WO1997047760A1 - Procede de production d'erythritol a l'aide d'un micro-organisme - Google Patents

Procede de production d'erythritol a l'aide d'un micro-organisme Download PDF

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WO1997047760A1
WO1997047760A1 PCT/JP1997/001640 JP9701640W WO9747760A1 WO 1997047760 A1 WO1997047760 A1 WO 1997047760A1 JP 9701640 W JP9701640 W JP 9701640W WO 9747760 A1 WO9747760 A1 WO 9747760A1
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medium
sugar
culture
cbs
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Saburo Chida
Toshiro Ochiai
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Nikken Chemicals, Co., Ltd.
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
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    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing erythritol using a microorganism, and more particularly, to a method for producing erythritol using a strain belonging to Trichosporonoides megatiliensis. Landscape technology
  • Moniliella tomentosa var. Pollinis CBS 46.16.7 and Monioella tomentosa var. Pollinis CBS 46.16.7 are microorganisms that have been put into practical use to produce erythritol. sp. SN-G42EFERMP-8940) is known.
  • Trichosporonoides megachiliensis used in the present invention was produced by G. Douglas Inglis and Lin. This strain was reported in 1992 as a new strain (Mycolgia, Vol. 84, No. 4, P. 555-570, 1992). Although their reports describe the morphological and physiological properties of the strains identified as new strains, they do not state that these strains produce erythritol.
  • the present inventors have conducted various studies on a method for producing erythritol using a microorganism, and as a result, Trichosboronoides' megatiliensis efficiently converts sugars such as glucose into erythritol in a high yield. This led to the completion of the present invention. Disclosure of the invention
  • the present invention provides a method for culturing a strain belonging to Trichosbolonoides' megatiliensis in a medium containing a high concentration of saccharide, particularly 20 to 50 WZV%, and collecting erythritol from the culture. It is intended to provide a method for producing erythritol.
  • the present invention provides a method for producing erythritol, which comprises culturing a strain associated with Trichosporonoides megatiliensis in a high-concentration sugar medium and collecting erythritol accumulated in the medium.
  • the strains belonging to Trichosporonoides' megatiliensis used in the present invention include Trichosporonoides megatiliensis CBS 190.92 strain (UAMH 6490) and CBS 191 strain. 9 strains (UAMH 682 2 strains) and Trichosporonoides, a strain reported by G. Douglas Inglis of the University of Alberta, Canada. Megachiliensis UAMH 6820 and UAMH 68 21 strains and UAMH6832 strains (these are stored at the University of Alberta Microfingus Collection and Herbarium), etc., and these strains are subjected to the usual mutation treatment methods, for example, ultraviolet irradiation, radiation.
  • Mutant strains obtained by treatment with a physical mutagenesis method such as irradiation or a chemical mutagenesis method with a chemical mutagen such as ethyl methanesulfonate and nitrosoguanidine can be mentioned.
  • the culture of these strains is carried out under aerobic conditions using a liquid medium containing a carbon source, a nitrogen source, inorganic salts and the like.
  • saccharides such as glucose, fructose, sucrose and maltose
  • saccharified solutions containing these saccharides such as starch saccharified solution, sweet potato molasses, and sugar beet molasses
  • Glucose, fructoses and sucrose are preferred.
  • the nitrogen source may be any nitrogen compound that can be used by microorganisms.
  • examples include yeast extract, peptone, malt extract, corn starch, ammonia water, ammonium salts, urea, and nitrates. Used alone or in combination as appropriate.
  • Phosphoric acid salts magnesium salts, calcium salts, potassium salts, iron salts, manganese salts, and the like can be used as appropriate as the inorganic salts.
  • Defoaming agents such as silicone resin can also be used as appropriate
  • the cultivation is performed by directly inoculating the strain into a liquid medium having the above composition, in which the sugar concentration in the medium is adjusted to a high concentration, preferably 20 to 50 WZV%, more preferably 30 to 40 WZV ⁇ .
  • inoculate a seed culture obtained by pre-culture the culture is carried out at pH 3 to 8, preferably pH 3 to 6, at a culture temperature of 24 to 40 ° C, and preferably at 35 to 38 ° C, usually for 3 to 8 days. It is desirable to terminate the culture when the nutrient source of the medium is used to the maximum and the amount of erythritol produced in the culture reaches the maximum.
  • Erythritol accumulated in the culture solution is separated and collected from the culture solution by an ordinary method. For example, cells are removed from the culture by filtration or centrifugation, and then appropriately combined with methods such as ion-exchange resin treatment, adsorption chromatography, solvent extraction, concentration, and crystallization. It is done by doing. Further, in order to remove impurities, a commonly used activated carbon decolorizing method, a recrystallization method and the like are also used.
  • Trichosporonoides megachiliensis CBS 190.92 and CBS 191.92 strains were each transformed into a yeast extract medium (glucose 30 W / V%, yeast extract 1 W / V%). ) And cultured with shaking at 35 for 3 days. After culturing, the yeast extract medium is inoculated into an L-shaped culture tube into which the yeast extract medium has been previously dispensed so that the medium volume becomes 2% of the medium volume, and a shaking temperature gradient culture device (Advantech Toyo Co., Ltd., Model TN-2) Using 148), the cells were cultured for 4 days at a shaking frequency of 60 times / min and at a temperature of 24.5 to 39.7 ° C. W
  • the yield of erythritol in the culture broth (yield of erythritol produced relative to the amount of sugar consumed) is measured by high-performance liquid chromatography to measure the remaining glucose and the amount of erythritol in the culture broth. It was calculated by doing The results are shown in Table 1.
  • the optimal temperature range for erythritol production is 36.5 to 38.0 ° C.
  • the yield was 28.1 to 29.4%.
  • the optimal temperature range for erythritol production is 35.0 to 38.0 ° C, and the yield of erythritol relative to sugar at this time is It was 27.8 to 28.8%.
  • a yeast extract medium was used as a basic medium, and glucose in the medium was converted to other sugars (fructosaccharides).
  • Tose, maltose, sucrose seed cultures obtained by inoculating the above strains into a yeast extract medium (glucose 30 WZV%, yeast extract 1 W / V%) and shaking for 3 days at 35
  • the solution is inoculated into a modified yeast extract medium (sugar 40 W / V%, yeast extract 1.33 W / V%) supplemented with various sugars (amount of medium: 2%), and shake-cultured with a triangular flask. Erythritol production was measured at 37 ° C for 7 days. The results are shown in Table 2.
  • Trichosporonoides megachiliensis CBS 190.92 and CBS 191.92 were cultured in media with different pH, and the effect of pH on erythritol production was examined. did. That is, both strains were inoculated in a yeast extract medium (glucose 30 W / V%; yeast extract 1 W / V%) and cultured with shaking at 35 ° C for 3 days. Subsequently, the pH of each strain was adjusted to 2.5, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 8.0, 10.0 using hydrochloric acid and caustic soda. Glucose was inoculated (40 WZV%, yeast extract: 1.33 W / V%) (the amount of medium was 0%).
  • the Trichosporonoides megachiliensis CBS 199.2 and CBS 191.92 strains were placed in a yeast extract medium (glucose 30 W / V%, yeast extract 1 W / V%), respectively.
  • the cells were inoculated and cultured at 35 with shaking for 3 days.
  • the obtained seed culture solution is inoculated into a yeast extract medium whose glucose concentration has been adjusted to 10, 20, 30, 40, 50, 60 W / V%, respectively. 0%), and shaking culture in an Erlenmeyer flask was performed at 37 ° C until the highest erythritol yield (yield to sugar) was obtained.
  • the results are shown in Table 4.
  • the culture period of the CBS 190.92 strain was 6 days, and the erythritol yield on sugar at this time was 27.3%.
  • the culture days of the CBS 191.92 strain were 6 days, and the yield of erythritol relative to sugar at this time was 26.1%.
  • Trichosporonoides megachiliensis CBS 190.92 strain was inoculated into a yeast extract medium (glucose 30 W / V%; yeast extract 1 W / V%) and shaken at 37 ° C for 3 days. Culture was continued. Next, the obtained culture solution was used as a seed bacterium, inoculated into a yeast extract medium having the same composition as described above (amount of medium: 2.0%), and mini-jaw arm Yuichi (available from Able Corporation: Model DPC-2) The culture was performed at 37 ° C for 5 days at a stirring speed of 450 times / min. The erythritol yield on sugar at the end of the culture was 35.1%.
  • Erythritol crystals were prepared using a part of the culture solution cultured in the medium having a sugar concentration of 30 W / V% in Example 4 and the substance was confirmed. That is, the cells were filtered off from the culture to obtain a supernatant containing erythritol. Next, the supernatant was decolorized with activated carbon and desalted with an ion exchange resin (SK-1B (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation): PA-408 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation)). The eluate obtained in this manner was concentrated to a sugar concentration of 50% or more, and erythritol crystals were obtained while cooling slowly. Further, the crystals are recrystallized from water to obtain crystals. Was. The infrared absorption spectrum, melting point, and nuclear magnetic resonance spectrum of this substance were compared with those of the standard erythritol. Based on this, it was confirmed that this substance was erythritol. Industrial applicability
  • the use of a strain associated with Trichosporonides des megatiliensis can significantly reduce the culturing time required for erythritol production, as compared to the same known strain.
  • the sugar concentration is 1 owz v%
  • the number of cultures is 6 days, whereas in the present invention, the culture is completed in 2 days.
  • the present invention is a very advantageous method for producing erythritol.
  • erythritol can be produced inexpensively and efficiently.

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Description

明 糸田 書 微生物を用いるエリスリ トールの製造方法 技術分野
本発明は、 微生物を用いるエリスリ トールの製造方法に関し、 詳 しくはト リコスポロノイデス · メガチリエンシスに属する菌株を用 いるエリスリ トールの製造方法に関する。 景技術
現在、 エリスリ トールを生産するために実用化されている微生物 として、 モニリエラ ' トメントサ 'ノくール ' ポリニス （Moniliella tomentosa var. pollinis C B S 4 6 1. 6 7 ) とォ—レオバシ デゥム属菌株 （Aureobasidium sp. SN-G 4 2 F E RM P - 8 9 4 0 ) の 2種類が知られている。
前者については、 糖類の発酵によりポリオールを工業的規模で製 造する方法等 （特公平 6— 3 0 5 9 1号公報、 同 6 - 3 0 5 9 2号 公報、 同 6 - 3 0 5 9 3号公報、 同 6 - 3 0 5 9 4号公報） の一連 のポリオールの製造方法が知られている。
また、 後者についてはエリスリ トール生產能を有する新規微生物 及びそれを用いる発酵によるエリスリ トールの製造方法 （特公平 4 - 1 1 1 8 9号公報、 同 4一 6 3 5号公報） が知られている。
—方、 トリ コスポロノイデス厲の微生物については、 その種は不 明であるが、 ブラジル国力ンピナス大学のマリナ · A · ァォキ氏等 による蔗糖及びグルコースからのエリスリ トールへの変換の報告 （ BIOTECHNOLOGY LETTERS, Volume 15, No.4, P.383-388, April 1993) がある。 この報告によると、 グルコースからエリスリ トールへの変 換率が 4 3 . 0 %、 蔗糖からエリスリ トールへの変換率が 3 7 . 4 %と高いものの、 このときの培養液の糖濃度は 1 0 % (WZV ) と 低く、 培養日数も 6 日間という長期間を要する等工業的規模での製 造には問題がある。
本発明で使用される ト リコスポロノイデス · メガチリエンシス （ Tr i chosporonoi des megachi 1 i ens i s) は、 カナダ国アルノく一夕大学 の G . ドグラス · イ ングリスと リ ン . シグラ一により、 1 9 9 2年 に新菌種として報告 (Mycol ogia, Vol ume 84 , No. 4 , P. 555-570, 1992) された菌株である。 彼らの報告には、 新菌種と同定した菌株 の形態学的及び生理学的諸性状は記述されているものの、 これらの 菌株がエリスリ トールを生成するとの記載はない。
本発明者等は、 微生物を用いるエリスリ トールの製造方法につい て種々研究を行った結果、 トリ コスボロノイデス ' メガチリェンシ スがグルコース等の糖類を効率よく、 しかも高収率でエリスリ トー ルに変換することを見出し、 本発明を完成するに至った。 発明の開示
本発明は、 トリコスボロノイデス ' メガチリェンシスに属する菌 株を高濃度の糖、 特に 2 0〜 5 0 WZV %の濃度の糖を含む培地で 培養し、 該培養物からエリスリ トールを採取するエリ スリ トールの 製造方法を提供することを目的とする。
即ち、 本発明はト リコスポロノイデス · メガチリエンシスに厲す る菌株を高濃度の糖培地で培養し、 培地中に蓄積されたエリスリ ト —ルを採取することを特徴とするエリスリ トールの製造方法に関す る。 発明を実施するための最良の形態
本発明で使用される トリコスポロノイデス ' メガチリェンシスに 属する菌株としては、 トリコスポロノイデス · メガチリエンシス C B S 1 9 0. 9 2株 （UAMH 6 4 9 0株） 、 同 C B S 1 9 1. 9 2株 （UAMH 6 8 2 2株） の他、 カナダ国アルバータ大学の G . ドグラス · ィングリス等により報告された菌株である トリコスポロ ノイデス . メガチリェンシス UAMH 6 8 2 0株、 同 UAMH 6 8 2 1株、 同 U A MH 6 8 2 3株 （これらは、 the University of Alberta Microf ungus Col lection and Herbarium で保管されて いる） 等及びこれらの菌株を通常の変異処理方法、 例えば紫外線照 射、 放射線照射等による物理的変異方法、 あるいはェチルメタンス ルホン酸、 ニ トロソグァ二ジン等の化学的変異剤による化学的変異 方法等で処理することにより得られた変異株を挙げることができる。
これらの菌株の培養は炭素源、 窒素源、 無機塩類等を含む液体培 地を用いて、 好気的条件下に行われる。
炭素源としてはグルコース、 フルク トース、 蔗糖、 マルト一ス等 の糖類及びこれらの糖類を含む澱粉糖化液、 甘藷糖蜜、 甜菜糖蜜等 の糖質を、 単独もしくは適宜組み合わせて用いることができるが、 特にグルコース、 フルク ト一ス、 蔗糖が好適である。
また、 窒素源としては、 微生物により利用可能な窒素化合物であ ればよく、 例えば酵母エキス、 ペプトン、 麦芽エキス、 コーンスチ 一プリカ一、 アンモニア水、 アンモニゥム塩類、 尿素、 硝酸塩類等 があり、 これらを単独もしくは適宜組み合わせて使用される。
無機塩としてはリ ン酸塩、 マグネシウム塩、 カルシウム塩、 カリ ゥ厶塩、 鉄塩、 マンガン塩等を適宜使用することができる。
その他、 培養液中の発泡を抑制するため、 通常の培養時において も使用されるシリコーン樹脂等の消泡剤を適宜使用することができ る
培養は、 培地中の糖濃度を高濃度、 好ましくは 2 0〜 5 0WZV %、 より好ましくは 3 0〜4 0 WZV^に調整した、 前記組成から なる液体培地に菌株を直接植菌するか、 又は別に前培養によって得 られる種培養液を接種して行う。 この際の培養は p H 3〜 8、 好ま しくは p H 3〜 6、 培養温度 2 4〜4 0 °C、 好ましくは 3 5〜 3 8 °Cで通常 3〜8 日間行われる。 尚、 培養は培地の栄養源が最大限に 利用され、 かつ培養液中のエリスリ トールの生成量が最高に達した 時点で終了させることが望ましい。
培養液中に蓄積されたエリスリ トールは、 常法により培養液から 分離し採取される。 例えば、 培養液から菌体を濾過あるいは遠心分 離等によって除去し、 次いでイオン交換樹脂処理法、 吸着クロマ ト グラフィ一法、 溶媒抽出法、 濃縮法、 晶析法等の方法を適宜組み合 わせることにより行われる。 更に、 不純物を除去するため、 通常用 いられる活性炭脱色処理法、 再結晶法等も用いられる。
次に、 本発明の実施例について具体的に説明する。
実施例 1 (培養温度とエリスリ トール収率）
ト リコスポロノイデス · メガチリェンシス C B S 1 9 0. 9 2 株及び同 C B S 1 9 1. 9 2株を、 それぞれ酵母エキス培地 （グル コース 3 0 W/V%、 酵母エキス 1 W/V%) に植菌し、 3 5でで 3 日間振とう培養した。 培養後、 予め同酵母エキス培地を分注して おいた L型培養管に、 培地量の 2 %となるように接種し、 振とう温 度勾配培養装置 （ァドバンテツク東洋株式会社、 モデル TN— 2 1 4 8 ) を用いて、 振とう数 6 0回/分、 温度 2 4. 5〜3 9. 7 °C の範囲で 4 日間培養した。 W
5
培養液中のエリスリ トールの対糖収率 （消費された糖量に対する 生成されたエリスリ トールの収率） は、 高速液体クロマトグラフで 培養液中のグルコースの残量とエリスリ トールの生成量を測定する ことにより算出した。 その結果を表 1に示す。
表 1 エリスリ トールの対糖収率
培養温度 *C B S 1 9 0 9 2 C B S 1 9 1 9 2
(で） (%)
2 4. 5 2 1. 0 1 7. 4
2 5 · 5 2 1. 9 1 6. 6
2 7. 0 2 2. 4 2 1. 3
2 8 · 5 2 3. 1 2 1. 9
3 0. 1 2 2. 8 2 2. 4
3 1. 5 2 2. 9 2 4. 1
3 3. 0 2 3. 2 2 4. 5
3 5. 0 2 3. 3 2 7. 8
3 6. 5 2 8. 1 2 8. 0
3 8. 0 2 9. 4 2 8. 8
3 9. 7 2 1. 0 1 7. 9
* C B S ： Central Bureau voor Schimmelcultures, Oosterstraat 1, P.O.Box 273, Nし - 3740 AG Baarn, The Netherlands
表から明らかなように、 C B S 1 9 0. 9 2株の場合は、 エリス リ トール生産の最適温度範囲は 3 6. 5〜3 8. 0°Cであり、 この ときのエリスリ トールの対糖収率は 2 8. 1〜2 9. 4 %であった。 また、 C B S 1 9 1. 9 2株の場合においては、 エリスリ トール生 産の最適温度範囲は 3 5. 0〜3 8. 0 °Cであり、 このときのエリ スリ トールの対糖収率は 2 7. 8〜2 8. 8 %であった。
実施例 2 (糖の種類の影響）
ト リコスポロノイデス · メガチリェンシス C B S 1 9 0. 9 2 株及び同 C B S 1 9 1. 9 2株を、 酵母エキス培地を基本培地とし て用い、 該培地中のグルコースを他の糖類 （フルク トース、 マルト —ス、 蔗糖） に変えて、 それぞれ培養した。 即ち、 上記の菌株をそ れぞれ酵母エキス培地 （グルコース 3 0 WZV%、 酵母エキス 1 W /V%) に植菌し、 3 5てで 3日問振とう培養して得られた種培養 液を、 各種の糖を添加した改変酵母エキス培地 （糖 4 0W/V%、 酵母エキス 1. 3 3 W/V%) に接種 （対培地量 2 %) し、 三角フ ラスコによる振とう培養を 3 7°Cで 7日間行い、 エリスリ トール生 成量を測定した。 その結果を表 2に示す。
表に示したように、 培地の炭素源としてフルク ト一ス又は蔗糖を 用いた場合には、 グルコースを用いた場合と同様に高いエリスリ ト —ル生成量が得られることが分かった。
表 2 エリスリ トール生成量 糖の種類 C B S 1 9 0. 9 2 C B S 1 9 1. 9 2
(g/L) フルク ト一ス 1 0 2. 7 9 3. 2
マル ト一ス 3 7. 9 2 8. 4
蔗糖 1 3 4. 9 1 2 4. 4 実施例 3 (p Hの影響）
ト リコスポロノイデス · メガチリェンシス C B S 1 9 0. 9 2 株及び同 C B S 1 9 1. 9 2株を、 それぞれ p Hの異なる培地で培 養し、 エリスリ トール生成に及ぼす pHの影響を検討した。 即ち、 両菌株をそれぞれ酵母エキス培地 （グルコース 3 0 W/V%. 酵母 エキス 1 W/V%) に植菌し、 3 5 °Cで 3日間振とう培養した。 続 いてそれぞれの菌株を、 塩酸及び苛性ソーダを用いて p Hを 2. 5, 3. 0， 4. 0, 5. 0， 6. 0 , 8. 0, 1 0. 0に調整した培 地 （グルコース 4 0 WZV%、 酵母エキス 1. 3 3 W/V%) に接 種 （対培地量し 0 %) した。 培養中は該培地の初発 p Hを保持し、 3 7°Cで 5日間、 三角フラスコによる振とう培養を行った。 培養終 了後、 エリスリ トールの対糖収率を算出した。 その結果を表 3に示 す。
表 3 エリスリ トールの対糖収率
P H C B S 1 9 0. 9 2 C B S 1 9 1 9 2
(%)
2. 5 2 3. 6 痕跡
3. 0 2 8. 9 2 6. 0
4. 0 2 6. 0 2 5 0
5. 0 2 7. 1 2 4 6
6. 0 2 6. 2 2 4
8. 0 2 7. 2 2 6
1 0. 0 0 0 表から明らかなように、 両菌株は p H 3. 0から 8. 0までの幅 広い範囲でエリスリ トールを安定して製造できることが分かった。 実施例 4 (糖濃度と培養時間）
ト リ コスポロノイデス · メガチリェンシス C B S 1 9 0. 9 2 株及び同 C B S 1 9 1. 9 2株を、 それぞれ酵母エキス培地 （グル コース 3 0 W/V%、 酵母エキス 1 W/V%) に植菌し、 3 5でで 3 日間振とう培養した。 得られた種培養液を、 グルコース濃度をそ れぞれ 1 0、 2 0、 3 0、 4 0、 5 0、 6 0W/V%に調整した酵 母エキス培地に接種 （対培地量 2. 0 %) し、 エリスリ トールの最 高収率 （対糖収率） が得られるまで、 三角フラスコによる振とう培 養を 3 7 °Cで行った。 その結果を表 4に示す。
表 4 グルコース C B S 1 9 0. 9 2 C B S 1 9 1. 92 濃度
(w/v%) 培養 エリスリ トール 培養 エリスリ トーゾ 日数 対糖収率 日数 対糖収率
(曰） (%) (曰） (%)
1 0 2 3 6. 7 2 3 7. 0
2 0 5 3 3. 2 5 2 9. 3
3 0 5 3 0. 5 5 2 8. 7
4 0 6 2 7. 3 6 2 6. 1
5 0 8 1 9. 0 1 1 1 8. 3
6 0 8 7. 1 1 1 5. 6 表に示したように、 糖濃度 1 0WZV%では、 C B S 1 9 0. 9 2 株及び C B S 1 9 1. 9 2株共に、 培養日数は 2日間と短期間で終 了し、 この時のエリスリ トールの対糖収率は、 それぞれ 3 6. 7 % と 3 7. 0 %であった。
また、 糖濃度 4 0WZV%においては、 C B S 1 9 0. 9 2株の 培養日数は 6日間で、 この時のエリスリ トールの対糖収率は 2 7. 3 %であった。 また、 C B S 1 9 1. 9 2株の培養日数は 6日間で、 この時のェリスリ トールの対糖収率は 2 6. 1 %であった。
実施例 5
ト リ コスポロノイデス · メガチリェンシス C B S 1 9 0. 9 2 株を、 酵母エキス培地 （グルコース 3 0 W/V%. 酵母エキス 1 W /V%) に植菌し、 3 7 °Cで 3日間振とう培養した。 次いで、 得ら れた培養液を種菌として、 前記と同一組成の酵母エキス培地に植菌 (対培地量 2. 0 %) し、 ミニジャフアーメ ン夕一 （エイブル株式 会社製： モデル DP C— 2) で撹拌数 4 5 0回/分、 3 7°Cで 5日 間培養した。 培養終了時のエリスリ トールの対糖収率は 3 5. 1 % であった。
実施例 6
実施例 4の糖濃度 3 0 W/V %の培地で培養した培養液の一部を 用いて、 エリスリ トールの結晶を作成し、 該物質の確認を行った。 即ち、 培養液から菌体を濾去し、 エリスリ トールを含む上澄液を得 た。 次いで、 該上澄液を活性炭による脱色及びイオン交換樹脂 （S K - 1 B (三菱化学株式会社製） ： P A - 4 0 8 (三菱化学株式会 社製） ） による脱塩を行った。 このようにして得られた溶出液を糖 濃度 5 0 %以上に濃縮した後、 ゆつく りと冷却しながらェリスリ ト ールの結晶を得た。 更に、 この結晶を水から再結晶させて結晶を得 た。 本物質の赤外線吸収スぺク トル、 融点及び核磁気共鳴スぺク ト ルを、 エリスリ トールの標準品と比較したところ一致した。 このこ とから、 本物質はエリスリ トールであることを確認した。 産業上の利用可能性
本発明のェリスリ トールの製造方法において、 ト リコスポロノィ デス · メガチリェンシスに厲する菌株を用いると、 同厲の公知菌株 と比べて、 エリスリ トール生産に要する培養時間を大巾に短縮する ことができる （前記従来法では糖濃度 1 o wz v %の場合、 培養曰 数が 6 日問であるのに対し、 本発明では 2日間で培養が終了する） 。 しかも、 両者のエリスリ トールの収率はほぼ同程度であるため、 本 発明はエリスリ トールを生産する上で、 非常に有利な方法である。 更に、 本発明では糖濃度 3 0 WZV %という高濃度の培地を用い た場合においても、 5 日間で培養が終了し、 かつエリスリ トールの 対糖収率が比較的高い。 そのため、 本発明の方法によれば、 エリス リ トールを安価に、 かつ効率よく生産することができる。

Claims

言青求の範囲
( 1 ) トリコスポロノイデス . メガチリェンシスに属する菌株を 高濃度の糖培地で培養し、 培地中に蓄積されたエリスリ トールを採 取することを特徴とするエリスリ トールの製造方法。
( 2) 高濃度の糖培地が、 糖濃度 2 0〜5 0WZV%である請求 項 1記載のェリスリ トールの製造方法。
( 3 ) トリコスポ αノイデス ' メガチリェンシスに属する菌株が、 卜 リ コスポロノ イデス · メガチリェンシス C B S 1 9 0. 9 2株 又はト リ コスポロノイデス ' メガチリェンシス C B S 1 9 1. 9 2 株である請求項 1記載のエリスリ トールの製造方法。
( 4 ) 糖が、 グルコース、 フルク ト一ス及び蔗糖のいずれか又は これらの混合物である請求項 1記載のエリスリ トールの製造方法。
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