WO2000064854A1 - Esters d'acides gras conjugues - Google Patents

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WO2000064854A1
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fatty acid
conjugated fatty
glyceride
oil
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Satoshi Kudo
Naomi Mizusawa
Mahoko Hamura
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Kabushiki Kaisha Yakult Honsha
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Definitions

  • the present invention relates to a conjugated fatty acid ester structure for effectively ingesting a conjugated fatty acid having a conjugated double bond in a molecule into the body, and particularly to a mono-, di-, or tridaliceride using the conjugated fatty acid as a glycerol ester. More specifically, the present invention relates to a conjugated linole having an effect of improving lipid metabolism, lowering blood triglyceride which is a risk factor for arteriosclerosis, cardiovascular disease, etc., and improving hyperlipidemia. The present invention relates to a conjugated fatty acid glyceride having an acid in a molecule. This glyceride can be used for medicines and foods and drinks.
  • conjugated fatty acids that occur naturally and are also produced during food manufacturing and processing are fatty acids in which adjacent carbons have a double bond across a single bond.
  • Conjugated linoleic acid which has one conjugated gen in a fatty acid molecule having 18 carbon atoms
  • eleostearic acid which has two conjugated genes
  • vinaric acid which has three conjugated genes
  • Japanese Unexamined Patent Application Publication No. Hei 8-5505775 discloses a method of administering conjugated linoleic acid to an animal to increase the weight gain and feed efficiency of the animal.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. H10-51081 discloses a method of reducing body fat in animals by administering conjugated linoleic acid to animals. There have been reports of antitumor effects, antiallergic effects, etc.
  • Conjugated linoleic acid is a fatty acid that exists in the form of glyceride in plants, and is also known to be converted from linoleic acid by the action of some microorganisms in the digestive tract of animals and absorbed.
  • Conjugated linoleic acids having various physiological actions as described above have begun to be manufactured and sold industrially.
  • Commercially available conjugated linoleic acid products include, for example, CLA80 activated linol manufactured by Linol Fats, Inc. and tonalin manufactured by Maypro. These are produced by conjugating natural cis-type linoleic acid (C18: 2) under strong pressure.
  • the main component is cis-9, trans-11 or trans-9, cis-11, trans- It is a free fatty acid of 10, cis-12 and contains some other positional or geometric isomers.
  • Conjugated linoleic acid is often marketed as a dietary supplement in the form of capsules or tablets, and its ingestibility is poor when taken alone, especially when taken between meals. L, which had the drawback.
  • the present invention relates to a method for producing a lipid metabolism improving agent, an anti-obesity agent, and an agent for preventing and treating hyperlipidemia.
  • conjugated fatty acid esters for oral ingestion of conjugated fatty acids represented by conjugated linoleic acid while suppressing the astringency and astringency of conjugated fatty acids. That is, the physiological effect of the conjugated fatty acid originally possessed is more effectively exhibited, the astringency and astringency of the conjugated fatty acid are suppressed, and the conjugated fatty acid suitable for oral ingestion of the conjugated fatty acid is obtained.
  • a conjugated fatty acid glyceride in which a conjugated fatty acid having a conjugated double bond in a molecule is in the form of a glycerol ester is used.
  • This conjugated fatty acid glyceride can be efficiently absorbed without any astringent or astringent taste no matter what form it is taken orally.
  • the present invention relates to a conjugated fatty acid ester having a conjugated fatty acid in the molecule, wherein the conjugated fatty acid glyceride in the form of a glycerol ester is used as a lipid metabolism improving agent, an anti-obesity agent, It can be used as a preventive and therapeutic agent for lipemia.
  • a further object of the present invention is to provide a glyceride containing conjugated linoleic acid glyceride, which is highly safe and can be ingested daily as food.
  • the present invention provides a conjugated fatty acid glyceride having a conjugated linoleic acid in a molecule, particularly as a conjugated fatty acid having a conjugated double bond.
  • a conjugated fatty acid glyceride having 9,11-year-old cactadecadienoic acid or 10,12-octadecadienoic acid as a conjugated fatty acid having a conjugated double bond is provided.
  • the present invention provides a conjugated fatty acid glyceride having any one form selected from the group consisting of mono, di, and triglyceride.
  • This conjugated fatty acid glyceride can be mixed with a food or drink such as milk or soy milk that does not denature the glyceride, and provided to the food or drink.
  • a food or drink such as milk or soy milk that does not denature the glyceride
  • the glyceride is denatured according to a standard method such as capsules and tablets. Otherwise, it can be combined with other pharmaceutical bases and provided to pharmaceuticals.
  • the method for producing a conjugated fatty acid glyceride of the present invention includes a method of conjugating a natural cis-type linoleic acid under a reduced pressure, followed by ester synthesis or transesterification reaction using a catalyst, or a method of producing a fatty acid-containing glyceride. Any method such as conjugation may be used. Among them, transesterification or ester synthesis using a biocatalytic lipase as a catalyst is preferred for food applications, and ester synthesis is particularly preferred.
  • the ester synthesis reaction may be performed by a conventional method. For example, the reaction may be performed while dehydrating in the presence of conjugated linoleic acid, immobilized lipase and glycerol. According to this method, the content of conjugated fatty acids in the total fat can be significantly increased, the reaction proceeds even at room temperature, the catalyst is easily deactivated / removed, and side reactions such as oxidation of fat are caused. Are also limited and the safety
  • the transesterification method also has high safety, but the reaction yield is poor and the separation of by-product fatty acids is difficult.
  • glycerides can be synthesized with chemical catalysts, there are fears of unexpected by-products, insufficient glyceride yields, and complicated removal of chemical catalysts.
  • the fats and oils that serve as substrates for the transesterification reaction include soybean oil, corn oil, cottonseed oil, sunflower oil, safflower oil, rapeseed oil, safflower oil, olive oil, peanut oil, linseed oil, perilla oil, and palm oil as vegetable oils and fats.
  • animal oils include fish oil such as sardine oil, dicin oil, squid liver oil, butter oil, tallow, lard, etc.
  • corn oil, soybean oil, palm oil, coconut oil and the like are preferable from the viewpoint of stability.
  • Butter oil is also preferable from the viewpoint of flavor. These can be used alone or in combination of two or more.
  • fatty acids used in the transesterification and synthesis reactions there are no particular restrictions on the fatty acids used in the transesterification and synthesis reactions, and specific examples thereof include free conjugated linoleic acid, eleostearic acid, and ballinaric acid.
  • an extract of a natural product rich in these, a fatty acid having a plurality of conjugated gens obtained by a synthesis method, or the like may be used.
  • conjugated linoleic acid (commercially available CLA80-active linol, tonalin, etc.) is preferred because various physiological effects have been reported.
  • the ratio between the fat and the conjugated fatty acid as the substrate is important to make the conjugated fatty acid content in the triglyceride 20% or more, and the weight ratio of the fat and oil to the conjugated fatty acid is 3.5 or less, preferably It is desirable to be 3 or less.
  • the reaction proceeds even when an organic solvent is added, the reaction proceeds sufficiently without an organic solvent at a temperature at which the mixture of the fat and oil and the conjugated fatty acid maintains a solution state. All lipases that catalyze transesterification and synthesis reactions can be used for the purpose of the present invention.
  • pancreatin F pancreatin F
  • lipase A lipase A
  • F lipase M
  • AY AY
  • G PS
  • newase F Amano Pharmaceutical Co., Ltd.
  • lipase CV Asahi Kasei Corporation
  • lipase OF AL
  • PL lipase OF
  • AL lipase
  • QL Meito Sangyo Co., Ltd.
  • Novozyme.Lipozyme Novozyme.Lipozyme
  • the amount of enzyme to be added is in the range of 0.1 to 15%, preferably 2 to 7% with respect to the base mass in the case of the immobilized enzyme.
  • the amount of enzyme to be added is in the range of 0.1 to 10%, preferably 0.5 to 3% based on the base mass.
  • ester exchange or ester synthesis reaction conditions are optimized.
  • reaction conditions such as selection of enzymes, ratio of fats and oils to fatty acids as substrates, and adjustment of water content are important.
  • the exchange reaction hardly proceeds in the absence of water, and the reaction proceeds to the maximum if water of 150 to 2000 ppm is present in the reaction system, which is preferable. Since water is not generated in the ester exchange reaction, it is desirable to adjust the water content of the reaction system at the start of the reaction in order to achieve a sufficient conjugated fatty acid content, for example, 20% or more.
  • the ester synthesis reaction it is preferable to dehydrate the by-produced water by depressurizing or heating the reaction system, adding molecular sieves, or drying the circulating gas phase.
  • the resulting reactants almost reflect the conjugated fatty acid composition used for the substrate.
  • the conjugated fatty acid glyceride is conjugated to a fatty acid glyceride containing at least one or more fatty acids having at least two double bonds as a component or an oil-and-fat-containing material containing the fatty acid glyceride. It can also be produced by reacting a microorganism capable of producing a heavy bond or an enzyme produced by the microorganism.
  • the conjugated double bond-producing ability refers to a fatty acid glyceride containing a fatty acid having two or more double bonds as a constituent component or a fat-containing material containing the fatty acid glyceride directly as a conjugated fatty acid glyceride.
  • Fatty acid glycerides containing at least one or more fatty acids having two or more double bonds as constituents include, for example, linoleic acid, ⁇ -linolenic acid, arlinolenic acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid ( ⁇ ⁇ ⁇ ) And glycerides containing one or more fatty acids having two or more double bonds, such as docosahexaenoic acid (DHA).
  • DHA docosahexaenoic acid
  • safflower oil soybean oil, corn oil, rapeseed oil, cottonseed oil, sunflower oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, linseed oil, and sesame oil
  • vegetable oils such as butter oil, fish oil, lard, tallow and the like.
  • vegetable oils such as safflower oil, soybean oil, corn oil, rapeseed oil, cottonseed oil, sunflower oil, and safflower oil are preferable because they contain a large amount of fatty acids having 18 carbon atoms, particularly linoleic acid.
  • the microorganism having the ability to produce a conjugated double bond in the present invention refers to a microorganism having the ability to directly convert the above-mentioned glyceride or oil / fat material serving as a reaction starting material into a conjugated fatty acid glyceride.
  • the microorganism may be allowed to act as it is, or the microorganism may be immobilized on a carrier and act as a bioreactor.
  • the enzyme produced by the microorganism may be recovered, purified, or powdered, and may be used as a bioreactor as it is or immobilized on a suitable carrier.
  • the microorganism used in the present invention is not particularly limited. Any microorganism can be used as long as it is capable of producing heavy bonds.
  • the microorganisms of the present invention having the ability to produce conjugated double bonds include many microorganisms that have been used for fermented milk products and the like for a long time, and have been confirmed to have no pathogenicity.
  • intestinal microorganisms namely lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus, Enterococcus, Leuconostoc, and the like, Bifidobacterium, Bacterium, and Propionibacterium. Bacteria are preferred.
  • microorganisms having the ability to produce a conjugated double bond include, for example, Lactobacillus bacteria such as Lactobacillus acidoph Uus, Lactobacillus brevis (LacioteciJJiJS brevis) ⁇ Lactobacillus buchneri Lactobacillus cas ei, Lactobacillus buchneri Lactobacillus cas ei, Lactobacillus debrueckii subspecies. Lactobacillus de IbrueckiKss.
  • Lactobacillus bacteria such as Lactobacillus acidoph Uus, Lactobacillus brevis (LacioteciJJiJS brevis) ⁇ Lactobacillus buchneri Lactobacillus cas ei, Lactobacillus buchneri Lactobacillus cas ei, Lactobacillus debrueckii subspecies. Lactobacillus de IbrueckiKss.
  • Lactobacillus gasser i Lactobacillus helveticus Knee (Lactobacillus johnsonii), Lactobacillus oris (Laci obacillus oris) Lactobacillus reuteri) ⁇ Lactobacillus rhaonosus ⁇ Lacco'tinolze zoelus Lactobacillus sai ei) is selected.
  • Lactococcus bacteria are selected from Lactococcus plantarum ⁇ Lactococcus plantarum ⁇ Lactococcus' Lactococcus raffinolactis and the like.
  • the bacterium of the genus Leuconostoc is selected from Leuconostoc lactis and the like.
  • the Streptococcus bacterium is selected from Streptococcus samophilus Streptococcus iAe / mop / ji Jus) and the like.
  • Enterococcus bacteria such as Enterococcus faecalis (Enterococcus faecalis) Selected from Enterococcus faecim, etc.
  • Bifidobacterium genus bacteria include bifidobacterium 'fiii idobacteriu adolescentis) ⁇ bifidobacterium' hinotamu (ifictotecie riu bifiduni), bifidopa 'cterium' Bifidobacterium breve ⁇ bifidobacterium Bifidobacterium catenulatuin) ⁇ Bifidobacterium infantis), Bifidobacterium longum Bif idobacterium Selected from Eubacterium genus bacteria are selected from Eubacterium aer ofaciens, Eubacterium noform (Eubacterium biforaej, Eubacterium * coplos evening radiance), and the like. Propionibacterium genus bacteria, Propionibacterium ⁇ ⁇ p p Propionibacieriim ireucfe / HTeicAii) ⁇
  • Lactobacillus delactino (LaciodacilZt / s acidophilus) ⁇ Lactobacillus brevis (LactotecilZi / s brevis), Lactobacillus del Burtzky Saff 'Scythe' del. Bruce del. Bulgaricas (La ctobacillus delbruecki ss.
  • Lactofcacillus gasseri Lactobacillus helveticus Lactobacillus johnsonil Lactobacillus oris Lactobacillus oris Lactobacillus reu teri, Lactobacillus sakei, Bifidobacterium bifidobacterium Banti-T Bifidobecteriwn infantis), Eupaquarium 'Eubacterim bifor e (Eubacterium coprosta noligens) ⁇ Prohionino-kterium-Freiden-Raiky fatty acids such as fatty acids .
  • Bifidobacterium bifid UD YIT4007 (FER BP-791) strain, Bifidobacterium infantif (Bifidobacterim i / 7ia / 7iis) YIT4018 (ATCC15697) strain, YIT401 9 (ATCC15702) strains Lactobacillus acidop! Zt / s) YI T0070 (ATCC4356) strain, Lactobacillus brevis (iactotecilZus 6reis) YI T0033 (NI RD T-6) strain, YI T0076CA TCC 14869 strain, Lactobacillus del Brutsky Lactobacillus delbrueckiKss.
  • the washed fresh bacterial cells are mixed with the emulsified fat and allowed to react, or the microorganisms are inoculated into a food containing an oil and fat material and cultured, or the washed fresh bacteria are used. What was mixed and reacted with the body may be used.
  • the bacterial enzyme may be used as it is, or after the viable cells are pulverized, they may be subjected to the usual processes such as salting out, membrane treatment, ion exchange resin treatment, and gel filtration.
  • the enzyme can be purified by a fractionation method and immobilized on a carrier such as silica gel, celite, ion exchange resin, chitosan beads, or cellulose by an ionic bond, a covalent bond, or a hydrophobic bond method.
  • a carrier such as silica gel, celite, ion exchange resin, chitosan beads, or cellulose by an ionic bond, a covalent bond, or a hydrophobic bond method.
  • the obtained reaction product is used as it is, or preferably after further purification.
  • a specific purification method when the oil phase is suspended in the aqueous phase, the oil phase is recovered by centrifugation, and the oil phase is extracted with an organic solvent and purified.
  • an extraction solvent a solvent that can elute a common fatty acid glyceride containing a conjugated double bond is used in accordance with a conventional method.
  • the reaction composition containing the conjugated fatty acid glyceride thus obtained can be used as it is in the fractionated oil. Can also be used.
  • conjugated fatty acid glyceride of the present invention a fatty acid having a conjugated double bond in the molecule, specifically, conjugated linoleic acid, eleostearic acid, parinaric acid or the like in the form of glyceride can be used. Both can be suitably used.
  • the form of glyceride may be any of mono-, di- and tri-forms, but desirably contains many di- and tri-forms containing a large amount of conjugated fatty acids in one molecule.
  • the conjugated fatty acid content in the derivative must be increased. Is preferably 20% or more. If the content of synergistic fatty acids in glycerides is less than 20%, consuming 5 to 15 g or more of the derivative will increase the calorie intake, and the physiological effects expected from conjugated fatty acids, such as body fat There is a high possibility that the number of cancers will be reduced and the effect of preventing cancer will be reduced.
  • the conjugated fatty acid glyceride obtained as described above has no safety problem at all.
  • the conjugated fatty acid glyceride intake is preferably from 100 mg to 500 mg, and particularly preferably from 300 mg to 300 mg per person per day.
  • the conjugated fatty acid glyceride of the present invention obtained by the above-described various reactions can be used as an oil or fat composition containing the same, but can be used in general foods and drinks, or tablets, capsules, granules, and oily salad foods. It can be used after mixing.
  • these dosage forms mainly capsules and granules, the excellent digestion and absorption properties of conjugated fatty acid glycerides particularly eliminate the problems of free form such as reduced absorption efficiency due to the degree of hunger upon ingestion and the like. This is preferable.
  • the oil / fat composition containing the conjugated fatty acid glyceride of the present invention obtained by various reactions is subjected to processing such as fractionation, sterilization, mixing, concentration, drying, etc., and then to other foods or It can be used as a medicine or food or drink with an administrable substance.
  • Sweeteners such as sugar and fructose, and citrate.
  • it can be processed into tablets, capsules, granules or salad oily foods and used in the form of dietary supplements.
  • the conjugated fatty acid glyceride when used in the form of a food, when using a lipid other than the conjugated fatty acid in the food, it is desirable to use an oil or fat material having a low linoleic acid content. Specifically, it is preferable to use fats and oils such as butter oil, fish oil, perilla oil, perilla oil, palm oil, coconut oil, linseed oil, olive oil, beef tallow, and lard.
  • fats and oils such as butter oil, fish oil, perilla oil, perilla oil, palm oil, coconut oil, linseed oil, olive oil, beef tallow, and lard.
  • the combined use of fats and oils containing a large amount of linoleic acid may inhibit the physiological effects of conjugated fatty acid glycerides, namely, the anti-obesity effect, the effect of improving oil and fat metabolism, the effect of preventing and treating hyperlipidemia, etc. Because there is.
  • the conjugated fatty acid glyceride of the present invention suppresses the bitterness and astringency unique to conjugated fatty acids and also has an improved digestive and absorptive property, if it is used, the conjugated fatty acid glyceride can be taken in a good flavor and at any time. Can be efficiently absorbed.
  • conjugated fatty acid glyceride for improving lipid metabolism of the present invention when used, conjugated fatty acids having various excellent physiological effects can be continuously ingested without using various taste improvers and the like.
  • visceral fat reduction effect, anti-obesity effect, weight loss effect can be obtained, and anti-diabetic effect, anti-atherosclerosis effect, anti-cancer effect, etc. can also be expected.
  • Conjugated fatty acid glycerides having a synergistic linoleic acid in the molecule significantly improve hyperlipidemia and reduce the risk of arteriosclerosis, diabetes and cardiovascular disease.
  • FIG. 1 is a diagram showing the change over time of the valence of conjugated linoleic acid in glyceride in the transesterification reaction between various fat and oil raw materials and conjugated linoleic acid.
  • FIG. 1 is a diagram showing the change over time of the valence of conjugated linoleic acid in glyceride in the transesterification reaction between various fat and oil raw materials and conjugated linoleic acid.
  • the vertical axis is the valence of conjugated linoleic acid in glyceride
  • the horizontal axis is the reaction time (hr) at 37 ° C
  • ⁇ is butter
  • Jiang is corn oil
  • ⁇ is coconut oil
  • FIG. 2 is a diagram showing the absorption rate of a conjugated linoleic acid-containing lipid.
  • the vertical axis is blood triglyceride concentration (mg / dl)
  • the horizontal axis is time (hr)
  • ⁇ is CLA (conjugated).
  • Linoleic acid) country is CLA-TG (triglyceride containing conjugated linoleic acid)
  • ⁇ is control.
  • the fatty acid and the conjugated linoleic acid content in the fat and oil are set to be equimolar, so that the valence of the conjugated linoleic acid in the glyceride when the reaction reaches equilibrium is calculated to be 1.5.
  • the content of conjugated linoleic acid already incorporated in glyceride in 2 hours of reaction exceeds 20% (corresponding to 0.6 conjugated linoleic acid in glyceride).
  • triglyceride was 85.5%
  • diglyceride was 13.5%
  • monoglyceride was 1% or less
  • unreacted fatty acid was 4%
  • unreacted glycerol was 2% or less.
  • Microorganisms capable of acting directly on linoleic acid-containing fats and oils to produce conjugated linoleic acid were screened.
  • various lactic acid bacteria, Bifidobacterium bacteria and Propionibacterium bacteria shown in Tables 1 and 2 were cultured in MRS medium containing 0.035% linoleic acid, and the cells were collected by centrifugation. Then, the cells were washed three times with physiological saline to prepare washed cells.
  • eubacterium bacteria were treated in the same manner as described above, except that they were cultured under anaerobic conditions using a BCM medium as a medium, to obtain washed cells.
  • the washed viable cells 1 were mixed with 1 mL of 5 OmM phosphate buffer (pH 7.1) containing 5 mg of linoleic acid, and reacted by shaking at 37 ° C for 2 days. After that, the mixture was centrifuged, and the supernatant was extracted with twice the amount of black form-methanol (1: 2) to extract lipids in the black form layer. The extracted lipid was appropriately diluted with hexane, and the ultraviolet absorption spectrum was measured to examine the formation of conjugated linoleic acid.
  • strains in which the production of conjugated linoleic acid was observed were treated in the same manner with an emulsion containing 5 mg of corn oil instead of linoleic acid, and the ultraviolet absorption spectrum was measured.
  • the linoleic acid content in corn oil is about 50%.
  • active linol linol
  • 4 parts of linoleic acid were similarly administered.
  • a non-administration group was set as another control.
  • Orbital blood was collected from three groups over time to determine the amount of triglyceride in the blood.
  • the glycerol derivative according to the present invention had better digestibility and absorbability than that of the control free fatty acid Eve (FIG. 2).
  • conjugated linoleic acid was also found in the blood samples.
  • Example 5 Production of conjugated linoleic acid glyceride 3, preparation of dairy beverage containing] Among the lactic acid bacteria in Table 1, three strains of i / idotecieriuffl infantis YIT4018 strain, Lactobacillus delbrueckii ss. Bulgaricus YIT0181 strain, and Lactobacillus helveticus YIT0085 strain A conjugated linoleic acid glyceride formation test was performed.
  • conjugated linoleic acid glyceride was produced in all of Bifidobacterium infant is YIT4018 strain, Lactobacillus delbruecki iss. Bulgaricus YIT0181 strain, and Lactobacillus helveticus Y IT0085 strain.
  • fats and oils containing conjugated linoleic acid prepared with Lactobacillus helveticus Y IT0085 strain were added to dairy products and mixed to produce conjugated linoleic acid glyceride-containing foods. That is, 0.49 parts by weight of the fat or oil was emulsified and mixed with 99.6 parts by weight of low-fat milk having a milk fat content of 1.1% by partially removing the cream by a centrifugal separator. Milk containing glycerides was produced. This milk had good flavor and stable physical properties.
  • Example 6 Production of conjugated linoleic acid glyceride 4, preparation of containing soymilk drink] From the lactic acid bacteria of Tables 1 and 2, three strains of Bifidobacteriu bididum YI T4007 strain, Lactobaci llus helveticus YIT0085 strain, and Lactobacillus reuteri YIT0313 strain A conjugated linoleic acid glyceride production test during the production of fermented soymilk was carried out.
  • Soy milk (8.3% non-fat solids) containing 5% soybean oil (containing 52% linoleic acid and 8% linolenic acid) is heat-sterilized at 100 ° C for 60 minutes to obtain each strain. , And cultured at 37 ° C for 2 days to produce fermented soymilk. Fat was extracted from each fermented soy milk, and the absorbance at 235 nm was measured to determine the production of conjugated linoleic acid.
  • Example 5 From the dairy lactic acid bacteria shown in Table 1, the washed viable cells of a 10-ml culture of Lactobacillus helveticus Y IT0085 were suspended in 2 ml of a 10% lysophosphatidylglycerol solution, and heated at 50 and 30 minutes. As a result, a cell enzyme was prepared. This is for Example 5. The reaction was performed by adding the cells instead of living cells according to the method, and as a result, the formation of conjugated fatty acid glycerides was confirmed by ultraviolet absorption spectrum measurement and thin-layer chromatography.
  • the conjugated linoleic acid-containing glyceride (TG-CLA) obtained in Example 2 was administered to ovariectomized mice at 0.5% to examine the effect on visceral fat accumulation. That is, 36 6-week-old C57BL / 6J mice (early) were purchased from Japan 8 Shisha Co., Ltd. After pre-breeding on an MF diet for one week, left and right ovaries were removed by a conventional method.
  • the animals were divided into four groups of nine animals, and each group was allowed to freely take the experimental diets shown in Table 3 for 7 weeks. After an overnight fast, the abdomen was opened under ether anesthesia. Immediately after blood collection, the kidney, uterus, and adipose tissue around the mesentery were excised and weighed to determine the visceral fat weight. Throughout the experiment, the breeding conditions were constant temperature (24 ⁇ 1 ° C) and constant humidity (60 ⁇ 5%), and the light-dark cycle was set to 12 hours. Food and water were available ad libitum and body weight and food consumption were measured weekly. In addition, since the amount of food consumed was bred in three cages per cage, the amount actually consumed by three mice per week was measured. All data were expressed as mean soil standard deviation. Tukey's multiple comparison test was used to test the difference between the means of each group.
  • the rate of weight gain (%) during the experimental period was 35.8 ⁇ 5.4 for the product group of the present invention; 35.8 ⁇ 8.8 for the corn oil group; Group: 47.5 ⁇ 11.3, fish oil group: 40.2 ⁇ 5.9.
  • the weight of the flax oil group increased more than that of the other groups, and the group of the present invention showed a significantly lower value than the flax oil group at 6 weeks and 7 weeks (P ⁇ 0.05).
  • ⁇ ⁇ The body weight and visceral fat weight at the time of dissection are shown in Table 4.
  • the visceral fat weight of the present invention group was 30% and 38 % lower than the corn oil group and linseed oil group, respectively.
  • the fatty acid composition of CLA was 9c, llt / 9t, llc_18: 2 and 10t, 12c-18: 2 as the main fatty acids, and the triglycerides were 80% or more.
  • mice Seven-week-old male C57BLZKsj, dbZdb mice were preliminarily reared for one week, divided into three groups, and fed the same feed as in Example 9 freely. Before or at 2, 4, or 6 weeks after the start of administration, orbital blood was collected and analyzed for triglyceride in the blood. Table 7 shows the results. The blood triglyceride showed a significantly lower value than the control group.
  • a capsule base was prepared with gelatin, glycerol, and water, and the contained oil was encapsulated and formed with a capsule base to prepare a soft capsule.
  • the obtained soft capsule had a good flavor.
  • the resulting tablet had a good flavor c
  • Tablets were manufactured by mixing and tableting various components according to the following formulation. As a result, the obtained tablet had a good flavor.

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Description

明 細 書
共役脂肪酸エステル 技術分野
本発明は、 共役二重結合を分子内に有する共役脂肪酸を有効に体内に摂取する ための共役脂肪酸エステル構造に関し、 特に前記共役脂肪酸をグリセロールエス テルとしたモノ、 ジ、 又はトリダリセリ ドに関する。 更に詳しくは、 本発明は、 脂質代謝改善することができ、 動脈硬化、 心血管系疾患等のリスクファクターで ある血中中性脂肪を低下させ、 高脂血症を改善させる作用のある共役リノール酸 を分子内に有する共役脂肪酸グリセリ ドに関する。 このグリセリ ドは、 医薬品及 び飲食品に用いることができる。
近年、 生活環境の変化に伴い、 過食 ·運動不足などを原因とする生活習慣病 （ 肥満、 糖尿病、 高脂血症等） の増加が指摘されており、 その発症も低年齢化して いる。 その中で脂質代謝異常症の一つである高脂血症は、 動脈硬化症の発症に密 接に関連しており、 血中脂質レベルのコントロールは重要である。 これらの病態 は、 運動療法、 食事療法によりかなり改善することが可能であるが、 どちらの方 法も実行に移すのにかなりの努力を要するものであり、 医師や栄養士等の指導を 必要とした。
一方、 天然に存在し、 食品製造加工中にも生成する共役脂肪酸は、 隣り合う炭 素が単結合を挟んで二重結合を持つ脂肪酸である。 炭素数 1 8の脂肪酸分子内に 共役ジェンを一個持つ共役リノール酸、 あるいは共役ジェンを 2個持つエレォス テアリン酸、 共役ジェンを 3個持つバリナリン酸等が良く知られており、 生理活 性も研究されている。
とりわけ共役リノール酸に関しては、 近年多くの有用な生理活性が報告されて いる。 例えば、 特表平 8 - 5 0 5 7 7 5号 （WO94/16690) 公報には、 共役リノ一 ル酸を動物に投与して動物の体重増加と飼料の効率とを高める方法が、 特表平 1 0— 5 0 8 1 8 9号 （WO96/06605) 公報には共役リノ一ル酸を動物に投与して動 物の体脂肪を減少させる方法が開示されており、 また、 その他にも抗腫瘍効果、 抗ァレルギ一効果等の報告がなされている。 共役リノール酸は、 植物中にグリセリ ドの形で存在する脂肪酸であり、 また、 動物の消化管内で一部の微生物の作用によりリノール酸から変換生成され、 吸収 される事も知られている。
上記のような各種生理作用を有する共役リノール酸は、 工業的にも製造販売さ れ始めている。 市販されている共役リノール酸製品としては、 例えばリノール油 脂社製の CLA80活性リノール、 Maypro社の卜ナリン等が挙げられる。 これらは、 天然のシス型リノール酸 (C18： 2)をアル力リ下で共役化する事により製造され、 主成分は、 cis-9, trans- 11あるいは trans- 9， cis- 11, trans- 10, cis-12の遊離脂肪 酸であり、 その他いくつかの位置あるいは幾何異性体を含んでいる。
しかしながら、 これら遊離脂肪酸型の製品は、 脂肪酸特有の渋味と収斂味が強 く、 そのまま摂取したり、 一般食品に生理効果量を添加するには難しい場合も多 かった。
また、 共役リノ一ル酸は多くの場合力プセルや錠剤型の栄養補助食品として市 販されており、 これらの剤型を単独摂取した場合、 とりわけ食間に摂取した場合 には消化吸収性が悪 L、という難点のあるものであった。
一方、 グリセリ ド型の共役脂肪酸を植物等から多量抽出利用する試みもなされ ているが、 工業的に見合う程度の原料素材は知られていない。
このため、 共役脂肪酸グリセリ ドを酵素反応により合成する試みもなされてい る。 例えば、 リパーゼに依るエステル交換法あるいはエステル合成法等の常法に より、共役リノール酸をグリセリ ド誘導体にする試みが幾つか報告されている（Ga rcia H. S.ら、 Biotechnology Letters, 20 :4, p393-395, 1998年、 Arcos J. A.ら、 Biotechnology Letters, 20 :6, p617-621, 1998年）。
しかしながら、 これらの報告には、 リパーゼを用いた合成反応を利用し、 モノ 、 ジ、 トリグリセリ ド誘導体中の共役リノール酸を製造しうることは記載されて いるものの、 生成したグリセリ ド誘導体の官能的品質や生理効果に付いては全く 触れられていない。 発明の開示
本発明は、 脂質代謝改善剤、 抗肥満剤、 及び高脂血症予防 ·治療剤の製造のた めの共役リノール酸を代表とする共役脂肪酸を、 共役脂肪酸が有する渋味や収斂 味を抑制して経口摂取するための共役脂肪酸エステルの使用を提案する。 即ち、 前記共役脂肪酸が元来有している生理効果を一層有効に発揮させ、 共役脂肪酸が 有する渋味や収斂味を抑制して、 前記共役脂肪酸を経口摂取するに好適な共役脂 肪酸の調製法の一つとして、 共役二重結合を分子内に有する共役脂肪酸をグリセ ロールエステルの形態とした共役脂肪酸グリセリ ドを使用するものである。 この共役脂肪酸グリセリ ドは、 経口摂取であればどの様な形態で摂取しても、 渋味や収斂味がなく、 効率良く吸収できる。
具体的には、 本発明は、 共役脂肪酸を分子内に有する共役脂肪酸エステルにお いて、 該共役脂肪酸をグリセロールエステルの形態とした共役脂肪酸グリセリ ド を、 脂質代謝改善剤、 抗肥満剤、 及び高脂血症予防 ·治療剤として用いることが できる。
更に、 本発明は安全性が高く、 食品として日常摂取することができる、 共役リ ノール酸グリセリ ドを含むグリセリ ドを提供することを目的とする。
本発明は、 共役二重結合を有する共役脂肪酸として、 特に共役リノール酸を分 子中に有する共役脂肪酸グリセリ ドを提供する。
更に好ましい態様としては、 共役二重結合を有する共役脂肪酸として 9， 1 1 一才クタデカジエン酸、 又は、 1 0， 1 2 —ォクタデカジエン酸を持つ共役脂肪 酸グリセリ ドを提供する。
また、 モノ、 ジ又は卜リクリセリ ドからなる群から選ばれた何れか一つの形態 を有する共役脂肪酸グリセリ ドを提供するものである。
この共役脂肪酸グリセリ ドは、 牛乳、 豆乳等のこのグリセリ ドを変性させない 飲食品と混合して飲食品に供することができ、 カプセル、 タブレツ ト等の常法に 基づ L、てグリセリ ドを変性させな t、他の医薬基剤と配合して医薬品に供すること ができる。
本発明の共役脂肪酸グリセリ ドの製造方法としては、 天然のシス型リノール酸 をアル力リ下で共役化した後、 触媒を使ったエステル合成あるいはエステル交換 反応をする方法、 或いは脂肪酸含有グリセリ ドの共役化等いずれの方法を用いて もよい。 中でも、 触媒として生体触媒のリパーゼを用いるエステル交換あるいはエステ ル合成反応が食品用途には好ましく、 特にエステル合成反応が好ましい。 エステ ル合成反応は、 常法により行えばよい。 例えば、 共役リノール酸と固定化リパー ゼ及びグリセロールとの存在下、 脱水しながら反応を行うとよい。 この方法によ れば、 総脂肪中の共役脂肪酸含有量を顕著に増加させることができ、 また常温で も反応が進行する上、 触媒の失活 ·除去も容易で脂肪の酸化等の副反応も限定さ れており安全性も高い。
エステル交換法も安全性は高いものの、 反応収率が劣り、 副生する脂肪酸の分 離も困難である。 一方、 化学触媒でグリセリ ドを合成する事も出来るものの、 予 期せぬ副反応物の恐れや、 グリセリ ドの収率が十分でなかったり、 また、 化学触 媒を除去する煩雑さがある。
エステル交換反応等の基質となる油脂としては、 植物油脂として大豆油、 コー ン油、 綿実油、 ひまわり油、 サフラワー油、 菜種油、 紅花油、 ォリーブ油、 落花 生油、 亜麻仁油、 しそ油、 ヤシ油、 パーム油等を挙げることが出来る。 動物油と しては、 いわし油、 二シン油、 烏賊肝油等の魚油やバター油、 牛脂、 豚脂等を挙 げる事が出来る。 中でも、 コーン油、 大豆油、 パーム油、 ヤシ油等が安定性の点 から好ましい。 また、 バター油も風味の点から好ましい。 これらは単独あるいは 2種以上混合して使用できる。
一方、 エステル交換，合成反応に用いる脂肪酸についても特に制約はなく、 具 体的には遊離型の共役リノール酸、 エレォステアリン酸、 バリナリン酸等が挙げ られる。 また、 これらを豊富に含む天然物の抽出物や合成法により得られた共役 ジェンを複数持つ脂肪酸等を用いてもよい。 中でも、 共役リノール酸 （市販品で は CLA80活性リノール、 トナリン等） が種々の生理効果が報告されているため好 ましい。
エステル交換の場合、 基質となる油脂と共役脂肪酸の比は、 トリグリセリ ド中 の共役脂肪酸含量を 2 0 %以上にするために重要で、 油脂の共役脂肪酸に対する 重量比が 3 · 5以下、 好ましくは 3以下とすることが望ましい。 また、 反応は有 機溶剤を添加しても進行するものの、 油脂と共役脂肪酸の混合物が溶液状態を保 つ温度であれば有機溶剤が無くても反応は十分進行する。 エステル交換 ·合成反応を触媒するリパーゼは総て本発明の目的に利用できる 。 市販されているものの例を挙げれば、 パンクレアチン F、 リパーゼ A, F, M ， A Y, G, P S、 ニューラーゼ F (天野製薬 （株） ） 、 リパーゼ CV (旭化 成 （株） ） 、 リパーゼ OF, AL， PL, Q L (名糖産業 （株） ） 、 Novozyme.L ipozyme (ノボ社：固定化酵素） 等である。 共役脂肪酸含量 20 %以上を達成する ためには、 リノヽ0—ゼ A Y, P L, C V, Novozyme, Lipozymeがエステル合成 ' 交換反応活性が高く好ましい。
添加する酵素量は、 固定化酵素の場合基質量に対して 0. 1〜 1 5 %、 好まし くは 2〜7%の範囲である。 一方、 リパーゼ AY， P L, CVを用いる場合に は添加する酵素量は、 基質量に対して 0. 1〜1 0%、 好ましくは 0. 5〜3% の範囲である。
また、 グリセリ ド誘導体中の共役脂肪酸含量を 20 %以上とするためには、 ェ ステル交換、 あるいはエステル合成反応条件を最適なものにしないと達成は難し い。 すなわち、 酵素の選択や、 基質となる油脂と脂肪酸の比、 水分含量の調節等 の反応条件が重要となる。
エステル交換反応は、 水分が無いと交換反応はほとんど進行せず、 反応系に 1 50〜2000 p pmの水分が存在すると反応が最大限に進行し好ましい。 エス テル交換反応では水の生成はないので、 共役脂肪酸の十分な含有量、 例えば 20 %以上を達成するには、 反応開始時に反応系の水分量を調整しておくことが望ま しい。
一方、 エステル合成反応は副生する水を、 反応系の減圧や加熱、 モレキュラー シーブの添加、 循環気相の乾燥等で脱水する事が好ましい。 得られる反応物には 、 基質に用いた共役脂肪酸組成がほぼ反映される。
また、 エステル合成あるいは交換反応終了物中に未反応の脂肪酸ゃグリセ口一 ルが品質に影響する程度残存している場合には、 時には分別除去する必要も生じ る。 反応物はモノ、 ジ、 卜リグリセリ ドの混合物である場合が多く、 時にはそれ らの分画も必要になる。 反応物からそれらの不要な成分を除くためには、 分子蒸 留、 水洗、 ゲン化分別、 クロマトグラフィー等が考えられる。 産業的には分子蒸 留がもっとも汎用され分別程度も良好である。 ゲン化分別法としては、 脂肪酸を ゲン化処理して石鹼として水性溶媒に分画除去、 あるいは不溶性塩として除去す る方法等があるが、 この場合は残存脂肪酸が 2 0 %以下でないと高粘性のために 実施は難しい。 クロマトグラフィーは分別程度は良好であるものの、 コスト高で ある。
更に、 共役脂肪酸グリセリ ドは、 二重結合を 2個以上有する脂肪酸の少なくと も 1種以上を構成成分とする脂肪酸グリセリ ド又は該脂肪酸グリセリ ドの含有さ れている油脂含有素材に、 共役二重結合産生能力を有する微生物又は該微生物の 産生する酵素を作用させることにより製造することも可能である。 ここで、 共役 二重結合産生能力とは、 前記二重結合を 2個以上有する脂肪酸を構成成分とする 脂肪酸グリセリ ド又は該脂肪酸グリセリ ドの含有されている油脂含有素材を、 直 接共役脂肪酸グリセリ ドに変換する能力のことである。
二重結合を 2個以上有する脂肪酸の少なくとも 1種以上を構成成分とする脂肪 酸グリセリ ドとしては、 例えばリノール酸、 α—リノレン酸、 アーリノレン酸、 ァラキドン酸、 エイコサペンタエン酸 （Ε Ρ Α ) 、 ドコサへキサェン酸 （D H A ) 等の二重結合を 2つ以上有する脂肪酸の 1種または 2種以上を構成成分とする グリセリ ドが挙げられる。
また、 これらのグリセリ ドを豊富に含有する油脂素材として、 具体的には、 サ フラワー油、 大豆油、 コーン油、 菜種油、 綿実油、 ひまわり油、 紅花油、 ごま油 、 ォリーブ油、 亜麻仁油、 エゴマ油等の植物油、 バター油、 魚油、 ラード、 牛脂 等の動物油等が挙げられる。 より好ましくは、 例えば、 炭素数 1 8の脂肪酸、 特 にリノール酸が多い点から、 サフラワー油、 大豆油、 コーン油、 菜種油、 綿実油 、 ひまわり油、 紅花油等の植物性油脂が好ましい。
本発明における共役二重結合産生能力を有する微生物とは、 反応の出発物質と なる上記のグリセリ ドまたは油脂素材を直接共役脂肪酸グリセリ ドに変換する能 力を有する微生物のことである。 反応時には、 微生物をそのまま作用させてもよ いが、 微生物を担体に固定化し、 バイオリアクターとして作用させてもよい。 ま た、 微生物の産生する酵素を回収、 精製、 或いは粉末化し、 そのまま或いは適当 な担体に固定化し、 バイオリアクターとして作用させてもよい。
また、 本発明で用いる微生物としては、 特に限定されるものではなく、 共役二 重結合産生能力を有する微生物であればよい。 例えば、 本発明の共役二重結合産 生能力を有する微生物としては、 古くから発酵乳製品等に利用されているものも 多く含まれ、 病原性を有さないことが確認されている等の安全性の点から、 腸管 系微生物、 即ち、 ラク トバチルス属、 ラク トコッカス属、 ストレプトコッカス属 、 ェンテロコッカス属、 ロイコノス卜ック属等に属する乳酸菌や、 ビフイ ドバク テリゥム属細菌、 バクテリゥム属細菌、 プロピオニバクテリゥム属細菌等が 好ましい。
具体的な共役二重結合産生能力を有する微生物としては、 例えば、 ラク トバチ ルス属細菌としては、 ラク 卜バチルス · ァシドフィルス（Lactobacillus acidoph Uus)、 ラク トバチルス · ブレビス（LacioteciJJiJS brevis)^ ラク トバチルス ·ブ フネ (Lactobacillus buchneri ラク 'チノレス ·カゼ Lactobacillus cas ei)、 ラク トバチルス 'デルブルツキィ サブスピーシーズ. デルブルツキィ（Lac tobacillus delbruecki s s. delbrueckii)) > ラク ナノレス · ァノレブノレッ干ィ サフ—スピーシーズ. ラクチス (^Lactobacillus delbrueckiiCss. lactis) )^ ラク ト ハ'チルス ·デルブルッキイ サブスピーシ一ズ. ブルガリカス Lactobacillus de IbrueckiKss. bulgaricus ^ ラク 卜ノヾチノレス ·カツセリ (Lactobacillus gasser i)、 ラク 'チノレス ·へノレべティカス Lactobacillus helveticus) ラク トノ チ ルス · ジョンソニー（Lactobacillus johnsonii), ラク 卜バチルス ·ォリス（Laci obacillus oris) ラク ト ヾチノレス · ロイ亍、） Lactobacillus reuteri)^ ラク ト バチルス · ラムノーザス（Lactobacillus rhaonosus)^ ラク く'チノレス ·ゼァェ（ Lactobacillus zeae~) ラク チノレス · サケ Lactobacillus sai ei)等力ヽら選は れる。
また、 ラク トコッカス属細菌としては、 ラク トコッカス · ラク千ス Lactococc us lactis) ラク トコッカス · プランタラム Lactococcus plantarum ^ ラク トコ ッカス ' ラフイノラクチス Lactococcus raffinolactis 等から選ばれる。 ロイコ ノス トック属細菌としては、 ロイコノストック · ラクチス Leuconostoc lactis) 等から選ばれる。 ス卜レプトコッカス属細菌としては、 ストレプトコッカス ·サ —モフィルス Streptococcus iAe/mop/ji Jus)等から選ばれる。 ェンテロコッカス 属細菌としては、 ェンテロコッカス ' フエカーリス（Enterococcus faecalis) , ェ ンテロコッカス · フヱシゥム (Enter∞occus faecim)等から選ばれる。 ビフィ ド バクテリゥム属細菌としては、 ビフィ ドバクテリゥム ' アドレスセンティス（fiii idobacteriu adolescentis) ^ ビフイ ドノヽクテリゥム ' ヒノィタム（ ifictotecie riu bifiduni)、 ビフイ ドパ'クテリゥム ' プレーべ (Bifidobacterium breve) ^ ビ フイ ドバクテリウム · 力テニユーラ一タム Bifidobacterium catenulatuin) ^ ビフ イ ドバクテリウム ·インファン亍イス Bifidobacterium infantis)、 ビフィ ドバ クテリゥム · ロンガム Bif idobacterium
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ら選ばれる。 ユーバクテリ ゥム属細菌としては、 ユーバクテリゥム · 了エロファシエンス Eubacterium aer ofaciens)、 ユーノくクテリゥム 'ノヽィフォーム ( Eubac teriu biforaej、 ユーノヾク テリゥム * コプロス夕ノ リジエンス（Eubacteriwn ∞prostanoligens)等から選ば れる。 プロピオニバクテリゥム属細菌としては、 プロピオ二バクテリウム · フ口 Λテンライ干ィ Propionibacieriim ireucfe/HTeicAii) 力ヽり選は' Lる。
中でも、 ラク トパ'チノレス · ァシ ドフイノレス（LaciodacilZt/s acidophilus)^ ラク 卜バチルス · ブレビス（LactotecilZi/s brevis , ラク 卜バチルス ·デルブルツキ ィ サフ'スヒーシース'. 7 "ノレフ'ノレッキイ Lactobacillus delbruecki ss. delbrue cki 、 ラク トバチルス ·デルブルツキィ サブスピーシーズ. ブルガリカス（La ctobacillus delbruecki ss. bulgaricus ) ^ ラク トノヾチノレス ·ガッセリ (Lactofc acillus gasseri) ラク トノヾチノレス ·へノレべティカス Lactobacillus helveticu s)、 ラク トノ《チノレス ··ジョンソニー (Lactobacillus johnsonil ラク トノくチノレス •ォリス Lactobacillus oris ラク トメくチノレス · ロイテリ (Lactobacillus reu teri 、 ラク トバチルス ·サケ（Lactobacillus sakei)、 ビフィ ドノくクテリゥム · ビフィダム（Bifidobacteri bifidum), ビフィ ドバクテリゥム ·インファンティ T Bifidobecteriwn infantis), ユーパクァリウム 'バイフオーム（Eubacterim bifor e ユーノくクテリゥム · コプロスタノ リジエンス（Eubacterium coprosta noligens)^ プロヒォニノくクテリヮム · フロイデンライキイ Propionibacteriwn iretiite/ reic jii)等が共役脂肪酸グリセリ ドの生産性が高く好ましい。
より具体的には、 ビフィ ドバクテリゥム · ビフィダム（Bifidobacteriiw bifid U D)Y IT4007(FER BP- 79 1 )株、 ビフィ ドバクテリゥム · インファンテイス（Bifido bacterim i/7ia/7iis)Y I T40 18 (ATCC15697 )株、 Y IT401 9( ATCC15702)株、 ラク トバチ ルス · ァシドフィルス（Lactobacillus acidop !Zt/s)YI T0070 (ATCC4356)株、 ラク 卜バチルス · ブレビス（iactotecilZus 6re is)YI T0033(NI RD T- 6)株、 YI T0076CA TCC 14869)株、 ラク トバチルス .デルブルツキィ サブスピーシーズ. デルブルッ キイ Lactobacillus delbrueckiKss. cteJZ>ruec±ii) ) YI T0080(ATCC9649)株、 ラク 卜バチルス ·デルブルツキィ サブスピーシーズ. ブルガリカス（Lactobacillus £teJi>ruecAii(ss. arictis) )YI T0181 (ATCC1 1842)株、 ラク トバチルス ·ガッセリ (Lactobacillus gasseri)Y IT0168株、 YIT0192(DSM20243)株、 ラク卜バチルス ·へ ルベティカス（Lactobacillus AeJi¾ii /s)Y IT0083(ATCC15009)株、 YIT0085(ATCC 521 )株、 ラク トバチルス · ジョノ、 ソニー Lactobacillus jo/mso77ii)Y IT0202CJC 1022)株、 ラク トバチルス ·オリ T Lactobacillus oris)Y IT0277(NCFB2160 )株、 ラク トバチルス · ロイテリ（Lactoteci!Zus ret;お ri)YI T0313株、 ラクトバチルス •サケ Lactobacillus sa/rei)YIT0247(JCM1 157)株、 プロピオニバクテリゥム ·フ ロイデンライキイ Propimibacteri freudenreicAii')ATCC6207株、 ユーバクァ リウム 'バイフォーム（Eubacteriiw Wiorae)YIT6076(ATCC27806)株、 ユーバクテ リゥム ·コプロスタノリジエンス（Eubacteriim copros tanoii^ens) YI T6166 (ATCC 51222)株等が挙げられる。
上記微生物を用いた製造法において、 微生物をそのまま用いる場合には、 洗浄 生菌体を乳化油脂と混合し反応させるか、 或いは油脂素材含有食品に該微生物を 接種し、 培養したり、 洗浄生菌体と混合して反応させたものを用いればよい。 固 定化してバイオリアクターとして用いる場合には、 例えば、 菌体酵素をそのまま 用いるか、 或いは生菌体を粉砕後、 塩析ゃ膜処理、 イオン交換樹脂処理、 ゲル濾 過処理等の通常の分画方法で酵素を精製し、 イオン結合や共有結合、 疎水結合法 によりシリカゲル、 セライト、 イオン交換樹脂、 キトサンビーズ、 セルロース等 の担体に固定化して用いることができる。
得られた反応物はそのまま、 又は、 好ましくは更に精製を行って用いる。 具体 的な精製法としては、 水相に懸濁している場合には、 遠心分離で油相を回収し、 これを有機溶媒で抽出して精製する。 抽出溶媒としては、 共役二重結合を含む共 役脂肪酸グリセリ ドを溶出することのできる溶媒を常法に従って用いる。 こうし て得られた共役脂肪酸グリセリ ドを含む反応組成物は、 分画した油分をそのまま 使用することもできる。
本発明の共役脂肪酸グリセリ ドとしては、 分子内に共役二重結合を有する脂肪 酸、 具体的には共役リノール酸、 エレォステアリン酸、 パリナリン酸等をグリセ リ ドの形態としたものであれば、 いずれも好適に使用できる。 また、 グリセリ ド の形態は、 モノ、 ジ、 又は、 トリのどの形態でもよいが、 共役脂肪酸を 1分子中 に多く含むジ、 トリ型を多く含むものが望ましい。
このようなグリセリ ドの形態とすることで、 遊離の脂肪酸のみならず、 メチル エステル等他のエステル類と比べても、 風味の改善、 消化吸収の促進効果等が高 くなり、 また、 これに付随する抗肥満効果、 脂質代謝改善効果、 高脂血症の予防 •治療効果等も増強される。
また、 生理効果の期待できる有効量 （例えば共役リノール酸の場合一日 1 〜 3 g ) の共役脂肪酸グリセリ ドを、 適正脂肪摂取量内で摂取するためには、 該誘導 体中の共役脂肪酸含量が 2 0 %以上である事が望ましい。 もしグリセリ ド中の共 役脂肪酸含量が 2 0 %未満になると 5 〜 1 5 g以上の誘導体を摂る事になって摂 取カロリーが増えるために、 共役脂肪酸により期待できる生理効果、 例えば体脂 肪の減少や、 癌の予防効果等が減殺される虞が大きくなる。
上記のようにして得られる共役脂肪酸グリセリ ドは、 安全性において全く問題 はない。 また、 共役脂肪酸グリセリ ドの摂取量としては 1人 1日あたり 1 0 0 m g〜 5 0 0 0 m g、 特に 3 0 0 m g〜 3 0 0 O m gが好ましい。
前述の種々の反応によって得られた本発明の共役脂肪酸グリセリ ドは、 これを 含む油脂組成物のまま使用することもできるが、 一般の飲食物、 あるいはタブレ ット、 カプセル、 顆粒、 サラダ油状食品等に混入 ·加工して使用することも可能 である。 これらの剤形、 主にカプセルや顆粒状では、 共役脂肪酸グリセリ ドの持 つ優れた消化吸収性により、 摂取時の空腹度合い等による吸収効率の低下といつ た遊離型の問題点が特に解消されるため好ましい。
より具体的には、 種々の反応によって得られた本発明の共役脂肪酸グリセリ ド を含む油脂組成物は、 分画、 殺菌、 混合、 濃縮、 乾燥等の加工をした後、 他の飲 食物又は経口投与可能な物質と共に医薬品又は飲食品として用いることができる 。 例えば、 各種フレーバーや、 果汁粉末、 砂糖 ·果糖等の甘味料、 クェン酸. リ ンゴ酸等の酸味料、 安定剤、 増粘剤、 穀物粉、 ビタミン類、 ミネラル類等と混合 して、 パン、 麵類、 焼き菓子、 ク リーム、 飴、 チューインガム、 绽菓、 お茶、 コ 一ヒー、 果汁飲料、 発酵乳、 炭酸飲料、 プリン、 ゼリー等の形態で用いることが できる。 同様に、 タブレツ 卜、 カプセル、 顆粒あるいはサラダ油状食品等に加工 して栄養補助食品の形態で用いる事が出来る。
また、 共役脂肪酸グリセリ ドを食品の形態で用いる場合において、 該食品中に 共役脂肪酸以外の脂質を併用する際には、 リノール酸含量の少ない油脂素材を用 いることが望ましい。 具体的には、 バター油、 魚油、 シソ油、 エゴマ油、 パーム 油、 ヤシ油、 アマ二油、 ォリーブ油、 牛脂、 ラード等の油脂を用いることが好ま しい。 リノール酸を多量に含む油脂を併用すると、 共役脂肪酸グリセリ ドの有す る生理効果、 即ち、 抗肥満効果、 油脂代謝改善効果、 高脂血症の予防 ·治療効果 等が阻害される可能性があるためである。
本発明の共役脂肪酸グリセリ ドは、 共役脂肪酸特有の苦味や収斂味が抑制され 、 かつ消化吸収性も改善されているため、 これを用いれば、 風味良好かつ何時ど の様な状況で摂取しても効率よく吸収することが可能となる。
また、 本発明の脂質代謝改善用共役脂肪酸グリセリ ドを用いれば、 種々の優れ た生理効果を有する共役脂肪酸を、 各種の呈味改善剤等を併用することなく、 継 続的に摂取でき、 優れた内臓脂肪減少効果、 抗肥満効果、 体重減少効果が得られ 、 また抗糖尿病効果、 抗動脈硬化症効果、 抗ガン効果等も期待できる。 また、 共 役リノール酸を分子内に有する共役脂肪酸グリセリ ドは、 高脂血症を顕著に改善 し、 動脈硬化、 糖尿病、 心血管疾患等のリスクを軽減させる。 図面の簡単な説明
図 1は各種油脂原料と共役リノール酸とのエステル交換反応における、 グリセ リ ド中の共役リノール酸の価数の変化を経時的に示した線図である。 図において
、 縦軸はグリセリ ド中の共役リノール酸の価数、 横軸は 3 7 °Cの反応時間（hr)で あり、 ♦はバター、 疆はコーン油、 ▲はヤシ油、 はイワシ油である。
図 2は共役リノール酸含有脂質の吸収速度を示す線図である。 図において、 縦 軸は血中トリグリセリ ド濃度（mg/dl )、 横軸は時間（hr)であり、 ♦は C L A (共役 リノール酸） 、 國は C L A— T G (共役リノール酸含有卜リグリセリ ド） 、 ▲は コントロールである。 発明を実施するための最良の形態
以下、 実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、 本発明はこれらに限定 されるものではない。
[実施例 1. 共役リノ一ル酸グリセリ ドの製造 1、 エステル交換反応]
30 OmLのメディゥム瓶に酵素リパーゼ P L ( 1 g) 、 水 400 ^L、 へキ サン 95mL、 さらにバター油、 ヤシ油、 コーン油の各 58 gか、 いわし油の 6 9 gを加え、 さらに活性リノール （リノール油脂 （株） 、 共役リノール酸 73. 6%含有） 56 gを添加して窒素を充填 '密栓し、 37°Cで 91時間、 往復振と う機で撹拌しながら反応させた。 所定時間ごとに 10 Lのサンプルを採取 ·希 釈し、 薄層クロマトグラフィーで分析した。 その結果を図 1に示した。 この反応 では油脂中の脂肪酸と共役リノール酸含量は等モルに設定されているので、 反応 が平衡に達した時のグリセリ ド中の共役リノール酸の価数は 1. 5と計算される 。 バター油やいわし油では反応 2時間で既にグリセリ ド中に取り込まれた共役リ ノール酸含量は 20% (グリセリ ド中の共役リノール酸 0. 6価に相当） を超え ている事が分かる。
[実施例 2. 共役リノ一ル酸グリセリ ドの製造 2、 エステル合成反応]
CLA80 (リノール油脂株式会社製） 100 g、 グリセロール （食添用） l l g ， Lipozyme 1M (ノボ ·ノルディスク社製） 1 1. 3 gをナスフラスコに抨量する 。 これをロータリーエバポレーターで減圧乾固させながら、 約 70 °Cで撹拌し、 エステル合成反応を 12時間行った。 反応物から Lipozyme IMを濾別し、 共役リノ —ル酸グリセリ ドを得た。 得られた反応物を薄層クロマトグラフィー、 沃素発色 により定量した。 その結果、 卜リグリセリ ドが 85.5%であり、 ジグリセリ ド 13.5 %、 モノグリセリ ド 1 %以下で、 未反応の脂肪酸が 4 %、 未反応のグリセロール が 2 %以下であった。 [実施例 3 . 乳酸菌のスクリーニング]
リノール酸含有油脂に作用して、 直接共役リノ一ル酸を生成する能力のある微 生物をスクリーニングした。 まず、 表 1及び表 2に示した各種乳酸菌、 ビフィ ド バクテリゥム属細菌及びプロピオニバクテリゥム属細菌を、 0. 035%リノール酸含 有 M R S培地で培養し、 遠心分離により菌体を回収し、 生理食塩水で 3回洗浄し て洗浄菌体を調製した。 また、 ユーバクテリゥム属細菌も培地として B C M培地 を用いて嫌気条件で培養する以外は、 上記と同様に処理して洗浄菌体を得た。 これらの洗浄生菌体 1 を、 5 m gのリノール酸を含む 1 m Lの 5 O m Mリン酸緩衝液 （p H 7 . 1 ) に混合し、 3 7 °Cで 2日間振盪して反応を行わせ た後、 遠心分離し、 上清を 2倍量のクロ口ホルム：メタノール （ 1 ： 2 ) で抽出 してクロ口ホルム層に脂質を抽出した。 抽出した脂質は、 へキサンで適宜希釈し 、 紫外線吸収スぺクトルを測定して共役リノール酸の生成を調べた。
更に、 共役リノ一ル酸の生成が認められた菌株はリノール酸の代わりに 5 m g のコーン油を含む乳化液を用い、 同様の方法で処理して紫外線吸収スぺクトルを 測定した。 尚、 コーン油中のリノール酸含量は約 5 0 %である。
その結果、 次の表 1及び表 2に〇印で示した菌が、 リノ一ル酸グリセリ ド含有 油脂を共役リノ一ル酸グリセリ ドに変換する能力を有する菌であることが判った 。 尚、 抽出した脂質に遊離の脂肪酸が含まれているかを薄層クロマトグラフィー で調べたところ、 遊離脂肪酸のバンドは殆ど検出されなかったため、 生成した共 役脂肪酸はグリセリ ド型であることが判った。
また、 リノール酸を強く異性化できるものの、 グリセリ ド型リノール酸を異性 化する能力が弱い菌 （各表中のコーン油で X印のついている菌） もいることから 、 リノ一ル酸を異性化する菌がグリセリ ド型リノ一ル酸を必ずしも異性化できる 訳ではないことも判った。
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表 2
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[実施例 4 . グリセリ ド体の調製と吸収試験]
実施例 1のコーン油で得られた反応生成物 9 g (残存脂肪酸量 3 . 6 g、 グリ セリ ド 5 . 4 g、 グリセリ ド中の共役リノ一ル酸含量 3 5 % ) を、 予め p H 7の 緩衝液で平衡化後、 エタノールで置換し、 さらにへキサンで置換した D E A Eセ ルロースカラム （乾燥樹脂量 6 0 g、 カラム 0 3 . 5 X 3 0 c m) に吸着させ、 へキサンで溶離し、 非吸着部を回収後、 ロータリーエバポレーターで溶剤を除去 し 5 gの乾固物を得た。 この脂質組成を薄層クロマ卜グラフィ一で調べた結果、 クリセリ ド誘導体が 9 6 %、 混在する脂肪酸が 4 %の組成であり、 乾固物の 2 9 %が共役リノール酸であつた。
この乾固物を、 一晩絶食させた 1 9週齢の雄 I C Rマウスに胃ゾンデにより投 与し （ 5 m L Z k g、 n = 5 ) 、 対照として、 3重量部の活性リノール （リノ一 ル油脂 （株） 製：共役リノ一ル酸を 7 0 %含む） とリノ一ル酸を 4部混合したも のを、 同様に投与した。 また、 もう一つの対照として非投与群を置いた。 経時的 に 3群の眼窩採血を行い血中のトリグリセリ ド量を測定した。 その結果、 本発明 によるグリセ口ール誘導体の方が、 対照の遊離脂肪酸夕イブのものより消化吸収 性の良い事が明らかとなった （図 2 ) 。 各群の 2頭の血液試料をガスクロマトグ ラフィーにより脂肪酸の分析を行つたところ、 、ずれも共役リノール酸が認めら れた。
[実施例 5 . 共役リノール酸グリセリ ドの製造 3、 含有乳飲料の調製] 表 1の乳酸菌の中から i/idotecieriuffl infantis YIT4018株、 Lactobacillus delbrueckii ss. bulgaricus YIT0181株、 Lactobacillus helveticus YIT0085株の 3菌株について共役リノール酸グリセリ ド生成試験を行った。 サフラワー油 （リ ノール酸 7 3 %含有） を対油脂重量 0 . 5 %のポリグリセリン脂肪酸エステル ( M S W 7 5 0、 阪本薬品工業 （株） ） を含む等量の水溶液に滴下しながら、 ヒス コ卜ロン乳化機で乳化して 5 0 %油脂乳化物とした。 これに、 0 . 0 3 5 %リノ ール酸含有 iM R S培地で培養したそれぞれの菌株の洗浄生菌体を湿重量で油脂の 約 2 0分の 1重量部添加し、 3 7 °Cで 2日間反応させて、 該反応液から脂肪を抽 出し、 へキサンで適宜希釈し紫外線吸収スぺク トルを測定して共役リノール酸グ リセリ ドの生成を調べた。 尚、 実施例 3と同様に薄層クロマトグラフィーにより 遊離の脂肪酸量も測定した。
その結果、 Bifidobacterium infant is YI T4018株、 Lactobacillus delbruecki i ss. bulgaricus YIT0181株、 及び Lactobacillus helveticus Y IT0085株の全てで 共役リノール酸のグリセリ ドが生成していることが判った。
また、 Lactobacillus helveticus Y IT0085株で調製した共役リノール酸を含む 油脂を乳製品に添加混合して、 共役リノール酸グリセリ ド含有食品を製造した。 即ち、 遠心分離器によりクリームを一部除去して乳脂肪分 1 . 1 %とした低脂肪 牛乳 9 9 . 6重量部に 0 . 4重量部の該油脂を乳化混合し、 共役リノ一ル酸グリ セリ ドを含む牛乳を製造した。 この牛乳は風味も良好で物性も安定していた。
[実施例 6 . 共役リノ一ル酸グリセリ ドの製造 4、 含有豆乳飲料の調製] 表 1及び表 2の乳酸菌から、 Bifidobacteriu bididum YI T4007株、 Lactobaci llus helveticus YIT0085株、 Lactobacillus reuteri YIT0313株の 3菌株につい て発酵豆乳製造中の共役リノ一ル酸グリセリ ド生成試験を行った。
5 %の大豆油 （リノール酸 5 2 %、 リノレン酸 8 %を含む） を含む豆乳 （無脂 肪固形分 8 . 3 % ) を 1 0 0 °Cで 6 0分間加熱殺菌して夫々の菌株を接種し、 3 7 °Cで 2日間培養し、 発酵豆乳を製造した。 各発酵豆乳から脂肪を抽出し、 2 3 5 nmの吸光度を測定して共役リノール酸の生成を調べた。
その結果、 いずれもリノール酸が共役リノール酸に変換されていることがわか つた。 なお、 一部の共役二重結合はリノレン酸からも生じている可能性があるも のの確認は出来なかった。 また、 発酵豆乳中の遊離脂肪酸は増加していなかった ので、 生成した共役リノール酸はグリセリ ド誘導体のリノール酸がそのまま共役 リノール酸に変換されたことが判った。
[実施例 7 . 菌体酵素の調製]
表 1に示した酪農乳酸菌から、 Lactobacillus helveticus Y IT0085株の 1 0 m l 培養分の洗浄生菌体を 2 m 1の 1 0 %リゾホスファチジルグリセロール溶液に懸 濁し、 5 0て、 3 0分間加熱処理して菌体酵素を調製した。 これを実施例 5の方 法に従い生菌体の代わりに添加して反応を行った結果、 共役脂肪酸グリセリ ドが 生成していることを紫外線吸収スぺク トル測定及び薄層クロマトグラフィ一で確 認した。
[実施例 8. 抗肥満試験]
実施例 2で得た共役リノール酸含有グリセリ ド （TG— C LA) を、 卵巣摘出 マウスに 0. 5%投与して内臓脂肪蓄積への影響を調べた。 すなわち、 6週齢の C57BL/6Jマウス （早） 3 6匹を日本8し〇 （株） より購入した。 MF食で 1週間 予備飼育した後、 常法に従い左右の卵巣の摘出手術を施した。
1週問の回復の後、 9匹ずつ 4群に分け、 表 3に示した実験飼料をそれぞれ 7 週間自由摂取させた。 一晩絶食後、 エーテル麻酔下で開腹し、 採血後直ちに腎臓 、 子宮、 腸間膜周辺の脂肪組織を摘出秤量し、 内臓脂肪重量とした。 実験期間を 通じて飼育条件は恒温 （ 24 ± 1 °C) 、 恒湿 （ 60 ± 5 %) とし、 明暗周期は 1 2時間に設定した。 飼料及び水は自由摂取とし、 毎週体重と摂餌量を測定した。 尚、 摂餌量は 1ケージ 3匹ずつ飼育を行ったため、 実際には 3匹が 1週問に摂 取した量を測定した。 データは全て平均値土標準偏差で表わした。 各群間の平均 値の差の検定には Tukeyの多重比較検定を用いた。
その結果、 摂餌量に差は見られず、 また、 実験期間中の体重増加率 （％) はそ れぞれ本発明品群； 35.8±5.4、 コーン油群； 38.3±8.8、 アマ二油群； 47.5± 11 .3、 魚油群； 40.2±5.9であった。 アマ二油群は他の群に比べて体重の増加が大き く、 6週目と 7週目には本発明品群がアマ二油群に対して有意に低い値を示した (P <0.05) ό 解剖時の体重、 内臓脂肪重量を表 4に示した、 内臓脂肪重量は本 発明品群がコーン油群、 アマ二油群に対してそれぞれ 3 0%、 3 8 %低い値を示 し、 有意な差が認められた （ρ <0.01， ρ < 0.001)。 また、 有意差は検出されな かったものの、 体脂肪を下げるとされている魚油に対しても本発明品群は体重に 対する内臓脂肪重量が低い傾向に有り （ρ =0.13) 本発明品の優れた効果が確認 できた。 表 3 実験飼科組成 本発明品 コーン油 アマ二油 魚油
70 % % % カゼィン ά 2 4 2 4 2 4
大豆ぺブチド * 1 1 1 1
コーンスターチ 1 3 . 3 1 3 . 3 1 3. 3 1 3. 3
シュクロース 5 0 5 0 5 0 5 0
コーン油 4. 5 5
実施例 2の（TG-CLA) 0. 5
アマ二油 5
魚油 5
セノレロース 2 2 2 2
ビタミン混合 1 1 1 1
ミネラル混合 ** 3. 5 3. 5 3. 5 3. 5
重酒石酸コリン 0. 2 0. 2 0. 2 0， 2
* ハイ二ユート R (不二製油）
* * A I Ν 7 6配合 表 4. 体重、 内臓脂肪重量の比較
Figure imgf000021_0001
a vs b, ρく 0.05、 a vs c, pく 0.01、 a vs d, p<0.001 (Tukeyの多重比較検定）
[実施例 9. 血中トリグリセリ ドの比較試験 1 ]
左右の卵巣を摘出した 7週齢の C 5 7 B LZ 6 Jマウスを 3群に分け、 1. 2 %サフラワー油添加 MF飼料 （対照群） 、 0. 6 7 %サフラワー油と実施例 2と 同様の方法で調製した共役リノ一ル酸グリセリ ド （TG— C LA) を 0. 5 3 % 含む MF飼料 （0. 5 3 %TG - C L A群） 、 及び 1. 2 %TG— C LA添加 M F飼料 （1. 2 %TG— C L A群） をそれぞれ白由摂取させた。 使用した T G— C L Aの脂肪酸組成は表 5に示すように、 9c, llt/9t、llc_18:2及び 10t, 12c-18:2 が主な脂肪酸であり、 トリグリセリ ドが 80 %以上のものであった。
8週間の飼育後、 4時間絶食を行った各群 8匹のマウスについてエーテル麻酔 下で心臓採血し、 血中トリクリセリ ドの分析を市販のキッ ト （トリグリセライ ド Gテス卜ヮコ一） を用いて行った。 その結果を表 6に示す。 尚、 血中中性脂肪は 1. 2%TG— C L A群で有意に低い値を示した。 表 5 丁〇ー〇 八の組成 脂肪酸組成 (%)
16:0 6.9
18:0 2.7
18:1 15.1
18:2(非共役） 0.8
共役リノール酸 18 :2 73.6
(c9,tll/t9,cll) (34.5)
(tlO, cl2) (35.2)
(その他異性体） (3.9) グリセリ ド誘導体組成 (%) 卜リグリセリ ド 83.4
ジグリセリ ド 12.4
モノグリセリ ド 0
遊離脂肪酸 4.2
表 6 血中卜リグリセリ ドの比較 血中 TG(mg/dl) P 対照群 42.0+8.5
0.53%TG— C L A群 39.0+6.8 0.590
1.2 %TG— CLA群 29.0+4.7 0.002 p (Dunnett多重比較検定、 各群 8匹） 表 6に示す通り、 食事中の脂質の一部を共役リノール酸グリセリ ドに置き換え ることで血中中性脂肪を低下させる効果を十分発揮することがわかつた。 このこ とから共役リノ一ル酸グリセリ ドの使用による閉経後の代謝異常がもたらす高脂 血症の軽減効果等が期待できる。
[実施例 1 0 . 血中トリグリセリ ドの比較試験 2 ]
7週齢の雄性 C 5 7 B L Z K s j , d b Z d bマウスを 1週間予備飼育後、 3 群に分けて、 実施例 9と同様の飼料をき由摂取させた。 投与開始前、 開始後 2， 4， 6週間目に眼窩採血し、 血中中性脂肪の分析を行った。 その結果を表 7に示 す。 尚、 血中卜リグリセリ ドは対照群と比較して有意に低い値を示した。
表 7に示す通り、 実施例 9と同様に、 食事中の脂質の一部を共役リノール酸グ リセリ ドに置き換えることで血中中性脂肪を低下させる効果を十分発揮すること がわかった。 このことから共役リノール酸グリセリ ドの使用による I I型糖尿病に おける高脂血症の改善等が期待できる。 表 7 血中卜リグリセリ ドの比較
Figure imgf000023_0001
* pく 0. 05、 * * p < 0. 001 (Dunnett多重比較検定、 各群 7匹）
[実施例 1 1 . 官能検査]
実施例 2及び実施例 4の共役リノ一ル酸含有グリセリ ドと、 対照として市販の 共役リノール酸 （活性リノール、 リノール油脂社製） を用い、 1 0人のパネラー による官能検査により嗜好性の検定を行った。 その結果、 本発明のグリセリ ド誘 導体は脂肪酸の嫌味が無く、 ほとんど無味無臭の標品である事が分かった （表 8 尚、 官能検査は、 10名で行い平均スコア一で表した。 採点基準は次の通りで ある。 無味 0点、 やや渋い 1点、 少し渋い 2点、 かなり渋い 3点、 非常に渋い 4 点。
表 8
Figure imgf000024_0001
[実施例 1 2. 軟カプセル剤の製造 1 ]
下記処方に従い、 ゼラチン ·グリセロール ·水でカプセル基剤を製し、 カプセ ル基剤にて含有油を被包成型して軟カプセル剤を調製した。
(処方）
ゼラチン 0. 4275 g
グリセロール 0. 0225 g
水 0. 05 g
実施例 2の共役リノール酸グリセリ ド 2. 0 g
得られた軟カプセル剤は良好な風味を有していた。
[実施例 13. タブレッ トの製造 1 ]
下記に示す処方で各種成分を混合、 打錠して、 タブレツ トを製造した t (処方）
乳糖 1 0 g
実施例 2の共役脂肪酸グリセリ ド含有油 250 m g
パントテン酸カルシウム 1 0mg
ビタミン B 2 4 mg
DKエステル F— 20W (第一工業製薬製） 400mg
微細化セルロース 6 g デキストリ ン 8 g
得られたタブレッ トは良好な風味を有していた c
[実施例 14. タブレッ トの製造 2]
下記に示す処方で各種成分を混合、 打錠してタブレツ トを製造した。 その結果 、 得られたタブレツ トは良好な風味を有していた。
(処方）
乳糖 1 0 g
実施例 7の共役脂肪酸グリセリ ド含有油 250 m g
パントテン酸カルシウム 10mg
ビタミン B 2 4 mg
DKエステル F - 20 W (第一工業製薬製） 400 mg
微細化セルロース 6 g
デキス卜リン 8 g

Claims

請求の範囲
1 . 共役二重結合を有する共役脂肪酸、 好ましくは共役リノール酸を分子内に有 する共役脂肪酸エステルにおいて、
前記共役脂肪酸が、 グリセロールとエステル結合して共役脂肪酸グリセリ ドを 形成していることを特徴とする共役脂肪酸エステル。
2 . 有効成分としての共役二重結合を有する共役脂肪酸、 好ましくは共役リノ一 ル酸を分子内に有する共役脂肪酸グリセリ ドと、 医薬上許容される成分とを含む 脂質代謝改善作用、 抗肥満作用、 又は高脂血症予防 ·治療作用を有する経口薬剤
3 . 脂質代謝改善、 抗肥満、 又は高脂血症予防及び Z又は治療用に用いられる経 口薬剤の製造のための、 共役二重結合を有する共役脂肪酸を分子内に有する共役 脂肪酸エステルの使用であつて、
前記分子内の共役脂肪酸がグリセロールにエステル結合して共役脂肪酸グリセ リ ドを形成していることを特徴とする共役脂肪酸グリセリ ドの使用。
4 . 前記共役脂肪酸が、 共役リノール酸であることを特徴とする請求項 3に記載 された共役脂肪酸エステルの使用。
5 . 共役二重結合を有する共役脂肪酸を分子内に有する共役脂肪酸グリセリ ドと 牛乳とを混合したことを特徴とする脂質代謝改善用牛乳。
6 . 共役二重結合を有する共役脂肪酸を分子内に有する共役脂肪酸グリセリ ドと 豆乳とを混合したことを特徴とする脂質代謝改善用豆乳。
7 . カプセル基剤で成型されたカプセルと、 該カプセル内に被包された共役脂肪 酸グリセリ ドとを備え、 前記共役脂肪酸グリセリ ドは、 共役二重結合を有する共役脂肪酸を分子内に有 することを特徴とする脂質代謝改善用カプセル剤。
8 . 共役二重結合を有する共役脂肪酸を分子内に有する共役脂肪酸グリセリ ドと 、 タブレツ 卜基材とを含むことを特徴とする脂質代謝改善用タブレツ 卜剤。
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