CN112675356A - 长期保存的止血组合物及其制备方法和长期保存的抗菌止血混合物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种长期保存的止血组合物,通过木棉多糖引入离子霉素钙得到;其加入的配方的重量百分比如下:木棉多糖:5%‑10%,乙醇:75%‑87%,离子霉素:5%‑10%,钙化剂:3%‑5%。通过对木棉根多糖的提取,有效避免了现有的木棉产品的杂质含量多,有效物含量不能控制,止血效果不佳等问题。将木棉多糖中引入离子霉素钙,将木棉的止血作用结合有效的可移动的钙离子载体。因为钙离子(Ca2+)可与体内的凝血因子发生反应,激活凝血系统,实现活性止血机制,提高止血效果;可以使整个止血组合物的止血效果达到最佳。同时,提供上述长期保存的止血组合物的制备方法,其制备方法操作简单,可操作性强,适于大规模生产及推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物技术领域,尤其涉及一种长期保存的止血组合物及其制备方法和长期保存的抗菌止血混合物的制备方法。
背景技术
有研究表明,当受伤出血的伤者的血量损失达20%,约800mL时就有可能出现休克的症状,甚至会危及生命。如何快速解决大出血的问题,已经越来越引起人们的重视。尤其是在意外事故造成的大创面损伤或动脉损伤,血压大,血液喷射而出,短时间内大量出血,抢救成功率低。如何避免因出血导致的休克或死亡,已经成为摆在科学家面前的一道难题。在出血后的黄金1分钟内完成止血,减少失血性休克的发生率,争取时间等待救援,可大大提高患者的生还几率。
但是现有的止血材料有以下问题:止血不够迅速,不能够在2分内止住大动脉出血;极少具有促进组织愈合功能,也没有抗菌功能。
经检索,微孔多糖材料中孔淀粉止血材料具有特殊的多孔结构和较大的比表面积,表面载有丰富的亲水性羟基,可快速吸收血液中的水分,降低创口部位的液体体积,加速血液浓缩,增大血液中有形成分的浓度,减缓血流;同时,吸水后的多孔淀粉粘度变强,形成的血栓对血管具有较强的压迫作用,有利于封闭血管末端,快速达到止血。已经有微孔淀粉和微孔壳聚糖止血材料的大量报道。与淀粉和壳聚糖多糖止血材料类似,木棉多糖也具有止血效果,木棉根清热利湿,收敛止血。《中药新编》:木棉根皮,收敛止血,治赤痢。
经检索,现有技术中所用的止血材料是直接把兰科植物木棉块茎干品磨成粉末使用,其缺点是不加提取,杂质含量多,有效物含量不能控制,使用不方便。并且止血材料的不能长期保存,不利于家居备用药品的储存。
发明内容
本发明的目的在于弥补上述现有技术中的不足之处,提供一种长期保存的止血组合物,通过对木棉根多糖的提取,有效避免了现有的木棉产品的杂质含量多,有效物含量不能控制,止血效果不佳等问题。将木棉多糖中引入离子霉素钙,将木棉的止血作用结合有效的可移动的钙离子载体。因为钙离子(Ca2+)可与体内的凝血因子发生反应,激活凝血系统,实现活性止血机制,提高止血效果;可以使整个止血组合物的止血效果达到最佳。
同时,提供上述长期保存的止血组合物的制备方法,其制备方法操作简单,可操作性强,适于大规模生产及推广。
并且本申请还提供了一种长期保存的抗菌止血混合物的制备方法,在止血的同时还有效抗菌,防止细菌感染,最重要的是本抗菌止血混合物可以长期保存,在室温保存2年止血效果仍然在30秒以内。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现:
提供一种长期保存的止血组合物,通过木棉多糖引入离子霉素钙得到;其加入的配方的重量百分比如下:
木棉多糖:5%-10%,
乙醇:75%-87%,
离子霉素:5%-10%,
钙化剂:3%-5%。
进一步地,提供上述述的长期保存的止血组合物的制备方法,将所述木棉多糖中加入离子霉素和钙化剂,按上述含量的酒精为介质,于磁力加热搅拌器中搅拌转速150-200r/min,维持温度在30-45℃,反应1-2h后,得木棉多糖复合离子霉素钙沉淀,经洗涤、过滤和干燥后粉碎即得。
进一步地,所述离子霉素钙的制备方法是将所述木棉多糖和离子霉素按照质量比1:1配方量加料,加入盛有配方量90%的乙醇的反应器中,边搅拌边加木棉多糖和离子霉素将其均匀地分散于混合溶剂中,形成均匀溶液;再加入由钙化剂粉末与乙醇配方量的10%调成的悬浮液,并在室温下持续反应1小时。
进一步地,所述木棉多糖复合离子霉素钙的洗涤为分别用75%酒精溶液洗涤,离心两次,每次在8000-10000r/min,离心20分钟,然后在80℃下干燥。
进一步地,所述木棉多糖的制备方法为:将新鲜木棉根洗净,烘干后粉碎,用无水乙醚脱脂后烘干;以无水乙醇为溶剂,加入酶酶解30分钟后,加热至100℃灭酶5min;离心8000-10000r/min分离,离心20分钟,取上清液,保存于恒温冰箱中备用。
进一步地,所述酶选用漆酶为原料。
同时还提供了一种长期保存的抗菌止血混合物的制备方法,采用上述止血组合物,其步骤为:取木棉多糖复合离子霉素钙,再通过物理共混方法加入抗菌药,研磨分散20-30分钟;抗菌药的加入量为抗菌止血混合物总质量的3-5%。
进一步地,所述抗菌药为环丙沙星,头孢吡肟、头孢匹罗、奈替米星、阿米卡星一种或多种。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1、本发明长期保存的止血组合物在整个制备过程中,酶法提取木棉多糖使得木棉根的植物细胞壁及组织能够快速降解,具有反应温度温和,易于控制等诸多优点。
2、本发明长期保存的止血组合物制备离子霉素钙,离子霉素它可与二价阳离子特别是钙离子特异性结合,成为1:1的复合物,形成一个有效的可移动的钙离子载体。作为人体的第四号凝血因子,钙离子(Ca2+)可与体内的凝血因子发生反应,激活凝血系统,实现活性止血机制,提高止血效果。
3、本发明长期保存的止血组合物,通过对木棉根多糖的提取,有效避免了现有的木棉产品的杂质含量多,有效物含量不能控制,止血效果不佳等问题。将木棉多糖中引入离子霉素钙,将木棉的止血作用结合有效的可移动的钙离子载体。因为钙离子(Ca2+)可与体内的凝血因子发生反应,激活凝血系统,实现活性止血机制,提高止血效果;可以使整个止血组合物的止血效果达到最佳。
同时,提供上述长期保存的止血组合物的制备方法,其制备方法操作简单,可操作性强,适于大规模生产及推广。
并且本申请还提供了一种长期保存的抗菌止血混合物的制备方法,在止血的同时还有效抗菌,防止细菌感染,最重要的是本抗菌止血混合物可以长期保存,在室温保存2年止血效果仍然在30秒以内。
附图说明
图1为实施例1所述长期保存的止血组合物的体外凝血效果图。
图2为实施例1所述长期保存的止血组合物对动物肝脏的止血效果图。
图3为本发明所述长期保存的抗菌止血混合物的抗菌实验组图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明,本发明实施例使用的各种原料均可以通过常规市购得到,或根据本领域的常规方法制备得到,所用设备为实验常用设备。除非另有定义或说明,本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练人员所熟悉的意义相同。
长期保存的止血组合物的制备方法,通过木棉多糖引入离子霉素钙得到;其加入的配方的重量百分比如下:
木棉多糖:5%-10%,
乙醇:75%-87%,
离子霉素:5%-10%,
钙化剂:3%-5%。
制得的1g木棉多糖中加入离子霉素1g,3-5%的钙化剂,以75-87%的酒精为介质,于磁力加热搅拌器中搅拌,氨水调pH为9.5,维持温度在30-45℃,反应1-2h后取出,分别用75%酒精溶液洗涤,离心两次,然后在80℃下干燥,粉碎过筛得木棉多糖复合离子霉素钙,下面以不同的钙化剂氯化钙﹑乳酸钙﹑葡萄糖酸钙做实施例说明。
实施例1
本实施例的长期保存的止血组合物,其钙化剂为氯化钙,加入的配方组份及其重量百分比为:
木棉多糖:5%,
乙醇:87%,
离子霉素:5%,
氯化钙:3%。
除另有说明外,均按配方量加料,木棉多糖中加入离子霉素和钙化剂,按上述含量的酒精为介质,于磁力加热搅拌器中搅拌,转速200r/min,维持温度在30℃,反应2h后,得木棉多糖复合离子霉素钙沉淀,木棉多糖复合离子霉素钙的洗涤为分别用75%酒精溶液洗涤,离心两次,每次在8000-10000r/min,离心20分钟,然后在80℃下干燥、过滤和干燥后粉碎即得。
具体地,离子霉素钙的制备方法是将木棉多糖和离子霉素按照质量比1:1配方量加料,本实施例中木棉多糖和离子霉素各取1g,加入盛有配方量90%的乙醇的反应器中,边搅拌边加木棉多糖和离子霉素将其均匀地分散于混合溶剂中,形成均匀溶液;再加入由钙化剂粉末与乙醇配方量的10%调成的悬浮液,并在室温下持续反应1小时。
其中,木棉多糖的制备方法为:将新鲜木棉根洗净,烘干后粉碎,用无水乙醚脱脂后烘干;以无水乙醇为溶剂,加入漆酶酶解30分钟后,加热至100℃灭酶5min;离心分离8000-10000r/min,离心20分钟,取上清液,保存于恒温冰箱中备用。
实施例2
本实施例的长期保存的止血组合物,其钙化剂为葡萄糖酸钙,加入的配方组份及其重量百分比为:
木棉多糖:8%,
乙醇:80%,
离子霉素:8%,
葡萄糖酸钙:4%。
除另有说明外,均按配方量加料,木棉多糖中加入离子霉素和钙化剂,按上述含量的酒精为介质,于磁力加热搅拌器中搅拌,转速200r/min,维持温度在35℃,反应2h后,得木棉多糖复合离子霉素钙沉淀,木棉多糖复合离子霉素钙的洗涤为分别用75%酒精溶液洗涤,离心两次,每次在8000-10000r/min,离心20分钟,然后在80℃下干燥、过滤和干燥后粉碎即得。
离子霉素钙的制备方法是将木棉多糖和离子霉素按照质量比1:1配方量加料,本实施例中木棉多糖和离子霉素各取1g,加入盛有配方量90%的乙醇的反应器中,边搅拌边加木棉多糖和离子霉素将其均匀地分散于混合溶剂中,形成均匀溶液;再加入由钙化剂粉末与乙醇配方量的10%调成的悬浮液,并在室温下持续反应1小时。
其中,木棉多糖的制备方法为:将新鲜木棉根洗净,烘干后粉碎,用无水乙醚脱脂后烘干;以无水乙醇为溶剂,加入漆酶酶解30分钟后,加热至100℃灭酶5min;离心分离8000-10000r/min,离心20分钟,取上清液,保存于恒温冰箱中备用。
实施例3
本实施例的长期保存的止血组合物,其钙化剂为乳酸钙,加入的配方组份及其重量百分比为:
木棉多糖:10%,
乙醇:75%,
离子霉素:10%,
乳酸钙:5%。
除另有说明外,均按配方量加料,木棉多糖中加入离子霉素和钙化剂,按上述含量的酒精为介质,于磁力加热搅拌器中搅拌,转速180r/min,维持温度45℃,反应1.5h后,得木棉多糖复合离子霉素钙沉淀,木棉多糖复合离子霉素钙的洗涤为分别用75%酒精溶液洗涤,离心两次,每次在8000-10000r/min,离心20分钟,然后在80℃下干燥、过滤和干燥后粉碎即得。
离子霉素钙的制备方法是将木棉多糖和离子霉素按照质量比1:1配方量加料,本实施例中木棉多糖和离子霉素各取1g,加入盛有配方量90%的乙醇的反应器中,边搅拌边加木棉多糖和离子霉素将其均匀地分散于混合溶剂中,形成均匀溶液;再加入由钙化剂粉末与乙醇配方量的10%调成的悬浮液,并在室温下持续反应1小时。
其中,木棉多糖的制备方法为:将新鲜木棉根洗净,烘干后粉碎,用无水乙醚脱脂后烘干;以无水乙醇为溶剂,加入漆酶酶解30分钟后,加热至100℃灭酶5min;离心分离8000-10000r/min,离心20分钟,取上清液,保存于恒温冰箱中备用。
实施例4
本实例的长期保存的抗菌止血混合物的制备方法,使用了实施例1的止血组合物,其步骤为:取木棉多糖复合离子霉素钙加入到研磨钵中,再通过物理共混加入抗菌药,研磨分散20-30分钟;抗菌药的加入量为抗菌止血混合物总质量的3-5%;其中,抗菌药为环丙沙星,头孢吡肟、头孢匹罗、奈替米星、阿米卡星一种或多种。本实施例中选用环丙沙星,加入量为抗菌止血混合物总质量的5%。
将本实例的长期保存的抗菌止血混合物进行以下实验测试。
体外止血测试实验:于8只新西兰兔耳中央动脉抽取6mL动脉血,分别加入2mL兔血于上述试管中,混合均匀后水浴,然后加入50mg的木棉多糖复合离子霉素钙止血粉,每隔5s倾斜玻璃管,至血液凝结不流动,记录凝血时间。测试表明50mg止血粉在15秒既可以使血液凝固。其中图1为体外凝血效果图。
动物止血实验:兔耳缘静脉止血模型30只新西兰大白兔被随机分为5组,每组的数量为6只,待测材料包括本实施例的长期保存的抗菌止血混合物和云南白药(云南白药有限公司)。将大白兔置于手术台上,通过左耳缘静脉注射浓度为0.3%的戊巴比妥钠(Pelltobarbitalum Natricum,PN)(25mg/kg,下同)溶液,并剃去右耳耳面上的兔毛,待动物麻醉后,用手术刀在右耳静脉处作横切面伤1:3,当创伤流血后,立即将样品洒于创伤出,并采用纱布进行轻微的施压,止血完成后用纱布轻拭去创伤表面的材料,并记录止血完成时间。得出结果本实施例方法制备的长期保存的抗菌止血混合物的止血效果明显优于云南白药的效果。经过湖南省药物评价实验中心测试,0.03g长期保存的抗菌止血混合物平均止血时间为20秒。
取15只小鼠,分成三组对小鼠鼠肝损伤出血模型止血,其结果如表1。
表1
图2中a)为不加长期保存的抗菌止血混合物的肝脏出血图,b)为加了本实施例的长期保存的抗菌止血混合物的肝脏图片。
抗菌性能测试:
抗菌止血混合物为抗菌实验材料,以大肠杆菌(E.coli,ATCC 8099)作为实验菌株,采用杀菌实验对材料的抗菌性能进行评估。将在37℃培养箱内中培养24小时的大肠杆菌,经PBS溶液稀释浓度104cfu/ml,然后加入0.05g的抗菌止血混合物接触20min,接种到固体培养基上,然后将其放在37℃培养箱中培养12h后,目数培养板上得菌落数目。根据抗菌材料的标准规定,抗菌率在90%以上的抗菌材料具有抗细菌作用,实施例4的抗菌止血混合物抗菌率明显在90%以上,具有明显的抗菌效果。直观效果见图3所示,其中a)为未添加抗菌止血混合物的对照组,b)为添加了实施例4的抗菌止血混合物的效果图。
Claims (8)
1.一种长期保存的止血组合物,其特征在于,通过木棉多糖引入离子霉素钙得到;其加入的配方的重量百分比如下:
木棉多糖:5%-10%,
乙醇:75%-87%,
离子霉素:5%-10%,
钙化剂:3%-5%。
2.一种权利要求1所述的长期保存的止血组合物的制备方法,其特征在于,将所述木棉多糖中加入离子霉素和钙化剂,按上述含量的酒精为介质,于磁力加热搅拌器中搅拌,转速150-200r/min,维持温度在30-45℃,反应1-2h后,得木棉多糖复合离子霉素钙沉淀,经洗涤、过滤和干燥后粉碎即得。
3.根据权利要求2所述长期保存的止血组合物的制备方法,其特征在于,所述离子霉素钙的制备方法是将所述棉多糖和离子霉素按照质量比1:1配方量加料,加入盛有配方量90%的乙醇的反应器中,边搅拌边加木棉多糖和离子霉素将其均匀地分散于混合溶剂中,形成均匀溶液;再加入由钙化剂粉末与乙醇配方量的10%调成的悬浮液,并在室温下持续反应1小时。
4.根据权利要求2所述长期保存的止血组合物的制备方法,其特征在于,所述木棉多糖复合离子霉素钙的洗涤为分别用75%酒精溶液洗涤,离心两次,每次在8000-10000r/min,离心20分钟,然后在80℃下干燥。
5.根据权利要求2所述长期保存的止血组合物的制备方法,其特征在于,所述木棉多糖的制备方法为:将新鲜木棉根洗净,烘干后粉碎,用无水乙醚脱脂后烘干;以无水乙醇为溶剂,加入酶酶解30分钟后,加热至100 ℃灭酶5min;离心分离8000-10000r/min,离心20分钟,取上清液,保存于恒温冰箱中备用。
6.根据权利要求5所述长期保存的止血组合物的制备方法,其特征在于,所述酶选用漆酶为原料。
7.一种长期保存的抗菌止血混合物的制备方法,其特征在于,采用权利要求1~6任意一项所述止血组合物,其步骤为:取木棉多糖复合离子霉素钙加入到研磨钵中,再通过物理共混加入抗菌药,研磨分散20-30分钟;抗菌药的加入量为抗菌止血混合物总质量的3-5%。
8.根据权利要求7所述长期保存的抗菌止血混合物的制备方法,其特征在于,所述抗菌药为环丙沙星,头孢吡肟、头孢匹罗、奈替米星、阿米卡星一种或多种。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20210420 |