WO1998009650A1 - Preparations vaccinales - Google Patents

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WO1998009650A1
WO1998009650A1 PCT/JP1997/003123 JP9703123W WO9809650A1 WO 1998009650 A1 WO1998009650 A1 WO 1998009650A1 JP 9703123 W JP9703123 W JP 9703123W WO 9809650 A1 WO9809650 A1 WO 9809650A1
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antigen
polysaccharide
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vaccine
hydrophobized
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Hiroshi Shiku
Junzo Sunamoto
Hideo Nakamura
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Mitsubishi Chemical Corporation
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    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2

Definitions

  • the present invention relates to a vaccine preparation comprising an antigen and a hydrophobized polysaccharide. More specifically, the present invention relates to an actin preparation comprising an antigen, for example, a cancer cell antigen or a virus antigen, and a hydrophobized polysaccharide acting as an adjuvant, wherein the antigen and the hydrophobized polysaccharide form a complex.
  • the vaccine preparation of the present invention particularly has an activity of activating and inducing cytotoxic T cells (hereinafter sometimes abbreviated as “CTL” in the present specification) specific for an antigen. It is extremely useful as a vaccine for the prevention and / or treatment of cancer, viral diseases, or autoimmune diseases.
  • CTL cytotoxic T cells
  • CTLs specifically recognize cancer cells and virus-infected cells through their T cell receptors and destroy and injure them, and are important as a defense mechanism against cancer or virus in vivo. It is.
  • the T cell receptor of CTL does not directly recognize the specific antigen expressed on the surface of cancer cell-virus-infected cells, but antigen-presenting cells such as macrophages and dendritic cells, cancer cells or virus-infected cells themselves. In recent years, it has been clarified that it recognizes a complex of an MHC class I antigen expressed on the surface of an E. coli and an oligopeptide derived from a specific antigen bound thereto ("CTL epitope" of the specific antigen).
  • Oligopeptide complexes derived from MHC class I antigen-specific antigens are thought to be generated via the following processing pathways. That is, after the antigen protein is synthesized in the cytoplasm, a part of it is decomposed into an oligopeptide by an intracellular protease complex ("proteome"). Then, a part (9 to 10 amino acid residues) is further transported from the cytoplasm to the endoplasmic reticulum membrane by transporter in antigen processing (TAP), which is located in the endoplasmic reticulum membrane.
  • TRIP antigen processing
  • a vaccine that artificially activates CTL for the purpose of preventing and / or treating cancer, viral disease, or autoimmune disease by eliminating cancer cells, virus-infected cells, or autoantigen-reactive lymphocytes (CTL activating vaccine) is being developed.
  • CTL activating vaccine a vaccine that artificially activates CTL for the purpose of preventing and / or treating cancer, viral disease, or autoimmune disease by eliminating cancer cells, virus-infected cells, or autoantigen-reactive lymphocytes (CTL activating vaccine) is being developed.
  • CTL activating vaccine a living body is immunized with a cancer cell or a virus-infected cell itself that expresses a specific antigen, or a specific antigen or an oligopeptide derived therefrom is subjected to the above-described processing of an antigen-presenting cell. And expressed as a complex with MHC class I antigen.
  • a method of introducing a gene encoding a specific antigen protein using a viral vector or the like 2) a method that includes some CTL epitopes, A method of introducing a specific antigen protein of a large size into the cytoplasm by any method, or 3) directing an oligopeptide of 9 to 10 amino acids derived from a specific antigen that can be a CTL peptide to MHC class I antigen of antigen presenting cells Attempts have been made to combine them.
  • the method 1) is equivalent to so-called gene therapy, and generally has a problem that its efficacy and safety have not yet been evaluated.
  • the method 3) has been confirmed to be effective in experimental animals, it is considered that practical problems will arise when applied to humans.
  • there are various types of antigens in MHC class I antigens possessed by each patient and it is necessary to cover the diversity of CTL epitopes generated in response to such diversity.
  • Polysaccharide monocholesterol derivatives are used as ribosome polysaccharide coating agent (Japanese Patent Application Laid-Open No. 61-1981) or fat emulsion coating agent (Japanese Patent Application Laid-Open No. 63-1991 / 46) It is known that it can be done. It is also known that a cancer cell antigen or a virus antigen-ribosome complex coated with a mannose-containing polysaccharide as described above has CTL-inducing activity (see WO92 / 48887). ).
  • the (antigen) protein is ribosomized or fat-emulsified and then coated with a polysaccharide / cholesterol derivative.
  • the specific effects of the complex there is no report on the specific effects of the complex.
  • the present inventors have intensively studied to find a substance that can be a simpler and more effective adjuvant.
  • a hydrophobized polysaccharide in which an alkyl group or a cholesterol group has been introduced into a natural polysaccharide can extremely easily and efficiently use a cancer cell antigen protein or a virus antigen protein without the need for phospholipids.
  • these complexes are administered to animals. Then, they found that specific CTLs were activated, resulting in a host defense response.
  • the present invention has been completed based on these findings.
  • the present invention provides a vaccine preparation comprising a hydrophobized polysaccharide and an antigen, and a vaccine preparation comprising a complex of a hydrophobized polysaccharide and an antigen.
  • a vaccine preparation comprising a hydrophobized polysaccharide and an antigen
  • a vaccine preparation comprising a complex of a hydrophobized polysaccharide and an antigen.
  • the above-mentioned vaccine preparation comprising the antigen encapsulated in the aggregated fine particles of the hydrophobized polysaccharide; and the above-mentioned vaccine preparation comprising the hydrophobized polysaccharide which is an adjuvant.
  • the vaccine preparation can be used, for example, for anticancer, antiviral, or for treating autoimmune diseases.
  • the above-mentioned vaccine preparation wherein the hydrophobized polysaccharide is a polysaccharide into which an alkyl group or a sterol residue is introduced; the hydrophobized polysaccharide is 1 to 100 per 100 sugar units constituting the polysaccharide.
  • the primary hydroxyl group of five sugar units is represented by the following formula (I) : -0- (CH 2 ) ffl CONH (CH 9 ) n NH-CO-OR (I)
  • R represents an alkyl group or a sterol residue
  • m represents 0 or 1
  • n represents an arbitrary positive integer
  • the above vaccine preparation which is a polysaccharide having a group represented by the following formula:
  • the above vaccine preparation, wherein the saccharide is pullulan or mannan; the above vaccine preparation, wherein the sterol residue is a cholesterol residue.
  • the above vaccine preparation wherein the antigen is a protein which is presented as an oligonucleotide to an MHC class I antigen and induces cytotoxic T cells; the above vaccine preparation, wherein the antigen is ErbB-2 protein
  • the vaccine preparation wherein the antigen is a cancer cell antigen, a virus antigen, or an autoantigen-reactive T cell receptor;
  • an immunization method including a step of administering the above vaccine preparation to a mammal, and the above method for inducing an antigen-specific cytotoxic T cell.
  • an adjuvant containing a hydrophobized polysaccharide is provided.
  • the above-mentioned adjuvant for combination with an antigen in a vaccine preparation is provided.
  • a hydrophobized polysaccharide for producing the vaccine formulation.
  • FIG. 1 shows the expression of human ErbB-2 in mice immunized with a complex of cholesterolized mannan or cholesterolized pullulan with the cancer gene product human ErbB-2 protein.
  • FIG. 2 shows growth curves of tumor cells of each individual after inoculation of mouse cancer cells (CMS 7HE) or non-expressing (CMS 7 neo).
  • the vertical axis represents the tumor volume (mm 3 ) calculated by approximate calculation by measuring the major axis and the minor axis of the tumor, and the horizontal axis represents the number of days after tumor inoculation.
  • 1 to 3 indicate data of CHM-erb B2, CHM-CAB (control group), and CHP-erb B2 mice, respectively.
  • FIG. 2 shows the expression of human ErbB-2 in mice immunized with a complex of cholesterolized mannan or cholesterolized pullulan with the cancer gene product human ErbB-2.
  • FIG. 3 shows the growth curves of tumor cells of each individual after inoculation of CMS 7HE) or non-expressing (CMS 7 neo) mouse cancer cells.
  • the vertical axis represents the tumor volume (mm 3 ) calculated by approximate calculation by measuring the major axis and the minor axis of the tumor.
  • the horizontal axis represents the number of days after tumor inoculation.
  • 4 to 7 show data of CHP-CAB (control group), ErbB-2 protein only (control group), CAB only (control group), and non-immune (naive) mice, respectively.
  • Fig. 3 shows splenocytes obtained from mice immunized under the same conditions as in Fig. 1, and stimulated with CMS 17 HE cells derived from human ErbB-2 expressing BalbZc mouse in test tube ⁇ .
  • the figure shows the results of measuring the cytotoxic activity of each target cell labeled with 51 Cr after culturing.
  • the abbreviations 1 to 7 in Fig. 2 indicate the immunization treatments described in Fig. 1 or Fig. 2. Synonymous with group abbreviation).
  • the vertical axis represents cytotoxic activity calculated by subtracting nonspecific leakage of 51 Cr from labeled cells
  • the horizontal axis represents the ratio of spleen cells to target cells.
  • FIG. 4 shows the results obtained by adding monoclonal antibodies against various mouse immune cell surface markers at a 1: 2 dilution at the same conditions as in the CHM-erb B2 immunized group shown in FIG. This shows changes in CTL activity specific to ErbB-2.
  • 1 indicates data without addition of antibody
  • 2 indicates anti-CD3, 3 indicates anti-CD4, 4 indicates anti-CD 8
  • 5 indicates anti-Kd
  • 6 indicates anti-D d
  • 7 indicates anti-Ld
  • 8 indicates the addition of anti-MHC class II antibody.
  • adjuvant refers to a substance used with an antigen to modify the immune response to the antigen, and although usually used to enhance antibody production or enhance cellular immunity, It also includes those that are optionally used for qualitative changes in the immune response.
  • the antigen used in the present invention is not particularly limited as long as it is a substance that elicits immunity.
  • polypeptides, polypeptide complexes, glycoproteins, nucleic acids and the like can be used.
  • the antigen may be the pathological target itself, such as a virus or cancer cell, or a part thereof.
  • the antigen may be expressed by a neoplastic tissue or a diseased tissue such as a virus-infected cell.
  • an antigen protein in particular, a protein which is presented as an oligopeptide to MHC class I antigen and induces CTL is preferably used.
  • the antigenic protein only needs to contain an antigenic determinant, and its origin and purity are not particularly limited.
  • the molecular weight of the antigen protein is generally about 500 to 100,000, preferably about 2,000 to 100,000.
  • oncogene product, ErbB-2 protein, rasp21 protein, tumor suppressor gene product P53 protein, virus-derived protein, or T cell receptor such as autoantigen reactivity (autologous Immune disease induction)
  • the whole includes T cell receptors and the like, and proteins containing partial sequences thereof.
  • Hydrophobized polysaccharides or hydrophobized polysaccharide aggregate microparticles are described, for example, in Akiyoshi et al., Macromolecules, 6, pp. 3062-3068, 1993; Akiyoshi et al., J. Proc. Japan. Acad., 71, 71B. , p.15, 1995; known per se described in JP-A-61-69801, JP-A-3-292301, JP-A-7-97333, etc. The method can be used.
  • the polysaccharide in the hydrophobized polysaccharide is not particularly limited as long as the saccharide residue is a polymer having a glycosidic bond.
  • the sugar residue constituting the polysaccharide for example, a residue derived from a monosaccharide such as darcose, mannose, galactose and fucose, or a sugar derived from a disaccharide or an oligosaccharide such as oligosaccharide can be used.
  • the sugar residue may have a 1,2-, 1,3-, 1,4- or 1,6-glycosidic bond, and the bond may be a tri- or tri-type bond.
  • the polysaccharide may be either linear or branched.
  • a sugar residue a glucose residue is preferable, and as a polysaccharide, natural or synthetic pullulan, dextran, amylose, amylopectin, or mannan, preferably mannan or pullulan is used.
  • hydrophobic group for example, those in which 1 to 5 single-chain or double-chain alkyl groups or sterol residues are introduced per 100 monosaccharides (5% or less by weight) are desirable.
  • the hydrophobic group is not limited to the above groups, and a group having a good encapsulation rate can be appropriately selected according to the molecular weight of the encapsulated antigen ⁇ the isoelectric point.
  • the sterol residue includes, for example, cholesterol, stigmasterol, 5-sitosterol, lanosterol, ergosterol residue and the like, and preferably, cholesterol residue can be used.
  • alkyl group an alkyl group having preferably 20 or less carbon atoms, more preferably 10 to 18 carbon atoms can be used, and these may be any of a straight chain or a branched chain.
  • hydrophobized polysaccharide for example, the primary hydroxyl group of 1 to 5 saccharide units per 100 saccharide units constituting the polysaccharide is represented by the following formula (I):
  • R represents an alkyl group or a sterol residue
  • m represents 0 or 1
  • n represents an arbitrary positive integer
  • alkyl group or sterol residue those described above can be preferably used, and n is preferably 1 to 8.
  • the hydrophobized polysaccharides may be those bonded via a linker as described in JP-A-7-97333.
  • the complex of the hydrophobized polysaccharide and the antigen thus obtained can be used as it is as the vaccine preparation of the present invention, but if necessary, it can be subjected to an operation such as sterilization according to a conventional method. is there.
  • the vaccine preparation of the present invention can immunize an animal by administering a predetermined amount thereof to the animal, similarly to other known vaccine preparations and the like. Can be evaluated.
  • the administration route of the pectin preparation of the present invention is generally subcutaneous injection, it is not limited to this administration route, and for example, parenteral administration such as intravenous or intramuscular administration or oral administration can be adopted.
  • the dose of the vaccine preparation of the present invention required for immunization can be determined as appropriate.For example, the usual dose is about 50 to 150 g / time as an antigen, and the dose is 1 to 4 It is appropriate to do it twice.
  • Example 1 Preparation of a complex of cholesterolated mannan or pullulan with the oncogene product ErbB-2 protein
  • the hydrophobized polysaccharide was synthesized by the method of Akiyoshi et al. (Akiyoshi et al., Macromolecules, 26, 3062-3068 (1993)).
  • CHM-55-2.3 cholesterolated mannan
  • Nan manufactured by Sigma
  • CHP_108-0.9 cholesterolized pullulan
  • pullulan with a molecular weight of about 108,000 manufactured by Hayashibara Biochemical Laboratory
  • contains about 0.9 Cholesterol residues have been introduced.
  • each aggregate contained about 7 hydrophobic domains formed by the association of an average of 7 molecules of cholesterol residues.
  • a histidine-hexamer is added to the ⁇ -terminal of the polypeptide corresponding to amino acids 1 to 147 of the cancer gene product ErbB-2 protein (Coussens et al., Science, 230, 1132, 1985).
  • the fused recombinant protein was expressed using Escherichia coli and used as an antigen protein. That is, using two oligonucleotide 'primers shown below, cDNA containing a portion encoding a polypeptide corresponding to amino acids 1 to 147 of amino acid of human ErbB-2 protein is used.
  • HN40 5 'AGCTGCAGTGATCACCATGGAGCT-3' (SEQ ID NO: 1 in Sequence Listing)
  • HN51 5'-TGAATTCTATGTGAGACTTCGAAGCTGCA 1 3 '(SEQ ID NO: 2 in Sequence Listing)
  • the resulting 463 bp DNA fragment was treated with T4 DNA polymerase to smooth the ends, and then cut with the restriction enzyme Bc1I. Furthermore, the expression plasmid vector, pQE11 (Qiagen) was digested with the restriction enzyme HindIII, the ends were blunted with T4 polymerase, and further digested with the restriction enzyme ⁇ JHHI. Approximately 3.3 kb derived from the pQE11 vector thus prepared. No B amH I -AH ind III The fragment was ligated to the above PCR fragment of the human ErbB-2c DNA using a ligation kit (Takara Shuzo) to transform Escherichia coli JMl09.
  • the recombinant protein was purified according to the attached Qiagen manual. Approximately 20 mg of recombinant protein was obtained from the recombinant cultured in 1 liter of medium.
  • a complex of the hydrophobized polysaccharide and the antigen is added to the aqueous solution of the hydrophobized polysaccharide and mixed with a recombinant protein solution of ErbB-2 (containing 2.0 mg / ml of protein in 6 S urea of PBS SZ).
  • a clear and colorless aqueous solution (CHM or CHP 5 mg / ml, human ErbB-2 recombinant protein 0.25 mg / ml) was obtained.
  • CHM or CHP 5 mg / ml, human ErbB-2 recombinant protein 0.25 mg / ml was obtained.
  • DLS Micro Light Scattering
  • CHM-erbB2 the complex of cholesterolated mannan and ErbB-2 protein obtained in this manner
  • CHM-erbB2 the complex of cholesterolized pullulan and ErbB-12 protein
  • CHP—erb B 2 the complex of cholesterolized pullulan and ErbB-12 protein
  • CAB hydrophobized polysaccharide
  • CHM—CABJ complex of cholesterolated mannan and CAB
  • CHP—CABJ complex of cholesterolized pullulan and CAB
  • Example 2 CHM-erbB2 and CHP— Vaccine action of erb B2 (CTL induction effect and anticancer effect)
  • mice To a group of 3 female B a1 b / c mice, 25 g / mouse of the suspension of CHM-erb B2 or CHP-erbB2 prepared in It was subcutaneously administered. Then, a mouse fibroblast sarcoma cell line (see DeLeo et al., J. Exp. Med., 146, 720, 1977), which is syngeneic to the Ba1 bZc mouse, was obtained by a conventional method.
  • spleen cells were collected from mice immunized in the same manner as in the above experiments, and stimulated with human ErbB-2 expressing CMS 17 HE cells syngeneic to Ba1b / c mice irradiated in vitro. Thereafter, cytotoxic activity against CMS 7 HE cells, CMS 17 HE cells, CMS 7 neo cells, CMS 17 neo cells, and CMS 7 cells labeled with 51 Cr was measured by an ordinary method. As a result, as shown in Fig.
  • the vaccine preparation of the present invention has an excellent effect of modifying an immune response to an antigen, in particular, an effect of activating and inducing cytotoxic ⁇ cells, and is useful for preventing and treating cancer, viral diseases, and autoimmune diseases. Can be used as a vaccine.
  • Sequence type nucleic acid
  • Sequence type nucleic acid

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Description

明 細 書 ワクチン製剤 技術分野
本発明は、 抗原と疎水化多糖類とを含むワクチン製剤に関する。 さらに詳しく 言うと、 抗原、 例えば癌細胞抗原またはウイルス抗原等とァジュバン トとして作 用する疎水化多糖類とを含み、 該抗原及び該疎水化多糖類が複合体を形成したヮ クチン製剤に関する。 本発明のワクチン製剤は、 特に、 抗原に対して特異的な細 胞障害性 T細胞 （以下、 本明細書において 「C T L」 と略称することがある） を 活性化及び誘導する作用を有しており、 癌、 ウィルス性疾患、 又は自己免疫疾患 の予防及び/又は治療のためのワクチンとして極めて有用である。 背景技術
C T Lは、 その T細胞レセプターなどを介して癌細胞やウィルス感染細胞を特 異的に認識して破壊 ·傷害する作用を有しており、 生体内での癌もしくはウィル スに対する生体防御機構として重要である。 C T Lの T細胞レセプターは、 癌細 胞ゃウィルス感染細胞の表面に発現されている特異抗原を直接認識するのではな く、 マクロファージ、 樹状細胞といった抗原提示細胞や癌細胞もしくはウィルス 感染細胞それ自身の表面に発現されている M H Cクラス I抗原及びそれに結合し た特異抗原由来のオリゴペプチド （その特異抗原の 「C T Lェピトープ」 ） の複 合体を認識することが近年明らかになつた。
M H Cクラス I抗原ノ特異抗原由来のオリゴぺプチド複合体は、 以下のような プロセシング経路を経て生成すると考えられている。 すなわち、 抗原蛋白質が紬 胞質内で合成された後、 その一部は細胞内のプロテアーゼ複合体 （ 「プロテアゾ— ム」 ） によりオリゴぺプチドに分解される。 その後、 さらにその一部 （9〜 1 0 アミノ酸残基） が、 小胞体膜に存在する輸送タンパク質 （TAP: transporter in antigen processing) によって細胞質から小胞体膜内に輸送され、 その中で M H C クラス I抗原との親和性の高いものが優先的に MHCクラス I抗原と結合して細 胞表面に現われる。
癌細胞、 ウィルス感染細胞、 又は自己抗原反応性リンパ球を排除することによ つて癌、 ウィルス性疾患、 又は自己免疫疾患を予防及び/又は治療する目的で、 人為的に CTLを活性化するワクチン （CTL活性化ワクチン） の開発が試みら れている。 この目的を達成するためには、 特異抗原を発現する癌細胞又はウィル ス感染細胞それ自身で生体を免疫するか、 あるいは特異抗原またはそれ由来のォ リゴぺプチドを抗原提示細胞の上記のプロセシング経路に導入して MHCクラス I抗原との複合体として発現させることが必要である。
「CTL活性化ワクチン」 を開発するために、 実際には、 1) 特異抗原タンパ ク質をコードする遺伝子をウィルスベクターなどを用いて導入する方法、 2) い くつかの CTLェピトープを含むある程度の大きさの特異抗原タンパク質を何ら かの方法で細胞質内に導入する方法、 又は 3) C TLェピトープとなりうる特異 抗原由来 9~1 0アミノ酸のオリゴぺプチドを直接抗原提示細胞の MHCクラス I抗原に結合させる方法などが試みられている。
これらのうち、 1) の方法はいわゆる遺伝子治療に相当するものであり、 一般 的に、 その効果及び安全性について未だ評価が定まっていないという問題がある。 また、 3) の方法は、 実験動物においては効果が確認されているものの、 ヒ 卜に 応用する場合には実際的な問題が生じると考えられる。 すなわち、 患者一人一人 の持つ MHCクラス I抗原には様々な種類の抗原が存在しており、 そのような多 様性に対応して生じる C TLェピトープの多様性をカバーする必要がある。 つま り、 各々の MHCクラス I抗原に対する高親和性オリゴぺプチドのァミノ酸配列 モチーフを明らかにし、 さらに各々の MHCクラス I抗原に対応するカスタム化 を医薬品として実現せねばならず、 現実にはこのタイプのワクチンの開発は極め て困難である。
一方、 2) のアプローチについてはいくつかの具体的な成功例が知られており、 効果及び安全性の面で満足できることから、 様々な患者に対して適用可能な C T L 活性化ワクチンの開発を可能にする方法としてもっとも期待されている。 もっと も、 特異抗原タンパク質をポリぺプチドのまま生体に投与して特異的 C T Lを活 性化する場合には、 何らかのアジュバントとの混合物として投与することが多い。 このようなアジュバン トとして、 例えば、 イスコム （ I S C 0 M) (Takahashi et al. , Nature, 344, 873-875, 1990) 、 Q S - 2 1 (Newman et al. , J. Immunol. , 148, 2357-2362, 1992) 、 マンナン被覆リボソーム （W0 9 2 Z 4 8 8 7 号公報） 、 A F ( aychaudhuri et al.， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 8308
-8312, 1992) などが知られている。
多糖類一コレステロール誘導体がリボソームの多糖被覆剤 （特開昭 6 1 一 6 9 8 0 1号公報） 、 又は脂肪乳剤被覆剤 （特開昭 6 3 - 3 1 9 0 4 6号公報） として使用できることが知られている。 また、 前述のようにマンノースを含む多 糖類で被覆された癌細胞抗原またはウィルス抗原一リボソーム複合体が C T L誘 導活性を有することも知られている （WO 9 2 / 4 8 8 7号公報参照） 。
しかしながら、 これらはいずれも （抗原） タンパク質をリボソーム化または脂 肪乳剤化したのち、 多糖類一コレステロール誘導体で被覆するものであり、 多糖 類一コレステロール誘導体と （抗原） タンパク質のみからなる複合体に関しては、 その複合体が具体的にどのような効果を生み出すのかについては全く報告されて いない。
上述したように、 特異抗原タンパク質をポリぺプチドのまま人体に投与して特 異的 C T Lを活性化しょうとする場合には、 何らかのアジュバントとを用いるこ とが必要であるが、 現在のところ、 免疫効率がよく、 安全で調製の容易なアジュ バントは見いだされていない。 発明の開示
そこで、 本発明者らは、 より簡便で効果の高いアジュバン卜となりうる物質を 見出すべく鋭意検討した。 その結果、 本発明者らは、 天然多糖にアルキル基また はコレステロール基を導入した疎水化多糖類が、 リン脂質を必要とせずに、 極め て容易かつ効率的に癌細胞抗原タンパク質またはウィルス抗原タンパク質を内包 化して複合体を形成することを見出した。 また、 これらの複合体を動物に投与す ると特異的 CTLが活性化され、 生体防御反応をもたらすことを見出した。 本発 明はこれらの知見を基にして完成されたものである。
すなわち本発明は、 疎水化多糖類と抗原とを含むワクチン製剤、 及び疎水化多 糖類と抗原との複合体を含むワクチン製剤を提供するものである。 この発明の好 ましい態様によれば、 疎水化多糖類の集合体微粒子内に封入された抗原を含む上 記ワクチン製剤；及びアジュバントである疎水化多糖類を含む上記ワクチン製剤 が提供される。 該ワクチン製剤は、 例えば、 抗癌用、 抗ウィルス用、 又は自己免 疫疾患治療用として用いることができる。
これらの発明の好ましい態様により、 疎水化多糖類がアルキル基またはステロー ル残基が導入された多糖類である上記ワクチン製剤；疎水化多糖類が、 多糖類を 構成する糖単位 100個あたり 1〜5個の糖単位の 1級水酸基が下記式 （ I ) : -0- (CH2 ) ffl CONH (CH9 ) n NH-CO-O-R ( I )
(式中、 Rはアルキル基またはステロール残基を示し ； mは 0または 1を示し ； nは任意の正の整数を示す） で表される基を有する多糖類である上記ワクチン製 剤；多糖類がプルラン又はマンナンである上記ワクチン製剤； ステロール残基が コレステロール残基である上記ワクチン製剤が提供される。
本発明のさらに好ましい態様により、 抗原が MHCクラス I抗原にオリゴぺプ チドとして提示され細胞障害性 T細胞を惹起するタンパク質である上記ワクチン 製剤；抗原が E r b B— 2タンパク質である上記ワクチン製剤；抗原が癌細胞抗 原、 ウィルス抗原、 又は自己抗原反応性 T細胞レセプターである上記ワクチン製 剤が提供される。
本発明の別の観点からは、 上記ワクチン製剤を哺乳類動物に投与する工程を含 む免疫感作方法、 及び抗原に特異的な細胞障害性 T細胞を誘導するための上記方 法が提供される。 さらに別の観点からは、 疎水化多糖類を含むアジュバン トが提 供され、 その好ましい態様によれば、 抗原とともにワクチン製剤に配合するため の上記アジュバントが提供される。 さらに、 上記ワクチン製剤を製造するための 疎水化多糖類の使用も提供される。 図面の簡単な説明
第 1図は、 コレステロール化マンナンまたはコレステロ一ル化プルランと癌遣 伝子産物ヒ ト E r b B— 2タンパク質との複合体などによって免疫されたマウス に対してヒ ト E r bB— 2発現 （CMS 7HE) または非発現 （CMS 7 n e o) マゥス癌細胞を接種した後の、 各個体の腫瘍細胞の増殖曲線を示したものである。 縦軸は、 腫瘍の長径及び短径を測定して近似計算によって算出した腫瘍体積 (mm3), 横軸は腫瘍接種後の日数を表す。 図中、 1から 3は、 それぞれ CHM— e r b B 2、 CHM- CAB (対照群） 、 及び C HP— e r b B 2マウスのデ— タを示す。
第 2図は、 コレステロール化マンナンまたはコレステロール化プルランと癌遺 伝子産物ヒ ト E r b B— 2夕ンパク質との複合体などによって免疫されたマウス に対してヒ ト E r bB— 2発現 （CMS 7HE) または非発現 （CMS 7 n e o) マウス癌細胞を接種した後の、 各個体の腫瘍細胞の増殖曲線を示したものである。 縦軸は、 腫瘍の長径及び短径を測定して近似計算によって算出した腫瘍体積 (mm3). 横軸は腫瘍接種後の日数を表す。 図中、 4から 7は、 それぞれ CHP— CAB (対照群） 、 E r b B— 2タンパク質のみ （対照群） 、 CABのみ （対照 群） 、 及び非免疫 （n a i v e) マウスのデータを示す。
第 3図は、 第 1図と同じ条件で免疫されたマウスから得られた脾細胞を採取し、 試験管內でヒ ト E r b B - 2発現 B a l bZcマウス由来 CMS 1 7 HE細胞で 刺激培養した後、 51C rで標識された各標的細胞に対するその細胞障害活性を測定 した結果を表す （図 2の 1から 7までの略号は、 第 1図または第 2図に記載され た免疫処理群の略号と同義である） 。 図中、 縦軸は、 標識された細胞からの非特 異的な51 C rの漏出分を差し引いて計算した細胞障害活性を表し、 横軸は標的細胞 に対する脾細胞の割合を表す。
第 4図は、 第 3図の CHM— e r b B 2免疫群と同様な条件下において、 さら に様々なマウス免疫細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体を 1 ： 2倍希 釈の濃度で加えたときのヒ ト E r bB— 2特異的な CTL活性の変化を表したも のである。 図中、 1は抗体無添加のデータを示し、 2は抗 CD3、 3は抗 CD4、 4は抗 CD 8、 5は抗 Kd、 6は抗 D d、 7は抗 L d、 8は抗 MHCクラス I I 抗体添加のデータをそれぞれ示す。 発明を実施するための最良の形態
本明細書において用いられる 「アジュバンド」 という用語は、 抗原に対する免 疫応答を修飾する目的で抗原とともに用いられる物質を意味しており、 通常は抗 体産生や細胞性免疫の強化に用いられるもののほか、 場合により免疫応答の質的 変化のために用いられるものも包含する。
< 1 >抗原
本発明において用いられる抗原としては、 免疫を惹起する物質であれば特に限 定されないが、 例えば、 ポリペプチド、 ポリペプチド複合体、 グリコプロテイン、 核酸等を用いることができる。 該抗原はウィルスや癌細胞などの病理学的標的そ のもの、 またはその一部であってもよい。 あるいは、 新生物組織またはウィルス 感染細胞等の病的組織が発現する抗原であってもよい。 本発明においては、 抗原 タンパク質、 なかでも MHCクラス I抗原にオリゴぺプチドとして提示され CTL を惹起するタンパク質が好適に用いられる。 抗原タンパク質は抗原決定基を含ん でいればよく、 その起源や純度は特に限定されないが、 例えば遺伝子組み換え法 により作製したものが好適である。 抗原タンパク質の分子量は、 一般的には 500 〜1 00, 000程度、 好ましくは 2, 000〜 100, 000程度である。 具 体的には、 癌遗伝子産物、 E r bB— 2タンパク質、 r a s p 21タンパク質、 癌抑制遣伝子産物 P 53タンパク質、 ウィルス由来タンパク質、 または T細胞レ セプター、 例えば自己抗原反応性 （自己免疫疾患惹起） T細胞レセプター等の全 体ならびにそれらの部分配列を含むタンパク質などが挙げられる。
< 2 >疎水化多糖類
疎水化多糖類または疎水化多糖類集合体微粒子は、 例えば、 Akiyoshi et al. , Macromolecules, 6, pp.3062-3068, 1993; Akiyoshi et al. , J. Proc. Japan. Acad. , 71, 71B, p.15, 1995; 特開昭 6 1 - 6980 1号公報、 特開平 3— 29230 1号公報、 特開平 7— 97333号公報等に記載されたそれ自体既知 の方法で製造することができる。
疎水化多糖類における多糖類は、 糖残基がグリコシド結合した高分子であれば 特に限定されることはない。 多糖類を構成する糖残基としては、 例えば、 ダルコ一 ス、 マンノース、 ガラク トース、 フコース等の単糖類、 または二糖類またはオリ ゴ糖類などの糖類に由来する残基を用いることができる。 糖残基は 1， 2—、 1, 3—、 1, 4一または 1, 6—グリコシド結合していてもよく、 その結合はひ— または 3—型結合のいずれであってもよい。 また、 多糖類は直鎖状でも分枝鎖状 のいずれでもよい。 糖残基としてはグルコース残基が好ましく、 多糖類としては、 天然または合成由来のプルラン、 デキス トラン、 アミロース、 アミロぺクチン、 又はマンナン、 好ましくはマンナンまたはプルランなどが用いられる。
疎水基としては、 例えば、 1本鎖及び 2本鎖のアルキル基またはステロール残 基を 1 00単糖あたり 1〜5個 （重量比で 5%以下） 導入したものが望ましい。 もっとも、 疎水基は上記の基に限定されるわけではなく、 封入される抗原の分子 量ゃ等電点に応じて封入率のよいものを適宜選択することができる。 ステロール 残基としては、 例えば、 コレステロール、 スチグマステロール、 5—シトステロ一 ル、 ラノステロール、 エルゴステロール残基などが挙げられるが、 好ましくは、 コレステロール残基を用いることができる。 また、 アルキル基としては、 好まし くは炭素数 20以下、 さらに好ましくは炭素数 1 0〜18のアルキル基を用いる ことができ、 これらは直鎖又は分岐鎖のいずれであってもよい。
疎水化多糖類としては、 例えば、 多糖類を構成する糖単位 1 00個あたり 1〜 5個の糖単位の 1級水酸基が下記式 （ I) ：
一 0 - (CH2 ) CONH (CH2 ) n NH-CO-O-R ( I)
(式中、 Rはアルキル基またはステロール残基を示し ； mは 0または 1を示し ； nは任意の正の整数を示す） で表されるものが好ましい。 ここで、 アルキル基又 はステロール残基としては好ましくは上記のものを用いることができ、 nは好ま しくは 1〜8である。 なお、 疎水化多糖類としては、 特開平 7— 97333号公 報に記載されたようなリンカーを介して結合したものであってもよい。
< 3 >疎水化多糖類による抗原の封入方法 疎水化多糖類と抗原との複合体は、 疎水化多糖類の集合体微粒子と抗原とを室 温で混合した後に、 ゲルクロマトグラフ法で処理することにより単離 · 精製できる
(Nishika a, Macromolecules, 27, pp. 7654-7659, 1994)。 このようにして得られ た疎水化多糖類と抗原との複合体は、 そのまま本発明のワクチン製剤として用い ることができるが、 必要に応じて常法に従って滅菌等の操作を施すことも可能で ある。
< 4〉疎水化多糖類と抗原との複合体による免疫
本発明のワクチン製剤は、 他の既知のワクチン製剤等と同様に、 その所定量を 動物に投与することによつて該動物を免疫化することができ、 同様にしてヮクチ ン製剤の力価を評価することができる。 本発明のヮクチン製剤の投与経路は皮下 注射が一般的であるが、 この投与経路に限定されることはなく、 例えば、 静脈内 または筋肉内のような非経口投与や経口投与も採用し得る。 免疫感作に必要な本 発明のワクチン製剤の投与量は適宜決定できるが、 例えば、 通常投与量としては 抗原として 5 0〜 1 5 0 g /回程度の量を目安とし、 投与は 1〜4回行うのが 適当である。
なお、 本発明のワクチン製剤の製剤化の際には、 それ自体既知の通常使用され 得る製剤、 担体及び希釈剤を、 採用される投与経路にしたがって適宜使用するこ とができる。 実施例
以下に実施例をあげて本発明をより具体的に説明するが、 本発明の範囲は以下 の実施例に限定されるものではない。 実施例 1 ： コレステロール化マンナンまたはプルランと癌遺伝子産物 E r b B - 2タンパク質との複合体の調製
疎水化多糖は秋吉らの方法 （Akiyoshi et al. , Macromolecules, 26, 3062 - 3068(1993)) によって合成した。 その結果、 コレステロール化マンナン （以下、 「C H M— 5 5— 2 . 3」 と略記する） としては、 分子量約 5 5 , 0 0 0のマン ナン （シグマ社製） に 1 00単糖当たり約 2. 3個のコレステロール残基が導入 された。 また、 コレステロール化プルラン （以下、 「CHP_ 108— 0. 9」 と略記する） としては、 分子量約 1 08, 000のプルラン （林原生物化学研究 所製） に 100単糖当たり約 0. 9個のコレステロール残基が導入された。 水溶 液中では、 1つの集合体当たり平均 7分子のコレステロール残基が会合して形成 された疎水性ドメインが約 7個含まれるものとなった。
上記疎水化多糖を DM SOに溶解した後、 PB S (pH7. 9) に透析し、 さ らにプローブ型のソニケ一ター （トミ一精ェ製 URP) を用いて 40Wで 1 0分 間超音波処理した。 この溶液を 1. 2 ; πι、 0. 45 ^ m、 0. 2〃mの順でフ ィルター濾過して疎水化多糖の集合体微粒子水溶液を得た。 各溶液の疎水化多糖 濃度をフヱノール硫酸法で定量した結果、 CHP— 108— 0. 9は 9. 62mg m 1、 CHM— 55— 2. 3は 6. 97mg/m lであった。
一方、 癌遣伝子産物ヒ E r bB— 2タンパク質のアミノ酸の 1番目から 147 番目に相当するポリペプチド (Coussens et al. , Science, 230, 1132, 1985)の Ν 末端にヒスチジン ·へキサマーを融合させた組み換えタンパク質を大腸菌を用い て発現させ、 抗原タンパク質として用いた。 すなわち、 下記に示すオリゴヌクレ ォチド ' プライマ一 2本を用いて、 ヒ ト E r b B- 2夕ンパク質のァミノ酸の 1 番目から 147番目に相当するポリベプチドをコ一ドする部分を含む c DN Aを P C R法にて増幅した。
HN 40 ： 5' 一 AGCTGCAGTGATCACCATGGAGCT - 3' (配 列表の配列番号 1 )
HN 51 ： 5' -TGAATTCTATGTGAGACTTCGAAGCTGCA 一 3' (配列表の配列番号 2)
得られた 463 b pの DNA断片を T 4 DNAポリメラーゼ処理して末端を平 滑化した後、 制限酵素 B c 1 Iで切断した。 さらに、 発現プラスミ ドベクター、 pQE 11 (Qiagen社） を制限酵素 H i n d I I Iで切断し、 末端を T 4ポリメラー ゼで平滑化した後、 さらに制限酵素 ^JHH Iで切断した。 このようにして作製 された pQE 1 1ベクタ一由来の約 3, 3 k b。の B amH I -AH i n d I I I 断片に、 上記ヒ ト E r b B— 2 c D N Aの P C R増幅 D N A断片をライゲ一ショ ン .キッ ト （宝酒造製） を用いて連結し、 大腸菌 J Ml 09を形質転換した。 ァ ンピシリ ン耐性のクローンについて制限酵素地図を作製して目的のクローンを選 別した後、 添付された Qiagen社のマニュアルにしたがって、 組み換えタンパク質を 精製した。 1 リ ッ トルの培地で培養した組み換え体から、 およそ 20 mgの組み 換えタンパク質を得た。
前記疎水化多糖水溶液にヒ E r bB— 2組み換えタンパク質溶液 （PB SZ 6 M尿素中にタンパク質 2. Omg/m lを含む） を加えて混合することにより、 疎水化多糖と抗原との複合体を含有する無色透明の水溶液 （C HMまたは CHP 5mg/m l、 ヒ ト E r b B— 2組み換えタンパク質 0. 25mg/m l ) を得た。 この溶液について DLS (Mnamic Light Scattering) 測定を行った結果、 粒径約 250 nm、 k 2/ k l 2= 0. 156の複合体微粒子を得たと考えられた
(以下、 このようにして得られたコレステロール化マンナンと E r b B— 2タン パク質との複合体を 「CHM— e r b B 2」 、 コレステロール化プルランと E r b B 一 2タンパク質との複合体を 「CHP— e r b B 2」 と略記する） 。
一方、 疎水化多糖が存在しない同一緩衝液を用いた条件では、 ヒ 卜 E r bB— 2組み換えタンパク質は全て不溶化し、 沈澱として析出した。
免疫実験の陰性対照としては、 Carbonic Anhydrase 11 (シグマ社製、 以下
「CAB」 と略記する） を用いて疎水化多糖とタンパク質との複合体を作製した
(以下、 コレステロール化マンナンと CABとの複合体を 「CHM— CABJ、 コレステロール化プルランと CABとの複合体を 「CHP— CABJ と略記する） 。 実施例 2 ： CHM- e r bB 2及び C HP— e r b B 2のワクチン作用 （CTL 誘導効果及び制癌効果）
1群 3匹の雌 B a 1 b/cマウスに、 実施例 1で調製した CHM— e r b B 2 または CHP— e r bB 2の懸濁液をタンパク質として一匹あたり 25 gを 1 週間間隔で 2回皮下投与した。 その後、 B a 1 bZcマウスと同系のマウス線維 芽肉腫細胞株 (DeLeo et al. , J. Exp. Med., 146, 720, 1977参照） に常法により 選択マーカ一の n e o遺伝子とヒ ト E r b B— 2を発現させた組み換え細胞 CMS 7 HE, または陰性対照として同様にしてマウス線維芽肉腫細胞株に n e o 遺伝子のみを発現させた組み換え細胞 CMS 7 n e oを皮下に接種した。
接種した腫瘍の大きさを経時的に計測したところ、 第 1図に見られるように、 CHM- e r bB 2または CHP— e r b B 2で免疫されたマウスでは 3匹中 3 匹ともヒ ト E r bB— 2を発現する腫瘍の増殖抑制及び完全退縮が観察された （第 1図の 1及び 3の左欄） 。 一方、 CHM— e r bB 2または CHP— e r b B 2 で免疫された場合でも、 接種された腫瘍がヒ ト E r b B— 2を発現していない場 合には腫瘍の増殖抑制効果は観察されず （第 1図の 1及び 3の右欄） 、 この免疫 操作の抗原特異性が示唆された。 組み換えヒ ト E r b B— 2のみ （第 2図の 5) や、 関連のない CABで免疫した場合にも （第 1図の 2、 第 2図の 4および 6) 、 腫瘍の増殖抑制効果はほとんど観察されなかった。
また、 上記実験と同様の方法で免疫されたマウスから脾細胞を採取し、 i n v i t r oで放射線処理した B a 1 b/cマウスと同系のヒ 卜 E r b B— 2発現 CMS 17 HE細胞によって刺激した後、 51C rにて標識された CMS 7 HE細胞、 CMS 17 HE細胞、 CMS 7 n e o細胞、 CMS 17 n e o細胞、 及び CMS 7 細胞に対する細胞障害活性を常法にて測定した。 その結果、 第 3図に示すように、 CHM- e r bB 2または CHP— e r b B 2で免疫されたマウスから得られた 脾細胞を用いた場合にのみ、 標的細胞数：脾細胞数の割合に依存してヒ ト E r bB 一 2発現細胞 （CMS 7 HE ； CMS 17 H Eは刺激に用いた細胞なので陽性対 照に相当する） が、 非発現細胞 （CMS 7 n e o、 CMS 17 n e o及び CMS 7) に比べて強く殺傷された （第 3図の 1及び 3) 。
上記のうち、 CHM— e r b B 2免疫マウスから得られた脾細胞のヒ 卜 E r b B 一 2特異的 C T L活性を測定する際に、 様々なマウス免疫細胞表面マ一力—に対 するモノ クローナル抗体を 1 ： 2倍希釈の濃度で加えると、 CD 3、 CD 8、 マ ウス MHCクラス I分子のうち K dに対する抗体のみがヒ 卜 E r b B— 2特異的 CTL活性を抑制した （第 4図） 。 抗 CD4、 抗 Dd、 抗 L dまたは抗マウス MH C クラス I I分子抗体にはそのような活性は認められなかった。 このことから、 観 察されたヒ ト E r b B— 2特異的 CTL活性は、 MHCクラス I拘束性の C D 8 陽性 Tリンパ球によるものであることが示唆された。 産業上の利用可能性
本発明のワクチン製剤は、 抗原に対する免疫応答の優れた修飾作用、 特に細胞 障害性 Τ細胞の活性化及び誘導作用を有しており、 癌、 ウィルス疾患、 自己免疫 疾患の予防及びノ又は治療用のワクチンとして用いることができる。
配列表 配列番号： 1
配列の長さ ： 2 4
配列の型：核酸
トポロジー ：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成 D N A
配列
AGCTGCAGTG ATCACCATGG AGCT 24 配列番号： 2
配列の長さ ： 2 9
配列の型：核酸
トポロジー ：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成 D N A
配列
TGAATTCTAT GTGAGACTTC GAAGCTGCA 29

Claims

請 求 の 範 囲
1. 疎水化多糖類と抗原とを含むワクチン製剤。
2. 疎水化多糖類と抗原との複合体を含むワクチン製剤。
3. 疎水化多糖類の集合体微粒子内に封入された抗原を含む請求の範囲第 2項に 記載のワクチン製剤。
4. アジュバントである疎水化多糖類を含む請求の範囲第 1項ないし第 3項のい ずれか 1項に記載のヮクチン製剤。
5. 癌、 ウィルス疾患、 又は自己免疫疾患の予防及び Z又は治療に用いる請求の 範囲第 1項ないし第 4項のいずれか 1項に記載のヮクチン製剤。
6. 疎水化多糖類がアルキル基またはステロール残基が導入された多糖類である 請求の範囲第 1項ないし第 5項のいずれか 1項に記載のヮクチン製剤。
7. 疎水化多糖類が、 多糖類を構成する糖単位 100個あたり 1〜5個の糖単位 の 1級水酸基が下記式 （ I ) ：
-0- (CH ) ffl CONH (CH2 ) n NH-CO-O-R ( I )
(式中、 Rはアルキル基またはステロール残基を示し ； mは 0または 1を示し； nは任意の正の整数を示す） で表される基を有することを特徴とする多糖類であ る請求の範囲第 6項に記載のヮクチン製剤。
8. 多糖類がプルランまたはマンナンである請求の範囲第 1項ないし第 7項のい ずれか 1項に記載のヮクチン製剤。
9. ステロール残基がコレステロール残基である請求の範囲第 6項又は第 7項に 記載のワクチン製剤。
10. 抗原が、 MHCクラス I抗原にオリゴペプチドとして提示され細胞障害性 T細胞を惹起するタンパク質である請求の範囲第 1項ないし第 9項のいずれか 1 項に記載のワクチン製剤。
1 1. 抗原が E r bB— 2タンパク質である請求の範囲第 1項ないし第 9項のい ずれか 1項に記載のヮクチン製剤。
1 2. 抗原が癌細胞抗原、 ウィルス抗原、 又は自己抗原反応性 T細胞レセプター である請求の範囲第 1項ないし第 9項のいずれか 1項に記載のヮクチン製剤。
1 3. 細胞障害性 T細胞を活性化する請求の範囲第 1項ないし第 1 2項のいずれ か 1項に記載のワクチン製剤。
1 . 請求の範囲第 1項ないし第 1 2項のいずれか 1項に記載のワクチン製剤を 哺乳類動物に投与する工程を含む免疫感作方法。
1 5. 抗原に特異的な細胞障害性 T細胞を誘導するための請求の範囲第 14項に 記載の方法。
16. 疎水化多糖類を含むアジュバン ト。
17. 抗原とともにワクチン製剤に配合するための請求の範囲第 1 6項に記載の アジュバン ト。
18. 請求の範囲第 1項ないし第 1 3項のいずれか 1項に記載のワクチン製剤を 製造するための疎水化多糖類の使用。
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Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000020563A1 (fr) * 1998-10-02 2000-04-13 Mitsubishi Chemical Corporation Procede d'induction d'une immunite cellulaire et cellules possedant cette immunite
EP1113023A1 (en) * 1999-03-31 2001-07-04 Nof Corporation Method of forming agglomerates of polysaccharide with hydrophobic groups
WO2001049320A2 (en) * 2000-01-05 2001-07-12 Cambridge Biopolymers Limited Use of hemicellulose microparticles as vaccine adjuvant
WO2006077724A1 (ja) * 2004-12-28 2006-07-27 Immuno Frontier, Inc. がんワクチン製剤
WO2007119859A1 (ja) 2006-04-11 2007-10-25 Immunofrontier, Inc. タンパク質複合体およびその製造方法
WO2010050578A1 (ja) * 2008-10-31 2010-05-06 国立大学法人東京医科歯科大学 カチオン性ナノゲルを用いる粘膜ワクチン
US7785625B2 (en) 2000-01-14 2010-08-31 Lg Life Sciences, Limited Lipophilic-coated microparticle containing a protein drug and formulation comprising same
WO2013085021A1 (ja) * 2011-12-09 2013-06-13 株式会社林原 抗体産生増強用の組成物
WO2020027309A1 (ja) * 2018-08-03 2020-02-06 国立大学法人東京大学 細胞性免疫を誘導する経鼻ワクチン
WO2020158771A1 (ja) 2019-01-29 2020-08-06 国立大学法人三重大学 がんワクチン製剤

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2912012C (en) 2005-05-05 2018-05-29 Sensient Flavors Inc. Production of beta-glucans and mannans
US20070042970A1 (en) * 2005-08-22 2007-02-22 Chemical Soft R&D Inc. Folate-modified cholesterol-bearing pullulan as a drug carrier
FR2944448B1 (fr) * 2008-12-23 2012-01-13 Adocia Composition pharmaceutique stable comprenant au moins un anticorps monodonal et au moins un polysacharide amphiphile comprenant des substituants derives d'alcools hydrofobes ou d'amines hydrophobes.
FR2958646B1 (fr) * 2010-04-07 2012-05-18 Adocia Polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles substitues par un derive d'acide hydrophobe.
WO2013031882A1 (ja) 2011-08-31 2013-03-07 国立大学法人三重大学 がん治療用ワクチン製剤
EP3053592A4 (en) 2013-10-01 2017-09-06 Mie University T cell-inducing vaccine containing interepitope sequence promoting antigen presentation

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5589298A (en) * 1978-12-01 1980-07-05 Merck & Co Inc Immunological adjuvant
JPS5612320A (en) * 1979-07-11 1981-02-06 Merck & Co Inc Immunity adjuvant
JPS5653698A (en) * 1979-07-31 1981-05-13 Merck & Co Inc Immunological adjuvant
EP0034835A1 (en) * 1978-07-11 1981-09-02 Merck & Co. Inc. Cholesterol derivatives as intermediary products for the synthesis of immunologic adjuvants
JPS6169801A (ja) * 1984-09-12 1986-04-10 Junzo Sunamoto 天然由来多糖誘導体およびその製造方法
JPH03292301A (ja) * 1990-04-11 1991-12-24 Nippon Oil & Fats Co Ltd 多糖類―ステロール誘導体とその製造法
JPH05339169A (ja) * 1992-03-03 1993-12-21 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd 経口ワクチン
JPH0797333A (ja) * 1993-08-04 1995-04-11 Takeda Chem Ind Ltd 超分子構造型集合体
JPH08508247A (ja) * 1993-03-11 1996-09-03 セクレテック，インク． 粘膜表面への免疫原の輸送における重合的粘膜付着体

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4189471A (en) 1978-07-11 1980-02-19 Merck & Co., Inc. Immunologic glycolipid adjuvants
JP2512310B2 (ja) 1987-06-24 1996-07-03 エーザイ株式会社 被覆脂肪乳剤
ES2106033T3 (es) 1989-05-19 1997-11-01 Genentech Inc Dominio extracelular de her2.
WO1992004887A1 (en) 1990-09-25 1992-04-02 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Induction of cytotoxic t cell
US5367080A (en) 1990-11-08 1994-11-22 Sterling Winthrop Inc. Complexing agents and targeting radioactive immunoreagents useful in therapeutic and diagnostic imaging compositions and methods
EP0640347A1 (en) 1992-03-03 1995-03-01 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Oral vaccine
US5736146A (en) 1992-07-30 1998-04-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic peptide carriers and vaccines comprising them
JPH07206903A (ja) 1994-01-24 1995-08-08 Takeda Chem Ind Ltd 超分子構造型集合体
NZ511118A (en) 1998-10-02 2002-11-26 Mitsubishi Chem Corp Activation of cellular immunity with antigenic proteins and hydrophobized polysaccharides, which have modified alkyl or cholesterol groups

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0034835A1 (en) * 1978-07-11 1981-09-02 Merck & Co. Inc. Cholesterol derivatives as intermediary products for the synthesis of immunologic adjuvants
JPS5589298A (en) * 1978-12-01 1980-07-05 Merck & Co Inc Immunological adjuvant
JPS5612320A (en) * 1979-07-11 1981-02-06 Merck & Co Inc Immunity adjuvant
JPS5653698A (en) * 1979-07-31 1981-05-13 Merck & Co Inc Immunological adjuvant
JPS6169801A (ja) * 1984-09-12 1986-04-10 Junzo Sunamoto 天然由来多糖誘導体およびその製造方法
JPH03292301A (ja) * 1990-04-11 1991-12-24 Nippon Oil & Fats Co Ltd 多糖類―ステロール誘導体とその製造法
JPH05339169A (ja) * 1992-03-03 1993-12-21 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd 経口ワクチン
JPH08508247A (ja) * 1993-03-11 1996-09-03 セクレテック，インク． 粘膜表面への免疫原の輸送における重合的粘膜付着体
JPH0797333A (ja) * 1993-08-04 1995-04-11 Takeda Chem Ind Ltd 超分子構造型集合体

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000020563A1 (fr) * 1998-10-02 2000-04-13 Mitsubishi Chemical Corporation Procede d'induction d'une immunite cellulaire et cellules possedant cette immunite
EP1113023A1 (en) * 1999-03-31 2001-07-04 Nof Corporation Method of forming agglomerates of polysaccharide with hydrophobic groups
EP1113023A4 (en) * 1999-03-31 2003-01-15 Nof Corp METHOD FOR PRODUCING AGGLOMERATES FROM POLYSACCHARIDES WITH HYDROPHOBIC GROUPS
WO2001049320A2 (en) * 2000-01-05 2001-07-12 Cambridge Biopolymers Limited Use of hemicellulose microparticles as vaccine adjuvant
WO2001049320A3 (en) * 2000-01-05 2002-01-17 Cambridge Biopolymers Ltd Use of hemicellulose microparticles as vaccine adjuvant
US7785625B2 (en) 2000-01-14 2010-08-31 Lg Life Sciences, Limited Lipophilic-coated microparticle containing a protein drug and formulation comprising same
WO2006077724A1 (ja) * 2004-12-28 2006-07-27 Immuno Frontier, Inc. がんワクチン製剤
WO2007119859A1 (ja) 2006-04-11 2007-10-25 Immunofrontier, Inc. タンパク質複合体およびその製造方法
JP2007277202A (ja) * 2006-04-11 2007-10-25 Immunofrontier:Kk タンパク質複合体およびその製造方法
WO2010050578A1 (ja) * 2008-10-31 2010-05-06 国立大学法人東京医科歯科大学 カチオン性ナノゲルを用いる粘膜ワクチン
JP2010105968A (ja) * 2008-10-31 2010-05-13 Tokyo Medical & Dental Univ カチオン性ナノゲルを用いる粘膜ワクチン
US8961983B2 (en) 2008-10-31 2015-02-24 National University Corporation Tokyo Medical And Dental University Mucosal vaccine using cationic nanogel
WO2013085021A1 (ja) * 2011-12-09 2013-06-13 株式会社林原 抗体産生増強用の組成物
WO2020027309A1 (ja) * 2018-08-03 2020-02-06 国立大学法人東京大学 細胞性免疫を誘導する経鼻ワクチン
JPWO2020027309A1 (ja) * 2018-08-03 2021-08-12 国立大学法人 東京大学 細胞性免疫を誘導する経鼻ワクチン
JP7445897B2 (ja) 2018-08-03 2024-03-08 国立大学法人 東京大学 細胞性免疫を誘導する経鼻ワクチン
WO2020158771A1 (ja) 2019-01-29 2020-08-06 国立大学法人三重大学 がんワクチン製剤

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