WO2004020462A1 - Cxcr4拮抗薬およびその用途 - Google Patents

Cxcr4拮抗薬およびその用途 Download PDF

Info

Publication number
WO2004020462A1
WO2004020462A1 PCT/JP2003/010753 JP0310753W WO2004020462A1 WO 2004020462 A1 WO2004020462 A1 WO 2004020462A1 JP 0310753 W JP0310753 W JP 0310753W WO 2004020462 A1 WO2004020462 A1 WO 2004020462A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
arg
cys
arginine
glutamic acid
tyr
Prior art date
Application number
PCT/JP2003/010753
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hirokazu Tamamura
Akira Hori
Original Assignee
Fujii, Nobutaka
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujii, Nobutaka filed Critical Fujii, Nobutaka
Priority to AU2003261723A priority Critical patent/AU2003261723A1/en
Priority to EP03791288A priority patent/EP1541585B1/en
Priority to CA2537158A priority patent/CA2537158C/en
Priority to ES03791288T priority patent/ES2403932T3/es
Priority to US10/525,838 priority patent/US7423007B2/en
Publication of WO2004020462A1 publication Critical patent/WO2004020462A1/ja
Priority to US12/172,007 priority patent/US8017585B2/en
Priority to US13/178,737 priority patent/US8410059B2/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K7/00Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • A61P35/02Antineoplastic agents specific for leukemia
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • A61P35/04Antineoplastic agents specific for metastasis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08Antiallergic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a compound having a CXCR4 antagonism, and a preventive and / or therapeutic agent for cancer and rheumatoid arthritis containing the compound.
  • G proteins conjugated guanine nucleotide-binding proteins
  • these receptors have a common structure having seven transmembrane regions, and are collectively referred to as G protein-coupled receptors or seven transmembrane receptors (7TMR).
  • G protein-coupled receptor protein is the human receptor protein encoded by the CXCR4 gene [Journal of
  • CXCL 12ZSDF-1 (Science, vol. 261] is a bioactive peptide that functions as a ligand for CXCR4. , Pp. 600-603 (1993)].
  • Fujii discloses peptidic compounds having an antagonistic effect on CXCR4 and states that those compounds have anti-HIV activity.
  • the metastasis of cancer is an important factor that determines the life expectancy of patients.
  • CXCR4 is expressed in breast cancer, etc., and its metastatic organs (lymph node, lung, liver and bone) Reported that the expression of its ligand CXCL12 / SDF-1 was enhanced [Nature, Vol. 410, pp. 50-56 (2001). Year) ] .
  • infiltration of CD4-positive T cells into the joint cavity fluid affects the progress of the disease.
  • An object of the present invention is to provide a novel cancer and a means for preventing and / or treating rheumatoid arthritis using a compound having a CXCR4 antagonistic effect.
  • the present invention also provides novel compounds having prophylactic and / or Z- or therapeutic activities for cancer and rheumatoid arthritis, in particular, various oligopeptides having a common structure. Disclosure of the invention
  • the present inventors have conducted intensive studies to solve the above problems, and as a result, a compound having a CXCR4 antagonistic activity, which has been considered to be effective as a chemotherapeutic agent for AIDS, is useful for cancers including metastasis and chronic diseases.
  • the present inventors have found that the present invention is effective in preventing and / or treating rheumatoid arthritis, and as a result of further research, have completed the present invention.
  • the present invention provides:
  • a 1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • A2 represents an arginine or glutamic acid residue when A1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus; If it has been lost, remove any arginine or glutamic acid residues that may be derivatized at the N-terminus. Represent;
  • a 3 represents an aromatic amino acid residue
  • A4, A5 and A9 independently represent arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • a 6 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • a 7 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • a 8 represents tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue
  • a 10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • A11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at the 4- and 13-positions may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a therapeutic or prophylactic and / or therapeutic agent for cancer or rheumatoid arthritis,
  • A1 is an arginine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or is deleted;
  • A2 represents an arginine or glutamic acid residue when A1 is an arginine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, and when A1 is deleted Represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus;
  • a 4 represents arginine, citrulline, alanine or glutamic acid residue
  • A5 is arginine, citrulline, alanine, lysine or glutamic acid residue Represents a group; '
  • A6 represents a lysine, alanine, citrulline or glutamic acid residue
  • A7 represents a proline or alanine residue
  • A8 represents a tyrosine, alanine or glutamic acid residue
  • a 9 represents an arginine, citrulline or glutamic acid residue
  • a 10 represents a citrulline or glutamic acid residue
  • Al 1 represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the C-terminus, wherein the preventive and Z or therapeutic agent according to (1).
  • B 1 is a glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus or is deleted;
  • B2 represents an arginine or glutamic acid residue when B1 is a glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, and represents an N-terminal when B1 is deleted. Represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized with
  • B3 represents an aromatic amino acid residue
  • 84, '85 and 89 independently represent arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • B 6 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • B7 represents proline, glycine, ordinine, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • B8 represents tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue
  • B10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • B ll represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at positions 4 and 13 may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • C1 is a arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus or has been deleted;
  • C2 represents a glutamic acid residue when C1 is an arginine, lysine, orditin, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, and C1 is deleted Represents a glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus,
  • C 3 represents an aromatic amino acid residue
  • C4, C5 and C9 independently represent arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • C6 is proline, glycine, orditin, lysine, alanine,
  • C7 is proline, glycine, orditin, lysine, alanine,
  • C8 represents a tyrosine, phenylalanine, malanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue
  • C10 represents citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue And
  • Cll represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the c-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at the 4- and 13-positions may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • D1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • D 2 represents an arginine or glutamic acid residue when D 1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus; When deleted, it represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus;
  • D 3 represents an aromatic amino acid residue
  • D 4 represents dalminic acid residue
  • D5 and D9 independently represent arginine, lysine, orditin, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • D 6 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • D7 represents a proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • D8 represents a tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue
  • D 10 represents a citrulline, glutamic acid, argyun or lysine residue
  • D 11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at the 4- and 13-positions may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • El is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • E2 represents an arginine or glutamic acid residue when E1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus; If missing, represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus;
  • E 3 represents an aromatic amino acid residue
  • E4 and E9 independently represent arginine, lysine, orditin, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • E5 represents an arginine or glutamic acid residue
  • E6 represents a proline, glycine, orditin, lysine, malanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • E7 represents a proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • E8 is tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, Represents tolulin or glutamic acid residues;
  • E 10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • E 11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at positions 4 and 13 may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • E5 represents a glutamic acid residue, the peptide according to (7) or a salt thereof, (9) a compound represented by the following formula (If)
  • F1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • F2 represents an arginine or glutamic acid residue when F1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, and F1 is deleted If present, represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus;
  • F 3 represents an aromatic amino acid residue
  • F4, F5 and F9 independently represent arginine, lysine, orditin, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • F6 represents a dalminic acid residue
  • F7 represents a proline, .glycine, ordinine, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • F8 is tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, Represents tolulin or glutamic acid residues;
  • F 10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • F 11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at positions 4 and 13 may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • Gl is a force that is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue that may be derivatized at the N-terminus, or is missing;
  • G2 represents an arginine or glutamic acid residue when G1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus; Arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus,
  • G3 represents an aromatic amino acid residue
  • G4, G5 and G9 independently represent arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • G6 represents proline, glycine, ordinine, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • G7 represents a proline, glycine, ordinine, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • G8 represents a glutamic acid residue
  • G10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • G11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at positions 4 and 13 may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • HI is an arginine, lysine, ordinyl, tin, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • H2 represents an arginine or glutamic acid residue when H1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminal, and HI is deleted.
  • H3 represents an aromatic amino acid residue
  • 114 and 115 independently represent arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • H6 represents proline, glycine, ordinine, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • H7 represents proline, glycine, ordinine, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • H8 represents tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue
  • H 9 represents a glutamic acid residue
  • H 10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • H 11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at positions 4 and 13 may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • I I is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • I 3 represents an aromatic amino acid residue
  • I5 and I9 independently represent arginine, lysine, orditin, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • 16 is for proline, glycine, orditin, lysine, alanine,
  • 17 is for proline, glycine, orditin, lysine, alanine,
  • I8 is tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, Represents tolulin or glutamic acid residues;
  • I 10 represents glutamic acid, arginine or lysine residue
  • I 11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at positions 4 and 13 may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • J1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • J2 represents an arginine or glutamic acid residue when J1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, and J1 is deleted. If missing, represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus;
  • J 3 represents an aromatic amino acid residue
  • J4, J5 and J9 independently represent arginine, lysine, lunitine, citrulline, 'alanine or glutamic acid residues;
  • J 6 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • J7 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • J 8 represents tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue
  • J 10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • J 11 represents a glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at the 4-position and the 13-position may be linked by a disulfide bond. Or a D-form) or a salt thereof,
  • nelf inabiryl-succinyl represents the following formula (III),
  • R-C3 ⁇ 4 is the following formula (V)
  • Arg represents L-arginine residue
  • Nal represents L-3- (2-naphthyl) alanine residue
  • Cys represents L-cystine residue
  • Tyr represents L-tyrosine residue
  • Cit represents L-tyrosine residue.
  • a medicament comprising the peptide according to any of (3) to (14) or a salt thereof;
  • Al is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or is deleted;
  • A2 represents an arginine or glutamic acid residue when A1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus; If missing, represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus;
  • a 3 represents an aromatic amino acid residue
  • A4, A5 and A9 independently represent arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • a 6 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • a 7 represents a proline, glycine, ordinine, lysine, alanine, citrulline, or arginine residue;
  • a 8 represents tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, cy, tolulin or glutamic acid residue;
  • a 10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • A11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at the 4- and 13-positions may be linked by a disulfide bond.
  • a method for preventing or treating cancer or rheumatoid arthritis which comprises administering an effective amount of a peptide represented by the formula: (22)
  • a 1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • a 2 represents an arginine or glutamic acid residue when A 1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus; When deleted, it represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus;
  • a 3 represents an aromatic amino acid residue
  • A4, A5 and A9 independently represent arginine, lysine, orditin, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • a 6 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • a 7 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • a 8 represents tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue
  • a 10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • A11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at the 4- and 13-positions may be linked by a disulfide bond. Or a D-isomer).
  • the peptide compound of the present invention has a potent CXCR4 antagonistic effect, and exhibits a therapeutic effect on cancer and chronic rheumatoid arthritis by inhibiting the binding of CXCR4 to CXCL12 / SDF-1.
  • FIG. 1 shows the inhibitory activity of TE-14005 on breast cancer cell migration induced by CXCL12.
  • FIG. 2 shows the inhibitory activity of TC_14012 on breast cancer cell migration induced by CXCL12.
  • FIG. 3 shows the inhibitory activity of 4Fb enzoy 1-TN-14003 on the migration of T cell-derived leukemia cells induced by CXCL12.
  • FIG. 4 shows the inhibitory activity of 4 Fb enzoy 1 -TN-14003 on breast cancer cell migration induced by CXCL12.
  • FIG. 5 is a lung tissue-stained image showing the lung metastasis-suppressing activity of 4Fb enzyl-TN-14003 in a mouse into which human breast cancer cells have been transplanted.
  • FIG. 5A shows the lungs of the control group (saline-administered group), and
  • FIG. 5B shows the lungs of the 4 Fb enzoy 1-TN-14003 administration group.
  • FIG. 6 shows the inhibitory activity of 4Fb enzy 1-TN-14003 on the migration of Jurkat cells induced by SDF_la (CXCL12).
  • the vertical axis indicates cell migration (ratio of moving cells to input). From left: SDF-1 la free, SDF-1 «added, SDF-1 and 4 F benz 0 y 1 -TN- 14003 ⁇ ⁇ ⁇ added, SDF-1 ⁇ and 4 F benz oy 1 -TN- 14003 At 100 pM, SDF—la and 4Fb enzoy l -TN-14003 At 1 nM, SDF—1 «and 4 Fbenzoy1 -TN-14003 ⁇ ⁇ , SDF—la and 4 The results obtained when 100 nM of F benzoy 1—TN—14003 were added.
  • FIG. 7 shows the inhibitory activity of 4F benzoy l-TN-14003 on the migration of mouse spleen cells induced by SDF-la (CXCL12).
  • the vertical axis indicates cell migration (ratio of moving cells to input). From left: SDF- 1 ⁇ not added, SDF- 1 added, SDF- 1 and 4F be ⁇ ⁇ ⁇ y 1 -TN- 140 0 3 ⁇ ⁇ ⁇ added, SDF- 1 ⁇ and 4 F benzoy 1- TN-140 03 100 pM added, SDF-la and 4F benzoy l -TN-140 0 3 1 nM added, SDF-la and 4Fb enzoyl -TN- 1400 3 ⁇ ⁇ ⁇ St> F—la and 4 F benzoy 1 — TN—140 0 3 1 0 0 nM Addition of c Figure 8 shows 4F benzoy 1 — TN—140 0 3 1 0 0 nM Addition of
  • PBS administration (control) group 4 Fb enz oy 1 -TN-140 0 34.8 g / day administration group, 4F benz oy 1 -TN- 140 0 32 day administration group, 4 F benz oy l — The result of the group administered with TN-140 0 3 120 gZ day is shown.
  • * Indicates P ⁇ 0..0 25 (comparison with PBS administration group; Wi11ams test).
  • FIG. 9 shows the effect of existing drugs on mouse collagen arthritis.
  • Fig. 9B shows variation in incidence [
  • FIG. 10 shows the effect of 4Fb enzoy 1-TN-14003 on mouse collagen arthritis.
  • Figure 10A shows changes in body weight [vertical axis: body weight (g) (average value of standard error of soil), horizontal axis: days after booster immunization], and
  • Figure 10B shows changes in disease incidence [vertical axis: disease incidence (%)] , Abscissa: days after booster immunization],
  • FIG. 10C shows fluctuation of arthritis score [vertical axis: arthritis score (mean soil error), abscissa: days after booster immunization], and FIG.
  • Figure 10E shows the effect of 4F enzoy l-TN-14003 on hind limb swelling 2 weeks after booster immunization [vertical axis: hind limb weight (mg) (mean SEM)],
  • Figure 1 OF Indicates the effect of 4Fb enzoy 1-TN-14003 on the antibody titer of type II collagen IgG2a antibody 2 weeks after the booster [vertical axis: antibody titer (A450) (mean SEM)]
  • ## indicates P ⁇ 0.01 (comparison with normal mouse group; t test), and P ⁇ 0.01 (comparison with drug non-administration group; t test).
  • the peptides described herein have the N-terminus (amino terminus) at the left end and the C-terminus (carboxyl terminus) at the right end according to the convention of peptide labeling.
  • H is or H: histidine
  • Trp or W Tribute fan
  • succiny 1 succiny g 1 utary 1
  • the present invention provides a preventive and / or therapeutic agent for cancer and rheumatoid arthritis, which contains a compound having a CXCR4 antagonistic effect.
  • a “compound having a CXCR4 antagonistic effect” is an anticancer effect that competitively inhibits the binding between CXCR4 and its physiological ligand, CXCL12 / SDF-1a (for example, an inhibitory effect on migration, an inhibitory effect on invasion). And anti-metastatic effect) or an anti-rheumatic rheumatoid effect (eg, migration inhibitory effect). More specifically, the following formula (Ia)
  • a 1 is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or has been deleted;
  • A2 represents an arginine or glutamic acid residue when A1 is an arginine, riorutin, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, and A1 is deleted If present, represents an arginine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus;
  • a 3 represents an aromatic amino acid residue
  • A4, A5 and A9 independently represent arginine, lysine, orditin, citrulline, alanine or glutamic acid residues;
  • a 6 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline, arginine or glutamic acid residue;
  • a 7 represents proline, glycine, orditin, lysine, alanine, citrulline or arginine residue;
  • A8 represents a tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue
  • a 10 represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue
  • A11 represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue which may be derivatized at the C-terminus;
  • Cys represents a cysteine residue
  • Tyr represents a tyrosine residue
  • the cysteine residues at the 4- and 13-positions may be linked by a disulfide bond.
  • D body D body
  • amides, esters or salts thereof hereinafter may be collectively referred to as “peptides of the present invention”.
  • a 1 represented by the above formula (Ia) is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus (L-form or D-form) ), Or preferably represents an arginine, citrulline, alanine or D-glutamic acid residue which may be derivatized at the N-terminus, or is deleted. .
  • N-terminal derivatized includes, for example, formyl groups; acyl groups, eg Eg to Asechiru group, a propionyl group, Puchiriru group, Pentanoiru group, the hexa Noiru C 2 _ 6 Arukanoiru group such as, Benzoiru group, a substituted Benzoiru group
  • A2 represented by the above formula (Ia) is an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or dalminic acid residue (L-isomer) in which A1 may be derivatized at the N-terminus.
  • Arginine or glutamic acid residue (which may be L-form or D-form)
  • a 1 is derivatized at the N-terminus.
  • arginine citrulline, alanine or glutamic acid residue
  • it represents an arginine or glutamic acid residue
  • A1 when deleted, it may be a derivative at the N-terminus.
  • examples of “derivatized at the N-terminal” include those similar to A1 above, but are not limited thereto.
  • a 3 represented by the above formula (la) is an aromatic amino acid residue (for example, phenyl lananine, tributofan, 3- (2-naphthyl) alanan, tyrosine, 4-fluorophenylalanan, 3- Naphthyl) alanine) (which may be L-form or D-form), preferably feniralanine, Lithojuan, which represents three-one (2-naphthyl) alanine.
  • aromatic amino acid residue for example, phenyl lananine, tributofan, 3- (2-naphthyl) alanan, tyrosine, 4-fluorophenylalanan, 3- Naphthyl) alanine
  • Lithojuan which represents three-one (2-naphthyl) alanine.
  • a 4 represented by the above formula (la) represents arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or a glutamic acid residue (which may be L-form or D-form), preferably arginine , Citrulline, alanine or L- or D-dalminic acid residue.
  • A5 in the above formula (Ia) represents an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue, and preferably represents an arginine, citrulline, alanine, lysine or glutamic acid residue.
  • a 6 in the above formula (Ia) represents proline, glycine, ordinine, lysine, alanine, citrulline, arginine or a glutamic acid residue (which may be L-form or D-form). And preferably represents D-lysine, D-alanine, D-citrulline or D-glutamic acid residue.
  • A7 in the above formula (Ia) represents a proline or alanine residue (which may be an L-form or a D-form), and preferably represents a proline or alanine residue.
  • a 8 represented by the above formula (Ia) represents tyrosine, phenylalanine, alanine, naphthylalanine, citrulline or glutamic acid residue (which may be L-form or D-form), preferably Represents tyrosine, alanine or D-glucosamic acid residue.
  • a 9 represented by the above formula (Ia) represents an arginine, lysine, ordinine, citrulline, alanine or glutamic acid residue (which may be L-form or D-form), preferably It represents an arginine, citrulline or glutamic acid residue.
  • a 10 represented by the above formula (la) represents a citrulline, glutamic acid, arginine or lysine residue (which may be an L-form or a D-form), preferably citrulline or D— Represents a glutamic acid residue. .
  • a 11 represented by the above formula (Ia) represents an arginine, glutamic acid, lysine or citrulline residue (which may be L-form or D-form) which may be derivatized at the C-terminus. , Preferably it may be derivatized at the C-terminus Arginine or glutamic acid residues.
  • Examples of “c-terminal derivatization” include amidation (—NH 2 , —NHR, —NRR ′), ester ⁇ ; (—C00R), and the like.
  • amide as R and R 'in the ester, for example, methylation, Echiru, n- propyl, C WINCH 6 alkyl group such as isopropyl or n- butyl, for example, C 3 _ 8 of cyclopentyl, cyclohexylene cyclohexyl cycloalkyl groups such as phenyl, alpha-naphthyl C 6 _ 12 Ariru group such as, if example embodiment, benzyl, phenylene Lou C such as phenethyl, _ 2 alkyl or alpha - naphthylmethyl etc. alpha-naphthyl - C alkyl in addition to C 7 _ 14 Araru kill groups such as groups, such as pivaloyl I Ruo carboxymethyl group which is generally used as an oral ester.
  • a peptide in which the lipoxyl group is amidated or esterified is also included in the peptide of the present invention.
  • amide and ester in this case, for example, the C-terminal amide and ester exemplified for A11 above are similarly used.
  • a substituent on the side chain of an amino acid in the molecule for example, — ⁇ H, monoSH, amino group, imidazole group, indole group, guanidino group, etc.
  • those protecting groups e.g., formyl group, those protected by C etc.
  • Ashiru group such as C 2 _ 6 Arukanoiru group such Asechiru group, a sugar chain bound - was called glycopeptide such as And the like.
  • Examples of the salt of the peptide of the present invention include a physiologically acceptable salt with an acid or a base, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable.
  • Such salts include, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid) and the like.
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, Succinic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, oxalic acid, benzoic
  • the peptide of the present invention is a novel peptide when any one of A 1 to A 11 represented by the above formula (Ia) is as follows:
  • the amino acid residue may be in L-form or D-form.
  • novel peptide of the present invention include peptides having the following amino acid sequences (1) to (58) (in each sequence, two cysteine residues are linked by a disulfide bond).
  • the peptide of the present invention also includes a peptide containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence of any of the above-mentioned peptides, or an amide, ester or salt thereof.
  • substantially identical amino acid sequence refers to the activity of a peptide (for example, the activity of inhibiting the binding of a ligand to a receptor) or the anticancer activity of a peptide (for example, a migration inhibitory effect, an invasion inhibitory effect, and an anti-metastatic effect.
  • Action, etc. or anti-rheumatic action are qualitatively equivalent [thus, to some extent quantitatively (eg, about 0.01 to 100 times, preferably about 0.5 times). 220-fold, more preferably about 0.5-2 fold). Therefore, as long as the above properties are maintained, one or more amino acids may have a mutation in the amino acid sequence represented by any one of the above formulas (la) to (Ij) and (1) to (58). It is good.
  • mutations such as amino acid substitutions, deletions, or insertions (with the addition of amino acids) in a peptide sequence greatly affect the physiological or chemical properties of the peptide.
  • substitutions include the substitution of a certain amino acid with another amino acid having similar properties (characteristics). Generally, when substitution is performed between amino acids having strong similarity in properties. It is thought that the smaller the substitution, the smaller the change in properties of the original peptide before substitution.
  • Amino acids are classified into the following classes based on their similarity in properties: (i) non-polar (hydrophobic) amino acids (eg, alanine, leucine, isoleucine, valine, proline, phenylalanine, tributofan, (Ii) polar (neutral) amino acids (eg, glycine, serine, threonine, cystine, tyrosine, asparagine, glutamine, etc.); (iii) positively charged (basic) amino acids (eg, arginine, (Iv) Lysine, histidine, etc.); (iv) Negatively charged (acidic) amino acids (eg, aspartic acid, glutamic acid, etc.), so amino acid substitutions within each class are conservative to peptide properties. (Ie, a substitution that results in a "substantially identical" amino acid sequence).
  • non-polar (hydrophobic) amino acids eg, alanine, leucine, iso
  • amino acid sequence represented by any of the above formulas (la) to (I j) and (1) to (58); Preferably an amino acid sequence in which one to three amino acids have been deleted,
  • amino acids 1 to 15 amino acids, preferably 1 to 10 amino acids in the amino acid sequence represented by any of the above formulas (Ia) to (: [j] and (1) to (58).
  • amino acid sequence in which one or more and five or less amino acids are added (inserted), or
  • An ester thereof or a salt thereof may be included. .
  • the peptide of the present invention is obtained by intentionally or accidentally subjecting the amino acid sequence to the substitution, deletion, insertion (addition), modification, or the like of (i) to (iv) above. It can be converted to a stable peptide or a highly active peptide having an increased inhibitory activity of the peptide.
  • the peptides of the present invention also include these mutant peptides or their amides, esters or salts thereof.
  • peptide of the present invention in addition to the peptide consisting of the amino acid sequence represented by any of the above formulas (Ia) to (; [j] and (1) ⁇ (58), 50 to 99.9% (preferably 70 to 99.9%, more preferably 80 to 99.9%, more preferably 90 to 99.9%). Having the above formulas (la) to (I j) and (1) to
  • the activity include inhibitory activities of the peptide, such as a binding inhibitory activity between a ligand and a receptor and a signal transduction inhibitory activity.
  • the expression “substantially the same” as the inhibitory activity indicates that the properties such as the inhibitory activity on the ligand binding to the receptor are the same. Therefore, the ligand binding inhibitory activity on the receptor may be markedly insignificant, and the difference in molecular weight is not a problem.
  • Examples of the amide, ester or salt of the peptide having an amino acid sequence represented by any of the above formulas (1) to (58) include those as exemplified for the peptide represented by the above general formula (Ia). Are similarly mentioned.
  • the peptides of the present invention, including the peptides containing the amino acid sequences represented by the above formulas (1;) to (58), can be produced according to known peptide synthesis methods.
  • any of a solid phase synthesis method and a liquid phase synthesis method may be used. That is, the desired peptide can be produced by condensing a partial peptide or amino acid capable of constituting a peptide with the remaining portion and, if the product has a protecting group, removing the protecting group.
  • Known methods for condensation and elimination of protecting groups include, for example, the methods described in the following 1 to 1.
  • Specific peptide synthesis methods include, for example, the following methods.
  • a commercially available resin for polypeptide synthesis can be used.
  • resins include, for example, chloromethyl resin, hydroxymethyl resin, benzhydrylamine resin, aminomethyl resin, 4-benzyloxybenzyl alcohol resin, 4-methylbenzhydrylamine resin, PAM resin, 4-hydroxymethylmethylphenylacetamidomethyl resin, polyacrylamide resin, 4- (2 ', 4'-dimethoxyphenylhydroxymethyl) phenoxy resin, 4- (2', 4'-dimethoxyphenyl resin) Fmoc aminoethyl) phenoxy resin and the like.
  • an amino acid having an ⁇ -amino group and a side chain functional group appropriately protected is condensed on the resin in accordance with the sequence of the target polypeptide according to various condensation methods known per se.
  • the polypeptide is cleaved from the resin, and at the same time, various protecting groups are removed.
  • an intramolecular disulfide bond formation reaction is carried out in a highly diluted solution to obtain the desired polypeptide or the target polypeptide.
  • various activating reagents that can be used for polypeptide synthesis can be used, and carbodiimides are particularly preferable.
  • carbodiimides examples include DCC, ⁇ , ⁇ ′-diisopropylcarboimide, and ⁇ -ethyl- ⁇ ′-(3-dimethylaminoprolyl) carbodiimide.
  • the protected amino acid may be added directly to the resin along with the racemization inhibitor additives (eg, HOBt, HOOBt), or the protected amino acid activity may be previously determined as a symmetrical acid anhydride or HOBt ester or HOOBt ester. After performing, it can be added to the resin.
  • the solvent used for activating the protected amino acid or condensing with the resin can be appropriately selected from solvents known to be usable for the polypeptide condensation reaction.
  • acid amides such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, and trifluoroethanol.
  • Alcohols, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, ethers such as pyridine, dioxane and tetrahydrofuran, butritols such as acetonitrile and propionitrile, esters such as methyl acetate and ethyl acetate, or an appropriate mixture thereof.
  • the reaction temperature is appropriately selected from a range known to be usable for the polypeptide bond formation reaction, and is usually appropriately selected from a range of about 120 ° C to 50 ° C.
  • the activated amino acid derivative is usually used in a 1.5 to 4-fold excess.
  • Examples of the protecting group for the amino group of the starting material include Z, Boc, tertiary-pentyloxycarbonyl, isopolnyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, Cl-Z, Br-Z, and adamantylo.
  • Xycarbonyl, trifluoroacetyl, fluoryl, formyl, 2-nitrophenylsulfenyl, diphenylphosphinothioyl, Fmoc and the like are used.
  • the group may be, for example, a linear, branched or cyclic such as an alkyl esterified (eg, methyl, ethyl, propyl, butyl, t-butyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, 2-adamantyl) Alkyl esterification), aralkyl esterification (eg, benzyl ester, 412 benzyl ester, 4-methoxybenzyl ester, benzene benzyl ester, benzhydryl esterification), phenacyl esterification, benzyl It can be protected by oxycarbonyl hydrazide, tert-butoxycarponyl hydrazide, trityl hydrazide, etc.
  • alkyl esterified eg, methyl, ethyl, propyl, butyl, t-butyl,
  • the hydroxyl group of serine can be protected, for example, by esterification or etherification.
  • a group suitable for the esterification for example, a lower alkanol group such as an acetyl group, an aroyl group such as a benzoyl group, a group derived from carbonic acid such as a benzyloxycarbonyl group, an ethoxycarponyl group, and the like are used.
  • Examples of a group suitable for etherification include a benzyl group, a tetrahydropyranyl group, and a t-butyl group.
  • the protecting group of Fueno Le hydroxyl group of tyrosine for example, Bz l, Cl 2 -Bz K 2- nitrobenzyl, Br-Z, tertiary one-butyl is used.
  • As a protecting group for imidazole of histidine for example, Tos, 4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzenesulfonyl, DNP, benzyloxymethyl, Bum Boc, Trt, Fmoc and the like are used.
  • Examples of the activated carbonyl group of the raw material include, for example, corresponding anhydrides, azides, active esters [alcohols (eg, pentachlorophenol, 2,4,5-trichlorophenol, 2,4 -Dinitrophenol, cyanomethyl alcohol, paranitrophenol, H0NB, N-hydroxysuccinimide, N-hydroxyphenolimide, and esters with HOBt).
  • As the activated amino group of the raw material for example, a corresponding phosphoric amide is used.
  • Methods for removing (eliminating) protecting groups include, for example, catalytic reduction in a hydrogen stream in the presence of a catalyst such as Pd-black or Pd-carbon, or anhydrous hydrogen fluoride or methanesulfonic acid.
  • Acid treatment with trifluoromethanesulfonic acid, trifluoroacetic acid or a mixture thereof, Base treatment with luamine, triethylamine, piperidine, piperazine, etc., and reduction with sodium in liquid ammonia are also used.
  • the elimination reaction by the above-mentioned acid treatment is generally carried out at a temperature of about 120 to 40 ° C.
  • anisol, phenol, thioanisole, methacrylate, paracresol The addition of a cation scavenger such as octyl, dimethyl sulfide, 1,4-butanedithiol, 1,2-ethanedithiol and the like is effective.
  • the 2,4-dinitrophenyl group used as an imidazole protecting group of histidine is removed by thiophenol treatment
  • the formyl group used as an indole protecting group of tryptophan is the above 1,2-ethanedithiol or 1-ethanedithiol.
  • it is also removed by alkali treatment with dilute sodium hydroxide solution, dilute ammonia and the like.
  • the protection of the functional group which should not be involved in the reaction of the raw material, the protective group, the elimination of the protective group, the activation of the functional group involved in the reaction, and the like can be appropriately selected from known groups or known means.
  • Another method for obtaining the amide form of the polypeptide is, for example, by first amidating the strong lipoxyl group of the carboxy-terminal amino acid: [After deprotection, extend the peptide chain to the desired length on the amino side. Then, a polypeptide in which only the protecting group for the N-terminal ⁇ -amino group of the peptide chain has been removed and a polypeptide in which only the protecting group for the C-terminal carboxyl group has been removed are produced.
  • the tide can be purified and isolated.
  • the peptide obtained by the above method is a free form, it can be converted to an appropriate salt by a known method, and conversely, when the peptide is obtained by a salt, it can be converted to a free form by a known method. it can.
  • the novel peptide of the present invention having an amino acid sequence represented by any one of the above formulas (1) to (58) can be produced by the method described in Examples below or a method analogous thereto. Further, the peptide of the present invention can be produced by the method described in WO02 / 20561 or a method analogous thereto.
  • the peptide of the present invention When used as a pharmaceutical or veterinary drug, it may be carried out according to conventional means. For example, tablets, capsules, elixirs, microcapsules, and the like, which are sugar-coated as required, orally, or aseptic solution with water or other pharmaceutically acceptable solutions, or suspensions It can be used parenterally in the form of injections, such as suspensions.
  • the peptide of the present invention is mixed with a physiologically acceptable carrier, flavoring agent, vehicle, vehicle, preservative, stabilizer, binder, etc. in a unit dosage form generally required for pharmaceutical practice. It can be manufactured by doing. The amount of the active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose in the specified range can be obtained.
  • additives that can be mixed with tablets, capsules, etc.
  • binders such as gelatin, corn starch, tragacanth gum, gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, alginic acid, etc.
  • Suitable leavening agents, lubricating agents such as magnesium stearate, sweetening agents such as sucrose, lactose or saccharin, flavoring agents such as peppermint, cocoa oil or citrus oil are used.
  • the unit dosage form is a capsule, the above-mentioned type of material can further contain a liquid carrier such as oil and fat.
  • Sterile compositions for injection should be formulated in accordance with normal pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending the active substance in vehicles such as water for injection, or naturally occurring vegetable oils such as guar oil, coconut oil, etc. Can be.
  • Aqueous liquids for injection include, for example, saline, isotonic solutions containing dextrose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride)
  • Suitable solubilizers for example, alcohols (eg, ethanol), polyalcohols (eg, propylene glycol, polyethylene glycol), nonionic surfactants (eg, polysorbate). 80 TM , HCO-50) and the like.
  • the oily liquid includes sesame oil, soybean oil and the like, and may be used in combination with solubilizers such as benzyl benzoate and benzyl alcohol.
  • buffers eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer
  • soothing agents eg, benzalkonium chloride, proactive hydrochloride, etc.
  • stabilizers eg, human serum albumin, polyethylene glycol
  • Preservatives eg, benzyl alcohol, phenol, etc.
  • antioxidants eg, antioxidants and the like.
  • the prepared injection solution is usually aseptically filled into a suitable ampoule.
  • the preparations obtained in this way are safe and low toxic and can be used, for example, in human mammals (eg, mice, rats, guinea pigs, egrets, sheep, sheep, bushus, puppies, cats, dogs, monkeys, baboons, Chimpanzee).
  • human mammals eg, mice, rats, guinea pigs, egrets, sheep, sheep, bushus, puppies, cats, dogs, monkeys, baboons, Chimpanzee).
  • the dosage of the peptide of the present invention may vary depending on the symptoms and the like, but when administered orally, it is usually about 0.1 to 1000 mg, preferably about 1.0 to 500 mg, more preferably about 1.0 to 500 mg per dose per 60 kg body weight. From 20 Omg. When administered parenterally, the dosage for a single dose of 60 kg may vary depending on the subject, symptoms, and method of administration. About 300 mg, preferably about 0.1 to 20 Omg, more preferably about 0.1 to 10 Omg may be administered by intravenous injection. In the case of other animals, the dose can be administered in terms of weight per 6 O kg.
  • the peptide of the present invention has an anticancer effect, that is, a cancer cell motility suppressing effect and a cancer metastasis inhibiting effect. That is, the peptide of the present invention has a cancer metastasis inhibitory action, as will be apparent from the examples described below, and thus can be used as a prophylactic and therapeutic drug relating to cancer, particularly to cancer metastasis.
  • the peptide of the present invention can be used as an anticancer drug for oral cancer, pharyngeal cancer, lip cancer, tongue cancer, gingival cancer, nasopharyngeal cancer, esophageal cancer, Stomach, small intestine, colon, including colon, liver, gallbladder, knee, nasal, lung, osteosarcoma, soft tissue, skin, melanoma, breast, uterine, ovarian, prostate It is useful as a drug for improving, preventing and treating adenocarcinoma, testicular cancer, penis cancer, bladder cancer, kidney cancer, brain tumor, thyroid cancer, lymphoma, leukemia, etc.
  • the peptide of the present invention has an anti-chronic rheumatoid action, that is, a T cell motility inhibitory action. That is, since the peptide of the present invention has a T cell motility inhibitory effect, as will be apparent from the examples described later, it can be used as an agent for preventing and treating rheumatoid arthritis. Therefore, the peptide of the present invention is useful as an agent for improving, preventing and treating rheumatoid arthritis.
  • the peptides of the present invention can also be used as prophylactic and therapeutic agents for viral infections (eg, AIDS, SARS, etc.). '' For example, when the peptide of the present invention is used as an anticancer drug,
  • a chemotherapeutic agent an immunotherapeutic agent, or a drug that inhibits the action of cell growth factor and its receptor
  • concomitant drug a drug that inhibits the action of cell growth factor and its receptor
  • the peptide of the present invention exhibits excellent anticancer activity even when used as a single agent, the effect can be further enhanced by using it in combination with one or several of the above-mentioned combination drugs (multiple drug combination). Can be augmented.
  • chemotherapeutic agent examples include an alkylating agent, an antimetabolite, an anticancer drug, a plant-derived anticancer drug, and the like.
  • alkylating agent examples include, for example, nitrogen mustard, nitrogen mass hydrochloride N-oxide, chlorambutyl, cyclophosphamide, diphosphamide, zotepa, carbocon, improsulfan tosylate, busulfan, dimustine hydrochloride, Mitopronil, melphalan, dacarbazine, lanimustine, estramustine sodium phosphate, triethylenmelamine, carmustine, oral mucin, streptozocin, Pipov mouth man, etoglucid, altrethamine, ambamustine, dibrospidipam, foteprestine , Ribomustine, Temo Zolomide, Treosulfan, Trofosfuamide, Dinostin tintimaramer, Carbocon, Adzeresin, Systemistin, Vizeresin, Platinum complex
  • Antimetabolites include, for example, mercaptopurine, 6-mercaptoprin liposide, thioinosin, methotrexate, enosinobin, cytarabine, silarabinokfosufate, ancitabine hydrochloride, 5-FU drug
  • anticancer antibiotics include anthracycline anticancer drugs (doxorubicin hydrochloride, daunorubicin hydrochloride, aclarubicin hydrochloride, pirarubicin hydrochloride, epilubicin hydrochloride, etc.), actinomycin D, actinomycin C, mitomycin C, chromomycin A 3.
  • anthracycline anticancer drugs doxorubicin hydrochloride, daunorubicin hydrochloride, aclarubicin hydrochloride, pirarubicin hydrochloride, epilubicin hydrochloride, etc.
  • actinomycin D actinomycin C
  • mitomycin C chromomycin A 3.
  • Bleomycin hydrochloride bleomycin sulfate, bepromycin sulfate, neocarzinostatin, mislamycin, sarcomycin, carcinophylline, mitotane, sorbicin hydrochloride, mitoxantrone hydrochloride, idarubicin hydrochloride and the like.
  • Plant-derived anticancer drugs ⁇ include, for example, bin-pot alkaloid anticancer drugs (vinblastine sulfate, vincristine sulfate, vindesine sulfate, vinorelbine, etc.), taxane anticancer drugs (paclitaxel, docetaxel, etc.), etoposide, phosphoric acid Etoposide, teniposide, vinorelbine, etc.
  • the “cell growth factor” in the “drug that inhibits the action of cell growth factor and its receptor” any substance that promotes cell growth is used. Usually, a peptide having a molecular weight of not more than 200,000 and a factor exerting an action at a low concentration by binding to a receptor is mentioned.
  • EGF epidermal growth factor
  • IGF insulin or a substance having substantially the same activity as that (eg, Insulin, IGF (insulin-like growth factor) 11, IGF-2, etc.)
  • FGF fibroblast growth factor
  • Other cell growth factors eg, CSF (colony stimulating factor), EPO (erythropoietin), IL-2 (interleukin-2), NGF ( nerve growth factor), PDGF (platelet-derived growth factor), TGF ⁇ (transforming growth factor / 3), HGF (epatocyte growth factor), VEGF (vascular endothelial growth factor), and the like.
  • the “cell growth factor receptor” may be any receptor as long as it has the ability to bind to the above-mentioned cell growth factor. Specifically, EGF receptor, haledalin receptor (HER2 ), Insulin receptor, IGF receptor, FGF receptor-1 or FGF receptor-2, HGF receptor (c-met), VEGF receptor, SCF receptor (c-kit) and the like.
  • Examples of the “drug that inhibits the action of cell growth factor” include Herceptin (HER2 antibody), G'LEEVEC (c-met, c-kit, ab1 inhibitor), Iressa (EGF receptor inhibitor) ).
  • topoisomerase I inhibitors eg, irinotecan, topotecan, etc.
  • topoisomerase II inhibitors eg, sobuzoxane, etc.
  • angiogenesis inhibitors e.g., angiogenesis inhibitors and the like
  • the peptide of the present invention when used as a prophylactic and / or therapeutic agent for rheumatoid arthritis, it can be used in combination with other prophylactic and / or therapeutic agents for joint diseases.
  • the concomitant drug include anti-inflammatory steroids (eg, prednisolone, hydrocortisone, methylprednisolone, dexamethasone, betamethasone, etc.), nonsteroidal anti-inflammatory and analgesics (eg, indomethacin, diclofenac, loxoprofen, Ibuprofen, aspirin, Piroxicam, sulindac, etc.) or hyaluronic acid preparations (eg, sodium hyaluronate), COX-II inhibitors and the like.
  • anti-inflammatory steroids eg, prednisolone, hydrocortisone, methylprednisolone, dexamethasone, betamethasone, etc.
  • the peptide of the present invention exhibits excellent anti-rheumatic rheumatoid action even when used as a single agent, but its effect is further enhanced by using it in combination with one or several of the above concomitant drugs (multiple drug use). Can be done.
  • the timing of administration of the peptide of the present invention and the concomitant drug is not limited, and the peptide of the present invention and the concomitant drug may be administered simultaneously to the subject. It may be administered at a time interval.
  • the dose of the concomitant drug may be in accordance with the dose clinically used and can be appropriately selected depending on the administration subject, administration route, disease, combination and the like.
  • the administration form of the peptide of the present invention and the concomitant drug is not particularly limited as long as the polypeptide of the present invention or a salt thereof and the concomitant drug are combined at the time of administration.
  • Such administration forms include, for example, (1) administration of a single preparation obtained by simultaneously preparing the peptide of the present invention and the concomitant drug, and (2) separate preparation of the peptide of the present invention and the concomitant drug. (3) 'The time difference of the two formulations obtained by separately formulating the peptide of the present invention and the concomitant drug in the same route of administration is the same.
  • the concomitant drug of the present invention has low toxicity.
  • the peptide of the present invention and Z or the above concomitant drug are mixed with a pharmacologically acceptable carrier in accordance with a method known per se to obtain a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition such as a tablet ( Oral or parenteral (eg, topical, rectal) as powdered tablets, powdered tablets, granules, capsules (including soft capsules), liquids, injections, suppositories, sustained release tablets, etc. , Intravenous administration, etc.).
  • Injection is for intravenous, intramuscular, subcutaneous, organ, nasal It can be administered intracavitary, intradermal, ophthalmic, ophthalmic, intracerebral, rectal, vaginal and intraperitoneal, inside a tumor, near a tumor, or directly into a lesion.
  • the same carriers as those used in the above-mentioned pharmaceutical composition of the present invention can be used. .
  • the compounding ratio of the peptide of the present invention to the concomitant drug in the concomitant drug of the present invention can be appropriately selected depending on the administration subject, administration route, disease and the like.
  • the content of the concomitant drug in the concomitant drug of the present invention varies depending on the form of the preparation, but is usually about 0.01 to 100% by weight, preferably about 0.1 to 50% by weight, based on the whole preparation. More preferably, it is about 0.5 to 20% by weight.
  • the content of additives such as carriers in the concomitant drug of the present invention varies depending on the form of the preparation, but is usually about 1 to 99.99% by weight, preferably about 10 to 90% by weight, based on the whole preparation. .
  • the protecting group-protected polypeptide resin was treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group, and then treated with 1M TMSBr-thioanisoruno TFA (trifluoroacetic acid) (m-cresol (100 eq)) And ethanedithiol (in the presence of 300 eq) at 25 ° C for 2 hours.
  • the resin was filtered off from the reaction mixture, washed twice with TFA, and the combined filtrate and washings were concentrated under reduced pressure, water-cooled dry ether was added to the residue, and the resulting precipitate was centrifuged and decanted. Separated from the supernatant. The obtained residue was washed with cold ether, dissolved in 1N acetic acid, and diluted with distilled water. 4. Cyclization by air oxidation
  • the diluted aqueous solution of the polypeptide described above was adjusted to pH 7.5 with concentrated aqueous ammonia, and cyclized by air oxidation using aeration.
  • This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (Cosmodil 5C18 AR-II column: acetonitrile-1 7)) and gel chromatography (Sephadex G-15, eluent: 0. IN AcOH) to obtain a single peak.
  • the polypeptide was obtained and lyophilized. Purity was confirmed by HPLC.
  • TC14005 was produced in the same manner as in Production Example 1. At the introduction of the amino acid at the 12th to 1st positions, DCit was used instead of DLys (Boc) at position 8, and Arg (PM) was used instead of Cit at position 6. Production Example 3: Production of TC14011>
  • TC14011 was produced in the same manner as in Production Example 1. However, DCit was used instead of DLys (Boc) at the 8-position at the introduction of the amino acid at the 12- to 1-position.
  • DCit was used instead of DLys (Boc) at the 8-position at the introduction of the amino acid at the 12- to 1-position.
  • TC14013 was produced in the same manner as in Production Example 1. However, Cit was used in place of Arg (Pbf) at position 11 at the introduction of amino acid at position 12 to position 1.
  • TC14015 was produced in the same manner as in Production Example 1. However, Cit was used in place of Arg (Pbf) at position 1 at the introduction of amino acid at position 12 to position 1.
  • TC14017 was produced in the same manner as in Production Example 1. However, at the introduction of amino acids at the 12th to 1st positions, DCit replaces DLys (Boc) at 8th position, Arg (Pbf) replaces Cit at 6th position, and Ci replaces Arg (Pbf) at 1st position. t was used.
  • TC 019 was produced in the same manner as in Production Example 1. However, at the introduction of amino acid at the 12th to 1st position, Cit and Arg (Pbf) at the 11th and 8th
  • TC14021 H-Cit-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Cit-Cit-Cys-Arg-OH (TC14021)
  • TC14021 was produced in the same manner as in Production Example 1. However, at the introduction of amino acids at the 12th to 1st positions, Cit is substituted for Arg Pbi at 11th position, Arg (Pbf) instead of Cit at 6th position, and Cit instead of Arg (Pbf) at 1st position. Using. Manufacturing Example 9: Manufacture of TC 012>
  • the protecting group-protected polypeptide resin was treated with 20% piperidine / DMF to remove the Fmoc group, and then treated with 1M TMSBr-thioanisole ZTFA (trifluoroacetic acid) (m-cresol (100 eq) And ethanedithiol (in the presence of 300 eq) at 25 ° C for 3 hours.
  • the resin was filtered off from the reaction mixture, washed twice with TFA, and the combined filtrate and washings were concentrated under reduced pressure, water-cooled dry ether was added to the residue, and the resulting precipitate was centrifuged and decanted and the supernatant was removed. Separated from The obtained residue was washed with cold ether, dissolved in 1N acetic acid, and diluted with distilled water. 4. Cyclization by air oxidation
  • the diluted aqueous solution of the above polypeptide was adjusted to pH 7.5 with concentrated aqueous ammonia, and cyclized by air oxidation with air.
  • This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (Cosmodil 5C18 AR-II column: acetonitrile water) and gel chromatography (Sephadex G-15, eluent: 0.1 IN AcOH) to obtain a single-peak
  • the peptide was obtained and lyophilized. Purity was confirmed by HH.
  • ⁇ Production Example 10 Production of TC 014>
  • TC14014 was produced in the same manner as in Production Example 9. However, Cit was used instead of Arg (Pbf) at position 11 and DLys (Boc) was used instead of DCit at position 8 at the introduction of the amino acid at positions 12 to 1.
  • Cit was used instead of Arg (Pbf) at position 11 and DLys (Boc) was used instead of DCit at position 8 at the introduction of the amino acid at positions 12 to 1.
  • TC14016 was produced in the same manner as in Production Example 9. At the introduction of amino acids at the 12th to 1st positions, DLys (Boc) was used instead of DCit at 8th position, and Cit was used instead of Arg (Pbf) at 1st position.
  • TC018 was produced in the same manner as in Production Example 9. However, Arg (Pbf) was used instead of Cit at position 6 and Cit was used instead of Arg (Pbf) at position 1 at the introduction of the amino acid at positions 12 to 1.
  • TC14022 was produced in the same manner as in Production Example 9. However, at the introduction of the amino acid at the 12th to 1st positions, Cit in place of Arg (Pbf) in position 11, DLys (Boc) in place of DCit in position 8, and Arg in place of Cit in position 6 (Pbf), Cit was used in place of Arg (Pbf) at the first position.
  • ⁇ Production Example 15 Production of TA1400K TA14005 to TA14009, TC14001 and TC14004>
  • T3 ⁇ 4 ⁇ i T n Ac-Cit-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Cit-Cit-Cys-Arg-NH 2 (AcTC14022)
  • TC14022 An acetylated form of TC14022 was produced. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group, acetic anhydride (100 eq) -s lysine (100 eq) / DMF treatment, and then acetylated.
  • 1 M TMSBr-thioanisole ZTFA (trifluoroacetic acid) system in the presence of m-cresol (100 eq), ethanedithiol (300 eq) at 25 ° C for 2 hours (when the C-terminal is carboxylic acid) or The reaction was performed for 3 hours (when the C-terminal is an amide form).
  • the protecting group-protected polypeptide resin was treated with 20% piperidine / DMF to remove the Fmoc group, and then treated with 200 mg of resin with 1 M TMSBr-thioanisole ZTFA (trifluoroacetic acid) (in-cresol (100 eq ), In the presence of ethanedithiol (300 eq)), and reacted with 10 mL at 25 ° C for 2 hours.
  • the resin was filtered from the reaction mixture, washed twice with 1 mL of TFA, and the combined filtrate and washings were concentrated under reduced pressure. 30 mL of cold dry ether was added, and the resulting precipitate was separated from the supernatant by centrifugation and decantation. The obtained residue was washed with cold ether, dissolved in 50 mL of 1N acetic acid, and diluted with distilled water to 250 mL.
  • the diluted aqueous solution of the above-mentioned polypeptide was adjusted to pH 7.5 with concentrated aqueous ammonia, and cyclized by air oxidation with aeration.
  • This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (Cosmodil 5C18 AR-II column: acetonitrile-water) and gel-mouth chromatography— (Sephadex G-15, eluent: 0. IN AcOH) to obtain a single peak poly-
  • the peptide was obtained and lyophilized. Purity was confirmed by HPLC.
  • TE14001 was produced in the same manner as in Production Example 17. However, at the introduction of the 12th to 1st amino acids, DLys (Boc;) in place of DGlu (0-1-Bu) at position 8 and DGlu (Ot-Bu) instead of Arg (Pbf) at position 1 Using.
  • TE14002 was produced in the same manner as in Production Example 17. However, at the introduction of the 12th to 1st amino acids, DLys (Boc;) in place of DGlu (0-t-Bu) in position 8 and Glu (Ot-Bu) in place of Arg (Pbf) in position 2 Using. t to () o sBc oa ⁇ ⁇ ⁇ 73 2 ⁇ s8: ⁇ ! ⁇
  • Production Example 24 Production of polypeptide TE 011>
  • the protecting group-protected polypeptide resin was treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group, and then treated with 1M TMSBr-thioanisole ZTFA (trifluoroacetic acid) (m-cresol (100%) eq) and ethanedithiol (in the presence of 300 eq) at 25 ° C for 3 hours.
  • the resin was filtered off from the reaction mixture, washed twice with TFA, and the combined filtrate and washings were concentrated under reduced pressure, water-cooled dry ether was added to the residue, and the resulting precipitate was centrifuged and decanted. Separated from the supernatant. The obtained residue was washed with cold ether, dissolved in 1N acetic acid, and diluted with distilled water. 4. Cyclization by air oxidation
  • the diluted aqueous solution of the above polypeptide was adjusted to pH 7.5 with concentrated aqueous ammonia, and cyclized by air oxidation with air.
  • the aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (Cosmodil 5C18 AR-II column: acetonitrile-water) and gel chromatography (Sephadex G-15, eluent: 0.1 IN AcOH) to obtain a single peak poly. And lyophilized. Purity was confirmed by HPLC.
  • ⁇ Production Example 25 Production of polypeptide TE14012>
  • TE14012 H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-DGlu-Lys-DCit-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Arg-NH 2 (TE14012), TE14012 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, at the introduction of amino acids at positions 12 to 1, DCit was used in place of DGlu (0-1-Bu) at position 8, and DGlu (0-1-Bu) was used instead of Cit at position 6.
  • TE14015 was produced in the same manner as in Production Example 24. On the other hand, DGlu (0-t-Bu) was used instead of Tyr (t-Bu) at position 10 at the introduction of amino acids at positions 12-1.
  • TE14016 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, DGlu (0-1-Bu) was used in place of Cit at position 12 at the introduction of amino acids at positions 1 to 1
  • TF1 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine / DMF to remove the Fmoc group, acetic anhydride (100 eq) -s lysine (100 eq) and acetylated by ZDMF treatment. Te 1M TMSBr- thiophosphorous two sole ZTFA (Torifuruoro acetate) system (m-cresol one eq), ethanedithiol (300 eq) 25 ° C, c tool reacted for 3 hours in the presence) preparation 3 2 polypeptide TF2 Manufacturing>
  • TF2 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group and to give 1H-birazol-1-carboxylpoxamidine (5 eq)-, N-diisopropylethylamine ( 10 eq) guanylation by ZDMF treatment, and then the resin was treated with 1M TMSBr-thioazole ZTFA (trifluoroacetic acid) system (in the presence of in-cresol (100 eq) and ethanedithiol (300 eq)). The reaction was performed at ° C for 3 hours.
  • Production example 33 Production of polypeptide TF3>
  • TF3 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine / DMF to remove the Fmoc group, resulting in 2- (1H-benzotriazole-tolyl) -1,1,3,3-tetramethyl Peronium tetrafluoroborate (5 eq) Tetramethyldanylation by ZDMF treatment, then 1M TMSBr-thioanisole / TFA (trifluoroacetic acid) system (in-cresol (100 eq) And ethanedithiol (in the presence of 300 eq)) at 25 ° C for 3 hours.
  • 2- (1H-benzotriazole-tolyl) -1,1,3,3-tetramethyl Peronium tetrafluoroborate 5 eq
  • 1M TMSBr-thioanisole / TFA trifluoroacetic acid
  • TF5 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group, condensing 4-fluorobenzoic acid (2.5 eq) by the DIPCDI-HOBt method, and then to the resin. On the other hand, the reaction was carried out at 25 ° C. for 3 hours in a 1M TMSBr-thioazione ZTFA (trifluoroacetic acid) system (in the presence of m-cresol (100 eq) and ethanedithiol (300 eq)).
  • Production example 36 Production of polypeptide TF6>
  • TF6 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine / DMF to remove the Fmoc group, and 2-fluorobenzoic acid (2.5 eq) is condensed by the DIPCDI-HOBt method. The reaction was carried out at 25 ° C for 3 hours in a 1M TMSBr-thioanisole / TFA (trifluoroacetic acid) system (in the presence of m-cresol (100 eq) and ethanedithiol (300 eq)). Production Example 37: Production of Polypeptide TF7>
  • TF7 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, at the time of introduction of the amino acid at the 12-position to the 1-position, 5-amino pentanoic acid (protected Fmoc) was introduced instead of Arg (Pbf) at the 1-position.
  • TF8 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, at the introduction of the amino acid at the 12-position to the 1-position, instead of Arg (Pb f) at the 1-position, 5-aminopentanoic acid (protected Fmoc) is introduced. 20% Pi The Fmoc group is removed by peridine / DMF treatment, and 1H-pyrazole-1-carboxamidine (5 eq)-, N-diisopropylethylamine (10 eq) is guanylated by ZDMF treatment, and then 1M TMSBr is applied to the resin.
  • TF9 was produced using the same method as in Production Example 32. However, the 1-position arginine was not condensed. '
  • TF10 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, the 1-position arginine was not condensed.
  • the protecting group-protected polypeptide resin was treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group, treated with succinic anhydride (5 eq) / pyridine to form hemisuccinyl, and then treated with 1M TMSBr-thioanisole. The reaction was carried out for 3 hours in a toluene / TFA (trifluoroacetic acid) system (in the presence of m-cresol (100 eq) and ethanedithiol (300 eq)) at 25 t for 3 hours.
  • TFA trifluoroacetic acid
  • TF11 was produced in the same manner as in Production Example 40. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group, treated with dartartic anhydride (5 eq) / pyridine to form hemisuccinyl, and then treated with 1M TMSBr-thioanhydride. Sole ZTFA (trifluoroacetic acid) (m-cresol (100 eq) in the presence of ethanedithiol (300 eq)) at 25 ° C for 3 hours.
  • Sole ZTFA trifluoroacetic acid
  • m-cresol 100 eq
  • ethanedithiol 300 eq
  • TF12 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, at the introduction of the amino acid at the 12th position to the 1st position, 5-aminoaminopentanoic acid (protected Fmoc) was introduced instead of ArgGPbf) at the 1st position, and the protecting group-protected polypeptide resin was 20% The Fmoc group is removed by piperidine ZDMF treatment, and 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethylperonium tetrafluoroborate (5 eq) After tetramethyldanylation by ZDMF treatment, the resin was then subjected to 1 M TMSBr-thioanisoruno TFA (trifluoroacetic acid) system (in the presence of m-cresol (100 eq) ethanedithiol (300 eq)) at 25 ° C. The reaction was performed for 3 hours.
  • Production Example 43 Production of polypeptide TF15>
  • TF15 was produced in the same manner as in Production Example 24. However, instead of condensing Fmoc-Arg (Pbf) -0H at the 1-position at the introduction of the 12- to 1-position amino acid, Fmoc-Arg (Pbf) -H (aldehyde) is condensed by reductive amination. did
  • TF18 was produced in the same manner as in Production Example 9. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group and to give 2- (1H-benzotriazolyl-tolyl) -1,1,3,3-tetramethyl ⁇ Ronium tetrafluoroborate (5 eq) Tetramethyldanylation by ZDMF treatment, and then 1M TMSBr-thioanisole TFA (trifluoroacetic acid) system (m-cresol (10Q eq), ethanedithiol (300 eq) (In the presence) at 25 ° C for 3 hours.
  • TMSBr-thioanisole TFA trifluoroacetic acid
  • TF20 was produced in the same manner as in Production Example 17. However, at the introduction of the 12- to 1-position amino acid, DLys (Boc :) is substituted for DGlu (0-1-Bu) at position 8, and 6-aminohexane is substituted for Arg (Pbf) at position 1. Acid (protected Fmoc) was used.
  • Production Example 14011 was produced in the same manner as in Production Example 48. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine DMF to remove the Fmoc group, treated with acetic anhydride (100 eq)-s lysine (100 eq) ZDMF, and then acetylated. The reaction was carried out at 25 ° C. for 3 hours in a 1M TMSBr-thioazinolno TFA (trifluoroacetic acid) system (in the presence of m-cresol (100 eq) and ethanedithiol (300 eq)).
  • Production example 50 Production of polypeptide TN14003>
  • TN14003 was produced in the same manner as in Production Example 9. However, DLys (Boc) was used instead of DCit at position 8 at the introduction of the amino acid at positions 12 to 1.
  • TN14005 was produced in the same manner as in Production Example 9. However, Arg (Pbf) was used instead of Cit at position 6 at the introduction of the amino acid at positions 12 to 1.
  • ACTNU005 was produced in the same manner as in Production Example 51. However, the protecting group-protected polypeptide resin is treated with 20% piperidine ZDMF to remove the Fmoc group, acetic anhydride (100 eq) -s lysine (100 eq) acetylated by ZDMF treatment, and then subjected to acetylation. The reaction was performed at 25 ° C. for 3 hours in a 1M TMSBr-thioanisole ZTFA (trifluoroacetic acid) system (in the presence of m-cresol (100 eq) and ethanedithiol (300 eq)).
  • TMSBr-thioanisole ZTFA trifluoroacetic acid
  • Arg (Pbf) residue was introduced into Rink amide resin, and 4-fluorobenzoic acid (2.5 eq) was condensed at the N-terminus by DIPCDI-HOB method to obtain a protecting group-protected polypeptide resin.
  • the diluted aqueous solution of the above-mentioned polypeptide was adjusted to pH 7.5 with concentrated aqueous ammonia, and cyclized by air oxidation with air.
  • This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC. (Cosmodil 5C18 AR-II column: acetonitrile monohydrate) to obtain a single peak polypeptide, which was lyophilized. Purity was confirmed by HPLC.
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure, water-cooled dry ether was added to the residue, and the resulting precipitate was separated from the supernatant by centrifugation and decantation.
  • the obtained residue was washed with cold ether, dissolved in 1N acetic acid, and diluted with distilled water.
  • the diluted aqueous solution of the above-mentioned polypeptide was adjusted to pH 7.5 with concentrated aqueous ammonia, and cyclized by air oxidation with aeration.
  • This aqueous solution was purified by large-scale preparative HPLC (COSMODIL 5C18 AR-II column: acetonitrile water) and gel-mouth chromatography— (Sephadex G-15, eluent: 0. IN AcOH) to obtain a single peak polypeptide. And lyophilized. Purity was confirmed by HPLC.
  • Production example 56 Production of polypeptide 4F-benzoyl TE14011-Et> 4-f luorobenzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Cit-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Ars-NHEt
  • F-benzoyl-TE14011-Et was produced in the same manner as in Production Example 55. However, ethylamine was used in place of methylamine.
  • Production Example 55 4F-benzoyl-TEOl-tyramine was produced in the same manner as in Production Example 5. However, tyramine (P-hydroxyphenylethylamine) was used instead of methylamine.
  • test compound (Table 1; each compound was synthesized in the form of acetate) prepared by diluting 50 ⁇ L of Jurkat human T-cell leukemia cells with a buffer was used for 25 ⁇ l each of 200 pM 125 1-CXCL12 solution. L was dispensed and reacted at room temperature for 1 hour to perform a binding reaction. After the reaction, aspirate the reaction solution with a 96-well GF ZC filter plate. After filtration, the radioactivity of each well was measured by a top count. The inhibitory activity of each test compound was determined assuming that the radioactivity when no test compound was added was 100% and the radioactivity when CXCL12 without radiolabel was added ⁇ was 0%. The results are shown in Table 1 below.
  • Test Example 2 Inhibitory activity of TE-14005 on breast cancer cell migration induced by CXCL12>
  • a transwell filter (polycarbonate filter 1, 8 m diameter, Costar) was treated in a 10 g / mL fibronectin solution at 37 ° C for 6 hours and air-dried. 600 L / well of DMEM (Gibco BRL) containing 100 nM CXCL12 (R & D Systems) and buffer A containing test substance (0.1% serum albumin, 12 mM HEPES) in the lower chamber of the transwell Test substance and human breast cancer MD A— MB— 231 cells in the upper chamber (purchased from American Tissue Culture Collection), 2 x 10 6 1.00 L / well of Buffer A containing cells / mL was added.
  • DMEM Gibco BRL
  • buffer A containing test substance (0.1% serum albumin, 12 mM HEPES
  • Test Example 3 Inhibitory activity of TC14012 and TN14003 on CXCL1 binding to CXCR4 receptor>
  • test compound was prepared by diluting 50 L of Jurkat human T cell leukemia cells prepared in Dulbecco's PBS solution (H 7.0) to 6 xlO 6 cells / mL with a buffer (Table 2; each compound is acetate 25 ⁇ L each of 200 pM 125 1-CXCL12 solution was dispensed and allowed to react at room temperature for 1 hour to perform a binding reaction. After the reaction, the reaction solution was suction-filtered through a 96-well GF / C filter plate, and the radioactivity of each well was measured by a top count. The inhibitory activity of each test compound was determined assuming that the radioactivity when no test compound was added was 100% and the radioactivity when CXCL12 without radiolabel was added ⁇ was 0. The results are shown in Table 2 below. Table 2
  • Transphil filter (polycarbonate filter, 8 m diameter, Costar) was treated in a 1 Og / mL fibronectin solution at 37 ° C for 6 hours, and then air-dried.
  • DMEM Gib oBRL
  • buffer-A containing the test substance (0.1% ⁇ serum albumin, 12 mM HEPES)
  • test substance and human breast cancer MDA-MB-231 cells purchased from American Tissue Culture Collection
  • 100 L / well of buffer-A containing 2 ⁇ 10 6 cells / mL were added to the upper chamber.
  • Control (-) indicates the migration without CXCL12
  • Control (+) indicates the migration when CXCL12 was added MD A-MB by adding CXCL12 -The migratory activity of 231 cells was enhanced, and the CXCL12-induced MDA-MB-231 cell migratory activity, TC-114012, was inhibited to 10 nM.
  • Control (-) indicates the migration without CXCL12 added. Indicates the migratory activity when CXCL 12 was added The migratory activity of SUP-T1 cells was enhanced by the addition of CXCL 12.
  • Transwell filters (polycarbonate filters, 8 m diameter, Costar) were treated in a 1 Og / mL fibronectin solution at 37 ° C and air-dried.
  • CXCL12 R & D Systems
  • Buffer containing 100 nM and 4F-benzoy1-1TN-14400 in the lower chamber of transwell (A) (DMEM containing 0.1% 0 serum albumin and 12 mM HEPES (Gi bc oBRL) in the upper chamber 4Fb enzoy l-TN-14003 and human breast cancer MDA—MB—231 cells (purchased from American Tissue Culture Collection), 2 ⁇ 10 6 ce 11 s / mL It was added 100 L / well buffer one a containing.
  • mice Twenty-eight days after transplantation, the mice were dissected, about 2 mL of a 2% Evans blue solution was injected from the trachea, and the lungs were stained. Lungs were removed, immersed in Bouin's solution, stained, and fixed. The metastatic foci (the area stained in yellow) was visually observed to determine whether there was clear anti-metastatic activity.
  • Fig. 5 shows the results. In the lungs of the control group, parts stained yellow were uniformly observed, and metastasis to the lungs was observed. On the other hand, in the 4Fbenzoyl-TN-14003 administration group, a case was observed in which the rate of yellow staining was small. In comparison, it was observed that metastasis was suppressed in the 4 F benzoy 1 -TN-14003 administration group.
  • RPMI-1640 and fetal calf serum (FCS) from BioWhittaker, penicillin-streptomycin solution, RPMI-1040 (no phenol red) and HEPES from Invitrogen, BSA from Sigma, human SDF-1 «(CXCL12) Purchased from Genzyme.
  • the human T lymphocyte cell line Jurkat was purchased from ATCC and cultured in RPMI-1640 10640FCS. 4F-benzoyl-TN14003 was dissolved in PBS and used for the experiment.
  • a migration reaction was performed using a 24-well Transwell (Costar, polycarbonate membrane, pore size 5 m). 600 L of SDF-la (final concentration 1 ng / mL) was added to the lower layer of the Transwell, 5 ⁇ 10 5 cells (200 L) were added to the insert, and the mixture was reacted at 37 ° C. for 4 hours. Cells were pre-incubated with drug for 30 minutes at 37 ° C.
  • the migration reaction was performed in RPMI-1640 medium containing 20 l / L HEPES and 0.5 l BSA. Cells that migrated to the lower layer were collected, and the number of cells was counted using a Coulter Counter. The inhibition rate (%) for the migration reaction by each concentration of the drug was calculated from the following equation, and the inhibition rate was used to calculate IC 5 . Values were calculated. ) )
  • Jurkat cells showed strong cell migration reactivity to SDF-1a ;. 4F-benzoyl-TN14003 inhibited this reaction in a concentration-dependent manner, and its IC 5 .
  • the value was 0.65 nniol / L.
  • Spleens were collected from BALB / c mice (male, Nippon Charles River), used as a single cell suspension, and erythrocytes were disrupted to prepare splenocytes.
  • Sheep preserved blood was purchased from Senichi Yuichi Biological Materials. Sheep preserved blood was washed twice with physiological saline, suspended in physiological saline, and used as shedding red blood cells (SRBC). Since the 0D541 value of oxyhemoglobin when the SRB suspension 1.0 X 10 9 cells / mL was hemolyzed with 14 volumes of distilled water was assumed to be approximately 0.700, the SRBC density was adjusted accordingly.
  • mice Male, 6 weeks old, Japan Chiya one Rusuriba I
  • 2xl0 of 7 cells / 50 i 1 SRBC were sensitized by subcutaneously in the left hind paw ⁇ of.
  • 10 8 cells / 501 of SRBC was subcutaneously administered to the right hind paw to induce a DTH reaction.
  • the thickness of the right hind limb foot was measured using a digital micrometer (Mitsutoyo CD-15B), and the increase in foot thickness (MI) due to swelling was measured by the DTH reaction. Index.
  • 4F-benzoy TN14003 was dissolved in PBS and continuously administered using an Alzet osmotic pump (Alza, 0.5 L / hr, 7-day continuous type). The osmotic pump was implanted subcutaneously in the back under ether anesthesia the day before sensitization. As a control, a pump injected with PBS was similarly implanted. 4F_benzoy TN14003 was administered at doses of 4.8, 24 and 120 / zg / day.
  • FK-506 was purified by a method known per se (Kino T. et al., J. Antibiot., 1987 40 (9): 1249-55). Methotrexate was purchased from Wako Pure Chemical Industries, indomethacin was purchased from Sigma, type II collagen was purchased from Collagen Technology Workshop, Freimd's complete adjuvant (FCA) was purchased from Difco, and anti-mouse IgG2a antibody was purchased from Zymed. '
  • Escherichia coli collagen was dissolved at a concentration of 2 mg / mL with a 0.05 mol / L acetic acid solution, and an emulsion was prepared with an equal amount of FCA.
  • DBA / 1JN mice male, 6-week-old, Japan charles liver
  • Booster immunization was performed similarly 21 days later.
  • Body weight and hind heel thickness measurements and arthritis scoring were performed for two weeks after the booster immunization. The arthritis score was scored on a 0-3 scale for each limb and evaluated as a total (out of 12) (0, normal; 1, mild or single finger swelling; 2, moderate or multiple finger swelling) 3, severe swelling). Limbs and serum were collected two weeks after the boost.
  • Indomethacin (1 mg / kg), methotrexate (3 mg / kg) and FK-506 (10 mg / kg) were suspended in 0.5% methylcellulose and boosted in a volume of 0.1 mL / lOg body weight.Oral administration daily for 2 weeks from the day of immunization did.
  • the control group was orally administered the same volume of 0.5% methylcellulose solution.
  • 4F-benzoy TN14003 was dissolved in PBS and continuously administered using an Alzet osmotic pump (Alza, 0.5 ⁇ 7 ⁇ 2 weeks). An osmotic pump was implanted subcutaneously on the back of the mouse under ether anesthesia the day before the booster immunization. versus A pump into which PBS was injected as a control was similarly embedded. Evaluations of each drug were given with values 2 weeks after booster immunization.
  • 4F-benzoyl-TN14003 (120 / day) showed a significant inhibitory effect on heel swelling of the hind limbs, arthritis score and weight loss. It also showed a tendency to suppress the increase in anti-type III collagen-specific IgG2a antibody titer (FIG. 10). These inhibitory effects were equal to or better than the above-mentioned existing drugs.
  • the peptide compound of the present invention having CXCR4 antagonistic activity inhibits the binding between CXCR4 and CXCL12 / SDF-1, one of the cancer types expressing CXCR4, for example, oral cancer, pharyngeal cancer, lip cancer, Tongue cancer, gingival cancer, nasopharyngeal cancer, esophageal cancer, stomach cancer, small intestine cancer, colon cancer including colon cancer, liver cancer, gallbladder cancer, Teng's cancer, nasal cavity cancer, lung cancer, osteosarcoma, soft tissue cancer, skin cancer, It can suppress the migration reaction of cancer cells such as melanoma, breast cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, testis cancer, penis cancer, bladder cancer, kidney cancer, brain tumor, thyroid cancer, lymphoma, leukemia, etc.
  • cancer cells such as melanoma, breast cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, testis cancer, penis cancer, bladder cancer, kidney cancer, brain tumor, thyroid cancer
  • the peptide compound of the present invention can suppress the migration reaction of immune cells induced by CXCL12ZSDF-1, and is useful as a preventive and / or therapeutic drug for rheumatoid arthritis.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本発明は、CXCR4拮抗作用を有するペプチドまたはそのアミド、そのエステルもしくはその塩を含有する、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び/又は治療剤を提供する。本発明はまた、CXCR4拮抗作用を有する新規ペプチドまたはそのアミド、そのエステルもしくはその塩を提供する。

Description

明 細 書
CXCR4拮抗薬およびその用途 技術分野
本発明は、 CXCR 4拮抗作用を有する化合物、 並びにそれを含有する癌 および慢性関節リユーマチの予防及び Z又は治療剤に関する。 背景技術 .
多くのホルモンや神経伝達物質は細胞膜に存在する特異的なレセプタ一を 通じて生体の機能を調節している。 これらのレセプ夕一の多くは共役してい るグァニンヌクレオチド結合性蛋白質 (guanine nucleotide - binding protein, 以下、 G蛋白質と略称する場合がある) の活性化を通じて細胞内 のシグナル伝達を行う。 また、 これらのレセプターは、 7個の細胞膜貫通領 域を有する共通した構造をもっていることから、 G蛋白質共役型レセプ夕一 あるいは 7回膜貫通型レセプ夕一 (7TMR) と総称される。
このような G蛋白質共役型レセプ夕一蛋白質の一つとして、 CXCR4遺 伝子によってコードされるヒト型レセプター蛋白質 [Journal of
biological chemistry, 第 273巻, 第 4754頁 (1998年) ] が知られている ( また、 上記の CXCR 4に対す リガンドとして機能する生理活性べプチ ドとして、 CXCL 12ZSDF— 1 [Science, 第 261卷, 600- 603頁 (1993年) ] が知られている。
藤井 [国際公開第 02Z20561号パンフレツト (2003年 3月 14 日) ] には、 CXCR 4に対して拮抗作用を有するペプチド性化合物が開示 されており、 それらの化合物が抗 H I V活性を有することが記載されている ( 癌の転移は患者の余命を左右する重要な要素である。 CXCR 4は乳癌な どにおいてその発現が宂進し、 さらに転移先の臓器 (リンパ節、 肺、 肝臓お よび骨) においてそのリガンドである CXCL 12/SDF- 1ひの発現が 亢進していることが報告されている [Nature, 第 410卷, 50- 56頁 (2001 年) ] 。 また、 慢性関節リューマチは、 C D 4陽性 T細胞の関節腔液への浸 潤がその病状の進展に影響を与える。 慢性関節リュ一マチ患者の関節腔液内 'の C D 4陽性記憶 T細胞において C X C R 4遺伝子発現が亢進し、 関節滑膜 組織において C X C L 1 2 / S D F - 1 α遺伝子発現が亢進していることが 報告されている [Journal of Immunology, 第 165巻, 6590-98頁 (2000 年) ] 。
本発明は、 C X C R 4拮抗作用を有する化合物を甩いた新規な癌ならびに 慢性関節リューマチの予防及び Z又は治療手段の提供を目的とする。 また、 本発明は、 癌ならびに慢性関節リユーマチの予防及び Z又は治療活性を有す る新規化合物、 特に共通の構造を有する種々のオリゴペプチドを提供する。 発明の開示
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、 これまでエイ ズの化学療法剤として有効であると考えられてきた C X C R 4拮抗作用を有 する化合物が、 転移を含む癌ならびに慢性関節リュ一マチの予防及び Z又は 治療に有効であることを見出し、 さらに研究を行った結果、 本発明を完成す るに至った。
すなわち、 本発明は、 .,
( 1 ) 下記式 (l a )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Al-A2-A3-Cys-Tyr-A4-A5-A6-A7-A8-A9-Al O-Cys-Al 1 ( l a )
(式中、
A 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
A 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し; '
A 4、 A 5及び A 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
A 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
A 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
A l lは、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、, グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩を含有してなる、 癌または慢性関節リユーマチの予防及び Z又は治 療剤、
( 2 ) 上記式 (l a ) において、
A 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 シトルリン、 ァ ラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失しており ;
A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 シトルリ ン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合には、 アルギニンまたは グルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合には、 N末端で誘導体化 されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 4は、 アルギニン、 シトルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表 し;
A 5は、 アルギニン、 シトルリン、 ァラニン、 リジン又はグルタミン酸残 基を表し; '
A6は、 リジン、 ァラニン、 シトルリン又はグルタミン酸残基を表し; A 7は、 プロリン又はァラニン残基を表し;
A8は、 チロシン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 9は、 アルギニン、 シトルリン又はグルタミン酸残基を表し;
A 10は、 シトルリン又はグルタミン酸残基を表し;
Al 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン 酸残基を表すものである、 (1) 記載の予防及び Z又は治療剤。
(3) 下記式 (I b)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Bl-B2-B3-Cys-Tyr-B4-B5-B6-B7-B8-B9-B10-Cys-Bll (I b)
(式中、
B 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいグルタミン酸残基であるか、 又は欠失しており ;
B 2は、 B 1が N末端で誘導体ィ匕されていてもよいグルタミン酸残基であ る場合には、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 B 1が欠失してい る場合には、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン 酸残基を表し;
B3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
84、'85及び89は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
B 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
B7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
B 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
B 10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し; B l lは、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 Cy sはシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、 '
(4) B 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいグルタミン酸残基である、 (3) 記載のペプチド又はその塩。 '
(5) 下記式 (I c)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Cl-C2-C3-Cys-Tyr-C4-C5-C6-C7-C8-C9-C10-Cys-Cll (I c)
(式中、
C 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シ.トルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である力 又は欠失 しており ;
C 2は、 C 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 グルタミン酸残基を表し、 C 1が欠失している場合には、 N末端で誘導 体化されていてもよいグルタミン酸残基を表し;
C 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
C4、 C 5及び C 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
C6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、
ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
C7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、
ン又はアルギニン残基を表し;
C8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 マラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
C 10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
C l lは、 c末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシ卜ルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、
( 6 ) 下記式 (I d )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Dl-D2-D3-Cys-Tyr-D4-D5-D6-D7-D8-D9-Dl O-Cys-Dl 1 ( I d )
(式中、
D 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
D 2は、 D 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に, は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 D 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し; ,
D 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
D 4は、 ダル夕ミン酸残基を表し;
D 5及び D 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリ ン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
D 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
D 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;.
D 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し; D 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギユン又はリジン残基を表 . し;
D 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、
( 7 ) 下記式 (I e )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
El-E2-E3-Cys-Tyr-E4-E5-E6-E7-E8-E9-E10-Cys-El l ( I e )
(式中、
E lは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
E 2は、 E 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 E 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
E 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
E 4及び E 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリ ン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
E 5は、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し; .
E 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 マラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
E 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
E 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
E 10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
E 11は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシ卜ルリン残基を表し;
上記式中、 Cy sはシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、
(8) E5は、 グルタミン酸残基を表す、 (7) 記載のペプチド又はその塩、 (9) 下記式 (I f )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Fl-F2-F3-Cys-Tyr-F4-F5-F6-F7-F8-F9-F10-Cys-Fll (I f )
(式中、
F 1は、 N末端で誘導体ィ匕されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
F2は、 F 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 F 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
F 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
F4、 F 5及び F 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
F 6は、 ダル夕ミン酸残基を表し;
F7は、 プロリン、. グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
F 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
F 10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;, '
F 11は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 Cy sはシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、
(10) 下記式 (I g) '
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Gl-G2-G3-Cys-Tyr-G4-G5-G6-G7-G8-G9-Gl O-Cys-Gl 1 (I g)
(式中、
Glは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である力、 又は欠失 しており ; '
G2は、 G 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 G1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
G3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
G4、 G 5及び G 9は、 独立して、 アルギニン、 リ.ジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
G6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
G7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
G8は、 グルタミン酸残基を表し; G10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
G11は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 Cy sはシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、
(11) 下記式 (I h)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12. 13 14
Hl-H2-H3-Cys-Tyr-H4-H5-H6-H7-H8-H9-H10-Cys-Hll (I )
(式中、
HIは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 ,チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
H2は、 H 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 HIが欠失している場合に は、 N末端で誘導体ィヒされていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
H3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
114及び115,は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリ ン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
H6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シ卜ルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
H7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
H8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し; H 9は、 グルタミン酸残基を表し;
H 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
H 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、
( 1 2 ) 下記式 (I i )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
11-12- 13- Cys- Tyr-I4- 15- 16- 17- 18- 19- 110- Cys - 111 ( I i )
(式中、
I Iは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
1 2は、 I 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ卜ルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 I Iが欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
I 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し; ' '
1 4、 I 5及び I 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
1 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、
ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
1 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、
ン又はアルギニン残基を表し;
I 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
I 1 0は、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表し;
I 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、
( 1 3 ) 下記式 ( I j )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Jl-J2-J3-Cys-Tyr-J4-J5-J6-J7-J8-J9-J10-Cys-Jl l ( I j )
(式中、
J 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
J 2は、 J 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 J 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
J 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
J 4、 J 5及び J 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 才ルニチン、 シ トルリン、'ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
J 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
J 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
J 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し; J 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
J 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいグルタミン酸、 リジン又は シトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩、
( 1 4 ) 以下の(1)〜(58)のいずれかのペプチドまたはその塩:
(1) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (2) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(3) Ac-Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(4) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH
(5) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (6) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(7) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH
(8) Ac-Ci t- Arg- Nal- Cys- Tyr- Arg- Lys- DLys- Pro- Tyr- Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH
(9) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci卜 Cys- Arg - NH2 ; '
(10) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg- NH2 ;
(11) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- N¾ ; '
(12) Ac-C i t -Ar g-N 1 -Cy s-Ty r-Ar g-Ly s-DC i t-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys- Arg - NH2
(13) Ac- Arg- Arg- Na卜 Cys- Tyr- Arg- Lys - DCi t- Pro- Tyr-Ci t-Ci t- Cys- Arg- NH2 ;
(14) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci i-Cys-Arg- t to
〇 x Cm
o
CO W K
t O oo
()31 、 ^
Figure imgf000015_0001
t to 〇
Figure imgf000016_0001
NH2 ;
(49) ACA-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- OH;
(50) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Arg-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2
(51) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Arg-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2 ;
(52) Ac- Arg- Arg-Na卜 Cys- Tyr-Ci t- Lys- DLys-Pro-Tyr- Arg- Ci t- Cys-Arg- N¾ ;
(53) Ac-Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-Ar g-Ly s-DC i t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2 ;
(54) 4F-benz oy 1 -Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NH2
(55) 4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t - Cys-Arg-NHMe
(56) 4F-benz oy 1 -Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NHEt
(57) 4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NHiPr
(58) 4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t - Cys-Arg-tyramine
(各配列中、 N末端アミノ酸の左の記号はアミノ基が誘導体化されているか、 またはされていないことを示し、 Hは誘導体化されていないことを、 Acはァ セチル基を、 guanylはグァニル基を、 succ inylはスクシニル基を、 glutarylはダル夕リル基を、 TMguanylはテトラメチルダァニル基を、 2F - beozoylは 2—フルォロベンソィル基を、 4F- benzoylは 4一フルォロベンゾ ィル基を、 APAは 5—ァミノペンタノィル基を、 ACAは 6—ァミノへキサノ ィル基を、 desamino- Rは 2 _デスァミノ—アルギニル基を、 deaminoTMG- APA は下記式(I I)を、 e-,Ν
Figure imgf000018_0001
nelf inabiryl-succinylは下記式 (III) を、
Figure imgf000018_0002
Figure imgf000018_0003
(IV)
R - C¾は下記式 (V)
Figure imgf000019_0001
をそれぞれ示し、 Argは L—アルギニン残基を、 Nalは L— 3— (2—ナフ チル) ァラニン残基を、 Cysは L一システィン残基を、 Tyrは L—チロシン 残基を、 Citは L—シトルリン残基を、 Lysは -リジン残基を、 DLysは D 一リジン残基を、 Proは L—プロリン残基を、 DCit は D—シトルリン残基を、 DGluは D -グル夕ミン酸残基を、 Gluは -ダル夕ミン酸残基をそれぞれ示 し、 2つのシスティン残基は分子内ジスルフィド結合により連結しており、 C末端アミノ酸の右の記号は力ルポキシル基が誘導体化されているか、 また はされていないことを示し、 0Hは誘導体化されていないことを、 2はアミ ノ基で、 匪 eはメチルァミノ基で、 NEtはェチルァミノ基で、 NiPrはイソプ 口ピルアミノ基で、 tyramineは p-ヒドロキシフエニルェチルアミソ基でァ ミド化されていることをそれぞれ示す) 、 .
(15) (3) 〜 (14) のいずれかに記載のペプチド又はその塩を含有し てなる医薬、
(16) CXCR4拮抗剤である (15) 記載の医薬、
(17) 癌または慢性関節リューマチの予防及び Z又は治療剤である (1 5) 記載の医薬、 '
(18) 癌種が乳癌または脬臓癌である (17) 記載の医薬、
(19) 哺乳動物に対して (3)。〜 (14) のいずれかに記 ;載のペプチド又 はその塩の有効量を投与することを特徴とする、 癌または慢性関節リュ一マ チの予防 ·治療方法、
(20) 癌または慢性関節リューマチの予防及び Z又は治療剤を製造するた めの (3) 〜 (14) のいずれかに記載のペプチド又はその塩の使用、
(21) 哺乳動物に対して下記式 (I a) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Al-A2-A3-Cys-Tyr-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-Cys-Al l ( I a )
(式中、
A lは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
A 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
A 4、 A 5及び A 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ,ン又はアルギニン残基を表し;
A 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ , トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
A 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
A l lは、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩の有効量を投与することを特徴とする、 癌または慢性関節リューマ チの予防,治療方法、 および ( 2 2 ) 癌または慢性関節リューマチの予防及び/又は治療剤を製造するた めの下記式 (l a ) ,
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Al-A2-A3-Cys-Tyr-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-Cys-Al l ( I a )
(式中、
A 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
A 2は、 A 1が N末端で誘導体ィ匕されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体ィヒされていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
A 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
A 4、 A 5及び A 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し; .
A 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
A 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
A 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
A l lは、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩の使用、
等を提供する。
本発明のぺプチド性化合物は強力な C X C R 4拮抗作用を有し、 C X C R 4と CXCL 12/SDF— 1との結合を阻害することにより、 癌および慢 性関節リューマチに対して治療効果を示す。 . ' 図面の簡単な説明
図 1は、 CXCL 12によって誘導される乳癌細胞遊走性に対する TE— 14005の阻害活性を示す。 縦軸は細胞遊走性 (OD 550 nmの吸光 度) を示す。 左より CXCL 12無添加時 (陰性対照) 、 CXCL 12添加 時 (陽性対照) 、. CXCL 12および TE— 14005 10 nM添加時、 CXCL 12および TE_ 14005 Ι Ο ΟηΜ添加時、 CXCL 12お よび TE— 140 0 5 I M添加時、 CXCL 1 2および TE— 1400 5 10 M添加時の結果を示す (平均値 +標準偏差、 n=2) 。 *は各 T E- 14005添加群の、 陽性対照群との有意性を示す (Wi l l i ams 検定、 p≤0.025) 。
図 2は、 CXCL 12によって誘導される乳癌細胞遊走性に対する TC_ 14012の阻害活性を示す。 縦軸は細胞遊走性 (OD 550 nmの吸光 度) を示す。 左より CXCL 12無添加時 (陰性対照) 、 CXCL 12添加 時 (陽性対照) 、 CXCL 12および TC— 14012 1 nM添加時、 C XCL 12および TC_ 14012 10 nM添加時、 CXCL 12および TC- 14012 Ι Ο ΟηΜ添加時、 C X C L 12および T C一 1401 2 1 M添加時の結果を示す (平均値 +標準偏差、 n = 2) 。 *は各 TC - 14012添加群の、 陽性対照群との有意性を示す (Wi 1 1 i ams検 定、 p≤0.025) 。
図 3は、 CXCL 12によって誘導される T細胞由来白血病細胞の遊走性 に対する 4Fb enz oy 1 -TN- 14003の阻害活性を示す。 縦軸は 細胞遊走性 (細胞数) を示す。 左より CXCL 12無添加時 (陰性対照) 、 CXCL 12添加時 (陽性対照) 、 C X C L 12および 4 F b e n z o y 1 -TN~ 14003 I nM添加時、 C X C L 12および 4 F b e n z o y 1 -TN- 14003 Ι ΟηΜ添加時、 C X C L 12および 4 F b e n z o y 1 -TN- 14003 100 nM添加時、 CXCL 12および 4 Fb e n z oy l— TN— 14003 1 μΜ添加時の結果を示す (平均値 +標 準偏差、 η=2) 。 *は各 4Fb e n z o y 1— TN— 14003添加群の、 陽性対照群との有意性を示す (Wi l l i ams検定、 p≤0.025) 。
図 4は、 CXCL 12によって誘導される乳癌細胞遊走性に対する 4 Fb enz oy l -TN- 14003の阻害活性を示す。 縦軸は細胞遊走性 (O D 550 nmの吸光度) を示す。 左より CXCL 12無添加時 (陰性対照) 、 CXCL 12添加時 (陽性対照) 、 C X C L 12および 4 Fb e n z oy 1 -TN- 14003 Ι ΟηΜ添加時、 C X C L 12および 4 F b e n z o y 1 -TN- 14003 Ι Ο ΟηΜ添加時、 C X C L 12および 4 F b e n z oy 1 -TN- 14003 1 添加時、 CXCL 12および 4 Fb e nz oy l— TN— 14003 10 M添加時の結果を示す (平均値 + 標準偏差、 n=2) 。 *は各 4Fb e n z oy 1—TN— 14003添加群 の、 陽性対照群との有意性を示す (Wi l l i ams検定、 p≤0.025) 。 図 5は、 ヒト乳癌細胞を移植されたマウスにおける 4Fb e nz oy l— TN— 14003の肺転移抑制活性を示す肺組織染色像である。 図 5 Aが対 照群 (生食投与群) の肺、 図 5 Bが 4 F b e n z oy 1 -TN- 14003 投与群の肺の像である。
図 6は、 SDF_l a (CXCL 12) によって誘導される Jurkat細胞 の遊走性に対する 4Fb e n z oy 1—TN— 14003の阻害活性を示す。 縦軸は細胞遊走性 (inputに対する移動細胞の割合) を示す。 左より SDF 一 l a無添加時、 SDF— 1 «添加時、 SDF— 1 および 4 F b e n z 0 y 1 -TN- 14003 Ι Ο ρΜ添加時、 S D F— 1 αおよび 4 F b e n z oy 1 -TN- 14003 100 pM添加時、 SDF— l aおよび 4F b en z oy l -TN- 14003 1 nM添加時、 SDF— 1 «および 4 Fb e n z oy 1 -TN- 14003 Ι ΟηΜ添加時、 SDF— l aおよ び 4 F b e n z o y 1— TN— 14003 100 nM添加時の結果を示す。 図 7は、 SDF— l a (CXCL 1 2) によって誘導されるマウス脾細胞 の遊走性に対する 4F b e n z oy l — TN— 140 0 3の阻害活性を示す。 縦軸は細胞遊走性 (inputに対する移動細胞の割合) を示す。 左より SDF 一 1 α無添加時、 SDF— 1 ひ添加時、 SDF— 1 および 4F b e η ζ ο y 1 -TN- 140 0 3 Ι Ο ρΜ添加時、 S D F— 1 αおよび 4 F b e n z o y 1 -TN- 140 03 1 0 0 pM添加時、 SDF— l aおよび 4F b e n z oy l -TN- 140 0 3 1 nM添加時、 SDF— l aおよび 4 Fb e n z oy l -TN- 1400 3 Ι Ο ηΜ添加時、 St>F— l aおよ び 4 F b e n z o y 1 — TN— 1 40 0 3 1 0 0 nM添加時の結果を示す c 図 8は、 SRBC誘発によるマウス DTH反応に対する 4F b e n z o y 1 -TN- 140 0 3の抑制効果を示す。 縦軸は蹿脹による足躕の厚みの増 力 Π (平均値土標準誤差、 n=7) を示す。 左より PBS投与 (対照) 群、 4 Fb e n z oy 1 -TN- 140 0 3 4. 8 g/日投与群、 4F b e n z oy 1 -TN- 140 0 3 2 日投与群、 4 F b e n z oy l — TN- 140 0 3 1 20 gZ日投与群の結果を示す。 *は P≤0.. 0 2 5 (PBS投与群との比較; Wi 1 1 i ams検定) を示す。
図 9は、 マウスコラーゲン関節炎に対する既存薬の作用を示す。 図 9 Aは 体重の変動 [縦軸:体重 (g) (平均値土標準誤差、 n= 8) 、 横軸:追加 免疫後の日数] 、 図 9 Bは発病率の変動 [縦軸:発病率 (%) (n=8) 、 横軸:追加免疫後の日数] 、 図 9 Cは関節炎スコアの変動 [縦軸:関節炎ス コア (平均値土標準誤差、 n = 8) 、 横軸:追加免疫後の日数] 、 図 9Dは 踵厚の変動' [縦軸:踵厚 (mm) (平均値土標準誤差、 n = 8) 、 横軸:追 加免疫後の日数] をそれぞれ示す (口:正常マウス群、 園:薬物非投与 (対 照) 群、 △:インドメ夕シン投与群、 ▲:メトトレキサート投与群、
K50 6投与群) 。 また、 図 9 Eは追加免疫 2週後の後肢腫脹に及ぼす各薬 物の効果 [縦軸:後肢重量 (mg) (平均値土標準誤差、 n=8) ] 、 図 9 Fは追加免疫 2週後の抗ゥシ II型コラーゲン IgG2a抗体価に及ぼす各薬物 の効果 [縦軸:抗体価 (A450) (平均値士標準誤差、 n=8) ] をそれぞれ 示す [左より正常マウス群、 薬物非投与 (対照) 群、 (IND) 投与群、 メト卜レキサート (MTX) 投与群、 FK 506投与群] を示 す] 。 《は P≤0. 01 (正常マウス群との比較; t検定) 、 *および は それぞれ P≤0. 05およびは P≤0. 01 (薬物非投与群との比較; Dunne U検定) を示す。
図 10は、 マウスコラーゲン関節炎に対する 4Fb e n z oy 1— TN— 14003の作用を示す。 図 10 Aは体重の変動 [縦軸:体重 (g) (平均 値土標準誤差) 、 横軸:追加免疫後の日数] 、 図 10 Bは発病率の変動 [縦 軸:発病率 (%) 、 横軸:追加免疫後の日数] 、 図 10 Cは関節炎スコアの 変動 [縦軸:関節炎スコア (平均値土標準誤差) 、 横軸:追加免疫後の日 数] 、 図 10Dは踵厚の変動 [縦軸:踵厚 (mm) (平均値士標準誤差) 、 横軸:追加免疫後の日数] をそれぞれ示す [口:正常マウス群 (n=8) 、 ■:薬物非投与 (対照) 群 (n= 12) 、 A : 4Fb e n z oy l一 TN— 14003投与群 (n=l l) ] 。 また、 図 10 Eは追加免疫 2週後の後肢 腫脹に及ぼす 4 F b enz oy l -TN- 14003の効果 [縦軸:後肢重 量 (mg) (平均値土標準誤差) ] 、 図 1 OFは追加免疫 2週後の抗ゥシ II 型コラーゲン IgG2a抗体価に及ぼす 4Fb e n z oy 1一 TN— 14003 の効果 [縦軸:抗体価 (A450) (平均値土標準誤差) :] をそれぞれ示す [左 より正常マウス群 (n=8) 、 薬物非投与 (対照) 群 (n=12) 、 4Fb e n z oy 1 -TN- 14003投与群 (n=l 1) を示す] 。 ##は P≤0. 01 (正常マウス群との比較; t検定) 、 は P≤0. 01 (薬物非投与群 との比較; t検定) を示す。 発明を実施するための最良の形態
本明細書に記載されるべプチドは、 ぺプチド標記の慣例に従って左端が N 末端 (ァミノ末端) 、 右端が C末端 (カルボキシル末端) である。
本明細書および図面において、 アミノ酸などを略号で表示する場合、 IU P AC - I UB Commision on Biochemical Nomenclature による田各号ある いは当該分野における慣用略号に基づくものであり、 その例を下記する。 ま たアミノ酸に関し光学異性体が存在する場合は、 特に明示しなければ L体を 示すものとする。
G 1 yまたは G :グリシン
A 1 aまたは A :ァラニン
Va 1または V . :バリン
L e uまたは L :ロイシン
I 1 eまたは I :イソロイシン
S e rまたは S :セリン
Th rまたは T :スレオニン
Cy sまたは C :システィン
Me tまたは M :メチォニン
G 1 uまたは E :ダル夕ミン酸
A s pまたは D :ァスパラギン酸
L y sまたは K : リジン
A r gまたは R :アルギニン
H i sまたは H : ヒスチジン
Ph eまたは F :フエ二ルァラニン
Ty rまたは Y :チロシン
T r pまたは W : トリブトファン
P r oまたは P :プロリン
As nまたは N :ァスパラギン
G 1 nまたは Q :ダル夕ミン
p G 1 u : ピログルタミン酸
Na 1 : 3— (2—ナフチノ
C i t :シトルリン
DL y s : D—リジン
DC i t : D—シトルリン
DG 1 u : D—グルタミン酸
Me :メチル基
E t :ェチル基 B u :ブチル基
Ph :フエニル基
また、 本明細書中で繁用される置換基、 保護基および試薬を下記の記号で 表 る。
BHA:ベンズヒドリルァミン
To s : p—トルエンスルフォニル
CHO:ホルミル
HONB: N—ヒドロキシ— 5—ノルポルネン一 2, 3—ジカルポキシイミ
OcHe X:シクロへキシルエステル
B z 1 :ベンジル
C 1 2— B z 1 :ジクロロべンジル
B om:ベンジルォキシメチル
Z :ベンジルォキシカルポニル
B r -Z : 2—ブロモベンジルォキシカルポニル
B o c : t一ブチルォキシカルボニル
DCM:ジクロロメタン
HOB t : 1—ヒドロキシベンズトリアゾ一ル
DCC : N、 N, —ジシクロへキシルカルポジイミド
TFA: トリフルォロ酢酸 ·
D I EA:ジイソプロピルェチルァミン
Fmo c : N— 9—フルォレニルメトキシカルポニル
DNP:ジニトロフエニル
B um:夕一シャリーブ卜キシメチル
T r t : 卜リチル
Ac :ァセチル
g u a n y 1 :クァニリレ
s u c c i n y 1 :スクシ二ル g 1 u t a r y 1 :グル夕リル
TMgu any 1 :テトラメ ' ルダァニル
2 F-b e o z oy l : 2—フルォロベンソィル
4F— b e n z oy l : 4—フルォロベンゾィル
APA: 5—ァミノペンタノィル
ACA: 6—ァミノへキサノィル
d e s am i n o -R: 2—デスァミノ—アルギニル d e am i n oTMG-APA:下記式 (II)
Figure imgf000028_0001
AZT-g 1 u t a r y 1 :下記式 (IV)
Figure imgf000029_0001
尚、 ペプチドの N末端アミノ酸において 「H―」 とは末端アミノ基が誘導 体化されていないことを示し、 C末端アミノ酸において 「一 OH」 とは末端 力ルポキシル基が誘導体化されていないことを示す。
本発明は、 C X C R 4拮抗作用を有する化合物を含有する癌ならびに慢性 関節リユーマチの予防及び Z又は治療剤を提供する。 「C X C R 4拮抗作用 を有する化合物」は、 CXCR4とその生理的リガンドである CXCL 12 /SDF- 1 aとの結合を拮抗的に阻害して抗癌作用 (例えば、 遊走阻害作 用、 浸潤阻害作用および抗転移作用など) または抗慢性関節リューマチ作用 (例夫ば、 遊走阻害作用) を発揮するものであり、 より具体的には、 下記式 (I a)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Al-A2-A3-Cys-Tyr-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-Cys-All (l a)
(式中、
A 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ; A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リ オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
A 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
A 4、 A 5及び A 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ 卜ルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
A 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を ¾し;
A 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
A l lは、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシ卜ルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい)
で示されるペプチド、 そのアミド、 そのエステルまたはその塩 (以下、 「本 発明のペプチド」と総称する場合もある) が挙げられる。
上記式 (I a ) で示される A 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいァ ルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン 酸残基 (L体であっても D体であってもよい) を表すか、 又は欠失しており、 好ましくは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 シトルリン、 ァラニン若しくは D—グルタミン酸残基を表すか、 又は欠失している。 「N 末端で誘導体化され」たものとしては、 例えば、 ホルミル基;ァシル基、 例 えば、 ァセチル基、 プロピオニル基、 プチリル基、 ペンタノィル基、 へキサ ノィル基等の C 2_6アルカノィル基、 ベンゾィル基、 置換ベンゾィル基
(例: 2-フルォロベンゾィル、 3-フルォロベンゾィル基、 4-フルォロベンゾ ィル基、 2-ブロモベンゾィル基、 3-ブロモベンゾィル基、 4-ブロモベンゾィ ル基、 2-ニトロベンゾィル基、 3-ニトロベンゾィル基、 4 -ニトロベンゾィル 基) 等のァリ一ルカルポニル基、 サクシ二ル基、 ダル夕リル基;ニコチニル 基;イソニコチニル基;アルキルスルフォニル基 (例:メタンスルフォニル 基、 エタンスルフォニル基、 プロパンスルフォニル基、 カンファースルフォ ニル基) ;ァリ一ルスルホニル基 (例: P-トルエンスルフォニル基、 4-フル ォロベンゼンスルフォニル基、 メシチレンスルフォニル基、 4-ァミノべンゼ ンスルフォニル基、 ダンシル基、 4 -ブロモベンゼンスルフォニル基) などで 保護されているもの等が挙げられるが、 これらに限定されない。 あるいは N 末端のアミノ基を欠失していていもよい。
上記式 (I a ) で示される A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていても よいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはダル 夕ミン酸残基 (L体であっても D体であってもよい) である場合には、 アル ギニンまたはグルタミン酸残基 (L体であっても D体であってもよい) を表 し、 A 1が欠失している場合には、 N末端で誘導体化されていてもよいアル ギニン又はグルタミン酸残基 (L体であっても D体であってもよい) を表し、 好ましくは、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 シトル リン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合には、 アルギニンまた はグルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合には、 N末端で誘導体 , 化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を表す。 「N末端で誘 導体化され」たものとしては、 上記 A 1と同様のものが挙げられるが、 それ らに限定されない。
上記式 (l a ) で示される A 3は、 芳香族アミノ酸残基 (例えば、 フエ二 ' ルァラニン、 トリブトファン、 3一 ( 2—ナフチル) ァラニン、 チロシン、 4—フルオロフェニルァラニン、 3 - ( 1一ナフチル) ァラニン) (L体で あっても D体であってもよい) を表し、 好ましくは、 フエ二ルァラニン、 ト リブトフアン、 3 一 ( 2—ナフチル) ァラニンを表す。
上記式 (l a ) で示される A 4は、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基 (L体であっても D体であっても よい) を表し、 好ましくは、 アルギニン、 シトルリン、 ァラニン又は L—も しくは D—ダル夕ミン酸残基を表す。
上記式 ( I a ) で示される A 5は、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し、 好ましくは、 アルギニン、 シトルリン、 ァラニン、 リジン又はグルタミン酸残基を表す。
上記式 (I a ) で示される A 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リ ジン、 ァラニン、 シトルリン、 アルギニン又はグルタミン酸残基 ( L体であ つても D体であってもよい) を表し、 好ましくは、 D—リジン、 D—ァラニ ン、 D—シトルリン又は D—グルタミン酸残基を表す。
上記式 (I a ) で示される A 7,は、 プロリン又はァラニン残基 (L体であ つても D体であってもよい) を表し、 好ましくは、 プロリン又はァラニン残 基を表す。
上記式 (I a ) で示される A 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニ ン、 ナフチルァラニン、 シトルリン又はグルタミン酸残基 ( L体であっても D体であってもよい) を表し、 好ましくは、 チロシン、 ァラニン又は D—グ ル夕ミン酸残基を表す。
上記式 ( I a ) で示される A 9は、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基 (L体であっても D体であっても よい) を表し、 好ましくは、 アルギニン、 シトルリン又はグルタミン酸残基 を表す。
上記式 (l a ) で示される A 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギ ニン又はリジン残基 (L体であっても D体であってもよい) を表し、 好まし くは、 シトルリン又は D—グルタミン酸残基を表す。 .
上記式 (I a ) で示される A 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよい アルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基 (L体であっても D 体であってもよい) を表し、 好ましくは、 C末端で誘導体化されていてもよ いアルギニン又はグルタミン酸残基を表す。 「c末端の誘導体化」としては、 例えば、 アミド化 (- NH2、 - NHR、 -NRR' ) 、 エステル^; (-C00R) 等が挙げ られる。 ここでアミド、 エステルにおける R及び R ' としては、 例えば、 メ チル、 ェチル、 n—プロピル、 イソプロピルもしくは n—ブチルなどの C卜6 アルキル基、 例えば、 シクロペンチル、 シクロへキシルなどの C 3_8シクロ アルキル基、 例えば、 フエニル、 α—ナフチルなどの C 6_12ァリール基、 例 えば、 ベンジル、 フェネチルなどのフエ二ルー C ,_2アルキル基もしくは α —ナフチルメチルなどの α—ナフチル— C アルキル基などの C 7_14ァラル キル基のほか、 経口用エステルとして汎用されるピバロィルォキシメチル基 などが用いられる。
本発明のペプチドが C末端以外に力ルポキシル基 (またはカルポキシレ一 ト) を有している場合、 力ルポキシル基がアミド化またはエステル化されて いるものも本発明のペプチドに含まれる。 この場合のアミドおよびエステル としては、 例えば上記 A 1 1について例示された C末端のアミドおよびエス テルなどが同様に用いられる。 さらに、 本発明のペプチドには、 上記したぺ プチドにおいて、 分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基 (例えば、 —〇H、 一 S H、 アミノ基、 イミダゾール基、 インド一ル基、 グァニジノ基など) が適 当な保護基 (例えば、 ホルミル基、 ァセチル基などの C 2_6アルカノィル基 などの C wァシル基など) で保護されているもの、 あるいは糖鎖が結合し - たいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。
本発明のペプチドの塩としては、 酸または塩基との生理学的に許容される 塩が挙げられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様 な塩としては、 例えば、 無機酸 (例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫 酸) との塩、 あるいは有機酸 (例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル 酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸) との塩などが挙げられる。
また、 本発明のペプチドは、 上記式 (I a ) で示される A 1〜A 1 1のい ずれか 1つが以下の場合には、 新規ペプチドである:
( i ) A 1がグルタミン酸残基又は欠失している場合 (即ち、 上記式 (I b ) の場合) ; '
(i i) A 2、 A 4、 A 6、 A 8及び A 9のいずれか 1つがグルタミン酸残基 の場合 (即ち、 上記式 (I c ) 〜 (I g ) のいずれかの場合) ;
(i i i) A 5がアルギニン又はグルタミン酸残基の場合即ち、 上記式 (I h ) の場合) ;
(iv) A 1 0がグルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基の場合即ち、 上記 式 ( I i ) の場合) ;
( V ) A l lがグルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基の場合即ち、 上記 式 ( I j ) の場合) 。
尚、 上記アミノ酸残基は、 L体でも D体でもよい。
本発明の新規べプチドとして、 好ましくは以下の(1)〜(58)のアミノ酸配 列 (各配列中、 2つのシスティン残基はジスルフイド結合により連結してい る) を有するペプチドが例示される。
(1) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (AcTC14003)
(2) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (AcTC14005)
(3) Ac-Arg-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (AcTCHOl l)
(4) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH (AcTC14013)
(5) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t -Ly s -DLy s -P r o-Ty r-Ar g-C i t-Cys-Arg-OH (AcTC14015)
(6) Ac-C i t -Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-Ar g-Lys-DC i t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (AcTC14017)
(7) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH (AcTC14019)
(8) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH (AcTC14021) (9) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (AcTC14012)
(10) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-NH2 (AcTCHOU)
(11) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (AcTC14016)
(12) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (AcTC14018)
(13) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-NH2 (AcTC14020)
(14) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-NH2 (AcTC14022)
(15) H-DGlu-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TE14001)
(16) H-Arg-Glu-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TE14002)
(17) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Glu-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TE14003)
(18) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Glu-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TE 14004)
(19) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TE14005)
(20) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Glu-Ci t-Cys-Arg-OH (TE14006) '
(21) H-Ar g-Ar g-Na 1 -Cys-Ty r-Ar g-Ly s-DLy s-P r o-Ty r-Ar g-C i t-Cys-Glu-OH (TE14007)
(22) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TE14011)
(23) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-DGlu-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 O s
Figure imgf000036_0001
gg TOyyyy gyCs uTrArCsArArTL UIproAr .〜—— —-— .-.-.
()TE14012 to I—1gyygyyyggs ACATrctLs proTrArcicArrArNciDLTIl--ll—- ■- ■l
Figure imgf000037_0001
(AcTN14003)
(53) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (AcTN14005)
(54) 4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NH2 (4F-benzoyl-TN14003)
(55) 4F- benzoy卜 Arg-Arg - Na卜 Cys - Tyr - Ci t- Lys_DGlu- Pro-Tyr - Arg - Ci t- Cys-Arg-NHMe (4F-benzoyl-TN14011-Me)
(56) 4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NHEt (4F-benzoyl-TN14011-Et)
(57) 4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t -Ly s -DG 1 u-P r o-Ty r -Ar g-C i t- Cys-Arg-NHiPr (4F-benzoyl-TN14011-iPr)
(58) 4F-benz oy 1 -Ar g-Ar g-Na 1 -Cys-Ty r-C i t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-tyraiine (4F-benzoyl-TN14011-tyramine)
本発明のペプチドは、 上記したいずれかのペプチドのアミノ酸配列と実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドまたはそのアミド、 そのエステ ルもしくはその塩をも包含する。 ここで 「実質的に同一のアミノ酸配列」 と は、 ペプチドの活性 (例えば、 リガンドと受容体の結合阻害活性など) また はペプチドの抗癌作用 (例えば、 遊走阻害作用、 浸潤阻害作用および抗転移 作用など) または抗リューマチ作用 (例えば、 遊走阻害作用) などが、 性質 的に同質である [従って、 量的にある程度 (例えば、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 5〜2 0倍、 より好ましくは約 0 . 5〜2倍) の差異があ つてもよい] ようなアミノ酸配列を意味する。 したがって、 上記特性を保持 する限り、 上記式 (l a ) 〜 (I j ) および(1)〜(58)のいずれかに示され るアミノ酸配列において 1または 2以上のアミノ酸に変異を有していてもよ い。
即ち、 本発明においては、 元の (無変異の) ペプチドの生理的な特性や化 学的な特性に重大な (著しい) 変化 (=性質的に異質、 もしくは同質であつ ても量的に著しく異なるような変化) をもたらさないような置換、 欠失ある いは挿入 (付加) 等のアミノ酸配列における変異の結果得られるペプチド (変異型ペプチド) は、 そのような変異を有していない元の (無変異の) ぺ プチドと実質的に同一であると見なされ、 またその変異型ペプチドのァミノ 酸配列は、 元の (無変異の) ペプチドのアミノ酸配列と実質的に同一である と見なされる。 '
—般に、 ペプチド配列中におけるアミノ酸の置換、 欠失あるいは挿入 (付 カロ) などの変異は、 そのペプチドの生理的な特性や化学的な特性に大きな
(著しい) 変化をもたらさないことがしばしばあることは、 よく知られた事 実である。 該置換の例としては、 あるアミノ酸が性質 (特性) の似ている他 のアミノ酸で置換されたものが挙げられ、 一般的には、 特性の類似性が強い アミノ酸相互間で置換が行われる場合ほど、 その置換が置換前の元のぺプチ ドにおよぼす特性の変化は小さいと考えられている。 アミノ酸は、 その特性 の類似性を一つの基準にして例えば次のようなクラス: (i) 非極性 (疎水 性) アミノ酸 (例:ァラニン、 ロイシン、 イソロイシン、 バリン、 プロリン、 フエ二ルァラニン、 トリブトファン、 メチォニンなど) ; (i i) 極性 (中 性) アミノ酸 (例:グリシン、 セリン、 スレオニン、 システィン、 チロシン、 ァスパラギン、 グルタミンなど) ; (i i i) 陽電荷をもつ (塩基性) ァミノ 酸 (例:アルギニン、 リジン、 ヒスチジンなど) ; (iv) 負電荷をもつ (酸 性) アミノ酸 (例:ァスパラギン酸、 グルタミン酸など) に分類されるので、 各クラス内でのアミノ酸置換は、 ペプチドの特性に対して保存的 (即ち、 「実質的に同一な」 アミノ酸配列を生ずる置換) であり得る。
言い換えれば、 「実質的に同一のアミノ酸配列」には、
(0 上記式 (l a ) 〜 (I j ) および(1)〜(58)のいずれかに示されるアミ ノ酸配列中の 1個以上、 好ましくは 1個以上 1 0個以下、 より好ましくは 1 • 個以上 5個以下のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、
(i i) 上記式 (l a ) 〜 (I j ) および(1)〜(58)のいずれかに示されるァ ミノ酸配列中の 1個以上 7個以下、 好ましくは 1個以上 5個以下、 より好ま しくは 1個以上 3個以下のァミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
(i i i) 上記式 (I a ) 〜 (: [ j ) および(1)〜(58)のいずれかに示されるァ ミノ酸配列に 1個以上 1 5個以下、 好ましくは 1個以上 1 0個以下、 より好 ましくは 1個以上 5個以下のアミノ酸が付加した (挿入された) アミノ酸配 列、 あるいは
(iv) 上記 (i) , (i i) または (i i i) のアミノ酸配列を有するペプチド中 の構成アミノ酸 (特にその側鎖) に修飾を含むペプチド、 またはそのアミド. そのエステルもしくはその塩が包含され得る。
本発明のペプチドは、 そのアミノ酸配列中に上記 (i) ないし (iv) の置 換、 欠失、 挿入 (付加) 、 修飾などを意図的または偶発的に施すことにより. 熱やプロテア一ゼに対する安定型ペプチドや、 該ペプチドの有する阻害活性 が高まった高活性型べプチドに変換させることが可能である。 本発明のぺプ チドは、 これら変異型ペプチドまたはそのアミド、 そのエステルもしくはそ の塩をも包含する。
さらに、 本発明のペプチドとしては、 上記式 (I a ) 〜 (; [ j ) および (1) ^ (58)のいずれかに示されるァミノ酸配列からなるペプチドの他に、 該 アミノ酸配列と約 5 0〜9 9 . 9 % (好ましくは 7 0〜9 9 . 9 %、 より好 ましくは 8 0〜 9 9 . 9 %、 さらに好ましくは 9 0〜9 9 . 9 %) の相同性 を有するアミノ酸配列を含有し、 上記式 (l a ) 〜 (I j ) および (1)〜
(58)のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるペプチドと実質的に同質の 活性を有するペプチドまたはそのアミド、 そのエステルもしくはその塩など が挙げられる。 該活性としては、 例えばリガンドとレセプターとの結合阻害 活性、 シグナル伝達阻害活性など、 該ペプチドが有する阻害活性が挙げられ る。 阻害活性が 「実質的に同質」 とは、 該レセプターに対する該リガンド結 合阻害活性などの特性が同質であることを示す。 従って、 該レセプ夕一に対 する該リガンド結合阻害活性には著しくない程度の強弱が認められてもよく. また、 分子量における相違は問題ではない。
上記式(1)〜(58)のいずれかに示されるァミノ酸配列を有するぺプチドの アミド、 エステルもしくは塩としては、 上記一般式 (I a ) で示されるぺプ チドについて例示した通りのものが同様に挙げられる。 好ましくは、 上記式 (1)〜(58)のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するペプチドは、 C末端 アミノ酸残基の力ルポキシル基がアミド化されていることが望ましい。 上記式( 1;)〜(58)に示されるアミノ酸配列を含有するペプチドをはじめと する本発明のぺプチドは、 自体公知のぺプチドの合成法に従つて製造するこ とができる。 ペプチドの合成法としては、 例えば、 固相合成法、 液相合成法 のいずれによっても良い。 すなわち、 ペプチドを構成し得る部分ペプチドも しくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、 生成物が保護基を有する場合は保 護基を脱離することにより目的のぺプチドを製造することができる。 公知の 縮合方法や保護基の脱離としては、 例えば、 以下の①〜⑤に記載された方法 が挙げられる。
(D M. Bodanszkyおよび M. A. Ondet t i、 ペプチド シンセシス (Pept i de Synthes i s) , Intersc i ence Pub l i shers, New York (1966年)
② Schroederおよび Luebke、 ザペプチド(The Pept i de) , Academi c Press, , New York (1965年) '
③泉屋信夫他、 ペプチド合成の基礎と実験、 丸善 (株) (1975年)
④矢島治明 および榊原俊平、 生化学実験講座 1、 蛋白質の化学 IV、 205、 (1977年)
⑤矢島治明監修、 続医薬品の開発第 14巻ペプチド合成広川書店
具'体的なペプチド合成法として、 例えば、 以下の方法が挙げられる。
通常市販のポリペプチド合成用樹脂を用いることができる。 そのような樹 脂としては、 例えば、 クロロメチル樹脂、 ヒドロキシメチル樹脂、 ベンズヒ ドリルァミン樹脂、 アミノメチル樹脂、 4一べンジルォキシベンジルアルコ ール樹脂、 4一メチルベンズヒドリルァミン樹脂、 PAM樹 、 4ーヒドロキ シメチルメチルフエニルァセトアミドメチル樹脂、 ポリアクリルアミド樹脂、 4— (2' , 4' -ジメトキシフエ二ルーヒドロキシメチル) フエノキシ樹脂、 4 一 (2' , 4' -ジメトキシフエ二ル一 Fmocアミノエチル) フエノキシ樹脂などを 挙げることができる。 このような樹脂を用い、 α—ァミノ基と側鎖官能基を 適当に保護したアミノ酸を、 目的とするポリペプチドの配列通りに、 自体公 知の各種縮合方法に従い、 樹脂上で縮合させる。 反応の最後に樹脂からポリ ペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、 さらに高希釈溶液中で分 子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、 目的のポリペプチドまたはそれら のアミド体を取得する。 上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、 ポリぺプ チド合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、 特に、 カル ポジイミド類がよい。 カルポジイミド類としては、 DCC、 Ν, Ν' -ジイソプロピ ルカルポジイミド、 Ν-ェチル -Ν' - (3 -ジメチルァミノプロリル)カルポジイミ ドなどが用いられる。 これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤 (例えば、 HOBt, HOOBt) とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、 対称 酸無水物または HOBtエステルあるいは HOOBtエステルとしてあらかじめ保 護アミノ酸の活性ィヒを行なった後に樹脂に添加することができる。
保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、 ポリべ プチド縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。 例えば、 N, N—ジメチルホルムアミド, N, N—ジメチルァセトアミド, N—メチルピロリドンなどの酸アミド類、 塩化メチレン, クロ口ホルムなど のハロゲン化炭化水素類、 トリフルォロェタノ一ルなどのアルコール類、 ジ メチルスルホキシドなどのスルホキシド類、 ピリジン, ジォキサン, テトラ ヒドロフランなどのエーテル類、 ァセトニトリル, プロピオ二トリルなどの 二卜リル類、 酢酸メチル, 酢酸ェチルなどのエステル類あるいはこれらの適 宜の混合物などが用いられる。 反応温度はポリペプチド結合形成反応に使用 され得ることが知られている範囲から適宜選択され、 通常約一 2 0 °C〜5 0 °Cの範囲から適宜選択される。 活性化されたアミノ酸誘導体は通常 1 . 5 〜4倍過剰で用いられる。 ニンヒドリン反応を用いたテストの結果、 縮合が 不十分な場合には保護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことによ り十分な縮合を行なうことができる。 反応を繰り返しても十分な縮合が得ら れないときには、 無水酢酸またはァセチルイミダゾ一ルを用いて未反応アミ ノ酸をァセチル化することができる。
原料のァミノ基の保護基としては、 例えば、 Z、 Boc、 ターシャリ一ペン チルォキシカルポニル、 イソポルニルォキシカルポニル、 4ーメトキシベン ジルォキシカルポニル、 Cl-Z, Br-Z、 ァダマンチルォキシカルポニル、 トリ フルォロアセチル、 フ夕ロイル、 ホルミル、 2—ニトロフエニルスルフエ二 ル、 ジフエニルホスフイノチオイル、 Fmocなどが用いられる。 力ルポキシル 基は、 例えば、 アルキルエステル化 (例えば、 メチル、 ェチル、 プロピル、 ブチル、 夕一シャリーブチル、 シクロペンチル、 シクロへキシル、 シクロへ プチル、 シクロォクチル、 2—ァダマンチルなどの直鎖状、 分枝状もしくは 環状アルキルエステル化) 、 ァラルキルエステル化 (例えば、 ベンジルエス テル、 4一二トロべンジルエステル、 4—メトキシベンジルエステル、 4一 クロ口べンジルエステル、 ベンズヒドリルエステル化) 、 フエナシルエステ ル化、 ベンジルォキシカルポニルヒドラジド化、 タ一シャリーブトキシカル ポニルヒドラジド化、 トリチルヒドラジド化などによって保護することがで きる。 セリンの水酸基は、 例えば、 エステル化またはエーテル化によって保 護することができる。 このエステル化に適する基としては、 例えば、 ァセチ ル基などの低級アルカノィル基、 ベンゾィル基などのァロイル基、 ベンジル ォキシカルポニル基、 エトキシカルポニル基などの炭酸から誘導される基な どが用いられる。 また、 エーテル化に適する基としては、 例えば、 ベンジル 基、 テトラヒドロピラニル基、 t-ブチル基などである。 チロシンのフエノー ル性水酸基の保護基としては、 例えば、 Bz l、 Cl 2-Bz K 2—ニトロベンジル、 Br-Z、 ターシャリ一ブチルなどが用いられる。 ヒスチジンのイミダゾールの 保護基としては、 例えば、 Tos、 4 -メトキシ- 2, 3, 6-トリメチルベンゼンス ルホニル、 DNP、 ベンジルォキシメチル、 Bum Boc、 Tr t、 Fmocなどが用いら れる。
原料の力ルポキシル基の活性化されたものとしては、 例えば、 対応する酸 無水物、 アジド、 活性エステル 〔アルコール (例えば、 ペンタクロロフエノ —ル、 2, 4, 5-トリクロ口フエノール、 2, 4 -ジニトロフエノール、 シァノメチ ルアルコール、 パラニトロフエノール、 H0NB、 N-ヒドロキシスクシミド、 N - ヒドロキシフ夕ルイミド、 HOBt) とのエステル〕 などが用いられる。 原料の ァミノ基の活性化されたものとしては、 例えば、 対応するリン酸アミドが用 いられる。 保護基の除去 (脱離) 方法としては、 例えば、 P d—黒あるいは P d -炭素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、 また、 無水 フッ化水素、 メタンスルホン酸、 トリフルォロメタンスルホン酸、 トリフル ォロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、 ルァミン、 トリェチルァミン、 ピぺリジン、 ピぺラジンなどによる塩基処理、 また液体アンモニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。 上記酸処理 による脱離反応は、 一般に約一 2 0 〜 4 0 °Cの温度で行なわれるが、 酸処 理においては、 例えば、 ァニソール、 フエノール、 チオア二ソ一ル、 メタク レゾ一ル、 パラクレゾ一ル、 ジメチルスルフイド、 1, 4-ブタンジチオール、 1 , 2 -エタンジチオールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効である。 ま た、 ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる 2, 4-ジニトロフエ二 ル基はチォフエノ一ル処理により除去され、 トリプトファンのィンドール保 護基として用いられるホルミル基は上記の 1 , 2 -エタンジチオール、 1,4-ブタ ンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、 希水酸化ナトリウ ム溶液、 希アンモニアなどによるアルカリ処理によっても除去される。
.原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、 およびその 保護基の脱離、 反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の 手段から適宜選択しうる。 ポリペプチドのアミド体を得る別の方法としては、 例えば、 まず、 カルポキシ末端アミノ酸のひ一力ルポキシル基をアミド化し て: [呆護した後、 アミノ基側にペプチド鎖を所望の鎖長まで延ばした後、 該ぺ プチド鎖の N末端の α—アミノ基の保護基のみを除いたポリぺプチドと C末 端のカルボキシル基の保護基のみを除去したポリペプチドとを製造し、 この 両ポリペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合させる。 '縮合反応の詳細 については上記と同様である。 縮合により得られた保護ポリペプチドを精製 した後、 上記方法によりすベての保護基を除去し、 所望の粗ポリペプチドを 得ることができる。 この粗ポリぺプチドは既知の各種精製手段を駆使して精 製し、 主要画分を凍結乾燥することで所望のポリペプチドのアミド体を得る ことができる。 ポリペプチドのエステル体を得るには、 例えば、 カルポキシ 末端アミノ酸の α—力ルポキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸 エステルとした後、 ポリペプチドのアミド体と同様にして、 所望のポリぺプ チドのエステル体を得ることができる。
反応後は通常の精製法、 たとえば、 溶媒抽出 ·蒸留 ·カラムクロマトダラ フィ一 ·液体クロマトグラフィ一 '再結晶などを組み合わせて本発明のぺプ チドを精製単離することができる。 上記方法で得られるペプチドが遊離体で ある場合は、 公知の方法によって適当な塩に変換することができるし、 逆に 塩で得られた場合は、 公知の方法によって遊離体に変換することができる。 好ましくは、 上記式(1)〜(58)に示されるァミノ酸配列を有する本発明の 新規ペプチドは、 後記実施例に記載される方法、 あるいはそれらに準じた方 法により製造することができる。 また、 本発明のペプチドは、 国際公開第 0 2 / 2 0 5 6 1号パンフレットに記載の方法、 あるいはこれらに準じた方法 によつて製造することができる。
本発明のペプチドを医薬または動物薬として使用する場合は、 常套手段に 従って実施すればよい。 例えば、 必要に応じて糖衣を施した錠剤、 カプセル 剤、 エリキシル剤、 マイクロカプセル剤などとして経口的に、 あるいは水も しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、 または懸濁液剤な どの注射剤の形で非経口的に使用できる。 例えば、 本発明のペプチドを生理 学的に認められる担体、 香味剤、 陚形剤、 べヒクル、 防腐剤、 安定剤、 結合 剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和 することによって製造することができる。 これら製剤における有効成分量は 指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
錠剤、 カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、 例えばゼ ラチン、 コーンスターチ、 トラガントガム、 アラビアゴムのような結合剤、 結晶性セルロースのような賦形剤、 コーンスターチ、 ゼラチン、 アルギン酸 などのような膨化剤、 ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、 ショ糖、 乳糖またはサッカリンのような甘味剤、 ペパーミント、 ァカモノ油またはチ Xリ一のような香味剤などが用いられる。 調剤単位形態がカプセルである場 合には、 前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することが できる。 注射のための無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、 胡^油、 椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるな どの通常の製剤実施にしたがって処方することができる。
注射用の水性液としては、 例えば、 生理食塩水、 ブドウ糖やその他の補助 薬を含む等張液 (例えば、 D—ソルビトール、 D—マンニトール、 塩化ナト リウムなど) などが挙げられ、 適当な溶解補助剤、 例えばアルコール (例え ば、 エタノール) 、 ポリアルコール (例えばプロピレングリコ一ル、 ポリエ チレングリコ一ル) 、 非イオン性界面活性剤 (例えばポリソルべ一卜 80TM、 HCO- 50) などと併用してもよい。 油性液としてはゴマ油、 大豆油など があげられ、 溶解補助剤として安息香酸ベンジル、 ベンジルアルコールなど と併用してもよい。 また、 緩衝剤 (例えば、 リン酸塩緩衝液、 酢酸ナトリウ ' ム緩衝液) 、 無痛化剤 (例えば、 塩化ベンザルコニゥム、 塩酸プロ力インな ど) 、 安定剤 (例えば、 ヒト血清アルブミン、 ポリエチレングリコールな ど) 、 保存剤 (例えば、 ベンジルアルコール、 フエノールなど) 、 酸化防止 剤などと配合してもよい。 調整された注射液は通常、 適当なアンプルに無菌 的に充填される。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、 例えばヒトゃ哺 乳動物 (例えば、 マウス、 ラット、 モルモット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥ シ、 ネコ、 ィヌ、 サル、 マントヒヒ、 チンパンジ一など) に対して投与する ことができる。
本発明のペプチドの投与量は、 症状などにより差異はあるが、 経口投与す る場合、 体重 60 k gに対して一回につき通常約 0.1から 1000mg、 好ましくは約 1.0から 500mg、 より好ましくは約 1.0から 20 Omg である。 非経口的に投与する場合は、 体重 60 kgに対してその一回の投与 量は投与対象、 症状、 投与方法などによっても異なるが、 例えば注射剤の形 では一回につき通常約 0.01力 ^ら 300 m g程度、 好ましくは約 0.1から 20 Omg程度、 より好ましくは約 0.1から 10 Omg程度を静脈注射に より投与すればよい。 他の動物の場合も、 体重 6 O kg当たりに換算した量 を投与することができる。
本発明のペプチドは、 抗癌作用、 つまり、 癌細胞の運動抑制作用および癌 転移阻害作用を有する。 即ち、 本発明のペプチドは、 後述の実施例から明ら かなように、 癌転移阻害作用を有するため、 癌特に癌転移に関係する予防お よび治療薬に用いることができる。 従って、 本発明におけるペプチドは、 抗 癌薬として、 口腔癌、 咽頭癌、 口唇癌、 舌癌、 歯肉癌、 鼻咽頭癌、 食道癌、 胃癌、 小腸瘙、 結腸癌を含む大腸癌、 肝臓癌、 胆のう癌、 膝臓癌、 鼻腔癌、 肺癌、 骨肉腫、 軟部組織癌、 皮膚癌、 黒色腫、 乳癌、 子宮癌、 卵巣癌、 前立 腺癌、 精巣癌、 陰茎癌、 膀胱癌、 腎臓癌、 脳腫瘍、 甲状腺癌、 リンパ腫、 白 血病などの改善、 予防および治療薬として有用である。 また、 本発明のぺプ ' チドは、 抗慢性関節リューマチ作用、 つまり、 T細胞の運動抑制作用を有す る。 即ち、 本発明のペプチドは、 後述の実施例から明らかなように、 T細胞 の運動抑制作用を有するため、 慢性関節リュ一マチに対する予防および治療 薬に用いることができる。 従って、 本発明におけるペプチドは、 慢性関節リ ユーマチの改善、 予防および治療薬として有用である。
C X C R 4拮抗作用を有する化合物が抗ウィルス活性を有することは公知 である。 従って、 本発明のペプチドがウィルス感染症 (例、 エイズ、 S A R Sなど) の予防および治療薬としても用い得ることは当業者に自明であろう。 ' 例えば、 本発明のペプチドを抗癌薬として用いる場合には、 他の抗癌剤
(例えば、 化学療法剤、 免疫療法剤、 または細胞増殖因子ならびにその受容 体の作用を阻害する薬剤) など (以下、 併用薬物と略記する) と併用して使 用することができる。
本発明のペプチドは、 単剤として使用しても優れた抗癌作用を示すが、 さ らに上記併用蕖物の一つまたは幾つかと併用 (多剤併用) することによって、 その効果をより一層増強させることができる。
該 「化学療法剤」 としては、 例えばアルキル化剤、 代謝拮抗剤、 抗癌性抗 生物質、 植物由来抗癌剤などが挙げられる。
「アルキル化剤」 としては、 例えば、 ナイトロジェンマスタ一ド、 塩酸ナ イトロジェンマス夕一ドー N—ォキシド、 クロラムブチル、 シクロフォスフ アミド、 ィホスフアミド、 チォテパ、 カルボコン、 トシル酸インプロスルフ アン、 ブスルファン、 塩酸二ムスチン、 ミトプロニ 1 ル、 メルファラン、 ダカルバジン、 ラニムスチン、 リン酸エストラムスチンナトリウム、 トリエ チレンメラミン、 カルムスチン、 口ムスチン、 ストレプトゾシン、 ピポブ口 マン、 ェトグルシド、 アルトレタミン、 アンバムスチン、 塩酸ジブロスピジ ゥム、 フォテムスチン、 プレドニムスチン、 プミテパ、 リボムスチン、 テモ ゾロミド、 トレォスルファン、 トロフォスフアミド、 ジノス夕チンスチマラ マー、 カルボコン、 アドゼレシン、 システムスチン、 ビゼレシン、 白金錯体
(カルポプラチン、 シスブラチン、 ミポプラチン、 ネダプラチン、 ォキサリ ブラチンなど) などが挙げられる。
「代謝拮抗剤」 としては、 例えば、 メルカプトプリン、 6—メルカプトプ リンリポシド、 チォイノシン、 メトトレキサ一ト、 エノシ夕ビン、 シタラビ ン、 シ夕ラビンォクフォスフアート、 塩酸アンシタビン、 5— F U系薬剤
(例、 フルォロウラシル、 テガフール、 U F T、 ドキシフルリジン、 カルモ フール、 ガロシタビン、 エミテフ一ルなど) 、 アミノブテリン、 ロイコポリ ンカルシウム、 タブロイド、 ブトシン、 フオリネイトカルシウム、 レポフォ リネイトカルシウム、 クラドリビン、 エミテフール、 フルダラビン、 ゲムシ 夕ビン、 ヒドロキシカルバミド、 ペントスタチン、 ピリトレキシム、 イドキ シゥリジン、 ミトグァゾン、 チアゾフリン、 アンバムスチン、 ジエミシ夕ビ ンなどが挙げられる。
「抗癌性抗生物質」 としては、 例えば、 アントラサイクリン系抗癌薬 (塩 酸ドキソルビシン、 塩酸ダウノルビシン、 塩酸アクラルビシン、 塩酸ピラル ビシン、 塩酸ェピルビシンなど) 、 ァクチノマイシン D、 ァクチノマイシン C、 マイトマイシン C、 クロモマイシン A 3、 塩酸ブレオマイシン、 硫酸ブ レオマイシン、 硫酸べプロマイシン、 ネオカルチノスタチン、 ミスラマイシ ン、 ザルコマイシン、 カルチノフィリン、 ミトタン、 塩酸ゾルビシン、 塩酸 ミトキサントロン、 塩酸イダルビシンなどが挙げられる。
「植物由来抗癌剤丄としては、 例えば、 ビン力アルカロイド系抗癌薬 (硫 酸ビンブラスチン、 硫酸ビンクリスチン、 硫酸ビンデシン、 ビノレルビンな ど) 、 タクサン系抗癌薬 (パクリタクセル、 ドセタクセルなど) 、 エトポシ ド、 リン酸エトポシド、 テニポシド、 ビノレルビンなどが挙げられる。 該 「細胞増殖因子ならびにその受容体の作用を阻害する薬剤」 における、 「細胞増殖因子」 としては、 細胞の増殖を促進する物質であればどのような ものでもよく、 通常、 分子量が 2 0 , 0 0 0以下のペプチドで、 受容体との 結合により低濃度で作用が発揮される因子が挙げられ、 具体的には、 (1) EGF (epidermal growth factor) またはそれと実質的に同一の活性を有 する物質 〔例、 EGF、 ハレダリン (HER2リガンド) など〕 、 (2) ィ ンシュリンまたはそれと実質的に同一の活性を有する物質 〔例、 インシユリ ン、 I GF (insulin-like growth factor) 一 1、 I GF— 2など〕 、 (3) FGF (fibroblast growth factor) またはそれと実質的に同一の活性を有 する物質 〔例、 酸性 FGF、 塩基性 FGF、 KGF (keratinocyte growth factor) 、 FGF- 10など〕 、 (4) その他の細胞増殖因子 〔例、 CSF (colony stimulating factor) 、 EPO (erythropoietin) 、 I L— 2 (interleukin-2) 、 NGF (nerve growth factor), PDGF (platelet - derived growth factor) 、 TGF β (transforming growth factor /3) 、 HGF ( epatocyte growth factor) 、 VE GF (vascular endothelial growth factor) など〕 などが挙げられる。
該 「細胞増殖因子の受容体」 としては、 上記の細胞増殖因子と結合能を有 する受容体であればいかなるものであってもよく、 具体的には、 EGF受容 体、 ハレダリン受容体 (HER2) 、 インシュリン受容体、 I GF受容体、 FGF受容体— 1または FGF受容体— 2、 HGF受容体 (c一 me t) 、 VEGF受容体、 SCF受容体 (c一 k i t) などがあげられる。
該 「細胞増殖因子の作用を阻害する薬剤」 としては、 ハーセプチン (HE R 2抗体) 、 G'LEEVEC (c— me t、 c— k i t、 a b 1阻害薬) 、 I r e s s a (EGF受容体阻害薬) などがあげられる。
上記の薬剤の他に、 トポイソメラ一ゼ I阻害薬 (例、 イリノテカン、 トポ テカンなど) 、 トポイソメラ一ゼ I I阻害薬 (例えば、 ソブゾキサンなど) 、 血管新生阻害薬なども用いることができる。
また、 本発明のぺプチドを慢性関節リユーマチの予防及び/又は治療剤と して用いる場合には、 他の関節疾患の予防及び Z又は治療剤と併用して使用 することができる。 該併用される薬剤としては、 例えば、 抗炎症ステロイド 剤 (例、 プレドニゾロン、 ヒドロコルチゾン、 メチルプレドニゾロン、 デキ サメ夕ゾン、 ベタメタゾン等) 、 非ステロイド性消炎鎮痛剤 (例、 インドメ 夕シン、 ジクロフエナク、 ロキソプロフェン、 イブプロフェン、 アスピリン、 ピロキシカム、 スリンダク等) あるいはヒアルロン酸製剤 (例、 ヒアルロン 酸ナトリウム等) 、 C O X— I I阻害剤などが挙げられる。
本発明のペプチドは、 単剤として使用しても優れた抗慢性関節リューマチ 作用を示すが、 さらに上記併用薬物の一つまたは幾つかと併用 (多剤併用) することによって、 その効果をより一層増強させることができる。
本発明のペプチドと併用薬物との併用に際しては、 本発明のペプチドと併 用薬物の投与時期は限定されず、 本発明のペプチドと併用薬物とを、 投与対 象に対し、 同時に投与してもよいし、 時間差をおいて投与してもよい。 併用 薬物の投与量は、 .臨床上用いられている投与量に準ずればよく、 投与対象、 投与ルート、 疾患、 組み合わせ等により適宜選択することができる。
本発明のペプチドと併用薬物との投与形態は、 特に限定されず、 投与時に、 本発明のポリペプチド又はその塩と併用薬物とが組み合わされていればよい。 このような投与形態としては、 例えば、 (1 ) 本発明のペプチドと併用薬物 とを同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与、 (2 ) 本発明のペプチド と併用薬物とを別々に製剤化して得られる 2種の製剤の同一投与経路での同 時投与、 ( 3 )'本発明のペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる 2種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、 (4 ) 本発明のぺプ チドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる 2種の製剤の異なる投与経路 での同時投与、 (5 ) 本発明のペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得 られる 2種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与 (例えば、 本 発明のペプチド→併用薬物の順序での投与、 あるいは逆の順序での投与) な どが挙げられる。 以下、 これらの投与形態をまとめて、 本発明の併用剤と略 記する。
本発明の併用剤は、 毒性が低く、 例えば、 本発明のペプチド及び Z又は上 記併用薬物を自体公知の方法に従って、 薬理学的に許容される担体と混合し て医薬組成物、 例えば錠剤 (糖衣錠、 フィルムコーティング錠を含む) 、 散 剤、 顆粒剤、 カプセル剤、 (ソフトカプセルを含む) 、 液剤、 注射剤、 坐剤、 徐放剤等として、 経口的又は非経口的 (例、 局所、 直腸、 静脈投与等) に安 ,全に投与することができる。 注射剤は、 静脈内、 筋肉内、 皮下、 臓器内、 鼻 腔内、 皮内、 点眼、 脳内、 直腸内、 膣内および腹腔内、 腫瘍内部、 腫瘍の近 位などへの投与あるいは直接病巣に投与することができる。
本発明の併用剤の,製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体とし ては、 前記した本発明の医薬組成物に使用されるものと同様のものを使用す ることができる。
本発明の併用剤における本発明のペプチドと併用薬物との配合比は、 投与 対象、 投与ル一卜、 疾患等により適宜選択することができる。
本発明の併用剤における併用薬物の含有量は、 製剤の形態によって相違す るが、 通常製剤全体に対して約 0. 01なぃし100重量%、 好ましくは約 0. 1ないし 50重量%、 さらに好ましくは約 0. 5ないし 20重量%程度 である。
本発明の併用剤における担体等の添加剤の含有量は、 製剤の形態によって 相違するが、 通常製剤全体に対して約 1ないし 99. 99重量%、 好ましく は約 10ないし 90重量%程度である。
以下に実施例を示して、 本発明をより詳細に説明するが、 これらは本発明 の範囲を限定するものではない。
<製造例 1 :ポリペプチド TC14003の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Cit-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TC14003)
1. TC 003保護ポリペプチド樹脂の合成
最初の 14位アルギニンを導入したアルコ樹脂 Fmoc-Arg(Pbf)-Alko resin から Fmoc基を 20%ピペリジン/ DMFで除去後、 13位に相当する Fmoc - Cys(Trt)-0H (2.5 eq)を加え DMF中、 DIPCDI ^iOBt法により縮合反応を行つ た。 縮合反応の進行の程度は、 Kaiser, E.ら(Anal. Biochem., 34: 595 (1970))のニンヒドリン試験により調べた。
2. 12位〜 1位アミノ酸の導入
以下同様にして、 順次、 Cit、 Arg(Pbf), Tyr(t- Bu)、 Pro, DLys(Boc)、 Lys(Boc), Cit、 Tyr(t-Bu), Cys(Trt), NaK Arg(Pbf), Arg(Pbf)残基を樹 脂に導入し保護基保護化ポリペプチド捷脂を得た。
3 . 脱保護基.、 樹脂からのポリペプチドの分離及び精製
保護基保護化ポリペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン ZDMF処理により Fmoc 基を除去し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr-チオアニソ一ルノ TFA (トリフル ォロ酢酸)系(m-クレゾール(100 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 2時間反応させた。 反応混合物から樹脂を濾別し、 TFAで 2回洗浄し、 瀘液、 洗液を合わせたものを減圧濃縮し、 残さに水冷乾燥エーテルを加え、 生じた沈殿物を遠心沈降とデカンテ一ションにより上澄みから分離した。 得 られた残さを冷エーテルで洗浄し、 1N酢酸に溶解し、 蒸留水で希釈した。 4. 空気酸化による環化
上述のポリペプチドの希釈水溶液を濃アンモニア水で PH7. 5に調整し、 通 気による空気酸化を行い環化させた。 本水溶液を大量分取型 HPLC (コスモジ ール 5C18 AR-I Iカラム:ァセトニトリル一 7] )およびゲルクロマトグラフィ 一(Sephadex G- 15、 溶出液: 0. IN AcOH) により精製し、 単一ピークのポリ ペプチドを得、 凍結乾燥した。 純度は、 HPLCにより確認した。
<製造例 2 : TC14005の製造 > ,
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(TC14005)
製造例 1と同様の方法により TC14005を製造した。 伹し、 1 2位〜 1位ァ ミノ酸の導入のところで、 8位の DLys (Boc)の代わりに DCi t、 6位の Ci tの 代わりに Arg (PM)を用いた。 ぐ製造例 3 : TC14011の製造 >
H-Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(TC1401 1)
製造例 1と同様の方法により TC1401 1を製造した。 但し、 1 2位〜 1位ァ ミノ酸の導入のところで、 8位の DLys (Boc)の代わりに DCi tを用いた。 <製造例 4 : TC14013の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Cit-Lys-DLys-Pro-Tyr-Cit-Ci t-Cys-Arg-OH (TCI 013)
製造例 1と同様の方法により TC14013を製造した。 伹し、 12位〜1位ァ ミノ酸の導入のところで、 11位の Arg(Pbf)の代わりに Citを用いた。
<製造例 5 : TC14015の製造〉
H-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TC14015)
製造例 1と同様の方法により TC14015を製造した。 伹し、 12位〜 1位ァ ミノ酸の導入のところで、 1位の Arg(Pbf)の代わりに Citを用いた。
<製造例 6 : TC14017の製造 >
H-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCit-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TCI 017)
製造例 1と同様の方法により TC14017を製造した。 但し、 12位〜 1位ァ ミノ酸の導入のところで、 8位の DLys(Boc)の代わりに DCit、 6位の Citの 代わりに Arg(Pbf)、 1位の Arg(Pbf)の代わりに Ci tを用いた。
<製造例 7 : TC14019の製造 > - H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCit-Pro-Tyr-Cit-Ci t-Cys-Arg-OH (TC14019)
製造例 1と同様の方法により TC 019を製造した。 但し、 12位〜1位ァ ミノ酸の導入のところで、 11位の Arg(Pbf)の代わりに Cit、 8位の
DLys (Boc)の代わりに DCi t、 6位の Citの代わりに Arg(Pbf)を用いた。 ぐ製造例 8 : TC14021の製造 >
H-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH (TC14021) 製造例 1と同様の方法により TC14021を製造した。 但し、 12位〜1位ァ ミノ酸の導入のところで、 11位の Arg Pbi)の代わりに Cit、 6位の Citの代 わりに Arg(Pbf)、 1位の Arg(Pbf)の代わりに Citを用いた。 ぐ製造例 9 : TC 012の製造〉
H-Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(TC14012)
1. TC14012保護ポリペプチド樹脂の合成
Fmoc- Rinkアミド樹脂から Fmoc基を 20%ピぺリジン ZDMFで除去後、 14位 に相当する Fmoc-Arg(Pbf)_0H (2.5 eq)を加え DMF中、 DIPCDI -HOBt法によ り縮合反応を行った。 縮合反応の進行の程度は、 Kaiser, E.ら(Anal.
Biochem., 34: 595 (1970))のニンヒドリン試験により調べた。
2. 12位〜 1位アミノ酸の導入
以下同様にして、 順次、 Cys(Trt)、 Cit、 Arg(Pbf), Tyr(t- Bu)、 Pro.
DCit、 Lys(Boc)、 Cit, Tyr(t-Bu)、 Cys (Trt), NaK Arg(Pbf), Arg(Pbf)残 基を Rinkアミド樹脂に導入し、 保護基保護化ポリペプチド樹脂を得た。
3. 脱保護基、 樹脂からのポリペプチドの分離及び精製
保護基保護化ポリぺプチド樹脂は、 20%ピペリジン/ DMF処理により Fmoc 基を除去し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソール ZTFA (トリフル ォロ酢酸)系 (m-クレゾール(100 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。 反応混合物から樹脂を濾別し、 TFAで 2回洗浄し、 瀘液、 洗液を合わせたものを減圧濃縮し、 残さに水冷乾燥エーテルを加え、 生じた沈殿物を遠心沈降とデカンテーションにより上澄みから分離した。 得 られた残さを冷エーテルで洗浄し、 1N酢酸に溶解し、 蒸留水で希釈した。 4. 空気酸化による環化
上述のポリペプチドの希釈水溶液を濃アンモニア水で PH7.5に調整し、 通 気による空気酸化を行い環化させた。 本水溶液を大量分取型 HPLC (コスモジ ール 5C18 AR-IIカラム:ァセトニトリルー水)およびゲルクロマトグラフィ 一(Sephadex G- 15、 溶出液: 0. IN AcOH)により精製し、 単一ピークのポリ ペプチドを得、 凍結乾燥した。 純度は、 HH により確認した。 <製造例 10 : TC 014の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TCI 401 )
製造例 9と同様の方法により TC14014を製造した。 但し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 11位の Arg(Pbf)の代わりに Cit、 8位の DCitの代 わりに DLys(Boc)を用いた。 <製造例 1 1 : TC14016の製造 >
H-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TC14016)
製造例 9と同様の方法により TC14016を製造した。 伹し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 8位の DCitの代わりに DLys(Boc)、 1位の Arg(Pbf) の代わりに Citを用いた。
<製造例 12 : TC14018の製造 >
H-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCit-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TC14018)
製造例 9と同様の方法により TC 018を製造した。 但し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 6位の Citの代わりに Arg(Pbf)、 1位の Arg(Pbf)の 代わりに Citを用いた。
<製造例 13 : TC14020の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TC14020)
製造例 9と同様の方法により AcTC14020を製造した。 但し、 12位〜 1位ァ ミノ酸の導入のところで、 11位の Arg(Pbf)の代わりに Cit、 6位の Citの代 わりに Arg(Pbf)を用いた。 <製造例 1 4: TC14022の製造 >
H-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-NH2
(TC14022)
製造例 9と同様の方法により TC14022を製造した。 但し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 11位の Arg (Pbf)の代わりに Ci t、 8位の DCi tの代 わりに DLys (Boc)、 6位の Ci tの代わりに Arg (Pbf)、 1位の Arg (Pbf)の代わ りに Ci tを用いた。 . <製造例 1 5 : TA1400K TA14005〜TA14009、 TC14001および TC14004の製造 >
H-Al a-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(TA14001)
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Al a-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(TA14005) , H-Arg-Arg-Na l-Cys-Tyr -Arg-A 1 a-DLys -Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(TA14006)
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DAl a-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(TA14007)
H-Ar g-Arg-Na 1 -Cy s -Ty r-Ar g-Ly s -DLys-A 1 a-Ty r-Ar g- C i t -Cy s -Ar g-OH
(TA14008)
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Al -Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(TA14009)
H-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(TC14001)
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Ci t-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(TC14004)
製造例 1または 9と同様の方法により導入するアミノ酸を変更することで、 以上に示した TA14001、 TA14005〜TA14009、 TC14001および TC14004を製造 ()AC0TC1402 ι 〇
Figure imgf000057_0001
T¾^i:T n Ac-Cit-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Cit-Cit-Cys-Arg-NH2 (AcTC14022)
製造例 1〜14と同様の方法により、 TC14003、 TC14005, TC 011〜
TC14022のァセチル化体を製造した。 但し、 保護基保護化ポリペプチド樹脂 は、 20%ピぺリジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 無水酢酸(100 eq) - s リジン(100 eq) /DMF処理によりァセチル化し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソール ZTFA (トリフルォロ酢酸)系(m-クレゾ一ル(100 eq), エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 2時間 (C末端がカルボン酸体 の場合) または 3時間 (C末端がアミド体の場合) 反応させた。
<製造例: I 7 :ポリペプチド TE 005の製造〉
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Arg-OH
(TE14005)
1. TE14005保護ポリペプチド樹脂の合成
最初の 14'位アルギニンを導入したアルコ樹脂 Fmoc-Arg(Pbf)-Alko resin (0.7 匪 ol/g) 270 nig (0.2 mmol)から Fmoc基を 20%ピぺリジン /DMFで除 去後、 12位に相当する Fmoc- Cys(Trt) - 0H (2.5 eq)を加え DMF中、 DIPCDI - HOBt法により縮合反応を行った。 縮合反応の進行の程度は、 Kaiser, E.ら (Anal. Biochem., 34: 595 (1970))のニンヒドリン試験により調べた。
2. 12位〜 1位アミノ酸の導入
以下同様にして、 順次、 Cit、 Arg(Pbf), Tyr(t - Bu)、 Pro, DGlu(O-t-Bu) , Lys(Boc)、 Arg(Pbf), Tyr(t-Bu), Cys(Trt), NaK Arg(Pbf), Arg(Pbf)残基 を樹脂に導入し保護基保護化ポリぺプチド樹脂を得た。
3. 脱保護基、 樹脂からのポリペプチドの分離及び精製
保護基保護化ポリペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン/ DMF処理により Fmoc 基を除去し、 次いで樹脂 200 mgに対して 1M TMSBr-チオア二ソール ZTFA (トリフルォロ酢酸)系(in-クレゾール(100 eq), エタンジチオール(300 eq) 存在下) 10 mLで 25 °C、 2時間反応させた。 反応混合物から樹脂を濾別し、 TFA 1 mLで 2回洗浄し、 瀘液、 洗液を合わせたものを減圧濃縮し、 残さに水 冷乾燥エーテル 30 mLを加え、 生じた沈殿物を遠心沈降とデカンテ一シヨン により上澄みから分離した。 得られた残さを冷ェ一テルで洗浄し、 1N酢酸 . 50 mLに溶解し、 蒸留水で 250 mLに希釈した。
4. 空気酸化による環化
上述のポリペプチドの希釈水溶液を濃アンモニア水で pH7.5に調整し、 通 気による空気酸化を行い環化させた。 本水溶液を大量分取型 HPLC (コスモジ —ル 5C18 AR-IIカラム:ァセトニトリル—水)およびゲルク口マトグラフィ — (Sephadex G- 15、 溶出液: 0. IN AcOH) により精製し、 単一ピークのポリ ペプチドを得、 凍結乾燥した。 純度は、 HPLCにより確認した。
収量 24.1 nig (7 AcOH塩) (21.3%)
[α]Β 23·6 = 一 5.36 (c 1.12, Η20)
イオンスプレーマススぺクトル (IS - MS): C89H136N32020S2
計算値: 2038.38 実測値: 2038
(卜リプルステージ四重極型質量分析装置 ΑΡΙ-ΙΠΕ (Sciex)) ぐ製造例 18 :ポリぺプチド TE14001の製造 >
H-DGlu-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Arg-OH
(TE14001)
製造例 17と同様の方法により TE14001を製造した。 但し、 12位〜 1位 アミノ酸の導入のところで、 8位の DGlu(0- 1- Bu)の代わりに DLys(Boc;)、 1 位の Arg(Pbf)の代わりに DGlu(O-t-Bu)を用いた。
<製造例 19 :ポリぺプチド TE14002の製造 >
H - Arg- Glu-Nal-Cys- Tyr- Arg- Lys- DLys- Pro- Tyr- Arg-Cit-Cys- Arg - 0H
(TE14002)
製造例 17と同様の方法により TE14002を製造した。 但し、 12位〜1位 アミノ酸の導入のところで、 8位の DGlu(0- t-Bu)の代わりに DLys(Boc;)、 2 位の Arg(Pbf)の代わりに Glu(O-t-Bu)を用いた。 t to ()o sBc o a隳栅 Λ73 2^ s8:Ί!Π
Figure imgf000060_0001
ぐ製造例 24 :ポリペプチド TE 011の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Cit-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Arg-NH2
(TE14011)
1. TE14011保護ポリペプチド樹脂の合成
Fmoc-Rinl アミド樹脂から Fnioc基を 20%ピペリジン, DMFで除去後、 14位 に相当する Fmoc- Arg(Pbf)-0H (2.5 eq)を加え DMF中、 DIPCDI - HOBt法によ り縮合反応を行った。 縮合反応の進行の程度は、 Kaiser, E.ら(Anal.
Biochem., 34: 595 (1970))のニンヒドリン試験により調べた。
2. 12位〜 1位アミノ酸の導入
以下同様にして、 順次、 Cys(Trt)、 Cit、 Arg(Pbf)、 Tyr(t- Bu)、 Pro, DGlu O— t—Bu)、 Lys(Boc), Cit、 Tyr(t-Bu), Cys(Trt)、 NaK Arg(Pbf), ArgCPbf)残基を Rinkアミド樹脂に導入し、 保護基保護化ポリペプチド樹脂 を得た。
3. 脱保護基、 樹脂からのポリペプチドの分離及び精製
保護基保護化ポリペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン ZDMF処理により Fmoc 基を除去し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr -チオア二ソール ZTFA (トリフル ォロ酢酸)系(m-クレゾ一ル(100 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。 反応混合物から樹脂を濾別し、 TFAで 2回洗浄し、 瀘液、 洗液を合わせたものを減圧濃縮し、 残さに水冷乾燥エーテルを加え、 生じた沈殿物を遠心沈降とデカンテ一シヨンにより上澄みから分離した。 得 られた残さを冷ェ一テルで洗浄し、 1N酢酸に溶解し、 蒸留水で希釈した。 4. 空気酸化による環化
上述のポリペプチドの希釈水溶液を濃アンモニア水で PH7.5に調整し、 通 気による空気酸化を行い環化させた。 本水溶液を大量分取型 HPLC (コスモジ —ル 5C18 AR-IIカラム:ァセトニトリル—水)およびゲルクロマトグラフィ 一(Sephadex G- 15、 溶出液: 0. IN AcOH)により精製し、 単一ピークのポリ を得、 凍結乾燥した。 純度は、 HPLCにより確認した。 <製造例 25 :ポリペプチド TE14012の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-DGlu-Lys-DCit-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Arg-NH2 (TE14012) , 製造例 24と同様の方法により TE14012を製造した。 但し、 12位〜 1位 アミノ酸の導入のところで、 8位の DGlu(0- 1- Bu)の代わりに DCit、 6位の Citの代わりに DGlu(0- 1- Bu)を用いた。
<製造例 26 :ポリペプチド TE14013の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-DGlu-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Arg-NH2 (TE14013)
製造例 24と同様の方法にょり 1514013を製造した。 但し、 12位〜1位 アミノ酸の導入のところで、 6位の Citの代わりに DGlu(0- 1- Bu)を用いた。
<製造例 27 :ポリペプチド TE140Uの製造 >
H-DGlu-Arg-Nal-Cys-Tyr-Cit-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys- Arg- M2 (TE1401 )
製造例 24と同様の方法にょり 1814014を製造した。 但し、 12位〜1位 アミノ酸の導入のところで、 1位の Arg(Pbf)の代わりに DGlu(0- 1- Bu)を用い た。
<製造例 28 :ポリペプチド TE14015の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Cit-Lys-DGlu-Pro-DGlu-Arg-Cit-Cys-Arg-NH2
(TE14015)
製造例 24と同様の方法により TE14015を製造した。 伹し、 12位〜1位 アミノ酸の導入のところで、 10位の Tyr(t-Bu)の代わりに DGlu(0-t - Bu)を用 いた。
<製造例 29 :ポリペプチド TE14016の製造〉
H-Ar g-Ar g-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys -DG 1 u-P r o-Tyr-Ar g- DG 1 u-Cy s -Ar g-NH2 (TE14016)
製造例 2 4と同様の方法により TE14016を製造した。 但し、 1 2位〜 1位 アミノ酸の導入のところで、 1 2位の Ci tの代わりに DGlu (0 - 1- Bu)を用いた
<製造例 3 0 :ポリペプチド AcTE14014〜AcTE14016の製造 >
Ac-DGlu-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(AcTE OU)
Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-DGlu-Arg-Ci t-Cys-Arg-N¾ (AcTE14015)
Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-DGlu-Cys-Arg-NH2 (AcTE14016)
製造例 2 7〜 2 9と同様の方法により TE14014〜TE14016のァセチル化体 を製造した。 但し、 保護基保護化ポリペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン ZDMF 処理により Fmoc基を除去し、 無水酢酸(100 eq) - sリジン(100 eq) ZDMF処 理によりァセチル化し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソ一ル ZTFA (トリフルォロ酢酸)系 (m-クレゾ一ル(100 eq) , エタンジチォ一ル(300 eq) 存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。 く製造例 3 1 :ポリぺプチド TF1の製造〉 ,
Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-N¾
(TF1 : AcTEHOU)
製造例 2 4と同様の方法により TF1を製造した。 但し、 保護基保護化ポリ ペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン/ DMF処理により Fmoc基を除去し、 無水酢 酸(100 eq) - sリジン(100 eq) ZDMF処理によりァセチル化し、 次いで樹脂 に対して 1M TMSBr-チオア二ソール ZTFA (トリフルォロ酢酸)系(m-クレゾ一 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた c ぐ製造例 3 2 :ポリペプチド TF2の製造 >
guanyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TF2 : guanyl-TEHOl l)
製造例 2 4と同様の方法により TF2を製造した。 但し、 保護基保護化ポリ ペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 1H -ビラ ゾ一ル- 1-力ルポキサミジン(5 eq) -,N-ジイソプロピルェチルァミン (10 eq) ZDMF処理によりグァニル化し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr-チオア 二ソ一ル ZTFA (トリフルォロ酢酸)系(in-クレゾ一ル(100 eq)、 エタンジチ オール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。 ぐ製造例 3 3 :ポリぺプチド TF3の製造 >
TMguanyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2
(TF3 : TMguanyl-TEHOl l)
製造例 2 4と同様の方法により TF3を製造した。 但し、 保護基保護化ポリ ペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン/ DMF処理により Fmoc基を除去し、 2- (1H - ベンゾトリァゾ一ル-卜ィル) - 1,1 , 3, 3-テトラメチルゥロニゥム テトラフ ルォロボレ一ト (5 eq) ZDMF処理によりテトラメチルダァニル化し、 次いで 樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソール /TFA (トリフルォロ酢酸)系(in-クレ ゾ一ル(100 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応さ せた。
<製造例 3 4 :ポリぺプチド TF4の製造 >
TMguanyl-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TF4 : TMguanyl-TEHOl l (2-14) )
製造例 2 4と同様の方法により TF4を製造した。 但し、 1位のアルギニン を縮合しなかった。 ぐ製造例 3 5 :ポリぺプチド TF5の製造 >
4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys~Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2 (TF5 : 4F-benzoyl-TE14011)
製造例 2 4と同様の方法により TF5を製造した。 但し、 保護基保護化ポリ ペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 4-フル ォロ安息香酸 (2. 5 eq)を DIPCDI -HOBt法により縮合し、 次いで樹脂に対し て 1M TMSBr-チオア二ソ一ル ZTFA (トリフルォロ酢酸)系(m-クレゾ一ル(100 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。 ぐ製造例 3 6 :ポリぺプチド TF6の製造 >
2F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2 (TF6 : 2F-benzoyl-TE14011)
製造例 2 4と同様の方法により TF6を製造した。 但し、 保護基保護化ポリ ペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン/ DMF処理により Fmoc基を除去し、 2-フル ォロ安息香酸 (2. 5 eq)を DIPCDI -HOBt法により縮合し、 次いで樹脂に対し て 1M TMSBr-チオア二ソ一ル /TFA (トリフルォロ酢酸)系(m-クレゾール(100 eq) , エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。 ぐ製造例 3 7 :ポリぺプチド TF7の製造 >
APA-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(TF7 : APA-TE1 011 (2-14))
製造例 2 4と同様の方法により TF7を製造した。 但し、 12位〜 1位ァミノ 酸の導入のところで、 1位の Arg (Pbf)の代わりに、 5 -ァミノペンタン酸 (Fmoc保護体)を導入した。
<製造例 3 8 :ポリぺプチド TF8の製造 >
desamino-R-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TF8 : desamino- R- TE1401 1 (2-14) )
製造例 2 4と同様の方法により TF8を製造した。 但し、 12位〜 1位ァミノ 酸の導入のところで、 1位の Arg (Pb f)の代わりに、 5 -ァミノペンタン酸 (Fmoc保護体)を導入し、 さらに、 保護基保護化ポリペプチド樹脂は、 20%ピ ペリジン/ DMF処理により Fmoc基を除去し、 1H-ピラゾール -1 -カルボキサミ ジン(5 eq) -, N-ジイソプロピルェチルァミン (10 eq) ZDMF処理によりグァ ニル化し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソール ZTFA (トリフルォ 口酢酸)系(m-クレゾール(100 eq)、 エタンジチオール (300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。 ぐ製造例 3 9 :ポリぺプチド TF9の製造 >
guany 1 -Arg-Na 1 -Cys-Tyr-C i t -Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-C i t - Cy s-Ar g - NH2 (TF9 : guany 1-TE 14011 (2-14) )
製造例 3 2と同様の方法を用いて TF9を製造した。 但し、 1位のアルギニ ンを縮合しなかった。 '
<製造例 4 0 :ポリペプチド TF10の製造 >
s u c c i ny 1 -Ar g-Na 1 -Cy s -Ty r-C i t -Ly s -DG 1 u-P r o-Ty r-Ar g-C i t -Cy s -Arg-NH2 (TF10 : succ inyi- TE1401 1 (2-14) )
製造例 2 4と同様の方法により TF10を製造した。 但し、 1位のアルギニ ンを縮合しなかった。 また、 保護基保護化ポリペプチド樹脂は、 20%ピペリ ジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 無水コハク酸(5 eq) /ピリジン処理 によりへミスクシニル化し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソ一ル /TFA (トリフルォロ酢酸)系(m-クレゾ一ル(100 eq)、 エタンジチオール (300 eq)存在下)で 25 t:、 3時間反応させた。
<製造例 4 1 :ポリペプチド TF11の製造 >
glutaryl-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TF11 : glutaryl-TEHOl l (2-14) )
製造例 4 0と同様の方法により TF11を製造した。 但し、 保護基保護化ポ リペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 無水 ダルタル酸(5 eq) /ピリジン処理によりへミスクシニル化し、 次いで樹脂に 対して 1M TMSBr-チオア二ソール ZTFA (トリフルォロ酢酸)系(m-クレゾール (100 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。 <製造例 42 :ポリペプチド TF12の製造 >
deaminoTMG-APA-Arg-Nal-Cys-Tyr-Cit-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Arg- NH2
(TF12: deaminoTMG-APA-TE14011 (2-14)) .
製造例 24と同様の方法により TF12を製造した。 但し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 1位の ArgGPbf)の代わりに、 5-ァミノペンタン酸 (Fmoc保護体)を導入し、 さらに、 保護基保護化ポリペプチド樹脂は、 20%ピ ペリジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 2- (1H -ベンゾトリアゾール -1 - ィル) -1,1,3,3-テトラメチルゥロニゥム テトラフルォロボレ一ト (5 eq) ZDMF処理によりテトラメチルダァニル化し、 次いで樹脂に対して 1M TMSBr-チオアニソ一ルノ TFA (トリフルォロ酢酸)系(m-クレゾ一ル(100 eq) エタンジチオール (300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応させた。
,
ぐ製造例 43 :ポリペプチド TF15の製造 >
-C¾-Arg-Nal-Cys-Tyr-Cit-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Cit-Cys-Arg-NH2 (TF15: R-CH2NH-RTE14011)
製造例 24と同様の方法により TF15を製造した。 但し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 1位に Fmoc-Arg(Pbf)-0Hを縮合する代わりに、 Fmoc-Arg(Pbf)-H (アルデヒド)を還元的ァミノ化により縮合した
(NaB (CN)H3(3 eq), Ac0H(l eq) /DMF) 0
<製造例 44 :ポリぺプチド TF17の製造 >
H-Arg-Na 1 -Cys-Tyr-C i ί -Lys-DG 1 u-Pro-Tyr-Arg-C i t -Cys-Arg-NH2 (TF 17) (TF17: TE14011 (2-14))
製造例 24と同様の方法により TF17を製造した。 但し、 1位のアルギニ ンを縮合しなかった。 <製造例 4 5 :ポリぺプチド TF18の製造〉
TMguany 1 -Ar g-Ar -Na 1 -Cys-Ty r-C i t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2
(TF18 : TMguany卜 TCI 4012)
製造例 9と同様の方法により TF18を製造した。 但し、 保護基保護化ポリ ペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 2- (1H- ベンゾトリアゾ一ル -卜ィル) -1, 1 , 3, 3 -テトラメチルゥロニゥム テトラフ ルォロボレート (5 eq) ZDMF処理によりテトラメチルダァニル化し、 次いで 樹脂に対して 1M TMSBr-チオアニソ レ TFA (トリフルォロ酢酸)系(m-クレ ゾール(10Q eq)、 エタンジチオール (300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応さ せた。
<製造例 4 6 :ポリペプチド TF19の製造 >
ACA-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2 (TF19 : ACA-TC14012)
製造例 9と同様の方法により TF19を製造した。 伹し、 12位〜 1位ァミノ 酸の導入のところで、 1位の Arg (Pbf)の次に、 6-ァミノへキサン酸 (Fraoc保 護体)を導入した。 <製造例 4 7 :ポリぺプチド TF20の製造 >
ACA-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (TF20 : ACA-T140)
製造例 1 7と同様の方法により TF20を製造した。 但し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 8位の DGlu (0- 1- Bu)の代わりに DLys (Boc:)、 1位の Arg (Pbf)の代わりに 6-ァミノへキサン酸 (Fmoc保護体)を用いた。
<製造例 4 8 :ポリペプチド TZ14011の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Arg-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(TZ14011) 製造例 2 4と同様の方法により TZ14011を製造した。 伹し、 12位〜 1位ァ ミノ酸の導入のところで、 8位の DGlu (O-t-Bu)の代わりに DLys (Boc;)、 7位 の Lys (Boc)の代わりに Arg (Pbf)を用いた。 ぐ製造例 4 9 :ポリペプチド AcTZUOl lの製造 >
Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Arg-DLys-Pro-Tyr-Arg-Gi t-Cys-Arg-NH2
(AcTZHOl l)
製造例 4 8と同様の方法にょり八^∑14011を製造した。 但し、 保護基保護 化ポリぺプチド樹脂は、 20%ピペリジンノ DMF処理により Fmoc基を除去し、 無水酢酸(100 eq) - sリジン(100 eq) ZDMF処理によりァセチル化し、 次い で樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソールノ TFA (トリフルォロ酢酸)系 (m-ク レゾール(100 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応 させた。 ぐ製造例 5 0 :ポリぺプチド TN14003の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(TN14003)
製造例 9と同様の方法により TN14003を製造した。 但し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 8位の DCi tの代わりに DLys (Boc)を用いた。
<製造例 5 1 :ポリぺプチド TN14005の製造 >
H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(TN14005)
製造例 9と同様の方法により TN14005を製造した。 但し、 12位〜 1位アミ ノ酸の導入のところで、 6位の Ci tの代わりに Arg (Pbf)を用いた。
<製造例 5 2 :ポリぺプチド AcTN14003の製造 >
Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(AcTN14003) 製造例 5 0と同様の方法により ACTN14003を製造した。 但し、.保護基保護 化ポリぺプチド樹脂は、 20%ピペリジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 無水酢酸(100 eq) -sリジン(100 eq) /DMF処理によりァセチル化し、 次い で樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソール ZTFA (トリフルォロ酢酸)系 (m -ク レゾ一ル(100 eq)、 エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応 させた。
<製造例 5 3 :ポリぺプチド AcTN14005の製造〉
Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-NH2
(AcTN14005)
製造例 5 1と同様の方法により ACTNU005を製造した。 但し、 保護基保護 化ポリペプチド樹脂は、 20%ピぺリジン ZDMF処理により Fmoc基を除去し、 無水酢酸(100 eq) -sリジン(100 eq) ZDMF処理によりァセチル化し、 次い 樹脂に対して 1M TMSBr-チオア二ソール ZTFA (トリフルォロ酢酸)系 (m-ク レゾール(100 eq) , エタンジチオール(300 eq)存在下)で 25 °C、 3時間反応 させた。 ぐ製造例 5 4 :ポリぺプチド 4F-benzoy卜 TN14003の製造 > ' 4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2
(4F-benzoyl-TN14003) - 1 . 4F-benzoyl-TN14003保護ポリべプチド樹脂の合成
Fmoc - Rinkアミド樹脂 (0. 34 mmol/g) 2. 94 g (1 mmol)から Fmoc基を 20% ピぺリジン/ DMFで除去後、 14位に相当する Fmoc-Arg(Pbf) - 0H (2. 5 eq)を 加え DMF中、 DIPCDI -HOBt法により縮合反応を行った。 縮合反応の進行の程 度は、 Kai ser, E.ら(Anal. Biochem. , 34 : 595 (1970))のニンヒドリン試験 により調べた。
2 . 13位〜 1位アミノ酸の導入
以下同様にして、 順次、 Cys (Trt)、 Ci t、 Arg(Pbf) , Tyr (t-Bu) , Pro, DLys(Boc)、 Lys (Boc) , Cit、 Tyr(t-Bu), Cys(Trt)、 Nal、 Arg(Pbf),
Arg(Pbf)残基を Rinkアミド樹脂に導入し、 最後 N端に 4-フルォロ安息香酸 (2.5 eq)を DIPCDI - HOBい法により縮合し、 保護基保護化ポリペプチド樹脂 を得た。
3. 脱保護基、 樹脂からのポリペプチドの分離及び精製
ポリペプチド樹脂(1 匪 ol)に対して 1M TMSBr-チオア二ソ一ル ZTFA (トリ フルォロ酢酸)系(m-クレゾ一ル(100 eq), エタンジチオール(300 eq)存在 下) 270 mLで 25 °C、 3時間反応させた。 反応混合物から樹脂を濾別し、 TFA
5 mLで 2回洗浄し、 瀘液、 洗液を合わせたものを減圧濃縮し、 残さに水冷乾 燥エーテル 300 mLを加え、 生じた沈殿物をデカンテーションにより上澄み から分離した。 得られた残さを冷ェ一テルで洗浄し、 1N酢酸 500 mLに溶解 し、 蒸留水で 2.5 Lに希釈した。
4. 空気酸化による環化
上述のポリぺプチドの希釈水溶液を濃アンモニア水で pH7.5に調整し、 通 気による空気酸化を行い環化させた。 本水溶液を大量分取型 HPLC. (コスモジ ール 5C18 AR-IIカラム:ァセトニトリル一水) により精製し、 単一ピ一ク のポリペプチドを得、 凍結乾燥した。 純度は、 HPLCにより確認した。
収量 551.5 mg (6 TFA塩) (19.4%)
[α]Β 28·6- - 10.25 (c 0.39, Η20)
イオンスプレーマススペクトル (IS- MS): C97H144FN33019S2
計算値: 2159.52 実測値:' 2161
(トリプルステージ四重極型質量分析装置 API- 11 IE (Sc i ex) ) ぐ製造例 55 :ポリペプチド 4F- benzoyl- TE14011- Meの製造 >
4-f luorobenzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NHMe
(4F- benzoy卜 TE1401卜 Me)
1. 4F- benzoyl- TE 1401卜 Me保護ポリぺプチド樹脂の合成
4-sulfamylbutyryl AM NovaGel樹脂に、 14位に相当する Fmoc- Arg(Pbf) - OH (4 eq)を加え CHC13中、 PyBOP (3 eq) -DIPEA (6 eq)法により- 0° Cにて 縮合反応を行った (本縮合反応を 2回行った)。 この樹脂から Fmoc基を 20% ピぺリジン/ DMFで除去後、 13位に相当する Fmoc- Cys(Trt) - 0H (2.5 eq)を 加え DMF中、 DIPCDI -HOBt法により縮合反応を行った。 縮合反応の進行の程 度は、 Kaiser, E.ら(Anal. Biochem., 34: 595 (1970))のニンヒドリン試験 により調べた。 以下、 12位〜 1位アミノ酸の導入に関して同様に 順次、 Cit、 Arg(Pbf), Tyr(t-Bu), Pro, DGlu(0- 1- Bu)、 Lys(Boc)、 Cit、 Tyr(t- Bu)、 Cys(Trt), Nal、 Arg(Pbf), Arg(Pbf)残基を sulfamylbutyryl樹脂に導 入し、 最後 N端に 4- fluorobenzoic acid (2.5 eq)を DIPCDI - HOBt法により 縮合し、 保護基保護化ポリペプチド樹脂を得た。
2. C端アルキルアミド化、 脱保護基、 樹脂からのポリペプチドの分離及び 保護基保護化ポリペプチド樹脂を、 ICH2CN (40 eq), DIPEA (10 eq)/匿 処理 (48時間) によりシァノメチル化し、 次いで樹脂に対して THF/DMF中メ チルァミン (excess) を作用させ、 C端がメチルアミド化された保護基保護 化ポリペプチドを樹脂から分離した。 次に、 保護基保護化ポリペプチドを 1 Mチオア二ソ一ル ZTFA (卜リフルォロ酢酸)系(in-クレゾール(100 eq), エタ ンジチオール(300 eq)存在下)で 25 。 C、 3時間反応させた。 反応液を減圧 濃縮し、 残さに水冷乾燥エーテルを加え、 生じた沈殿物を遠心沈降とデカン テ一ションにより上澄みから分離した。 得られた残さを冷ェ一テルで洗浄し、 1N酢酸に溶解し、 蒸留水で希釈した。
3. 空気酸化による環化
上述のポリペプチドの希釈水溶液を濃アンモニア水で pH7.5に調整し、 通 気による空気酸化を行い環化させた。 本水溶液を大量分取型 HPLC (コスモジ —ル 5C18 AR-IIカラム:ァセトニトリルー水)およびゲルク口マトグラフィ — (Sephadex G- 15、 溶出液: 0. IN AcOH)により精製し、 単一ピークのポリ ペプチドを得、 凍結乾燥した。 純度は、 HPLCにより確認した。 ぐ製造例 56 :ポリペプチド 4F- benzoy卜 TE14011- Etの製造〉 4-f luorobenzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NHEt
(4F-benzoyl-TE14011-Et)
製造例 5 5と同様の方法により F-benzoyl-TE14011-Et を製造した。 但し、 メチルァミンの代わりにェチルァミンを用いた。
<製造例 5 7 :ポリペプチド: 4F- benzoy卜 TE14011- iPrの製造 >
4-f luorobenzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-
Cys-Arg-NHiPr
(4F-benzoyl-TE14011-iPr) ,
製造例 5 5と同様の方法により 4F- benzoy卜 TE1401卜 iPrを製造した。 伹 し、 メチルァミンの代わりにイソプロピルアミンを用いた。
<製造例 5 8 :ポリペプチド 4F-benzoyl-TE14011-tyramineの製造 >
4-f luorobenzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t -
Cys-Arg-tyramine
(4F-benzoyl-TE14011-tyramine)
製造例 5 5と同様の方法により 4F- benzoyl- TE Ol l-tyramineを製造した。 但し、 メチルァミンの代わりにチラミン (P-ヒドロキシフエニルェチルアミ ン) を用いた。
<試験例 1 : CXCL12の CXCR4受容体への結合に対する、 本発明のポリぺプチ ドの阻害活性 >
アツセィプレートにバッファ一 (0. 5% BSA, 20mM HEPESを含む
Dulbecco ' s PBS 溶液 (pH 7. 0) ) にて 6 xl O 6 ee l l s/mL に調製した
Jurkat ヒト T細胞白血病細胞 を 50 L、 バッファ一にて希釈した被検化合 物 (表 1 ;各化合物は酢酸塩の形で合成したものを用いた) と 200 pM 1251- CXCL12溶液 をそれぞれ 25 L分注し、 室温で 1時間反応させ結合反応を行 つた。 反応後、 反応溶液を 9 6ゥエル G F ZCフィルタープレートにて吸引 濾過し、 各 wellの放射活性をトップカウントで測定した。 被検化合物を添 加しない場合の放射活性を 100%、 放射標識していない CXCL12を ΙΟΟηΜ添加 した場合の放射活性を 0%として各被検化合物の阻害活性を求めた。 結果を以 下の表 1に示す。
Figure imgf000074_0001
表 1の結果から、 本化合物は強い結合阻害活性を有することが示された。 ぐ試験例 2 : CXCL 12によって誘導される乳癌細胞遊走性に対する TE - 14005の阻害活性 >
トランスゥエルフィルター (ポリカーポネ一トフィルタ一、 8 m径、 C o s t a r社)を 10 g/mL フイブロネクチン溶液中に 37 °Cで 6時間処理 した後、 風乾した。 トランスゥエルの下室に CXCL12 (R&Dシステムズ社) 100 nMおよび被検物質を含むバッファー A (0. 1 %ゥシ血清アルブ ミン、 12mM HEPESを含む DMEM (G i bc oBRL) を 600 L/穴加えた。 上室に被検物質およびヒト乳癌 MD A— MB— 231細胞 . (アメリカンティッシューカルチャーコレクションより購入) 、 2 x 106 c e l l s/mLを含むバッファ一 Aを 1.00 L/穴加えた。 37°C、 5 % C02インキュベーター内で 15時間培養後、 フィルターの上面をふき取り 細胞を除去し、 0. 5%クリスタルバイオレット (和光純薬) を含む 25% メタノ一ル溶液によ.りフィルター下面の細胞を固定および染色し、 蒸留水で 洗った後風乾した。 フィルタ一部分を切り離し、 0. 1Mクェン酸ナト'リウ ム Z50 %エタノール溶液を加え、 クリスタルバイオレツ卜を溶かし出し、 550 nmの吸光度を測定した。 結果を図 1に示す。 Con t r o l (—) は CXCL12を添加しない場合の遊走性を示す。 CXCL12を添加することにより MD A— MB— 231細胞の遊走性は亢進した。 この CXCL 12で誘導さ れる MD A— MB— 231細胞の遊走性をアンタゴニスト、 TE 14005 は 10 nMまで阻害した。 ぐ試験例 3 : CXCL1 の CXCR4受容体への結合に対する、 TC14012及び TN14003の阻害活性 >
アツセィプレートにバッファ一 (0.5% BSA, 20mM HEPESを含む
Dulbecco' s PBS溶液 ( H 7.0) ) にて 6 xlO 6cells/mL に調製した Jurkat ヒト T細胞白血病細胞 を 50 L、 バッファ一にて希釈した被検化合 物 (表 2 ;各化合物は酢酸塩の形で合成したものを用いた) と 200 pM 1251- CXCL12溶液 をそれぞれ 25^ L分注し、 室温で 1時間反応させ結合反応を行 つた。 反応後、 反応溶液を 96ゥエル GF/Cフィルタ一プレートにて吸引 濾過し、 各 wellの放射活性をトップカウン卜で測定した。 被検化合物を添 加しない場合の放射活性を 100%、 放射標識していない CXCL12を ΙΟΟηΜ添加 した場合の放射活性を 0 として各被検化合物の阻害活性を求めた。 結果を以 下の表 2に示す。 表 2
No. IC50 (nM)
TC14012 2.7
TN14003 2.6 表 2の結果から、 本化合物は強い結合阻害活性を有することが示された。
<試験例 4: CXCL 12によって誘導される乳癌細胞遊走性に対する TC -14012の阻害活性 >
トランスゥエルフィル夕一 (ポリカーポネ一トフィル夕一、 8 m径、 C o s t a r社)を 1 O g/mL フイブロネクチン溶液中に 37 °Cで 6時間処理 した後、 風乾した。 トランスゥエルの下室に CXCL12 (R&Dシステムズ社) 100 nMおよび被検物質を含むバッファ一 A (0. 1 %ゥシ血清アルブ ミン、 12mM HEPESを含む DMEM (G i b e oBRL) を 6、 00 t L/穴加えた。 上室に被検物質およびヒト乳癌 MDA— MB— 231細胞 (アメリカンティッシュ一カルチャーコレクションより購入) 、 2x 106 c e l l s/mLを含むバッファ一 Aを 100 L/穴加えた。 37°C、 5% C02インキュベータ一内で 15時間培養後、 フィルターの上面をふき取り 細胞を除去し、 0. 5%クリスタルバイオレット (和光純薬) を含む 25% メタノール溶液によりフィルタ一下面の細胞を固定および染色し、 蒸留水で 洗った後風乾した。 フィル夕一部分を切り離し、 0. 1Mクェン酸ナ卜リウ ム /50%エタノール溶液を加え、 クリスタルバイオレツトを溶かし出し、 550 nmの吸光度を測定した。 結果を図 2に示す。 Con t r o l (-) は CXCL12を添加しない場合の遊走性を示す。 Con t r o l (+) は CX CL 12を添加した場合の遊走性を示す。 CXCL12を添加することにより MD A-MB- 231細胞の遊走性は亢進した。 この CXCL 12で誘導される MDA-MB- 231細胞の遊走性をアンタゴニスト、 TC一 14012は 10nMまで阻害した。
<試験例 5 : CXCL 12によって誘導される T細胞由来白血病細胞遊走性 に対する 4Fb e n z oy 1— TN— 14003の阻害活性 >
トランスゥエル(ポリカーボネートフィルター、 8 m径、 Co s t a r 社)の下室に CXCL 12 (R&Dシステムズ社) 30 nM および被検物質 を含むバッファー A' (0. 1%ゥシ血清アルブミン、 12mM HEPES を含む DMEM (G i b c oBRL) を 600 L/穴加えた。 上室に被検 物質およびヒト T細胞由来白血病細胞 S U P— T 1細胞 (アメリカンティッ シュ一カルチャーコレクションより購入) 、 2x l 06c e l 1 s/mLを 含むバッファ一 Aを 100 L/穴加えた。 37°C、 5 %C02インキュベー 夕一内で 4時間培養後、 下室に移動した細胞数をコールターカウン夕一を用 いて測定した。 結果を図 3に示す。 Con t r o l (―) は CXCL 12を 添加しない場合の遊走性を示す。 Con t r o l (+) は CXCL 12を添 加した場合の遊走性を示す。 CXCL 12を添加することにより SUP— T 1細胞の遊走性は亢進した。 この CXCL 12で誘導される SUP— T 1細 胞の遊走性をアンタゴニスト、 4Fb e n z oy 1― TN— 14003は 1 0 nMまで阻害した。 以上より、 4Fb e nz oy l― TN— 14003は T細胞の運動性を低濃度で阻害することより、 慢性関節リュ一マチの阻害薬 として有用であると考えられる。
<試験例 6 : CXCL 12によって誘導される乳癌細胞遊走性に対する 4 F 一 b e nz oy l— TN— 14003の阻害活性 >
トランスゥエルフィルタ一 (ポリカーボネートフィルタ一、 8 m径、 C o s t a r社)を 1 O g/mL フイブロネクチン溶液中に 37 °Cでー晚処理し た後、 風乾した。 トランスゥエルの下室に CXCL12 (R&Dシステムズ社) 1 00 nM および 4 F— b e n z o y 1一 TN— 14003を含むバッファ 一 A (0. 1%ゥシ血清アルブミン、 12mM HEPESを含む DMEM (G i bc oBRL) を 600 L/穴加えた。 上室に 4Fb enz oy l -TN- 14003およびヒト乳癌 MDA— MB— 231細胞 (アメリカン ティッシユーカルチャーコレクションより購入) 、 2 X 106 c e 1 1 s/ mLを含むバッファ一 Aを 100 L/穴加えた。 37°C、 5 %C02インキ ュベータ一内で 15時間培養後、 フィル夕一の上面をふき取り細胞を除去し、 0. 5%クリスタルバイオレット (和光純薬) を含む 25%メタノール溶液 によりフィル夕一下面の細胞を固定および染色し、 蒸留水で洗った後風乾し た。 フィルタ一部分 ¾切り離し、 0. 1Mクェン酸ナトリウム/ 50%エタ ノール溶液を加え、 クリスタルバイオレットを溶かし出し、 550皿の吸 光度を測定した。 結果を図 4に示す。 Con t r o l (—) は CXCL12を添 加しない場合の遊走性を示す。 Con t r o l (+ ) は CXCL 12を添加 した場合の遊走性を示す。 CXCL 12を添加することにより MDA— MB -231細胞の遊走性は亢進した。 この CXCL 12で誘導される MDA— MB- 231細胞の遊走性をアンタゴニスト、 4Fb en z oy l— TN— 14003は 100 nMまで阻害した。 <試験例 7 : 4Fb enz oy l -TN-14003の抗転移活性 >
5週!^雌の CB— 17 SC IDマウス (日本クレア) に 106個の MDA — MB— 231ヒ卜乳癌細胞を尾静脈より移植した。 4Fb enz oy l _ TN- 14003を生理的食塩水で 8 OmgZmLに調製し、 徐放的浸透圧 ポンプ (アルゼットポンプ、 アルザ社、 2週間徐放用) に封入し (投与量と してはそれぞれ、 18.2 mg/kg/day相当) 、 移植前日にマウス背部皮下に装着 した。 さらに、 移植 14日後に同用量薬物を含むアルゼットポンプを追加装 着した。 対照群には生理的食塩水を注入したアルゼットポンプを追加装着し た。 移植 28日後、 マウスを解剖し、 気管より 2%エバンスブルー溶液 約 2 mLを注入し、 肺を染色した。 肺を取り出し、 Bou i n ' s液中に浸 し、 染色、 固定した。 転移巣 (黄色に染色される部分) を目視で観察するこ とにより明確な抗転移活性があるか否かを判断した。 結果を図 5に示す。 対 照群の肺においては黄色に染色される部分が一様に認められ肺への転移が観 察された。 一方、 4Fbe n z oy l— TN— 14003投与群においては 黄色に染色される割合が少ない症例が観察された。 相対的に、 4 F b e n z oy 1 -TN- 14003投与群においては転移が抑制されていることが観 察された。
<試験例 8 : CXCL 12によって誘導されるヒト T細胞株 (Jurkat) およ びマウス脾細胞の遊走性に対する 4Fb en z oy l— TN14003の阻 害活性 >
1. ヒト T細胞株の遊走反応に及ぼす影響
RPMI-1640およびゥシ胎児血清 (FCS)は BioWhittakerより、 penicillin- streptomycin溶液、 RPMI- 1040 (フエノールレツド不含) および HEPESは Invitrogenより、 BSAは Sigmaより、 ヒト SDF - 1 « (CXCL12) は Genzymeよ り購入した。 ヒト Tリンパ球細胞株 Jurkatは ATCCより購入し、 RPMI-1640 10¾ FCS中で培養した。 4F- benzoyl- TN14003は PBSに溶解して実験に供した。
24穴 Transwell (Costar, polycarbonate膜、 ポアサイズ 5 m) を用い て遊走反応を行っ 。 Transwell下層に SDF-la (最終濃度 1 ng/mL) 600 Lを添力 Πし、 5xl05個の細胞 (200 L) を insertに加え、 37°Cで 4時間 反応させた。 細胞は薬物と 37°Cで 30分プレインキュペートした。 遊走反応 は 20麵 ol/L HEPES、 0.5¾ BSA含有の RPMI-1640培地中で行った。 下層に遊 走した細胞を回収し、 細胞数を Coulter Counterを用いて計測した。 各濃度 の薬物による遊走反応に対する抑制率 (%)は次式から求め、 その抑制率から IC5。値を算出した。 )
Figure imgf000079_0001
)
その結果、 図 6に示される通り、 Jurkat細胞は SDF-1 a;に対して強い細胞 遊走反応性を示した。 4F- benzoyl- TN14003は本反応を濃度依存的に抑制し、 その IC5。値は 0.65 nniol/Lであった。
2. マウス脾細胞の遊走反応に及ぼす影響
BALB/cマウス (雄、 日本チヤ一ルスリバ一) より脾臓を採取し、 単細胞浮 遊液とし、 赤血球を破碎して脾細胞を調製した。
Transwell (ポアサイズ 5 μΐη) 下層に SDF-Ια (Peprotech, 最終濃度 100 ng/mL) を添加し、 lxl06/wellの細胞 (100 JLLD を insertに加え、 37。Cで 2.5時間反応させた。 細胞は薬物と 37°Cで 30分プレインキュベ一トした。 遊走反応は 20 mmol/L HEPES, 0.5% BSA含有の RPMI- 1640培地中で行った。 下層に遊走した細胞数は Coulter Counter を用いて計測した。 前項と同様に、 各濃度の薬物による遊走反応の抑制率および阻害作用の IC5。値を算出した。 その結果、 図 7に示される通り、 4F- benzoy卜 TN14003は SDF- 1ひに対する マウス脾細胞の遊走反応に対して濃度依存的な抑制作用を示した。 その IC50 値は 0.54 nmol/Lであり、 ヒト細胞の場合と同程度の阻害作用を示した。 こ のことより、 本ペプチドに関してはヒトとマウス間で種差がほとんどないこ とが確認された。
<試験例 9 :マウス遅延型過敏反応 (DTH) に及ぼす 4 Fb e n z oy 1 一 TNI 4003の影響 >
緬羊保存血は日本生物材料セン夕一より購入した。 緬羊保存血は生理食塩 液で 2回洗浄し、 生理食塩液に懸濁してヒッジ赤血球 (SRBC) として用いた。 SRB 懸濁液 1.0 X 109 cells/mLを 14倍量の蒸留水で溶血した時のォキシへ モグロビンの 0D541 値がほぼ 0.700に相当するとされているので、 SRBC 密度はそれに応じて調製した。
BALB/cマウス (雄、 6週齢、 日本チヤ一ルスリバ一) の左後肢足躕に 2xl07 cells/50 i 1の SRBCを皮下投与して感作した。 5日後右後肢足躕に 108 cells/50 1の SRBCを皮下投与し DTH反応を誘発した。 抗原誘発の直 前および 24時間後に右後肢足躕の厚さをデジタルマイクロメ一夕一 (ミツ トヨ CD-15B) を用いて測定し、 腫脹による足躕の厚みの増加 (MI) を DTH 反応の指標とした。
4F - benzoy卜 TN14003は PBSに溶解し、 Alzet 浸透圧ポンプ (Alza、 0.5 L/hr 7日間持続型) を用いて持続的に投与した。 浸透圧ポンプは感作前日に エーテル麻酔下で背部皮下に埋め込んだ。 対照として PBSを注入したポンプ を同様に埋め込んだ。 4F_benzoy卜 TN14003は 4.8、 24および 120 /zg/dayの 用量を投与した。
デ一夕は平均値士標準誤差 (n=7) として表した。 ffilUams検定で行い、 p ≤0.025を有意とした。
その結果、 図 8に示される通り、 4F-benzoyl-TN14003 (4.8、 24.および 120 ^g/day) は用量依存的かつ有意に足躕浮腫を抑制し、 その抑制率は 各々 9、. 31および 51%であった。 このことより、 CXCR4が DTH反応等 の細胞性免疫において重要な役割を果たしていることが示唆された。 <試験例 1 0 :マウスコラーゲン関節炎に対する 4Fb e n z o y 1 -TN 14003の治療効果 >
FK-506は自体公知の方法 (Kino T. et al., J. Antibiot., 1987 40(9): 1249-55) により精製した。 Methotrexateは和光純薬より、 indomethacinは Sigmaより、 ゥシ Π型コラーゲンはコラーゲン技術研修会より、 Freimd's complete adjuvant (FCA) は Difcoより、 抗マウス IgG2a抗体は Zymedより それぞれ購入した。 '
ゥシ Π型コラ一ゲンを 0.05 mol/L の酢酸溶液で 2 mg/mL の濃度に溶解し、 等量の FCAでェマルジヨンを調製した。 DBA/1JNマウス (雄、 6週齢、 日本 チヤ一ルスリバ一) の尾根部皮内に 50 Lのェマルジヨンを接種して感作 した。 21日後に同様に追加免疫を行った。 追加免疫から 2週にわたり体重お よび後肢踵厚みの測定ならびに関節炎スコアリングを行った。 関節炎スコア は各肢 0-3点でスコア化し、 その合計 (12点満点) で評価した (0, 正常; 1, 軽度な腫脹または単指の腫脹; 2, 中程度の腫脹または複数指の腫脹; 3, 重度の腫脹) 。 追加免疫の 2週後に四肢および血清を採取した。
ゥシ Π型コラーゲン(10 g/mL PBS溶液)をィムノプレートにコート、 ブ ロッキングした後、 1000倍希釈したマウス血清を 100 L添加し、 室温で 2 時間放置した。 洗浄後抗マウス IgG2a抗体 (1000倍希釈) を添加した。 洗浄 後 TMBを添加し、 室温で 30分放置後 H2S04を等量添加し、 A450M1を測定した。
Indomethacin (1 mg/kg) 、 methotrexate (3 mg/kg) および FK- 506 (10 mg/kg) は 0.5%メチルセルロースに懸濁し、 0.1 mL/lOg体重の容量で追加 免疫当日から 2週間毎日経口投与した。 対照群には同容量の 0.5%メチルセ ルロース液を経口投与した。 4F - benzoy卜 TN14003は PBSに溶解し、 Alzet 浸 透圧ポンプ (Alza、 0.5 μΐ7ΐΐΓ 2週間) を用いて持続的に投与した。 浸透圧 ポンプは追加免疫前日にエーテル麻酔下にマウス背部皮下に埋め込んだ。 対 照として PBSを注入したポンプを同様に埋め込んだ。 各薬物の評価は追加免 疫 2週後の値をもつて行つた。
データは平均値土標準誤差 (n=8— 12) として表した。 2群間の比較は
Student's t検定にて行い、 p≤0.05を有意とした。 多重比較は Dunne 11検定 にて行い、 p≤0.05を有意とした。
その結果、 Indomethacin (1 rag/kg, p.o.)、 methotrexate (3 mg/kg, P.O.)および FK-506 (lOmg/kg, p. o. )はいずれも後肢踵腫脹を有意に抑制し、 関節炎スコアに対しては有意または明らかな抑制作用を示した (図 9) 。
4F-benzoyl-TN14003 (120 /day) は、 後肢踵腫脹、 関節炎スコアおよ び体重減少に対して有意な抑制作用を示した。 また、 抗 Π型コラーゲン特異 的 IgG2a抗体価の増加に対して抑制傾向を示した (図 10) 。 これらの抑制 効果は上記既存薬と同等もしくはそれ以上であった。 産業上の利用可能性
CXCR4拮抗作用を有する本発明のペプチド性化合物は、 CXCR4と CXCL 12/SDF- 1ひとの結合を阻害することから、 CXCR4を発 現している癌種、 例えば、 口腔癌、 咽頭癌、 口唇癌、 舌癌、 歯肉癌、 鼻咽頭 癌、 食道癌、 胃癌、 小腸癌、 結腸癌を含む大腸癌、 肝臓癌、 胆のう癌、 滕臓 癌、 鼻腔癌、 肺癌、 骨肉腫、 軟部組織癌、 皮膚癌、 黒色腫、 乳癌、 子宮癌、 卵巣癌、 前立腺癌、 精巣癌、 陰茎癌、 膀胱癌、 腎臓癌、 脳腫瘍、 甲状腺癌、 リンパ腫、 白血病などの癌細胞の遊走反応を抑制することができ、 これらの 癌に対しての予防及び Z又は治療薬として有用である。 また、 本発明のぺプ チド性化合物は、 CXCL 12ZSDF— 1 によって誘導される免疫細胞 の遊走反応を抑制することができ、 慢性関節リューマチの予防及び 又は治 療薬として有用である。

Claims

請求の範囲
1 . 下記式 (I a )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 13 14
Al-A2-A3-Cys-Tyr-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-Cys-Al l ( l a )
(式中、
A 1は、 N末端で誘導体ィ匕されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
A 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
A 4、 A 5及び A 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
A 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
A 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
A l lは、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩を含有してなる、 癌または慢性関節リユーマチの予防及び/又は治
2 . 上記式 (l a ) において、
A 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 -シトルリン、 ァ ラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失しており ;
A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 シトルリ ン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合には、 アルギニンまたは グルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合には、 N末端で誘導体化 されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 4は、 アルギニン、 シトルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表 し;
A 5は、 アルギニン、 シトルリン、 ァラニン、 リジン又はグルタミン酸残 基を表し;
A 6は、 リジン、 ァラニン、 シトルリン又はグルタミン酸残基を表し; A 7は、 プロリン又はァラニン残基を表し;
A 8は、 チロシン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 9は、 アルギニン、 シトルリン又はグルタミン酸残基を表し; · A 1 0は、 シトルリン又はグルタミン酸残基を表し;
A l 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン 酸残基を表すものである、 請求項 1記載の予防及び Z又は治療剤。
3 . 下記式 (I b )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Bl-B2-B3-Cys-Tyr-B4-B5-B6-B7-B8-B9-B10-Cys-Bl l ( I b )
(式中、
B 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいグルタミン酸残基であるか、 又は欠失しており ; B 2は、 B 1が N末端で誘導体化されていてもよいグルタミン酸残基であ る場合には、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 B 1が欠失してい る場合には、 N末端で誘導体ィヒされていてもよいアルギニン又はグルタミン 酸残基を表し;
B3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
B4、 85及び89は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し';
B6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 マラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
B7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
B8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
B 10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
B 11は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 Cy sはシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。
4. B 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいグルタミン酸残基である, 請求項 3記載のぺプチド又はその塩。
5. 下記式 ( I c )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 13 14
Cl-C2-C3-Cys-Tyr-C4-C5-C6-C7-C8-C9-C10-Cys-Cll (I c)
(式中、 CIは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
C2は、 C 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 グルタミン酸残基を表し、 C 1が欠失している場合には、 N末端で誘導 体化されていてもよいグルタミン酸残基を表し;
C 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
C4、 。5及びじ9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
C 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
C7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
C8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
C 10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
C 11は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 Cy s.はシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。
6. 下記式 (I d)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Dl-D2-D3-Cys-Tyr-D4-D5-D6-D7-D8-D9-D10-Cys-Dll (I d)
(式中、 D lは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、. リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
D 2は、 D 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 D 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を ' 表し;
D 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
D 4は、 ダル夕ミン酸残基を表し;
D 5及び D 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリ ン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
D 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
D 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ 'ン又はアルギニン残基を表し;
D 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァ ニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
D 1 0は、 シ卜ルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
D 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し; , 上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。 .
7 . 下記式 ( I e )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 13 14 El-E2-E3-Cys-Tyr-E4-E5-E6-E7-E8-E9-E10-Cys-El l ( I e )
(式中、
E lは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
E 2は、 E 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 E 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
E 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
E 4及び E 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリ ン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
E 5は、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
E 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 アラ^ン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
E 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
E 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
E 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
E 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。
8. E 5は、 グルタミン酸残基を表す、 請求項 7記載のペプチド又はその塩。
9. 下記式 ( I ί )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Fl-F2-F3-Cys-Tyr-F4-F5-F6-F7-F8-F9-F10-Cys-Fll (I f)
(式中、
.F 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
F2は、 F 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 F 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し; , ·
F3は、 芳香族アミノ酸残基を表し.;
F4、 5及び?9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
F6は、 グルタミン酸残基を表し;
F7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
F8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
F 10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
F 11は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 Cy sはシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。
10. 下記式 (I g)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Gl-G2-G3-Cys-Tyr-G4-G5-G6-G7-G8-G9-Gl O-Cys-Gl 1 ( I g)
(式中、
Glは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である力、、 又は欠失 しており ;
G2は、 G 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 G1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し; ' ,
G3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
G4、 05及び09は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
G6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
G7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
G8は、 グルタミン酸残基を表し;
G10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
G11は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 Cy sはシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。
1 1 . 下記式 (I h )
1 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Hl-H2-H3-Cys-Tyr-H4-H5-H6-H7-H8-H9-Hl O-Cys-Hl 1 ( I h )
(式中、
H Iは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
H 2は、 H 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 H Iが欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
H 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
«[ 4及びト1 5は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリ ン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
H 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
H 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 マラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
H 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 マラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
H 9は、 ダル夕ミン酸残基を表し;
H 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
H 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。 12. 下記式 ( I i )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Il-I2-I3-Cys-Tyr-I4-I5-I6-I7-I8-I9-I10-Cys-Ill (I i)
(式中、
I Iは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シ.トルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
12は、 I 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 I 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
I 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
14、 15及び 19は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
16は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、
ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
17は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、
ン又はアルギニン残基を表し;
18は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
1 10は、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表し;
I 11は、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 Cy sはシスティン残基を表し、 Ty rはチロシン残基を表し、 4位と 13位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。 13. 下記式 ( I j )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Jl-J2-J3-Cys-Tyr-J4-J5-J6-J7-J8-J9-J10-Cys-Jll (I j )
(式中、
J 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
J 2は、 J 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジ 、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 J 1が欠失している場合に は、 N末端で 導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
J 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し; ' .
J 4、 5及び 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
J 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シ卜ルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
J 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン又はアルギニン残基を表し;
J 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
J 10は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
J 1 1は、 C末端で誘導体化されていてもよいグルタミン酸、 リジン又は シトルリン残基を表し; 上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩。
1 4 . 以下の(1)〜(58)のいずれかのペプチドまたはその塩:
(1) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(2) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(3) Ac-Arg-Ar g-N 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH (4) Ac-A'rg-Arg-Na 1 -Cys-Ty r-C i t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH
(5) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(6) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH ' (7) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH
(8) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg-OH (9) Ac-Arg-Ar g-Na 1 -Cys-Ty r-C i t-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- N¾ ;
(10) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg- NH2 ;
(11) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2
(12) Ac-Ci t-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2 ;
(13) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DCi t-Pro-Tyr-Ci t-Ci t-Cys-Arg- NH2 ;
(14) Ac-Ci ί-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Ci ί-Ci i-Cys-Arg- N¾;
(15) H-DGlu-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- OH;
(16) H-Arg-Glu-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH; (17) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Glu-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(18) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Glu-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg-OH
(19) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci i-Cys-Arg-OH
(20) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Glu-Ci t-Cys-Arg-OH (21) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Glu-OH
(22) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t -Ly s -DG 1 u-P r o-Ty r -Ar g-C i t-Cys-Arg- NH2; ' ,
(23) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-DGlu-Lys-DCi t -Pr o-Ty r-Ar g-C i t-Cys-Arg- N¾ ;
(24) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-DGl u-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- N¾ ;
(25) H-DG 1 u-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- N¾ ;
(26) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-DGlu-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2
(27) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Ero-Tyr-Arg-DGlu-Cys-Arg- N¾ ;
(28) Ac-DGlu-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t -Ly s -DG 1 u-P r o-Ty r -Ar g-C i t-Cys-Arg- NH2 ;
(29) Ac-Ar g-Arg-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t -Ly s -DG 1 u-P r o-DG 1 u-Ar g-C i t -Cy s -Ar g- NH2 ;
(30) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-DGlu-Cys-Arg- NH2
(31) Ac-Arg-Ar g-Na 1 -Cy s-Tyr-C i t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2
(32) guany 1 -Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t- Lys-DGlu- Pro- Tyr-Arg-Ci t-Cys- Arg-NH2
(33) TMguany 1 -Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys- Arg-NH2; t t
o
Figure imgf000096_0001
yy)yy (gyg34csTrcGlpTiTLsDurorArcisArtc -llilill!ll (50) H-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Arg-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- NH2
(51) Ac-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Arg-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- N¾ ;
(52) Ac-Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys- DLys- Pro- Tyr- Arg- Ci t-Cys-Arg- NH2
(53) Ac-Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-Ar g-Ly s-DC i t-Pro-Tyr-Arg-Ci t-Cys-Arg- N¾;
(54) 4F-benz oy 1 -Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NH2
(55) 4F-benzoy卜 Arg-Arg- Na卜 Cys- Tyr-Ci t- Lys- DGlu- Pro-Tyr_Arg- Ci t - Cys-Arg-NHMe
(56) 4F-benzoyl-Arg-Arg-Nal-Cys-Tyr-Ci t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys- Arg -職 t
(57) 4F-benz oy 1 -Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s-Ty r-C i t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t- Cys-Arg-NHiPr
(58) 4F-b enz oy 1 -Ar g-Ar g-Na 1 -Cy s -Ty r-C i t-Lys-DGlu-Pro-Tyr-Arg-Ci t - Cys-Arg-tyramine
(各配列中、 N末端アミノ酸の左の記号はァミノ基が誘導体化されているか、 またはされていないことを示し、 Hは誘導体化されていないことを、 Acはァ セチル基を、 guanylはグァニル基を、 succ inylはスクシニル基を、 glutarylはダル夕リル基を、 TMguanylはテトラメチルダァニル基を、 F- beozoylは 2 _フルォロベンソィル基を、 4F-benzoylは 4一フルォロベンゾ ィル基を、 APAは 5—ァミノペンタノィル基を、 ACAは 6—ァミノへキサノ ィル基を、 desamino- Rは 2—デスアミノーアルギニル基を、 deaminoTMG-APA は下記式(I I)を、
Figure imgf000098_0001
V)
R - C は下記式 (V)
Figure imgf000099_0001
(V)
をそれぞれ示し、 Argは L一アルギニン残基を、 Nalは L一 3— ( 2—ナフ チル) ァラニン残基を、 Cysは L一システィン残基を、 Tyrは L—チロシン 残基を、 CUは L—シトルリン残基を、 Lysは L一リジン残基を、 DLysは D 一リジン残基を、 Proは L—プロリン残基を、 DCi tは D—シトルリン残基を、 DGluは D—グルタミン酸残基を、 Gluは L—グルタミン酸残基をそれぞれ示 し、 2つのシスティン残基は分子内ジスルフイド結合により連結しており、 C末端アミノ酸の右の記号は力ルポキシル基が 導体化されているか、 また はされていないことを示し、 0Hは誘導体化されていないことを、 NH2はアミ ノ基で、 丽 eはメチルァミノ基で、 NEtはェチルァミノ基で、 NiPrはイソプ 口ピルアミノ基で、 tyramineは p-ヒドロキシフエニルェチルァミノ基でァ ミド化されていることをそれぞれ示す) 。
1 5 . 請求項 3〜 1 4のいずれかに記載のぺプチド又はその塩を含有してな る医藥。 '
1 6 . C X C R 4拮抗剤である請求項 1 5記載の医薬。 .
1 7 . 癌または慢性関節リュ一マチの予防及び/又は治療剤である請求項 1 5記載の医薬。
1 8 . 癌種が乳癌または膝臓癌である請求項 1 7記載の I?薬。
1 9 . 哺乳動物に対して請求項 3〜 1 4のいずれかに記載のぺプチド又はそ の塩の有効量を投与することを特徴とする、 癌または慢性関節リユーマチの 予防 ·治療方法。
2 0 . 癌または慢性関節リュ一マチの予防及び Z又は治療剤を製造するため 5 の請求項項 3〜 1 4のいずれかに記載のぺプチド又はその塩の使用。
2 1 . 哺乳動物に対して下記式 (l a )
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Al-A2-A3-Cys-Tyr-A4-A5-A6-A7-A8-A9-Al 0-Cys-Al 1 ( l a )
10 (式中、
• A lは、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 15 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 'アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合に ' は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
A 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
20 A 4、 A 5及び A 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 6は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、 シトルリ 25 ン又はアルギニン残基を表し;
A 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
A 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し; A l lは、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシトルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩の有効量を投与することを特徴とする、 癌または慢性関節リユーマ チの予防 ·治療方法。
2 2 . 癌または慢性関節リューマチの予防及び Z又は治療剤を製造するため の下記式 (l a )
1 2 3 4 . 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Al-A2-A3-Cys-Tyr-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-Cys-Al l ( l a )
(式中、
A 1は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二 チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基であるか、 又は欠失 しており ;
A 2は、 A 1が N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 リジン、 オル二チン、 シトルリン、 ァラニン若しくはグルタミン酸残基である場合に は、 アルギニンまたはグルタミン酸残基を表し、 A 1が欠失している場合に は、 N末端で誘導体化されていてもよいアルギニン又はグルタミン酸残基を 表し;
A 3は、 芳香族アミノ酸残基を表し;
A 4、 A 5及び A 9は、 独立して、 アルギニン、 リジン、 オル二チン、 シ トルリン、 ァラニン又はダリレタミン酸残基を表し;
A 6は、 プロリン、 グリシン、,オル二チン、 リジン、 ァラニン、
ン、 アルギニン又はグルタミン酸残基を表し;
A 7は、 プロリン、 グリシン、 オル二チン、 リジン、 ァラニン、
ン又はアルギニン残基を表し;
A 8は、 チロシン、 フエ二ルァラニン、 ァラニン、 ナフチルァラニン、 シ トルリン又はグルタミン酸残基を表し;
A 1 0は、 シトルリン、 グルタミン酸、 アルギニン又はリジン残基を表 し;
A l lは、 C末端で誘導体化されていてもよいアルギニン、 グルタミン酸、 リジン又はシ卜ルリン残基を表し;
上記式中、 C y sはシスティン残基を表し、 T y rはチロシン残基を表し、 4位と 1 3位のシスティン残基はジスルフィド結合により連結していてもよ く、 アミノ酸は L体であっても D体であってもよい) で示されるペプチド又 はその塩の使用。
PCT/JP2003/010753 2002-08-27 2003-08-26 Cxcr4拮抗薬およびその用途 WO2004020462A1 (ja)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2003261723A AU2003261723A1 (en) 2002-08-27 2003-08-26 Cxcr4 antagonist and use thereof
EP03791288A EP1541585B1 (en) 2002-08-27 2003-08-26 Cxcr4 antagonist and use thereof
CA2537158A CA2537158C (en) 2002-08-27 2003-08-26 Cxcr4 antagonist and use thereof
ES03791288T ES2403932T3 (es) 2002-08-27 2003-08-26 Antagonista de CXCR4 y uso del mismo
US10/525,838 US7423007B2 (en) 2002-08-27 2003-08-26 Cxcr4 antagonist and use thereof
US12/172,007 US8017585B2 (en) 2002-08-27 2008-07-11 CXCR4 antagonist and use thereof
US13/178,737 US8410059B2 (en) 2002-08-27 2011-07-08 CXCR4 antagonist and use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2002247843 2002-08-27
JP2002-247843 2002-08-27

Related Child Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US10525838 A-371-Of-International 2003-08-26
EP10176632.7A Previously-Filed-Application EP2426139B1 (en) 2002-08-27 2003-08-26 CXCR4 antagonist and use thereof
US12/172,007 Division US8017585B2 (en) 2002-08-27 2008-07-11 CXCR4 antagonist and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2004020462A1 true WO2004020462A1 (ja) 2004-03-11

Family

ID=31972487

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2003/010753 WO2004020462A1 (ja) 2002-08-27 2003-08-26 Cxcr4拮抗薬およびその用途

Country Status (7)

Country Link
US (3) US7423007B2 (ja)
EP (2) EP2426139B1 (ja)
JP (1) JP5315372B2 (ja)
AU (1) AU2003261723A1 (ja)
CA (1) CA2537158C (ja)
ES (1) ES2403932T3 (ja)
WO (1) WO2004020462A1 (ja)

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007049771A1 (ja) 2005-10-28 2007-05-03 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. 塩基性基を含有する化合物およびその用途
WO2007058322A1 (ja) 2005-11-18 2007-05-24 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. 塩基性基を含有する化合物およびその用途
EP1898943A2 (en) * 2005-05-25 2008-03-19 Hadasit Medical Research Services &amp; Development Ltd. Cxcr4 antagonists for wound healing and re-epithelialization
US8008312B2 (en) 2005-01-07 2011-08-30 Emory University CXCR4 antagonists for the treatment of HIV infection
US8080659B2 (en) 2006-07-11 2011-12-20 Emory University CXCR4 antagonists including diazine and triazine structures for the treatment of medical disorders
KR20120037463A (ko) * 2009-06-14 2012-04-19 바이오카인 테라퓨틱스 리미티드 혈소판 수준을 증가시키는 펩타이드 요법
WO2012095849A1 (en) 2011-01-10 2012-07-19 Biokine Therapeutics Ltd. Peptides and compositions for the treatment of neuroectodermal derived tumors and retinoblastoma
US8338448B2 (en) 2008-03-28 2012-12-25 Altiris Therapeutics, Inc. Chemokine receptor modulators
US8410059B2 (en) 2002-08-27 2013-04-02 Biokine Therapeutics Ltd. CXCR4 antagonist and use thereof
US8455450B2 (en) 2006-12-21 2013-06-04 Biokine Therapeutics Ltd. Methods for obtaining a therapeutically effective amount of hematopoietic precursor cells and long term engraftment thereof
WO2013160895A1 (en) 2012-04-24 2013-10-31 Biokine Therapeutics Ltd. Peptides and use thereof in the treatment of large cell lung cancer
WO2014155376A1 (en) 2013-03-24 2014-10-02 Biokine Therapeutics Ltd. Methods of treating myeloid leukemia
WO2015063768A1 (en) 2013-10-31 2015-05-07 Biokine Therapeutics Ltd. Methods of treating acute myeloid leukemia with a flt3 mutation
WO2015114638A2 (en) 2014-02-03 2015-08-06 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method of eliminating stem cells
WO2017009842A2 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
WO2017021963A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Biokine Therapeutics Ltd. Cxcr4 binding agents for treatment of diseases
CN110357946A (zh) * 2016-10-18 2019-10-22 国家纳米科学中心 一种抑制肿瘤转移的多肽及其应用
WO2020065647A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Biolinerx Ltd. Methods of selecting treatment for cxcr4-associated cancer
US10993985B2 (en) 2016-02-23 2021-05-04 BioLmeRx Ltd. Methods of treating acute myeloid leukemia

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4808363B2 (ja) * 2000-09-05 2011-11-02 バイオカイン セラピューティックス リミテッド 新規ポリペプチド及びこれを含む抗hiv剤
US8435939B2 (en) * 2000-09-05 2013-05-07 Biokine Therapeutics Ltd. Polypeptide anti-HIV agent containing the same
JP2006524242A (ja) * 2003-03-27 2006-10-26 エモリー ユニバーシティー Cxcr4アンタゴニストおよびそれらの使用方法
JP2007512006A (ja) * 2003-11-10 2007-05-17 ザ ユーエービー リサーチ ファウンデーション 細菌輸送およびcns侵襲を低減させるための組成物およびこの組成物を使用する方法
JP5308829B2 (ja) 2006-02-27 2013-10-09 テクニッシュ ユニべルシタット ミュンヘン 癌の画像化および処置
EP2081953A2 (en) * 2006-08-17 2009-07-29 The UAB Research Foundation Immunogenic pcpa polypeptides and uses thereof
US8323656B2 (en) 2007-06-25 2012-12-04 Yijun Xu Antigen determinant of rheumatoid arthritis-specific autoantibody and use thereof
DE102007036128A1 (de) * 2007-07-23 2009-02-12 Universität Leipzig Antibiotische Peptide
AU2009311645C1 (en) 2008-11-04 2014-10-02 Acer Therapeutics Inc. CXCR4 receptor compounds
US9155780B2 (en) 2009-02-11 2015-10-13 Yeda Research And Development Co. Ltd. Short beta-defensin-derived peptides
EP2566494B1 (en) * 2010-02-26 2017-11-29 Acer Therapeutics, Inc. Cxcr4 receptor compounds
WO2012058241A2 (en) 2010-10-26 2012-05-03 University Of South Alabama Methods and compositions for ameliorating pancreatic cancer
WO2012112919A1 (en) * 2011-02-17 2012-08-23 Rhode Island Hostpital Stromal derived factor inhibition and cxcr4 blockade
RU2638802C2 (ru) 2011-05-16 2017-12-15 Джензим Корпорейшн Применение антагонистов cxcr4
GB201214007D0 (en) 2012-08-07 2012-09-19 Scancell Ltd Anti-tumour immune responses to modified self-epitopes
WO2017011517A1 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Emory University Bis-amines, compositions, and uses related to cxcr4 inhibition
GB201512703D0 (en) 2015-07-20 2015-08-26 Scancell Ltd Anti-tumour immune responses to modified self-epitopes
EP3911353A1 (en) * 2019-01-17 2021-11-24 BioLineRx Ltd. Specific combination therapy for treatment of pancreatic cancer
US11993631B2 (en) 2020-12-30 2024-05-28 Biolinerx Ltd. Process for manufacturing peptide
CN116801896A (zh) * 2020-12-30 2023-09-22 百欧林纳克斯有限公司 Bl-8040的组合物
EP4043041A1 (en) 2021-02-15 2022-08-17 Technische Universität München Cxcr4-ligands for diagnostic and therapeutic use and precursors thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995010534A1 (en) 1993-10-14 1995-04-20 Seikagaku Corporation Polypeptide and anti-hiv agent prepared therefrom
WO1999047158A2 (en) 1998-03-13 1999-09-23 The University Of British Columbia Therapeutic chemokine receptor antagonists
WO2001038352A2 (en) 1999-11-24 2001-05-31 Schering Corporation Methods of inhibiting metastasis
WO2001085196A2 (en) 2000-05-09 2001-11-15 The University Of British Columbia Cxcr4 antagonist treatment of hematopoietic cells
WO2002020561A1 (fr) 2000-09-05 2002-03-14 Seikagaku Corporation Nouveaux polypeptides et medicaments anti-vih contenant lesdits polypeptides

Family Cites Families (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US5206018A (en) 1978-11-03 1993-04-27 Ayerst, Mckenna & Harrison, Inc. Use of rapamycin in treatment of tumors
US4342828A (en) 1979-07-20 1982-08-03 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Method for producing substance capable of stimulating differentiation and proliferation of human granulopoietic stem cells
JPS61227526A (ja) 1984-07-25 1986-10-09 Chugai Pharmaceut Co Ltd 新規なコロニー刺激因子
DE3680613D1 (de) 1985-02-08 1991-09-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Menschlicher granuloxcyt-kolonie-stimulierungsfaktor.
US4810643A (en) 1985-08-23 1989-03-07 Kirin- Amgen Inc. Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor
EP1018552B1 (en) 1985-08-23 2006-07-05 Kirin-Amgen, Inc. Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor
ATE67517T1 (de) 1985-09-30 1991-10-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Menschlicher granulozyten-colony stimulierender faktor.
JPH0618778B2 (ja) 1985-10-04 1994-03-16 中外製薬株式会社 白血球減少症治療剤
DE3777845D1 (de) 1986-01-22 1992-05-07 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Pharmazeutischer stoff fuer die behandlung von myelogener leukaemie.
ATE65403T1 (de) 1986-01-22 1991-08-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Pharmazeutischer stoff fuer die foerderung der wiederherstellung der haematopoietischen faehigkeit.
DK203187A (da) 1986-04-22 1987-10-23 Immunex Corp Human g-csf proteinekspression
GR871067B (en) 1986-07-18 1987-11-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Process for producing stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony stimulating factor
JPH0725689B2 (ja) 1986-10-07 1995-03-22 中外製薬株式会社 顆粒球コロニ−刺激因子を含有する徐放性製剤
JP2618618B2 (ja) 1988-03-04 1997-06-11 協和醗酵工業株式会社 抗g−csf誘導体、nd28モノクローナル抗体
DK174044B1 (da) 1986-12-23 2002-05-06 Kyowa Hakko Kogyo Kk Polypeptid afledt fra human granulocytkolonistimulerende faktor, og fremgangsmåde til fremstilling deraf, DNA kodende for nævnte polypeptid, rekombinant plasmid indeholdende nævnte DNA, og mikroorganismer indeholdende nævnte rekombinante plasmid.......
CA1340810C (en) 1988-03-31 1999-11-02 Motoo Yamasaki Polypeptide derivatives of human granulocyte colony stimulating factor
ES2063783T3 (es) 1988-06-03 1995-01-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Factor de cristalino humano de estimulacion de colonias de granulocitos y procedimiento para su preparacion.
US5202117A (en) 1988-08-24 1993-04-13 Koichiro Tsuji Method of treating thrombi with g-csf
US5218092A (en) 1988-09-29 1993-06-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Modified granulocyte-colony stimulating factor polypeptide with added carbohydrate chains
US5104651A (en) 1988-12-16 1992-04-14 Amgen Inc. Stabilized hydrophobic protein formulations of g-csf
ATE135370T1 (de) 1988-12-22 1996-03-15 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
IL96477A0 (en) 1989-12-01 1991-08-16 Amgen Inc Megakaryocyte production
GB9107846D0 (en) 1990-04-30 1991-05-29 Ici Plc Polypeptides
JP3249147B2 (ja) 1990-06-01 2002-01-21 キリン−アムジエン・インコーポレーテツド 生理活性蛋白含有経口製剤
EP0459516A1 (en) 1990-06-01 1991-12-04 Kirin-Amgen, Inc. Oral dosage form of biologically active proteins
IE912365A1 (en) 1990-07-23 1992-01-29 Zeneca Ltd Continuous release pharmaceutical compositions
US5250732A (en) 1991-07-18 1993-10-05 Genentech, Inc. Ketamine analogues for treatment of thrombocytopenia
FR2686900B1 (fr) 1992-01-31 1995-07-21 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides ayant une activite de stimulation des colonies de granulocytes, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5595756A (en) * 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
US5492126A (en) 1994-05-02 1996-02-20 Focal Surgery Probe for medical imaging and therapy using ultrasound
JP2002505596A (ja) 1997-05-23 2002-02-19 トランサージカル,インコーポレイテッド Mri誘導治療装置及び方法
CA2305787A1 (en) 2000-05-09 2001-11-09 The University Of British Columbia Cxcr4 antagonist treatment of hematopoietic cells
WO2000009152A1 (en) 1998-08-14 2000-02-24 The University Of British Columbia Therapeutic chemokine receptor antagonists
CA2245224A1 (en) 1998-08-14 2000-02-14 Jiang-Hong Giong Chemokine receptor antagonists and chemotherapeutics
WO2000006086A2 (en) 1998-07-31 2000-02-10 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Use of inhibitors of the activation of cxcr4 receptor by sdf-1 in treating rheumatoid arthritis
EA003634B1 (ru) 1998-10-05 2003-08-28 Фармэкса А/С Новые способы терапевтической вакцинации
EP1124614A1 (de) 1998-10-27 2001-08-22 Fraunhofer-Gesellschaft Zur Förderung Der Angewandten Forschung E.V. Verfahren und vorrichtung zur regelung einer gezielten wärmedeponierung in ein material
US20060079492A1 (en) 1999-10-25 2006-04-13 Ahlem Clarence N Compositions and treatment methods
US6365583B1 (en) 1999-02-02 2002-04-02 Anormed, Inc. Methods to enhance white blood cell count
WO2001064716A1 (fr) 2000-03-03 2001-09-07 Nobutaka Fujii Composes antiviraux
US8435939B2 (en) 2000-09-05 2013-05-07 Biokine Therapeutics Ltd. Polypeptide anti-HIV agent containing the same
US7630750B2 (en) 2001-02-05 2009-12-08 The Research Foundation For The State University Of New York Computer aided treatment planning
US7169750B2 (en) 2001-07-31 2007-01-30 Anormed, Inc. Methods to mobilize progenitor/stem cells
US8774913B2 (en) 2002-04-08 2014-07-08 Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. Methods and apparatus for intravasculary-induced neuromodulation
AU2003261723A1 (en) 2002-08-27 2004-03-19 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cxcr4 antagonist and use thereof
DE10240064A1 (de) 2002-08-30 2004-03-11 Universitätsklinikum Freiburg CXCR4-Rezeptor-Antagonisten
US7759336B2 (en) 2002-12-10 2010-07-20 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Nitrogen-containing heterocyclic compounds and medicinal use thereof
US20050002939A1 (en) 2002-12-23 2005-01-06 Albert Zlotnik Tumor killing/tumor regression using CXCR4 antagonists
JP2006524242A (ja) 2003-03-27 2006-10-26 エモリー ユニバーシティー Cxcr4アンタゴニストおよびそれらの使用方法
US7291631B2 (en) 2003-04-11 2007-11-06 Genzyme Corporation CXCR4 chemokine receptor binding compounds
AR063470A1 (es) 2006-08-02 2009-01-28 Genzyme Corp Terapia combinada
US7968098B2 (en) 2006-08-04 2011-06-28 Kurume University HLA-A24-binding KIF-derived peptide
US8455450B2 (en) 2006-12-21 2013-06-04 Biokine Therapeutics Ltd. Methods for obtaining a therapeutically effective amount of hematopoietic precursor cells and long term engraftment thereof
ES2462517T3 (es) 2009-06-14 2014-05-23 Biokine Therapeutics Ltd. Terapia con péptidos para aumentar los niveles de plaquetas
MX2011013457A (es) 2009-06-15 2012-05-08 Biokine Therapeutics Ltd Polipeptidos que enlazan quimioquina novedosos capaces de inhibir el curso de autoinmunidad, inflamacion y cancer.
US20130303460A1 (en) 2011-01-10 2013-11-14 Biokine Therapeutics Ltd. Peptides and compositions for the treatment of neuroectodermal derived tumors and retinoblastoma

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995010534A1 (en) 1993-10-14 1995-04-20 Seikagaku Corporation Polypeptide and anti-hiv agent prepared therefrom
WO1999047158A2 (en) 1998-03-13 1999-09-23 The University Of British Columbia Therapeutic chemokine receptor antagonists
WO2001038352A2 (en) 1999-11-24 2001-05-31 Schering Corporation Methods of inhibiting metastasis
WO2001085196A2 (en) 2000-05-09 2001-11-15 The University Of British Columbia Cxcr4 antagonist treatment of hematopoietic cells
WO2002020561A1 (fr) 2000-09-05 2002-03-14 Seikagaku Corporation Nouveaux polypeptides et medicaments anti-vih contenant lesdits polypeptides

Non-Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Effective lowly cytotoxic analogs of an HIV-cell fusion inhibitor, T22 ([Tyr5, 12, Lys7]-polyphemusin II)", BIOORG. MED. CHEM., vol. 6, no. 2, 1998, pages 231 - 238
"Efficient analogs of an anti-HIV peptide, T22 ([Tyr5, 12, Lys7]-polyphemusin II)", PEPTIDE SCIENCE, vol. 1997, 1999, pages 427 - 429
HATSE S. ET AL.: "CXC-chemokine receptor 4 as a potential new therapeutic target for neuroblastoma and breast cancer", INT. J OF CANCER, no. 13, 2002, pages 349, XP001156644
KAISER, E. ET AL., ANAL. BIOCHEM., vol. 34, 1970, pages 595
MORI T. ET AL.: "Involvement of stromal cell-derived factor 1 and CXCR4 receptor system in pancreatic cancer", GASTROENTEROLOGY, vol. 122, no. 4, 2002, pages A490, XP009021758
See also references of EP1541585A4
TAMAHURA H. ET AL.: "Effective lowly cytotoxic analogs of an HIV-cell fusion inhibitor, T22 ((Tyr5,12, Lys7)-polyphemusin II)", BIOORG. MED. CHEM., vol. 6, no. 2, 1998, pages 231 - 238, XP002906341 *
TAMAHURA H. ET AL.: "Efficient analogs of an anti-HIV peptide, T22 ((Tyr5,12, Lys7)-polyphemusin II)", PEPTIDE SCIENCE, vol. 1997, 1999, pages 427 - 429, XP002973954 *
TAMAMURA H. ET AL.: "A low-molecular-weight inhibitor against the chemokine receptor CXCR4: A strong anti-HIV peptide T140", BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 253, no. 3, 1998, pages 877 - 882, XP002169961 *
TAMAMURA H. ET AL.: "A low-molecular-weight inhibitor against the chemokine receptor CXCR4: A strong anti-HIV peptide T140", BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 253, no. 3, 1998, pages 877 - 882, XP002169961, DOI: doi:10.1006/bbrc.1998.9871
TAMAMURA H. ET AL.: "Downsizing of an HIV-cell fusion inhibitor, T22 ([Tyr5, 12, Lys7]-polyphemusin II), with the maintenance of anti-HIV activity and solution structure", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 6, no. 4, 1998, pages 473 - 479, XP002458598, DOI: doi:10.1016/S0968-0896(97)10055-4

Cited By (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8410059B2 (en) 2002-08-27 2013-04-02 Biokine Therapeutics Ltd. CXCR4 antagonist and use thereof
US8008312B2 (en) 2005-01-07 2011-08-30 Emory University CXCR4 antagonists for the treatment of HIV infection
US8114884B2 (en) 2005-01-07 2012-02-14 Emory University CXCR4 antagonists for the treatment of medical disorders
EP1898943A4 (en) * 2005-05-25 2011-05-04 Hadasit Med Res Service ANTAGONISTS OF CXCR4 FOR HEALING OF INJURIES AND REEPITHELIALIZATION
US20100055088A1 (en) * 2005-05-25 2010-03-04 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. CXCR4 Antagonists for Wound Healing and Re-Epithelialization
EP1898943A2 (en) * 2005-05-25 2008-03-19 Hadasit Medical Research Services &amp; Development Ltd. Cxcr4 antagonists for wound healing and re-epithelialization
US9034814B2 (en) * 2005-05-25 2015-05-19 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. CXCR4 antagonists for wound healing and re-epithelialization
WO2007049771A1 (ja) 2005-10-28 2007-05-03 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. 塩基性基を含有する化合物およびその用途
EP2657235A1 (en) 2005-10-28 2013-10-30 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Compound containing basic group and use thereof
WO2007058322A1 (ja) 2005-11-18 2007-05-24 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. 塩基性基を含有する化合物およびその用途
US8080659B2 (en) 2006-07-11 2011-12-20 Emory University CXCR4 antagonists including diazine and triazine structures for the treatment of medical disorders
US8663651B2 (en) 2006-12-21 2014-03-04 Biokine Therapeutics Ltd. T-140 peptide analogs having CXCR4 super-agonist activity for immunomodulation
EP3011961A1 (en) 2006-12-21 2016-04-27 Biokine Therapeutics LTD. 4F-benzoyl-TN14003 for the mobilisation of hematopoietic progenitor cells in view of transplantation
EP2759302A2 (en) 2006-12-21 2014-07-30 Biokine Therapeutics LTD. 4F-benzoyl-TN14003 combined with rituximab for use in the treatment of a tumour
US8455450B2 (en) 2006-12-21 2013-06-04 Biokine Therapeutics Ltd. Methods for obtaining a therapeutically effective amount of hematopoietic precursor cells and long term engraftment thereof
US8765683B2 (en) 2006-12-21 2014-07-01 Biokine Therapeutics Ltd. T-140 peptide analogs having CXCR4 super-agonist activity for cancer therapy
US9314468B2 (en) 2008-03-28 2016-04-19 Altiris Therapeutics, Inc. Chemokine receptor modulators
US8338448B2 (en) 2008-03-28 2012-12-25 Altiris Therapeutics, Inc. Chemokine receptor modulators
EP2664618A2 (en) 2008-03-28 2013-11-20 Altiris Therapeutics Chemokine receptor modulators
KR101719339B1 (ko) 2009-06-14 2017-03-23 바이오카인 테라퓨틱스 리미티드 혈소판 수준을 증가시키는 펩타이드 요법
JP2012530130A (ja) * 2009-06-14 2012-11-29 バイオカイン セラピューティックス リミテッド 血小板レベルを増大させるためのペプチド療法
KR20120037463A (ko) * 2009-06-14 2012-04-19 바이오카인 테라퓨틱스 리미티드 혈소판 수준을 증가시키는 펩타이드 요법
US9427456B2 (en) 2009-06-14 2016-08-30 Biokine Therapeutics Ltd. Peptide therapy for increasing platelet levels
WO2012095849A1 (en) 2011-01-10 2012-07-19 Biokine Therapeutics Ltd. Peptides and compositions for the treatment of neuroectodermal derived tumors and retinoblastoma
WO2013160895A1 (en) 2012-04-24 2013-10-31 Biokine Therapeutics Ltd. Peptides and use thereof in the treatment of large cell lung cancer
US9439942B2 (en) 2012-04-24 2016-09-13 Biokine Therapeutics Ltd. Peptides and use thereof in the treatment of large cell lung cancer
WO2014155376A1 (en) 2013-03-24 2014-10-02 Biokine Therapeutics Ltd. Methods of treating myeloid leukemia
WO2015063768A1 (en) 2013-10-31 2015-05-07 Biokine Therapeutics Ltd. Methods of treating acute myeloid leukemia with a flt3 mutation
WO2015114638A2 (en) 2014-02-03 2015-08-06 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method of eliminating stem cells
US11554159B2 (en) 2015-07-16 2023-01-17 Blokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11534478B2 (en) 2015-07-16 2022-12-27 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
WO2017009843A2 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions, articles of manufacture and methods for treating cancer
US11648293B2 (en) 2015-07-16 2023-05-16 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11642393B2 (en) 2015-07-16 2023-05-09 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US10682390B2 (en) 2015-07-16 2020-06-16 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US10786547B2 (en) 2015-07-16 2020-09-29 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions, articles of manufacture and methods for treating cancer
EP3744340A2 (en) 2015-07-16 2020-12-02 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11638743B2 (en) 2015-07-16 2023-05-02 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11638742B2 (en) 2015-07-16 2023-05-02 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
EP3943098A2 (en) 2015-07-16 2022-01-26 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11612638B2 (en) 2015-07-16 2023-03-28 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
WO2017009842A2 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11559562B2 (en) 2015-07-16 2023-01-24 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11590200B2 (en) 2015-07-16 2023-02-28 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11596666B2 (en) 2015-07-16 2023-03-07 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
US11607444B2 (en) 2015-07-16 2023-03-21 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
WO2017021963A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Biokine Therapeutics Ltd. Cxcr4 binding agents for treatment of diseases
US10993985B2 (en) 2016-02-23 2021-05-04 BioLmeRx Ltd. Methods of treating acute myeloid leukemia
CN110357946B (zh) * 2016-10-18 2021-08-03 国家纳米科学中心 一种抑制肿瘤转移的多肽及其应用
CN110357946A (zh) * 2016-10-18 2019-10-22 国家纳米科学中心 一种抑制肿瘤转移的多肽及其应用
WO2020065647A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Biolinerx Ltd. Methods of selecting treatment for cxcr4-associated cancer

Also Published As

Publication number Publication date
US8017585B2 (en) 2011-09-13
US20090181897A1 (en) 2009-07-16
ES2403932T3 (es) 2013-05-22
EP2426139B1 (en) 2014-10-01
EP1541585A1 (en) 2005-06-15
EP1541585A4 (en) 2007-12-26
JP2011168594A (ja) 2011-09-01
US20060264378A1 (en) 2006-11-23
AU2003261723A1 (en) 2004-03-19
CA2537158C (en) 2014-07-22
US20110269686A1 (en) 2011-11-03
EP1541585B1 (en) 2013-01-30
JP5315372B2 (ja) 2013-10-16
US7423007B2 (en) 2008-09-09
EP2426139A1 (en) 2012-03-07
US8410059B2 (en) 2013-04-02
CA2537158A1 (en) 2004-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5315372B2 (ja) Cxcr4拮抗薬およびその用途
US5604203A (en) Analogs of peptide YY and uses thereof
JP5384342B2 (ja) 癌のような変更された細胞遊走に関連する障害の治療のための薬理学的活性を有するペプチド
EP0309297B1 (en) Therapeutic peptides
JP5358564B2 (ja) 環状ペプチドcxcr4アンタゴニスト
KR100225679B1 (ko) 노나펩티드 봄베신 길항제
HU208439B (en) Process for producing pharmaceutical peptides
CN104822702A (zh) α-MSH和γ-MSH类似物
JP3838656B2 (ja) ポリペプチドのボンベシン拮抗物質
JP2016065018A (ja) Cxcr7結合剤およびcxcr7結合剤を含有する医薬組成物
JP2022551153A (ja) 活性ポリペプチド化合物
US20040122013A1 (en) Analogs of nocicettin
LV10108B (en) Inhibitors of cells proliferation, pharmaceutical composition, process of producing of compounds, methods of inhibition of cellular proliferation
JP2000507925A (ja) 骨形成活性を有する合成ペプチド及び疑似ペプチド及びそれらを含有する医薬製剤
JP4781621B2 (ja) Cxcr4拮抗薬およびその用途
HU205771B (en) Process for producing irreversible peptide ligands for bombesin receptors and process for producing pharmaceutical compositions comprising such peptides as active ingredient
JP4391123B2 (ja) 新規cxcr4アンタゴニスト
HUT63178A (en) Process for producing bombesin antagonist polypeptides
CA2405724C (en) Substance p analogs for the treatment of cancer
IE903958A1 (en) Reduced irreversible bombesin antagonists
WO2017073764A1 (ja) 新規nk3受容体アゴニスト
JPH06298797A (ja) ペプチド誘導体およびその用途
WO2012118124A1 (ja) 新規ケモカイン受容体拮抗剤
JPH06321985A (ja) ペプチド誘導体及びその用途
JPH0717999A (ja) ペプチド誘導体及びその用途

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LU MC NL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2003791288

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2003791288

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2006264378

Country of ref document: US

Ref document number: 10525838

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: JP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2537158

Country of ref document: CA

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 10525838

Country of ref document: US