている。特開 2002-212097号公報において乳由来の塩基性べプチ ド画分の脂質代謝改善剤が知られているが陽イオン交換体を用いて製造されており 、またグルタミン酸 +ァスパラギン酸含量も 30%以下と本発明とは異なるものである。 本発明のように苦味を感じず、酸性アミノ酸含量が高い肝臓中の脂質代謝促進剤 は知られていない。
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0011] 本発明は肝臓での脂質代謝を促進し、肝臓での脂質代謝異常と関連する生活習 慣病などを改善あるいは予防すベぐそのための有効な肝臓内脂質代謝促進剤或 いは健康食品を提供することを目的とした。
課題を解決するための手段
[0012] 本発明者等は前記課題を解決すべく鋭意研究するなかで酸性アミノ酸 (グルタミン 酸ゃァスパラギン酸）が豊富でその割合の大きいペプチド混合物が肝臓内の脂質代 謝を促進する知見を得て本発明を完成するに到った。 即ち、本発明は親水性ペプチドからなり、この親水性ペプチドの構成アミノ酸の 30 一 70重量％が酸性アミノ酸であるペプチド混合物を有効成分とする肝臓内の脂質代 謝促進剤である。親水性ペプチドの構成アミノ酸中のプロリンが全アミノ酸中 5%以 下が好ましい。より具体的には、蛋白の酵素分解物であって、平均分子量 200— 10 000、全アミノ酸組成中酸性アミノ酸が 30 70重量％ (以下％)、塩基性アミノ酸が 1 0%— 30%、分岐鎖アミノ酸が 15. 0%以下、芳香族アミノ酸が 9. 0%以下、プロリン が 5. 3%以下であるペプチド混合物を有効成分とする肝臓中の脂質代謝促進剤が 好ましい。 また、本発明は、蛋白質を、一種以上の蛋白質分解酵素により分解し、 疎水性樹脂で処理することを特徴とするペプチド混合物の製造法である。蛋白質は 大豆蛋白質が好ましレ、。疎水性樹脂はスチレンジビュルベンゼン系の樹脂が好まし レ、。
また、本発明は、親水性ペプチドからなり、この親水性ペプチドの構成アミノ酸の 30 一 70重量％が酸性アミノ酸であるペプチド混合物を有効成分とする肝臓内の脂質代 謝促進健康食品である。親水性ペプチドの構成アミノ酸中のプロリンが全アミノ酸中 5%以下が好ましい。より具体的には、蛋白の酵素分解物であって、平均分子量 200 一 10000、全アミノ酸組成中酸性アミノ酸が 30— 70重量％ (以下％)、塩基性ァミノ 酸が 10%— 30%、分岐鎖アミノ酸が 15. 0%以下、芳香族アミノ酸が 9. 0%以下、 プロリンが 5. 3%以下であるペプチド混合物を有効成分とする肝臓中の脂質代謝促 進健康食品が好ましい。
発明の効果
[0013] 本発明により肝臓の脂質代謝を促進するオリゴペプチド混合物が得られ、肝臓での 脂肪酸の生合成を抑制することから、肝臓でのトリグリセリド濃度異常が原因され肥満 、高トリグリセリド血症、脂肪肝、糖尿病または高血圧症に代表される生活習慣病、冠 動脈疾患、脳動脈疾患、慢性腎炎、ネフローゼ、肝硬変、閉塞性黄疸等を予防 -改 善することが期待され、食品、健康食品、および医薬品への応用が可能になったもの である。
発明を実施するための最良の形態
[0014] まず、本発明の肝臓中の脂質代謝促進剤について説明する。この肝臓中の脂質 代謝促進剤は、親水性ペプチドからなり、この親水性ペプチドの構成アミノ酸の 30— 70重量％が酸性アミノ酸であるペプチド混合物を有効成分とするものである。ここで 、重要なことはこの肝臓中の脂質代謝促進ペプチド混合物が水不溶画分を含まず親 水性アミノ酸力、ら成ることであり、かつ酸性アミノ酸の割合が多いことである。親水性ァ ミノ酸としてはグリシニン（Gly)、セリン（Ser)、スレオニン（Thr)、シスチン（Cys)、ァス パラギン（酸）（Asp)、グルタミン（酸）（Glu)、リジン（Lys)、アルギニン (Arg)、ヒスチジ ン (His)があげられる力 S、この親水性ペプチドの構成アミノ酸中で酸性アミノ酸の割合 力 ¾0 70重量％ (以下単に％と記載する）、好ましくは 35 55%が適当である。尚 、酸性アミノ酸としては、ァスパラギン、ァスパラギン酸、グノレタミン、グノレタミン酸等が 挙げられる力 グルタミンとグルタミン酸が好ましレ、。グルタミン酸あるいはグルタミン の割合が多いほど肝臓内の脂質代謝促進効果に優れる傾向にある。グノレタミン酸ぁ るいはグルタミンの割合が 30%未満では公知の大豆ペプチド混合物より優れた肝臓 内の脂質代謝促進効果を奏しない。
また、構成アミノ酸の中で特にプロリン含量が 5%以下、好ましくは 3%以下、特に 1 %以下であることが脂肪酸の合成抑制の点から望ましい。より具体的には、蛋白の酵 素分解物であって、平均分子量 200— 10000、全アミノ酸組成中酸性アミノ酸が 30 一 70重量％ (以下％)、塩基性アミノ酸が 10%— 30%、分岐鎖アミノ酸が 10. 5%以 下、芳香族アミノ酸が 8. 0%以下、プロリンが 5%%以下であるペプチド混合物を有 効成分とする肝臓中の脂質代謝促進剤が適当である。このペプチド混合物の平均分 子量が肝臓内の脂質代謝促進効果に寄与するかは定かでないが、消化管吸収速度 は小さいほど早いので酵素分解の態様により通常 200— 20000とすることが出来、 酵素分解の方法によっては 500 3000とすることが出来る。遊離アミノ酸含量は肝 臓内の脂質代謝促進に関与する効果は定かではないが、ペプチド混合物としては少 ないほうが好ましぐ通常 35%以下、好ましくは 10%以下が適当である。肝臓内の脂 質代謝促進効果は定かでないが、本発明におレ、て、塩基性アミノ酸が 10% 30% 、分岐鎖アミノ酸が 15. 0%以下、芳香族アミノ酸が 9. 0%以下であることが望ましい 。本発明の肝臓内の脂質代謝促進剤や健康食品の風味やその安定性の点で、疎水 性アミノ酸の含量は少なければ少ない程好ましぐ分岐鎖アミノ酸、芳香族アミノ酸な どは前記範囲が好ましい。
[0016] 尚、本発明の肝臓内の脂質代謝促進は肝臓中の脂肪酸の生合成を抑制すること である。すなわち肝臓中で、ァセチルー CoAから脂肪酸を合成する一連の酵素であ Acety卜し oA-carboxylase、 Fatty acid synthase Λ ATPcitrate-lyase、 Malic enzyme ^ Glucose-6-phosphate dehydrogenaseなどの酵素活性を抑制し、並びに
Acety卜 CoA_carboxylaseおよび Fatty acid synthaseなどの mRNAの発現を抑制する 脂質代謝促進であり、肝臓中に蓄積されるトリグリセリドおよびコレステロール含量を 低下させる効果がある。
[0017] 従って、本発明の肝臓内脂質代謝改善ペプチド混合物は脂肪酸の合成抑制を基 礎とする疾患の予防'治療用の医薬品や健康食品として用いることができる。医薬品 として用いる肝臓内の脂質代謝促進剤は、オリゴペプチド混合物として剤中に 0. 01 %以上、好ましくは 0. 1 %以上含有することが出来る。 0. 01 %未満では、実質的な 効果を認めるのが困難である。また、 1日摂取又は投与量は、オリゴペプチド混合物 として、 0. lmg/kg/日以上、好ましくは lmg/kg/日以上、更に好ましくは 10m g/kg/日以上が適当である。 0. lmg/kg/日未満では効果が認められない場合 がある。また、健康食品としての肝臓内の脂質代謝促進健康食品も同様のペプチド 混合物の含有量と摂取量で同様の効果を奏する。この様にして本発明の肝臓内の 脂質代謝促進剤及び肝臓内の脂質代謝促進健康食品は、肝臓での脂質代謝を顕 著に促進することより、肝臓での脂質代謝異常、具体的にはトリグリセリドの濃度異常 により引き起こされる、肥満、高トリグリセリド血症、脂肪肝、糖尿病または高血圧症の 予防'改善を目的とする剤または食品として利用することが出来る。食品として利用 する場合、経口栄養食、経管栄養食等の使用形態に応じ、溶液のままや濃縮液'凍 結乾燥物 ·噴霧乾燥物の原材料として使用することができる。摂食物としては広く各 種の食品が含まれ、例えば飲料、冷菓、タブレット、菓子等を挙げることができる。ま た、通常の食品の形態でないカプセルとか錠剤として健康食品として用いることも出 来る。
[0018] 次に、本発明の肝臓中の脂質代謝促進に有効なペプチド混合物の製造法につい て説明する。本発明の肝臓中の脂質代謝促進ペプチド混合物は大豆蛋白を酵素で 分解することにより得ること力 S出来る。本発明に用いる大豆蛋白は安価に手に入る材 料として、豆乳、濃縮大豆蛋白、あるいは分離大豆蛋白、脱脂大豆、大豆ホエー蛋 白などを使用し得るが、その中で分離大豆蛋白が好ましい。酵素処理に供する大豆 蛋白溶液の濃度は 1重量％— 30重量％、好ましくは 5 15重量％、より好ましくは 8 一 12重量％が適当である。この濃度が低くても酵素分解に支障はないが、生産性が 落ちて好ましくない。大豆蛋白溶液の濃度が高すぎると一旦分解された蛋白加水分 解物どうしの重合が強くなるため力 \十分分解するのに多量の酵素量を必要とし好ま しくない。
[0019] 酵素分解は大豆蛋白を水系下（大豆蛋白スラリーもしくは溶液）に酵素を用いて加 水分解することが適当である。本発明に用いる蛋白分解酵素（プロテアーゼ）は、ェ キソプロテアーゼ又はエンドプロテアーゼを単独又は併用することができ、動物起源 、植物起源あるいは微生物起源は問わなレ、。具体的には、セリンプロテアーゼ (動物 由来のトリプシン、キモトリブシン、微生物由来のズブチリシン、カルボキシぺプチダ ーゼ等）、チオールプロテアーゼ (植物由来のパパイン、フイシン、ブロメライン等）、 カルボキシプロテアーゼ（動物由来のペプシン等）を用いることができる。更に、具体 的にはァスペルギルス'ォリゼ起源の「プロチン FN」（大和化成 (株)製）、ストレプトマ イセス 'グリセウス起源の「ァクチナーゼ」（科研製薬 (株)製）、バチルス'リケホルミス由 来の「アルカラーゼ」 (Novozymes Japan Ltd.製）、バチルス'ズブチルス由来の「プロ チン A」（大和化成 (株)製)等を例示できる。また、エンドプロテアーゼを含有する酵素 としては、「プロテア一ゼ3」（天野製薬 (株)製）や「プロチン AC— 10」（大和化成 (株)製 )力 ェキソプロテアーゼおよびエンドプロテアーゼを含有する蛋白分解酵素として「 プロテア一ゼ1^」（天野製薬 (株)製）が例示できる。
[0020] 本発明の加水分解の条件は用いる蛋白分解酵素の種類により多少異なるが、概し てその蛋白分解酵素の作用 pH域、作用温度域で、大豆蛋白を加水分解するに充分 な量を用いることが好ましい。本発明の肝臓内脂質代謝促進ペプチド混合物を塩分 制限食 (例えば、経管栄養食等）に用レ、ることを考慮すると、 pHが 5 10、好ましくは pH6— 9であれば中和による塩の生成を軽減できて好ましい。
[0021] 大豆蛋白酵素分解物から不溶性の分解物を除く方が後で行なう樹脂処理を容易 に行なうことができ好ましい。大豆蛋白酵素分解溶液から不溶性の分解物を分離除 去する手段としてはフィルタープレス、膜分離などろか手段によってもよいが、最も通 常には遠心分離と膜分離を併用する方法が望ましい。酸性下で酵素分解した場合、 例えば大豆蛋白の酵素分解液の pHが 3— 8の範囲にある場合、この分離の際の分 離性を高めるには不溶性物の凝集性を高める目的で pHを 4一 6. 2好ましくは 4. 5 5. 5とすることが適当である。これは、未分解物を含む不溶解物は大豆蛋白の等電 点付近で凝集しやすくなる傾向にあることによる。或いはまた、分解液中にカルシゥ ムゃマグネシウムの塩化物、硫酸塩などの塩類や水酸化物とレ、つたアルカリ土類金 属化合物又はポリアクリル酸 Na、アルギン酸、キチンキトサンなどといった蛋白凝集 剤をカ卩えても分離性を高めることができる。
[0022] 以上のように大豆蛋白酵素分解溶液から不溶性の分解物を分離除去した後、ポリ スチレンビーズのような疎水性吸着材に疎水性成分を吸着させることにより、親水性 成分を回収する。適当な疎水性吸着樹脂材としては、例えばオルガノネ土製のアンバ 一ライト XAD (登録商標)やバイエル社製のレバチット OC (登録商標）、三菱化成社 製のダイヤイオン (登録商標）等が挙げられる。より具体的には、芳香族系としてスチ レンジビニノレベンゼン系の樹脂（例えば、 HP— 20、 HP— 21、 SP— 825、 SP— 206、 SP - 207、 SP - 800 (いずれも登録商標、三菱化成 (株)製)等）、アクリル系の樹脂（ HP1MG、 HP2MG (いずれも登録商標、三菱化成株製）等）、フエノール系の樹脂（ S874、S861 (いずれも登録商標、住友化学工業 (株)製)等）が適当である。
[0023] 樹脂で処理して疎水性成分を吸着除去する態様としては樹脂と大豆蛋白酵素分 解溶液を接触させることが出来る。この接触方法は、バッチ式の処理或いは連続カラ ムによる処理でも力、まわない。例えば、ノ ツチ式で処理する場合には、使用する疎水 性吸着材の量を大豆蛋白加水分解物乾燥物重量の 0. 5から 100倍重量程度、より 好ましくは 2 60倍重量程度である。吸着剤の量が少ないと疎水性アミノ酸を十分吸 着できず多すぎると他のオリゴぺプチト混合物の収率が下がる。 5分一 2時間程度、 1 一 40°Cの温度範囲内で攪拌した後、水不溶の高分子成分は通過できるが樹脂は通 過出来ない程度のフィルタ—でろ過することが出来る。
[0024] 又、連続カラムによる方法では、大豆蛋白質加水分解物の乾燥物重量 1部に対し て疎水性吸着材として 2— 200重量部、より好ましくは 25— 100重量程度となる量の 大豆蛋白加水分解物液を通液し、疎水性吸着材との接触時間が 5分以上取れる線 速度とすることが出来る。この時の大豆蛋白加水分解物の濃度は 2— 50%、より好ま しくは 10 30%であることが好ましい。疎水性吸着材の再生は、 0. 5 3Nの水酸 化ナトリウム或いは 10 90%程度の有機溶剤を用いることが出来、有機溶剤として、 エタノール、メタノール、イソプロパノ—ル、アセトン等を、疎水性吸着材量の 1一 20倍 容量程度用いることが出来る。
[0025] 以上のようにして得られた大豆蛋白ペプチド混合物液は、用途によりそのまま或い は濃縮して用いることも出来るが、通常、殺菌して粉霧乾燥、凍結乾燥等して乾燥粉 末の状態で利用することができる。
[0026] 上記した方法によって得られたペプチド混合物を加水分解しアミノ酸組成を分析す るもとの大豆蛋白質加水分解物にくらべ、親水性アミノ酸の組成が高ぐ疎水性ァミノ 酸の組成が低くなる。親水アミノ酸の中では特に酸性アミノ酸であるグルタミン酸の含 量が高ぐ次ぎにァスパラギン酸が高くなる傾向にある力 塩基性アミノ酸およびその 他の親水性アミノ酸含量はさほど増減しなレ、。疎水性アミノ酸含量はレ、づれも低下す るが中でも特にプロリン、低下が高ぐついでフエ二ルァラニン、ロイシン、イソロイシン 、チロシンが低下する。また、このようにして調製されたペプチドは風味が良好で、長 期間保存しても褐変が少ない特徴がある。
実施例
[0027] 以下、実施例により本発明の実施態様を説明する。
(実施例 1)ペプチド混合物の製造法
分離大豆蛋白（不二製油（株)製、「ニューフジプロ- R」） 3kgを水を添加して 10% 水溶液とし、蛋白分解酵素（大和化成 (株)製、「プロチン AC— 10」） 120gを作用させ 50°Cで 5時間加水分解（15%TCA可溶率 85%)した後、生じた沈殿成分を高速遠 心分離機で分離除去した。得られた上清液 8kg m2圧の蒸気を吹き込んで 140°Cで 7秒間殺菌後、さらにこの液を 0.22ミクロン (キュノー (株)製）のフィルターでろ過しスプ レードライで粉末乾燥させた。
[0028] 上記で得られたペプチド粉末を 10%の水溶液に調製し、 7°Cの雰囲気下で約 1時間 、バッチ式で生合成吸着剤 HP— 20 (三菱化成 (株)製）で処理を行なレ、、 1ミクロンの ろ紙を通過させて樹脂の除き、処理液を凍結乾燥した。尚、ペプチド乾燥物重量の 1 、 2, 4、 8, 16, 32倍重量にふらして樹脂で処理を行った。前記方法で得られたぺプ チド混合物の平均分子量は 700 (HPLCでのゲルろ過法）で、分画後のペプチドの 平均分子量は 700 800で、樹脂の比率が高くなるほどやや分子量が大きくなる傾 向にあった。
[0029] 実施例 1で得られた凍結乾燥品について、 6N塩酸で 110°C、 24時間加水分解した後 、アミノ酸分析装置 (L-8500型、 日立製作所製）でそのアミノ酸組成を分析した。その 結果を表 1に示す。
[0030] (表 1 ) アミノ酸分菥値％ ぐ疎水性ア^/酸 >
分 鑕
Ala Val He Leu Pro Met Phe Tyr Tip
ア^ ア 農 スタート 4.1 3.8 3.8 8 5.5 1.5 4.9 4.2 9.9 15.6 9.9
X 1 4 33 3.4 6.9 5.1 1J 4 3.5 0.5 13.6 8
X 2 4 3.5 3.6 6.8 5 1.2 3.6 3.4 0.4 13.9 7.4
X 4 4.2 3.4 3.2 6.4 4.5 1.2 3.3 3.1 03 13 6.7
X 8 4.7 3.4 2.2 53 2.4 1 2.1 . 2 0.11 10.9 4.21
X 16 4.9 3.1 2 4.6 1.7 0.9 1.7 1.5 0.1 9.7 3J 32 4.9 3.1 1.7 3.9 0.9 0.8 0.8 1.1 0.05 8.7 1.45 128 6 0.9 0 0 0 0 0 0 0 0.9 0
<親水性ア^ 酸 >
堪 性
Asp His 酸性
Gly Ser Thr Cys Glu Lys
ァ 57» ア^ » スタート 3.8 5.6 4.1 1.1 12.1 19.5 6.2 8.1 3 31.6 173
X 1 3.6 5.5 4.1 1 12.6 24 6.2 8.1 2.8 36.6 17.1
X 2 3.7 5.5 4.1 1 12.7 24.7 6.2 8 2.7 37.4 16.9
X 4 3.6 5.6 4.2 1 12.7 26.7 6.5 7.6 2.6 39.4 16.7
X 8 3.4 6 4.2 0.7 13 33.8 6.4 6.8 2.7 46.8 15.9
X 16 3.2 6 4.1 0.6 13.4 36.2 6.7 6.7 2.6 49.6 16 32 3 6.1 4.2 0.6 13.8 39 6.7 6.7 2.6 52.8 16
X 128 0 9 4.5 0 18 42.1 7 9 3.5 60.1 19.5
[0031] (実施例 2)培養細胞での試験 その 1/脂肪酸合成系酵素の mRNA量の測定
コラゲナーゼ法で得たラットの肝細胞を WE培地（20mM glucose, 10-7M Insulin)で 5時間 platingした後、サンプルを添加した。朝と夕方に培地を交換し、 24時間後に total RNAを抽出して mRNA量を測定した。 WE培地はアミノ酸として 2.04g スタート、 XI、 X4、 X8tt0.2g/L。
[0032]
(表 2— 1 ) 脂肪酸合成系酵素 Acety卜 CoA- Carboxylase の mRNA量
(WEを 1とした場合の変化量）
WE 1. 0
スタート 0. 94
X 1 0. 39
X4 0. 33
X 8 0. 19
(表 2— 2) 脂肪酸合成系酵素 Fatty acid synthase の mRNA量
WE 1 0
スタ' h o 75
X 1 0 78
X 4 0 72
X 8 0 19
[0033] (実施例 3)培養細胞での試験 その 2
コラゲナーゼ法で得たラットの肝細胞を WE培地（20mM glucose, 10-7M Insulin)で 5 時間 platingした後、サンプルを添加した。朝と夕方に培地を交換し、 48時間調整後 に harvestした。肝細胞をホモジネイトした後、 105, 000 X g上清後の酵素活性を測 定した。 WE培地はアミノ酸として 2.04g/L,スタート、 XI、 X4、 X8は 0.2g/L0
[0034] (表 3) 肪酸合成系酵素の活性の測定
Acetyト CoA- carboxylase Fatty acid synthase ATPcitrate - lyase
WE 0 WE 0 WE 0
X 1 3 X 1 0. 73 X 1 0. 76 X 4 0 92 X 4 0. 73 X 4 0, 36 X 8 0 42 X 8 0. 55 X 8 0, 24
Glucose - 6 - phosphate
Malic enzyme dehydrogenase
WE 1. 0 WE 1. 0
X I 1. 18 X I 0. 76
X 4 0. 76 X 4 0. 24
X 8 0. 67 X 8 0. 42
[0035] (実施例 4)動物での試験 (肝臓の脂質濃度の試験）
ラットは、 Sprague-Dawley(SD)系雄ラット（4週令、体重 70— 80g)を九動 (株）（熊本） 力 購入した。 6— 10日の予備飼育の後、カゼイン群、大豆蛋白群、大豆蛋白酵素 分解 (スタート原料)および大豆蛋白酵素分解物の樹脂分画品（上記 X 32)の 4群に 分け下記に示すような飼料を 4週間摂食させた。飼育室の温度は 22— 24°Cに維持し 、 7:00 19:00までを明期とした。なお、飼料および脱イオン水は自由に与えた。 2週 間摂食終了後、ラットは断頭屠殺し、肝臓および脂肪組織を摂取した。尚、脂肪組織 は腎臓周辺および副睾丸周辺脂肪を摂取した。ラットは初体重 130 140gの
Sprague-Dawley(SD)系雄ラットに AIN76に準じて調製した飼料を 2週間自由に摂取 させた。尚、大豆蛋白酵素分解物ではラットの摂食性に問題ないが、その分画品（上 記 X 32)を配合した飼料では強い摂食抑制を示したことから、蛋白量の 50%をカゼ インに代替して試験を行なった。試料組成は、タンパク質量は窒素換算で、カゼイン 20%、カゼイン 10% +大豆蛋白（「フジプロ R」不二製油 (株)製） 9. 75%、カゼイン 10% +大豆蛋白分解物スタート 9. 64%及びカゼイン 10% +大豆蛋白酵素分解物 の樹脂分画品（上記 X 32) 12. 26%を添加した。その他、 コーンスターチ 15%、 DL メチォニン 0.3%、セルロース 5%、コーン油 5%、ミネラル混合 3.5%、ビタミン混 合 1%、重酒石酸コリン 0.2%を添加し、シュクロースを添加して 100%になるように調 製した
[0036]
(表 4)
(単位： fflg/g liver) カゼイン 大豆蛋白 蛋白分解スタート 蛋白分解物分画品
TG 84.5 土 6 a 16.2 +1.8 b 21.0 士 2.5 b 18.2 ±1.4 b PL 25.7 ± 0.7 a 28.6 ±0.7 b 26.3 ±0.3 a 26.4 ±0.7 a TC 2.95土 0.11a 1.89士 0.07b 2.15±0.09b 2.02±0.08b FC 1.55士 0.09a 1.37±0.03ab 1.32±0.06b 1.33±0.05b エステル 47.1 士 3.8 a 26.7 ±3.2 b 38.2 士 2.6 ac 34.0 ±3.2 be 含有率 （％)
(平均値土標準偏差） abc 異なるアルファベット間で有意差
[0037] (実施例 5)
下記表 5に示す組成の脂質代謝改善飲料を製造した。製造した飲料の風味は良好 で、常温 1年間保存によっても風味が劣化することはなく、沈殿等の問題もなかった。
[0038]
(表 5) 実施例 1の 8倍量処理凍結乾燥品 1 5 %
還元麦芽糖水飴 2 0%
m被 0%
スクラロース 0 0045% フマル酸 0 12%
クェン酸 0 2%
水

Claims

請求の範囲
[1] 親水性ペプチドからなり、この親水性ペプチドの構成アミノ酸の 30— 70重量％が酸 性アミノ酸であるペプチド混合物を有効成分とする肝臓内の脂質代謝促進剤。
[2] 親水性ペプチドの構成アミノ酸中のプロリンが全アミノ酸中 5 %以下である請求項 1記 載の肝臓内の脂質代謝促進剤。
[3] 蛋白の酵素分解物であって、平均分子量 200 10000、全アミノ酸組成中酸性アミ ノ酸が 30— 70重量％ (以下％)、塩基性アミノ酸が 10 %— 30 %、分岐鎖アミノ酸が 1 5. 0 %以下、芳香族アミノ酸が 9. 0 %以下、プロリンが 5. 3 %以下であるペプチド混 合物を有効成分とする請求項 1又は 2の肝臓中の脂質代謝促進剤。
[4] 蛋白質を、一種以上の蛋白質分解酵素により分解し、疎水性樹脂で処理することを 特徴とするペプチド混合物の製造法。
[5] 蛋白質が大豆蛋白質である請求項 4記載の製造方法。
[6] 疎水性樹脂がスチレンジビニルベンゼン系の樹脂である請求項 4または 5の製造法。
[7] 親水性ペプチドからなり、この親水性ペプチドの構成アミノ酸の 30— 70重量％が酸 性アミノ酸であるペプチド混合物を有効成分とする肝臓内の脂質代謝促進健康食品
[8] 親水性ペプチドの構成アミノ酸中のプロリンが全アミノ酸中 5 %以下である請求項 1記 載の肝臓内の脂質代謝促進健康食品。
[9] 蛋白の酵素分解物であって、平均分子量 200 10000、全アミノ酸組成中酸性アミ ノ酸が 30 70重量％ (以下％)、塩基性アミノ酸が 10 %— 30 %、分岐鎖アミノ酸が 1 5. 0。/o以下、芳香族アミノ酸が 9. 0。/o以下、プロリンが 5. 3。/0以下であるペプチド混 合物を有効成分とする請求項 7又は 8の肝臓中の脂質代謝促進健康食品。
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