WO2004064878A1 - 止血用材料 - Google Patents

Abstract

　安全かつ効果的な止血用材料を提供する。有効成分としてトロンビン及びフィブリノゲンを含む止血用材料において、補強材としてポリグリコール酸等からなる生体吸収性合成不織布を使用することを特徴とする止血用材料。当該止血用材料においてトロンビンが生体吸収性合成不織布に固定化されていることを特徴とする止血用材料。本発明の止血用材料を用いると、噴出性出血及び滲出性出血のいずれに対しても迅速かつ確実な止血が可能となる。

Description

明 細 書

止血用材料

技術分野

本発明は、 有効成分としてトロンビン及びフィプリノゲンを含む止血用材料に おいて、 補強材として生体吸収性合成不織布が使用される止血用材料に関する。 背景技術

医療現場において止血管理は極めて重要な位置づけにあり、 特に、 外科手術に おいては、 止血操作は多大な労力と時間を必要とし、 最大の作業の一つといえる。 Fallotの四 ί敷根治術を例に挙げると、 約 5時間の手術時間のうち 2時間強の時間 が止血操作に使われるという報告もある。 止血操作に割く時間を短くすることは、 手術時間の短縮化に大いに寄与するといえる。

更に、 止血においては、 それに要する時間の短縮化のみならず、 止血に至るま での出血量を最小限に抑え、 確実に止血することが要求される。 出血は、 大量で あれば致命的になったり、 後に重篤な合併症を引き起こしたりする。 また、 確実 に止血されていなければ、 術中あるいは術後の再出血を招く。 術中に再出血すれ ば、 量はわずかでも操作を行っている術野の視野を妨げ、 容易な操作をも困難な ものとすることもある。 術後の再出血は、 ドレ一ンからの排液を増やし、 感染の 機会を増大させて、 術後管理を困難にする。 そして、 最悪の場合には、 止血のた めに再手術を必要とする場合もある。 心臓血管外科領域では、 3 %の患者が再手 術を余儀なくされているという報告もある。 従って、 手術時間の短縮化及び出血 量を減らし確実な止血をすることは、 医師の負担及び患者への侵襲を軽減するた めに解決が切望されている問題である。

ここで、 一般的な止血方法を挙げると、 ①機械的な方法で行う方法と、 ②局所 の凝固機能を促進させる方法がある。 そして、 通常、 結紮、 鏠合などの機械的な 方法で行う止血方法で止血が困難な局所の止血を行う場合に、 局所止血剤または 充填剤といわれる材料が止血に用いられる。 局所止血剤を用いる場合は、 通常、 コラーゲン繊維、 乾燥トロンビン末、 酸化セルロース、 ゼラチン剤、 フイブリン 接着剤などを出血部位に散布あるいは貼布し、 5〜10分間程圧迫する方法が用い られる。 現在の止血法では、 止血のためにかなりの手術時間を割かれ、 また、 結 紮糸の滑脱や局所止血剤による不確実な止血から起こる再出血等の前述したよう な問題がある。

発明の開示

(発明が解決しようとする技術的課題）

このうち、 フイブリン接着剤を用いた止血方法について詳述すると、 本剤はフ イブリノゲン溶液とトロンビン溶液を創傷部位に重層する力、 もしくはスプレー 器具を用いて混合塗布することにより、 組織の接着■閉鎖 ·止血等に使用される。 しかしながら、 フイブリン接着剤単独では、 出血の勢いが強く出血量も多い動脈 性出血の止血に用いると、 液状である当該混合成分が血流により流されてしまう ことがあり、 効果的な止血は困難となる。

このフイブリン接着剤の構成成分を各種基材に固定化し、 シート状製剤を作製 する試みも行われている。 そのような基材としては、 生体吸収性/生分解性の材 料である、 ゼラチン、 コラーゲン等の天然由来成分や、 ポリエチレングリコール ゃポリグリコール酸等の合成高分子材料等が使用されている。 そのような一例と して、 ゥマ由来のコラーゲンにフイブリノゲン及びトロンビンを固定化したシー ト製剤 （例えば、 特公昭 6 1—3 4 8 3 0号公報） が実用化されている。 しかし ながら、 本シート製剤の基材であるコラーゲンは厚みがあり、 比較的硬質である ため、 止血したい創傷部位での密着性が低く、 効果的な止血は困難な場合もある。 また、 本シート製剤は、 基材が馬コラーゲンであり、 力つトロンビンは牛由来で あり、 ヒト以外の動物成分が使用されているため、 異種タンパクに対する抗体の 出現ゃプリオン病等の人畜共通感染症の危険性が存在するため理想的なものとは 言い難い。 フイブリン接着剤を止血に使用する場合、 他の局所止血剤に比較して 異物反応は軽微であるという利点は有するものの、 上述のような問題点もある。 これらの問題を解決するには、 短時間の止血が可能であり、 出血量を最小限に 抑え、 確実な止血が可能なフィプリン接着剤を開発することがーつの方策である。 この際、 フイブリン接着剤にはヒトと同じ成分で感染因子の存在しない凝固因子 からなり、 さらに止血効果を十分に発揮するためにシート状の剤型をとり、 シ一 トは^！工夫された素材により、 その材質も生体に安全であることが求められる。

(その解決方法） そこで、 本発明者らは上記の諸問題に鑑み、 鋭意検討した結果、 有効成分とし てトロンビン及ぴフイブリノゲンを含有する止血用材料において、 生体吸収性材 料の中でも特に不織布に加工された生体吸収性合成不織布を補強材として使用す ることを特徴とする止血用材料が極めて優れた止血効果を有することを見出し本 発明を完成するに至った。

(従来技術より有効な効果〉

本発明による止血用材料は、

( 1 ) 様々な状態の出血 （噴出性出血から滲出性出血） に対応可能で、 出血量を 最小限に抑え、 確実な止血ができる；

( 2 ) 安全性に優れている；

( 3 ) 経時的に吸収される；

( 4 ) 伸縮性■柔軟性に優れている；

( 5 ) 広範囲に亘る止血も可能である；

( 6 ) 炎症反応が軽微であるかまたは全く惹起しない；

のような性質を有しており、 理想的な局所止血用材料となることが明らかになつ た。

本発明により、 様々な領域の外科手術をはじめとする各種医療分野において、 安全、 迅速かつ確実に止血を行うことのできる生体吸収性合成不織布からなる止 血用材料を提供することが可能となつた。

発明を実施するための最良の形態

本発明に使用される生体吸収性合成不織布は、 生体吸収性の合成 »锥からなる 不織布であれば、 特に限定されるものではない。 ここで、 生体吸収性の合成繊維 とは、 異物として生体に対する炎症惹起性が低く、 時間経過と共に生体内に吸収 及ぴ zまたは分解されるものをいう。 また、 本不織布は、 いかなる患部にも確実 に被覆可能なように適度な柔軟性と伸縮性を有することが好ましい。 例えば、 そ のような不織布を形成しうる合成 t維として、 ポリダリコール酸、 ポリ乳酸、 ま たはグリコール酸及び乳酸の共重合体などを不織布に加工したものが使用可能で ある。 中でも、 ポリグリコール酸を不織布に加工した生体吸収性合成不織布は、 本目的に極めて好ましい素材である。 当該不織布の形状としては特に限定されるものではないが、 種々の用途への適 用しゃすさの観点からシート状であることは好ま Ι 、形状の一つである。

また、 当該成分に加えて、 薬学的に許容しうる添加剤及び安定剤を添加しても よい。 そのような添加剤及び安定剤の例として、 例えば、 血液凝固第 XIII因子 (好ましくはヒト血液由来または遺伝子組換え技術により得られたもの） 、 塩化 カノレシゥム、 プロテアーゼ抑制剤 （例えば、 ァプロチュン等） 、 アルブミン、 了 ミノ酢酸、 ポリェチレングリコール、 アルギニン、 ヒアル口ン酸ナトリウム、 グ リセリン、 及びマンニトールなどがある。

トロンビン、 フイブリノゲン及び血液凝固第 XIII因子としては、 ヒト血液由 来または遺伝子組換え技術により得られるものが好ましい。

本発明の止血用材料は、 最終的に、 生体吸収性合成不織布に有効成分としてト ロンビン及びフイブリノゲンが含まれるものであれば特にその剤型は問わない。 ただし、 術場での使いやすさを考慮すると、 トロンビンが予め固定化された生 体吸収性合成不織布は柔軟性が保持されており、 その扱い易さ、 さらに止血効果 の観点から好ましい態様の一つとなる。

また、 トロンビンとフイブリノゲンを予め生体吸収性合成不織布に固定化する 場合は、 使用前にトロンビンとフイブリノゲンが反応して安定ィ匕フィプリンを形 成することがないよう、 各々の成分が互いに遮断された環境下で不織布に固定化 されるカゝ、 または有機溶剤に各粉末を懸濁して不織布に噴きつける、 などの処理 が必要である。

本発明の止血用材料の具体的なキット構成としては、

①トロンビン固定化生体吸収性合成不織布及びフイブリノゲン

②生体吸収性合成不織布、 トロンビン及ぴフイブリノゲン

を基本構成とし、 さらにこれに上述した添加剤や安定剤を適宜含むものである。 ①の場合、 トロンビン固定化生体吸収性合成不織布をフイブリノゲンを含む溶 液に浸漬後、 または当該溶液を不織布にスプレーなどによる塗布後、 使用される。 当該トロンビン固定ィ匕生体吸収性合成不織布は、 1 ) トロンビンを生理食塩水ま たは緩衝液に溶かし、 さらに選択的にそのトロンビン溶液に添加剤として、 塩化 カルシウムを適宜加える、 2 ) 当該トロンビン溶液に生体吸収性合成不織布を浸 漬し、 一 8 0 °C、 2時間凍結後、 乾燥する、 ことにより製造される。

②の構成の場合、 例えば市販のフイブリン接着剤 （例えば、 ボルヒール (製品 名：化学及血清療法研究所製)） の調製方法に従い調製されたトロンビンを含む 溶液及びフイブリノゲンを含む溶液に、 生体吸収性合成不織布を順次浸漬後、 ま たは各溶液をスプレーなどを用いて同時に不織布に塗布後、 使用される。

また、 いずれの構成においても、 フィプリノゲンを含む溶液中に、 血液凝固第

X 111因子やプロテアーゼ抑制剤を添加してもよい。

本発明により得られる止血用材料は、 高い粘着性、 適度な強度、 柔軟性及び伸 縮性を有すること力ゝら、 様々な形状の出血部位においても密着被覆が可能であり、 噴出性出血から滲出性出血まで種々の出血状態に対して迅速な止血が可能となる。 また、 本発明の止血用材料の基材として使用されるポリグリコール酸系生体吸 収性不織布は、 生体に吸収され水と二酸化炭素に分解されることから、 安全性に 優れているものである。

このように本発明の止血用材料は、 局所出血に簡便かつ早急に対処が可能であ り、 圧迫止血と血液凝固反応により効果的な止血を可能とする。 しかも、 いずれ の成分も生体に安全なものを用いているため医療現場で安心して利用できる。 以下、 本発明の実施例を示し本発明をさらに具体的に説明するが、 本発明はこ れに限定されるものではない。

実施例 1

(トロンビン固定化シートの作製）

本発明のト口ンビン固定化シートの作製は以下の方法に従って行った。

5 %ヒト血清アルブミンを含む溶液に、 塩化カルシウムを 40mM加え、 ヒト血液 由来トロンビンを最終濃度 500単位/ mlの濃度で添加する。 この溶液を、 ポリダリ コール酸からなる生体吸収性合成不織布 （製品名：ネオベール Zグンゼ (株)， 厚 さ： 0. 15瞧） を底に敷いた容器に厚さ 1瞧となるように注ぐ。 このシートを一 8 0 °Cで 2時間凍結後、 乾燥させたものをト口ンビン固定化シートのサンプルとす る （固定化されたト口ンビンの量： 50単位 /cm²) 。

実施例 2

(噴出性出血に対する止血試験） 実施例 1で作製されたトロンビン固定化シートのブイプリノゲン溶液との併用 による噴出性出血に対する止血効果を比較検討した。

具体的な評価方法を以下に示す。

①供試ゥサギをネンプタール （20〜35mg/kg) 麻酔下で開腹した。

②へパリンを 3 0 0 U/kg静脈内投与した。

③ 21 Gの針で腹大動脈に穴を開け、 噴出性出血を作製した。

④各群以下の方法で止血を試みた。 なお、 止血は血液が噴出した状態で行った。 く第 1群： トロンビン固定化シート +フイブリノゲン溶:?夜 >

実施例 1で作製されたトロンビン固定化シート （2 X 2 cra) にフイブリノゲ ン溶液 （製品名：ボルヒール/ (財)化学及血清療法研究所， A液を約 0. 7raL) を スプレー塗布し、 直ちに出血部位に当て、 1分間軽く圧迫した。

く第 2群：ポリグリコール酸系不織布 +フィプリン接着剤 >

実施例 1において基材として使用したポリダリコール酸系生体吸収性合成不織 布 （製品名：ネオベール Zグンゼ (株）， 2 X 2 cm) に、 フイブリン接着剤 （製 品名：ポルヒール Z (財） 化学及血清療法研究所， フイブリノゲン含有溶液 ( A 液)及びトロンビン含有溶液（B液）を各約 0. 7mL) をスプレー塗布し、 直ちに出血 部位に当て、 1分間軽く圧迫した。

<第 3群：コラーゲンシート >

フイブリン接着剤の成分が固定化されたコラーゲンシート製剤 （製品名：タコ コンブ /鳥居薬品 (株） ：フイブリノゲン及びトロンビン等の成分が、 スポンジ状 のゥマコラーゲンのシートを支持体とし、 シートの片面に真空乾燥により固着さ れたもの： 2 X 2 cm) を出血部位に当て、 1分間軽く圧迫した。

⑤処置後出血の有無を確認し、 出血がある場合は最大 3回まで同様の処置を繰り 返した。

⑥止血完了後 5分間再出血の有無を観察した。

その結果、 表 1に示すとおり、 第 1群のトロンビン固定化シートとフイブリノ ゲン溶液の併用により、 本モデルによる噴出性出血は 1回の止血処置で確実に止 血することができた。 また、 第 2群のポリグリコール酸系不織布にフィプリン接 着剤をスプレーした場合には、 1回の止血処置で止血できない例がありわずかな がら第 1群には劣るものの、 高い止血効果が確認された。 これに対し、 第 3群の コラーゲンシートでは 1回の止血処置で止血されることは少なかった。 なお、 止 血完了後の再出血はいずれの群にもみられなかった。

表 1

実施例 3

(滲出性出血に対する止血試験）

実施例 1で作製されたトロンビン固定化シ一トのフイブリノゲン溶液との併用 による滲出性出血 （oozing) に対する止血効果を比較検討した。

具体的な評価方法を以下に示す。

①供試ゥサギをネンプタール （20〜35mg/kg) 麻酔下で開腹した。

②へパリンを 300U/kg静脈内投与した。

③肝臓の右葉、 内側左葉または外側左葉に、 径 1. 5cmの皮ポンチで深さ 4 mmの円 形の創傷をつくり、 その部分をメスで切除した。

④創傷からの出血を 1 0秒間ガーゼに吸収して重量を測定した （0. 68 g ) 。 群間 で出血量に差はなかった。

⑤実施例 2と同様の群構成で止血処置を行った。

⑥それぞれの止血処理時間を含め 5分間の出血をガーゼに吸収して重量を測定し た。 5分間経った時点で創面からの出血がみられた場合には、 それぞれの止血処 置と出血量の測定を繰り返し行つた。

⑦止血処置は最大 3回まで実施し、 止血までに要した止血処置の回数と、 止血処 置開始から止血までの出血の総重量で評価した。

その結果、 表 2に示すとおり、 第 1群のトロンビン固定化シートとフイブリノ ゲン溶液の併用により、 本モデルによる滲出性出血は 1回の止血処置で完全に止 血することができ、 止血処置後の出血量 （止血されるまでの出血量） も極めて少 量に抑えられた。 第 2群のポリグリコール酸系不織布にフィプリン接着剤をスプ レーした場合には、 止血処置後の総出血量は、 ト口ンビン固定化シ一トとフイブ リノゲン溶液の併用時より多少多い傾向はあったが、 1回の止血処置で止血され た。 これに対し、 第 3群のコラーゲンシートでは 1回の止血処置で止血されるこ とはなく、 3回止血処置を繰り返しても止血できない場合もあった。 さらに、 止 血処置後の総出血量も多かった。

表 2

*： 3回目の処置後も止血不可

本発明によるフィプリノゲン及びトロンビンが被覆された生体吸収性合成不織 布は、 実施例 2及び 3に示されるように止血処置時間が 1分間という極めて短時 間で行ったにも関わらず、 確実な止血が可能であった。

Claims

請 求 の 範 囲

I . 有効成分としてトロンビン及びフイブリノゲンを含む止血用材料において、 捕強材として生体吸収性合成不織布を使用することを特徴とする止血用材料。

2. 当該生体吸収性合成不織布の材料が、 ポリグリコール酸、 ポリ乳酸、 及びグ リコール酸と乳酸との共重合体からなる群より選択される材料を含む請求項 1記 載の止血用材料。

3 . 当該生体吸収性合成不織布がポリダリコール酸を材料とする不織布である請 求項 1または²に記載の止血用材料。

4 . トロンビン及びフイブリノゲンのうち少なくともトロンビンが予め生体吸収 性合成不織布に固定化されていることを特徴とする請求項 1から 3のいずれかに 記載の止血用材料。

5 . 血液凝固第 ΧΙΠ因子、 プロテアーゼ抑制剤、 または塩化カルシウムから選 択される少なくとも一つの添加剤を含む請求項 1から 4のいずれかに記載の止血 用材料。

6 . トロンビン、 フィプリノゲン及ぴ血液凝固第 XIII因子がヒト血液由来また は遺伝子組換え技術により生産される請求項 1力 ら 5のいずれかに記載の止血用 材料。

7 . 止血用材料としての、 基材として生体吸収性合成不織布、 並びに有効成分と してトロンビン及びフイブリノゲンの,組み合わせの使用。

8 . 当該生体吸収性合成不織布の材料が、 ポリダリコール酸、 ポリ乳酸、 及びグ リコール酸と乳酸との共重合体からなる群より選択される材料を含む請求項 7記 載の使用。

9 . 当該生体吸収性合成不織布がポリダリコール酸を材料とする不織布である請 求項 7または 8に記載の使用。

1 0 . 血液凝固第 XIII因子、 プロテアーゼ抑制剤、 または塩ィヒカルシウムから 選択される少なくとも一つの添加剤を含む請求項 7力 ら 9のいずれかに記載の使 用。

I I . 当該血液凝固第 X III因子がフイブリノゲンに添加される請求項 1 0に記 載の使用。

1 2 . 当該トロンビン、 フィプリノゲン及び血液凝固第 XIII因子がヒト血液由 来または遺伝子組換え技術により生産される請求項 7から 1 1のいずれかに記載 の使用。

1 3 . 止血用材料としての、 有効成分としてトロンビンが固定化された生体吸収 性合成不織布及び有効成分としてフイブリノゲンの組み合わせの使用。

1 4 . 当該トロンビンが固定化された生体吸収性合成不織布が、 生体吸収性合成 不織布をトロンビンを含む溶液に浸漬する工程、 及び該工程で得られた不織布を 凍結乾燥する工程、 を含む工程により作製されることを特徴とする請求項 1 3記 載の使用。

1 5 . 当該生体吸収性合成不織布の材料が、 ポリダリコール酸、 ポリ乳酸、 及び ダリコール酸と乳酸との共重合体からなる群より選択される材料を含む請求項 1 3または 1 4に記載の使用。

1 6 . 当該生体吸収性合成不織布がポリグリコ一ル酸を材料とする不織布である 請求項 1 3から 1 5のいずれかに記載の使用。

1 7 . 血液凝固第 XIII因子、 プロテアーゼ抑制剤、 または塩化カルシウムから 選択される少なくとも一つの添加剤を含む請求項 1 3から 1 6のいずれかに記載 の使用。

1 8 . 当該塩化カルシウムがトロンビンとともに生体吸収性合成不織布に固定化 されている請求項 1 7に記載の使用。

1 9 . 当該血液凝固第 XIII因子がフイブリノゲンに添加される請求項 1 7また は 1 8に記載の使用。

2 0 . 当該トロンビン、 フィプリノゲン、 及ぴ血液凝固第 XIII因子がヒト血液 由来または遺伝子組換え技術により生産される請求項 1 3から 1 9のいずれかに 記載の使用。

2 1 . 有効成分としてトロンビンが固定化された生体吸収性合成不織布、 及び有 効成分としてフイブリノゲンを含む容器、 を含む止血用キット。

2 2 . 当該生体吸収性合成不織布の材料が、 ポリダリコール酸、 ポリ乳酸、 及ぴ ダリコール酸と乳酸との共重合体からなる群より選択される材料を含む請求項 2 1記載の止血用キット。

2 3 . 当該生体吸収性合成不織布がポリグリコール酸を材料とする不織布である 請求 2 1または 2 2に記載の止血用キット。

2 4 . 添加剤として血液凝固第 XIII因子、 プロテアーゼ抑制剤、 または塩化力 ルシゥムから選択される少なくとも一つを含む請求項 2 1から 2 3のいずれかに 記載の止血用キット。

2 5 . 当該塩化カルシウムがト口ンビンの添加剤として生体吸収性合成不織布中 に添加されている請求項 2 4に記載の止血用キット。

2 6 . 当該血液凝固第 ΧΠΙ因子がフィプリノゲンを含む容器に含まれる請求項 2 4または 2 5に記載の止血用キット。

2 7 . 当該トロンビン、 フイブリノゲン、 及ぴ血液凝固第 XIII因子がヒト血液 由来または遺伝子組換え技術により生産される請求項 2 1から 2 6のいずれかに 記載の止血用キット。

2 8 . 当該トロンビン固定化生体吸収性合成不織布が、 生体吸収性合成不織布を ト口ンビンを含む溶液に浸漬する工程、 及ぴ該工程で得られた不織布を凍結乾燥 する工程、 を含む工程により作製されることを特徴とする請求項 2 1から 2 7の いずれかに記載の止血用キット。

2 9 . 基材として生体吸収性合成不織布、 有効成分としてトロンビンを含有する 容器、 及び有効成分としてフイブリノゲンを含有する容器を含む止血用キット。

3 0 . 当該生体吸収性合成不織布の材料が、 ポリダリコール酸、 ポリ乳酸、 及ぴ ダリコール酸と乳酸との共重合体からなる群より選択される材料を含む請求項 2

9記載の止血用キット。

3 1 . 当該生体吸収性合成不織布がポリグリコール酸を材料とする不織布である 請求項 2 9または 3 0に記載の止血用キット。

3 2 . 添加剤として、 血液凝固第 XIII因子、 プロテアーゼ抑制剤、 または塩ィ匕 カルシウムから選択される少なくとも一つを含む請求項 2 9から 3 1のいずれか に記載の止血用キット。

3 3 . 当該血液凝固第 XIII因子がフイブリノゲンを含む容器に含まれる請求項 3 2に記載の止血用キット。

3 4 . 当該トロンビン、 フィプリノゲン及び血液凝固第 XIII因子がヒ ト血液由 来または遺伝子組換え技術により生産される請求項 2 9カゝら 3 3のいずれかに記 載の止血用キット。