KR101865160B1 - 조직 접착용 시트 제제 - Google Patents

Abstract

시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 성분이 고정되고, 피브리노겐 성분이 고정되어 있지 않은 다른 쪽 면에 트롬빈 성분이 고정되고, 또한 양 성분이 서로 분리해서 고정화되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제, 및 그 제조방법.

Description

조직 접착용 시트 제제{SHEET PREPARATION FOR TISSUE ADHESION}

본 발명은 피브리노겐 및 트롬빈을 주성분으로 함유하는 시트형 지지체로 구성되는 시트 제제, 및 그 조제방법에 관한 것이다. 상세하게는, 시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 성분이, 다른 한쪽 면에 트롬빈 성분이 고정화되어 있는 것을 특징으로 하는 조직 접착 등에 사용되는 시트 제제, 및 그 조제방법에 관한 것이다.

피브리노겐은 소위 응고 캐스케이드의 최종단계에 존재하는 매우 중요한 응고 인자이다. 피브리노겐은 예를 들면, 손상 후의 응고계의 활성화에 있어서, 트롬빈에 의해 그 가용성 형태로부터, 지혈 및 창상치유에 중요한 기여를 하는 불용성의 피브린으로 변환된다.

피브리노겐은 지혈 및 창상치유에 대해서 중요성을 가지고, 예를 들면 선천성 및 후천성의 피브리노겐 결핍증에 있어서의 보충요법으로 정맥투여 제제로서 임상적으로 사용되고, 혈액 중의 피브리노겐 농도를 높이는 것에 의해서 치명적인 출혈을 저지한다. 또, 최근, 피브리노겐과 트롬빈으로 구성되는 피브린 접착제는 외과수술에 있어서 간장 또는 비장과 같은 연부 기관의 봉합 대용의 접착제로서, 또는 봉합 보조제로서 사용되고 있는 동시에, 기타 폭넓은 임상 현장에서 응용되고 있다.

이러한 피브린 접착제는 상처 또는 조직 표면으로의 접착 능력을 가지고, 접착 부위 또는 접합된 상처의 인장강도를 높이는 동시에, 생체 내에서 완전하게 흡수되는 것으로, 상처의 치유를 촉진하는 특성을 갖는다.

피브린 접착제는 용액상태에서는 안정적이라고는 할 수 없고, 냉동 보존액 또는 동결 건조분말의 형태로 제제화된 것이, 의료현장에서 이용되고 있다. 따라서 입수 가능한 시판 중인 제제는 적용 전에 해동하거나, 동결 건조품으로 재수화할 필요가 있고, 어느 쪽의 방법으로도 그 조제 때문에 시간을 필요로 하게 된다. 상세하게는, 동결 건조품으로부터 조제하는 피브린 접착제는 피브리노겐 동결 건조분말, 피브리노겐 용해액, 트롬빈 동결 건조분말, 트롬빈 용해액으로 구성되고, 동결 건조분말의 용해 조작이나 피브리노겐 용액과 트롬빈 용액의 도포준비ㆍ혼합조작 등에 시간을 필요로 하는 경우, 특히 긴급을 필요로 하는 외과수술에 있어서는 환자에게 악영향을 미치는 것도 걱정된다.

또, 피브린 접착제로서의 접착작용을 충분하게 얻기 위해서는, 피브리노겐을 고농도로 용해시키는 것이 필요하며, 응고할 수 있는 피브리노겐 농도는 고농도일수록 유리하다. 그런데, 이러한 고농도 피브리노겐 용액을 피브리노겐 동결 건조물로부터 조제하기 위해서는 상당한 시간을 필요로 하고, 긴급을 필요로 하는 외과수술에서의 사용에 적합하지 않다는 문제가 있다.

트롬빈이 고정화된 생체 흡수성 시트와 피브리노겐 용액으로 구성되는 시트 제제가 보고되고 있다(특허문헌 1, 특허문헌 2). 본 시트 제제는 외과수술의 현장에서 피브리노겐 용액에 트롬빈 고정화 시트를 침지시킨 후에, 수술 부위에 적용되는 것으로, 뛰어난 지혈효과나 접착효과가 인정되는 것이다. 그렇지만, 트롬빈은 시트에 미리 고정화되어 있지만, 피브리노겐 용액을 조제하기 위한 시간이 필요하기 때문에, 여전히 긴급사용을 가능하게 하는 것은 아니다.

따라서, 임상현장에서 요구되고 있는 약제는 (1)높은 접착ㆍ지혈력을 가지는 약제, (2)조제시간이 불필요한 제형, 즉 피브리노겐과 트롬빈이 일체화된 시트 제제라고 할 수 있다. 일체화된 시트 제제로서 현재 임상적 사용이 인가되어 있는 제제는 말 콜라겐의 지지체에 피브리노겐과 트롬빈을 혼합 고정한 시트 제제(TachoComb(등록상표): CSL Behring사)가 있다. 그렇지만, 당해 시트 제제의 유효성은 한정적으로, 외과의를 만족시키기까지는 이르지 않고 있다. 또 당해 시트 제제의 제법은 매우 복잡하다(특허문헌 3). 따라서 임상현장에서는 긴급시의 수술에 대응할 수 있고, 또한 강력한 조직 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈력을 가지는 약제가 소망되고 있다. 또, 보다 간편한 시트 제제의 제법을 발명하는 것은, 임상현장에서 강력 또한 저렴한 조직 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈제를 공급하는 것을 가능하게 한다.

유효성분으로 피브리노겐이 고정화된 생체 흡수성 지지체, 및 유효성분으로 트롬빈이 고정화된 생체 흡수성 지지체로 구성되는 것을 특징으로 하는 2층의 지지체로 이루어지는 시트상 피브린 풀 접착제는 공지이다(특허문헌 4). 그렇지만, 당해 발명은 2층의 지지체로 구성되기 때문에, 환부로의 적용 조작이 번잡하고, 현미경을 사용한 수술 시에는 환부로의 적용이 곤란하다고 할 수 있다. 게다가, 긴급수술이나 불규칙한 출혈 시에 적용하기 어렵다.

5-100N/㎝의 범위의 탄성계수, 1-10mg/㎤의 밀도, 직경이 0.75mm보다 크고 4mm 미만, 및/또는 평균 직경이 3mm 미만인 심실의 물리적 특성의 적어도 하나를 가지는 담체, 및 그 담체에 고체 피브리노겐 및 고체 트롬빈이 고정된 고체 조성물은 공지이다(특허문헌 5). 그렇지만, 당해 발명은 시트 제제가 아니기 때문에, 압박해서 사용하는 것이 어렵다. 동시에 인장강도가 약하고, 조직 폐쇄력이 부족하다. 또, 환부에 적용할 때, 애플리케이터를 사용하지 않으면 안되고, 조작이 번잡하다. 또 담체에 고체 피브리노겐과 고체 트롬빈을 고정함으로써， 매트릭스 내에서 순식간에 2성분이 반응해서 피브린을 형성해 버리어, 적용해야 할 조직과의 접착이 불충분하게 된다고 할 수 있다. 높은 접착력을 발휘하기 위해서는 조직 접착 부위에 피브리노겐이 침투한 상태에서 트롬빈과 반응해서 겔화하는 것이 중요하다.

국재공개 WO2004/064878호 국재공개 WO2005/113030호 일본 공개특허공보 제2004-520124호 일본 공개특허공보 제2010-69031호 일본 공개특허공보 제2007-190399호

이러한 상황 하, 본 발명의 과제는 (1)높은 접착력ㆍ지혈력을 가지는 약제, (2)조제 시간이 불필요한 제형, (3)제법이 간편하고, 또한 저렴한 약제, 즉 피브리노겐과 트롬빈이 일체화된 시트 제제, 및 그 제조방법을 제공하는 것에 있다. 더 구체적으로는, 현재 임상적 사용이 인가되어 있는 제제와 비교해서, 더욱 강력한 조직 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈력을 발휘할 수 있고, 또한 저렴한 시트 제제, 및 그 제조방법을 제공하는 것에 있다.

그래서, 본원발명자 들은 상기한 문제를 감안해서 예의 검토한 결과, 시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 용액을 함침ㆍ동결건조 시켜서 피브리노겐 동결 건조분말을 고정화시킨 후, 트롬빈 분말을 분산시킨 분말 분산액을 다른 쪽 면에 도포ㆍ건조해서 트롬빈 건조 분말을 고정화시키는 것에 의해, 피브리노겐 성분과 트롬빈 성분이 일체적으로 고정된 시트 제제가 상기 특성을 구비하고 있는 것을 발견했다. 당해 시트 제제는 피브리노겐을 동결 건조분말로서 고정함으로써, 시트형 지지체의 고정면에 있어서, 단위면적 당에 고농도로 피브리노겐을 고정화시키고 있다. 그 때문에 당해 시트 제제는 기존제제보다도 뛰어난 조직 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈효과를 발휘한다. 이하, 상세하게 본 발명에 대해서 설명한다.

본 발명은 이하의 형태를 포함한다.

[1] 시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 성분이 고정되고, 피브리노겐 성분이 고정되어 있지 않은 다른 쪽 면에 트롬빈 성분이 고정되고, 또한 양 성분이 서로 분리해서 고정화되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[2] 상기 [1]에서, 해당 시트형 지지체가 적어도 두께 0.3mm의 시트형 지지체인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[3] 상기 [1] 또는 [2]에서, 해당 시트형 지지체가 폴리글리콜산, 폴리락트산, 폴리카프로락톤, 폴리글리세롤세바스산, 폴리하이드록시알칸산 및 폴리부틸렌숙시네이트, 및 이것들의 공중합체 및 유도체로 이루어지는 그룹에서 선택되는 생체 흡수성 재료보다 제작되는 시트형 지지체인 시트 제제.

[4] 상기 [3]에서, 해당 시트형 지지체가 폴리글리콜산을 재료로 해서 제작되는 시트형 지지체인시트 제제.

[5] 상기 [1] 내지 [4] 중 어느 하나에서, 해당 시트형 지지체가 생체 흡수성 재료를 사용해서 편직, 직조된 편물, 직물을 니들 펀칭해서 제조된 부직포로 이루어지는 시트형 지지체인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[6] 상기 [1] 내지 [5] 중 어느 하나에서, 해당 피브리노겐 성분이 피브리노겐 동결 건조분말인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[7] 상기 [6]에서, 해당 피브리노겐 동결 건조분말이 피브리노겐 용액을 시트형 지지체의 한쪽 면에 도포 또는 함침시킨 후, 동결건조시킨 피브리노겐 동결 건조분말인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[8] 상기 [1] 내지 [7] 중 어느 하나에서, 해당 피브리노겐 성분이 시트형 지지체의 고정면의 표면적당 피브리노겐이 적어도 1.5mg/㎠로 고정되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[9] 상기 [1] 내지 [8] 중 어느 하나에서, 해당 피브리노겐 용액이 1%∼15%(w/v) 피브리노겐이 포함되는 피브리노겐 용액인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[10] 상기 [1] 내지 [9] 중 어느 하나에서, 해당 트롬빈 성분이 트롬빈 분말인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[11] 상기 [10]에서, 해당 트롬빈 분말이 트롬빈 분말을 용매 중에 분산시킨 분말 분산액을 피브리노겐 성분이 고정되어 있지 않은 다른 쪽 면에 도포한 후, 건조시킨 트롬빈 분말인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[12] 상기 [11]에서, 해당 용매가 알코올류인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[13] 상기 [12]에서, 해당 알코올류가 에탄올, 메탄올, 이소프로필알코올, 1-부탄올, 2-부탄올, 이소부틸알코올, 이소펜틸알코올로 이루어지는 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[14] 상기 [1] 내지 [14] 중 어느 하나에서, 해당 알코올류가 에탄올인 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[15] 상기 [1] 내지 [14] 중 어느 하나에서, 해당 트롬빈 성분이 시트형 지지체의 고정면의 표면적당 트롬빈이 적어도 0.28U/㎠로 고정되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[16] 상기 [1] 내지 [15] 중 어느 하나에서, 혈액응고 제XIII 인자, 아프로티닌, 알부민, 염화칼슘, 비이온 계면활성제, 각종 아미노산로 이루어지는 그룹에서 선택되는 적어도 1개를 포함하는 것을 특징으로 하는 시트 제제.

[17] 상기 [1] 내지 [16] 중 어느 하나에서, 시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 성분을 고정하고, 피브리노겐 성분이 고정되어 있지 않은 다른 쪽 면에 트롬빈 성분을 고정하는 것을 특징으로 하는 시트 제제의 제조방법.

[18](A) 시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 용액을 도포 또는 함침시킨 후, 동결건조시켜서 피브리노겐 동결 건조분말을 고정화시키는 공정, 및

(B) 트롬빈 분말 분산액을 시트형 지지체의 다른 쪽 면에 도포시킨 후, 건조시켜서 트롬빈 분말을 고정화시키는 공정

으로 이루어지고, 피브리노겐 성분과 트롬빈 성분이 별도로 면에 분리해서 고정화되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제의 제조방법.

[19] 상기 [18]에서, 해당 피브리노겐 용액이 시트형 지지체의 트롬빈 분말이 고정화되는 다른 쪽 면에 도달하지 않는 액량의 피브리노겐 용액인 것을 특징으로 하는 시트 제제의 제조방법.

[20] [1] 내지 [16] 중 어느 하나에 기재된 시트 제제를 사용하는 것을 포함하는 지혈방법.

본 발명에 따르면, 피브리노겐 동결건조 시트에 트롬빈 분말을 고정한 시트 제제, 및 그 조제방법이 제공된다. 본 발명의 시트 제제는,

(1) 기존제제보다도 뛰어난 조직 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈효과를 발휘할 수 있다;

(2) 기존제제에는 형성 할 수 없는 γ다이머를 형성할 수 있고, 피브린 응괴의 물리적 강도와 안정성을 높일 수 있다;

(3) 조제시간이 불필요해서 긴급 시에 사용 가능한 편리성의 높은 제제이다;

(4) 재수화가 우수하다;

(5) 생체 흡수성이다;

(6) 유연성ㆍ신축성이 우수하다;

(7) 유효성분의 고정이 우수하다;

(8) 제법이 간편해서, 저렴하게 제조할 수 있다, 는 뛰어난 효과를 가지는 것이다.

도 1은 본 발명의 시트 제제의 접착력 평가시험의 결과를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 시트 제제의 접착력 평가시험의 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명의 시트 제제의 접착력 평가시험의 결과를 나타낸다.
도 4는 본 발명의 시트 제제의 SDS-PAGE의 결과를 나타낸다.
도 5는 본 발명의 시트 제제의 지혈력 평가시험의 결과를 나타낸다.

본 발명의 시트 제제는 시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 성분이 고정되고, 피브리노겐 성분이 고정되어 있지 않은 다른 쪽 면에 트롬빈 성분이 고정되고, 또한 양 성분이 서로 분리해서 고정화되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제이다.

상기 피브리노겐 성분은 피브리노겐을 함유하는 건조 분말, 동결 건조분말, 겔일 수 있고, 바람직하게는 동결 건조분말이다. 피브리노겐 성분에는 피브리노겐 이외에, 혈액응고 제XIII 인자, 아프로티닌, 알부민, 염화나트륨, 시트르산 3나트륨, 폴리솔베이트80 등의 비이온 계면활성제, 각종 아미노산, 글리세린 등을 포함할 수도 있다.

상기 피브리노겐 성분을 고정하는 방법은 피브리노겐 용액을 시트형 지지체의 한쪽 면에 도포 또는 함침시킨 후에 동결건조시켜서, 피브리노겐 동결 건조분말을 고정화 시킬 수도 있고, 피브리노겐 동결 건조분말을 시트형 지지체의 한쪽 면에 직접 살포할 수도 있다. 특히, 피브리노겐 용액을 시트형 지지체에 함침시킨 후, 동결건조시켜서 고정하는 방법이 바람직하다. 그때에, 피브리노겐 성분을 다른 쪽 면에 도포, 침윤 또는 표출시켜서는 안된다.

상기 시트형 지지체에의 피브리노겐 성분의 고정은 시트형 지지체의 고정면의 표면적당 피브리노겐이 적어도 1.5mg/㎠인 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 1.5mg/㎠∼30mg/㎠, 더욱 바람직하게는 1.5mg/㎠∼15mg/㎠, 더욱 바람직하게는 1.5mg/㎠∼12mg/㎠, 더욱 바람직하게는 3mg/㎠∼12mg/㎠, 더욱 바람직하게는 6mg/㎠∼12mg/㎠이다. 시트형 지지체에 고정하는 피브리노겐의 양은, 시트형 지지체의 두께나 피브리노겐 용액의 농도에 따라서 적당하게 변경해도 상관없다.

상기 피브리노겐 용액은 1%∼15%(w/v) 피브리노겐이 포함되는 용액이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 1%∼12%(w/v), 더욱 바람직하게는 2%∼12%(w/v), 더욱 바람직하게는 3%∼12%(w/v), 더욱 바람직하게는 3%∼6%(w/v)이다. 피브리노겐 용액의 농도는 시트형 지지체의 두께나 시트에 고정하는 피브리노겐의 양에 따라서 적당하게 변경해도 상관없다.

상기 트롬빈 성분은 트롬빈을 함유하는 건조분말, 동결 건조분말, 겔일 수 있고, 바람직하게는 건조분말이다. 트롬빈 성분에는 트롬빈 이외에, 알부민, 염화나트륨, 시트르산 3나트륨, 폴리솔베이트80 등의 비이온 계면활성제, 각종 아미노산, 글리세린 등을 포함할 수도 있다.

상기 트롬빈 성분을 고정하는 방법은 트롬빈 분말을 분산시킨 분말 분산액을 시트형 지지체에 도포한 후, 건조시킬 수도 있고, 트롬빈 분말을 시트형 지지체에 직접 살포할 수도 있다. 특히, 트롬빈 분말을 분산시킨 분말 분산액을 시트형 지지체에 도포한 후, 건조시켜서 고정하는 방법이 바람직하다.

상기 시트형 지지체에의 트롬빈 분말의 도포량은 시트형 지지체의 고정면의 표면적당 트롬빈이 적어도 0.28U/㎠인 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 0.28∼60U/㎠, 더욱 바람직하게는 0.28∼30U/㎠, 더욱 바람직하게는 0.28∼15U/㎠, 더욱 바람직하게는 0.28∼13.8U/㎠, 더욱 바람직하게는 1.38∼13.8U/㎠, 더욱 바람직하게는 4.6∼13.8U/㎠이다. 시트형 지지체에 고정하는 트롬빈의 양은 시트형 지지체에 고정하는 피브리노겐의 양에 따라서 적당하게 변경해도 상관없다.

상기 트롬빈 분말 분산액은 유기용매를 주용매로 하는 것이 바람직하다. 특히, 에탄올, 메탄올, 이소프로필알코올, 1-부탄올, 2-부탄올, 이소부틸알코올, 이소펜틸알코올 등의 알코올 용매, 또는 인체에 영향을 주지 않는 종류에서의 저비점 용매를 주용매로 하는 것이 바람직하다. 인체에 대한 안전성을 고려했을 경우에는, 에탄올을 주용매로 하는 것이 바람직하다.

상기 트롬빈 분말을 분산시킨 트롬빈 분말 분산액은 5.6U/㎖∼1380U/㎖ 트롬빈, 0.064mg/㎖∼64mg/㎖ 염화칼슘을 포함하는 것이 바람직하다. 특히, 27.6U/㎖∼276U/㎖ 트롬빈, 0.64mg/㎖∼6.4mg/㎖ 염화칼슘을 포함하는 것이 바람직하다. 트롬빈 분말의 농도는 시트형 지지체의 두께나 시트형 지지체에 고정하는 트롬빈의 양에 따라서 적당하게 변경해도 상관없다.

상기 피브리노겐 성분 및 트롬빈 성분을 시트형 지지체에 고정화시키는 순서는 피브리노겐 성분과 트롬빈 성분이 적용 전에 서로 접촉ㆍ반응하지 않는 한, 피브리노겐 성분을 먼저 시트형 지지체에 고정화시킨 후에 트롬빈 성분을 고정화 시킬 수 있고, 트롬빈 성분을 먼저 시트형 지지체에 고정화시킨 후에 피브리노겐 성분을 고정화시킬 수도 있다. 단, 제작방법의 간편함의 관점에서 시트형 지지체에 피브리노겐 성분을 고정화시킨 후에 트롬빈 성분을 고정화시키는 방법이 바람직하다. 구체적으로는, 시트형 지지체의 한쪽 면을 피브리노겐 용액에 침지시키고, 피브리노겐 용액을 함침시킨 후, 동결건조해서 피브리노겐 고정화 시트를 제작한다. 그 때, 피브리노겐 용액의 액량은 사용하는 시트형 지지체의 면적과 두께를 고려하고, 트롬빈 성분이 고정화되는 면에 도달하지 않는 양으로 조정할 필요가 있다. 그 후에 피브리노겐 성분이 고정화된 면의 반대측의 면에 에탄올에 분산시킨 트롬빈 분말 분산액을 도포하고 건조한다.

상기 시트형 지지체의 두께는 적어도 0.15mm인 것이 바람직하다. 추가로, 적어도 0.3mm인 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 적어도 0.4mm, 더욱 바람직하게는 적어도 0.8mm, 더욱 바람직하게는 적어도 1mm이다. 시트형 지지체의 두께의 상한은 적용조직이나 도포하는 피브리노겐 용액의 양에 따라 적당하게 변경해도 상관없다.

상기 시트형 지지체에 사용되는 생체 흡수성 재료는 지방족 폴리에스테르인 것이 바람직하다. 생체 흡수성 재료로서는 구체적으로는, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리카프로락톤, 폴리글리세롤세바스산, 폴리하이드록시알칸산, 폴리부틸렌숙시네이트 등이나, 이것들의 공중합체 및 유도체를 예시할 수 있다. 바람직하게는, 폴리글리콜산, 폴리락트산, 폴리카프로락톤, 및 그것들의 공중합체나 유도체로 이루어지는 그룹에서 선택되는 적어도 1종이다. 더욱 바람직한 것은 폴리글리콜산 및 그 유도체이다.

상기 시트형 지지체의 구조는 부직포, 스펀지상, 직포, 편물, 브레이드 및 그것들의 복합체인 것이 바람직하다. 특히, 부직포인 것이 바람직하다.

상기 부직포로서는 예를 들면, 멜트블로법, 니들펀칭법, 스판본드법, 플래시 방사법 등의 방법에 의해 제조된 부직포인 것이 바람직하다. 특히, 생체 흡수성 재료(예를 들면 폴리글리콜산)을 사용해서 편직, 직조된 편물, 직물을 니들펀칭해서 부직포화한 부직포가 바람직하다(일본 공개특허공보 제H05-18579호).

본 발명에 사용되는 피브리노겐, 트롬빈, 알부민, 아프로티닌, 혈액응고 제XIII 인자를 제조하는 방법은 특별하게 한정되지 않고, 예를 들면 인간 혈액에서 분리하는 방법 혹은 유전자 재조합 기술에 의해 제작하는 방법 등에 의해 제조할 수 있다.

이하에, 실시예를 들어서 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이것들의 예에 전혀 한정되는 것은 아니다.

실시예

실시예 1

(시트 제제의 제작방법)

시트형 지지체로서는 생체 흡수성 시트를 사용하고, 구체적인 생체 흡수성 시트로서, Neoveil 015G(등록상표)(Gunze사, 조성: 폴리글리콜산, 두께 0.15mm), Neoveil 03G(등록상표)(Gunze사, 조성: 폴리글리콜산, 두께 0.3mm), Neoveil 05G(등록상표)(Gunze사, 조성: 폴리글리콜산, 두께 0.5mm)를 사용했다.

피브리노겐 용액I는 약 12.0%(w/v) 피브리노겐, 약 90IU/㎖ 혈액응고 제XIII 인자, 1.5%(w/v) 인간 혈청알부민, 2.6%(w/v) 염화나트륨, 1.8%(w/v) 시트르산 3나트륨, 0.5%(w/v) 이소로이신, 0.7%(w/v) 글리신, 1.6%(w/v) 아르기닌 염산염, 1.2%(W/V) 글루탐산나트륨, 0.03%(w/v) 폴리솔베이트80, 1.0% 글리세린을 포함하는 pH 6.7∼6.9가 되도록 조제했다. 피브리노겐 용액II는 피브리노겐 용액I를 주사 용수로 2배로 희석한 약 6.0%(w/v)피브리노겐 용액에 글리세린을 첨가해서 1.0% 글리세린 용액으로 한 것이다. 피브리노겐 용액III은 피브리노겐 용액I를 주사 용수로 4배로 희석한 약 3.0%(w/v) 피브리노겐 용액에 글리세린을 첨가해서 1.0% 글리세린 용액으로 한 것이다. 트롬빈 동결 건조분말은 Bolheal(등록상표)(THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC RESEARCH INSTITUTE)의 트롬빈 동결 건조분말을 사용했다. 염화칼슘 분말은 염화칼슘 2수화물(Nacalai Tesque, Inc.)을 사용했다. 분말 분산액은 에탄올(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 순도: 99.5%)을 사용했다.

배양접시 상에 2.5×2.0㎝ 사이즈의 생체 흡수성 시트를 스탠딩했다. 두께 0.8mm의 시트형 지지체로서 Neoveil 03G와 Neoveil 05G를 중첩시킨 것을, 두께 0.45mm의 시트형 지지체로서 Neoveil 015G와 Neoveil 03G를 중첩시킨 것, 또는 Neoveil 015G을 3매 중첩시킨 것을, 두께 0.3mm의 시트형 지지체로서 Neoveil 03G, 또는 Neoveil 015G을 2매 중첩시킨 것을 사용했다. 발명품 A, B, J, K, L은 생체 흡수성 시트의 고정면의 표면적당 50㎕/㎠의 피브리노겐 용액I를 함침하고, 동결건조해서 피브리노겐 고정화 시트를 제작했다. 발명품 C, D는 생체 흡수성 시트의 고정면의 표면적당 100㎕/㎠의 피브리노겐 용액I를 함침하고, 동결건조해서 피브리노겐 고정화 시트를 제작했다. 발명품 E는 생체 흡수성 시트의 고정면의 표면적당 50㎕/㎠의 피브리노겐 용액III을 함침하고, 동결건조해서 피브리노겐 고정화 시트를 제작했다. 발명품F는 생체 흡수성 시트의 고정면의 표면적당 100㎕/㎠의 피브리노겐 용액III을 함침하고, 동결건조해서 피브리노겐 고정화 시트를 제작했다. 발명품G는 생체 흡수성 시트의 고정면의 표면적당 50㎕/㎠의 피브리노겐 용액 II를 함침하고, 동결건조해서 피브리노겐 고정화 시트를 제작했다. 각 피브리노겐 고정화 시트에 대해서, 에탄올에 트롬빈 동결 건조분말과 염화칼슘 분말을 분산시킨 분말 분산액을, 피브리노겐 고정면과는 반대면에 도포해서 건조시켰다. 트롬빈 동결 건조분말의 도포량은 생체 흡수성 시트의 고정면의 표면적 당으로 나타내고, 다음과 같았다. 발명품 A, B, C, D, E, F, G는 13.8U/㎠, 발명품 J는 0.28U/㎠, 발명품 K는 1.38U/㎠, 발명품L은 4.6U/㎠로 했다. 염화칼슘 분말의 도포량은 0.32mg/㎠로 했다.

각 발명품의 조건을 하기 표에 정리했다.

실시예 2

(시트 제제의 접착력 평가시험)

생리식염액은 일본약전 생리식염액(Otsuka PHarmaceutical co., Ltd.)을 사용했다. 주사 용수는 일본약전 주사용수(THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC RESEARCH INSTITUTE)을 사용했다. 시트 제제의 대조로서, TachoComb(등록상표)(CSL Behring사)를 사용했다.

2개의 검사 지그에 각각 부착한 돼지 피부(접착면적 2.5㎠)의 사이에 50㎕/㎠의 생리 식염액을 도포하고, 그 위에 시트 제제를 스탠딩했다. 5분간 압착 후, 즉시 한쪽의 검사 지그를 수평방향으로 견인해서 최대 항장력(N: 뉴턴)을 측정하고, 그 값을 시트 제제의 접착력으로 기재했다. n수는 TachoComb: 22, 발명품 E/G: 5, 발명품 A/B/D/F/J/K/L: 6, 발명품 D: 8. 결과는 도 1, 2, 3에 나타냈다.

도 1, 2, 3로부터 분명하게 나타나 있는 바와 같이, 본 발명품의 접착력값은 Mann-Whitney의 U검정에 의해 TachoComb와 비교해서 유의차를 인정하였다(**P <0.01). 따라서 현재 임상적 사용이 인가되어 있는 제제와 비교해서, 더욱 강력한 조직 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈력을 발휘할 수 있는 것임을 밝혔다.

또, 도 2에 있어서, 발명품E, F, 및 G는 발명품 A와 비교해서, 시트형 지지체로의 피브리노겐 도포량이 적은데도 불구하고, 뛰어난 접착효과를 발휘했다. 시트형 지지체에 피브리노겐을 고농도로 존재시켜 두면, 높은 접착력이 수득된다고 쉽게 생각할 수 있자만, 시트형 지지체에서의 피브리노겐 존재량 이외의 요인(도포하는 피브리노겐 용액의 농도)도 접착력에 기여하는 점을 나타낸 발명자에 있어서도 놀랄만한 지견이다.

실시예 3

(시트 제제의 SDS-PAGE)

[겔화 전의 검체제작: 0분]

시험군은 TachoComb과 실시예 1에서 제작한 발명품B이다. 0.5×0.8㎝=0.4㎠의 시트를 준비하고, 샘플 튜브에 넣었다. 샘플 튜브에 환원용 처리액을 첨가했다. 시트가 들어간 처리액을 적당하게 교반하고, 실온에서 48시간 용해시켰다. 자비처리를 실시하고, 영동ㆍ염색(CBB)ㆍ탈색을 실시했다.

[겔화 후의 검체제작: 5, 60분]

시험군은, TachoComb과 실시예 1에서 제작한 발명품 A이다. 0.5×0.8㎝=0.4㎠의 시트를 준비하고, 샘플 튜브에 넣었다. 샘플 튜브에 40㎕의 생식을 첨가하고, 시트를 용해ㆍ겔화시켰다. 생식을 첨가ㆍ겔화 5분 후, 또는 60분 후에 환원용 처리액을 첨가해서 겔화 반응을 정지시켰다. 겔화한 시트가 들어간 처리액을 적당하게 교반하고, 실온에서 48시간 용해시켰다. 자비처리를 실시하고, 영동ㆍ염색(CBB)ㆍ탈색을 실시했다. 결과는 도 4에 나타냈다.

도 4로부터 분명하게 나타나 있는 바와 같이, 기존제제로는 형성할 수 없는 γ다이머를 본 발명품은 형성하는 것을 확인했다. 따라서 피브린 겔-매트릭스 내의 가교형성에 의해 피브린 응괴의 물리적 강도와 안정성을 높일 수 있고, 강력한 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈력을 발휘할 수 있는 것을 밝혔다.

실시예 4

(시트 제제의 지혈력 평가시험)

지혈평가 동물모델은 10∼12주령 SD계 웅성랫트를 사용해서 제작했다. 자일라진 염산염과 케타민 염산염 마취 하에서 복부를 정중선을 따라서 따라서 절개해서 개복했다. 거즈 등을 사용해서 복대동맥을 노출시켰다. 복대정맥에서 헤파린소듐 주사액을 300U/kg 투여했다. 헤파린 투여 2분 후에, 복대동맥에 주사바늘을 천자해서 출혈을 제작했다. 즉시 출혈 부위에 1×1㎝의 시험군을 적용하고, 3분간 압박했다. 압박 종료 후, 3분간 재출혈의 유무를 관찰했다. 재출혈한 경우에는 시험군을 제거하고, 새로운 시험군을 적용하고, 재차 지혈조작을 실시했다. 지혈에 필요로 한 지혈조작 횟수에 의해 지혈력을 평가했다. ｎ수는 TachoComb: 7, 발명품 A/C/G: 3. 결과는 도 5에 나타냈다.

도 5로부터 분명하게 나타나 있는 바와 같이, 본 발명품의 지혈력은 TachoComb와 비교해서 높은 것으로 생각되었다. 따라서 현재 임상적 사용이 인가되어 있는 제제와 비교해서, 더욱 강력한 조직 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈력을 발휘할 수 있는 것을 밝혔다.

(산업상의 이용 가능성)

본 발명의 시트 제제는 외과수술 시에 있어서의 조직 접착, 지혈 및 조직 폐쇄 등을 실시할 때에, 조제시간이 불필요해서 긴급 시에 사용 가능한 편리성이 높은 제제이다. 종래 기술보다도 뛰어난 조직 접착ㆍ폐쇄ㆍ지혈효과를 발휘하는 동시에, 기존제제로는 형성할 수 없는 γ다이머를 형성할 수 있고, 피브린 응괴의 물리적 강도와 안정성을 높일 수 있다. 또 종래 기술보다도 간편한 제법이기 때문에, 저렴하고, 유효성이 높은 시트 제제를 공급할 수 있다. 본 발명은 유효성과 편리성이 높고, 또한 저렴한 시트 제제, 및 그 조제방법을 제공할 수 있다.

Claims (50)

1. (A) 두께 0.3 mm 내지 0.8 mm의 시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 용액을 도포 또는 함침시킨 후, 동결건조시켜서 피브리노겐 동결 건조분말을 1.5∼3.0 mg/㎠으로 고정화시키는 공정, 및
   (B) 트롬빈 분말 분산액을 시트형 지지체의 다른 쪽 면에 도포시킨 후, 건조시켜서 트롬빈 분말을 고정화시키는 공정
   으로 이루어지고, 피브리노겐 성분과 트롬빈 성분이 별도의 면에 분리해서 고정화되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제의 제조방법.
2. 제 1 항에 있어서, 피브리노겐 용액이 시트형 지지체의 트롬빈 분말이 고정화되는 다른 쪽 면에 도달하지 않는 액량의 피브리노겐 용액인 것을 특징으로 하는 제제의 제조방법.
3. 두께 0.3 mm 내지 0.8 mm의 일체 형성된 시트형 지지체의 한쪽 면에 피브리노겐 성분이 1.5∼3.0 mg/㎠으로 고정되고, 피브리노겐 성분이 고정되어 있지 않은 다른 쪽 면에 트롬빈 성분이 고정되고, 또한 양 성분이 서로 분리해서 고정화되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제.
4. 제 3 항에 있어서, 해당 시트형 지지체가 폴리글리콜산, 폴리락트산, 폴리카프로락톤, 폴리글리세롤세바스산, 폴리하이드록시알칸산 및 폴리부틸렌숙시네이트, 및 글리콜산과 락트산의 공중합체로 이루어지는 그룹에서 선택되는 생체 흡수성 재료로 제작되는 시트형 지지체인 시트 제제.
5. 제 4 항에 있어서, 해당 시트형 지지체가 폴리글리콜산을 재료로 해서 제작되는 시트형 지지체인 시트 제제.
6. 제 3 항에 있어서, 해당 시트형 지지체가 생체 흡수성 재료를 사용해서 편직, 직조된 편물, 직물을 니들펀칭해서 제조된 부직포로 이루어지는 시트형 지지체인 것을 특징으로 하는 시트 제제.
7. 제 3 항에 있어서, 해당 피브리노겐 성분이 피브리노겐 동결 건조분말인 것을 특징으로 하는 시트 제제.
8. 제 7 항에 있어서, 해당 피브리노겐 동결 건조분말이 피브리노겐 용액을 시트형 지지체의 한쪽 면에 도포 또는 함침시킨 후, 동결건조시킨 피브리노겐 동결 건조분말인 것을 특징으로 하는 시트 제제.
9. 제 3 항에 있어서, 해당 피브리노겐 용액이 1%∼15%(w/v) 피브리노겐이 포함되는 피브리노겐 용액인 것을 특징으로 하는 시트 제제.
10. 제 3 항에 있어서, 해당 트롬빈 성분이 트롬빈 분말인 것을 특징으로 하는 시트 제제.
11. 제 10 항에 있어서, 해당 트롬빈 분말이 트롬빈 분말을 용매 중에 분산시킨 분말 분산액을 피브리노겐 성분이 고정되어 있지 않은 다른 쪽 면에 도포한 후, 건조시킨 트롬빈 분말인 것을 특징으로 하는 시트 제제.
12. 제 11 항에 있어서, 해당 용매가 알코올류인 것을 특징으로 하는 시트 제제.
13. 제 12 항에 있어서, 해당 알코올류가 에탄올, 메탄올, 이소프로필알코올, 1-부탄올, 2-부탄올, 이소부틸알코올, 이소펜틸알코올로 이루어지는 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 하는 시트 제제.
14. 제 13 항에 있어서, 해당 알코올류가 에탄올인 것을 특징으로 하는 시트 제제.
15. 제 3 항에 있어서, 해당 트롬빈 성분이 시트형 지지체의 고정면의 표면적당 트롬빈이 적어도 0.28U/㎠로 고정되어 있는 것을 특징으로 하는 시트 제제.
16. 제 3 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액응고 제XIII 인자, 아프로티닌, 알부민, 염화칼슘, 비이온 계면활성제, 각종 아미노산으로 이루어지는 그룹에서 선택되는 적어도 1개를 포함하는 것을 특징으로 하는 시트 제제.
    
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