WO1996026287A1 - Procedes enzymatiques d'enrichissement en acides gras polyinsatures - Google Patents

Procedes enzymatiques d'enrichissement en acides gras polyinsatures

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Definitions

  • the present invention relates to new processes for the production of polyunsaturated fatty acid esters in pure or concentrated form.
  • It relates more particularly to processes for the production of polyunsaturated fatty acid esters of the ⁇ - 3 series from fatty acid glycerides extracted from fish oils, from phospholipids, or from 1,2-dialkylene glycerols , using an enzyme treatment.
  • DHA docosahexaenoic acid
  • EPA eicosapentaenoic acid
  • It also relates to a process for producing glycerides of polyunsaturated fatty acids, characterized in that one obtains starting from natural phospholipids, in the presence of polyunsaturated fatty acids, by enzymatic treatment, phospholipids whose EPA content and / or DHA represents approximately 50% of the total fatty acids.
  • the invention also relates to a process for producing synthetic glycerides, characterized in that a 1,2-dialkoylene glycerol is subjected to an enzymatic action in the presence of concentrated or pure polyunsaturated fatty acids, in order to obtain a monoacylglyceride of which the EPA and DHA content represents at least 70% of the total fatty acids
  • the invention relates in particular to a process for obtaining concentrates of polyunsaturated fatty acids which consists in subjecting a fish oil containing DHA and EPA to a selective enzymatic hydrolysis, in position 1, 3 or 2, to obtain a mixture of free fatty acids, monoglycerides and diglycerides, to separate the constituents of this mixture, to collect the free fatty acids which are purified by crystallization to urea, to increase the EPA and / or DHA content, to decomplex the isolated fatty acids, to carry out an interesterification between the free fatty acids, concentrated in polyunsaturated fatty acids and the crude oil, in the presence of a lipase specific position or steric hindrance, in order to obtain a mixture enriched in glycerides of polyunsaturated fatty acids, which are separated and that the free fatty acids are freed.
  • the sardine oil obtained by pressing fresh sardines caught in cold seas is used.
  • the sardine offers the advantage of an easy and constant supply.
  • the oil of ocular orbital tuna exploited industrially, although having a higher content of EPA and DHA, has the disadvantage that the supply is limited in raw material.
  • the initial enzymatic hydrolysis has the effect of splitting the ester function of the glycerol esterified by a polyunsaturated fatty acid and leaving intact the other ester functions according to the diagram.
  • the free polyunsaturated fatty acids are reesterified in the presence of an enzyme and in particular in the presence of either a non-specific lipase or a lipase specific for position 2. If a non-specific lipase is used, the glycerol will be reacted with the mixture of polyunsaturated free fatty acids and a triglyceride is obtained whose polyunsaturated fatty acid content is of the order of 60%.
  • the free fatty acids are purified by cold crystallization in the presence of urea, to increase the content of EPA and DHA.
  • This concentrated mixture is then subjected to an interesterification by a triglyceride whose position 2 is occupied by a polyunsaturated fatty acid, and the positions 1,3 by a saturated fatty acid, in the presence of a specific lipase-1,3, to obtain a triglyceride in which at least two hydroxyls are esterified by a polyunsaturated fatty acid.
  • the invention also relates to a process for the synthesis of triglycerides enriched in unsaturated fatty acids, which consists in saponifying the fish oil chemically or enzymatically, to obtain a mixture of saturated and unsaturated fatty acids, to be converted saturated fatty acids in lower alkyl esters in the presence of a selective lipase to obtain a mixture of alkyl esters of saturated fatty acids and of unsaturated fatty acids, to separate the alkyl esters of saturated fatty acid, to collect the free unsaturated fatty acids and to react these fatty acids with glycerol in the presence of a specific lipase to obtain a mixture of triglycerides enriched with polyunsaturated fatty acids.
  • the enrichment of crude sardine oil, by extraction of polyunsaturated fatty acids (AGHI), with an average content of 30% to a content corresponding to 50-60% of the total fatty acids can be carried out according to one of the two schematic processes (A and B) according to the invention.
  • fish oils The main characteristic of fish oils is their high natural content (20-30%) of polyunsaturated fatty acids, types ⁇ -3, and in particular docosahexaenoic acids (DHA) and eicosapentaenoic acids (EPA).
  • DHA docosahexaenoic acids
  • EPA eicosapentaenoic acids
  • fish oil is the only commercially exploitable source of long chain polyunsaturated fatty acids, despite attempts to produce it by microbiological processes.
  • intestinal or adipose tissue lipases from the muscle of insects, which preferentially hydrolyze monoglycerides compared to triglycerides.
  • cabbage lipase (B.napus) which recognizes the position of the double bond on fatty acids and differentiates ⁇ -linolenic acid from DHA, or Geotrichum lipase which is specific for fatty acids containing unsaturations CIS-9 and CIS-9 -CIS-12.
  • lipases This specificity of lipases is generally the basis of the fractionation processes of commercially advantageous fatty acids contained in vegetable or fish oils.
  • the polyunsaturated fatty acids are either in position 2 or in position 1.3. It is therefore necessary, after this determination, to choose a lipase suitable for the hydrolysis reaction as for the interesterification or transesterification reaction.
  • the technique used to determine this position is based on hydrolysis by specific enzymes and on analysis by physical methods (CPG, CCM or HPLC) of the content of EPA and DHA in the hydrolysis products.
  • the results provide a triglyceride content of polyunsaturated fatty acids at around 70%, with an EPA / DHA ratio of the order of 1.
  • the free fatty acids are separated from the other hydrolysis products (monoglycerides, diglycerides, glycerol) by washing with basic water or by saponification.
  • the third step of the process consists in purifying the mixture of free fatty acids by cold crystallization in the presence of urea in an ethanolic medium.
  • the saponification stage necessary to separate the free fatty acids from the other products of the enzymatic hydrolysis must respond to precise experimental conditions, because it determines the effects of the hydrolysis products on specific and non-specific lipases, on the yield of separation and on the purification yield.
  • the step of interesterification of the crude oil with concentrated polyunsaturated fatty acids is an enzymatic step opposite to the initial step of the process according to the invention. It requires completely different experimental conditions to shift the reaction balance and, in particular, the choice of water concentration, the possible presence of organic solvents or the choice of pH and concentrations.
  • the concentrated polyunsaturated fatty acids are brought into contact with the crude fish oil and with the chosen enzyme.
  • the enzyme used is a lipase specific for ester bonds not containing polyunsaturated fatty acid, so as to preserve the ester bond combined with a fatty acid. polyunsaturated present, initially, in crude oil
  • the water content is preferably low and kept constant.
  • the nature of the solvent, if any, is important. This must be compatible with the enzyme.
  • the enzyme used is a Mucor miehei lipase marketed under the name NOVOZYME 435 by the company Novo Nordisk.
  • the enzyme used can be separated at the end of the reaction and, optionally, reused.
  • An immobilized enzyme makes separation and reuse easier.
  • the free fatty acids are separated by washing in aqueous phase at basic pH.
  • the triglycerides formed do not pass into the aqueous phase and can then be taken up in a solvent.
  • the desired concentrated mixture is obtained containing between 50 and 70% of polyunsaturated fatty acids.
  • Another subject of the invention is concentrates of polyunsaturated fatty acids, rich or enriched in eicosapentaenoic acid and in docosahexaenoic acid, obtained by the process according to the invention. It also relates to triglycerides enriched in eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid obtained by the interesterification process according to the invention. It also relates to fish oils and in particular sardine oils enriched or concentrated in EPA and / or in DHA obtained according to the process of the invention.
  • the invention also resides in a process for the enrichment of polyunsaturated fatty acids (EPA C 20: SnJ , DHA C 22: 6n -,) of phospholipids by the enzymatic route which consists in reacting one or more phospholipids with an AGHI of the series n3 in the presence of a lipase to obtain a modified phospholipid. It involves modifying the * fatty acid composition of the phospholipids by the enzymatic process previously described, that is to say by a transesterification reaction causing AGHI and phospholipids to react in the presence of a lipase.
  • the reaction can be summarized as follows:
  • the phospholipids obtained contain an EPA and DHA content of approximately 50% of the total fatty acids.
  • Phospholipids are important majority constituents of cell membranes.
  • the fatty acid chains, the components play an essential role in terms of bran fluidity and more particularly the chains of highly polyunsaturated fatty acids including EPA and DHA, which allow normal cellular functioning.
  • phospholipids have applications in cosmetology (liposomes) and in the food industry because of their amphiphilic nature.
  • the subject of the invention is also the phospholipids enriched or concentrated in EPA and / or DHA obtained according to the process of
  • the invention also relates to the synthesis of AGHI monoacylglycerols (n-3) by enzymatic synthesis from a 1,2 alkylene glycerol.
  • the method according to the invention consists in reacting AGHI (n3) in the presence of a lipase (example: Mucor miehei lipase) with glycerol, two of whose alcohol functions are blocked, by the route previously described for the enzymatic synthesis of triglycerides.
  • Monoglycerides are sought after mainly for their emulsifying properties in the fields of cosmetics, pharmaceuticals and the food industry.
  • Another subject of the invention is the glyceric monoesters enriched or concentrated in EPA and / or in DHA obtained according to the process of the invention.
  • the methods of the invention can include numerous variants to adapt to the various particular modalities made necessary by the variability of the raw material and in particular of fish oil in its fatty acid content and in the triglyceride ratios of polyunsaturated fatty acids and triglycerides of saturated fatty acids, without departing from the scope of the invention.
  • One or more steps of the methods described above can also be replaced by an extraction using a super-critical fluid such as, for example, supercritical CO 2 .
  • a super-critical fluid such as, for example, supercritical CO 2 .
  • Saponification triglycerides are saponified from an oil preferably rich in AGHI.
  • the reaction is carried out in basic ethanolic medium, for example 1 volume of sardine oil for 1 volume of the saponification mixture (1/3 of water to
  • the depletion ratios are: 1 volume of oil / 2 volumes of urea / 6 to 8 volumes of ethanol
  • the enriched phase reaches values close to 85% of AGHI relative to the total fatty acids.
  • the monoacylglycerides with a high content of omega-3 AGHI, produced, may constitute a possible marketing route. Indeed, they would be more easily absorbed in the intestinal wall compared to triglycerides. Furthermore, the AGHIs are preferable in their form of monoacylglycerides to their highly oxidizable free form. According to its specificity, the lipase hydrolyzes the triglyceride either according to the positions on the glyceride or according to the steric hindrance of fatty acids. Thus, the choice of the lipase applied to an oil whose distribution of fatty acids on the glyceric skeleton is known, makes it possible to exert an influence on the EPA / DHA balance, depending on the intended application. The fatty acids produced by hydrolysis are removed by washing with basic water. According to this process, no solvent is used.
  • Rhizopus arrhizus lipase T 0
  • the first route that is to say hydrolysis followed by grafting
  • the hydrolysis products mainly represented by monoacylglycerides are likely to be marketable.
  • a mixture of mono and diacylglycerides can be obtained with either a DHA / EPA balance of 1.1 with the lipase of Pseudomonas fluorescens or else of 4 with the lipase of Mucor miehe ⁇ .
  • a grafting of these mono and di ⁇ acylglycerides with purified AGHI at a known DHA / EPA balance, using a non-specific enzyme allows '' Get triglycerides rich in AGHI.
  • monoacylglycerides rich in AGHI can be easily produced by an enzymatic grafting of purified AGHI on natural glycerol.
  • Enzyme (IM immobilized Lipozyme from ⁇ ovo ⁇ ordisk): 20g
  • the reaction takes place under an inert atmosphere, at a temperature of 45 ° C with stirring. A prior hydration of the enzyme is recommended. The reaction time is approximately 9 hours, beyond an oxidation of the AG ⁇ I in the presence can lead to one lipase inhibition.
  • the reaction products are then purified on a silica column.
  • the phospholipids obtained contain an EPA and DHA content of approximately 46% of the total fatty acids. (Which must mean that only one of the two possible positions ( ⁇ , ⁇ ) can be esterified with EPA or DHA in the presence of lipase Lipozyme IM).

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Abstract

L'invention se rapporte au domaine de la chimie et plus particulièrement à celui de la chimie des corps gras. L'invention réside essentiellement dans un procédé d'obtention de concentrés d'acides gras polyinsaturés qui consiste à soumettre une huile de poisson contenant de l'acide docosahexaénoïque (DHA) et de l'acide eicosapentaénoïque (EPA), à une hydrolyse enzymatique sélective, en position 1, 3 ou 2, pour obtenir un mélange d'acides gras libres, de monoglycérides et de diglycérides, à séparer les constituants de ce mélange, à recueillir les acides gras libres que l'on purifie par cristallisation à l'urée, pour augmenter la teneur en EPA et en DHA, à décomplexer les acides gras isolés, à effectuer une interestérification entre les acides gras libres, concentrés en acides gras polyinsaturés et l'huile brute, en présence d'une lipase spécifique de position ou d'encombrement stérique, afin d'obtenir un mélange enrichi en triglycérides d'acides gras polyinsaturés que l'on sépare et que l'on débarrasse des acides gras libres. L'invention réside aussi dans un procédé d'enrichissement en acides gras polyinsaturés (EPA, DHA) de phospholipides par voie enzymatique, ainsi que dans la synthèse de monoacylglycerols d'acides gras polyinsaturés de la série n3, par synthèse enzymatique à partir d'un 1,2-dialcoylène glycérol. Application des produits au domaine de l'alimentation, de la cosmétique et de la pharmacie.

Description

PROCEDES ENZYMATIQUES D'ENRICHISSEMENT EN ACIDES GRAS POLYINSATURES
La présente invention a pour objet des nouveaux procédés de production d'esters d'acides gras polyinsaturés sous forme pure ou concentrée.
Elle a plus particulièrement pour objet des procédés de production d'esters d'acides gras polyinsaturés de la série ω- 3 à partir de glycerides d'acides gras extraits d'huiles de poissons, de phospholipides, ou de 1,2-dialcoylène glycérols, à l'aide d'un traitement enzymatique.
Elle a spécifiquement pour objet un procédé de production de glycerides d'acides gras polyinsaturés sous forme pure ou concentrée à partir d'huile de poissons ou d'autres sources, caractérisé en ce qu'il permet d'obtenir, par traitement enzymatique, un mélange renfermant une teneur élevée d'acide docosahexaenoïque (DHA) et/ou d'acide eicosapentaenoïque (EPA), pouvant atteindre dans le cas d'huiles de poisson, 60 %.
Elle a également pour objet un procédé de production de glycerides d'acides gras polyinsaturés, caractérisé en ce que l'on obtient au départ de phospholipides naturels, en présence d'acides gras polyinsaturés, par traitement enzymatique, des phospholipides dont la teneur en EPA et/ou DHA représente environ 50 % des acides gras totaux.
L'invention se rapporte aussi à un procédé de production de glycerides synthétiques, caractérisé en ce que l'on soumet un 1, 2-dialcoylène glycerol à une action enzymatique en présence d'acides gras polyinsaturés concentrés ou purs, pour obtenir un monoacylglyceride dont la teneur en EPA et DHA représente au moins 70% des acides gras totaux
L'invention concerne en particulier un procédé d'obtention de concentrés d'acides gras polyinsaturés qui consiste à soumettre une huile de poisson contenant du DHA et de l'EPA, à une hydrolyse enzymatique sélective, en position 1, 3 ou 2, pour obtenir un mélange d'acides gras libres, de monoglycerides et de diglycerides, à séparer les constituants de ce mélange, à recueillir les acides gras libres que l'on purifie par cristallisation à l'urée, pour augmenter la teneur en EPA et/ou en DHA, à décomplexer les acides gras isolés, à effectuer une interesterification entre les acides gras libres, concentrés en acides gras polyinsaturés et l'huile brute, en présence d'une lipase spécifique de position ou d'encombrement stérique, afin d'obtenir un mélange enrichi en glycerides d'acides gras polyinsaturés, que l'on sépare et que l'on débarrasse des acides gras libres.
D'une manière préférée, on utilise l'huile de sardine obtenue par pression des sardines fraîches pêchées dans les mers froides. La sardine offre l'avantage d'un approvisionnement facile et constant. Au contraire, l'huile d'orbitales oculaires de thon, exploitée industriellement, quoique présentant une teneur plus élevée en EPA et DHA, présente l'inconvénient que l'approvisionnement est limité en matière première.
L'hydrolyse enzymatique initiale a pour effet de scinder la fonction ester du glycerol estérifié par un acide gras polyinsaturé et de laisser intactes les autres fonctions esters selon le schéma.A.
Il est possible également, d'hydrolyser les triglycérides présents dans l'huile de sardine par une lipase non spécifique de manière à obtenir un mélange d'acides gras libres dans lequel les acides gras polyinsaturés représentent environ 30 % du mélange total. Ce mélange d'acides gras est fractionné par des moyens physiques pour conduire à un mélange dans lequel les acides gras polyinsaturés et notamment l'EPA et le DHA prédominent, pouvant aller jusqu'à 70-80 % du mélange d'acides gras libres.
Les acides gras polyinsaturés libres sont reestérifiés en présence d'un enzyme et notamment en présence soit d'une lipase non spécifique soit d'une lipase spécifique de la position 2. Si on utilise une lipase non spécifique, le glycerol sera mis à réagir avec le mélange d'acides gras libres polyinsaturés et on obtient un triglycéride dont la teneur en acide gras polyinsaturé est de l'ordre de 60 %.
Si on interestérifie à l'aide d'une lipase spécifique de la position AG.2 un mélange d'acides gras polyinsaturés déjà concentré et d'un glycéride estérifié en une seule position par un acide gras polyinsaturé, on peut obtenir .un diglycéride-1,2 dont deux positions seulement sont estérifiées par un acide gras polyinsaturé.
Il est également possible d'hydrolyser un triglycéride dont la position 2 est estérifiée par un acide gras polyinsaturé à l'aide d'un enzyme spécifique et notamment par une lipase du type SN.2 spécifique, pour obtenir un mélange d'acides gras polyinsaturés libres, de monoglycerides et de diglycerides ayant une teneur en acides gras polyinsaturés comprise entre 80 et 100 %
Après fractionnement de ce mélange, les acides gras libres sont purifiés par cristallisation à froid en présence d'urée, pour augmenter la teneur en EPA et en DHA. Ce mélange concentré est alors soumis à une interesterification par un triglycéride dont la position 2 est occupée par un acide gras polyinsaturé, et les positions 1,3 par un acide gras saturé, en présence d'une lipase-1,3 spécifique, de façon à obtenir un triglycéride dont au moins deux hydroxyles sont estérifiés par un acide gras polyinsaturé.
L'invention concerne également un procédé de synthèse de triglycérides enrichis en acides gras non saturés, qui consiste à saponifier l'huile de poisson par voie chimique ou par voie enzymatique, pour obtenir un mélange d'acides gras saturés et non saturés, à convertir les acides gras saturés en esters d'alcoyle inférieur en présence d'une lipase sélective pour obtenir un mélange d'esters d'alcoyle d'acides gras saturés et d'acides gras non saturés, à séparer les esters d'alcoyle d'acide gras saturés, à recueillir les acides gras non saturés libres et à faire réagir ces acides gras avec le glycerol en présence d'une lipase spécifique pour obtenir un mélange de triglycérides enrichis en acides gras polyinsaturés.
Les schémas joints illustrent ces diverses variantes du procédé.
L'enrichissement de l'huile brute de sardine, par extraction des acides gras polyinsaturés (AGHI) , d'une teneur moyenne de 30 % à une teneur correspondant à 50-60 % du total en acides gras peut être mené selon l'un des deux procédés schématisés (A et B) selon l'invention.
Jusqu'à ces dernières années, la majorité de la production d'huile de poissons, considérée comme un sous-produit de la transformation, était destinée, après hydrogénation, à la fabrication de la margarine. La faible valeur ajoutée du produit et la mise en oeuvre de traitements physico-chimiques pour l'extraction, la désodorisation, la décoloration et l'hydrogénation entraînant une destruction des propriétés de l'huile, explique le peu d'intérêt des industriels en ce qui concerne ce type de procédé.
La principale caractéristique des huiles de poissons est leur teneur naturelle élevée (20-30 %) en acides gras polyinsaturés, de types ω-3, et en particulier en acides docosahexaenoïque (DHA) et eicosapentaénoïque (EPA). A l'heure actuelle, l'huile de poisson est la seule source commercialement exploitable d'acides gras polyinsaturés à longue chaîne, malgré les tentatives de production par des procédés microbiologiques.
Depuis les études épidémiologiques rapportées par Bang et al en 1971, et les études physiologiques sur ce sujet, il est apparu que les acides gras essentiels sont les principaux constituants des phospholipides de la rétine, de la matière grise, de l'épiderme. ils jouent un rôle important au niveau du système nerveux central et présentent des propriétés pharmacologiques importantes dans les maladies cardio-vasculaires, en tant qu'antithrombotiques. En conséquence, l'intérêt que montrent les industries pharmaceutiques, cosmétiques et parapharmaceutiques est à l'origine d'un marché en pleine expansion, aux USA, au JAPON et en EUROPE. Le marché des AGHI (acides gras polyinsaturés) , sur la base de la qualité des huiles et donc de la valeur ajoutée, présente 3 domaines d'utilisation :
* les huiles brutes, jusqu'à 30 % en AGHI, pour les applications en Industrie agro-alimentaire (IAA), l'oléochimie, biopolymères, alimentation animale.
* les huiles enrichies, de 30 à 60 %, pour les applications pharmaceutiques et cosmétiques.
* les AGHI purifiés, de 80 à 98 % pour la pharmacie.
Actuellement, les motifs de contestation de l'industrie de l'huile de poisson se situent à différents niveaux, compte tenu de ces nouveaux marchés.
* qualité de la matière première
* stabilité des caractéristiques techniques au cours de l'année, nécessitant donc une sélection des huiles
* méthodes d'extraction à reconsidérer * définition des conditions de raffinage en fonction des cahiers des charges
* conditions de stockage
Les huiles de poissons, sardines ou foie de morue, contiennent en moyenne 20 à .30 % d'EPA+DHA par rapport au total des acides gras. Parmi la grande variété d'huiles de poisson, les huiles d'orbitales oculaires de thon, exploitées industriellement, se caractérisent par une teneur plus importante, jusqu'à 40 %, mais l'approvisionnement en matière première est la principale limite à sa production. Bien qu'il soit plus aisé de purifier des AGHI, libres ou sous la forme d'esters éthyliques, la demande du marché des AGHI, en particulier la pharmacie et la cosmétique, concerne exclusivement les acides gras sous forme naturelle de triglycérides pour des raisons d'efficacité.En partant d'huiles contenant jusqu'à 30 % en EPA et DHA, de nombreuses techniques sont applicables à l'huile brute, telles que la wintérisation, la distillation moléculaire ou la cristallisation par solvant.
Du fait du nombre de combinaisons possibles de la position des acides gras sur les triglycérides, le fait d'obtenir à partir d'une huile brute, des teneurs en AGHI supérieure à 30 % nécessite la mise en oeuvre de techniques plus complexes. Cependant, le fractionnement des acides gras libres ou estérifiés, jusqu'à 65-80 % est possible par un certain nombre de méthodes, telles que l'extraction par fluide supercritique, la complexation à l'urée, la chromatographie, la séparation sur zéolite et même la séparation jusqu'à 90 % est possible par HPLC.
En dehors de ces méthodes physico-chimiques, l'enrichissement par voie enzymatique a été utilisé avec succès sur des huiles végétales.
Les techniques physico-chimiques, du fait de leur coût en investissement (par exemple 3MF pour un extracteur FSC industriel de 1 m3) , ne peuvent être économiquement viables que pour des enrichissements supérieurs à 80 % caractérisés par une forte valeur ajoutée. Par contre, les techniques enzymatiques, plus simples et donc moins coûteuses, sont en théorie bien adaptées dans un créneau allant de l'huile brute à une huile titrant 55-60 % en AGHI.
En effet, depuis quelques années, de nombreux travaux ont montré l'importance physiologique et diététique des acides gras polyinsaturés et surtout de l'acide eicosapentaenoïque (ou EPA = acide Δ-5, 8, 11, 14, 17-eicosapentaenoïque) et de l'acide docosahexaenoïque (ou DHA = acide Δ-4, 7, 10, 13, 16, 19- docosahexaenoïque) . Ces composés ne se forment dans l'organisme humain qu'en très petites quantités et les quantités produites selon les deux schémas biologiques ci-après, vont en diminuant au cours des années, de telle sorte qu'il peut en résulter une carence chez les femmes enceintes et chez les personnes âgées. Le schéma ci-après résume le schéma de formation des acides gras polyinsaturés dans l'organisme.
Figure imgf000009_0001
Les applications des enzymes dans le traitement du poisson sont multiples, production d'hydrolysats protéiques par des proteases, ensilage, dépeçage du thon, attendrissement de la chair, hydrolyse des tissus enveloppant les oeufs (caviar) , élimination des membranes de foie. En ce qui concerne les huiles, de nombreuses publications montrent l'intérêt des traitements enzymatiques pour extraire et purifier les acides gr-is polyinsaturés. Les enzymes les plus couramment utilisées sont des lipases qui permettent, soit d'hydrolyser les triglycérides en acides gras et glycerol dans des conditions aqueuses, soit inversement, d'esterifier les acides gras dans des conditions anhydres ou en présence de solvants organiques. De nombreuses lipases hydrolysent les triglycérides selon la séquence suivante :
2-monoglycéride
Figure imgf000010_0001
Cependant, certains lipases ne répondent pas à cette cinétique du fait de la "reconnaissance" spécifique : - de certains acides gras
- de la position de ces acides gras sur le triglycéride
- de glycerides de différents poids moléculaires ou
- de leur stéréospécificité.
II existe ainsi de nombreuses lipases de spécificités différentes :
• les lipases intestinales ou de tissu adipeux, du muscle d'insectes, qui hydrolysent preferentiellement les monoglycerides comparativement aux triglycérides.
• les lipases de Mucor, de Rhizopus, de lait, et la lipase pancréatique de porc, qui sont spécifiques des positions 1,3 sur le triglycéride, alors que la lipase de Pseudomonas est spécifique de la position 2. « la lipase de Candida qui hydrolyse preferentiellement les liaisons d'ester de DHA.
• la lipase de chou (B.napus) qui reconnaît la position de la double liaison sur les acides gras et différencie l'acide α- linolénique du DHA, ou la lipase de Geotrichum qui est spécifique des acides gras contenant des insaturations CIS-9 et CIS-9 -CIS-12.
Cette spécificité des lipases est généralement à la base des procédés de fractionnement d'acides gras commercialement intéressants contenus dans les huiles végétales ou de poissons.
On a ainsi décrit des procédés d'enrichissement d'acide α- linolénique dans une huile de primevère (de 9,5 % à 64,6 %) avec une lipase de chou; de DHA dans une huile de foie de morue (de 12,7 à 45,9 %) avec une lipase de Mucor; d'EPA + DHA dans une huile de foie de morue (de 23 à 72,2 %) avec une lipase de Mucor; de DHA dans une huile de thon (facteur de concentration=3) avec une lipase de Candida; d'acide 5- eicosaenoique (20:1) dans une huile de Meadowfoam (de 83,5 à 95 %) par une lipase de Chromobactérium.
Schématiquement, la préparation de triglycérides enrichis en AGHI est basée sur une interesterification catalysée par une lipase sélective :
R
Figure imgf000011_0001
d'AGHI en excès)
R " = -H = -Et
Cependant, les procédés enzymatiques antérieurs nécessitent un apport d'AGHI, libres ou estérifiés, de pureté élevée. En conséquence, cet apport doit être précédé d'une hydrolyse totale des triglycérides pour libérer les AGHI libres par une lipase et d'une purification par voie chimique ou à l'aide de lipases spécifiques.
Ce sont des difficultés particulières que le présent procédé vise à résoudre.
Selon un des procédés de l'invention, il est nécessaire de déterminer au préalable la position des acides gras polyinsaturés dans les triglycérides d'huile de sardines traitée. Selon les espèces, et peut-être selon les saisons, les acides gras polyinsaturés sont soit en position 2, soit en position 1,3. Il est donc nécessaire, après cette détermination, de choisir une lipase appropriée pour la réaction d'hydrolyse comme pour la réaction d' interesterification ou de transestérification. La technique utilisée pour déterminer cette position, est basée sur l'hydrolyse par des enzymes spécifiques et sur l'analyse par des méthodes physiques (CPG, CCM ou HPLC) de la teneur en EPA et en DHA dans les produits d'hydrolyse.
A partir des stocks d'enzymes disponibles dans le commerce (estérases et lipases) , immobilisés ou non, les tests d'hydrolyse ont été effectués pour déterminer l'optimum en matière de teneur en acides gras polyinsaturés de manière à ce que les étapes ultérieures de séparation et de purification soient facilités.
Les paramètres étudiés ont été les suivants :
• choix des enzymes en fonction de leur spécificité : hydrolyse des longues chaînes d'AG, hydrolyse des courtes chaînes spécifiquement, hydrolyse des liaisons EPA et DHA spécifiquement
• teneur en eau (dont dépend la cinétique de la réaction) • rapport huile/enzyme
• température
• inhibition par les produits de la réaction
A partir des résultats à l'échelle du laboratoire, une montée en échelle (scale-up) (facteur 10) a été expérimenté pour évaluer la rentabilité économique de cette phase.
Ces essais ont montré que trois enzymes conduisaient aux meilleurs rapports EPA/DHA, à savoir : - une lipase de Pseudomonas fluorescenε
- une lipase de Mucor javanicus
- une lipase de Mucor miehei
Les résultats fournissent une teneur en triglycérides à acides gras polyinsaturés à 70 % environ, avec un rapport EPA/DHA de 1'ordre de 1. A l'étape suivante, les acides gras libres sont séparés des autres produits d'hydrolyse (monoglycerides, diglycerides, glycerol) par lavage à l'eau basique ou par saponification.
La troisième étape du procédé consiste à purifier le mélange d'acides gras libres par cristallisation à froid en présence d'urée en milieu éthanolique.
Les essais effectués ont montré que les acides gras à longue chaîne en C20 ou en C22 cristallisaient plus facilement à froid
(-10°C) après complexation à l'urée et qu'ainsi, on pouvait obtenir une concentration et des rendements intéressants en acides gras polyinsaturés (de 63 à 83 %) . Cependant, cette technique basée sur la solubilité différentielle des acides gras dans le solvant utilisé, nécessite une adaptation aux acides gras polyinsaturés désirés et une optimisation des paramètres de précipitation (température, rapports Urée/Acide gras polyinsaturé) et des conditions de décomplexâtion.
L'étape de saponification nécessaire pour séparer les acides gras libres des autres produits de l'hydrolyse enzymatique doit répondre à des conditions expérimentales précises, car elle détermine les effets des produits d'hydrolyse sur les lipases spécifiques et non spécifiques, sur le rendement de séparation et sur le rendement de purification.
L'étape d'interesterification de l'huile brute par des acides gras polyinsaturés concentrés, est une étape enzymatique inverse de l'étape initiale du procédé selon l'invention. Elle nécessite des conditions expérimentales totalement différentes pour déplacer l'équilibre réactionnel et, en particulier, le choix de la concentration en eau, la présence éventuelle de solvants organiques ou le choix du pH et des concentrations. Les acides gras polyinsaturés concentrés sont mis en contact avec l'huile de poissons brute et avec l'enzyme choisi. L'enzyme utilisé est une lipase spécifique des liaisons esters ne contenant pas d'acide gras polyinsaturé, de manière à préserver la liaison ester combinée à un acide gras polyinsaturé présent, initialement, dans l'huile brute
(± 30 %) .
La teneur en eau est de préférence faible et maintenue constante. La nature du solvant, s'il y en a, est importante. Celui-ci doit être compatible avec l'enzyme.
D'une manière préférée, l'enzyme utilisée est une lipase de Mucor mieheï commercialisée sous la dénomination NOVOZYME 435 par la Société Novo Nordisk.
L'enzyme utilisé peut être séparé en fin de réaction et, éventuellement, réutilisé. Un enzyme immobilisé permet plus facilement une séparation et une réutilisation.
Après réaction d'interesterification, les acides gras libres sont séparés par lavages en phase aqueuse à pH basique. Les triglycérides formés ne passent pas en phase aqueuse et peuvent ensuite être repris par un solvant. Par évaporation, on obtient le mélange concentré désiré renfermant entre 50 et 70 % d'acides gras polyinsaturés.
La détermination de la position des acides gras polyinsaturés sur les triglycérides permet d'effectuer le choix entre les deux variantes de procédé : position 1,3 — procédé A position SN.2 -→ procédé B
L'invention a encore pour objet des concentrés d'acides gras polyinsaturés, riches ou enrichis en acide eicosapentaenoïque et en acide docosahexaenoïque, obtenus par le procédé selon l'invention. Elle a encore pour objet, des triglycérides enrichis en acide eicosapentaenoïque et en acide docosahexaenoïque obtenus par le procédé d'interesterification selon l'invention. Elle a aussi pour objet les huiles de poissons et notamment les huiles de sardines enrichies ou concentrées en EPA et/ou en DHA obtenues selon le procédé de l'invention.
L'invention réside également dans un procédé d'enrichissement en acides gras polyinsaturés ( EPA C20:SnJ, DHA C22:6n-, ) de phospholipides par voie enzymatique qui consiste à faire réagir un ou des phospholipides avec un AGHI de la série n3 en présence d'une lipase pour obtenir un phospholipide modifié. II s'agit de modifier la composition en* acides gras des phospholipides par le procédé enzymatique précédemment décrit, c'est à dire par une réaction de transestérification faisant réagir AGHI et phospholipides en présence d'une lipase. La réaction peut être schématisée de la façon suivante:
lipase
R'-COOH R-COOH
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000015_0002
Phospholipides + AGHI(n3) Phospholipides+Acides gras modifiés
A:éthano1a iné, R' :acide gras serine ou choline de la série n3 EPA-DHA
Cette transestérification s'opère sans solvant organique en seule présence des phospholipides, des acides gras libres (AGPI) et de l'enzyme.Cependant, certains travaux semblent indiquer que l'utilisation de solvants à constante diélectrique élevée favorise l'interesterification d'acides gras (Hosoka a & ail, 1995; Mustranta & ail, 1994; Mutua & ail, 1993).La présence d'un tamis moléculaire (3A) piégant l'eau, améliore la transestérification des AGHI.
Après réaction, il est nécessaire de purifier les produits, c'est à dire les acides gras libres du pool de phospholipides, par exemple par chromatographie sur colonne de silice ou par toute autre technique de séparation (ex:ultrafiltration) . Les phospholipides obtenus contiennent une teneur en EPA et DHA d'environ 50% des acides gras totaux.
Les phospholipides sont d'importants constituants majoritaires des membranes cellulaires.Les chaînes d'acides gras les composants jouent un rôle essentiel au niveau de la fluidité me branaire et plus particulièrement les chaînes d'acides gras hautement polyinsaturés dont l'EPA et le DHA, qui permettent un fonctionnement cellulaire normal.
Par ailleurs, les phospholipides ont des applications en cosmétologie (liposomes) et dans l'industrie agro-alimentaire du fait de leur caractère amphiphile.
L'invention a aussi pour objet les phospholipides enrichis ou concentrés en EPA et/ou DHA obtenus selon le procédé de
1'invention.
L'invention concerne encore la synthèse de monoacylglycerols d'AGHI (n-3) par synthèse enzymatique à partir d'un 1,2 alcoylène glycerol.
Le procédé selon l'invention consiste à faire réagir des AGHI (n3) en présence d'une lipase (exemple: lipase de Mucor miehei) avec du glycerol dont deux des fonctions alcools sont bloquées, par la voie précédemment décrite pour la synthèse enzymatique des triglycérides.
La synthèse des monoesters glyceriques d'AGHI n-3 (EPA,DHA) peut être schématisée de la façon suivante:
Figure imgf000016_0001
1 , 2-dialcoylène 1 , 3 -dialcoylène glycerol 3 -acyl glycerol En faisant réagir des AGHI purifiés, contenant au moins 70% d'EPA et DHA, on peut envisager d'obtenir des monoacylglycérides dont l'EPA et le DHA représentent au moins 70% des acides gras totaux.
Les monoglycerides sont recherchés principalement pour leurs propriétés émulsionnantes dans les domaines de la cosmétique, de la pharmacie et de l'agroalimentaire.
L'invention a encore pour objet les monoesters glyceriques enrichis ou concentrés en EPA et/ou en DHA obtenus selon le procédé de l'invention.
Il va de soi que les procédés de l'invention peuvent comporter de nombreuses variantes pour s'adapter aux diverses modalités particulières rendues nécessaires par la variabilité de la matière première et notamment de l'huile de poisson dans sa teneur en acides gras et dans les rapports triglycérides d'acides gras polyinsaturés et triglycérides d'acides gras saturés, sans pour cela sortir du cadre de l'invention.
On peut également remplacer une ou plusieurs étapes des procédés décrits ci-dessus par une extraction à l'aide d'un fluide super critique comme par exemple le C02 supercritique.
Exemple 1
Saponification les triglycérides sont saponifiés à partir d'une huile de préférence riche en AGHI. La réaction s'effectue en milieu ethanolique basique, par exeπple 1 volume d'huile de sardine pour 1 volume du mélange de saponification (1/3 d'eau à
20 % de soude, 2/3 éthanol à 99 %) porté à chaud (70°C) pendant environ 30 mn sous atmosphère inerte.
A la suite d'étapes successives de lavage à pH acide (faisant passer les acides gras sous la forme R-COOH) , les acides sont récupérés par séparation de phase. Fractionnement -à l'urée : l'éthanol est saturé à l'urée. Cette saturation permet de se libérer des problèmes de température de fractionnement.
Les rapports d'épuisement sont : 1 volume d'huile/2 volumes d'urée/ 6 à 8 volumes d'éthanol La phase enrichie atteint des valeurs voisines de 85 % d'AGHI par rapport aux acides gras totaux.
C'est ainsi qu'en partant d'une huile de poisson à 20 % d'AGHI, on a pu obtenir une fraction contenant 70 à 75 % d'EPA+DHA par rapport aux acides gras totaux. Les rendements en AGHI obtenus par ce procédé sont proches de 85 %.
Résultats de l'hydrolyse enzymatique le positionnement préférentiel des AGHI sur le squelette glycérique est : • le DHA preferentiellement en position β à environ 60 % • l'EPA répartition quasi uniforme en α, β.
Le résultat du criblage des enzymes testés figure dans le tableau ci-après.
Dans ces premières données, il n'a pas été observé d'hydrolyse qui enrichisse la fraction d'acides gras libres en EPA et/ou DHA. On note par contre une augmentation en EPA ou DHA dans la fraction des monoacylglycérides.
Les monoacylglycérides à teneur élevée en AGHI oméga 3, produits, peuvent constituer une voie de commercialisation possible. En effet, ils seraient plus facilement absorbés au niveau de la paroi intestinale comparativement aux triglycérides. Par ailleurs, les AGHI sont préférables sous leur forme de monoacylglycérides à leur forme libre très oxydable. Suivant sa spécificité, la lipase hydrolyse le triglycéride soit en fonction des positions sur le glycéride soit en fonction de l'encombrement stérique des acides gras. Ainsi, le choix de la lipase appliquée sur une huile dont la répartition des acides gras sur le squelette glycérique est connue, permet d'exercer une influence sur la balance EPA/DHA, en fonction de l'application visée. Les acides gras produits par l'hydrolyse sont éliminés par lavage à l'eau basique. Suivant ce procédé, aucun solvant n'est utilisé.
Résultats :Criblage de l'activité des lipases
Figure imgf000019_0001
Lipase de Rhizopus arrhizus T = 0
Contrôle T = 0
Résultats après hydrolyse et extraction des MAG+DAG
%
Enzyme Rdt répartition balance de la masse DHA/EPA EPA+DHA EPλ DHA
Pseudomonas DAG 19 0,99 25,3 f luorescens MAG 81 1,1 44
Total 32,3 1,8 40,37 19,4 21
Rhizopus DAM 33 3,1 28,4 dele ar MAG 67 3.3 44,2
Total 31,8 3,23 39,3 9,3 30
Mucor DAG 16,8 2,2 21,2 javanicus MAG 83,1 4,1 40,7
Total 26,7 3,78 37,3 7,8 29,5
Mucor DAG 30 2,7 38,3 mieheï MAG 70 4 45,1
Total 22,2 3,62 43,2 9,35 33,9
Greffage enzymatique :
Exeπple d'estérification des AGHI sur du glycerol naturel : enzyme utilisé : Novozyme 435
15 heures à 45°C élimination des acides gras libres n'ayant pas réagi par lavage basique
72% de triglycérides. Triglycérides + diglycerides = 98 % DHA/EPA = 0,65 EPA+DHA = 68 % AGHI = 83 %
En tenant compte des trois voies de synthèse, et en se rapportant aux résultats d'hydrolyse de différents enzymes, la première voie, c'est-à-dire l'hydrolyse suivie d'un greffage paraît la plus appropriée car elle offre une plus grande souplesse dans la modulation du rapport DHA/EPA. Par ailleurs, les produits d'hydrolyse, représentés de façon majoritaire par des monoacylglycérides sont susceptibles d'être commercialisables.
Ainsi, suivant la lipase utilisée, on peut obtenir un mélange de mono et diacylglycérides avec soit une balance DHA/EPA de 1,1 avec la lipase de Pseudomonas fluorescens ou bien de 4 avec la lipase de Mucor mieheï. Un greffage de ces mono et di¬ acylglycérides avec des AGHI purifiés à une balance DHA/EPA connue, à l'aide d'un enzyme non spécifique (par exeπple la préparation Novozyme 435 de la société Νovo Νordisk Bioindustries (U.K)) permet d'obtenir des triglycérides riches en AGHI.
On peut remarquer que l'on peut produire facilement des monoacylglycérides riches en AGHI par un greffage enzymatique d'AGHI purifiés sur du glycerol naturel.
Une autre voie possible, celle d'une hydrolyse incomplète avec transestérification simultanée peut permettre d'aboutir à une augmentation des AGHI sur les triglycérides (Y.Shimada et al, 1994).
Exemple 2
phospholipides (origine Lucas meyers base soja) : 100g
AGHI purifiés (dont EPA, DHA) : 110g
Enzyme (Lipozyme immobilisée IM de Νovo Νordisk) : 20g
Tamis moléculaire (3A) 3 à 5g
La réaction s'opère sous atmosphère inerte, à une température de 45°C avec agitation.Une hydratation préalable de l'enzyme est conseillée.Le temps de réaction est d'environ 9 heures, au delà une oxydation des AGΗI en présence peut conduire à une inhibition des lipases.Les produits de réaction sont ensuite purifiés sur colonne de silice.
Les phospholipides obtenus contiennent une teneur en EPA et DHA d'environ 46% des acides gras totaux. (Ce qui doit signifier qu'une seule des deux positions possibles (α, β) peut être estérifiée par de l'EPA ou DHA en présence de la lipase Lipozyme IM) .

Claims

R E V E N D I C A T I O N S
1. Un procédé d'obtention de glycerides d'acides gras polyinsaturés caractérisé en ce que l'on soumet un glycéride extrait de sources naturelles ou synthétiques à l'action d'un produit enzymatique pour libérer un acide gras et traite le glycéride résultant à l'action d'un acide gras polyinsaturé en présence d'un enzyme pour former un glycéride estérifié par un acide gras polyinsaturé.
2. Un procédé d'obtention de concentrés d'acides gras polyinsaturés selon la revendication 1, par voie enzymatique, qui consiste à soumettre une huile de poisson contenant de l'acide docosahexaenoïque (DHA) et de l'acide eicosapentaenoïque (EPA) à une hydrolyse enzymatique sélective en position 1,3 ou en 2 pour obtenir un mélange d'acides gras libres, de monoglycerides et de diglycerides, à séparer les constituants de ce mélange, à recueillir les acides gras libres que l'on purifie par cristallisation à l'urée pour augmenter la teneur en EPA et en DHA, à décomplexer les acides gras isolés, puis à effectuer une interesterification entre les acides libres concentrés en acides gras polyinsaturés et l'huile brute en présence d'une lipase spécifique de position, afin d'obtenir un mélange enrichi en triglycérides d'acides gras polyinsaturés que l'on sépare et que l'on débarrasse des acides gras libres.
3. Un procédé d'enrichissement selon la revendication 1, en acides gras polyinsaturés (EPA,DHA) de phospholipides par voie enzymatique qui consiste à faire réagir les acides gras polyinsaturés (AGHI) de la série n3 et un phospholipide, en présence d'une lipase, pour obtenir un mélange de phospholipides modifiés et d'acides gras, à séparer ensuite les acides gras libres du pool de phospholipides par une technique de séparation classique pour obtenir un phospholipide de formule:
Figure imgf000024_0001
dans laquelle R' représente un AGHI(n3)
A représente de l'éthanolamine, de la serine ou de la choline.
Un procédé d'obtention selon la revendication 1, de monoacylglycérides d'acides gras polyinsaturés (AGHI)de la série n3 qui consiste à faire réagir des AGHI de la série n3 en présence d'une lipase, avec du glycerol dont deux des fonctions alcools sont bloquées sous forme de cétal, pour obtenir un monoacylglycéride de formule:
Figure imgf000024_0002
dans laquelle RI et R2 représentent des radicaux alcoyles inférieurs
AGHI représente un acide gras polyinsaturé ayant de 2 à 6 doubles liaisons.
Un procédé selon la revendication 2 dans lequel l'huile de poisson contenant du DHA et/ou de l'EPA est l'huile de sardines obtenue par pression des sardines pêchées dans les mers froides.
Un procédé selon l'une des revendications 2 et 5 dans lequel on soumet l'huile de poisson à un traitement enzymatique qui libère d'une manière non sélective tous les acides gras présents et que l'on isole séparément les acides gras polyinsaturés.
Un procédé selon l'une des revendications 2, 5 et 6 dans lequel le traitement enzymatique fournit un mélange de monoglycerides, de diglycerides et d'acides gras libres. 8. Un procédé selon l'une des revendications 2, 5, 6 et 7 dans lequel les acides gras libres libérés sont constitués principalement d'acides gras polyinsaturés.
9. Un procédé selon au moins une des revendications 2, 5 à 8 dans lequel on concentre les acides gras polyinsaturés libres par cristallisation avec de l'urée, à froid et en milieu ethanolique.
10. Un procédé selon au moins une des revendications 2, 5 à 9, dans lequel le mélange concentré d'acides gras polyinsaturés est interestérifié avec un triglycéride dont la position 2 est occupée par un acide gras polyinsaturé en présence d'une lipase-1,3 spécifique pour obtenir un triglycéride dont au moins deux hydroxyles sont estérifiés par un acide gras polyinsaturé.
11. Un procédé selon au moins une des revendications 2, 5 à 9, dans lequel le mélange concentré d'acides gras polyinsaturés est mis à réagir avec le glycerol en présence d'une lipase non spécifique pour obtenir un diglycéride dont deux fonctions alcool sont estérifiées par un acide gras polyinsaturé.
12. Un procédé selon au moins une des revendications 2, 5 à 9, dans lequel on hydrolyse un triglycéride d'huile de poisson dont une position est estérifiée par un acide gras polyinsaturé, par un enzyme non spécifique, pour obtenir un mélange d'acides gras polyinsaturé libres, de monoglycerides et de diglycerides, on fractionne ce mélange et on purifie les acides gras libres par cristallisation au froid en présence d'urée pour augmenter la teneur en EPA et en DHA, soumet le mélange concentré à une interesterification avec un triglycéride dont au moins une position est occupée par un acide polyinsaturé en présence d'une lipase spécifique de la position 2 pour obtenir un triglycéride à haute teneur en acide gras polyinsaturé. 13. Un procédé selon au moins une des revendications 2, 5 à 9, dans lequel on soumet un triglycéride d'huile de poisson dont une des fonctions hydroxyle est estérifiée par un acide gras polyinsaturé en présence de lipase spécifique 1,3 pour obtenir un mélange d'acide gras polyinsaturé, de mono- et de diglycerides que l'on fait réagir avec un triglycéride dont seule la position 2 se trouve bloquée par un acide gras polyinsaturé en présence d'une lipase 1,3 spécifique pour former un triglycéride dont au moins deux fonctions alcool sont estérifiées par un groupe acyle dérivé d'un acide gras polyinsaturé.
14. Un procédé selon au moins l'une des revendications 2, 5 à 13, dans lequel l'enzyme non spécifique est choisi parmi une lipase de Pseudomonas fluorescens, une lipase de Mucor javanicus et une lipase de Mucor mieheï.
15. Un procédé selon au moins une des revendications 2, 5 à 13, dans lequel l'enzyme spécifique est une lipase de Candida antartica, notamment celle commercialisée sous la dénomination Novozyme 435 par la Société Novo Nordisk.
16. Un procédé d'enrichissement selon la revendication 3, en AGHI de phospholipides par voie enzymatique, dans lequel l'enzyme spécifique est une lipase de Mucor mieheï, produit commercialisé sous le nom Lipozyme immobilisée IM de Novo Nordisk.
17. Un procédé d'enrichissement selon la revendication 3 en AGHI de phospholipides par voie enzymatique, dans lequel l'hydrolyse enzymatique est effectuée en présence d'un tamis moléculaire.
18. Un procédé d'obtention selon la revendication 4 de monoacylglycéride d'AGHI (n-3) qui consiste à faire réagir un 1,2-dialcoylène glycerol bloqué en présence d'une lipase, avec un acide gras polyinsaturé (AGHI) pour obtenir un 1,2-dialcoylène 3-acyl glycerol de formule:
Figure imgf000027_0001
dans laquelle AGHI représente un acide gras polyinsaturé ayant de 2 à 6 doubles liaisons
Ri et R2 représentent des radicaux alcoyles inférieurs, identiques ou différents.
19. Un procédé d'obtention de monoacylglycérides d'AGHI (n3) selon la revendication 4 qui consiste à soumettre un 1,2 alcoylidène glycéride à une hydrolyse en milieu acide pour former un monoacylglycéride de formule:
Figure imgf000027_0002
dans laquelle AGHI est défini comme précédemment.
20. Un mélange concentré d'acides gras polyinsaturés contenant 70 % environ d'acide docosahexaenoïque et d'acide eicosapentaenoïque.
21. Un mélange concentré d'acides gras selon la revendication 20, dans lequel le rapport EPA/DHA est de l'ordre de 1.
22. Une huile de sardines enrichie en EPA et/ou en DHA dont la teneur en acides gras polyinsaturés varie entre 30 et 60 % chaque fois qu'elle est obtenue par le procédé de la revendication 2.
23. Les phospholipides enrichis en EPA et/ou en DHA, de formule générale:
Figure imgf000028_0001
dans laquelle R' représente un acide gras polyinsaturé de la série n3 ayant de 2 à 6 doubles liaisons A représente de l'éthanolamine, de la serine ou de la choline dont la teneur en EPA et en DHA varie de 40 à 60% des acides gras totaux.
24. Les monoesters glyceriques enrichis en EPA et/ou en DHA de formule générale:
r-O^Rl
-0>^R2 -O-AGHI
dans laquelle Ri et R2 représentent des radicaux alcoyles inférieurs
AGHI représente un acide gras polyinsaturé ayant de 2 à 6 doubles liaisons dont la teneur en EPA et en DHA représente au moins 70% des acides gras totaux.
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003094625A1 (fr) * 2002-05-08 2003-11-20 Danmarks Tekniske Uni Technica Procede enzymatique simple en deux etapes destine a augmenter le contenu en acides gras polyinsatures d'huiles de poisson
EP1383904A1 (fr) * 2001-04-06 2004-01-28 Archer-Daniels-Midland Company Procede de production de graisses ou d'huiles
WO2004062379A2 (fr) * 2003-01-10 2004-07-29 Forinnova As Compositions alimentaires pour poissons
WO2008093378A1 (fr) * 2007-01-31 2008-08-07 Adorkem Technology Spa Processus d'enrichissement enzymatique sélectif d'un mélange contenant des oméga trois
EP1978102A1 (fr) 2007-04-02 2008-10-08 Cognis IP Management GmbH Un mélange comprenant des glycérides d'acides gras
EP1978101A1 (fr) 2007-04-02 2008-10-08 Cognis IP Management GmbH Procédé d'enrichissement en acides gras polyinsaturés
WO2008149177A2 (fr) * 2006-05-05 2008-12-11 Natural Asa Compositions lipidiques marines et leurs utilisations
WO2016092203A1 (fr) * 2014-12-10 2016-06-16 Agronutrition Procédé de préparation d'une composition de traitement de plante, composition obtenue et ses utilisations
CN108135198A (zh) * 2015-05-27 2018-06-08 英国贝尔法斯特女王大学 从甘油酯油中去除氯丙醇和/或缩水甘油、或其脂肪酸酯的方法、包括该方法的改进甘油酯油精炼方法

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2839887A1 (fr) 2002-05-22 2003-11-28 Synergia Nouvelles compositions nutraceutiques et pharmaceutiques et leurs utilisations
DK175501B1 (da) * 2002-12-02 2004-11-15 Green Earth Anlæg og fremgangsmåde til kontinuerlig hydrolyse af et proteinholdigt animalsk eller vegetabilsk råmateriale
WO2005040334A2 (fr) * 2003-10-23 2005-05-06 Enzymotec Ltd. Lipases selectives et methodes de criblage de celles-ci
US20070251141A1 (en) * 2004-02-26 2007-11-01 Purdue Research Foundation Method for Preparation, Use and Separation of Fatty Acid Esters
US20050232956A1 (en) * 2004-02-26 2005-10-20 Shailendra Bist Method for separating saturated and unsaturated fatty acid esters and use of separated fatty acid esters
EP1723096A4 (fr) * 2004-03-04 2008-03-05 Htl High Tech Lipids Ltd Triglycerides structures et emulsions contenant ces triglycerides
EP1805302B1 (fr) * 2004-10-08 2012-08-15 Novozymes A/S Hydrolyse de liaisons ester utilisant une lipase
AU2005305610A1 (en) * 2004-11-17 2006-05-26 Natural Asa Enzymatically synthesized marine phospholipids
WO2006102896A2 (fr) * 2005-03-29 2006-10-05 Aalborg Universitet Procede servant a concentrer $g(v)3-pufa a partir d'huile de poisson par hydrolyse selective au moyen de cutinase immobilisee sur nay zeolitique
US7691270B2 (en) * 2005-07-13 2010-04-06 Battelle Energy Alliance, Llc Method for removing impurities from an impurity-containing fluid stream
RU2437583C2 (ru) * 2005-12-21 2011-12-27 Бруди Текнолоджи, С.Л. Применение дгк (dha), эпк (epa) или эпк, полученных из дгк, для лечения патологии, связанной с окислительным повреждением клетки, a также их нетерапевтические применения
ES2277557B1 (es) 2005-12-21 2008-07-01 Proyecto Empresarial Brudy, S.L. Utilizacion de acido docosahexaenoico para el tratamiento del daño celular oxidativo.
US20090199462A1 (en) * 2007-03-23 2009-08-13 Shailendra Bist Method for separating saturated and unsaturated fatty acid esters and use of separated fatty acid esters
US8697138B2 (en) 2007-03-28 2014-04-15 Aker Biomarine As Methods of using krill oil to treat risk factors for cardiovascular, metabolic, and inflammatory disorders
PL2144618T3 (pl) 2007-03-28 2014-03-31 Aker Biomarine As Bio-skuteczne kompozycje z oleju krylowego
US20100226977A1 (en) * 2007-08-29 2010-09-09 Aker Biomarine Asa Low viscosity phospholipid compositions
AU2008291978B2 (en) * 2007-08-29 2012-08-09 Aker Biomarine Antarctic As A new method for making krill meal
US20090182049A1 (en) * 2008-01-16 2009-07-16 Joar Arild Opheim Pharmaceutical Composition and Method for Treating Hypertriglyceridemia and Hypercholesterolemia in Humans
US8747673B2 (en) 2008-09-25 2014-06-10 Battelle Energy Alliance, Llc Methods for recovering a solvent from a fluid volume and methods of removing at least one compound from a nonpolar solvent
US8308954B2 (en) * 2008-09-25 2012-11-13 Battelle Energy Alliance, Llc Methods for recovering a polar solvent from a fluid stream contaminated with at least one polar impurity
US8372812B2 (en) * 2009-02-26 2013-02-12 Aker Biomarine Asa Phospholipid and protein tablets
US20110223246A1 (en) * 2010-03-10 2011-09-15 Joar Opheim Docosahexaenoic acid bound in phospholipids and method of recovering same from a natural source
ES2674047T3 (es) 2012-02-17 2018-06-27 Alcresta Therapeutics, Inc. Métodos, composiciones y dispositivos para satisfacer las necesidades dietéticas de ácidos grasos
CN105263321B (zh) 2013-03-28 2018-07-27 哥伦比亚大学纽约管理委员会 用omega-3甘油酯再灌注促进对用于移植的供体器官的保护
AU2014203179C1 (en) 2013-06-14 2017-05-04 Aker Biomarine Antarctic As Lipid extraction processes
GB201400431D0 (en) 2014-01-10 2014-02-26 Aker Biomarine As Phospholipid compositions and their preparation
EP3906920A1 (fr) 2014-06-06 2021-11-10 Marine Ingredients, LLC Compositions d'oméga-3, formes posologiques et procédés d'utilisation
MX364197B (es) 2014-10-21 2019-04-16 Univ Illes Balears Proceso de sintesis de hidroxi-triacilgliceroles y usos de los mismos para la prevencion y el tratamiento de enfermedades.
CN105779140A (zh) * 2014-12-23 2016-07-20 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 一种高含量epa乙酯型鱼油的制备方法
US10864223B2 (en) 2015-02-11 2020-12-15 Aker Biomarine Antarctic As Lipid compositions
AU2016217559A1 (en) 2015-02-11 2017-08-31 Aker Biomarine Antarctic As Lipid extraction processes
EP3294850B1 (fr) * 2015-05-13 2020-09-30 Epax Norway AS Acides gras polyinsaturés à chaîne très longue
WO2017003992A1 (fr) * 2015-07-02 2017-01-05 Stepan Company Procédé de préparation de 2-monoacylglycérides
US10258590B2 (en) 2015-10-14 2019-04-16 Alcresta Therapeutics, Inc. Enteral feeding device and related methods of use
CN106609286B (zh) * 2015-10-22 2022-01-25 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 含长链多不饱和脂肪酸的磷脂的制备方法
CN110468166A (zh) * 2019-08-26 2019-11-19 中国科学院深圳先进技术研究院 甘油酯型鱼油的制备方法、浓缩型甘油酯型鱼油和鱼油制品
KR20230085877A (ko) * 2021-12-07 2023-06-14 주식회사 종근당 에이코사펜타엔산(epa)이 고 함량으로 함유된, 고 순도의 트리글리세라이드 유도체의 제조방법

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60234588A (ja) * 1984-05-07 1985-11-21 Asahi Denka Kogyo Kk 長鎖高度不飽和脂肪酸アルコ−ルエステルの製造法
JPS60234589A (ja) * 1984-05-07 1985-11-21 Asahi Denka Kogyo Kk 油脂の製造法
JPS6143143A (ja) * 1984-08-03 1986-03-01 Nisshin Flour Milling Co Ltd エイコサペンタエン酸のグリセリンエステルおよびその製法
WO1990012858A1 (fr) * 1989-04-19 1990-11-01 Novo Nordisk A/S Procede de preparation de triglyceride et d'une composition a base de triglyceride
EP0417823A2 (fr) * 1989-09-13 1991-03-20 Unilever N.V. Transestérification
JPH03108489A (ja) * 1989-09-22 1991-05-08 Meito Sangyo Kk 長鎖高度不飽和脂肪酸モノグリセリドの製造法
JPH0595792A (ja) * 1991-10-03 1993-04-20 Agency Of Ind Science & Technol 濃縮された高度不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
JPH06217783A (ja) * 1993-01-28 1994-08-09 Maruha Corp 長鎖高度不飽和脂肪酸を高純度に含むトリグリセリドの製造方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0225447A (ja) * 1988-07-13 1990-01-26 Nippon Oil & Fats Co Ltd 高度不飽和脂肪酸類の製造方法
AU6785490A (en) * 1989-12-18 1991-06-20 Kraft General Foods, Inc. Low-saturate edible oils and transesterification methods for production thereof
GB9404483D0 (en) * 1994-03-08 1994-04-20 Norsk Hydro As Refining marine oil compositions

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60234588A (ja) * 1984-05-07 1985-11-21 Asahi Denka Kogyo Kk 長鎖高度不飽和脂肪酸アルコ−ルエステルの製造法
JPS60234589A (ja) * 1984-05-07 1985-11-21 Asahi Denka Kogyo Kk 油脂の製造法
JPS6143143A (ja) * 1984-08-03 1986-03-01 Nisshin Flour Milling Co Ltd エイコサペンタエン酸のグリセリンエステルおよびその製法
WO1990012858A1 (fr) * 1989-04-19 1990-11-01 Novo Nordisk A/S Procede de preparation de triglyceride et d'une composition a base de triglyceride
EP0417823A2 (fr) * 1989-09-13 1991-03-20 Unilever N.V. Transestérification
JPH03108489A (ja) * 1989-09-22 1991-05-08 Meito Sangyo Kk 長鎖高度不飽和脂肪酸モノグリセリドの製造法
JPH0595792A (ja) * 1991-10-03 1993-04-20 Agency Of Ind Science & Technol 濃縮された高度不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
JPH06217783A (ja) * 1993-01-28 1994-08-09 Maruha Corp 長鎖高度不飽和脂肪酸を高純度に含むトリグリセリドの製造方法

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 104, no. 17, 28 April 1986, Columbus, Ohio, US; abstract no. 147186q, page 550; *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 104, no. 17, 28 April 1986, Columbus, Ohio, US; abstract no. 147187r, page 550; *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 113, no. 13, 24 September 1990, Columbus, Ohio, US; abstract no. 114028, OSADA, KYOICHI ET AL: "Modification of sardine oil by immobilized bacterial lipase" page 578; *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 116, no. 5, 3 February 1992, Columbus, Ohio, US; abstract no. 39796, KOKUSHO, SUMITAKA ET AL: "Manufacture of higher polyunsaturated fatty acid monoglycerides with alkaline lipase" page 629; *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 118, no. 13, 29 March 1993, Columbus, Ohio, US; abstract no. 123028, TOYOSHIMA, TAKASHI ET AL: "Preparation of polyunsaturated triacylglycerols via transesterification catalyzed by immobilized lipase" page 674; *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 121, no. 23, 5 December 1994, Columbus, Ohio, US; abstract no. 279091, BABA, TAKASHI ET AL: "Preparation of polyunsaturated fatty acid-high triglycerides with immobilized lipase" page 894; *
DATABASE WPI Section Ch Week 8615, Derwent World Patents Index; Class B05, AN 86-097901 *
DATABASE WPI Section Ch Week 9320, Derwent World Patents Index; Class B05, AN 93-163591 *
YUKAGAKU (1990), 39(7), 467-71 CODEN: YKGKAM;ISSN: 0513-398X *
YUKAGAKU (1993), 42(1), 30-5 CODEN: YKGKAM;ISSN: 0513-398X *

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1383904A1 (fr) * 2001-04-06 2004-01-28 Archer-Daniels-Midland Company Procede de production de graisses ou d'huiles
EP1383904A4 (fr) * 2001-04-06 2005-12-28 Archer Daniels Midland Co Procede de production de graisses ou d'huiles
WO2003094625A1 (fr) * 2002-05-08 2003-11-20 Danmarks Tekniske Uni Technica Procede enzymatique simple en deux etapes destine a augmenter le contenu en acides gras polyinsatures d'huiles de poisson
WO2004062379A2 (fr) * 2003-01-10 2004-07-29 Forinnova As Compositions alimentaires pour poissons
WO2004062379A3 (fr) * 2003-01-10 2004-10-28 Forinnova As Compositions alimentaires pour poissons
WO2008149177A3 (fr) * 2006-05-05 2009-01-29 Natural Asa Compositions lipidiques marines et leurs utilisations
WO2008149177A2 (fr) * 2006-05-05 2008-12-11 Natural Asa Compositions lipidiques marines et leurs utilisations
WO2008093378A1 (fr) * 2007-01-31 2008-08-07 Adorkem Technology Spa Processus d'enrichissement enzymatique sélectif d'un mélange contenant des oméga trois
EP1978102A1 (fr) 2007-04-02 2008-10-08 Cognis IP Management GmbH Un mélange comprenant des glycérides d'acides gras
EP1978101A1 (fr) 2007-04-02 2008-10-08 Cognis IP Management GmbH Procédé d'enrichissement en acides gras polyinsaturés
US7737289B2 (en) 2007-04-02 2010-06-15 Cognis Ip Management Gmbh Process for enriching polyunsaturated fatty acids
WO2016092203A1 (fr) * 2014-12-10 2016-06-16 Agronutrition Procédé de préparation d'une composition de traitement de plante, composition obtenue et ses utilisations
FR3029738A1 (fr) * 2014-12-10 2016-06-17 Agronutrition Procede de preparation d'une composition de traitement de plante, composition obtenue et ses utilisations
CN108135198A (zh) * 2015-05-27 2018-06-08 英国贝尔法斯特女王大学 从甘油酯油中去除氯丙醇和/或缩水甘油、或其脂肪酸酯的方法、包括该方法的改进甘油酯油精炼方法

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