JP3423842B2 - 変異株及び該変異株又は親株を用いるエリスリトールの製造方法 - Google Patents
変異株及び該変異株又は親株を用いるエリスリトールの製造方法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はトリコスポロノイデ
ス・オエドセファリスの変異株及び該変異株又は親株を
用いるエリスリトールの製造方法に関し、更に詳しくは
トリコスポロノイデス・オエドセファリス（Trichospor
onoides oedocephalis）ＴＯ−２４１−１４株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５３０９）及びそれを用いるエリスリトール
の製造方法に関する。
ス・オエドセファリスの変異株及び該変異株又は親株を
用いるエリスリトールの製造方法に関し、更に詳しくは
トリコスポロノイデス・オエドセファリス（Trichospor
onoides oedocephalis）ＴＯ−２４１−１４株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５３０９）及びそれを用いるエリスリトール
の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】現在、エリスリトールを生産するために
実用化されている微生物として、モニリエラ・トメント
サ・バール・ポリニス（Moniliella tomentosa var. po
llinisＣＢＳ４６１．６７）とオーレオバシディウム
（Aureobasidium sp. ＳＮ−Ｇ４２ ＦＥＲＭ Ｐ−８９
４０）の２種類が知られている。前者には、糖類の発酵
によりポリオールを工業的規模で製造する方法等（特公
平６−３０５９１、同６−３０５９２、同６−３０５９
３、同６−３０５９４）一連のポリオールの製造方法が
知られている。しかし、これらの方法で用いられるモニ
リエラ・トメントサ・バール・ポリニス菌株は耐糖性が
低く、糖濃度が高くなるとエリスリトールの収率が低下
する欠点がある。即ち、糖濃度が２５Ｗ／Ｖ％ではエリ
スリトールの対糖収率（消費された糖量に対する生成さ
れたエリスリトールの収率）が４２％と高いものの、糖
濃度が３５Ｗ／Ｖ％と高くなるとエリスリトールの対糖
収率は３３％、糖濃度４０Ｗ／Ｖ％ではエリスリトール
の対糖収率は２７％と著しく低下する。
実用化されている微生物として、モニリエラ・トメント
サ・バール・ポリニス（Moniliella tomentosa var. po
llinisＣＢＳ４６１．６７）とオーレオバシディウム
（Aureobasidium sp. ＳＮ−Ｇ４２ ＦＥＲＭ Ｐ−８９
４０）の２種類が知られている。前者には、糖類の発酵
によりポリオールを工業的規模で製造する方法等（特公
平６−３０５９１、同６−３０５９２、同６−３０５９
３、同６−３０５９４）一連のポリオールの製造方法が
知られている。しかし、これらの方法で用いられるモニ
リエラ・トメントサ・バール・ポリニス菌株は耐糖性が
低く、糖濃度が高くなるとエリスリトールの収率が低下
する欠点がある。即ち、糖濃度が２５Ｗ／Ｖ％ではエリ
スリトールの対糖収率（消費された糖量に対する生成さ
れたエリスリトールの収率）が４２％と高いものの、糖
濃度が３５Ｗ／Ｖ％と高くなるとエリスリトールの対糖
収率は３３％、糖濃度４０Ｗ／Ｖ％ではエリスリトール
の対糖収率は２７％と著しく低下する。
【０００３】また、後者にはエリスリトール生産能を有
する新規微生物及びそれを用いる発酵によるエリスリト
ールの製造方法（特公平４−１１１８９、同４−６３
５）が知られている。この公報で使用している微生物は
耐糖性及びエリスリトールの生産性に優れている。しか
し、この菌株は同時に、旺盛な生育を示すため、大規模
生産になるとエリスリトール（ポリオール）の精製工程
に於ける発酵液からの菌体分離に長時間を要し、大量に
でる廃菌体の処分に負担がかかるという欠点がある。本
発明に係るトリコスポロノイデス・オエドセファリスに
ついては、その菌学的性質及びエリスリトールを生産す
ることがＲ．Ｈ．ハスキンスらにより報告（CANADIAN J
OURNAL OF BOTANY, Volume45, p.515〜520, 1967）され
ている。しかし、この報告にはエリスリトールの収率等
に関する記載はない。一方、トリコスポロノイデス属に
ついては、その種は不明であるがブラジル国カンピナス
大学のマリナ・Ａ・Ｙ・アオキ氏らによる蔗糖及びブド
ウ糖からのエリスリトールへの変換の報告（BIOTECHNOL
OGY LETTERS, Volume15, No.4, p.383-388, April 199
3）がある。この報告によるとブドウ糖からエリスリト
ールへの変換率は４３．０％、蔗糖からエリスリトール
への変換率は３７．４％と比較的高いものの、このとき
の培養液の糖濃度は１０Ｗ／Ｖ％と低く、工業的規模で
の製造は期待できない。
する新規微生物及びそれを用いる発酵によるエリスリト
ールの製造方法（特公平４−１１１８９、同４−６３
５）が知られている。この公報で使用している微生物は
耐糖性及びエリスリトールの生産性に優れている。しか
し、この菌株は同時に、旺盛な生育を示すため、大規模
生産になるとエリスリトール（ポリオール）の精製工程
に於ける発酵液からの菌体分離に長時間を要し、大量に
でる廃菌体の処分に負担がかかるという欠点がある。本
発明に係るトリコスポロノイデス・オエドセファリスに
ついては、その菌学的性質及びエリスリトールを生産す
ることがＲ．Ｈ．ハスキンスらにより報告（CANADIAN J
OURNAL OF BOTANY, Volume45, p.515〜520, 1967）され
ている。しかし、この報告にはエリスリトールの収率等
に関する記載はない。一方、トリコスポロノイデス属に
ついては、その種は不明であるがブラジル国カンピナス
大学のマリナ・Ａ・Ｙ・アオキ氏らによる蔗糖及びブド
ウ糖からのエリスリトールへの変換の報告（BIOTECHNOL
OGY LETTERS, Volume15, No.4, p.383-388, April 199
3）がある。この報告によるとブドウ糖からエリスリト
ールへの変換率は４３．０％、蔗糖からエリスリトール
への変換率は３７．４％と比較的高いものの、このとき
の培養液の糖濃度は１０Ｗ／Ｖ％と低く、工業的規模で
の製造は期待できない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】一般に、工業的規模に
於ける製造、即ち、大規模生産になると、収率の向上は
もとより、耐糖性が高い菌株や菌体の増殖性が低い菌株
を選択することが、生産性の向上のために極めて重要で
ある。
於ける製造、即ち、大規模生産になると、収率の向上は
もとより、耐糖性が高い菌株や菌体の増殖性が低い菌株
を選択することが、生産性の向上のために極めて重要で
ある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的に合致する生産性の高いエリスリトール生産菌株を選
択すべく鋭意検討した結果、トリコスポロノイデス属、
好ましくはトリコスポロノイデス・オエドセファリス
（Trichosporonoides oedocephalis ＣＢＳ６４９．６
６）株が比較的高いエリスリトール生産能を有すること
を見い出し、更にこの菌体を変異処理することにより得
られた突然変異株は発酵に於けるエリスリトールの収率
が高くて、耐糖性が高く、しかも菌体の増殖性が低く、
工業的に有利であることを見いだし本発明を完成するに
至った。
的に合致する生産性の高いエリスリトール生産菌株を選
択すべく鋭意検討した結果、トリコスポロノイデス属、
好ましくはトリコスポロノイデス・オエドセファリス
（Trichosporonoides oedocephalis ＣＢＳ６４９．６
６）株が比較的高いエリスリトール生産能を有すること
を見い出し、更にこの菌体を変異処理することにより得
られた突然変異株は発酵に於けるエリスリトールの収率
が高くて、耐糖性が高く、しかも菌体の増殖性が低く、
工業的に有利であることを見いだし本発明を完成するに
至った。
【０００６】したがって、本発明の目的は、従来の微生
物に比べて菌体の増殖性が大幅に低下（ほぼ半減）した
にもかかわらず、高い糖濃度（４０〜５０Ｗ／Ｖ％）に
於てもエリスリトール収率の高い（対糖収率４０％以
上）微生物を提供する事にある。また、本発明は、この
微生物又はこの微生物の親株を用いてエリスリトールを
製造する方法を提供する事にある。即ち、本発明は親株
に比べてエリスリトールの生産性が高く、かつ菌体の増
殖性が低いことを特徴とするトリコスポロノイデス・オ
エドセファリス（Trichosporonoides oedocephalis）に
属する変異株、好ましくは、トリコスポロノイデス・オ
エドセファリス（Trichosporonoides oedocephalis）Ｔ
Ｏ−２４１−１４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）に関
する。更に、本発明は、トリコスポロノイデス・オエド
セファリス（Trichosporonoides oedocephalis）に属す
る菌株、好ましくは上記の変異株を培養し、培養物から
エリスリトールを採取することを特徴とするエリスリト
ールの製造方法に関する。
物に比べて菌体の増殖性が大幅に低下（ほぼ半減）した
にもかかわらず、高い糖濃度（４０〜５０Ｗ／Ｖ％）に
於てもエリスリトール収率の高い（対糖収率４０％以
上）微生物を提供する事にある。また、本発明は、この
微生物又はこの微生物の親株を用いてエリスリトールを
製造する方法を提供する事にある。即ち、本発明は親株
に比べてエリスリトールの生産性が高く、かつ菌体の増
殖性が低いことを特徴とするトリコスポロノイデス・オ
エドセファリス（Trichosporonoides oedocephalis）に
属する変異株、好ましくは、トリコスポロノイデス・オ
エドセファリス（Trichosporonoides oedocephalis）Ｔ
Ｏ−２４１−１４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）に関
する。更に、本発明は、トリコスポロノイデス・オエド
セファリス（Trichosporonoides oedocephalis）に属す
る菌株、好ましくは上記の変異株を培養し、培養物から
エリスリトールを採取することを特徴とするエリスリト
ールの製造方法に関する。
【０００７】本発明の変異株は通常の変異処理方法、例
えば、紫外線照射、放射線照射等による物理的変異方
法、あるいはエチルメタンスルホン酸、ニトロソグアニ
ジン等の化学的変異剤による化学的変異方法等で処理す
ることにより得られた変異株の中から培養の際の培養液
中の菌体濃度（濁度）が低く、エリスリトールの対糖収
率が高い株を選択する方法で得られる。このような方法
で得られた本発明の変異株のうち代表的なものが工業技
術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１５３０
９の受託番号で寄託されている。
えば、紫外線照射、放射線照射等による物理的変異方
法、あるいはエチルメタンスルホン酸、ニトロソグアニ
ジン等の化学的変異剤による化学的変異方法等で処理す
ることにより得られた変異株の中から培養の際の培養液
中の菌体濃度（濁度）が低く、エリスリトールの対糖収
率が高い株を選択する方法で得られる。このような方法
で得られた本発明の変異株のうち代表的なものが工業技
術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１５３０
９の受託番号で寄託されている。
【０００８】以下に、本発明の変異株トリコスポロノイ
デス・オエドセファリス（Trichosporonoides oedoceph
alis）ＴＯ−２４１−１４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０
９）の菌学的性質を、親株（ＣＢＳ６４９．６６）との
対比で、以下に示す。 （菌学的性質） １．形態学的性質 （１）ＹＭ培地で２５℃、３日間培養した後、顕微鏡で
観察した。 （２）酵母エキス培地（３０％グルコース、１％酵母エ
キス）で３５℃、３日間培養した後顕微鏡で観察した。 （変異株は親株に比べて形の大きいものが多い。）
デス・オエドセファリス（Trichosporonoides oedoceph
alis）ＴＯ−２４１−１４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０
９）の菌学的性質を、親株（ＣＢＳ６４９．６６）との
対比で、以下に示す。 （菌学的性質） １．形態学的性質 （１）ＹＭ培地で２５℃、３日間培養した後、顕微鏡で
観察した。 （２）酵母エキス培地（３０％グルコース、１％酵母エ
キス）で３５℃、３日間培養した後顕微鏡で観察した。 （変異株は親株に比べて形の大きいものが多い。）
【０００９】２．増殖の形態：出芽
（親株と同じ）
３．生理的性質
ａ）糖の発酵性
ウイッカーハムの炭素化合物同化試験用培地（デフコ社
製）をダーラム管入り試験管に分注し、２５℃で３週間
培養して、その炭酸ガスの発生の有無を観察した。 1. D-グルコース ＋ 2. D-ガラクトース ＋ 3. 麦芽糖 ＋ 4. ショ糖 ＋ 5. 乳糖 − 6. ラフィノース − （以上の糖で、親株と同一発酵性を示す。）
製）をダーラム管入り試験管に分注し、２５℃で３週間
培養して、その炭酸ガスの発生の有無を観察した。 1. D-グルコース ＋ 2. D-ガラクトース ＋ 3. 麦芽糖 ＋ 4. ショ糖 ＋ 5. 乳糖 − 6. ラフィノース − （以上の糖で、親株と同一発酵性を示す。）
【００１０】ｂ）糖の資化性
ウイッカーハムの炭素化合物同化試験用培地（デフコ社
製）を用い、２５℃で３週間培養して、その濁度から生
育の有無を観察した。 1. D-アラビノース − 2. L-アラビノース ＋ 3. D-リボース ＋ 4. D-キシロース − 5. D-グルコース ＋ 7. D-ガラクトース ＋ 8. L-ラムノース − 9. D-フラクトース ＋ 10. L-ソルボース − 11. 麦芽糖 ＋ 12. ショ糖 ＋ 13. 乳糖 ＋ 14. セロビオース ＋ 15. トレハロース − 16. ラフィノース − 17. メレジトース − 18. α-メチル-D-グリコシド − 19. 可溶性デンプン − 20. エリスリトール ＋ 21. イノシット − 22. D-マンニトール ＋ 23. グリセリン ＋ 24. サリシン − （以上の糖で、親株と同一資化性を示す。）
製）を用い、２５℃で３週間培養して、その濁度から生
育の有無を観察した。 1. D-アラビノース − 2. L-アラビノース ＋ 3. D-リボース ＋ 4. D-キシロース − 5. D-グルコース ＋ 7. D-ガラクトース ＋ 8. L-ラムノース − 9. D-フラクトース ＋ 10. L-ソルボース − 11. 麦芽糖 ＋ 12. ショ糖 ＋ 13. 乳糖 ＋ 14. セロビオース ＋ 15. トレハロース − 16. ラフィノース − 17. メレジトース − 18. α-メチル-D-グリコシド − 19. 可溶性デンプン − 20. エリスリトール ＋ 21. イノシット − 22. D-マンニトール ＋ 23. グリセリン ＋ 24. サリシン − （以上の糖で、親株と同一資化性を示す。）
【００１１】
【００１２】上記の通り、本発明の変異株トリコスポロ
ノイデス・オエドセファリス（Trichosporonoides oedo
cephalis）ＴＯ−２４１−１４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５
３０９）は、親株と菌学的性質が近似しているが、菌の
形態学的性質（大きさ）、生育の範囲のｐＨ及び温度、
及び最適生育条件のｐＨで相違がみられる。また、培養
によりエリスリトールを製造する場合、本発明の変異株
は親株に比べて耐糖性が高くてエリスリトールの収率が
高く、しかも菌体の増殖性が低いという相違がある。
ノイデス・オエドセファリス（Trichosporonoides oedo
cephalis）ＴＯ−２４１−１４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５
３０９）は、親株と菌学的性質が近似しているが、菌の
形態学的性質（大きさ）、生育の範囲のｐＨ及び温度、
及び最適生育条件のｐＨで相違がみられる。また、培養
によりエリスリトールを製造する場合、本発明の変異株
は親株に比べて耐糖性が高くてエリスリトールの収率が
高く、しかも菌体の増殖性が低いという相違がある。
【００１３】以下に、トリコスポロノイデス・オエドセ
ファリス（Trichosporonoides oedocephalis）に属する
菌株の培養方法及び該菌株を用いるエリスリトールの製
造方法について述べる。菌株の培養は炭素源、窒素源、
無機塩類等を含む液体培地を用いて好気的条件下に行わ
れる。炭素源としてはブドウ糖、フルクトース、蔗糖、
マルトース等の糖類及びこれらの糖類を含む澱粉糖化
液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜等の糖質、好ましくはブドウ糖
又は蔗糖が使用される。窒素源としては微生物により利
用可能な窒素化合物、例えば酵母エキス、ペプトン、麦
芽エキス、コーンスチープリカー、アンモニア水、アン
モニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用される。無機塩
としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、カ
リウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜使用される。
ファリス（Trichosporonoides oedocephalis）に属する
菌株の培養方法及び該菌株を用いるエリスリトールの製
造方法について述べる。菌株の培養は炭素源、窒素源、
無機塩類等を含む液体培地を用いて好気的条件下に行わ
れる。炭素源としてはブドウ糖、フルクトース、蔗糖、
マルトース等の糖類及びこれらの糖類を含む澱粉糖化
液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜等の糖質、好ましくはブドウ糖
又は蔗糖が使用される。窒素源としては微生物により利
用可能な窒素化合物、例えば酵母エキス、ペプトン、麦
芽エキス、コーンスチープリカー、アンモニア水、アン
モニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用される。無機塩
としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、カ
リウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜使用される。
【００１４】培養は、培地中の糖濃度を２０〜６０Ｗ／
Ｖ％、好ましくは３０〜５０Ｗ／Ｖ％に調製した、前記
組成からなる液体培地に菌株を直接植菌するか、又は別
に前培養によって得られる種培養液を接種して、以下の
条件、即ち、通常ｐＨ２．５〜９．０、好ましくはｐＨ
３．０〜４．０、培養温度２７〜４０℃、好ましくは３
５〜３９℃で通常３〜１１日間培養することにより行わ
れる。尚、培養は、培地の栄養源が最大限に利用され、
かつ培養液中のエリスリトールの生成量が最高に達した
時点で培養を終了させることが望ましい。
Ｖ％、好ましくは３０〜５０Ｗ／Ｖ％に調製した、前記
組成からなる液体培地に菌株を直接植菌するか、又は別
に前培養によって得られる種培養液を接種して、以下の
条件、即ち、通常ｐＨ２．５〜９．０、好ましくはｐＨ
３．０〜４．０、培養温度２７〜４０℃、好ましくは３
５〜３９℃で通常３〜１１日間培養することにより行わ
れる。尚、培養は、培地の栄養源が最大限に利用され、
かつ培養液中のエリスリトールの生成量が最高に達した
時点で培養を終了させることが望ましい。
【００１５】培養液中に蓄積されたエリスリトールは、
常法により培養液から分離し採取される。例えば、培養
液から菌体を濾過あるいは遠心分離によって除去し、次
いで、イオン交換樹脂処理法、吸着クロマトグラフィー
法、溶媒抽出法、濃縮法、晶析法等の方法を適宜組み合
わせることにより行われる。更に、不純物を除去するた
め、通常用いられる活性炭脱色処理法、再結晶法等も用
いられる。
常法により培養液から分離し採取される。例えば、培養
液から菌体を濾過あるいは遠心分離によって除去し、次
いで、イオン交換樹脂処理法、吸着クロマトグラフィー
法、溶媒抽出法、濃縮法、晶析法等の方法を適宜組み合
わせることにより行われる。更に、不純物を除去するた
め、通常用いられる活性炭脱色処理法、再結晶法等も用
いられる。
【００１６】
【実施例】次に、本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。 実施例１（変異株の取得） トリコスポロノイデス・オエドセファリス（Trichospor
onoides oedocephalisＣＢＳ６４９．６６）株を酵母エ
キス培地（ブドウ糖 ３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／
Ｖ％）に植菌し、３５℃で３日間振とう培養した。次い
で培養液を１／１５Ｍリン酸緩衝液で１０倍に希釈し、
シャーレ中で緩やかに撹拌しながら３３ｃｍの距離から
１５Ｗの紫外線ランプを３０分間照射した。続いて、紫
外線照射処理液を酵母エキス培地に接種し、３５℃で１
夜（１８時間）培養し変異を固定した後、更に、この培
養液を酵母エキス寒天培地平板（ブドウ糖３０Ｗ／Ｖ
％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％、寒天１．５Ｗ／Ｖ％）に塗
抹して２７℃で５日間培養した。次いで、得られたコロ
ニーを釣菌分離し、あらかじめ中試験管（１８×１８０
ｍｍ）に分注しておいた酵母エキス培地３ｍｌに接種
し、３５℃で７日間振とう培養した。次に、以上の方法
で得られた培養液の菌の増殖の程度を培養液の濁度を測
定すること、即ち、分光光度計（島津製作所、モデルＵ
Ｖ−２２００）により６６０ｎｍの吸光度を測定する事
により調べた。また、培養によるエリスリトールの対糖
収率は高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデル
ＬＣ−９Ａ）で培養液中のブドウ糖の残量とエリスリト
ールの生成量を測定する事で算出した。このようにし
て、培養液の濁度が低く、エリスリトールの対糖収率の
高い変異株、（ＴＯ−２４１−１４株、ＦＥＲＭ Ｐ−
１５３０９）を選択した。
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。 実施例１（変異株の取得） トリコスポロノイデス・オエドセファリス（Trichospor
onoides oedocephalisＣＢＳ６４９．６６）株を酵母エ
キス培地（ブドウ糖 ３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／
Ｖ％）に植菌し、３５℃で３日間振とう培養した。次い
で培養液を１／１５Ｍリン酸緩衝液で１０倍に希釈し、
シャーレ中で緩やかに撹拌しながら３３ｃｍの距離から
１５Ｗの紫外線ランプを３０分間照射した。続いて、紫
外線照射処理液を酵母エキス培地に接種し、３５℃で１
夜（１８時間）培養し変異を固定した後、更に、この培
養液を酵母エキス寒天培地平板（ブドウ糖３０Ｗ／Ｖ
％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％、寒天１．５Ｗ／Ｖ％）に塗
抹して２７℃で５日間培養した。次いで、得られたコロ
ニーを釣菌分離し、あらかじめ中試験管（１８×１８０
ｍｍ）に分注しておいた酵母エキス培地３ｍｌに接種
し、３５℃で７日間振とう培養した。次に、以上の方法
で得られた培養液の菌の増殖の程度を培養液の濁度を測
定すること、即ち、分光光度計（島津製作所、モデルＵ
Ｖ−２２００）により６６０ｎｍの吸光度を測定する事
により調べた。また、培養によるエリスリトールの対糖
収率は高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデル
ＬＣ−９Ａ）で培養液中のブドウ糖の残量とエリスリト
ールの生成量を測定する事で算出した。このようにし
て、培養液の濁度が低く、エリスリトールの対糖収率の
高い変異株、（ＴＯ−２４１−１４株、ＦＥＲＭ Ｐ−
１５３０９）を選択した。
【００１７】実施例２
本発明の変異株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）を酵母エ
キス培地（ブドウ糖３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ
％）４０ｍｌに植菌し、３５℃、３日間振とう培養し
た。続いて得られた培養液を、酵母エキス培地（ブドウ
糖４０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１．３Ｗ／Ｖ％）１．５Ｌ
に３ｍｌ接種（対培地量の０．２％）し、ミニジャーフ
ァーメンター（エイブル株式会社：モデルＤＰＣ−２）
で３５℃、撹拌数４５０回／分、培地ｐＨ４で７日間培
養した。培養終了後、培養液中のエリスリトールを測定
した結果、対糖収率は４７．０％であった。次に、この
培養液の一部２５０ｍｌから菌体を濾去して得た上澄液
を活性炭による脱色及びイオン交換樹脂（ＳＫ−１Ｂ
（三菱化学）：ＰＡ−４０８（三菱化学））による脱塩
をし、得られた溶出液を糖濃度５０％以上に濃縮した
後、ゆっくりと冷却することによりエリスリトールの結
晶を得た。この結晶の赤外線吸収スペクトル、融点及び
核磁気共鳴スペクトルをエリスリトールの標準品と比較
したところ、両者は一致する事から本物質はエリスリト
ールである事を確認した。
キス培地（ブドウ糖３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ
％）４０ｍｌに植菌し、３５℃、３日間振とう培養し
た。続いて得られた培養液を、酵母エキス培地（ブドウ
糖４０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１．３Ｗ／Ｖ％）１．５Ｌ
に３ｍｌ接種（対培地量の０．２％）し、ミニジャーフ
ァーメンター（エイブル株式会社：モデルＤＰＣ−２）
で３５℃、撹拌数４５０回／分、培地ｐＨ４で７日間培
養した。培養終了後、培養液中のエリスリトールを測定
した結果、対糖収率は４７．０％であった。次に、この
培養液の一部２５０ｍｌから菌体を濾去して得た上澄液
を活性炭による脱色及びイオン交換樹脂（ＳＫ−１Ｂ
（三菱化学）：ＰＡ−４０８（三菱化学））による脱塩
をし、得られた溶出液を糖濃度５０％以上に濃縮した
後、ゆっくりと冷却することによりエリスリトールの結
晶を得た。この結晶の赤外線吸収スペクトル、融点及び
核磁気共鳴スペクトルをエリスリトールの標準品と比較
したところ、両者は一致する事から本物質はエリスリト
ールである事を確認した。
【００１８】実施例３（培養温度と濁度及びエリスリト
ール収率の比較） 本発明の変異株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９株）とその
親株（ＣＢＳ６４９．６６）の培養に於ける菌の増殖性
（培養液の濁度の比較で表示）の比較、及びエリスリト
ールの対糖収率（この場合は消費されたブドウ糖に対す
る収率）の比較を行った。各菌株を酵母エキス培地（ブ
ドウ糖３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌
し、３５℃で３日間振とう培養した後、予め、同酵母エ
キス培地を分注しておいたＬ型培養管に、培地量の２％
になるように接種し、振とう温度勾配培養装置（アドバ
ンテック東洋株式会社、モデルＴＮ−２１４８）を用い
て、振とう数６０回／分、温度２３〜４１℃の範囲で７
日間培養した。培養液中の菌の増殖性は培養液の濁度
（６６０ｎｍの吸光度×培養液の希釈倍数）で表示して
比較した。また、エリスリトールの対糖収率は高速液体
クロマトグラフィで培養液中のブドウ糖の残量とエリス
リトールの生成量を測定する事で算出した。尚、モニリ
エラ・トメントサ・バール・ポリニス（Moniliella tom
entosa var. pollinis ＣＢＳ４６１．６７）株、オー
レオバシデウム（Aureobasidium sp.ＳＮ−Ｇ４２、Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−８９４０）株についても、上記と同様の方
法で菌の増殖性を調べた。結果を表１に示す。
ール収率の比較） 本発明の変異株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９株）とその
親株（ＣＢＳ６４９．６６）の培養に於ける菌の増殖性
（培養液の濁度の比較で表示）の比較、及びエリスリト
ールの対糖収率（この場合は消費されたブドウ糖に対す
る収率）の比較を行った。各菌株を酵母エキス培地（ブ
ドウ糖３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌
し、３５℃で３日間振とう培養した後、予め、同酵母エ
キス培地を分注しておいたＬ型培養管に、培地量の２％
になるように接種し、振とう温度勾配培養装置（アドバ
ンテック東洋株式会社、モデルＴＮ−２１４８）を用い
て、振とう数６０回／分、温度２３〜４１℃の範囲で７
日間培養した。培養液中の菌の増殖性は培養液の濁度
（６６０ｎｍの吸光度×培養液の希釈倍数）で表示して
比較した。また、エリスリトールの対糖収率は高速液体
クロマトグラフィで培養液中のブドウ糖の残量とエリス
リトールの生成量を測定する事で算出した。尚、モニリ
エラ・トメントサ・バール・ポリニス（Moniliella tom
entosa var. pollinis ＣＢＳ４６１．６７）株、オー
レオバシデウム（Aureobasidium sp.ＳＮ−Ｇ４２、Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−８９４０）株についても、上記と同様の方
法で菌の増殖性を調べた。結果を表１に示す。
【００１９】
【表１】
【００２０】表１に示したように、本発明の変異株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１５３０９）は、菌体の増殖性が他の３菌
株に比較し、かなり低い事を示した。即ち、本発明の変
異株のエリスリトール生産の最適温度範囲は３５〜３７
℃で濁度は４５．９〜５１．５であった。それに対し
て、親株（ＣＢＳ６４９．６６）のエリスリトール生産
の最適温度範囲は３５〜３９℃で、濁度は８８．０〜９
７．７とほぼ２倍、即ち、菌体量がほぼ２倍を示した。
更に、モニリエラ・トメントサ・バール・ポリニス株
（Moniliella tomentosa var. pollinis ＣＢＳ４６
１．６７）の最適温度範囲は２７〜３２℃（特公平６−
３０５９２）であり、３２℃での濁度は７２．３と本発
明の変異株の約１．５倍であった。オーレオバシデウム
（Aureobasidium sp. ＳＮ−Ｇ４２、ＦＥＲＭ Ｐ−８
９４０）株の最適温度範囲は３５〜３７℃（特公平４−
１１１８９、同４−６３５）でこの時の濁度は９３．０
〜１２０．４と本発明の変異株の２倍あるいはそれ以上
を示した。
ＥＲＭ Ｐ−１５３０９）は、菌体の増殖性が他の３菌
株に比較し、かなり低い事を示した。即ち、本発明の変
異株のエリスリトール生産の最適温度範囲は３５〜３７
℃で濁度は４５．９〜５１．５であった。それに対し
て、親株（ＣＢＳ６４９．６６）のエリスリトール生産
の最適温度範囲は３５〜３９℃で、濁度は８８．０〜９
７．７とほぼ２倍、即ち、菌体量がほぼ２倍を示した。
更に、モニリエラ・トメントサ・バール・ポリニス株
（Moniliella tomentosa var. pollinis ＣＢＳ４６
１．６７）の最適温度範囲は２７〜３２℃（特公平６−
３０５９２）であり、３２℃での濁度は７２．３と本発
明の変異株の約１．５倍であった。オーレオバシデウム
（Aureobasidium sp. ＳＮ−Ｇ４２、ＦＥＲＭ Ｐ−８
９４０）株の最適温度範囲は３５〜３７℃（特公平４−
１１１８９、同４−６３５）でこの時の濁度は９３．０
〜１２０．４と本発明の変異株の２倍あるいはそれ以上
を示した。
【００２１】実施例４（糖濃度によるエリスリトールの
生産性の比較） 本発明の変異株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）と親株を
種々の糖濃度で培養した場合のエリスリトールの生産性
の比較をした。各菌株を酵母エキス培地（ブドウ糖３０
Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３５℃で
３日間振とう培養した。次いで、この培養液を、予め三
角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、即ち、
ブドウ糖の濃度を２０〜６０Ｗ／Ｖ％に調製した酵母エ
キス培地（酵母エキス培地を基本にＣ／Ｎ比は一定）に
培地量の２％接種し、振とう数２２０回／分、３５℃で
培養した。培養時間は、糖濃度即ち、消費される糖の速
さに応じて３〜１１日間培養した。その結果を表２に示
した。
生産性の比較） 本発明の変異株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）と親株を
種々の糖濃度で培養した場合のエリスリトールの生産性
の比較をした。各菌株を酵母エキス培地（ブドウ糖３０
Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３５℃で
３日間振とう培養した。次いで、この培養液を、予め三
角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、即ち、
ブドウ糖の濃度を２０〜６０Ｗ／Ｖ％に調製した酵母エ
キス培地（酵母エキス培地を基本にＣ／Ｎ比は一定）に
培地量の２％接種し、振とう数２２０回／分、３５℃で
培養した。培養時間は、糖濃度即ち、消費される糖の速
さに応じて３〜１１日間培養した。その結果を表２に示
した。
【００２２】
【表２】
【００２３】表２に示したように、親株、変異株ともブ
ドウ糖の濃度２０〜５０Ｗ／Ｖ％でエリスリトールの高
い対糖収率を示した。また、ブドウ糖の濃度３０Ｗ／Ｖ
％以上の高い糖濃度に於て、本発明の変異株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５３０９）は親株に比較し、更にエリスリトー
ルの対糖収率が高く良好な成績を示した。また、本発明
の変異株は親株に比較し、培養液の濁度が低く、即ち、
菌体の増殖量が少ない事を示している。
ドウ糖の濃度２０〜５０Ｗ／Ｖ％でエリスリトールの高
い対糖収率を示した。また、ブドウ糖の濃度３０Ｗ／Ｖ
％以上の高い糖濃度に於て、本発明の変異株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５３０９）は親株に比較し、更にエリスリトー
ルの対糖収率が高く良好な成績を示した。また、本発明
の変異株は親株に比較し、培養液の濁度が低く、即ち、
菌体の増殖量が少ない事を示している。
【００２４】実施例５（糖の種類によるエリスリトール
の生産性の比較） 酵母エキス培地を基本培地として、各種糖類（ブドウ
糖、フルクトース、マルトース、蔗糖）を用いて、本発
明の変異株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）と親株を培養
した。即ち、本発明の変異株又は親株を酵母エキス培地
（ブドウ糖３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植
菌し、３５℃で３日間振とう培養した。次いで、得られ
た培養液を、酵母エキス培地を基本にそれぞれの糖を添
加した培地（糖４０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１．３Ｗ／Ｖ
％）に接種（対培地量０．２５％）し、三角フラスコに
よる振とう培養を３５℃で７日間行い、培養液中に含ま
れるエリスリトール等の量を測定した。その結果を表３
に示した。
の生産性の比較） 酵母エキス培地を基本培地として、各種糖類（ブドウ
糖、フルクトース、マルトース、蔗糖）を用いて、本発
明の変異株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）と親株を培養
した。即ち、本発明の変異株又は親株を酵母エキス培地
（ブドウ糖３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植
菌し、３５℃で３日間振とう培養した。次いで、得られ
た培養液を、酵母エキス培地を基本にそれぞれの糖を添
加した培地（糖４０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１．３Ｗ／Ｖ
％）に接種（対培地量０．２５％）し、三角フラスコに
よる振とう培養を３５℃で７日間行い、培養液中に含ま
れるエリスリトール等の量を測定した。その結果を表３
に示した。
【００２５】
【表３】
【００２６】表３に示したように親株、変異株ともブド
ウ糖、フルクトース及び蔗糖から多量のエリスリトール
と少量ないし微量のグリセリン及びリビトールを産生し
た。また、マルトースからのエリスリトールの産生量は
少なかった。特に変異株はブドウ糖とフルクトースから
最も多量のエリスリトールを生成し、それぞれ対糖収率
は４５．１％と４６．３％であった。
ウ糖、フルクトース及び蔗糖から多量のエリスリトール
と少量ないし微量のグリセリン及びリビトールを産生し
た。また、マルトースからのエリスリトールの産生量は
少なかった。特に変異株はブドウ糖とフルクトースから
最も多量のエリスリトールを生成し、それぞれ対糖収率
は４５．１％と４６．３％であった。
【００２７】実施例６（ｐＨの影響試験）
本発明の変異株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）及び親株
（ＣＢＳ６４９．６６）を培養し、培地ｐＨの比較を行
った。即ち、両菌株をそれぞれ酵母エキス培地（ブドウ
糖３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３
５℃で３日間振とう培養した。次いで、得られた培養液
を、塩酸を用いて培地のｐＨを３．０〜５．０に調整し
た培地に接種（対培地量０．２％）し、ミニジャーファ
ーメンター（エイブル株式会社：モデルＤＰＣ−２）で
３５℃、撹拌数４５０回／分で７日間培養した。培地の
ｐＨは、培養終了まで初めのｐＨを保持できる様にして
培養した。その結果（各ｐＨにおける培養液の濁度及び
エリスリトールの対糖収率）を表４に示した。
（ＣＢＳ６４９．６６）を培養し、培地ｐＨの比較を行
った。即ち、両菌株をそれぞれ酵母エキス培地（ブドウ
糖３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３
５℃で３日間振とう培養した。次いで、得られた培養液
を、塩酸を用いて培地のｐＨを３．０〜５．０に調整し
た培地に接種（対培地量０．２％）し、ミニジャーファ
ーメンター（エイブル株式会社：モデルＤＰＣ−２）で
３５℃、撹拌数４５０回／分で７日間培養した。培地の
ｐＨは、培養終了まで初めのｐＨを保持できる様にして
培養した。その結果（各ｐＨにおける培養液の濁度及び
エリスリトールの対糖収率）を表４に示した。
【００２８】
【表４】
【００２９】表４に示したように本発明の変異株（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１５３０９）の菌体量（濁度）は親株トリコ
スポロノイデス・オエドセファリス（Trichosporonoide
s oedocephalis ＣＢＳ６４９．６６）に比較して少な
く、培地のｐＨ４．５以上ではほぼ半減した。
ＲＭ Ｐ−１５３０９）の菌体量（濁度）は親株トリコ
スポロノイデス・オエドセファリス（Trichosporonoide
s oedocephalis ＣＢＳ６４９．６６）に比較して少な
く、培地のｐＨ４．５以上ではほぼ半減した。
【発明の効果】本発明の変異株は、親株に比べて耐糖性
が高く、エリスリトールの収率が高く、しかも菌体の増
殖性が低いという特徴を有する。また、本発明では該変
異株又は親株、特に変異株を使用することにより、エリ
スリトールを工業的に低価格で生産することが可能とな
る。
が高く、エリスリトールの収率が高く、しかも菌体の増
殖性が低いという特徴を有する。また、本発明では該変
異株又は親株、特に変異株を使用することにより、エリ
スリトールを工業的に低価格で生産することが可能とな
る。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12N 1/00 - 1/38
C12P 7/18
ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (5)
- 【請求項１】親株に比べてエリスリトールの生産性が高
く、かつ菌体の増殖性が低いことを特徴とするトリコス
ポロノイデス・オエドセファリス（Trichosporonoides
oedocephalis）の変異株。 - 【請求項２】変異株がトリコスポロノイデス・オエドセ
ファリス（Trichosporonoides oedocephalis）ＴＯ−２
４１−１４株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３０９）であること
を特徴とする請求項１記載の変異株。 - 【請求項３】請求項１記載の変異株を高濃度の糖培地で
培養し、培地中に蓄積されたエリスリトールを採取する
ことを特徴とするエリスリトールの製造方法。 - 【請求項４】請求項２記載の変異株を用いることを特徴
とする請求項３記載のエリスリトールの製造方法。 - 【請求項５】高濃度の糖培地が糖濃度２０〜５０Ｗ／Ｖ
％であることを特徴とする請求項３又は請求項４記載の
エリスリトールの製造方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23264196A JP3423842B2 (ja) | 1996-01-19 | 1996-08-15 | 変異株及び該変異株又は親株を用いるエリスリトールの製造方法 |
| US09/091,377 US5916797A (en) | 1996-01-19 | 1997-01-17 | Mutant strain of Trichosporonoides oedocephalis |
| PCT/JP1997/000077 WO1997026323A1 (fr) | 1996-01-19 | 1997-01-17 | Variant possedant une capacite elevee de production d'erythritol et procede de production d'erythritol |
| EP97900436A EP0878540A4 (en) | 1996-01-19 | 1997-01-17 | VARIANT HAVING HIGH ERYTHRITOL PRODUCTION CAPACITY AND METHOD FOR PRODUCING ERYTHRITOL |
| KR1019980705415A KR19990077270A (ko) | 1996-01-19 | 1997-01-17 | 에리스리톨 생산능이 높은 변이주 및 에리스리톨의 제조방법 |
| CA002241954A CA2241954A1 (en) | 1996-01-19 | 1997-01-17 | A variant having a high erythritol producing ability and a method for producing erythritol |
| US09/243,886 US6074857A (en) | 1996-01-19 | 1999-02-03 | Method of producing erythritol |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8-24901 | 1996-01-19 | ||
| JP2490196 | 1996-01-19 | ||
| JP23264196A JP3423842B2 (ja) | 1996-01-19 | 1996-08-15 | 変異株及び該変異株又は親株を用いるエリスリトールの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09252765A JPH09252765A (ja) | 1997-09-30 |
| JP3423842B2 true JP3423842B2 (ja) | 2003-07-07 |
Family
ID=26362481
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23264196A Expired - Lifetime JP3423842B2 (ja) | 1996-01-19 | 1996-08-15 | 変異株及び該変異株又は親株を用いるエリスリトールの製造方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5916797A (ja) |
| EP (1) | EP0878540A4 (ja) |
| JP (1) | JP3423842B2 (ja) |
| CA (1) | CA2241954A1 (ja) |
| WO (1) | WO1997026323A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4151089B2 (ja) * | 1997-10-07 | 2008-09-17 | 三菱化学株式会社 | 高純度エリスリトール結晶の製造方法 |
| EP0939133A3 (en) * | 1998-02-03 | 1999-12-29 | Nikken Chemicals Company, Limited | Method for producing polyol by recycling microorganisms |
| US6455301B1 (en) * | 2001-01-12 | 2002-09-24 | Food Industry Research And Develpment Institute | Erythritol—producing Moniliella strains |
| EP2436772A1 (en) * | 2010-09-30 | 2012-04-04 | Annikki GmbH | Method for the production of erythritol |
| MX355760B (es) | 2010-12-13 | 2018-04-27 | Salix Pharmaceuticals Inc | Formulaciones gástricas y colónicas y métodos para elaborar y usar las mismas. |
| MY169799A (en) | 2011-12-22 | 2019-05-16 | Xyleco Inc | Processing biomass for use in fuel cells related applications |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AR246307A1 (es) * | 1983-08-24 | 1994-07-29 | Cpc International Inc | Procedimiento a escala industrial, para la produccion de polioles por fermentacion de azucares. |
| JPH0734749B2 (ja) * | 1988-02-03 | 1995-04-19 | 日本碍子株式会社 | エリスリトールの製造方法 |
| US5453491A (en) * | 1990-09-11 | 1995-09-26 | Kiyoshi Takatsu | Murine interleukin-5 receptor |
| DE69218687T2 (de) * | 1991-07-26 | 1997-07-10 | Mitsubishi Chem Corp | Verfahren zur Herstellung von Erythritolkristallen |
| DE69720379T2 (de) * | 1996-12-02 | 2004-02-12 | Mitsubishi Chemical Corp. | Verfahren zur Herstellung von Erythritol |
| KR100541578B1 (ko) * | 1997-12-04 | 2006-04-06 | 미쓰비시 가가꾸 가부시키가이샤 | 에리트리톨 생산방법 |
-
1996
- 1996-08-15 JP JP23264196A patent/JP3423842B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-01-17 US US09/091,377 patent/US5916797A/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-17 CA CA002241954A patent/CA2241954A1/en not_active Abandoned
- 1997-01-17 EP EP97900436A patent/EP0878540A4/en not_active Withdrawn
- 1997-01-17 WO PCT/JP1997/000077 patent/WO1997026323A1/ja not_active Application Discontinuation
-
1999
- 1999-02-03 US US09/243,886 patent/US6074857A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
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|---|
| Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．，Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．４（１９９３），ｐ．３８３−３８８ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09252765A (ja) | 1997-09-30 |
| CA2241954A1 (en) | 1997-07-24 |
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