WO1999030698A1 - Medicament pour traiter la nephropathie diabetique et retarder l'apparition d'insuffisance renale - Google Patents

Medicament pour traiter la nephropathie diabetique et retarder l'apparition d'insuffisance renale Download PDF

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WO1999030698A1
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emodin
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kidney
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Leishi Li
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Nanjing General Hospital Of Nanjing Command Pla
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Definitions

  • the present invention relates to anthraquinone compounds, and more particularly to a emodin-containing medicine for treating diabetic nephropathy.
  • BACKGROUND Diabetes is a metabolic disease caused by absolute or relative lack of insulin secretion. As a hormone with important biological activity, insulin can regulate the body's blood sugar level and promote the synthesis of protein and fatty acids in the body. Due to the lack of insulin in diabetic patients, while a series of metabolic disorders occur in the patient's body, important structural organs, such as the heart, kidneys, peripheral nerve tissue, and retina, can have severe structural and functional damage.
  • One of the common complications, and diabetic nephropathy is one of the main causes of end-stage renal failure (known as uremia) in chronic renal insufficiency.
  • the object of the present invention is to provide a medicament which has a significant effect on the treatment of diabetic nephropathy, and can further delay chronic renal failure.
  • a medicine for treating diabetic nephropathy which contains emodin
  • Oral aqueous solution is preferably 100-200 mg / day of emodin.
  • a drug for chronic renal failure which contains emodin, is made into an oral capsule containing emodin or an oral aqueous solution containing emodin, and the dosage is preferably 100 to 200 mg / day of emodin.
  • the medicine for prolonging renal failure of the present invention can also be made into a compound, that is, it contains emodin and meproproline. It can also be made into oral capsules and oral aqueous solutions.
  • the administered dose is 100 ⁇ 200mg / day
  • Rhubarb family Polygonaceae is one of the important medicinal materials in China. It is mainly produced in Qinghai, Gansu, Ningxia, and Inner Mongolia. Emodin is a component of anthraquinone derivatives contained in rhubarb. In palm rhubarb, the total amount of anthraquinone-containing derivatives is 3.5%, and the content of emodin is 1.27%.
  • emodin has certain antibacterial, anti-inflammatory, and antitumor effects.
  • Oral emodin can control the increase of triglyceride and cholesterol in diabetic rats.
  • the metabolic level of renal tissue in diabetic rats treated with emodin is significantly controlled, which is shown by oxygen consumption and Powder removal rate has decreased.
  • the weight of kidney and protein, DNA, and RA content in kidney tissue of rats in emodin treatment group were significantly smaller than those in control group.
  • emodin can significantly reduce glomerular volume and mesangial area. Moreover, it can significantly inhibit the production of fibronectin (FN) by mesangial cells, which can reduce the hillocks of mesangial cells.
  • FN fibronectin
  • emodin can prevent kidney hypertrophy in rats with diabetic nephropathy and correct its hemodynamic abnormalities
  • Emodin can reduce the growth of extracellular matrix in kidney tissue during diabetes and slow down the glomerular sclerosis.
  • emodin has a delayed effect on chronic renal failure in rats.
  • Oral emodin can reduce kidney index; can reduce the content of RNA, DNA and protein in kidney tissue; can reduce serum creatinine and urea nitrogen; can reduce blood lipid level; can reduce urine protein level; can reduce oxygen consumption and inulin regeneration Can inhibit the growth of mesangial cells; Can inhibit the proliferation of renal tubular epithelial cells. Therefore, emodin can delay chronic renal failure.
  • Figure 1 Effect of emodin on protein excretion in diabetic nephropathy rats;
  • Figure 2a Comparison of mean glomerular volume between two groups at different times
  • Figure 2b Comparison of mean glomerular mesangial area between two groups at different times
  • Figure 8a Effects of emodin at different concentrations on proliferation of murine mesangial cells
  • Figure 8b Effects of emodin at different concentrations on human mesangial cell proliferation
  • Figure 9 Effects of serum of emodin administered to rats on renal tubular epithelial cell proliferation;
  • Figure 10. Effects of serum of emodin administered to rats once or chronically on renal tubular epithelial cell proliferation; Direct effect of the product on renal tubular epithelial cell proliferation; the best mode for carrying out the present invention
  • Example 1 Effect of emodin on diabetic nephropathy
  • VLDL-CH (mmol / L) 0.32 ⁇ 0. 06 0.99 ⁇ 0. 13 * 0.82 ⁇ 0. 19 * Note: Compared with group A, * P ⁇ 0.01; compared with group B ⁇ P ⁇ 0. 05 (the same below )
  • Group A Normal control group
  • Group B Diabetes group C: Emodin treatment group
  • Table 2 Effects of emodin on overall renal function and isolated renal oxygen consumption in diabetic nephropathy rats (X ⁇ S)
  • Renal hypertrophy is one of the most significant histomorphological changes in diabetic nephropathy.
  • the kidney weight of diabetic rats increased significantly, and the protein, RNA, and DNA contents of kidney tissues also increased significantly.
  • the increase in protein and RNA was significantly greater than the increase in DNA.
  • Rhubarb The weight of kidney and the content of protein, DNA, and RNA in tissues of rats in the treatment group were significantly less than those in the control group. See Table 3. Table 3. Emodin on kidney weight and protein, RNA and DNA in diabetic rats
  • RNA / DNA 1.41 ⁇ 0. 63 1.76 ⁇ 0. 44 * 1.57 ⁇ 0. 53 *
  • mice Female SD rats weighing 170 to 190 g. The tail vein was injected with streptozotocin (40mg / kg). After 72 hours, the blood glucose level was measured, and the blood glucose concentration between 15. 3 to 27.7 mmol / L was included in the experimental observation object.
  • emodin treatment group emodin was administered 10 mg / kg 18 hours after streptozotocin injection, and then emodin was orally administered at 10 mg / kg / day for 4 weeks.
  • the blood pressure of the rats in the first three groups of the experiment was not significantly different, ranging from 11.2 to 14.0KPa. After injection of streptozotocin, the blood pressure of the rats increased significantly (15.9 ⁇ 0.5 Vs 13. 8 ⁇ 0.8 Kpa P ⁇ 0.05). O The blood pressure of the rats did not change significantly after treatment with emodin .
  • the glomeruli were isolated from normal human kidney tissue by mechanical mesh sieving, 0.1 ° /. After the collagenase digestion treatment, the cells were cultured in a DMEM medium containing 20% calf serum, and the following experiments were performed with 3 to 5 passage cells.
  • FN fibronectin
  • Emodin can prevent kidney hypertrophy in diabetic rats. Correct its hemodynamic abnormalities; (2) Emodin can reduce kidney damage and protect renal function in diabetic rats;
  • Emodin can reduce the growth of extracellular matrix in kidney tissue during diabetes and slow down the degree of glomerular sclerosis.
  • the emodin treatment group was given emodin 10 mg / kg daily, and the other two groups were given the same amount of distilled water.
  • the blood creatinine and urea nitrogen levels of the rats in each group were not different before the experiment, and the blood creatinine and urea nitrogen levels increased sharply after surgery. After 2 to 4 weeks, it decreased to near normal levels, and then serum creatinine and urea nitrogen increased gradually in each group.
  • the rate of increase in serum creatinine and urea nitrogen levels in the emodin treatment group was significantly less than that in the experiment In the control group, there was a significant difference between the two groups and urea nitrogen levels at 12 weeks. See Table 6.
  • the animal model of chronic renal failure was established by the 5/6 nephrectomy method, which is the same as above.
  • Emodin delays the progressive decline of renal function in patients with chronic renal failure.
  • Renal Failure Prediction 1 Industrial applicability This drug can significantly delay the progressive decline of function in patients with chronic renal failure and can be used for the treatment of diabetic nephropathy.

Description

治疗糖尿病肾病及延缓慢性肾衰的药 技术领域 本发明涉及蒽醌化合物， 具体地说是含大黄素的治疗糖尿病肾病的 药。 背景技术 糖尿病是因胰岛素分泌绝对或相对缺乏而导致的一种代谢性疾病。 作为具有重要生物学活性的激素， 胰岛素能够调节机体血糖水平， 促进 体内蛋白质和脂肪酸的合成。 糖尿病患者由于缺乏胰岛素， 在患者体内 出现一系列代谢紊乱的同时， 重要的生命器官， 如心脏、 肾脏、 外周神 经组织， 及视网膜等可出现严重的结构与功能的损伤， 其中糖尿病肾病 是糖尿病最常见的并发症之一， 而糖尿病肾病又是慢性肾功能不全终末 期肾衰 （即称尿毒症） 的主要原因之一。
除胰岛素治疗外， 糖尿病， 尤其是糖尿病肾病迄今仍缺乏行之有效 的治疗药物。 发明内容 本发明的目是提供一种对糖尿病肾病的治疗有显著疗效， 进而能延 缓慢性肾衰的药物。
本发明的技术方案如下：
一种治疗糖尿病肾病的药， 它含有大黄素
Figure imgf000003_0001
口服水溶液。 给药的剂 量为 100〜 200mg/日大黄素为宜。
一种延缓慢性肾衰的药， 它含有大黄素， 它是制成含大黄素的口服 胶囊或含大黄素的口服水溶液， 给药的剂量为 100〜 200mg/日大黄素为 宜。
本发明延缓慢性肾衰的药也可以制成复方， 即含有大黄素和巯甲丙脯 酸。 它也可以制成口服胶囊和口服水溶液。 给药的剂量为 100〜 200mg/日
替换页（细则第 26条） 大黄素和 50〜 150mg/日巯甲丙脯酸。
大黄系蓼科植物， 为中国重要的药材之一。 主产于中国的青海、 甘肃、 宁夏、 内蒙一带。 大黄素是大黄所含蒽醌衍生物中的一种成份。 掌叶大黄 中， 含蒽醌衍生物总量为 3. 5%， 其中大黄素的含量为 1. 27%。 已有的研究 证实， 大黄素具有一定的抗菌、 消炎、 抗肿瘤等作用。 实验证明雌性 SD大 鼠（体重 200±30g )服用 10mg/kg大黄素，给药后 30min血中即可测出 50ng/mL 的大黄素， 4 小时达到血药浓度高峰， 达 350 〜 500ng/mL， 12 小时降至 50ng/mL以下。大黄素的毒性极小， 实验表明单项给药 3. Og/kg仍未观察到 动物的死亡。 我们的研究发现， 大黄素不仅能够治疗糖尿病肾病， 而且可 以延缓慢性肾衰。
口服大黄素能控制糖尿病的大鼠甘油三脂和胆固醇的升高， 用离体肾 灌注技术， 糖尿病大鼠经大黄素治疗后， 其肾组织代谢水平明显得到控制， 表现为氧耗量和菊粉清除率都有降低。 大黄素治疗组的大鼠肾脏重量及肾 组织中蛋白质、 DNA、 R A含量明显小于对照组。
糖尿病肾病大鼠肾脏血流动力学研究表明， 服用大黄素能使菊粉清除 率和肾血流量减少， 滤过分数也呈减少趋势。
糖尿病肾病大鼠的组织形态学分析表明， 服用大黄素能使肾小球体积 和系膜区面积明显减小。 并且能明显抑制系膜细胞产生纤维连接蛋白 ( FN ) ， 能使系膜细胞小丘减小。
总之， （ 1 ) 大黄素能够防治糖尿病肾病大鼠肾脏的肥大， 纠正其血 流动力学异常；
( 2 ) 大黄素能够减轻糖尿病肾病大鼠肾脏的损伤， 保护肾功能；
( 3 ) 大黄素能够纠正糖尿病时血脂代谢异常；
( 4 ) 大黄素能够减少糖尿病时肾脏组织中细胞外基质的生长， 减缓 肾小球的硬化。
进一步研究表明， 大黄素对大鼠慢性肾衰有延缓作用。 口服大黄素能 减小肾脏指数； 能降低肾组织中 RNA、 DNA及蛋白质的含量； 能降低血清 肌酐和尿素氮； 能降低血脂水平； 能降低尿蛋白水平； 能降低氧耗量和菊 粉再生量； 能抑制系膜细胞的生长； 能抑制肾小管小皮细胞的增殖。 因此 大黄素能延缓慢性肾衰。 附图的简要说明 图 1.大黄素对糖尿病肾病大鼠蛋白质排泄量的影响；
图 2a.不同时间两组平均肾小球体积的比较；
图 2b.不同时间两组平均肾小球系膜区面积的比较；
图 3.大黄素作用后系膜细胞培养上清液中 FN水平的改变；
图 4.大黄素作用后系膜细胞相连 FN水平的改变； 图 5.大黄素对系膜细胞小丘形成数目的影响；
图 6.灌服大黄素后不同时间血对系膜细胞增殖的抑制作用；
图 7.不同剂量大黄素对系膜细胞增殖的影响；
图 8a.不同浓度大黄素对鼠系膜细胞增殖的影响；
图 8b.不同浓度大黄素对人系膜细胞增殖的影响；
图 9.大鼠服不同剂量大黄素的血清对肾小管上皮细胞增殖的影响； 图 10.大鼠 1次或慢性服大黄素的血清对肾小管上皮细胞增殖的影响； 图 11.大黄素纯品对肾小管上皮细胞增殖的直接影响； 实施本发明的最佳方式 实施例 1 大黄素治疗糖尿病肾病的作用
1.大黄素治疗大鼠实验性糖尿病肾病的作用
1.1.糖尿病肾病大鼠动物模型的建立：
采用单侧肾切除合并链脲菌素注射的方法。 建立此模型方法简述如 下： 雌性 SD大鼠， 体重 180±20g,， 腹腔麻醉及无菌条件下， 行左肾切除 术。 手术后 7天， 轻度乙醚麻醉下， 尾静脉注射链脲菌素 ( 35mg/kg ) 。 72小时测定血糖浓度， 血糖水平〉 250mg/100mL认为模型成立。 列入实验观 察对象。
1. 2.实验设计及分组： 实验大鼠分为 4 组： 单侧肾切除大鼠对照组 ( n=6 ) ； 糖尿病对照组 ( n=18 ) ； 糖尿病大黄素治疗组 （ n=10 ) ； 和 正常对照组 （ n=9 ) 。
• 其中， 大黄素治疗组经口灌服大黄素溶液 lmL/200g (体重） （浓度： 2mg/mL )剂量为 10mg/kg/日，连续用药 120天后宰杀动物，检测治疗效果， 余下各组动物给等量蒸馏水为对照。
1. 3.结果
1. 3. 1血糖体重等一般状态的变化：
各组大鼠实验前体重无显著差别， 单侧肾切除后体重有轻度减轻， 但 减少幅度 <10%。 链脲菌素注射后， 大鼠的体重与对照组相比明显减少。 大 黄素治疗后， 两组体重差别不明显。
实验结果表明， 实前各组血糖无明显差异。 链脲菌素注射后， 血糖水 平显著升高与正常组差异明显， 说明糖尿病动物'模型成立。
( 17. 63+1. 17mmol/L Vs6. 32±0. 34廳 ol/L P〈0. 01 ) 。 经大黄素治疗后， 两组血糖相比， 无明显差异 （ 22. 1±3. 1 Vs 20. 4±2. 6nnnol/L P<0. 05 ) , 均显著高于正常对照组， 说明大黄素无明显降低血糖的作用。
1. 3. 2血脂代谢的影响：
实验前各组血脂无显著的差异， 大鼠经链脲菌素注射出现糖尿病时， 血脂代谢出现明显的异常。 表现为甘油三酯和胆固醇的升高。 经大黄素治 疗后， 升高的甘油三酯和胆固醇得到明显地控制。 表现为降低甘油三酯、 胆固醇水平， 升高高密度脂蛋白 （ HDL ) ， 降低极低密度和低密度脂蛋白 水平 （ VLDL和 LDL ) 。 见表 1
1. 3. 3大黄素对糖尿病大鼠肾组织代谢水平的影响：
应用离体肾灌经技术可以研究肾组织的代谢水平， 结果表明， 与正常 组大鼠肾脏相比， 糖尿病大鼠肾脏的菊粉清除率和尿量明显增加， 同时氧 耗量也明显增加。 糖尿在鼠经大黄素治疗后， 其肾组织代谢水平明显得到 控制。 表现为氧耗量小于非治疗组大鼠肾脏的氧耗量， 同时， 菊粉清除率 也低于糖尿病组。 如表 2所示 表 1 大黄素对糖尿病大鼠血脂和脂蛋白代谢的影响 （ X土 S)
¾¾5 Α组 （ n=9 ) B S ( n=10 ) C组 （ n=10 ) 甘油三脂 （ mmol/L) 0.67±0.13 1.87±0.52* 1.53±0. 40*Δ
胆固醇 （ mmol/L ) 3.49±0. 71 5.14±1. 09* 3.91±1. 12*厶
HDL-CH ( mmol/L ) 1.49±0. 29 1.47±0. 27 1.86±0. 42*Δ
LDL-CH ( mmol/L ) 1.71±0. 51 2.70±0. 69* 1.38±0. 47 Δ
VLDL-CH(mmol/L) 0.32±0. 06 0.99±0. 13* 0.82±0. 19* 注： 与 A组比较， *P<0.01 ； 与 B组比较 Δ Ρ〈0. 05 (下同）
A组： 正常对照组 B组： 糖尿病组 C组： 大黄素治疗组 表 2 大黄素对糖尿病肾病大鼠整体肾功能和离体肾氧耗量 的影响 （ X±S )
类别 A组 （ n=9 ) B组 ( n=6 ) C组 ( η=6 ) 平均动脉压 （ kPa ) 16.26±1. 22 21.06±3. 17* 20.23±3. 67* 菊粉清除率
(mL/min) 1.04±0. 27 1.42±0. 30** 1.37±0. 21
(mL/min X g ) 0·48±0. 11 0.58±0. 18 0.67±0. 13 Δ 尿量 (mL/min) 0.026±0. 014 0.082±0. 031* 0.058±0. 029* 氧耗量 （n=4) (n=6) (η=4)
基础氧耗量 Oimol/min) 2.48±0. 37 4.37±0. 97* 3.10±0. 52*厶 总氧耗量 (μπιοΐ/min) 3.03±0. 62 4.86±1. 06* 3.79±0. 89*Δ 注： 与 Α组比较， *P<0.01,**P<0.05;与 B组比较: Δ Ρ<0. 05
1. 3. 4大黄素对肾脏肥大的作用：
肾脏肥大是糖尿病肾病最显著的组织形态学变化之一。 本组实验中， 糖尿病大鼠肾重量明显增加， 同时肾组织中蛋白质、 RNA、 DNA含量也明 显增加。 但是， 蛋白质与 RNA升高的幅度明显大于 DNA升高的幅度。 大黄 素治疗组大鼠肾脏重量， 及组织中蛋白质、 DNA、 RNA含量则明显少于对 照组。 见表 3。 表 3.大黄素对糖尿 大鼠肾重量和组织中蛋白质、 RNA及 DNA的
影响 （ X±S)
类别 A组（ n=9 ) B组（ n-10 ) C组（ n=10 ) 肾重 2.23±0. 17 2.94±0. 27* 2.54±0. 25* 肾重 /体重(％) 6.85±0. 62 13.5±0. 83* 10.4±0. 47*厶
肾组织中
蛋白质 (mg/g肾） 183.7±22. 0 251.0±34. 9** 207.2+34. 5*Δ
R A 4.26±0. 29 5.82±0. 41* 5.36±0. 67*
DNA 3.04±0. 42 3.51±0. 29* 3.40±0. 23*
RNA/DNA 1.41±0. 63 1.76±0. 44* 1.57±0. 53*
注： 与 Α组比较， *P<0.01，**P<0.05;与 B组比较： Δ Ρ<0.05
1. 35大黄素对尿蛋白质排泄量的影响：
与正常组大鼠相比， 糖尿病组大鼠尿 24 小时蛋白质排泄量明显增多。 经大黄素治疗后， 尿 24小时蛋白质排泄量显著减少。 见图 1。
2.大黄素对糖尿病大鼠肾脏血流动力学异常的作用。
2. 1.糖尿病大鼠动物模型：
雌性 SD大鼠， 体重 170〜 190g。 尾静脉注射链脲菌素 （ 40mg/kg)。 72小时后测定血糖水平， 血糖浓度在 15. 3〜 27. 7mmol/L之间的列入实验 观察对象。
2. 2实验设计与分组
大鼠分为 3组， 正常对照组 ( n=6)， 糖尿病大鼠组 （ n=l l)， 和糖尿 病大黄素治疗组 （ n=9)。其中大黄素治疗组在注射链脲菌素 18小时给大黄 素 10mg/kg， 随后按 10mg/kg/日经口灌服大黄素， 连续用药 4周。
2. 3结果：
2. 3. 1血压的变化：
实验前三组大鼠血压无明显差别， 在 11. 2〜 14. 0KPa范围内。 大鼠在 注射链脲菌素后， 血压明显升高 （ 15. 9±0. 5 Vs 13. 8±0. 8Kpa P<0. 05) o 经大黄素治疗后， 大鼠血压无明显地变化。
2. 3. 2肾脏血流动力学变化：
实验结果如表所示， 与正常大鼠相比， 糖尿病组大鼠的菊粉清除率和 肾脏血流量均明显升高， 同时肾血管阻力明显减少， 滤过分数 （ FF ) 也明 显升高。 经大黄素治疗后， 菊粉清除率和肾血流量明显减少， 同时 FF也呈 减少的趋势。 见表 4. 表 4.大黄素对糖尿病大鼠肾血流动力学的影响
正常对照组 糖尿病组 大黄素治疗组 n=6 n=l l n=9 平均动脉压 KPa 13.8±0. 8 15.9±0. 5 16.0±0. 9 菊粉清除率 mL/min 1.67±0. 22 3.30±0. 94 2.15±0. 44 肾血流量 ml/mL 6.0.1±0. 23 8.63±0. 48 7.14±0. 31 肾血管阻力 mmHg/min/mL 7.31±0. 28 9.06±0. 41 8.11±0. 37 滤过分数 0.28±0. 03 0.38±0. 07 0.33±0. 04 尿量 uIJmL 7.3±2. 1 34.7±16. 3 28.6±14. 2
3.大黄素治疗糖尿病大鼠作用的肾组织形态学分析
3.1动物模型同前
3.2实验设计与分组：
大鼠分为三组， 正常对照组 （ n=12)， 糖尿病大鼠组 （ n=12 ) 和大黄 素治疗组 （ n=12 ) ， 用药方法同前， 在大黄素治疗的第 3、 7及 14天宰 杀动物， 取肾组织常规病理检查。 应用镜下图像分析技术， 定量分析各组 肾组织形态学变化。
3.3结果
大鼠注射链脲菌素后， 肾小球体积较正常对照组明显增大。 大黄素治 疗组在糖尿病发生后 3天， 7天及 14天时， 肾小球体积和膜区面积均较糖 尿病组明显减小。 见图 2
4.大黄素对系膜细胞纤维连接蛋白产生的影响
4.1系膜细胞培养：
正常人肾组织经机械网筛法分离出肾小球， 0.1°/。胶原酶消化处理后， 置含 20%小牛血清的 DMEM培养液中培养，以 3〜 5代细胞进行下列实验。
4.2纤维连接蛋白 （FN ) 的测定： 以双抗体夹心 ELISA法检测培养上 清液及与细胞相连的 FN水平。
4.3结果
4.3.1大黄素对系膜细胞产生 FN的影响- 大黄素能够明显抑制系膜细胞产生 FN， 当其浓度为 20mg/L时， 几乎 完全抑制由转化生长因子 β而致的 F 合成。 见图 3、 图 4。
4.3.2大黄素对培养系膜细胞小丘形成的影响
长期培养的系膜细胞可叠层生长而形成小丘， 是系膜细胞增殖及细胞 外基质积的结果。 无大黄素时， 系膜细胞形成小丘大而多， 经大黄素处理 后， 小丘数小而少。 20mg/L的大黄素几乎完全抑制系膜细胞小丘的形成。
小结： ( 1 )大黄素能够防治糖尿病大鼠肾脏的肥大。 纠正其血流动力学异常； ( 2 ) 大黄素能够减轻糖尿病大鼠肾脏的损伤， 保护肾功能；
( 3 ) 大黄素能够纠正糖尿病时血脂代谢异常；
( 4 ) 大黄素能够减少糖尿病时肾脏组织中细胞外基质的生长， 减缓 肾小球硬化的程度。
实施例 2.大黄素延缓慢性肾衰的作用
1.大黄素延缓慢性肾衰的作用
1.1慢性肾衰动物模型：
雄性 SD大鼠， 体重 150〜 200g， 腹腔麻醉和无菌条件下， 先期结扎 左肾动脉分枝上、 下各 1枝， 随后在结扎血管的第 7天行右肾切除， 并开 始记录手术后时间。
1.2实验设计与分组- 术后第 4周开始分组， 正常对照组 （ n=10 )； 5/6肾切除大黄素治疗组 (简称大黄素组， n=16 ) ;和 5/6肾切除对照组（简称实验对照组， n=17 )。
大黄素治疗组每日给大黄素 10mg/kg ， 经口灌服， 其余两组给等量的 蒸馏水。
1 3结果
1.3.1大黄素对体重、 肾重等的影响：
实验前， 各组大鼠体重无明显差异， 术后体重有一过性降低。 随实验 进展， 各组大鼠体重均增加， 且无明显差异。 术后 12周时大黄素组肾重量 呈减少趋势， 肾重 /体重明显少于实验对照组。 同时肾组织中 RNA、 DNA 及蛋白质含量也明显减少。 如表 5所示。 表 5体重、 肾重和肾组织中蛋白质， RNA及 DNA含量的变化
正常对照组 大黄素组 实验对照组 体重 g 372±34 350±31 369±38
肾重 g 2.01±0. 31 2.75±0. 63 3.03±0. 36 肾重 /体重％ 5.31±0. 66 6.50±1. 03 7.61±0. 91 肾组织中 mg肾
蛋白质 134.3±9. 5 156.2±17. 1 183.8±19. 5
RNA 4.13±0. 17 4.25±0. 21 4.87±0. 45
DNA 3.51±0. 23 3.38±0. 30 4.18±0. 43
R A/DNA 1.25±0. 37 1.15±0. 42 1.26±0. 26 摄食量 g/24h 28.5±8. 2 26.7+9. 5 25.3±8. 3
1.3.2大黄素对肾功能的影响
各组大鼠实验前， 血肌酐和尿素氮水平无差异， 手术后血肌酐和尿素 氮水平急剧上升。 2〜 4周回降近正常水平， 尔后各组血清肌酐和尿素氮 再进行性升高。 大黄素治疗组血肌酐和尿素氮水平上升速度明显小于实验 对照组， 第 12周时两组和尿素氮水平相差明显。 见表 6。
1.33.大黄素对血脂和脂蛋白代谢的影响：
实验前及开始用药治疗前， 实验对照组和大黄素治疗组的血脂及脂蛋 白水平无明显差异， 经 12 周大黄素治疗， 血脂水平明显低于实验对照组。 见表 6。 表 6 大黄素对肌酐、 BUN、 血脂、 脂蛋白及总蛋白水平的影响
正常对照组 大黄素组 实验对照组 肌酐 μπιοΙ/L 68.4±21. 3 190.0±69. 5 272.6±56. 8
BUN mmol/L 17.4+2. 0 21.9±3. 8 31.7±8. 9 甘油三脂 mmol/L 0.67±0. 13 1.51±0. 42 2.06±0. 51 胆固醇 mmol/L 2.95±6. 01 3.26±0. 70 4.26±0. 89
HDL mmol/L 1.27±0. 25 1.44±0. 31 1.10±0. 18
LDL mmol/L 1.44±0. 43 1.18±0. 35 2.06±0. 40
VLDL mmol/L 0.27±0. 05 0.61±0. 32 0.84±0. 35 总蛋白 g L 75.9±3. 2 72.8±3. 4 71.2±8. 1 白蛋白 g L 40.1±5. 4 37.4±3. 8 36.9±4. 7 白蛋白 /球蛋白 1.12±0. 30 1.07+0. 41 1.03±0. 38
Na + mmol/L 141.7+1. 6 142.2±1. 8 143.7±1. 7
K + mmol/L 6.2±0. 8 6.5±0. 6 6.4±0. 8
1.3.4大黄素对尿蛋白影响：
实验前， 各组大鼠 24小时尿蛋白水平无差异。 手术后尿蛋白排泄量明 显增加 （ 28.6±7. 3 Vs 7. 1±4. 8mg/24h P<0. 01)。 随后尿蛋白排泄进行 性增多。 经大黄素治疗后， 尿蛋白水平明显低于实验对照组， 第 12周时两 组相差明显。 （ 35. 6±13. 7 Vs 120. 8±38. 2mg/24h P〈0. 01)。
1. 3. 5各组死亡率的比较：
见表 7。 手术后 4周时死亡数较多， 随着实验的进行， 实验对照组略 多于大黄素治疗组。第 12周，结束实验时，三组大鼠的存活率分别为 90%、
75%、 和 61%。
1 表 7 死亡只数与成活率
正常对照组 大黄素治疗组 实验对照组 术后第 4周 2 3
7 1
8 1 1
12 1 1 1
16 1 最终存活只数 9 12 11 存活率 （％) 90 75 61 2.大黄素对 5/6肾切除后残余肾功能保护作用
2. 1.动物模型：
慢性肾衰动物模型的建立采用 5/6肾切除的方法， 与前述相同。
2. 2实验设计与前述相同。
2 3 结果
2. 3. 1大黄素对正常大鼠肾功能的影响：
研究表明， 正常大鼠经大黄素治疗后， 其肾功能， 如氧耗量， 运量， 菊粉清除率及葡萄糖再生量无明显差异。 见表 8。 大 OP黄素对正常大鼠肾功能的影响
正常对照组 （ n=24 ) 正常大黄素 （ n=4 ) 肾重 g 1.62±0. 14 1.59±0. 10
氧耗量 μπιοΐ/min/g 4.49±0. 72 4.66±0. 59
Na +转运量 fjmol/min/g 38.87±4. 38 36.21±5. 67
菊粉清除率 μΐ/min/g 282.5±48. 5 274.8+27. 8
流量 ml/min/g 21.3±2. 8 22.1±1. 7
葡萄糖再生量 mol/min/ g 10.4±3. 1 8.2±1. 6
尿量 51±7 55±9
2. 3. 2大黄素对残余肾功能的影响
大黄素治疗后， 残余肾氧耗量和葡萄糖再生量 ：明显低于实验对照组。 见表 9。 表 9 大黄素对残余肾功能的影响
实验对照组 （ n=6 ) 大黄素治疗组 （ n=6 ) 肾重 g 1.26±0. 11 1.23+0. 28
氧耗量 μπιοΐ/min/g 5.75±0. 72 4.42±0. 64
Na +转运量 pmol/min/g 10.5±2. 1 9.3±1. 5
菊粉清除率 L/min/g 127.4±23. 6 122.2±13. 7
流量 L/min/g 14.7±1. 6 14.1±2. 3
葡萄糖再生量 10.6±2.9 6.0±2. 5
尿量 L/min 20±3 17+2
3.大黄素抑制系膜细胞和肾小管上皮细胞生长与功能的作用
3. 1大黄素抑制系膜细胞的生长
正常 SD大鼠灌服 20mg大黄素后的血清， 对系膜细胞生长即可见抑制 作用， ¾-TdR掺入率为 77%， 6小时抑制作用最强， ¾- TdR掺入率为 60%， 9小时后抑制作用逐渐减弱。 见图 6。 以不同剂量的大黄素灌服大鼠， 统一在灌药后 6 小时取血， 可见随用 药剂量的增加， 抑制系膜生长的作用也增加。 见图 7。
3. 2大黄素直接抑制系膜细胞生长的作用
研究发现， 大黄素直接加入细胞培养体系中， 其系膜细胞生长明显被 抑制， 见图 8 。 25 g/mL的大黄素已使系膜细胞 - TdR掺入率降为 58%。 随着大黄素浓度的增加， 10C^g/mL时， 系膜继胞的掺入率仅为 17%。
3. 3大黄素对肾小管上皮细胞增殖的作用：
研究表明， 大黄素经口灌服后的血清能够明显地抑制肾小管上皮细胞 的生长。 （见图 9 ) 。 而且长期灌服大黄素的血清， 抑制肾小管上皮细胞 生长的作用， 明显大于单次灌服大黄素的血清。 见图 10。
将大黄素直接加入培养的肾小管上皮细胞中， 也能够明显地抑制上皮 细胞 ¾- TdR的掺入。 （见图 11 )
实施例 3， 临床研究：
1.大黄素延缓慢性肾衰患者肾功能进行性减退的作用。
1. 1病例选择：
49例慢性肾衰患者， 男性 38例， 女性 11例， 平均年龄 40. 7岁。 除去 造成肾功能一过性降低的因素， 如电解质紊乱， 酸碱失衡， 感染及严重高 血压后， 本组患者平均基础血肌酐水平 344±114MM)1/L。
1. 2.病人分组： 病人随机分为 4组： 大黄素治疗组 （ η=12 ) , 巯甲丙 脯酸治疗组 （ n=10 ) ， 联合用药组 （ n=14 ) 和对照组 （ n=13 ) 。 其中， 大黄素治疗组每日给大黄素 100〜 200mg/日； 巯甲丙脯酸治疗组给巯甲丙 脯酸 75mg/日； 联合用药组每日同时给大黄素 100〜 200mg/kg/日和巯甲丙 脯酸 75mg/日。 对照组仅给安慰剂作为对照。
1. 3结果
在 6〜 20日的随访期间， 对照组有 5例 （ 26. 3%) 发展至终末期肾衰 而行透析治疗， 其余 3组无一例发生终末期肾衰。
经回归分析表明， 肾功能衰退速度以对照组最大， 巯甲丙脯酸次之， 大黄素和联合用药组较好。 见表 10 大黄素延缓慢性肾衰患者肾功能进行性减退的作用
对照组 大黄素组 巯甲丙酸组 联合用药组 例数 19 11 9 10 随访时间 （日） 11.8±3. 3 11.4±4. 8 9.3±2. 8 11.7±4. 7 肾功能衰退指数 -100.5±46. 9 -6.1±2. 1 -31.9±3. 1 16.7±4. 3
( X 10" )
10年内发生终末期 94.7% 36.4% 66.4% 30%
肾衰的预测 1 工业应用性 此药物能够明显延缓慢性肾衰患者功能进行性减退， 可用于对糖尿病 肾病的治疗。

Claims

权利要求
1.一种治疗糖尿病肾病的药，
其特征是含有大黄素。
2.根据权利要求 1所述治疗糖尿病肾病的药，
其特征是含大黄素的口服胶囊或含大黄素的口服水溶液。
3.根据权利要求 1所述治疗糖尿病肾病的药，
其特征是给药剂量为 100〜 200mg/日大黄素。
4.一种延缓慢性肾衰的药，
其特征是含有大黄素。
5.根据权利要求 4所述延缓慢性肾衰的药
其特征是大黄素的剂量为 100〜 200gm/日。
6.根据权利要求 4所述延缓慢性肾衰的药，
其特征是含有大黄素和巯甲丙脯酸。
7.根据权利要求 6所述延缓慢性肾衰的药，
其特征是给药剂量为 100〜 200mg/日大黄素和 50 〜 150mg/日巯甲脯 酸。
8.根据权利要求 4或 6所述的延缓慢性肾衰的药，
其特征是制成口服胶囊或口服水溶液。
12
替换页（细则第 26条）
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