CN110121350A - 包含阴离子交换剂和钙盐的止血组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种组合物及其制备方法，该组合物包含阴离子交换剂和钙盐，以用作用于促使出血部位止血的药物。
Description
技术领域
本发明涉及止血组合物领域。更具体地讲，本发明涉及包含阴离子交换剂和钙的止血组合物，及其使用方法。
背景技术
出血是通常用于描述血液从脊椎动物的循环系统逃逸的术语。出血可发生在体内(内部出血)或体外(外部出血)。出血部位可以是身体的几乎任何区域。通常，当血液通过血管或器官的损伤而漏出时，会发生内部出血。当血液通过皮肤破裂流出或当血液通过身体中的天然开口(诸如口、鼻、耳、阴道或直肠)流出时，会发生外部出血。
出血可由多种事件或病症引起，包括创伤性损伤(包括磨伤、擦伤、裂伤、切伤、来自诸如针或刀的物品的穿孔伤口、压碎损伤和枪伤)或某些医学病症，诸如与具有凝血因子缺陷的凝血受损受试者相关的那些。此外，通过使用某些药物可能致使出血，诸如一些非甾体抗炎药(NSAID)或抗凝药，例如华法林、低分子量肝素、阿哌沙班达比加群酯依度沙班和利伐沙班
接下来，未经处理的出血可能致使放血，即血量的过度减少(血容量减少)，从而致使死亡。
止血或控制出血被称为止血，其涉及凝血，并且促进、加快或增强该机制是急救和外科手术两者的重要部分。增强、促进或加快止血的药剂和组合物称为“止血剂”。
止血剂可包括止血剂、密封剂或粘合剂。通常，止血剂被细分为机械止血剂(明胶、胶原、氧化再生纤维素等)、活性止血剂(诸如凝血酶)、可流动止血剂(诸如与凝血酶结合的明胶基质)和纤维蛋白密封剂。
一些已知的止血剂需要在使用前长时间制备，涉及许多步骤，这些步骤在紧急情况下浪费宝贵的时间。
生物止血剂非常有效，但其具有潜在的安全风险，而且其生产成本高。
许多已知的止血剂需要冷藏，这在发展中国家以及在各种情况下(包括在战场、隔离区、紧急情况下)或停电期间可能是不可用的或非常昂贵的。此外，冷藏的要求增加了生产、运输和储存的成本。
许多已知的止血剂对使用血液稀释药物(诸如肝脏素、阿司匹林或香豆素)的患者无效。
许多已知的止血剂包括凝结剂，其具有潜在的污染风险，具有高生产成本、短失效时间并且通常需要冷藏。
因此，需要安全和有效的止血剂，其不具有现有技术的缺点中的至少一些。
背景技术包括美国专利5,502,042和8,741,335；美国公布2009/0062849；以及PCT公布WO 2013/071235和1993/05822。
发明内容
本发明提供了包含阴离子交换剂的止血组合物；钙和药学上可接受的载体，以及使用它们促止血的方法。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了用于在对其有需要的受试者的出血部位促使止血的方法，该方法包括向出血部位施用有效量的包含阴离子交换剂和钙盐的止血组合物。
根据本发明的一些实施方案，阴离子交换剂包含一个或多个结合到基质的带正电的基团。
根据一些实施方案，带正电基团(也称为多阳离子)由选自强碱、弱碱以及它们的组合的碱提供。
根据一些实施方案，强碱包含季氨基团。
根据一些实施方案，弱碱包含选自伯氨基团、仲氨基团、叔氨基团以及它们的组合的氨基团。
根据一些实施方案，弱碱由二乙氨基乙基(DEAE)基团组成。
根据一些实施方案，基质选自脂族聚酯、多糖、多肽、聚苯乙烯-二乙烯基苯、蛋白质(诸如胶原明胶或白蛋白)、二氧化硅以及它们的组合。
根据一些实施方案，基质是交联的，任选地为共价交联。
根据一些实施方案，组合物基本上不含凝血串联蛋白质链的任何蛋白质。
根据一些实施方案，组合物为选自下列的形式：浆料、粉末、纤维、膜、贴剂和液体。
根据一些实施方案，其中组合物为浆料或液体形式，该组合物还包含药学上可接受的载体。
根据一些实施方案，施用通过在组合物上施加压力来进行，任选地向出血部位施加压力。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种止血组合物，所述止血组合物包含阴离子交换剂；钙盐；和任选的药学上可接受的载体。
根据本发明的一些实施方案，阴离子交换剂包含一个或多个结合到基质的带正电的基团。
根据一些实施方案，阴离子交换剂连接到固相。
根据一些实施方案，带正电基团由选自下列的碱组成：强碱、弱碱以及它们的组合。
根据一些实施方案，强碱包含季氨基团。
根据一些实施方案，弱碱包含选自伯氨基团、仲氨基团、叔氨基团以及它们的组合的氨基团。
根据一些实施方案，弱碱由二乙氨基乙基(DEAE)基团组成。
根据一些实施方案，基质选自脂族聚酯、多糖、多肽、聚苯乙烯-二乙烯基苯、二氧化硅以及它们的组合。
根据一些实施方案，基质是交联的，任选地为共价交联。
根据一些实施方案，多糖选自纤维素、葡聚糖、琼脂糖、以及它们的组合。
根据一些实施方案，蛋白质为结构蛋白质，诸如胶原或明胶，或在血浆中具有高丰度的蛋白质，诸如白蛋白。
根据一些实施方案，组合物基本上不含凝血串联蛋白质链的任何蛋白质。
根据一些实施方案，组合物为选自下列的形式：浆料、粉末、膜、贴剂和液体。
根据一些实施方案，组合物为浆料或液体形式，还包含药学上可接受的载体。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种止血组合物，其包含结合到基质的二乙氨基乙基(DEAE)；和钙盐。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种制备止血组合物的方法，该方法包括通过共价地将一个或多个带正电基团结合到交联基质来制备阴离子交换剂；以及向所述阴离子交换剂添加钙盐。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了可通过本文所公开的方法获得的止血组合物。
如本文所用，术语“促使止血”是指致使、形成、促进，加快和/或增强止血。
如本文所用，术语“出血部位”是指主动出血的部位和可能容易或易于发生出血并发症的部位，诸如例如外科部位、吻合部位和/或缝合部位。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指任何不具有生物活性并且适用于人类或其它动物的惰性稀释剂或载体。载体可选自本领域已知的任何载体，诸如但不限于磷酸盐缓冲液(PBS)、盐水、氯化钠溶液、氯化钙溶液、乳酸林格氏溶液(LR)、5％右旋糖的生理盐水溶液、不同的糖类、糖醇(诸如甘露糖醇、山梨糖醇)、以及注射用水。
如本文所用，术语“浆料”是指厚的、软的、潮湿的物质。通常，通过将干燥成分(例如粉末或固体亲水性颗粒)与液体混合来制备浆料。干燥成分浓度可为整个浆料组合物的0.5％至99％w/w。通常，浆料为在15-40℃的温度范围内的可模制材料。
如本文所用，关于组合物组分的术语“不含”是指以小于总组合物的0.1％w/w的浓度存在于组合物中的组分。
如本文所用，术语“包括”、“包含”、“具有”及其语法变体应视为指定所述特征、整数、步骤或组分，但不排除一种或多种另外特征、整数、步骤、组分或它们的组的添加。这些术语涵盖术语“由……组成”和“基本上由……组成”。
如本文所用，不定冠词“一个”和“一种”意指“至少一个/种”或“一个或多个/一种或多种”，除非上下文另有明确说明。
如本文所用，术语“约”是指±10％。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。另外，说明、材料、方法和实施例仅为示例性的而非旨在用于限制。类似于或等同于本文所述的那些方法和材料可用于实践本发明。
附图说明
本发明的一些实施方案在本文中参考附图进行描述。说明书连同附图使本领域的普通技术人员显而易见地知道如何实践本发明的一些实施方案。附图用于例示性讨论的目的，而非试图显示比基本理解本发明所需的更详细的实施方案结构细节。为清楚起见，附图中描绘的一些物体未按比例绘制。
在附图中：
图1示出施用DEAE SEPHADEXTM A-50(10％w/v)和市售明胶止血剂之后在体内的肝素化猪脾脏圆形穿孔模型(4mm直径/2mm深度)中出血的减少，其中压紧时间为30秒(对于DEAE SEPHADEXTM A-50)或60秒(对于市售明胶止血剂)。
图2a示出了用于猪脾脏有问题的出血模型以产生“子弹样”伤口的装置。图2b示出了由图2a的装置在猪脾脏中产生的伤口。如图2b中可见，伤口致使脾脏严重出血。DEAESEPHADEXTM A-50制备成20mM CaCl2中10％w/v的浆料并施用到伤口上。在施用浆料和4分钟的压紧时间之后，如针对图1所述评估施用后出血强度。图2c示出了施用DEAE SEPHADEXTMA-50和棉塞后的子弹样伤口，其实现了严重出血伤口的完全止血。
具体实施方式
本发明提供了包含阴离子交换剂的止血组合物；钙盐和任选的药学上可接受的载体，以及使用它们实现止血的方法。
本文教导的原理、用途和具体实施可参考所附说明书得到更好理解。在精读说明书后，本领域技术人员能够实施本发明而无需过度努力或实验。
在详细说明至少一个实施方案之前，应当理解本发明不一定在其应用中限制于下述说明书中所示的组分和/或方法的构建和排列的细节。本发明能够具有其它实施方案，或能够以各种方式实践或实施。
本文采用的措辞和术语用于描述性目的且不应视为限制性的。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了用于在出血部位有需要的受试者身上促使止血的方法，该方法包括向出血部位施用有效量的包含阴离子交换剂和钙盐的止血组合物。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种止血组合物，其包含阴离子交换剂和钙盐，用于在出血部位促使止血。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种止血组合物的用途，该止血组合物在用于促使止血的药物制造中包含阴离子交换剂和钙盐。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种止血药物组合物的使用，该止血药物组合物在用于促使止血的药物制造中包含阴离子交换剂和钙盐。
根据本文公开的方法、供使用的组合物、使用或制备方法的一些实施方案，阴离子交换剂包含一个或多个结合到基质的带正电的基团(pH在2至10之间)(也称为多阳离子)。在一些此类实施方案中，止血组合物不含多阴离子。
根据本文公开的方法、供使用的药物组合物、使用或制备方法的一些实施方案，阴离子交换剂包含一个或多个结合到基质的带正电的基团(pH在2至10之间)(也称为多阳离子)。在一些此类实施方案中，止血组合物不含多阴离子(诸如多阴离子聚合物)。
多阴离子为具有多于一个负电荷的分子或化学络合物。多阳离子为具有多于一个正电荷的分子或化学络合物。
在一个实施方案中，基质可包括阴离子残基；然而，阴离子交换剂的总净电荷将为正。
根据一些实施方案，带正电基团以不小于2mmol/g，例如介于2至5mmol/g、3至4mmol/g之间的总离子容量存在于止血组合物中。
如本文所用，术语“总离子容量”是指组合物中可用于交换的带电位点的总量。总离子容量以干重、湿重或湿体积为基础来表示。
根据一些实施方案，阴离子交换剂以总止血组合物的0.5-99％w/v的浓度存在，任选地以总止血组合物的5-15％w/v的浓度存在，例如5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％。
根据一些实施方案，其中阴离子交换剂以总止血组合物的至少10％w/v的浓度存在，该阴离子交换剂与止血组合物中钙之间的比率在1:5至1:70的范围内。在一些实施方案中，该比率为约1:34。
根据一些实施方案，带正电基团由选自下列的碱组成：强碱(诸如包含季氨基团的强碱)、弱碱(诸如包含选自伯氨基团、仲氨基团、叔氨基团的氨基团的弱碱)，以及它们的组合。
根据一些实施方案，弱碱由二乙氨基乙基(DEAE)基团组成。
根据一些实施方案，带正电的基团经由存在于基质载体和带正电基团之间的连接基结合到基质例如基质载体上。
根据一些实施方案，基质选自脂族聚酯、多糖、多肽(诸如明胶、牛血清白蛋白(BSA)或胶原蛋白，或它们的组合)、聚丙烯酰胺、丙烯酸酯共聚物、聚苯乙烯二乙烯基苯、二氧化硅以及它们的组合。
根据一些实施方案，基质是交联的，任选地为共价交联。在一些此类实施方案中，基质不含离子交联。
根据一些实施方案，多糖选自纤维素、葡聚糖、琼脂糖、以及它们的组合。
根据一些实施方案，基质包含SEPHADEXTM(葡聚糖)、SEPHACELTM(纤维素)或TOYOPEARLTM(羟基化甲基丙烯酸类聚合物)或它们的组合。根据一些实施方案，组合物为选自下列的形式：浆料、粉末、膜、贴剂和液体。根据一些此类实施方案，其中组合物为浆料或液体形式，该组合物还包含药学上可接受的载体。
根据本文所公开方法的一些实施方案，将止血组合物施用到出血部位通过朝向出血部位在组合物上施加压力(例如用纱布)来执行。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种止血组合物，其包含阴离子交换剂、钙盐，以及任选的药学上可接受的载体。
根据本发明的一些实施方案，阴离子交换剂包含一个或多个结合到基质的带正电的基团(也称为多阳离子)。在一些此类实施方案中，止血组合物基本上不含多阴离子。
根据一些实施方案，带正电基团以不小于2mmol/g例如介于2至5、3至4mmol/g之间的总离子容量存在于止血组合物中。
根据一些实施方案，其中阴离子交换剂以总止血组合物的至少10％w/v的浓度存在，该阴离子交换剂与止血组合物中钙之间的比率在1:5至1:70的范围内。在一些实施方案中，该比率为约1:34。
根据一些实施方案，阴离子交换剂以总止血组合物的1-99％w/v的浓度存在，任选地以总止血组合物的5-15％w/v的浓度存在，例如5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％。
根据一些实施方案，带正电基团由选自下列的碱提供：强碱(诸如包含季氨基团的强碱)、弱碱(诸如包含选自伯氨基团、仲氨基团、叔氨基团及它们的组合的氨基团的弱碱)，以及它们的组合。
根据一些实施方案，弱碱包含二乙氨基乙基(DEAE)基团。
根据一些实施方案，带正电的基团经由存在于基质载体和带正电基团之间的连接基结合到基质上。
根据一些实施方案，基质选自多糖、多肽(诸如明胶、牛血清白蛋白(BSA)或胶原蛋白，或它们的组合)、聚丙烯酰胺、丙烯酸酯共聚物、聚苯乙烯二乙烯基苯、二氧化硅以及它们的组合。
根据一些实施方案，基质是交联的，任选地为共价交联。在一些此类实施方案中，基质不含离子交联。
根据一些实施方案，多糖选自纤维素、葡聚糖、琼脂糖、以及它们的组合。
根据一些实施方案，基质包含SEPHADEXTM(葡聚糖)、SEPHACELTM(纤维素)或TOYOPEARLTM(羟基化甲基丙烯酸类聚合物)或它们的组合。
根据一些实施方案，组合物为选自下列的形式：浆料、粉末、膜、贴剂和液体。根据一些此类实施方案，其中组合物为浆料或液体形式，该组合物还包含药学上可接受的载体。
根据一些实施方案，本文所用的盐为正二价阳离子。
根据本文公开的方法、供使用的组合物、使用或止血组合物的一些实施方案，钙以钙盐的形式存在于止血组合物中，诸如氯化钙、乙酸钙、乳酸钙、草酸钙、碳酸钙、葡萄糖酸钙、磷酸钙、甘油磷酸钙或它们的组合。在一些实施方案中，钙盐为氯化钙，任选地以溶液形式存在，还任选地以1至100mM的浓度存在。在一些此类实施方案中，存在于止血组合物中的钙是氯化钙。
根据本文公开的方法、供使用的组合物、使用或止血组合物的一些实施方案，止血组合物基本上不含凝血串联蛋白质链的所有蛋白质。
根据一些实施方案，基质不含下列多阴离子聚合物：藻酸盐和/或透明质酸盐。
根据一些实施方案，基质不含一种或多种可交联的多阴离子聚合物，该一种或多种聚合物选自聚苯乙烯磺酸盐(诸如聚苯乙烯磺酸钠)、聚丙烯酸盐(诸如聚丙烯酸钠)、聚甲基丙烯酸盐(诸如聚甲基丙烯酸钠)、聚乙烯硫酸盐(诸如聚乙烯硫酸钠)、聚磷酸盐(诸如聚磷酸钠)、卡拉胶、k型卡拉胶、吉兰糖胶、羧甲基纤维素、羧甲基琼脂糖、羧甲基葡聚糖、羧甲基甲壳素、羧甲基壳聚糖、通过羧甲基基团改性的聚合物、藻朊酸盐(诸如海藻酸钠)、包含多个羧酸盐基团的聚合物、黄原胶，以及它们的组合。
根据一些实施方案，基质的聚合物不通过添加羧甲基(CM)基团进行改性。
根据一些实施方案，生物相容性聚合物用二乙氨基乙基(DEAE)基团改性以获得阳离子官能团，从而变成多阳离子聚合物。
根据一些实施方案，多阳离子聚合物选自脱乙酰壳多糖(诸如壳多糖氯化物)、甲壳素、二乙氨乙基葡聚糖、二乙氨乙基纤维素、二乙氨乙基琼脂糖、二乙氨乙基藻朊酸盐、通过二乙氨乙基基团改性的聚合物、和具有高于7的平均残基等电点的多肽，以及它们的组合。优选地，多阳离子聚合物为二乙氨基乙基葡聚糖(DEAE葡聚糖)。
根据本文公开的方法、供使用的组合物、使用或止血组合物的一些实施方案，基质不含藻酸和果胶酸。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种止血组合物，其包含结合到基质的二乙氨基乙基(DEAE)，和钙盐。
根据本发明的一些实施方案的一个方面，提供了一种制备止血组合物的方法，该方法包括通过共价地将至少一种带正电基团结合到交联基质来制备阴离子交换剂；以及向所述阴离子交换剂添加钙盐。
根据本发明的此类实施方案的另一方面，提供了可通过本文所公开的方法获得的止血组合物。
根据本文公开的方法、供使用的组合物、使用或止血组合物的一些实施方案，止血组合物基本上不含所有生物止血剂，即不含凝血串联蛋白质链的所有蛋白质组分，即纤维蛋白原、纤维蛋白、因子V、因子Va、因子VII、因子VIIa、因子VIII、因子VIIIa、因子IX、因子IXa、因子X、因子Xa、因子XIa、因子XI、因子XII、因子XIIa、组织因子(TF)、以及凝血酶、以及凝血酶原酶复合物、凝血酶原、以及vWF.、酶复合物、高分子激肽原(HMWK)、前激肽释放酶、激肽释放酶、促凝血酶原激酶。
根据本文公开的方法、供使用的组合物、使用或止血组合物的一些实施方案，止血组合物基本上不含凝血串联蛋白质链(诸如凝血酶、凝血酶原和纤维蛋白原)的所有蛋白质。
在一些实施方案中，阴离子交换剂包含基质(也被称为“载体”、“基材”、“本底”、“基础珠粒”或“树脂”)，其可为固体或半固体，任选地呈一个或多个带正电基团所结合的珠粒形式。
有利的是，当使用辅助材料阻止出血而不分解时，基质能够耐受在外科手术期间通常施加的压力。
在一些实施方案中，基质包含交联聚合物。在一些实施方案中，固体或半固体基质材料直到实现止血(从施用止血组合物后至少1分钟)才溶解或分解。
根据一些实施方案，形成基质的聚合物不溶于水，并且优选为多孔的，具有至少20KDa的排阻极限。
根据一些实施方案，当经受手动物理压紧时，基质不会分解。
如本文所用，术语“带正电的基团”是指在2.0至10的pH范围内包含携带正电荷的化学基团的分子，这些基团诸如铵、烷基铵、二烷基铵、三烷基铵、季铵、二乙氨基乙基(DEAE)、二甲氨基乙基(DMAE)、三乙胺基乙基、三甲胺基乙基、烷基、胺基(例如NR2H+)、二乙基-(2-羟丙基)氨乙基、三甲胺基-羟丙基、以及它们的组合。
在一个实施方案中，离子交换剂具有6至14范围内的多个pKa值。在另一个实施方案中，离子交换剂具有高于9的单个pKa值。
根据一些实施方案，阴离子交换剂包含结合到已知具有止血性质的任何基质的DEAE，以增加基质的止血功效。合适的基质的示例包括但不限于明胶、纤维素、胶原和淀粉。
根据一些实施方案，止血组合物包含至少一种阴离子交换剂和钙的共混物。术语“共混物”旨在指任何形式的至少阴离子交换剂和钙的均匀或非均匀混合物。共混物可任选地另外包含其它成分。
根据一些实施方案，共混物基本上没有或不含凝血串联蛋白质链的任何蛋白质组分(即，此类组分以小于总体组合物的0.1％w/w的浓度存在于组合物中)，例如共混物可基本上没有或不含凝血酶和纤维蛋白原。
根据一些实施方案，共混物为浆料、粉末或液体共混物。
根据一些实施方案，共混物以冷冻状态提供，使得在使用之前，将产物解冻并上升至室温(即在15-40℃的范围内)，其中该共混物处于其可用状态。
根据一些实施方案，本文所公开的组合物在1分钟内停止伤口的出血。
如本文所用，术语“止血剂”或“止血组合物”是指通过引起血液凝块即促使止血而起作用的材料或组合物。通常，止血剂增加凝血功能。
在一个实施方案中，就组合物而言，术语“促使止血”是指通过活化凝血因子(诸如凝血酶原)致使血液凝块，从而实现出血中止或出血强度降低的组合物。
如本文所用，就组合物而言，术语“停止出血”或“中止出血”是指当施用于伤口部位时，例如基于下面的“材料和方法”部分中所述的0(不出血)到5的标度，致使不出血的组合物。
如本文所用，术语“出血强度降低”(在本文中也称为“止血功效”)是指初始出血强度和施用后出血强度之间的差值。
如本文所用，术语“初始出血强度”是指在形成伤口之后和施用组合物之前，例如基于下面的“材料和方法”部分中所述的0到5的标度，立即评估的出血强度。
如本文所用，对于指定的压紧时间，术语“施用后出血强度”是指例如基于下面的“材料和方法”部分中所述的0到5的标度，在施用组合物后和在压紧时间之后评估的出血强度。
根据施用到出血伤口时的压紧时间，可评估组合物的止血功效。
如本文所用，术语“压紧时间”是指在施用组合物后对出血伤口施用手动压紧的时间。通常，该力等于外科医生在使用助剂产品以实现止血时通常施加的强度。在一些实施方案中，其中不施加压紧，压紧时间被表示为0秒。
在一些实施方案中，压紧时间为约8至12分钟。在一些实施方案中，在有问题的出血中，压紧时间为约5分钟。在一些实施方案中，在一般外科手术中遇到的出血中，压紧时间为约1至2分钟。根据世界卫生组织分类，“有问题的出血”被定义为III类出血及以上。通常，III类出血涉及循环血液量的30-40％的损失。典型的症状包括：患者的血压降低、心率增加、外周低灌注(休克)。
不受任何一种理论的束缚，本发明人假设当将如本文所公开的组合物施用到出血伤口或部位时，原位产生凝血酶。令人惊讶的是，发现这种原位凝血酶生成以足够的程度和足够的速度发生以实现止血。
有利的是，物理基质的存在使得止血组合物能够容易地施用到出血部位，任选地通过压紧施用。此外，与氧化再生纤维素(ORC)类似，基质自身可通过截留血小板而有助于凝结作用。
如下文的实施例部分所示，发现基质是带正电的官能团诸如DEAE的止血能力的先决条件。通常，基质必须具备这样的性质：在初始接触液体时不溶解并且在实现止血之前保持其完整性，例如至少1分钟，并且允许血液蛋白质聚集以在伤口部位局部浓缩从而允许引发凝血串联蛋白质链。有利的是，基质在通常由外科医生在一般外科手术期间施用以实现止血的压力下是稳定的。有利的是，基质的性质使得其在施用后分布在伤口上和/或伤口内，任选地通过使用压紧来分布。
根据本发明发现不同的Sephadex类型和市售明胶止血剂未能阻止出血(在肝脏出血模型中)，即未观察到出血强度降低。
当包含相同基体聚合物(即以粉末形式提供的交联葡聚糖，通过其制备浆料)时，不同的Sephadex类型令人惊讶地减少了出血。
此外，在施用DEAE Sephadex后，通过从两侧折叠器官来手动操纵脾脏，并且不发生再出血。
据发现，虽然市售明胶止血剂在60秒的压紧时间后未能阻止出血，但DEAESEPHADEXTM A-5010％(w/v)成功地停止了出血，即使在30秒的短压紧时间之后也是如此。还发现，包含阴离子交换剂(诸如结合到基质的DEAE)与钙盐的组合物致使完全止血。
无论所使用的具体基质为何，这些组合物基本上致使完全止血。
还发现，包含阴离子交换剂与钙盐的组合物致使完全止血，该阴离子交换剂诸如结合到基质的DEAE(诸如SEPHADEXTM、SEPHACELTM和TOYOPEARLTM(分别为葡聚糖、纤维素和羟基化甲基丙烯酸类聚合物)。
更具体地，发现CaCl2中的DEAE Sephadex能够在压紧60秒和30秒后中止出血。
据发现，可使用DEAE SEPHADEXTM A-50(8％w/v)施用而不压紧，以降低出血强度。
发现包含DEAE Sephadex(诸如DEAE SephadexTM A-50)和钙盐的组合物的止血能力表现出与具有凝血酶的市售明胶止血剂类似的功效，例如当使用相同的压紧时间(诸如30秒或10秒的压紧)时。然而，在不存在生物活性组分如凝血酶的情况下，基于包含结合到基质的DEAE和钙盐的阴离子交换剂的止血剂的止血能力基本上优于市售明胶止血剂的止血能力。
根据本发明发现，包含用NaCl制备的DEAE Sephadex但缺少钙盐的组合物不会降低出血强度。
结果表明，在存在钙盐的情况下包含结合到基质的DEAE基团的组合物的使用有效地实现止血。
结果还显示，在存在钙盐的情况下，在DEAE Sephadex施用后30秒和60秒的压紧时间致使完全止血。
在存在钙盐的情况下，正常血浆的止血时间(TTH)为约200秒(如通过凝血测定测量)。而根据本发明，在存在钙盐和阴离子交换剂的情况下正常血浆的TTH，在约10至180秒范围内，例如在约10至60秒范围内，在约10至30秒范围内，在约15至60秒范围内，在约15至30秒范围内，以及在约30至60秒范围内。在一个实施方案中，TTH为约30秒。
根据本发明，示出了诸如结合到基质的DEAE的阴离子交换剂与钙盐一起提供完全止血。无论使用何种基质，均获得该结果。结果与和凝血酶一起使用市售止血剂诸如明胶时获得的结果相当。
发现QAE SEPHADEXTM与钙盐一起减少了出血。
不含钙盐和/或基质的组合物对出血强度没有影响。
这些使用DEAE和QAE的结果表明，包含结合到基质的阴离子交换剂并且包含钙盐的组合物有效地用作止血剂。在存在钙盐的情况下结合至交联聚合物的DEAE的止血能力在更具挑战性的有问题的出血模型中得到进一步证实，该模型从Holcomb JB、Pusateri AE、Harris RA等人公开的模型(Effect of dry fibrin sealant dressings versus gauzepacking on blood loss in grade V liver injuries in resuscitated swine.JTrauma.1999；46:49–58)修改而成，该文据此以引用方式并入，视同在本文中充分阐述。
其表明结合到根据本发明的交联基质的DEAE在肝素化猪脾脏圆形穿孔模型中成功地实现体内完全止血，而未结合至基质的DEAE未能降低出血强度。
如本文所公开的结合到基质的带正电基团的密度(即存在)表现出对于实现止血的重要性。根据本发明，基质上的电荷可有利地以足以实现止血的密度存在。
根据本发明发现，并非所评估的所有正电荷提供相同水平的止血功效。因此，为了评估电荷密度和电荷类型，可进行分析以确保存在最佳密度范围。
例如，合成的基质可单体化，诸如通过加酸水解，并应用至分析仪器(例如高压液相色谱法、气相色谱法)，能够基于单体携带的不同电荷将这些单体分离。这样，可进行分析以评估某个分子上的电荷密度。
实施例
材料和方法
表1：材料
体内循环穿孔模型。
该模型基于先前在WO 2012087774 A1中描述的模型，但有一些修改。该模型评估所测试的组合物在减少体内出血方面的功效(止血功效)。
最初，将要研究止血的器官暴露，然后使其经受单个活检穿孔(在实施例1和5中为4mm直径，2mm深度；在实施例2中为4mm直径，2mm深度或8mm直径，3mm深度，第二实验)。移除穿孔中的组织。以0至5的标度评定初始出血强度(“初始出血”)，其中：0-“无出血”；1-“渗血”；2-“非常轻度的出血”；3-“轻度出血”；4-“中度出血”；5-“严重出血”。
为了评估每种所测试组合物的止血功效，将大约0.5ml浆料或100mg粉末(对于以粉末形式施用的组合物)施用到出血穿孔伤口中。使用注射器将以浆料形式施用的组合物施用到伤口中；将以粉末形式施用的组合物直接施用到伤口上。
在施用组合物之后，使用纱布任选地施加手动压紧达指定时间(本文也称为“压紧时间”)。在压紧后，移除纱布并且立即以及在另外1分钟后定性(是/否)或定量(使用如上所述的0至5的标度)评估施用后出血强度。
将出血强度(其至少在3处开始)降低至1(渗血)或0(无出血)的所测试组合物被认为是有效的。为了定性确定，在视觉上并且通过被压到所处理区域的边缘上的一块纱布检查出血是存在还是不存在。
肝素化活检穿孔模型被认为是评估强止血的合适模型。
在施用组合物后评估止血时间(TTH)。在施用组合物后评估止血时间(TTH)。TTH定义为从施用组合物直至观察到完全止血(分数0)的时间间隔。
实施例1：体内脾脏模型中包含阴离子交换剂和钙盐的组合物的止血特性。
使用与Sephadex(DEAE SephadexTM)共价结合的DEAE作为阴离子交换剂，在如上所述的体内肝素化猪脾脏圆形穿孔模型中进行包含阴离子交换剂和钙盐的组合物的止血特性的初始评估。在该实验中，穿孔尺寸为4mm直径、2mm深度。在施用之后采用30或60秒的压紧时间。在两种浓度下测试DEAE SEPHADEXTM A-50。在该实验中，对施用后出血强度进行定性评估。
评价下列组合物(参见上表1中的详细说明)的止血功效：
1.DEAE SEPHADEXTM A-50，制备为20mM CaCl2溶液中的10％w/v浆料(0.5ml，含有50mg DEAE SEPHADEXTM A-50)(30秒压紧时间)；
2.DEAE SEPHADEXTM A-50，制备为20mM CaCl2溶液中的6.6％w/v浆料(0.5ml，含有33mg DEAE SEPHADEXTM A-50)(60秒压紧时间)；
3.SEPHADEXTM G-75Superfine，制备为20mM CaCl2溶液中的10％w/v浆料(0.5ml，含有50mg SEPHADEXTM G-75Superfine)(60秒压紧时间)；
4.SEPHADEXTM G-50Medium，制备为20mM CaCl2溶液中的10％w/v浆料(0.5ml，含有50mg SEPHADEXTM G-50Medium)(60秒压紧时间)；
5.制备浆料形式的市售明胶止血剂(0.5ml，含有55mg明胶)(60秒压紧时间)。
所有四个SEPHADEXTM样品包含相同的基体聚合物、交联葡聚糖。组合物1-4以粉末形式提供，通过其如上表1中所述制备浆料。使用市售明胶可流动止血剂作为对照物。
发现SEPHADEXTM G-50Medium、SEPHADEXTM G-75Superfine和市售明胶止血剂未能停止出血，即未观察到出血强度降低(结果未示出)。
令人惊讶的是，DEAE SEPHADEXTM A-50在所有测试的压紧时间减少了出血。在施用DEAE SEPHADEXTM A-50后，通过从两侧折叠器官来手动操纵脾脏。在任一测试浓度下并且在两个不同的压紧时间之后未发生再出血(结果未示出)。由于止血仅发生在用DEAE基团补充的基质中，因此得出结论，止血效果是由于DEAE基团的存在。
图1示出了使用DEAE SEPHADEXTM A-50 10％(w/v)和市售明胶获得的示例性结果。如图所示，市售明胶止血剂在60秒的压紧时间后未能停止出血，而DEAE SEPHADEXTM A-5010％(w/v)成功地停止了出血，即使在30秒的更短压紧时间之后也是如此。
实施例2：包含阴离子交换剂和钙的组合物对体内猪肝脏模型中止血的影响。
在以下实施例中，使用如上所述的体内肝素化猪肝脏圆形穿孔模型，单独和组合评估了包含阴离子交换剂以及钙盐的组合物中的每种组分对于止血的功效。该实验确定组合物中组分的哪一种为实现止血所需的。
每种组合物的制备描述于以上表1中。下表2列出了压紧时间。在该实验中，根据0-5标度评估了初始出血强度和施用后出血强度。
评估了以下组合物：
1.DEAE SEPHADEXTM A-50，制备为20mM CaCl2溶液中的8％w/v浆料(0.5ml，含有40mg DEAE SEPHADEXTM A-50)；
2.制备浆料形式的市售明胶止血剂(0.5ml，含有55mg明胶)；
3.用凝血酶制备浆料形式的市售明胶止血剂(0.5ml，含有55mg明胶)；
4.SEPHADEXTM G-50Medium，制备为20mM CaCl2溶液中的14％w/v浆料(0.5ml，含有70mg SEPHADEXTMG-50Medium)。
5.DEAE SEPHADEXTM A-50，制备为20mM CNaCl溶液中的8％w/v浆料(0.5ml，含有40mg DEAE SEPHADEXTM A-50)；
6.SP SEPHADEXTM C-50，制备为20mM CaCl2溶液中的8％w/v浆料(0.5ml，含有40mgSP SEPHADEXTM C-50)；
7.QAE SEPHADEXTM，制备为20mM CaCl2溶液中的8％w/v浆料(0.5ml，含有40mg QAESEPHADEXTM)；
8.DEAE SEPHACELTM，制备为浆料形式(100mg)；以及
9.TOYOPEARL DEAE-650MTM，制备为粉末形式(100mg)。
在表2中示出了在施用每种测试的组合物之后的压紧时间和出血强度结果。通过从初始出血强度中减去施用后出血强度来计算出血强度降低。
表2：所测试组合物在出血强度降低(肝脏出血模型)中的效果
*通过从初始出血强度中减去施用后出血强度来计算。
表3：所测试组合物在出血强度降低(肝脏出血模型)中的效果
*通过从初始出血强度中减去施用后出血强度来计算。
一般来讲，可以看出，包含阴离子交换剂(诸如结合到基质的DEAE)与钙盐的组合物致使完全止血(参见针对DEAE SEPHADEXTM A-50、DEAE SEPHACELTM和TOYOPEARL DEAE-650MTM的表2，都包含钙盐)。无论所使用的具体基质为何，这些组合物基本上致使完全止血。例如，诸如SEPHADEXTM、SEPHACELTM和TOYOPEARLTM(分别为葡聚糖、纤维素和羟基化甲基丙烯酸类聚合物)的基质在减少出血强度方面具有类似的功效。
更具体地讲，在CaCl2中的DEAE SEPHADEXTM A-50 8％w/v能够在压紧60秒和30秒后中止出血。结果还示出可使用DEAE SEPHADEXTM A-50(8％w/v)施用而不压紧，以降低出血强度(表2)。
包含DEAE SEPHADEXTM A-50和钙盐的组合物的止血能力表现出与具有凝血酶的市售明胶止血剂类似的功效，例如当使用相同的压紧时间(30秒)时，甚至是仅使用10秒压紧时。然而，在不存在生物活性组分如凝血酶的情况下，基于包含结合到基质的DEAE和钙盐的阴离子交换剂的止血剂的止血能力显著优于市售明胶止血剂的止血能力。
如表3所示，包含用NaCl制备的DEAE SEPHADEXTM且不含钙盐的组合物不产生出血强度降低，使得可以得出结论，样品不能有效地停止出血。
当评估离子交换基团对止血能力的影响时，示出包含阴离子基团的SPSEPHADEXTM、具有钙盐的磺丙基(SP)不会降低出血强度。换句话讲，具有负(SP)基团而不是正(DEAE)基团的材料不能有效作为止血剂。
还示出季氨乙基、QAE SEPHADEXTM能够与钙盐一起降低出血强度。
在实施例1中还示出，在不存在官能团(EPHADEXTM G-50连同钙盐，但是没有DEAE基团)的情况下，单独基质不具有止血功效。
结果表明，在存在钙盐的情况下包含结合到基质的DEAE基团的组合物的使用有效地实现止血。
结果还示出，在SEPHADEXTM A-50(8％w/v)施用之后的30秒和60秒的压紧时间致使完全止血，因此TTH被定义为30秒。
因此示出了诸如结合到基质的DEAE的阴离子交换剂与钙盐一起提供完全止血。无论使用何种基质，均获得该结果。结果与和凝血酶一起使用市售止血剂诸如明胶时获得的结果相当。
发现QAE SEPHADEXTM与钙盐一起减少了出血。
不含钙盐和/或基质的组合物对出血强度没有影响。
这些结果表明，包含阴离子交换剂和钙盐的组合物有效地用作止血剂。
实施例3：包含阴离子交换剂和钙盐的组合物对体内猪脾脏模型中止血的影响。
上一实验示出，包含由结合到交联聚合物的DEAE组成的阴离子交换剂和钙盐的组合物有效地降低体内脾脏圆形穿孔模型中的出血强度。
在该实验中，组合物的止血活性在另一个模型即体内肝素化猪脾脏圆形穿孔模型中被证实(如上所述进行)。该模型在出血强度方面比上一个模型更严重。所有样品的压紧时间为30秒。对于样品1-6，穿孔尺寸为4mm直径、2mm深度。对于样品7-9，穿孔尺寸为8mm直径以及3mm深度。通常，出血的严重程度随着穿孔大小的增加和/或肝素的添加而增大。
测试了以下样品的止血功效：
1.DEAE SEPHADEXTM A-50，制备为20mM CaCl2溶液中的8％w/v浆料(0.5ml，含有40mg DEAE SEPHADEXTM A-50)；
2.DEAE SEPHADEXTM A-50，制备为20mM CaCl2溶液中的10％w/v浆料(0.5ml，含有50mg DEAE SEPHADEXTM A-50)，重复测试；
3.制备浆料形式的市售明胶止血剂(0.5ml，含有55mg明胶)；
4.用凝血酶制备浆料形式的市售明胶止血剂(0.5ml，含有55mg明胶)；
5.SEPHADEXTM G-50Medium，制备为20mM CaCl2溶液中的14％w/v浆料(0.5ml，含有70mg SEPHADEXTM G-50Medium)；
6.DEAE SEPHADEXTM A-50，制备为20mM CNaCl溶液中的8％w/v浆料(0.5ml，含有40mg DEAE SEPHADEXTM A-50)；
7.纯DEAE；
8.CaCl2(20mM)；以及
9.DEAE连同CaCl2。
据观察，在存在CaCl2的情况下，DEAE SEPHADEXTM A-508％和10％w/vv能够降低出血强度(观察到约2-3个点的降低)，其中较高的百分比提供更好的结果。在该模型中，DEAESEPHADEXTM A-50的止血能力优于含有或不含凝血酶的基于市售明胶的止血剂的止血能力。
如肝脏实验所示，单独的SEPHADEXTM G-50和DEAE SEPHADEXTM连同钠盐均未能降低出血强度。
纯DEAE未能降低出血强度。因此得出结论，当DEAE不与交联聚合物结合时，其不能用作有效的止血剂(即未发生显著的出血减少)。在不存在基质的情况下，钙盐的添加不改善DEAE的止血能力，如对于包含DEAE的组合物连同钙盐组合物所看到的(减少0个点)。还证明了，单独钙盐不具有止血能力。
该实验还支持上一实验，并且示出钙盐、DEAE基团和基质的组合对于所示的止血功效是必需的。
实施例4：包含阴离子交换剂和钙盐的溶液在体内猪脾脏有问题的出血模型中的 止血特性。
在该实施例中，在存在钙盐的情况下结合至交联聚合物的DEAE的止血能力在有问题的出血的更具挑战性的问题出血模型中得到进一步测试，该模型从Holcomb JB、Pusateri AE、Harris RA等人公开的模型(Effect of dry fibrin sealant dressingsversus gauze packing on blood loss in grade V liver injuries in resuscitatedswine.J Trauma.1999；46:49–58)修改而成，该文据此以引用方式并入，视同在本文中充分阐述。
DEAE SEPHADEXTM A-50制备成25mM CaCl2溶液中10％w/v的浆料。使用专用装置(参见图2a)执行穿孔，得到X形伤口，其中每个臂长5.5cm，并且中心孔深度为1.5cm，子弹形状，并且直径为9.5mm(图2b)。伤口表示有问题的出血(诸如子弹伤害)。
将约20ml的所测试组合物施用到伤口上。将手动压紧施用到伤口部位四分钟。所测试的组合物停止了出血。
实验进行三次(再重复两次)，并且获得类似的结果。
如果在第一次试验中不存在足够的材料来实现完全止血，则施用另外的材料，并且将压紧另外施用三分钟。然后实现了完全止血。
实施例5：基质要求评估
在以下实施例中，使用如上所述体内肝素化猪脾脏圆形穿孔模型对DEAE结合的基质的要求进行进一步评估。组合物的制备描述于以上表1中。压紧时间为60秒。在该实验中，根据0-5标度评估了初始出血强度和施用后出血强度。
DEAE葡聚糖500为葡聚糖的多阳离子衍生物，其由平均分子量为500kD的葡聚糖制备，其中葡聚糖链不是交联的。
评估了以下组合物：
1.DEAE SEPHADEXTM A-50，制备为20mM CaCl2溶液中的10％w/v浆料(0.5ml，含有40mg DEAE SEPHADEXTM A-50)；
2.DEAE葡聚糖500，通过10％(w/w)CaCl2粉末(100mg粉末，包含90mg DEAE葡聚糖和10mg CaCl2)制备。
不同的所测试组合物的出血强度结果示于表4中。
表4：所测试组合物在脾脏出血模型中出血强度降低的效果
结合到交联基质的DEAE成功地实现完全止血，而未结合至基质的DEAE未能降低出血强度。
实施例6：带正电荷的基团对止血的影响
如本文所公开的结合到基质的带正电基团的密度(即存在)表现出对于实现止血的重要性。基质上的电荷应有利地以足以实现上文所定义的止血的密度存在。
在先前实施例中示出，并非所评估的所有正电荷提供相同水平的止血功效。因此，为了评估电荷密度和电荷类型，进行分析以确保存在最佳密度范围。
为此，合成的基质被单体化，诸如通过加酸水解，并应用至分析仪器(例如高压液相色谱法、气相色谱法)，能够基于单体携带的不同电荷将这些单体分离。这样，进行分析以评估某个分子上的电荷密度。
应理解，为清晰起见，在独立实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征，也可在单个实施方案中组合提供。相反地，为简明起见，在单个实施例的上下文中描述的本发明的各种结构也可单独地或以任何合适的子组合形式提供，或如其所适当地提供于本发明的任何其它所述实施例中。在各种实施方案的上下文中所述的某些特征不应视为那些实施方案的基本特征，除非实施方案在没有那些要素的情况下不起作用。
尽管本发明已结合其具体实施方案进行了描述，但显然许多替代、修改和变型对于本领域中那些技术人员而言是显而易见的。因此，本发明旨在涵盖落在所附权利要求书范围内的所有此类替代、修改和变型。
本申请中的任何参考文献的引用或鉴定不应解释为承认此类参考文献可用作本发明的现有技术。
Claims (29)
1.一种组合物，所述组合物包含阴离子交换剂和钙盐，以用作用于促使出血部位止血的药物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述阴离子交换剂包含结合到基质的一个或多个带正电的基团。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述带正电基团由选自强碱、弱碱以及它们的组合的碱提供。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述强碱包括季氨基团。
5.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述弱碱包含选自伯氨基团、仲氨基团、叔氨基团以及它们的组合的氨基团。
6.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述弱碱由二乙氨基乙基(DEAE)基团组成。
7.根据权利要求2至6中任一项所述的组合物，其中，所述基质选自脂族聚酯、多糖、多肽、聚苯乙烯-二乙烯基苯、二氧化硅以及它们的组合。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的组合物，其中，所述基质为交联的。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述基质为共价交联的。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中，所述组合物基本上不含所述凝血串联蛋白质链的任何蛋白质。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中，所述组合物为选自下列的形式：浆料、粉末、膜、贴剂和液体。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中，浆料或液体形式的所述组合物还包含药学上可接受的载体。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，所述使用涉及向所述组合物施加压力，任选地向所述出血部位施加压力。
14.一种止血组合物，所述止血组合物包含：
阴离子交换剂；
钙盐；和
任选的药学上可接受的载体。
15.根据权利要求14所述的止血组合物，其中，所述阴离子交换剂包含结合到基质的一个或多个带正电的基团。
16.根据权利要求15所述的止血组合物，其中，所述带正电基团由选自强碱、弱碱以及它们的组合的碱提供。
17.根据权利要求16所述的止血组合物，其中，所述强碱包括季氨基团。
18.根据权利要求16所述的止血组合物，其中，所述弱碱包含选自伯氨基团、仲氨基团、叔氨基团以及它们的组合的氨基团。
19.根据权利要求16所述的止血组合物，其中，所述弱碱由二乙氨基乙基(DEAE)基团组成。
20.根据权利要求14至19中任一项所述的止血组合物，其中，所述基质选自脂族聚酯、多糖、多肽、聚苯乙烯-二乙烯基苯、二氧化硅以及它们的组合。
21.根据权利要求15至20中任一项所述的止血组合物，其中，所述基质为交联的。
22.根据权利要求21所述的止血组合物，其中，所述交联的聚合物为共价交联的。
23.根据权利要求20至22中任一项所述的止血组合物，其中，所述多糖选自纤维素、葡聚糖、琼脂糖、以及它们的组合。
24.根据权利要求15至23中任一项所述的止血组合物，其中，所述组合物基本上不含所述凝血串联蛋白质链的任何蛋白质。
25.根据权利要求15至24中任一项所述的止血组合物，其中，所述组合物为选自下列的形式：浆料、粉末、膜、贴剂和液体。
26.根据权利要求25所述的止血组合物，其中，浆料或液体形式的所述组合物还包含药学上可接受的载体。
27.一种止血组合物，所述止血组合物包含：
结合到基质的二乙氨基乙基(DEAE)；和
钙盐。
28.一种用于制备止血组合物的方法，所述方法包括：
通过共价地将一个或多个带正电基团结合到交联基质来制备阴离子交换剂；以及
向所述阴离子交换剂添加钙盐。
29.一种可通过权利要求28所述的方法获得的止血组合物。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112675356A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-20 | 湖南工业大学 | 长期保存的止血组合物及其制备方法和长期保存的抗菌止血混合物的制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989004657A1 (en) * | 1987-11-16 | 1989-06-01 | Damon Biotech, Inc. | Sustained release of encapsulated molecules |
| WO1999056798A1 (en) * | 1998-05-07 | 1999-11-11 | Genzyme Corporation | Compositions comprising hemostatic compounds and bioabsorbable polymers |
| WO2008076598A1 (en) * | 2006-12-13 | 2008-06-26 | Honeywell International Inc. | Combination of inorganic hemostatic agents with other hemostatic agents |
| US8110208B1 (en) * | 2009-03-30 | 2012-02-07 | Biolife, L.L.C. | Hemostatic compositions for arresting blood flow from an open wound or surgical site |
| CN103025360A (zh) * | 2010-05-24 | 2013-04-03 | 犹他大学研究基金会 | 增强的粘合剂复合物凝聚层和其制备和使用方法 |
| CN103930133A (zh) * | 2011-11-13 | 2014-07-16 | 桑那瑞斯公司 | 原位可交联的聚合物组合物及其方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4532134A (en) * | 1981-04-06 | 1985-07-30 | Malette William Graham | Method of achieving hemostasis, inhibiting fibroplasia, and promoting tissue regeneration in a tissue wound |
| US5502042A (en) * | 1994-07-22 | 1996-03-26 | United States Surgical Corporation | Methods and compositions for treating wounds |
| JP4159682B2 (ja) * | 1998-12-22 | 2008-10-01 | 株式会社クラレ | 止血材 |
| US7371403B2 (en) * | 2002-06-14 | 2008-05-13 | Providence Health System-Oregon | Wound dressing and method for controlling severe, life-threatening bleeding |
| GB201004072D0 (en) * | 2010-03-11 | 2010-04-28 | Turzi Antoine | Process, tube and device for the preparation of wound healant composition |
-
2017
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-
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989004657A1 (en) * | 1987-11-16 | 1989-06-01 | Damon Biotech, Inc. | Sustained release of encapsulated molecules |
| WO1999056798A1 (en) * | 1998-05-07 | 1999-11-11 | Genzyme Corporation | Compositions comprising hemostatic compounds and bioabsorbable polymers |
| WO2008076598A1 (en) * | 2006-12-13 | 2008-06-26 | Honeywell International Inc. | Combination of inorganic hemostatic agents with other hemostatic agents |
| US8110208B1 (en) * | 2009-03-30 | 2012-02-07 | Biolife, L.L.C. | Hemostatic compositions for arresting blood flow from an open wound or surgical site |
| CN103025360A (zh) * | 2010-05-24 | 2013-04-03 | 犹他大学研究基金会 | 增强的粘合剂复合物凝聚层和其制备和使用方法 |
| CN103930133A (zh) * | 2011-11-13 | 2014-07-16 | 桑那瑞斯公司 | 原位可交联的聚合物组合物及其方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| KATARINA ET AL.: "In vitro and in vivo evaluation of chemically modified degradable starch microspheres for topical haemostasis", 《ACTA BIOMATERIALIA》 * |
| 高峰主编: "《药用高分子材料学》", 31 October 2014, 华东理工大学出版社 * |
| 黄萍等主编: "《手术室护理技术指导》", 30 April 2015, 云南科技出版社 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112675356A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-20 | 湖南工业大学 | 长期保存的止血组合物及其制备方法和长期保存的抗菌止血混合物的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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