WO1995012610A1 - N-alkyl-peptidchelatbildner, deren metallkomplexe mit radionukliden, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende radiopharmazeutische zusammensetzungen - Google Patents

N-alkyl-peptidchelatbildner, deren metallkomplexe mit radionukliden, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende radiopharmazeutische zusammensetzungen Download PDF

Info

Publication number
WO1995012610A1
WO1995012610A1 PCT/DE1994/001295 DE9401295W WO9512610A1 WO 1995012610 A1 WO1995012610 A1 WO 1995012610A1 DE 9401295 W DE9401295 W DE 9401295W WO 9512610 A1 WO9512610 A1 WO 9512610A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
general formula
group
cys
ile
leu
Prior art date
Application number
PCT/DE1994/001295
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hartmut Spies
Paul-Eberhard Schulze
Bernd Noll
Steffi Noll
Ludger Dinkelborg
Original Assignee
Institut für Diagnostikforschung GmbH an der Freien Universität Berlin
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institut für Diagnostikforschung GmbH an der Freien Universität Berlin filed Critical Institut für Diagnostikforschung GmbH an der Freien Universität Berlin
Priority to EP95900059A priority Critical patent/EP0726909A1/de
Priority to JP7512959A priority patent/JPH09508351A/ja
Priority to AU81038/94A priority patent/AU681919B2/en
Publication of WO1995012610A1 publication Critical patent/WO1995012610A1/de
Priority to KR1019960702247A priority patent/KR960705842A/ko
Priority to NO961743A priority patent/NO961743D0/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D457/00—Heterocyclic compounds containing indolo [4, 3-f, g] quinoline ring systems, e.g. derivatives of ergoline, of the formula:, e.g. lysergic acid
    • C07D457/04—Heterocyclic compounds containing indolo [4, 3-f, g] quinoline ring systems, e.g. derivatives of ergoline, of the formula:, e.g. lysergic acid with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 8
    • C07D457/06—Lysergic acid amides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
    • C07C327/26—Esters of monothiocarboxylic acids having carbon atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D457/00—Heterocyclic compounds containing indolo [4, 3-f, g] quinoline ring systems, e.g. derivatives of ergoline, of the formula:, e.g. lysergic acid
    • C07D457/10—Heterocyclic compounds containing indolo [4, 3-f, g] quinoline ring systems, e.g. derivatives of ergoline, of the formula:, e.g. lysergic acid with hetero atoms directly attached in position 8
    • C07D457/12—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0072—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the A ring of the steroid being aromatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/57536—Endothelin, vasoactive intestinal contractor [VIC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N

Definitions

  • N-Al yl peptide chelating agents their metal complexes with radionuclides, processes for their preparation and radiopharmaceutical compositions containing these compounds
  • the invention relates to N-alkyl peptide chelating agents, their metal complexes with radionuclides, processes for their preparation and radiopharmaceutical compositions containing these compounds.
  • the invention further relates to radiopharmaceuticals which contain these chelates in a form complexed with metals, their diagnostic kits in which the chelate can be present in a non-complexed form and which is complexed either by adding technetium or rhenium ions and also via the use of such preparations for diagnostic and therapeutic purposes.
  • Radiolabeled chemical compounds that bind to so-called carrier molecules eg, steroids, Antikör- by, lipids, proteohormones etc.
  • carrier molecules eg. steroids, Antikör- by, lipids, proteohormones etc.
  • Targeting Drug on the principle of .
  • receptors e.g. steroid conjugates
  • REPLACEMENT LEAF Antibodies are substances which are able to pass the cell wall and the blood-brain barrier and substances for checking organ functions, for example before and after transplants and for finding vascular lesions.
  • complexing agents for a large number of radionuclides are increasingly being developed and coupled to tissue or metabolism-specific carrier molecules.
  • a radioactive isotope of rhenium For therapy, one is looking for ways to use a radioactive isotope of rhenium.
  • the most commonly used radionuclide is technetium-99m, which due to its favorable physical properties (no corpuscular radiation, favorable physical half-life, 140 KeV ⁇ radiation) and the associated low radiation exposure is particularly suitable as an isotope for in-vivo diagnostics.
  • Technetium-99m can be easily obtained from nuclide generators as [99m_ c _ -pertechnetate. In order to obtain technetium-99m chelates, the pertechnetate is converted by suitable reducing agents (eg SnCl2, S2O4 2 ", etc.) into a lower oxidation state, in which the technetium-99m forms complexes with chelating agents or proteins.
  • suitable reducing agents eg SnCl2, S2O4 2 ", etc.
  • REPLACEMENT LEAF Complexing agents have also been developed from the group of cyclic amines (Troutner, DE et al.; J. Nucl. Med. 1980, 21, 443 and Gurcke, H.; DE-3 911 816), Cyclame (Ketring, AR; Troutner , DE et al.; J. Nucl. Med., 1980, 21, 443-448, Int. J. Nucl. Med. Biol. 1984, 11, 113, Volkert et al., Applied Radiat. Isot., 1982, 33, 891-896), N 0 2 systems (Pillai, MRA; Troutner, DE et al .; Inorg. Chem.
  • the object of the invention is to provide short-chain N-alkyl peptide chelating agents which complex with technetium and rhenium in a wide pH range at room temperature, both ionic and non-ionic complexes being formed and thus providing compounds which provide the Disadvantages of known 99m Tc and 180 ' 188 Re complexes do not have.
  • n a number 0, 1 or 2
  • REPLACEMENT LEAF R 1 is a straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 20 carbon atoms, which is optionally interrupted or substituted by one to three oxygen atoms, and which optionally has a terminal -
  • COOH, -OH or -NH group which is optionally esterified or etherified with glycolic acid or glycolic acid esters or ethers, the esters or ethers being formed with carboxylic acids or alcohols having up to 18 carbon atoms, or a phenyl or cyclohexyl radical which is optionally in the 4-position with a COOH, NH2 or OH group which is optionally esterified, etherified or amidated with carboxylic acids or alcohols having up to 6 carbon atoms or is substituted with a halogen atom,
  • R 4 is a methylene, propenylene amino, propinylene amino, methylene amino or methyleneoxy group
  • R 8 means a hydrogen atom or a methyl group
  • R 5 is an -NH-, -NH-CO-N ⁇ , -NH-CO-NH or methyleneoxy group
  • R 6 represents a hydrogen atom, a halogen atom or a methyl group
  • R 7 represents a hydrogen atom or a straight-chain or branched alkyl radical having up to 6 carbon atoms
  • R - * - is a hydrogen atom, an acetyl, benzoyl, p-methoxybenzyl, ace amidomethyl, benzamidornethyl, trimethylacetamidomethyl, hydroxyacetyl, ethoxyethyl, ethylthio, trityl or an easily removable sulfur protecting group
  • REPLACEMENT LEAF Formula IV shows an N3S-N-alkyl-peptide complex in the 99m Tc _ core (neutral)
  • formula VII shows an N2S2 * -N-alkyl * peptide complex in 99m Tc core (with positive charge) from R 3 S-CH 2 -CO-NR 1 [CH2-CO-NH] 0 -CH 2 -CO-R 2 .
  • 99m-p c compounds has not been described and is outstandingly suitable for displaying plaques in vascular lesions and for measuring kidney function, it being possible for the compounds to be coupled in each case to bioactive ligands.
  • REPLACEMENT LEAF or Rl is a phenyl, a p-phenylamine, a cyclohexylamine, p-hydroxyphenyl, 4-hydroxycyclohexyl, p-halophenyl or 4-halocyclohexyl group.
  • R 1 is equal to - (__H 2 ) q -00C-CH 2 -00C- (CH 2 ) r " CH 3,
  • R 1 is a straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 6 carbon atoms or a P-bromophenyl radical.
  • R 2 is a radical of the general formula II
  • REPLACEMENT LEAF R 4 is a methylene, propenylamino, propinylamino, methylenamino or methyleneoxy group and
  • R 8 represents a hydrogen atom or a methyl group.
  • a 17 ⁇ -ethynyl group of estradiol can also be coupled to an ethene.
  • the order of the ethyne and ethene groups is interchangeable; doubling the ethyne or ethene group is also advisable. It is important to have a minimum distance between the chelator and estradiol molecule, preferably a rigid ethyne or ethene group, so that the side chain cannot fold.
  • N3S-K01T1 plex as a steroid 17 ⁇ -ethynyl chelate, of the thioacetyl-glycyl-glycyl-glycyl-O-ester type (own experiments), penetrate the N - * - alkylated complexes according to the invention (N 1 methyl ) the cell wall and accumulate after iv
  • the enrichment expressed as the quotient between blood / uterus, is 0.2 and can be varied depending on the N ** alkyl chain length or substituents. Mamma-ca early detection using the SPECT method is thus possible.
  • the compound according to Example 10 is particularly preferred here.
  • R 5 is an -NH-, -NH-CO-N ⁇ , -NH-CO-NH or methylene oxy group
  • REPLACEMENT LEAF R 6 represents a hydrogen atom, a halogen atom or a methyl group
  • R 7 represent a straight-chain or branched alkyl radical having up to 6 carbon atoms.
  • the 8 ⁇ -amino-6-methyl-ergoline is optionally with alkyl substituents in the 2- and / or 6-position with a chain length of C * j_ in the 2 position or C ⁇ _3 in the 6 position and / or a methyl or halogen substituents in position 2 are preferred.
  • the substituent in the 8-position of ergoline can also be ß-CH 2 0- or ⁇ NH-CO-N ⁇ or ⁇ NH-CO-NH-.
  • the compounds of general formula I according to the invention carry a radical R 3 at the terminal sulfur atom.
  • This radical R 3 represents a sulfur protecting group which is necessary during the synthesis of the compounds of the general formula I according to the invention. Such a protective group must be easily removable. Suitable
  • R 3 are, for example, acetyl, benzoyl, p-methoxybenzyl, acetamidomethyl, benzamidomethyl, trimethylacetamidomethyl, hydroxyacetyl, ethoxyethyl or trityl groups.
  • the benzyol group is particularly preferred.
  • the present invention furthermore relates to the metal chelate complexes of radioactive metal ions with the compounds of the general formula I according to the invention, in which R 1 , R 2 and R 3 have the meaning indicated above.
  • radioactive metal ions are, for example, ions of the radioisotopes of the elements Tc, Re, Cu, Ga, Gd, Y and In.
  • the selection of the radionuclide depends on the desired type of use of the metal chelate complexes of the general formula I according to the invention.
  • Radionuclides are used for radio diagnostics or radiotherapy.
  • Radioactive metal ions of the isotopes of the elements Tc and Re are preferred.
  • the radioisotope technetium-99m is particularly preferred.
  • Another object of the present invention are to provide a third object of the present invention.
  • Endothelins endothelins, endothelin analogs, endothelin derivatives or endothelin antagonists.
  • REPLACEMENT LEAF peptides accumulating in diseased tissue the peptides having the following sequences
  • the present invention further provides a process for the preparation of the compounds of the general formula I according to the invention
  • n a number 0, 1 or 2
  • R 1 is a straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 20 carbon atoms, which is optionally interrupted or substituted by one to three oxygen atoms and which optionally carries a terminal -COOH, -OH or -NH 2 group which
  • REPLACEMENT LEAF optionally esterified or etherified with glycolic acid or glycolic acid esters or ethers, the esters or ethers being formed with carboxylic acids or alcohols having up to 18 carbon atoms, or representing a phenyl or cyclohexyl radical which may optionally be in the 4-position with a COOH, NH 2 or OH group which is optionally esterified, etherified or amidated or substituted with a halogen atom with carboxylic acids or alcohols having up to 6 carbon atoms,
  • R 4 is a methylene, propenylene amino, propinylene amino, methylene amino or methyleneoxy group
  • R 8 represents a hydrogen atom or a methyl group
  • R 5 is an -NH-, -NH-CO-N ⁇ , -NH-CO-NH or methylene oxy group
  • R 6 represents a hydrogen atom, a halogen atom or a methyl group
  • R 7 represents a hydrogen atom or a straight-chain or branched alkyl radical with up to 6 carbon atoms
  • R 3 represents a hydrogen atom, an acetyl, benzoyl, p-methoxybenzyl, acetamidomethyl, benzamidomethyl, trimethylacetamidomethyl, hydroxyacetyl, ethoxyethyl, ethylthio, trityl or an easily cleavable sulfur protecting group
  • R 2 has the meaning given above, with a halocarboxylic acid halide and then with an alkylamine or arylamine of the general formula VI
  • R 3 has the meaning given in above, and these compounds are optionally converted into their salt with a pharmaceutically acceptable acid or base.
  • the compounds of the general formula I according to the invention can also be prepared in such a way that starting from a compound of the general formula I according to the invention, where n is 0 or 1, this is reacted with a compound which has terminal groups, and thus after the coupling forms a radical R 2 on the above-mentioned compound.
  • REPLACEMENT LEAF Compounds of general formula I are formed in which n is 1 or 2. This means that part of the chain of the compounds of the general formula I according to the invention is provided by the coupled radical R 2 .
  • the production of metal chelate complexes of radioactive metal ions of the elements Tc and Re with compounds of the general formula I is carried out by adding technetium-99m or Re in the form of pertechnetate or perrhenate in the presence of a reducing agent and optionally an auxiliary ligand with a compound of the general formula I.
  • R 1 , R 2 and R 3 have the meaning given above, implemented.
  • REPLACEMENT LEAF System when complexing a chelate complex, which both shows an N 2 S -N-alkyl system or is a further dimer is an 0 S 2 -N-alkyl complex, without a chemical covalent bridge function connecting the complex.
  • the N-alkyl chelates according to the invention can be used for the early detection of atherosclerotic vascular diseases.
  • WHHL rabbits have high LDL levels in the blood due to a missing or defective LDL receptor and therefore develop atherosclerotic vascular changes
  • R 2 is an endothelin, a partial sequence of endothelin, an endothelin analogue, an endothelin derivative or an endothelin antagonist, from activity in the plaque and undamaged vessel, was 1: 5 (see Figures 1 and 2) .
  • the affinity for plaques in atherosclerotic changes in the vessels can be influenced by varying the R 1 alkyl group.
  • the lipophilicity can be controlled via the nature of the residue in R 1 , and at the same time R 2 as a free carboxyl group offers the necessary prerequisite for good water solubility.
  • R 2 as the free carboxylic acid, however, an amidation of this carboxyl group with an amino hydrocarbon can also contribute to water solubility.
  • N-alkyl complexing agents of general formula I with endothelines (examples 11 and 12) from chelating precursors shown here is a new method for generating such complexing sites.
  • the stability of the new N-alkyl complexes of the general formula I corresponds to the known N3S complexes.
  • the compounds according to the invention are prepared by the processes known to those skilled in the art [A Specialist Periodical Report; Amino acids, peptides and proteins;
  • REPLACEMENT LEAF Glycine is then reacted with N-methylamine or, for the introduction of longer residues, with N-alkylamines, phenylamines, alkyloxaalkylamines, cycloalkylamines or glycatedlycolic acid esters.
  • N-alkylamines phenylamines, alkyloxaalkylamines, cycloalkylamines or glycatedlycolic acid esters.
  • R 1 stands for the variations on the sarcosyl nitrogen atom
  • the compounds A, B, C react in a conventional manner with reaction partners carrying amino groups or hydroxyl groups.
  • a to C are dissolved in N-methylpyrrolidone, with BOP (B. Castro et al. Tetrahedron Letters 14 (1975) 1219) or TBTU (Knorr et al. Tetrahe- dron Letters 30 (1989), 1927 ) pre-activated and then reacted with the amino component.
  • BOP B. Castro et al. Tetrahedron Letters 14 (1975) 1219
  • TBTU Knorr et al. Tetrahe- dron Letters 30 (1989), 1927
  • REPLACEMENT LEAF are preferably carried out with dicyclohexylcarbodiimide in the presence of dimethylaminopyridine.
  • an estrogen which already has an unsaturated substituent in 17 ⁇ such as propargylamine or propargyl alcohol residue and reacts this with one of the compounds A to C in the manner described.
  • the compounds A to C are reacted with peptides, in particular with endothelin components, according to methods customary in peptide chemistry, either conventionally in solution, preferably in dimethylformamide, dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide or mixtures of these components.
  • the solid-phase method can also be used to acylate the amino component under customary conditions on the synthetic resin. Cleavage from the synthetic resin provides the desired compounds. Preparative cleaning, if necessary, is carried out chromatographically on an RP 18
  • reaction with peptides in solution was carried out analogously to the reactions with peptides in the reaction with amino groups or hydroxyl group-bearing ergolines.
  • the reactions were carried out in N-methylpyrrolidone.
  • the preparative cleaning is also carried out as indicated for peptides.
  • the complex formation is preferred in an aqueous medium, at a pH between 6 and 9 and at room temperature, by reducing Na pertechnetate with e.g.
  • Tin (II) chloride or dithionide optionally carried out via an auxiliary ligand such as sodium citrate or sodium tartrate, the protective group R 3 being split off beforehand or in situ.
  • R 2 OH
  • replacement of the carboxyl group by an NCS or similarly reactive group lead to peptide chelates covalently attached to a larger protein or proteohormones, endotheline, endothelin analogues, endothelin antagonists, endothelin derivatives To bind partial sequences of endothelins and subsequently carry out complexation.
  • the protective group is cleaved off according to methods known to the person skilled in the art (see “Protective groups in organic synthesis” T.N. Greene, John; Wiley and Sons 1981).
  • REPLACEMENT LEAF Between 370 MBq and 1850 MBq, preferably 740 to 1480 MBq, are usually used for use in human diagnostics.
  • the compounds according to the invention are provided in the form of a kit for use in humans.
  • the kit contains at least one chelator according to the general formula I in free form or bound to ligands.
  • Another object of the invention is a cold kit, which a chelating agent according to the general formula I in free form or to a bioactive molecule, such as. contains an ergoline, estradiol or endothelin derivative, which is capable of binding metal atoms.
  • activated groups are: acid chlorides, mixed anhydrides [Org. Prep. Proc. Int. 1975, 7, 215], activated esters [Adv. Org. Chem. Part B, 472].
  • the linkage with biomolecules can take place directly or via linkers, here the carbodiimide method (Fieser, Reagents for Organic Synthesis 10, 142) is mentioned.
  • the linkage is such that a covalent bond is formed between the chelate and the biomolecule.
  • estradiol derivatives with substituents in the 17 ⁇ position are preferably used.
  • the synthesis of such compounds is e.g. described by Collinsenstaff for 17 ⁇ -ethynyl derivatives of estradiol. (Blickenstaff A.; Steroids 46, 889 (1985); USP 462.426).
  • the synthesis of Magnoliaenstaff, Brandes and Poirier is described for estradiol derivatives with 17 ⁇ -propargyl substituents with terminal NH2 or OH function. (Blickenstaff et al.; Steroids 48, 223 (86); Brandes, A. et al. Dissertation 87-01441, 1986, University of Illinois, D. Poirier et al. J. Steroids. Biochem. Molec. Biol. 38, No. 6, 759-774, 1991).
  • a preferred dopaminergic ligand is ergoline.
  • An overview of synthetic routes to 8-substituted ergolines can be found at Ergot Alkaloids and Related Compounds, Editors B. Berde and H.O. Schild, Springer-Verlag Berlin, Heidelberg, New York, 1978, Chapter II Chemical Background, J. Ruisemmann and P.A. Stadler.
  • reaction with the 8 ⁇ -amino or 8 ⁇ -hydroxy-methyl-ergoline is preferred. It takes place via an activated group in R 2 , for example that with benzotriazol-1-yl-tetra-methyl-uronium tetrafluoroborate or according to the known carbodiimide method.
  • REPLACEMENT LEAF Another object of the invention is the use of the metal chelates for diagnostic and / or therapeutic purposes and pharmaceutical compositions which contain at least one chelate of the general formula I according to the invention, optionally with the additives customary in galenics.
  • the compounds according to the invention are provided in the form of a cold or hot kit.
  • the kit contains at least one chelator according to formula I in free or bound form, the ligands preferably being obtained from the class of ergolines, estriols, endothelins, short-chain synthetic peptides and cholecystokinins.
  • reaction product precipitates as a brown oil, which is separated from the supernatant solution and extracted with chloroform.
  • the chloroform is removed under reduced pressure and ether is added to the residue.
  • the reaction product is precipitated by cooling and intensive stirring, filtered off and dried on the clay plate.
  • reaction product consisted of a mixture of 60% methyl ester and 40% free amino acid.
  • 0.08 mmol of the mixture obtained are suspended in 2 ml of absolute methanol, 2 mg of Pd / CaC03 (5%) are added, and at a hydrogen pressure of 66 kPa with stirring, a solution of 0.13 mmol of sodium methylate in 1 ml of absolute methanol implemented.
  • the mixture is stirred for a further 15 min and then the solution is neutralized with methanolic Dowex 50WX8.
  • the catalyst and the resin are filtered off, the substance is lyophilized and the impurities are extracted with 2 ml of benzene. The benzene is then separated off and the substance is lyophilized from ethanol.
  • the oil is extracted several times with hot water and used as a colorless oil for the next synthesis step without further purification.
  • Tc-gluconate solution 1 ml of 99m Tc-gluconate solution is mixed with a solution of 0.4 mg of pure substance from precursor 4 in 0.5 ml of water. The reaction is complete after 30 minutes.
  • TLC (silica gel 60, 95% ethanol): two components Rf 0-0.1 (40%), Rf 0.8 (60%) electrophoresis (pH 7.0): both components migrate as anions.
  • 0.0022 mol of hexylglycyl diglycine are dissolved in 5 ml of 1N sodium hydroxide solution and stirred for 30 minutes at room temperature. The solution is then cooled. At 0 ° C., 0.3 ml of chloroacetyl chloride and 4 ml of 1N sodium hydroxide solution are added alternately within 30 minutes. Then stirring is continued for 30 minutes without cooling.
  • REPLACEMENT LEAF slowly added and stirring continued for 12 hours.
  • the methanol is removed under reduced pressure and the residue is taken up in 2N HCl.
  • the hydrochloric acid is also removed under reduced pressure, the residue is washed with water and the wash water is thoroughly washed through
  • reaction mixture is prepared on a VYDAc column (40 x 300 mm) without further pretreatment
  • the substance shows an Rf of 0.4 in TLC (CH Cl 2 / MeOH] 5: 5.
  • Example 10 The compound obtained according to Example 10 is complexed with 99m Tc according to the method given as the general method (Example 1).
  • REPLACEMENT LEAF 0.010 mol of His (Trt) -Leu-Asp (OBut) -Ile-Ile-Trp-OH, produced on sasrin resin, are dissolved in a mixture of DMF / NMP with the addition of 0.010 mol of diisopropylethylamine and with stirring with 0.010 mol of S-Bzl-acetyl-Sar-OH, prepared as in Example 11, dissolved in 3 ml of DMF.
  • the mixture is stirred for 2 hours and then the solvent is removed.
  • the remaining residue is stirred with water and suction filtered, washed and dried.
  • the protective groups are removed as usual and the product is obtained by pouring it into ether. The cleaning is carried out as described for example 5.
  • REPLACEMENT LEAF 4th stage S-Bzl-acetyl- [N 1 -Bromphenyl] -Gly-Gly-Gly-OH
  • 0.08 mmol of substance from stage 4 are suspended with 2 ml of anhydrous methanol, mixed with 2 mg of Pd / CaC03 (5%), and stirred at a hydrogen pressure of 66 kPa with a solution of 0.13 mmol of sodium methylate 1 ml of absolute methanol implemented. The mixture is stirred for a further 15 minutes and then the solution is neutralized with methanolic Dowex 50WX8. The catalyst and the resin are filtered off, the substance is lyophilized and extracted with 2 ml of benzene. The benzene is then separated off and the substance is lyophilized from ethanol. The cleaning is done by preparative HPLC.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft N-Alkyl-Peptid-Chelatbildner, deren Metallkomplexe mit Radionukliden, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende radiopharmazeutische Zusammensetzungen. Die Erfindung betrifft ferner Radiopharmazeutika, welche diese Chelate in mit Metallen komplexierter Form enthalten, deren diagnostische Kits, in denen das Chelat in nicht komplexierter Form vorliegen kann und entweder durch Zusatz von Technetium- oder Rhenium-Ionen komplexiert wird und auch über die Anwendung solcher Präparate für diagnostische und therapeutische Zwecke.

Description

N-Al yl-Peptidchelatbildner, deren Metallkomplexe mit Radionukliden, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende radiopharmazeutische Zusammen¬ setzungen
Die Erfindung betrifft N-Alkyl-Peptid-Chelatbildner, deren Metallkomplexe mit Radionukliden, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende radiopharmazeutische Zusammensetzungen.
Die Erfindung betrifft ferner Radiopharmazeutika, welche diese Chelate in mit Metallen komplexierter Form enthal¬ ten, deren diagnostische Kits, in denen das Chelat in nicht komplexierter Form vorliegen kann und entweder durch Zusatz von Technetium- oder Rhenium-Ionen komple¬ xiert wird und auch über die Anwendung solcher Präparate für diagnostische und therapeutische Zwecke.
Radioaktiv markierte Substanzen werden vor allem in der medizinischen Diagnostik angewandt, um Verformungen und
Funktionsänderungen innerer Organe oder Änderungen patho¬ logischer Prozesse im Körper festzustellen. Für diese Anwendung wird dem Patienten eine Formulierung verab¬ reicht, z.B. in Form einer Injektionslösung, welche die radioaktive Substanz enthält. Mit geeigneten Detektoren (z.B. einer Gamma-Kamera) können durch Aufzeichnen der emittierten Strahlung Bilder von Organen, pathologischen Prozessen und deren Veränderungen im Körper erhalten werden; bei besonders hohen Anreicherungen in Organen oder Gefäßen dienen sie als Therapeutika.
In den vergangenen Jahren wuchs das Verlangen nach spezi¬ fischen, radioaktiv markierten, chemischen Verbindungen, die an sogenannte Trägermoleküle (z.B. Steroide, Antikör- per, Lipide, Proteohormone etc.) gekoppelt werden können' und nach dem Prinzip des "Drug Targeting" wirken. Von besonderem Interesse für die Tumordiagnose und Therapie sowie zur Rezeptordarstellung (z.B. Steroidkonjugate,
ERSATZBLATT Antikörper, etc.), sind solche Substanzen, die befähigt sind, die Zellwand und die Blut-Hirn-Schranke zu passie¬ ren sowie Substanzen zur Überprüfung von Organfunktionen, z.B. vor und nach erfolgten Transplantationen und zum Auffinden von Gefäßläsionen. Mit dem Ziel, eine höhere Selektivität des Radiopharmazeutikums und eine damit verbundene signifikante Anreicherung eines Radionuklids im Zielorgan zu erhalten, werden verstärkt Komplexbildner für eine Vielzahl von Radionukliden entwickelt und an gewebe- oder stoffwechselspezifische Trägermoleküle gekoppelt. Für die Therapie sucht man nach Möglichkeiten, ein radioaktives Isotop des Rhenium anzuwenden.
Das am häufigsten verwendete Radionuklid ist Technetium- 99m, das sich aufgrund seiner günstigen physikalischen Eigenschaften (keine Korpuskularstrahlung, günstige physikalische Halbwertzeit, 140 KeV γ-Strahlung) und der damit verbundenen geringen Strahlenbelastung besonders gut als Isotop für die in-vivo-Diagnostik eignet. Techne- tium-99m läßt sich ohne Aufwand aus Nuklidgeneratoren als [99m_c_ -Pertechnetat gewinnen. Zur Gewinnung von Techne¬ tium-99m-Chelaten wird das Pertechnetat durch geeignete Reduktionsmittel (z.B. SnCl2, S2O42", etc.) in eine niedrigere Oxidationsstufe überführt, in welcher das Technetium-99m mit Chelatbildnern oder Proteinen Komplexe bildet. Zur Markierung potentieller Chelatbildner mit Technetium-99m und zur Herstellung von Kits für den klinischen Routinebedarf wurden spezielle Verfahren entwickelt und beschrieben. So lassen sich Proteine direkt über Donor-Gruppen (Amino-, Amid-, Thiol-, etc.) des Proteins (J. Nucl . Med. 1986, 27, 685) oder durch Einführen von Komplexbildnern (US-Patent 4 479 930 und Fritzberg, A. R. et al. , J. Nucl. Med. 1986, 27, 957) mit Technetium-99m markieren.
ERSATZBLATT Auch aus der Gruppe zyklischer Amine wurden Komplexbild¬ ner entwickelt (Troutner, D. E. et al. ; J. Nucl. Med. 1980, 21, 443 und Mäcke, H. ; DE-3 911 816), Cyclame (Ketring, A. R. ; Troutner, D. E. et al . ; J. Nucl. Med., 1980, 21, 443-448, Int. J. Nucl. Med. Biol. 1984, 11, 113, Volkert et al. , Applied Radiat. Isot., 1982, 33, 891-896), N 02-Systeme (Pillai, M. R. A. ; Troutner, D. E. et al.; Inorg. Chem. 1990, 29, 1850) und ebenso wurden N2S2-Systeme (Bormans, G. et al . ; Nucl. Med. Biol. 1990, 17, 499) und N3S-Systeme (Fritzburg, A. ; EP-A-0 173 424 und EP-A-0 250 013) beschrieben.
Alle diese Komplexbildner haben jedoch erhebliche Nach¬ teile. So sind für die Markierung der Cyclame als auch literaturbekannter N2θ2*-Systeme (Pillai, M. R. A. et al; Inorg. Chem. 1990, 29, 1850-1856) pH-Werte von 10-13 erforderlich. Ferner verfügen diese System nicht über reaktive Gruppen, die eine Verknüpfung mit Biomolekülen bzw. Proteohormonen ermöglichen. N2S2- und N3S-Systeme haben zwar in einzelnen Fällen eine hinreichende Stabili¬ tät, sind aber lediglich für einfache Ausscheidungs- studien, wie der Harnausscheidung, EP-A-0 250 013, geeig¬ net. Bemühungen, die Herstellung des literaturbekannten MAG3 (EP-A-0 250 013) , welches zur Markierung ein Erhit- zen auf 100°C verlangt (Bannister, K. M. et al. ; J. Nucl. Med. 1990, 31, 1568-1573) zu vereinfachen, sind zwar im Gange (WO-91-16076) , aber bis heute ohne klinischen Zugang geblieben.
Für N2S2-Komplexe (Bormans, G. et al. ; Nucl. Med. Biol. 1990, 17, 499) ist die Haltbarkeit zwischen Zubereitung und Verabreichung geringer als 1 h und bedeutet so einen empfindlichen Nachteil. Auch hier sind daher - bisher ohne klinische Relevanz - Bemühungen im Gange, Mängel zu beheben (Merryn, W. et al. , Applied. Radiat. Isot. Vol. 42 (7) , 607-612) .
ERSATZBLATT Die bisher bekannt gewordenen Komplexbildner haben je¬ weils eine einheitliche Struktur und sind daher auch diagnostisch nur für einen Zweck anwendbar. Die Molekül- Variationen sind auf Substituenten des Grundgerüstes beschränkt und ermöglichen daher keine breite medizini¬ sche Anwendung, wie sie bei einer Komplexvariation mög¬ lich wäre. Sie sind daher kostenträchtig in Herstellung und wissenschaftlicher Durchdringung der einzelnen Kom- plexe.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, kurzkettige N- Alkyl-Peptid-Chelatbildner, die in einem breiten pH- Bereich bei Raumtemperatur mit Technetium und Rhenium komplexieren, wobei sowohl ionische als auch nicht ioni¬ sche Komplexe gebildet werden und somit Verbindungen bereitzustellen, welche die Nachteile bekannter 99mTc- und 180' 188Re-Komplexe nicht aufweisen.
Dabei müssen gleichzeitig die Voraussetzungen für die Anwendung dieser Verbindungen am Menschen im Hinblick auf Strahlendosis, Stabilität und Löslichkeit erfüllt sein; es muß gleichzeitig ein möglichst einfaches Verfahren zu deren Darstellung geschaffen werden und eine Kit-Formulierung dieser erfindungsgemäßen
Verbindungen/Konjugate und ihrer Metallkomplexe für ihre klinische Anwendung bereitgestellt werden.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß Verbindungen der allgemeinen Formel I
R3-S-CH2-CO-NR1- [CH2-CO-NH]n-CH2-CO-R2 (I)
worin
n eine Zahl 0 , 1 oder 2 bedeutet ,
ERSATZBLATT R1 einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen, welcher gegebenenfalls durch ein bis drei Sauerstoffatome unterbrochen oder substitu- iert ist, und welcher gegebenenfalls eine endständige -
COOH-, -OH- oder -NH -Gruppe trägt, welche gegebenenfalls mit Glykolsäure oder Glykolsäureestern oder -ethern verestert oder verethert ist, wobei die Ester oder Ether mit Carbonsäuren oder Alkoholen mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen gebildet werden, oder einen Phenyl- oder Cyclohexylrest darstellt, welcher gegebenenfalls in der 4-Position mit einer COOH-, NH2- oder OH-Gruppe, welche gegebenenfalls mit Carbonsäuren oder Alkoholen mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen verestert, verethert oder amidiert ist oder einem Halogenatom substituiert ist,
R2 ein Halogenatom, eine Halogenmethyl-, Methyl-carb- oxyl-, Trifluor ethylcarboxyl-, eine NH2*- oder eine OH- Gruppe darstellt, wobei die im Falle von R2 = OH gebildete Carboxyl- Gruppe entweder unmittelbar oder nach Veresterung mit einer α,ω-Hydroxycarbonsäure mit bis zu 8 Kohlen- stoffatomen über deren endständige Carboxyl-Gruppe mit einem Biomolekül, einem Steroid, einem Ergolinderiva , einem Benzodiazepinderivat, einem Cholecystokinin, einem Peptid, einem Protein, einem Proteohormon, einem Aminozucker, einem Endothelin, einem Endothelin-Deri- vat, einem Endothelin-Antagonisten oder einem Endothe- linfragment verestert oder amidiert ist,
in Rest der allgemeinen Formel II
ERSATZBLATT
Figure imgf000008_0001
oder der allgemeinen Formel II a
Figure imgf000008_0002
ist, wobei
R4 eine Methylen-, Propenylenamino-, Propinylen- amino- , Methylenamino- oder Methylenoxygruppe und
R8 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe bedeu¬ tet,
einen Rest der allgemeinen Formel III
Figure imgf000008_0003
oder der allgemeinen Formel III a
ERSATZBLATT
Figure imgf000009_0001
darstellt, worin
R5 eine -NH-, -NH-CO-N<, -NH-CO-NH- oder Methylenoxy¬ gruppe,
R6 ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine Methylgruppe und
R7 ein Wasserstoffatom oder einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen bedeuten,
R-*- ein Wasserstoffatom, eine Acetyl-, Benzoyl-, p- Methoxybenzyl-, Ace amidomethyl-, Benzamidornethyl-, Trimethylacetamidomethyl-, Hydroxyacetyl-, Ethoxyethyl-, Ethylthio-, Trityl- oder eine leicht abspaltbare Schwe¬ felschutzgruppe bedeutet
und deren Salze mit pharmazeutisch annehmbaren Säuren oder Basen zur Verfügung gestellt werden.
Überraschenderweise wurde eine Verbindungsklasse gefun¬ den, welche nicht nur die genannten Nachteile vermeidet, sondern als 99mTc+5-Komplexe einen Übergang vom N3S -> N S0 -> S 02 -> N2S2-N-Alkyl-Peptid-Komplex- system aufweist und daher in großer Breite als Kom¬ plexbildner eingesetzt werden kann.
ERSATZBLATT Die Formel IV zeigt einen N3S-N-Alkyl-Peptid-Komplex im 99mTc_Core (neutral) aus
R3S- CH2-CO-NR1 [CH2-CO-NH] 2-CH2-CO-R2'
Figure imgf000010_0001
die Formel V einen N2θS-N-Alkyl-Peptid-Komplex im 99mTc- Core (neutral) aus
R3S-CH2-CO-NR1 [CH2-CO-NH] i-C^-COOH,
Figure imgf000010_0002
die Formel VI einen 02S2_N-Alkyl-Peptid-Komplex im 99mTc- Core (mit negativer Ladung) aus
R3S-CH2-CO-NR1 [CH2-CO-NH]0-CH2-COOH,
ERSATZBLATT
Figure imgf000011_0001
und die Formel VII zeigt schließlich einen N2S2*-N-Alkyl* Peptid-Komplex in 99mTc-Core (mit positiver Ladung) aus R3S-CH2-CO-NR1[CH2-CO-NH]0-CH2-CO-R2.
Figure imgf000011_0002
Die bei der Molekülvariation entstehenden Komplexe zeigen eine überraschende Breite und Übereinstimmung im Hinblick auf ihr biologisches Verhalten. So sind Verbindungen dieses Typs, gekoppelt an einen Bioliganden, verwendbar zur Rezeptordarstellung, was bisher für
99m-pc-Verbindungen nicht beschrieben wurde und hervorra¬ gend geeignet zur Darstellung von Plaques bei Gefä߬ läsionen und der Messung der Nierenfunktion, wobei die Verbindungen jeweils an bioaktive Liganden gekoppelt sein können.
Bevorzugt sind Verbindungen, bei denen R1 eine -CH2- (CH2)m-CH3-Gruppe mit m = 1 - 14 darstellt
ERSATZBLATT oder Rl eine Phenyl-, eine p-Phenylamin-, eine Cyclo- hexylamin-, p-Hydroxyphenyl-, 4-Hydroxycyclohexyl, p- Halogenphenyl- oder 4-Halogencyclohexyl-Gruppe ist.
Bevorzugt sind außerdem Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin
R1 gleich - (__H2)q-00C-CH2-00C- (CH2) r"CH3 ist,
wobei q und r jeweils ganze Zahlen von 1 bis 16 bedeuten.
Besonders bevorzugt sind Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin R1 ein geradkettiger oder verzweigter Akylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder ein P- Bromphenylrest ist.
Ferner sind Verbindungen der allgemeinen Formel I bevor¬ zugt, bei denen R2 ein Rest der allgemeinen Formel II
Figure imgf000012_0001
oder der allgemeinen Formel II a
Figure imgf000012_0002
ist, wobei
ERSATZBLATT R4 eine Methylen-, Propenylamino- , Propinylamino-, Methylenamino- oder Methylenoxygruppe und
R8 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe bedeu- tet.
Von diesen Steroiden sind 17α-Ethinyl-Estradiole oder deren 3-Methyl-Ether bevorzugt.
Eine 17α-Ethinylgruppe des Estradiols kann auch gekoppelt sein mit einem Ethen. Die Reihenfolge der Ethin- und Ethengruppen ist austauschbar; auch eine Verdopplung der Ethin- oder Ethengruppe ist zweckmäßig. Wichtig ist ein Mindestabstand zwischen Chelator und Estradiolmolekül, bevorzugt eine starre Ethin- oder Ethen-Gruppe, so daß keine Faltung der Seitenkette eintreten kann.
Erfolgt die Bindung von I in dieser bevorzugten 17α-Posi- tion des Estradiolgerüstes, ist bei den erhaltenen Che- lat-Komplex-Bioligand-Verbindungen keine oder nur eine geringe Abnahme der biologischen Aktivität zu erwarten, wie es z. B. in Epperly, M. W. et al [J. Steriod Biochem. Molec. Biol. Vol. 39, No. 5A, 729-734, 1991] belegt wird.
Die hervorragende Bedeutung dieser Estrogen-Chelat-Kom¬ plexe liegt in ihrer Eigenart, die Zellwand zu durchdrin¬ gen und sich an den Estrogen-Rezeptor anzulagern. Dies gilt insbesondere für Komplexbildner gemäß der allgemei¬ nen Formel I, bei denen n = 2 ist. Bei 99m*pc+5 s±nc\ diese N3S-Komplexe als Folge der N1-Alkylierung im Tc-Core neutral (vgl . Formel IV) . Während geladene Komplexe die Zellwand nicht zu durchdringen vermögen, z. B. N3S-K01T1- plex als Steroid 17α-ethinyl-Chelat, vom Typ Thioacetyl- glycyl-glycyl-glycyl-O-Ester (eigene Versuche) , durch- dringen die erfindungsgemäßen N-*--alkylierten Komplexe (N1 = methyl) die Zellwand und reichern sich nach i. v.
ERSATZBLATT Injektion im Uterus an. Die Anreicherung beträgt, ausge¬ drückt als Quotient zwischen Blut/Uterus, 0,2 und läßt sich in Abhängigkeit von der N**--Alkyl-Kettenlänge bzw. Substituenten variieren. Damit wird eine Mamma-ca Früher¬ kennung nach dem SPECT-Verfahren möglich. Besonders bevorzugt ist hier die Verbindung gemäß Beispiel 10.
Weiterhin bevorzugt sind Verbindungen der allgemeinen Formel I, bei denen R2 ein Rest der
allgemeinen Formel III
Figure imgf000014_0001
oder der allgemeinen Formel III a
Figure imgf000014_0002
ist, wobei
R5 eine -NH-, -NH-C0-N<, -NH-CO-NH- oder Methylen¬ oxygruppe,
ERSATZBLATT R6 ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine Methylgruppe und
R7 einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen darstellen.
Diese Verbindungen der allgemeinen Formeln III und III a sind Ergolin-Derivate.
Von diesen Ergolinen wird das 8α-Amino-6-Methyl-Ergolin ggf. mit Alkyl-Substituenten in 2- und/oder 6-Position mit einer Kettenlänge von C*j_ in 2 Position oder Cι_3 in Position 6 und/oder einem Methyl- bzw. Halogensubstituen- ten in Position 2 bevorzugt. Der Substituent in 8-Positi- on des Ergolins kann außer αNH2 auch ß-CH20- oder αNH-CO- N< oder αNH-CO-NH- sein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I tragen am endständigen Schwefelatom einen Rest R3. Dieser Rest R3 stellt eine Schwefelschutzgruppe dar, welche während der Synthese der erfindungsgemäßen Verbin¬ dungen der allgemeinen Formel I erforderlich ist. Eine solche Schutzgruppe muß leicht abspaltbar sein. Geeignete
Rest R3 sind beispielsweise Acetyl-, Benzoyl-, p-Methoxy- benzyl-, Acetamidomethyl-, Benzamidomethyl-, Trime- thylacetamidomethyl-, Hydroxyacetyl-, Ethoxyethyl- oder Trityl-Gruppen. Besonders bevorzugt ist die Benzyol- gruppe.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind ferner die Metallchelatkomplexe radioaktiver Metallionen mit den erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben.
ERSATZBLATT Geeignete radioaktive Metallionen sind beispielsweise Ionen der Radioisotope der Elemente Tc, Re, Cu, Ga, Gd, Y und In. Die Auswahl des Radionuklids richtet sich nach der gewünschten Art der Anwendung der erfindungsgemäßen Metallchelatkomplexe der allgemeinen Formel I.
Dabei werden für die Radiodiagnostik oder Radiotherapie unterschiedliche Radionuklide verwendet.
Bevorzugt werden dabei radioaktive Metallionen der Iso¬ tope der Elemente Tc und Re.
Besonders bevorzugt ist das Radioisotop Technetium-99m.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind
Konjugate, enthaltend Verbindungen der allgemeinen Formel I oder Metallchelatkomplexe radioaktiver Metallionen der Elemente Tc, Re, Cu, Ga, Gd, Y und In mit Verbindungen der allgemeinen Formel I und sich selektiv in erkrankten Geweben oder in Tumoren anreichernde Substanzen, wobei zwischen diesen eine kovalente Bindung besteht und diese im Falle von Carboxy- oder Aminogruppen enthaltenden Substanzen wie Peptiden, Proteinen, Antikörpern oder deren Fragmenten, amidisch oder im Falle von Hydroxygrup- pen enthaltenden Substanzen wie Fettalkoholen, esterartig oder im Falle von Aldehydgruppen enthaltenden Substanzen imidisch vorliegt.
Bevorzugt sind Konjugate mit sich in erkranktem Gewebe anreichernden Peptiden wie Endotheline, Teilsequenzen von
Endothelinen, Endothelin-Analoga, Endothelin-Derivate oder Endothelin-Antagonisten.
Insbesondere bevorzugt sind solche Konjugate mit den Verbindungen der allgemeinen Formel I und sich selektiv
ERSATZBLATT in erkranktem Gewebe anreichernden Peptiden, wobei die Peptide die folgenden Sequenzen
Figure imgf000017_0001
Cys-Ser-Ala-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-
Phe-Cys-His-Le -Asp-Ile-Ile-Trp,
Cys-Ser-Cys-Asn-Ser-Trp-Leu-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr- i
Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
-Leu-Asn-
Figure imgf000017_0002
I I
Ala-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-
Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
Ala-Ser-Ala-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr- Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Trp-Leu-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr- Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
ERSATZBLATT 1 I
Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
N-Acetyl-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-Phe-Ala-His- Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
oder die Teilsequenz
His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp
oder die cyclischen Aminosäuresequenzen
Cyclo- (DTrp-DAsp-Pro-DVal-Leu) ,
Cyclo- (DGlu-Ala-alloDIle-Leu-DTrp)
aufweisen.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I
R3-S-CH2-CO-NR-*-- [CH2-CO-NH]n-CH2-CO-R2 (I)
worin
n eine Zahl 0,1 oder 2 bedeutet,
R1 einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen, welcher gegebenenfalls durch ein bis drei Sauerstof atome unterbrochen oder substituiert ist, und welcher gegebenenfalls eine end- ständige -COOH-, -OH- oder -NH2-Gruppe trägt, welche
ERSATZBLATT gegebenenfalls mit Glykolsaure oder Glykolsäureestern oder -ethern verestert oder verethert ist, wobei die Ester oder Ether mit Carbonsäuren oder Alkoholen mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen gebil¬ det werden, oder einen Phenyl- oder Cyclohexylrest darstellt, wel¬ cher gegebenenfalls in der 4-Position mit einer COOH-, NH2- oder OH-Gruppe, welche gegebenenfalls mit Carbon¬ säuren oder Alkoholen mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen verestert, verethert oder amidiert ist oder einem Ha¬ logenatom substituiert ist,
R2 ein Halogenatom, eine Halogenmethyl-, Methyl- carboxyl-, Trifluormethylcarboxylgruppe, eine NH - oder eine OH-Gruppe darstellt, wobei die im Falle von R2 = OH gebildete Carboxyl-Gruppe entweder unmittelbar oder nach Veresterung mit einer α,ω-Hydroxycarbonsäure mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen über deren endständi¬ ge Carboxyl-Gruppe mit einem Biomolekül, einem Steroid, einem Ergolinderivat, einem Benzodia- zepinderivat, einem Cholecystokinin, einem Pep- tid, einem Protein, einem Proteohormon, einem Aminozucker, einem Endothelin, einem Endothelin- Derivat, einem Endothelin-Antagonisten oder ei¬ nem Endothelinfragment verestert oder amidiert ist,
in Rest der allgemeinen Formel II
Figure imgf000019_0001
ERSATZBLATT oder der allgemeinen Formel II a
Figure imgf000020_0001
ist, wobei
R4 eine Methylen-, Propenylenamino-, Propinylen- amino-, Methylenamino- oder Methylenoxygruppe und
R8 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe be¬ deutet,
einen Rest der allgemeinen Formel III
Figure imgf000020_0002
oder der allgemeinen Formel III a
Figure imgf000020_0003
ERSATZBLATT darstellt, worin
R5 eine -NH-, -NH-CO-N<, -NH-CO-NH- oder Methylen¬ oxygruppe,
R6 ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine Methylgruppe und
R7 ein Wasserstoffatom oder einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit bis zu 6 Kohlen¬ stoffatomen bedeuten,
R3 ein Wasserstoffatom, eine Acetyl-, Benzoyl-, p- Methoxybenzyl- , Acetamidomethyl-, Benzamidomethyl-, Trimethylacetamidomethyl-, Hydroxyacetyl-, Ethoxy- ethyl-, Ethylthio-, Trityl- oder eine leicht abspalt¬ bare Schwefelschutzgruppe bedeutet
und deren Salze mit pharmazeutisch annehmbaren Säuren oder Basen
welches sich dadurch auszeichnet, daß man
a) ein Diketopiperazinderivat des Glycins oder b) Glycin
mit einem Halogencarbonsäurehalogenid und anschließend mit einem Alkylamin oder Arylamin der allgemeinen Formel VI
R1 - NH2 (VI)
wobei R1 die oben angegebene Bedeutung hat, umsetzt, erneut mit einem Halogencarbonsäurehalogenid umsetzt und anschließend mit einer Verbindung der allgemeinen Formel IV
ERSATZBLATT R3 - SH ( IV)
wobei R3 die oben angegebene Bedeutung hat,
umsetzt
oder eine Verbindung der allgemeinen Formel V
R**--NH-CH2-CO-R2 (V)
wobei R2 die oben angegebene Bedeutung hat, mit einem Halogencarbonsäurehalogenid und anschließend mit einem Alkylamin oder Arylamin der allgemeinen Formel VI
R1 - NH2 (VI]
wobei R1 die oben angegebene Bedeutung hat, umsetzt, erneut mit einem Halogencarbonsäurehalogenid umsetzt und anschließend mit einer Verbindung der allgemeinen Formel IV
R3 - SH (IV) ,
wobei R3 die in oben angegebene Bedeutung hat, umsetzt und diese Verbindungen gegebenenfalls mit einer pharma¬ zeutisch annehmbaren Säure oder Base in deren Salz über¬ führt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I lassen sich auch derart herstellen, daß man ausgehend von einer erfindungsgemäßen Verbindung der allgemeinen Formel I, wobei n 0 oder 1 ist, diese mit einer Verbin¬ dung umsetzt, welche endständige Gruppen aufweist, und dadurch nach der Kopplung an die oben genannte Verbindung einen Rest R2 bildet. Dabei werden erfindungsgemäße
ERSATZBLATT Verbindungen der allgemeinen Formel I gebildet, bei denen n 1 oder 2 ist. Dies bedeutet, daß ein Teil der Kette der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I durch den angekoppelten Rest R2 zur Verfügung gestellt wird.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Metallchelatkom¬ plexe radioaktiver Metallionen mit den erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I ist ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
Die Umsetzung der Verbindungen der allgemeinen Formel I, gegebenenfalls unter vorheriger oder gleichzeitiger Abspaltung des Restes R3 erfolgt in an sich bekannter Weise.
Die Herstellung von Metallchelatkomplexen radioaktiver Metallionen der Elemente Tc und Re mit Verbindungen der allgemeinen Formel I erfolgt dadurch, daß man Technetium- 99m oder Re in Form von Pertechnetat oder Perrhenat in Gegenwart eines Reduktionsmittels und gegebenenfalls eines Hilfsliganden mit einer Verbindung der allgemeinen Formel I
R3-S~CH2-CO-NR*--- [CH2-CO-NH]n-CH2-CO-R2 (I)
worin R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben, umsetzt.
Von besonderer erfinderischer Bedeutung ist nun die überraschende Variablität der Verbindungen und ihrer Komplexe. Für Verbindungen mit n = 2 gemäß der allgemei¬ nen Formel I erhält man ein N3S-System. Geht man von n = 2 auf n = 1 über, so kann sich ein N SO-N-Alkyl-System mit einer überraschend hohen Komplexstabilität bilden. Schließlich kann sich bei n = 0 aus dem N-^Sx-N-Alkyl-
ERSATZBLATT System beim Komplexieren ein Chelatkomplex, der sowohl ein N2S -N-Alkyl-System aufzeigt oder aber als weiteres Dimeres ein 0 S2-N-Alkyl-Komplex ist, bilden ohne daß eine chemische kovalente Brückenfunktion den Komplex verbindet.
Die neuen Verbindungen haben wegen ihrer chemischen Variabilität und ihrer Varianten in der Komplexbildung auch eine außerordentliche Breite der klinischen Anwen- düng.
Bis heute gibt es keine Methode, die - in vivo - die Bildung von Plaques als Beginn einer Atherosklerose bildlich darstellt. Die Atherosklerose ist eine Volks- krankheit und eine Vorstufe einer koronaren Herzerkran¬ kung, an deren Folgen etwa 40 % der Bevölkerung der Industriestaaten sterben. Es ist daher von besonderem Wert, mit einem einfachen Mittel zu einer bildhaften Darstellung der Gefäßläsionen zu gelangen. So können die erfindungsgemäßen N-Alkyl-Chelate zur Früherkennung atherosklerotischer Gefäßerkrankungen verwendet werden.
Der im Tiermodell (Kaninchen der Art WHHL mit künstlich erzeugten atherosklerotischen Gefäßveränderungen: WHHL- Kaninchen weisen aufgrund eines fehlenden oder defekten LDL Rezeptors hohe LDL Spiegel im Blut auf und bilden daher atherosklerotische Gefäßveränderungen aus) erreichte Quotient nach i.v. Gabe von Verbindungen gemäß der allgemeinen Formel I, wobei R2 ein Endothelin, eine Teilsequenz von Endothelin, ein Endothelin-Analoga, ein Endothelin-Derivat oder ein Endothelin-Antagonist ist, aus Aktivität im Plaque und unbeschädigten Gefäß, lag bei 1 : 5 (vgl. hierzu Abbildungen 1 und 2) .
Es war in hohem Maße überraschend, daß trotz der Lipho- philie des Komplexes, als Folge der R1-Alkylkette mit
ERSATZBLATT einer Kettenlänge von Cg bereits nach 3 Stunden die Ausscheidung soweit erfolgt war. Die Läsionen im Bereich der Aorta sind autoradiographisch überraschend gut dar¬ stellbar. Hier liegt eine durch die Fettähnlichkeit der Moleküle gegebene Affinität zu den Plaques oder deren Rezeptoren vor, die so hoch ist, daß trotz abfallender Konzentration der Verbindung im Blut - als Folge der Ausscheidung via Leber - die Haftung an den Plaques erhalten bleibt.
Die Affinität zu Plaques bei atherosklerotischen Verände¬ rungen der Gefäße läßt sich durch die Variation der R1- Alkyl-Gruppe beeinflussen. So läßt sich über die Eigenart des in R1 befindlichen Restes die Lipophilie steuern, und gleichzeitig bietet R2 als freie Carboxylgruppe die notwendige Voraussetzung für eine gute Wasserlöslichkeit. Anstelle von R2 als freie Carbonsäure kann aber auch eine Amidierung dieser Carboxylgruppe mit einem Aminokohlen- wasserstoff zur Wasserlöslichkeit beitragen.
Es ist bekannt, daß Proteine, insbesonders kurzkettige Proteohormone wie Endotheline, beim Ankoppeln eines Chelators über eine kovalente Bindung ihre Wirksamkeit verlieren. Völlig unerwartet war daher das Verhalten der erfindungsgemäßen Verbindungen bei der kovalenten Bindung an Endotheline, deren Antagonisten oder Fragmente (Beispiel 11, 12) .
Die hier gezeigte Art der Generierung der erfindungsge- mäßen N-Alkyl-Komplexbildner der allgemeinen Formel I mit Endothelinen (Beispiel 11 und 12) aus Chelatbildungs- vorstufen ist eine neue Methode zur Generierung von solchen Komplexbildungsstellen. Die Stabilität der neuen N-Alkyl-Komplexe der allgemeinen Formel I entspricht den bekannten N3S-Komplexen.
ERSATZBLATT Nich -invasive Techniken zur Diagnose der Atherosklerose wurden beschrieben, insbesonders mit einer Radio-Jod- Markierung. So wurden mit Radioisotopen markierte Anti¬ körper oder auch markierte "Low Density Lipoproteine" (LDL) vorgestellt, die an atherosklerotische Wandbereiche binden (Lees et al . 1983, J. Nucl. Med. 24, 154 -156, Kaliman et al . 1985, Circulation, 72, 300; Virgolini et al. 1991, Eur. J. Nucl. Med., 18, 944-947) . Diese Metho¬ den beinhalten jedoch entscheidende Nachteile, wie z.B. die antigene Wirkung der Antikörper auf den Organismus und die lange Zeitdauer (mehrere Tage) , die zur Isolie¬ rung, Reinigung und Markierung des LDL aus dem Blut des Patienten benötigt wird. Vor allem aber sind diese großen Moleküle durch eine lange Halbwertzeit im Blut ausge- zeichnet, die zusammen mit einer hohen Hintergrundstrah¬ lung im gesamten Körper eine Lokalisation der atheros- klerotischen Läsionen erschwert, wenn nicht gar unmöglich macht (Shih et al . 1990 Proc. Natl . Acad. Sei., 87, 1436 - 1440) , synthetisierten Teilsequenzen des LDL-Proteinan- teils (apo-B-100) , die zwar noch an die atheroskleroti- schen Plaques binden, aber sich durch eine weitaus kürze¬ re Halbwertzeit im Blut und ein verbessertes Si¬ gnal/Rausch-Verhältnis hervorheben. Aufgrund einer zu geringen Affinität zum Plaque und/oder der geringen Dichte der Bindungsstellen dieser Peptide im Plaque, konnte auch mit diesen apo-B-Peptiden keine erfolgreiche in vivo Diagnose der Atherosklerose gezeigt werden.
Allgemein ist diesen Verbindungen der Nachteil des radio- aktiven Iod-123 zu eigen. Die schlechte Verfügbarkeit wegen der Herstellung im Cyclotron und der physikalischen Halbwertzeit von 13 Stunden, verbunden mit der leichten Abspaltbarkeit im Organismus. So war es überraschend, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen nach Formel I nach kovalenter Bindung an NH-Gruppen des Endothelins und
Komplexierung mit 99m-pc e-j_ne gute Anreicherung in athero- skierotischen Plaques zeigten. Insbesonders auffallend ist der Vorteil, daß die n = 1 und n = 0 Verbindungen nach kovalenter Bindung an Endotheline über eine Amidbil- dung neue N-Alkyl-Peptid-Komplexbildner generieren, ggf. unter Einbeziehung der in geeigneter Position befindli¬ chen NH- und SH-Gruppen des jeweiligen Endothelins.
Bei der Umsetzung der erfindungsgemäßen Verbindungen mit dopaminergen bioaktiven Molekülen geht überraschend die Rezeptoraffinität dieser aus der Ergolinreihe stammenden Verbindungen nicht verloren, sondern es gelang sogar bei Vorstufen - mit oder ohne Affinität zum D2-Rezeptor - eine hinreichende Gehirngängigkeit zu erreichen, die eine Darstellung der D2*-Rezeptoren ermöglicht. Bemühungen, mit 99mTc+5-Komplexen Rezeptoren im Gehirn darzustellen, sind bis heute ohne Erfolg geblieben. So findet man bei der Umsetzung von 8α-Amino-6-Methyl-Ergolin mit Mercapto- Acetyl-Glycyl-Glycyl-Glycin zum 8α-Amid und Komplexierung mit 99mτc+5 nach i.v. Injektion an der Ratte (Wistar) keine Aufnahme im Gehirn.
Führt man hingegen die Umsetzung mit den erfindungsgemä¬ ßen Verbindungen nach Formel I durch, wobei R1 = Methyl ist und die Amidierung oder Veresterung über R2 erfolgt, so erhält man unter analogen Bedingungen eine Anreiche¬ rung im Gehirn von 0,1 bis 0,5 % der Dosis.
Figure imgf000027_0001
ERSATZBLATT Bei n = 1 und n = 0 Komplexen bilden sich neue N-Alkyl- Peptid-Komplexstrukturen heraus, die im Zusammenwirken mit dem bioaktiven Molekül, überraschenderweise Struktu¬ ren dopaminerger Verbindungen nachahmen und eine hohe Anreicherung im Gehirn zeigen, die zur Sichtbarmachung der D-Rezeptoren genutzt werden kann (Formel IX) .
Figure imgf000028_0001
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen er¬ folgt nach den dem Fachmann bekannten Verfahren [A Spe¬ cialist Periodical Report; Amino-acids, Peptides and Proteins;
The Chemical Society, Burlington House, London, W1VOBN]. Zur Herstellung der Verbindungen mit R1 = CH3 und R2 = OH geht man vom Sarcosin aus und setzt dieses mit Chloracetylchlorid um. Das entstehende Chloracetylsarco- sin wird mit Thiobenzoesaure in üblicher Weise umgesetzt und man gelangt zu Strukturen mit n = 0
R3S-CH2-CO-N- (CH2-CO-NH) 0-CH2-COR2
/ CH3
Verbindung A
Die Herstellung der Verbindungen mit n = 2 erfolgt durch Umsetzung des Diketopiperazins des Glycins mit Chloracetylchlorid. Das entstehende Chloracetylglycyl-
ERSATZBLATT glycin wird anschließend mit N-Methylamin oder zur Ein¬ führung längerer Reste mit N-Alkylaminen, Phenylaminen, Alkyl-oxa-alkylaminen, Cycloalkylaminen oder Glycinglycolsäureester umgesetzt. Durch erneutes Umsetzen mit Chloracetylchlorid und anschließende Thiobenzoylie- rung werden Verbindungen der Formel n = 2 erhalten.
R3S-CH2-CO-N- (CH2-CO-NH)2-CH2-COR2 / R1
Verbindung B
R1 steht dabei für die Variationen am Sarcosylstick- stoffatom
Die entsprechenden Verbindungen mit n = 1 erhält man durch Umsetzung von Salzen des Glycins mit N - geschütz¬ ten SarcosylVerbindungen oder durch Umsetzung von Glycin mit Chloracetylchlorid mit nachfolgender Aminolyse der Chlormethylgruppe. Erneute Reaktion mit Chloracetylchlo¬ rid und anschließender Thiobenzylierung liefert die Titelverbindungen mit n = 1.
R3S-CH2-C0-N- (CH2-CO-NH) -L-CH2-COR2 /
Rl
Verbindung C
Die Verbindungen A, B, C reagieren in üblicher Weise mit Aminogruppen- oder Hydroxylgruppentragenden Reaktions- partnern. Zu diesem Zweck werden A bis C in N-Methyl- pyrrolidon gelöst, mit BOP (B. Castro et al. Tetrahedron Letters 14 (1975) 1219) oder TBTU (Knorr et al . Tetrahe- ■ dron Letters 30 (1989) , 1927) voraktiviert und anschlie- ßend mit der Aminokomponente umgesetzt. Veresterungen
ERSATZBLATT werden vorzugsweise mit Dicyclohexylcarbodiimid in Gegen¬ wart von Dimethylaminopyridin durchgeführt. Für die Synthese von Verbindungen mit einem Estrogen als Bioli- gand geht man von einem Estrogen aus, das bereits einen ungesättigten Substituenten in 17α wie Propargylamin- oder Propargylyalkolholrest trägt und setzt diesen mit einer der Verbindungen A bis C in der beschriebenen Weise um.
Die Umsetzung der Verbindungen A bis C mit Peptiden, insbesondere mit Endothelinbausteinen erfolgt nach in der Peptidchemie gebräuchlichen Methoden entweder konventio¬ nell in Lösung, vorzugsweise in Dimethylformamid, Dime- thylacetamid, N-Methylpyrrolidon, Dimethylsulfoxid oder Gemischen aus diesen Komponenten. Bei Verwendung der
Solid-Phase-Methode kann die Acylierung der Aminokompo- nente auch unter üblichen Bedingungen am Syntheseharz erfolgen. Abspaltung vom Syntheseharz liefert die ge¬ wünschten Verbindungen. Eine präparative Reinigung, falls erforderlich, erfolgt chromatographisch an einer RP 18
Säule in einem Wasser / Acetonitrilgradienten, der 0,1 % Trifluoressigsäure enthält.
Für die Umsetzung mit Aminogruppen- oder Hydroxylgruppen- tragenden Ergolinen wurde anlog zu den Umsetzungen mit Peptiden in Lösung verfahren. Die Umsetzungen wurden in N-Methylpyrrolidon durchgeführt. Die präparative Reini¬ gung erfolgt ebenfalls wie für Peptide angegeben.
Die anderen R4-Reste werden nach Aufbau der geschützten Dipeptide A - C erhalten in dem R1, wobei R2 = OH ist, nach Aktivierung mit
NH2-CH2C1,
NH2-CH2-CH=CHJ oder
ERSATZBLATT NH2 -CH2 - C=CJ
umgesetzt wird und nach der Palladium-O-Reaktion das 17α- Ethinylsteroid mit dem gewünschten Komplexbildner über eine C-C-Bindung kovalent gebunden wird.
Die Komplexbildung wird bevorzugt in wässrigem Medium, bei einem pH-Wert zwischen 6 und 9 und bei Raumtempera- tur, durch Reduktion von Na-Pertechnetat mit z.B.
Zinn(II) chlorid oder Dithionid, ggf. über einen Hilfsli- ganden wie Natriumeitrat oder Natriumtartrat ausgeführt, wobei die Schutzgruppe R3 bereits zuvor oder in situ abgespalten wird.
Eine Aktivierung der im Falle von R2 = OH entstehenden R2 Carboxylgruppe oder der Ersatz der Carboxylgruppe durch eine NCS- oder ähnlich reaktive Gruppe führen dazu, Peptidchelate kovalent an ein größeres Protein oder Proteohormone, Endotheline, Endothelinanaloge, Endothe- lin-Antagonisten, Endothelinderivate, Teilsequenzen von Endothelinen zu binden und nachträglich eine Komplexie- rung durchzuführen.
Wie in der Herstellungsvorschrift ausgewiesen, lassen sich die erfindungsgemäßen 99mTc-und 186' 188Re-Komplexe bei Raumtemperatur, neutralem bis schwach alkalischem pH und mit oder ohne Umchelatisierung (z.B. über ein Heptagluconat-99mTc-Komplex) in Ausbeuten zu 95 % als Komplexe herstellen. Ihre leichte Salzbildung über ein freies Kation führen zu einer guten Wasserlöslichkeit.
Herstellung der Metallkomplexe: Die Abspaltung der Schutzgruppe erfolgt nach dem Fachmann bekannten Methoden (s. "Protective groups in organic synthesis" T.N. Greene, John; Wiley and Sons 1981) .
ERSATZBLATT Für die Anwendung im humandiagnostischen Bereich werden üblicherweise zwischen 370 MBq und 1850 MBq eingesetzt, bevorzugt 740 bis 1480 MBq. Zur Anwendung am Menschen werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Form eines Kit ' s bereitgestellt. Der Kit enthält mindestens einen Chelator nach der allgemeinen Formel I in freier oder an Liganden gebundener Form.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Cold-Kit, welches einen Chelatbildner nach der allgemeinen Formel I in freier Form oder an ein bioaktives Molekül, wie z.B. eine Ergolin-, Estradiol- oder Endothelin-Derivat gebun¬ den, enthält und welches in der Lage ist, Metallatome zu binden.
Erhebliche Schwierigkeiten bereitet oft die Abspaltung der intermediär zur Ausführung der Synthese eingeführten Schutzgruppen. Gerade Chelatbildner mit Peptid-Verknüp- fungen werden bei der Abspaltung der -S-Schutzgruppe (R3) durch gleichzeitig ablaufende Spaltung der Peptidkette stark in Mitleidenschaft gezogen bzw. führen zu nicht mehr verwertbaren Bruchstücken, umso überraschender war es, daß bei gleichzeitiger Anwesenheit von Wasser- stoff/Pd/CaC03, also einer Schutzgruppenabspaltung unter hydrierenden Bedingungen, in Gegenwart von dem üblich angewendeten Alkali, eine hohe, bis zu 80 % reichende Abspaltung eintritt.
Diese entscheidende Verbesserung in der Synthese der freien Chelat-Komplexe ist insofern von hoher Bedeutung, als damit eine Schutzgruppenabspaltung vor der Kit-Formu¬ lierung erfolgen kann und die Gewinnung des schutzgrup- penfreien Chelators technisch erheblich verbessert wird.
ERSATZBLATT Am Beispiel 3 wird die erfindungsgemäße Abspaltungsmetho¬ de beschrieben. Während bei der üblichen Abspaltung mit Alkali ein nur schwer zu trennendes Gemisch erhalten wurde, erhielt man bei der Schutzgruppenabspaltung mit Alkali in Gegenwart von Wasserstoff/Pd/CaC03 eine ~ 100
%ige Stoffausbeute mit über 80 % an gewünschtem Material.
Beispielhaft sei genannt, daß die Umsetzung mit Aminen bzw. Alkoholen über eine Aktivierung der Carbonsäure R2 = OH verläuft, wobei dem Fachmann bekannte Methoden ange¬ wendet werden.
Als aktivierte Gruppen seien beispielhaft genannt: Säu¬ rechloride, gemischte Anhydride [Org. Prep. Proc. Int. 1975, 7, 215], aktivierte Ester [Adv. Org. Chem. Part B, 472] . Die Verknüpfung mit Biomolekülen kann direkt oder auch über Linker erfolgen, hier sei die Carbodiimidmetho- de (Fieser, Reagents for Organic Synthesis 10, 142) genannt. Die Verknüpfung erfolgt derartig, daß zwischen Chelat und Biomolekül eine kovalente Bindung gebildet wird.
Bei Verwendung von Steroiden als Biomoleküle werden bevorzugt Estradiol Derivate mit Substituenten in 17α- Position verwendet. Die Synthese solcher Verbindungen wird z.B. von Blickenstaff für 17α-Ethinyl-Derivate des Estradiols beschrieben. (Blickenstaff A. ; Steroids 46, 889 (1985); USP 462.426) . Für Estradiol-Derivate mit 17α- Propargyl-Substituenten mit endständiger NH2 oder OH-Funktion wird die Synthese von Blickenstaff, Brandes und Poirier beschrieben. (Blickenstaff et al . ; Steroids 48, 223 (86) ; Brandes, A. et al . Dissertation 87-01441, 1986, University of Illinois, D. Poirier et al . J. Steroids. Biochem. Molec. Biol. 38, No. 6, 759-774, 1991) .
ERSATZBLATT Eine Übersicht über die Verknüpfung von Dreifach- mit Zweifach-Bindungen, z.B. nach der Palladium-0-Reaktion sind in Aldrichchimica Acta, Vol. 15, No. 1, 1982; Shun- ichi Murahashi et al. , Stephen A. Godleski, Tetrahedron Letters, Vol. 22, No. 24, pp 2247-2250, 1981; Tetrahedron Letters, Vol. 29, No. 24, 2973-2976, 1988; beschrieben. Hierbei wird z.B. I mit R2 = - NH-CH2-C≡CH bei der Kopp¬ lung mit z.B. 17α[2-Halogen-ethenyl] -estradiol gemäß genannter Literaturstellen umgesetzt.
Aus der Literatur ist bekannt, daß Ergotalkaloide vom Typ der 6-Methyl-8-substituierter Ergoline über ein breites Spektrum an chemischer Variation verfügen, ohne daß bis heute ein Zusammenhang zwischen Wirkung und Substituenten in Position 8 eindeutig erkennbar wäre [Ergot Alkaloids and Related Compounds, Editors: B. Berde and H.O. Schild, Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, 1978] .
Ein bevorzugter dopaminerger Ligand ist Ergolin. Eine Übersicht über Synthesewege zu 8-substituierten Ergolinen findet man bei Ergot Alkaloids and Related Compounds, Editors B. Berde and H.O. Schild, Springer-Verlag Berlin, Heidelberg, New York, 1978, Chapter II Chemical Back- ground, J. Ruisemmann and P.A. Stadler.
Bevorzugt ist die Umsetzung mit dem 8α-Amino- bzw. 8ß- Hydroxy-Methyl-Ergolin. Sie erfolgt über eine aktivierte Gruppe in R2, beispielsweise das mit Benzotriazol-1-yl- tetra-methyl-uronium-tetrafluoroborat oder nach der bekannten Carbodiimidmethode.
Bei der erfindungsgemäßen Anwendung der n = 1 und n = 0 Komplex- bzw. Partialkomplexbildner werden unter Einbe¬ ziehung des Stickstoffs in der 8α-Amino und 6-N-Methyl Gruppe des Ergolins neue Komplexe generiert.
ERSATZBLATT Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung der Metallchelate für diagnostische und/oder therapeuti¬ sche Zwecke sowie pharmazeutische Mittel, die mindestens ein erfindungsgemäßes Chelat der allgemeinen Formel I, gegebenenfalls mit den in der Galenik üblichen Zusätzen, enthalten.
Zur Anwendung am Menschen werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Form eines Cold- oder Hot-Kit's bereit- gestellt. Der Kit enthält mindestens einen Chelator nach Formel I in freier oder gebundener Form, wobei die Ligan¬ den bevorzugt aus der Stoffklasse der Ergoline, Estra¬ diole, Endotheline, kurzkettige synthetische Peptide, Cholecystokinine gewonnen werden.
Beispiele
Allgemeine Komplexbildung mit Natrium-Gluconat
99mTc-Gluconat :
2 ml 99mTc-Generatoreluat werden zu 2 ml 0,1 M Natrium- gluconatlösung gegeben und mit 10 μl 0.01 M SnCl2 (in
0,01 M HC1) versetzt. Danach erfolgt dünnschichtchromatographische Prüfung der quantitativen Pertechnetatreduktion.
DC (Kieselgel/Aceton) : 99mTc-Gluconat Rf: 0-0.1;
99mTc04- Rf: 0 9
Beispiel 1
[99mTc] -Mercaptoacetyl-Sarkosin
1. Stufe: Chloracetyl-sarkosin:
0,07 mol Sarkosin werden in 50 ml IN Natronlauge gelöst und bei 0°C portionsweise mit 0,08 mol Chloracetylchlorid
ERSATZBLATT und 110 ml IN Natronlauge versetzt. Nach 45 min ist die Zugabe beendet und die Reaktionslösung wird mit 20 ml 5N Salzsäure angesäuert.
Das Produkt wird unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt und der Rückstand mit dreimal je 50 ml kaltem Aceton extrahiert. Das Aceton wird unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit 100 ml Ether extra¬ hiert . Der Ether wird abgedampft und das zurückbleibende Öl mit etwas Ether aufgenommen und unter starkem Rühren zur Kristallisation gebracht. Ausbeute: 77 % d.Th. DC: Kieselgel// Butanol/ Eisessig/ Wasser 2:1:1 Rf: 0,65 (Jodbedampfung)
2. Stufe: Benzoylmercaptoacetyl-sarkosin:
0,02 mol Chloracetyl-sarkosin werden in 750 ml Methanol unter Rühren in einer Schutzgas-Atmosphäre bei Raumtempe¬ ratur gelöst. Dazu wird langsam eine Lösung von 0,041 mol Thiobenzoesaure, gelöst in 20 ml Methanol und neutrali¬ siert mit Natriummethylat, zugetropft und weitere 12 h gerührt .
Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit 2N Salzsäure aufgenommen. Das Reaktionsprodukt fällt als braunes Öl aus, das von der überstehenden Lösung abgetrennt und mit Chloroform extra- hiert wird. Das Chloroform wird unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit Ether versetzt. Durch Kühlen und intensives Rühren wird das Reaktionsprodukt ausgefällt, abfiltriert und auf dem Tonteller getrocknet.
ERSATZBLATT pH-Titration und IR-Spektrum zeigten, daß das Reaktions¬ produkt aus einem Gemisch von 60 % Methylester und 40 % freier Aminosäure bestand.
3. Stufe: Abspaltung der Schutzgruppe:
0,08 mmol des erhaltenen Gemisches werden in 2 ml absolu¬ tem Methanol suspendiert, mit 2 mg Pd/CaC03 (5 %) ver¬ setzt und bei einem Wasserstoffdruck von 66 kPa unter Rühren mit einer Lösung von 0,13 mmol Natriummethylat in 1 ml absolutem Methanol umgesetzt. Man rührt noch 15 min und neutralisiert danach die Lösung mit methanolischem Dowex 50WX8. Der Katalysator und das Harz werden abfil¬ triert, die Substanz lyophilisiert und die Verunreini- gungen mit 2 ml Benzol extrahiert. Anschließend wird das Benzol abgetrennt und die Substanz aus Ethanol lyophili¬ siert.
Das erhaltene Produktgemisch aus Ester und freier Säure wird über Sephadex G10 getrennt. (Säule 14 x 1000, 20 ml/h, RI-Detektor) Mercapto-acetyl-sarkosin-methylester wird als zweite Fraktion abgetrennt, vgl. Beispiel 1 a) .
Mercaptoacetyl-sarkosin : DC:
Kieselgel//Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1
Rf: 0,7 (Ninhydrin)
RP 18/Methanol Rf: 0,85 (Ninhydrin)
•--H-NMR (DMSO) TMS δ2, 9 (SH, 1H) , δ3, 1 (N-CH3, 3H) , δ3, 9 (-CH2, 2H)
Markierung von N-Methyl-MAGl
Zu 2 ml 99mTc-gluconatlösung werden ca. 1 mg N-Methyl- MAG1, gelöst in 200 μl Wasser, gegeben. Nach einer Reak-
ERSATZBLATT tionszeit von 15-20 min erfolgt die Reinheitskontrolle mittels DC auf Kieselgel 60/95 % Ethanol .
Die Hauptmenge der Aktivität läuft mit Rf = 0.1 (ca.80%) ; weitere Peaks bei Rf = 0.2 (ca.10%) und Rf = 0.4(ca.l0%) . Im Elektropherogramm wird ein anionischer Tc-MAGl-Komplex nachgewiesen mit einer relativen Beweglichkeit uPertechn. / uTcMAGl von °'2-
Beispiel 1 a:
Bei der Auftrennung des Reaktionsgemisches aus Beispiel 1, Stufe 3 erhält man 20 % Mercapto-acetyl-sarkosin- methylester als farbloses Öl.
Beispiel 2
Mercapto-acetyl-hexylaminoessigsäure
1. Stufe: Hexylaminoessigsäure
0,021 mol Chloressigsäure werden mit 0,1 mol Hexylamin versetzt und 5 Tage bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach wird der dicke Sirup in 500 ml Aceton eingerührt und kristallisiert in Form von weißen Blättchen aus. Ausbeute 2,1 g (63 % d.Th.)
DC:
Kieselgel//Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1 Rf: 0,6 (Ninhydrin)
2. Stufe: Chloracetyl-hexylaminoessigsäure:
0,01 mol Hexylaminoessigsäure werden in 10 ml IN Natron- lauge gelöst, gekühlt und bei 0°C abwechselnd mit 1,5 ml (1 ml = 0,012 mol) Chloracetylchlorid und 20 ml IN Na-
ERSATZBLATT tronlauge versetzt. Nach 30 min ist die Reaktion beendet und es wird noch 30 min unter leichter Erwärmung nachge¬ rührt. Mit 3 ml 5N Salzsäure wird angesäuert und das ausfallende braune Öl abgetrennt.
Das Öl wird mehrfach mit heißem Wasser extrahiert und als farbloses Öl ohne weitere Reinigung für die nächste Synthesestufe eingesetzt.
DC:
Kieselgel//Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1 Rf: 0,75 ( odbedampfung)
3. Stufe: Benzoylmercaptoacetyl-hexylaminoessigsäure:
0,018 mol Chloracetyl-hexylaminosäure werden in 500 ml Methanol unter Stickstoff gerührt. 0,036 mol Thiobenzoe¬ saure werden mit Natriummethylat neutralisiert und inner¬ halb von 30 min zu der Lösung gegeben. Es wird noch weitere 12 h unter Schutzgas gerührt. Das Methanol wird unter vermindertem Druck entfernt, der Rückstand mit 2N Salzsäure angesäuert und das ausfallende gelbe Öl abge¬ trennt. Ausbeute: 370 mg DC:
Kieselgel//Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1 Rf: 0,5
Beispiel 3
[99m-pc] Mercaptoacetyl-sarkosyl-diglycin
1. Stufe: Chloracetyldiglycin:
10 g Glycinanhydrid werden in einem 250 ml Dreihalskolben in 50 ml 2N Natronlauge bei Raumtemperatur gelöst. Nach
ERSATZBLATT 45 min wird die Lösung auf 0 °C abgekühlt und 11,1 g Chloracetylchlorid und 24 ml 5N Natronlauge abwechselnd unter fortgesetztem Rühren und Kühlen zugetropft. Nach 45 min ist die Zugabe beendet. Anschließend werden 40 ml 5N Salzsäure zugegeben, wobei sich die Lösung entfärbt und die Substanz zu kristallisieren beginnt. Man läßt sie noch ca. 1 h bei 0 °C stehen und saugt ab. Er wird mehr¬ mals mit kaltem Wasser gewaschen und aus heißem Wasser umkristallisiert. Ausbeute: 5 g
Die Mutterlauge wird unter vermindertem Druck eingeengt. Der Niederschlag wird aus Wasser umkristallisiert. Ausbeute: 2,5 g Schmp. : 173 °C
DC: Kieselgel//n-Butanol/Eisessig/Wasser/ 4:1:1
Rf: 0,75 (Jodbedampfung)
IR (fest in KBr) : vc=01636, 1676; 6**^ 1550; v 00H 1708 cm"1
2. Stufe: Sarkosyl-diglycin
5 g Chloracetyldiglycin werden mit 15 ml 33 %iger wäßri¬ ger Methylaminlösung versetzt und 2 Tage bei Raumtempera- tur stehen gelassen. Danach wird die Lösung auf Sirup¬ dicke unter vermindertem Druck eingeengt, der Sirup auf dem Wasserbad erwärmt und mit 50 ml heißem Ethanol ver¬ setzt. Den Niederschlag läßt man in der Kälte absetzen und saugt über eine G4-Fritte ab. Er wird in 43 ml heißem Wasser gelöst und 43 ml heißes Ethanol zugegeben. Das Produkt kristallisiert aus, man saugt ab und lyophili- siert .
Ausbeute: 3 g = 60 % d. Th. Schmp. : 237 °C DC: Silufol//n-Butanol/Eisessig/Wasser/ 4:1:1 Rf: 0,3 (Ninhydrin)
ERSATZBLATT IR ( fest in KBr) : vc=0 1620, 1650, 6-^1540; vCQOH 1672 cm_1 •J-H-NMR (DMSO) TMS δ2, 8 (N-CH3, 3H) , δ3, 8-4,1 (-CH2-,6H)
3. Stufe: Chloracetyl-sarkosyl-diglycin:
2 g Sarkosyl-diglycin werden in 10 ml IN NaOH bei Raum¬ temperatur gelöst und dann bei 0°C unter Rühren abwech¬ selnd mit 1 ml Chloracetylchlorid und 16 ml IN NaOH innerhalb von 30 min versetzt. Man läßt weitere 30 min rühren, säuert mit 3 g 5N HCl an und engt das Produkt unter vermindertem Druck bis zur Trockne ein. Die dabei anfallenden Kristalle werden in heißem Wasser gelöst und die Lösung mit Ethanol versetzt. Vom ausgefallenen Natri- umchlorid wird abfiltriert und das Filtrat unter vermin¬ dertem Druck eingeengt. Durch mehrmaliges Behandeln mit jeweils 30 ml heißem Aceton wird das gewünschte Produkt extrahiert, das Aceton unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit wenig Wasser aufgenommen und lyo- philisiert.
Ausbeute: 1,1 g = 53 % d. Th.
Schmp. : 74 °C
DC: Silufol//n-Butanol/Eisessig/Wasser 4:1:1
Rf : 0,7 (Jodbedampfung) IR (fest in KBr) : vc=0 1655; 0*^1550; VC00H 17 0 cm"1
4. Stufe: Benzoylmercaptoacetyl-sarkosyl-diglycin:
1 g Chloracetyl-sarkosyl-diglycin wird in 140 ml Met¬ hanol, p.a., unter Rühren und unter Schutzgas bei Raum¬ temperatur gelöst.
In einem Erlenmeyerkolben werden 0,8 g Thiobenzoesaure in 3 ml Methanol gelöst und mit Natriummethylat neutrali-
ERSATZBLATT siert. Diese Lösung wird unter Rühren und unter Schutz¬ gas-Atmosphäre langsam zur Ausgangslösung zugetropft und noch weitere 12 Stunden gerührt. Man entfernt unter vermindertem Druck das Lösungsmittel und nimmt den Rück- stand mit 2N HC1 auf. Es wird abgesaugt und mit warmen Wasser neutral gewaschen. Anschließend wäscht man noch mit 20 ml Chloroform, 20 ml Acetonitril und 20 ml Ether und trocknet den Rückstand unter vermindertem Druck. Ausbeute: 0,83 g = 61 % d.Th. Schmp. : 134 °C
DC: Silufol//n-Butanol/Eisessig/Wasser 4:1:1
Rf: 0,8 (Jodbedampfung)
IR (fest in KBr) : vc=o1620,-6-^1550 cm"1,VCOOH1720 cm-1
5. Stufe: Mercaptoacetyl-sarkosyl-diglycin
Alkalische Abspaltung der Schutzgruppe:
Die Abspaltung der Schutzgruppe nach dem üblichen Verfah¬ ren mit Natriummethylat führte zu einem stark verunrei- nigten Endprodukt. Das Mercaptoacetyl-sarkosyl-diglycin ist nur zu etwa 25 % enthalten. Neben einem nicht identi¬ fizierten Nebenprodukt entstehen bei dieser Verseifung in der Hauptsache Mercaptoacetyl-sarkosin und Diglycin. Das gewünschte Produkt wird nur in geringer Ausbeute erhal- ten.
Alkalische Abspaltung unter Hydrierbedingungen:
0,08 mmol Substanz werden in 2 ml wasserfreiem Methanol suspendiert, mit 2 mg Pd/CaCθ3 (5 %) versetzt und bei einem Wasserstoffdruck von 60 kPa unter Rühren mit einer Lösung von 0,13 mmol Natriummethylat in 1 ml wasserfreiem Methanol umgesetzt. Man rührt noch 15 min und neutrali¬ siert danach die Lösung mit methanolischem Dowex 50WX8. Der Katalysator und das Harz werden abfiltriert, die
Substanz lyophilisiert und mit 2 ml Benzol extrahiert.
ERSATZBLATT Anschließend wird das Benzol abgetrennt und die Substanz aus Ethanol lyophilisiert.
Ausbeute: 10,2 mg = 61 % d. Th. , farbloses Öl DC: Silufol//n-Butanol/Eisessig/Wasser 4:1:1 Rf: 0,4 (Ninhydrin) RP 18 // Methanol Rf = 0,8 (Ninhydrin) IR (fest in KBr) : vc=01650, 1680; δjjjjl550, vC00H1745 c _1 -LH-NMR (DMSO) TMS δ 2,8 (SH, 1H) , δ3,0 (N-CH3, 3H),δ 3,5- 4,1 (-CH2,8H), 58,1-8,2 (CO-NH-,2H)
[99m>pc] Mercaptoacetyl-Sarkosyl-Diglycin
1 ml 99mTc-Gluconatlösung wird mit einer Lösung von 0,4 mg Reinsubstanz aus Vorstufe 4, in 0,5 ml Wasser, ver¬ setzt. Nach 30 min ist die Umsetzung vollständig. DC: (Kieselgel 60, 95 % Ethanol) : Zwei Komponenten Rf 0-0,1 (40 %) , Rf 0,8 (60 %) Elektrophorese (pH 7,0) : Beide Komponenten wandern als Anionen.
Beispiel 4
Synthese von [99mTc] -Mercaptoacetyl-Hexylglycyl-Diglycin
1. Stufe: Hexylglycyl-diglycin
0,0048 mol Chloracetyl-diglycin werden mit 0,05 mol Hexylamin und 5 ml Ethanol versetzt und stehen gelassen. Nach 6 Tagen wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Der ölige Rückstand wird in 50 ml Aceton gegeben und erhitzt. Nach dem Abkühlen wird die gelbe
ERSATZBLATT Lösung abgetrennt und der weiße Rückstand nochmals mit ca. 5 ml Aceton gewaschen. Das Produkt wird auf dem Tonteller getrocknet. Ausbeute: 610,5 mg (47 % d. Th.) DC:
Silufol//n-Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1
Rf: 0,3 (Ninhydrin)
RP 18//Methanol, Rf : 0,7 (Ninhydrin)
2. Stufe: Chloracetyl-hexylglycyl-diglycin
0,0022 mol Hexylglycyl-diglycin werden in 5 ml IN Natron¬ lauge gelöst und 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wird die Lösung gekühlt. Bei 0°C werden abwechselnd innerhalb von 30 min 0,3 ml Chloracetylchlo¬ rid und 4 ml IN Natronlauge zugegeben. Dann wird noch 30 min ohne Kühlung gerührt.
Nach dem Ansäuern mit 5N Salzsäure wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt und das Produkt als gelbes Öl gewonnen. Nach mehrmaligem Extrahieren mit jeweils 100 ml heißem Aceton wird das Aceton unter ver¬ mindertem Druck entfernt und der Rückstand mit 30 ml Aceton aufgeschlämmt. Der weiße Bodensatz wird auf dem Tonteller getrocknet.
Ausbeute: 311 mg (40 % d.Th.)
DC: Silufol//n-Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1
Rf: 0,75 (Jodbedampfung)
3. Stufe: Benzoylmercaptoacetyl-hexylglycyl-diglycin
0,00089 mol Chloracetyl-hexylglycyl-diglycin werden in 70 ml Methanol (spezialrein für Mikroelektronik) gelöst und unter Schutzgas (N ) gerührt. 0,002 mol Thiobenzoesaure werden in 5 ml Methanol gelöst und mit 0,4 ml Na-Methano- lat neutralisiert. Diese Lösung wird unter Schutzgas
ERSATZBLATT langsam zugegeben und noch 12 Stunden weitergerührt. Das Methanol wird unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit 2N HCl aufgenommen. Die Salzsäure wird ebenfalls unter vermindertem Druck entfernt, der Rück- stand mit Wasser gewaschen und das Waschwasser durch
Abdekantieren entfernt. Der zähflüssige Rückstand wird mit wenig Methanol versetzt und das Produkt fällt aus. Es wird mit Acetronitril gewaschen und auf dem Tonteller getrocknet. Ausbeute: 253, 3 mg (67 % d. Th.)
DC: Silufol//Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1 Rf: 0,8 (UV)
4. Stufe: Mercaptoacetyl-hexylglycyl-diglycin
0,064 (28,8 mg) mmol Benzoylmercaptoacetyl-hexylglycyl- diglycin werden in 2 ml Methanol suspendiert, 2,7 mg 5 % Pd/CaC03 zugegeben und an der Hydrierapparatur ange¬ bracht. In einem Winkelkolben werden 0,04 ml Na-Methano- lat und 1 ml Methanol gegeben. Die Apparatur wird evaku¬ iert und anschließend mit Wasserstoff gespült.
Das Methanolat wird zugegeben und bei einem Wasserstoff- druck von 60 kPa noch 15 min gerührt. Die Lösung wird mit methanolischem Dowex 50WX8 angesäuert, das Harz über einen Faltenfilter abfiltriert (Argonglocke) , mit Methanol gewaschen und anschließend lyophilisiert. Der Rückstand wird dreimal mit jeweils 4 ml Benzol extra¬ hiert, das Benzol durch Dekantieren entfernt, der Rück- stand erneut in Methanol aufgenommen und lyophilisiert. Das Produkt wurde über eine Sephadex-Säule gereinigt. Ausbeute: 9,8 mg (42 % d. Th.) DC: Silufol//Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1 Rf.0,5 (Ninhydrin)
ERSATZBLATT !H-NMR (DMSO) TMS δl , 2 ( - CH3 , 3H ) , δ3 , 1 ( SH , 1H) , δ3 , 2 (N-CH2 , 10H) , δ3 , 7 ( -CH2 , 6H) , δ3 , 8 ( CH2 - SH , 2H) δ8 , 2 - 8 , 5 ( -NH , 2H)
[99m-pc] -Mercaptoacetyl-hexyl-glycyl-diglycin:
1 ml 99mTc-Gluconatlösung wird mit 400 μl 0,1 N NaOH und 30 μl Vorstufe 4 Lösung - 1,63 mg/100 μl Wasser - ver¬ setzt. Nach 40minütigem Stehenlassen wird der Reaktions- ansatz mit 2 ml einer 0,1 M Natriumphosphatpufferlösung (pH 7,0) neutralisiert. Die Reaktionsmischung ist mindestens 2 Stunden lang stabil. DC (Kieselgel 60; 95 % Ethanol) : Rf 0,7 (95 %) Elektrophorese (pH 7,0) : Wanderung als Anion
Beispiel 4 a
Anreicherung von [99mTc] -Mercaptoacetyl-Hexyl-glycin-
Diglycin in atherosklerotischen Plaques von Aorten an WHHL-Kaninchen.
99,9 GBq (2,7 mCi) der nach Beispiel 4 markierten Sub¬ stanz wurde mit phosphatgepufferter Saline auf 1 ml verdünnt und einem narkotisierten WHHL-Kaninchen Rom- pun/Ketavet (1:2) über eine Ohrvene appliziert. 5 Stunden nach Applikation wurde das Kaninchen getötet und sowohl eine Autoradiographie der Aorta als auch eine Sudan III- Färbung zur Darstellung der atherosklerotischen Plaques durchgeführt (Abbildung 1) . Der Anreicherungsfaktor zwischen normalen und atherosklerotischen Wandbereichen betrug je nach Ausbildung der Plaques (Sudan III-Färbung) zwischen 3 und 5. Die In-vivo-Darstellung eines WHHL- Kaninchens ist in Abbildung 2 dargestellt.
ERSATZBLATT Beispiel 5
S-Bzl-acetyl-Sar-Gly-Gly- [8α-Ergolinylamid]
200 mg S-Bzl-acetyl-Sar-Gly-Gly-OH und 161 mg Benzotria- zol-1-yl-tetramethyl-uronium-tetrafluoroborat wurden in 1 ml N-Methylpyrrolidon gelöst und 172 μl Diisopropyl- ethylamin addiert. Nach 3 min wird die farblose Lösung zu einer gerührten Lösung von 120 mg 8c_-Amino-ergolin getropft. Die rotbraune Lösung wird bei Raumtemperatur noch 4 Stunden gerührt, wobei der Fortgang der Reaktion HPLC-chromatographisch an einer VYDAC C18 Säule (4,6 x 250 mm) unter Anlegung eines Gradienten von 10 % auf 60 % B in 25 min verfolgt wurde (Laufmittel A 1000 ml Wasser/2 ml Trifluoressigsäureanhydrid, Laufmittel B 500 ml
Acetonitril/100 ml Wasser/l ml Trifluoressigsäureanhy¬ drid) .
Der Reaktionsansatz wird ohne weitere Vorbehandlung präparativ an einer VYDAc-Säule (40 x 300 mm) unter
Anlegung eines Gradienten von 20 % auf 30 % B in 20 min getrennt (Laufmittelzusammensetzung wie oben angegeben) .
Anschließend wird lyophilisiert.
Ausbeute: 75 mg Ein Massenspektrum zeigte das erwartete Molekulargewicht.
Beispiel 6
S-Bzl-acetyl - [Nl -Hexyl] -Gly-Gy-Gly- [8α-Ergolinylamid]
60 mg S-Bzl-acetyl- [N*---Hexyl] -Gly-Gy-Gly-OH und 40 mg Benzotriazol-1-yl-tetramethyl-uronium-tetrafluoroborat wurden in 0,6 ml N-Methylpyrrolidon suspendiert und durch Zugabe von 17,2 μl Diisopropylethylamin in Lösung ge- bracht. Diese Lösung wurde zu einer Lösung von 30 mg 8α- Amino-ergolin in 0,4 ml N-Methylpyrrolidon getropft. Nach
ERSATZBLATT 4 Stunden wurde die Reaktionslösung aufgearbeitet. Die rohe Reaktionsmischung wurde präparativ chromatographiert (wie für Beispiel 5 beschrieben) . Anschließende Lyophili- sierung ergab das gewünschte Produkt. Ausbeute: 30 mg eines pseudokristallinen Produktes.
Das Massenspektrum zeigte das erwartete Molekulargewicht.
Beispiel 7
S-Bzl-acetyl-Sar-Gly- [8α-Ergolinylamid]
180 mg S-Bzl-acetyl-Sar-Gly-OH und 161 mg Benzotriazol-1- yl-tetramethyl-uronium-tetrafluoroborat wurden in 1 ml N- methyl-pyrrolidon gelöst und 172 μl Diisopropylethylamin addiert. Nach 3 min wird die farblose Lösung unter Rühren zu einer Lösung von 120 mg 8α-Amino-ergolin getropft. Die rotbraune Lösung wird bei Raumtemperatur noch 4 Stunden gerührt und - wie bei Beispiel 5 beschrieben - aufgearbeitet und chromatographiert. Ausbeute: 70 mg (Pseudokristallin) Ein MS zeigte den erwarteten Peak.
Beispiel 8
S-Bzl-acetyl-Sar- [8α-Ergolinyl-amid]
120 mg S-Bzl-acetyl-Sar-OH und 161 mg Benzotriazol-1-yl- tetramethyl-uronium-tetrafluoroborat wurden in 1 ml N- methyl-pyrrolidon gelöst und 172 μl Diisopropylethylamin addiert.
Man setzt dann analog Beispiel 5 um und erhält nach Aufarbeiten und Trennen 52 mg einer pseudokristallinen Verbindung. Ein MS zeigt den erwarteten Massenpeak.
Beispiel 9
ERSATZBLATT 3,17ß-Dihydroxy-17α- [5 (S-benzoylthio-acetyl-sarkosyl- glycyl-) amino-pent-l-en-3-in] -1,3, 5-estratrien
Man fügt zu einer Suspension von 130,0 mg 17ß-Hydroxy- 17α-iodvinyl-l, 3, 5-estratrien-3-tetrahydropyranyl- ether,0,35 g [S-Benzoyl-thioacetyl-sarkosyl-glycyl- propargylamid] , 11,0 mg Benzyl-triethyl-ammoniumchlorid, 11,5 mg Tetrakis- (triphenylphosphin) palladium (0), 9 mg Kupfer- (I) -iodid, in 5 ml Toluol suspendiert und rührt 90 Stunden bei Raumtemperatur. Man versetzt mit Wasser, extrahiert mit Toluol und trocknet. Das Lösemittel wird unter vermindertem Druck entfernt, der Rückstand in 10 ml Tetrahydrofuran aufgenommen, mit 190 mg Pyridinium- paratoluolsulfonsäure in 5 ml Ethanol versetzt und 3 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Anschließend wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt und man reinigt mit Methylenchlorid/Methanol (8:1) an einer Silicagelsäule. Ausbeute: 30 % d. Th.
Die Substanz zeigt im DC (CH Cl2/MeOH] 5 : 5 einen Rf von 0,4.
Beispiel 10
3, 17ß-Dihydroxy-17α- [N- (benzoyl-thio-acetyl-sarkosyl- glycyl) -amino-propin-1] -1,3,5 estratrien
Man fügt zu einer Suspension von 110 mg 17ß-Hydroxy-17α- propargyl-amino-1, 3, 5-estratrien-3-tetrahydropyranyl- ether, in 3 ml DMF 350 mg S-Benzoyl-thioacetyl-sarkosyl- glycin in 3 ml DMF. Man rührt bei 100°C 24 Stunden unter Schutzgas.
ERSATZBLATT Nach Zugabe von 10 ml Tetrahydrofuran, saugt man vom Kristallisat ab und engt unter vermindertem Druck ein. Der Rückstand wird in 20 ml Tetrahydrofuran aufgenommen, mit 100 mg Pyridinium-para-toluolsulfonsäure in 3 ml Ethanol gelöst, versetzt und 1 Stunde unter Rückfluß erhitzt. Nach Entfernen des Lösemittels wird an Silica- gel-Niederdrucksäule im System Methanol/Methylenchlorid (1:8) gereinigt.
Die Substanz zeigte im DC (CH2Cl2/MeOH) 5 : 5 einen Rf von 0,6.
Ausbeute: 71 mg
Beispiel 11
0,001 mol S-Bzl-acetyl-Sar-Gly-OH und 322 mg Benzotria- zol-1-yl-tetramethyl-uroniumtetrafluoroborat werden in 3 ml DMF gelöst unter Zugabe von 344 μl Diisopropylethyla- min. Es wird zur Bildung des Benzotriazolylesters 5
Minuten voraktiviert und anschließend die klare Lösung zu 33 mmol geschütztem His (Trt) -Leu-Asp (OBut) -Ile-Ile-Trp- Harz addiert. Die Suspension wird eine Stunde gerührt, anschließend mehrfach mit DMF gewaschen, abgesaugt und getrocknet. Das getrocknete Harz wird dann wie üblich mit TFA/Scavanger behandelt, um das Produkt von den Schutz¬ gruppen zu befreien. Die Reinigung wird wie für Beispiel 5 beschrieben ausgeführt.
Die nach Beispiel 10 erhaltene Verbindung wird nach dem als allgemeine Methode (Beispiel 1) angegebenem Verfahren mit 99mTc komplexiert.
Beispiel 12
ERSATZBLATT 0,010 mol His (Trt) -Leu-Asp (OBut) -Ile-Ile-Trp-OH, herge¬ stellt am Sasrin-Harz, werden in einem Gemisch aus DMF/NMP unter Zugabe von 0,010 mol Diisopropylethylamin gelöst und unter Rühren mit 0,010 mol S-Bzl-acetyl-Sar- OH, vorbereitet wie unter Beispiel 11, gelöst in 3 ml DMF versetzt. Es wird 2 Stunden gerührt und anschließend das Lösungsmittel entfernt. Der verbleibende Rückstand wird mit Wasser verrührt und abgesaugt, gewaschen und getrock¬ net. Die Schutzgruppen werden wie üblich entfernt und das Produkt durch Eingießen in Ether erhalten. Die Reinigung wird wie für Beispiel 5 beschrieben ausgeführt.
S-Bzl-acetyl- [N14-Bromphenyl] -Gly-Gly-Gly-OH
1.Stufe: Chloracetyldiglycin
10 g Glycinanhydrid werden in einem 250 ml Dreihalskolben in 50 ml 2N Natronlauge bei Raumtemperatur gelöst. Nach 45 min wird die noch etwas trübe Lösung auf etwa 0 °C abgekühlt und 11,1 g (7,8 ml) Chloracetylchlorid und 24 ml 5N Natronlauge im Wechsel unter Rühren zugetropft. Nach 45 min ist die Zugabe beendet. Die Lösung färbt sich leicht rosa. Anschließend werden 40 ml 5N Salzsäure zugegeben, wobei sich die Lösung entfärbt und die Sub- stanz zu kristallisieren beginnt. Man läßt noch ca.
1 Stunde bei 0 °C stehen und saugt den Niederschlag ab. Er wird mehrmals mit kaltem Wasser gewaschen und aus heißem Wasser umkristallisiert. Ausbeute: 5 g Schmp. : 173-174 °C
Die Mutterlauge wird unter vermindertem Druck eingeengt und der Rückstand wird ebenfalls aus Wasser umkristalli¬ siert. Ausbeute: 2,5 g Schmp. : 173 °C
ERSATZBLATT Gesamtausbeute : 7,5 g = 41 % d.Th.
DC:
Silufol//n-Butanol/Eisessig/Wasser 4:1:1
2.Stufe: 4-Bromphenyl-triglycin
0,0144 mol Chloracetyldiglycin werden mit 0,029 mol 4- Bromanilin in 20 ml Ethanol und 20 ml IN NaOH 7 Stunden am Rückfluß erhitzt. Nach Entfernen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck wird der verbleibende Rückstand dreimal mit je 50 ml warmen Aceton extrahiert. Das zu¬ rückbleibende Produkt wird aus heißem Wasser umkristalli¬ siert. Das Rohprodukt wird in Stufe 3 eingesetzt. Ausbeute: ca. 60 %.
3.Stufe: Chloracetylierung von 4-Bromphenyl-triglycin
0,01 mol 4-Bromphenyl-triglycin werden in 10 ml IN NaOH bei Raumtemperatur gelöst und dann bei 0°C unter Rühren abwechselnd mit 0,012 mol Chloracetylchlorid und 20 ml IN NaOH innerhalb von 30 min versetzt. Man läßt weitere 30 min rühren, säuert mit 5N HC1 an und engt das Produkt unter vermindertem Druck zur Trockne ein. Die dabei anfallenden Kristalle werden in heißem Wasser gelöst und die Lösung mit Ethanol versetzt. Das ausfallende Natrium¬ chlorid wird abfiltriert und das Filtrat am Rotationsver¬ dampfer eingeengt. Durch mehrmaliges Behandeln mit jeweils 30 ml heißem Aceton wird das gewünschte Produkt extrahiert, das Aceton unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit wenig Wasser aufgenommen und lyo¬ philisiert . Ausbeute: 50% d.Th. DC: Silufol//n-Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1 Rf: 0,6
ERSATZBLATT 4.Stufe: S-Bzl-acetyl- [N1-Bromphenyl] -Gly-Gly-Gly-OH
0,01 mol des Chloracetylproduktes werden in 140 ml Methanol unter Rühren und Schutzgas bei Raumtemperatur gelöst. Hierzu werden 0,02 mol Thiobenzoesaure in 20 ml Methanol gelöst und mit Natriummethylat neutralisiert, unter Rühren und unter Schutzgas langsam zugetropft und noch weitere 12 Stunden gerührt. Man entfernt das Lδ- sungsmittel unter vermindertem Druck und nimmt den Rück¬ stand mit 2N HCl auf. Die dabei anfallenden Kristalle werden abgesaugt und mit warmem Wasser neutral gewaschen. Anschließend wäscht man noch mit 20 ml Chloroform, 20 ml Acetonitril und 20 ml Ether und trocknet den Rückstand unter vermindertem Druck. Ausbeute: 60% d.Th.
5.Stufe: Thio-acetyl- [N1-Bromphenyl] -Gly-Gly-Gly-OH
0,08 mmol Substanz von Stufe 4 werden mit 2 ml wasser¬ freiem Methanol suspendiert, mit 2 mg Pd/CaC03 (5%) ver¬ setzt und bei einem Wasserstoffdruck von 66 kPa unter Rühren mit einer Lösung von 0,13 mmol Natriummethylat in 1 ml absolutem Methanol umgesetzt. Man rührt noch 15 Min und neutralisiert danach die Lösung mit methanolischem Dowex 50WX8. Der Katalysator und das Harz werden abfil¬ triert, die Substanz lyophilisiert und mit 2 ml Benzol extrahiert. Anschließend wird das Benzol abgetrennt und die Substanz aus Ethanol lyophilisiert. Die Reinigung erfolgt mittels präparativer HPLC.
DC: Silufol//Butanol/Eisessig/Wasser 2:1:1
Rf: 0,8
Ausbeute: 40% d.Th.
99mTc [Thioacetyl- [N1^-Bromphenyl] -Gly-Gly-Gly-OH
ERSATZBLATT Wie zur allgemeinen Komplexierung vor Beispiel 1 be¬ schrieben, wird Thio-acetyl- [N1-Bromphenyl] -Gly-Gly-Gly- OH mit einem [99mTc] -Gluconat-Präparation umgesetzt.
ERSATZBLATT

Claims

Patentansprüche
1. Verbindungen der allgemeinen Formel I
R3-S-CH2-CO-NR---- [CH2-CO-NH]n-CH2-CO-R2 (I)
worin
n eine Zahl 0,1 oder 2 bedeutet,
R1 einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen, welcher gegebenenfalls durch ein bis drei Sauerstoffatome unterbrochen oder substituiert ist, und welcher gegebenenfalls eine end¬ ständige -COOH-, -OH- oder -NH2-Gruppe trägt, welche gegebenenfalls mit Glykolsaure oder Glykolsäureestern oder -ethern verestert oder verethert ist, wobei die Ester oder Ether mit Carbonsäuren oder Alkoholen mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen gebil¬ det werden, oder einen Phenyl- oder Cyclohexylrest darstellt, wel¬ cher gegebenenfalls in der 4-Position mit einer COOH-, NH2- oder OH-Gruppe, welche gegebenenfalls mit Carbon- säuren oder Alkoholen mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen verestert, verethert oder amidiert ist oder einem Halogenatom substituiert ist,
R2 ein Halogenatom, eine Halogenmethyl-, Methyl- carboxyl-, Trifluormethylcarboxyl, eine NH2- oder eine OH-Gruppe darstellt, wobei die im Falle von R2 = OH gebildete Carboxyl-Gruppe entweder unmittelbar oder nach Veresterung mit einer α,ω-Hydroxycarbonsäure mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen über deren endständi¬ ge Carboxyl-Gruppe mit einem Biomolekül, einem
ERSATZBLATT Steroid, einem Ergolinderivat, einem Benzo- diazepinderivat, einem Cholecystokinin, einem Peptid, einem Protein, einem Proteohormon, einem Aminozucker, einem Endothelin, einem Endothelin- Derivat, einem Endothelin-Antagonisten oder ei¬ nem Endothelinfragment verestert oder amidiert ist,
ein Rest der allgemeinen Formel II
Figure imgf000056_0001
oder der allgemeinen Formel II a
Figure imgf000056_0002
ist, wobei
R4 eine Methylen-, Propenylenamino-, Propinylen- amino-, Methylenamino- oder Methylenoxygruppe und
R8 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe be¬ deutet,
ERSATZÖLATT einen Rest der allgemeinen Formel III
Figure imgf000057_0001
oder der allgemeinen Formel III a
Figure imgf000057_0002
darstellt, worin
R5 eine -NH-, -NH-CO-N<, -NH-CO-NH- oder Methylen¬ oxygruppe,
R ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine Methylgruppe und
R7 ein Wasserstoffatom oder einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit bis zu 6 Kohlen¬ stoffatomen bedeuten,
R3 ein Wasserstoffatom, eine Acetyl-, Benzoyl-, p- Methoxybenzyl-, Acetamidomethyl-, Benzamidomethyl-, Trimethylacetamidomethyl- , Hydroxyacetyl-, Ethoxy- ethyl-, Ethylthio- , Trityl- oder eine leicht abspalt¬ bare Schwefelschutzgruppe bedeutet
ERSATZBLATT und deren Salze mit pharmazeutisch annehmbaren Säuren oder Basen.
2. Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R1 ein geradkettiger oder verzweigter Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder ein p-Bromphenyl- rest ist.
3. Verbindungen nach mindestens einem der Ansprüche 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß R2 eine OH- oder CH3-O- Gruppe darstellt.
4. Verbindungen nach mindestens einem der Ansprüche 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß R2 ein Rest der allge¬ meinen Formel II
Figure imgf000058_0001
oder der allgemeinen Formel II a
Figure imgf000058_0002
ist, wobei
ERSATZBLATT R4 eine Methylen- oder Propinylenaminogruppe und
R8 ein Wasserstoffatom bedeutet,
5. Verbindungen nach mindestens einem der Ansprüche 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß R2 ein Rest der allge¬ meinen Formel III
Figure imgf000059_0001
oder der allgemeinen Formel III a
R5
Figure imgf000059_0002
ist, wobei
R5 eine NH-Gruppe,
R6 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe und
R7 einen Methyl-, Ethyl- oder n-Propylrest darstel¬ len.
ERSATZBLATT 6. Verbindungen nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß R3 ein Wasserstoffatom oder ein Benzoylrest ist.
7. Verbindungen nach Anspruch 1, nämlich
17α- [5- (Mercapto-acetyl-sarkosyl-glycyl-amino-1- penten-3-inyl] estra-1, 3, 5 (10) -trien-3, 17ß-diol,
6-N-Methyl-8α-amino- [8α-N- (thio-acetyl-sarkosyl- glycyl-glycyl) ] ergolin,
6-N-Methyl-8α-amino- [8α-N- (thio-acetyl-sarko- syl) ] ergolin,
6-N-Methyl-8ß-hydroxymethylen- [O- (thio-acetyl-sarko- syl-glycyl-glycyl) ] ergolin und
6-N-Methyl-8ß-hydroxymethylen- [O- (thio-acetyl-sarko- syl-glycyl] ergolin.
8. Metallchelatkomplexe radioaktiver Metallionen der Elemente Tc, Re, Cu, Ga, Gd, Y und In mit
Verbindungen der allgemeinen Formel I
R3-S-CH2-CO-NR1- [CH2-CO-NH]n-CH2-CO-R2 (I)
worin
n eine Zahl 0,1 oder 2 bedeutet,
ERSATZBLATT R1 einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen, welcher gegebenenfalls durch ein bis drei Sauerstoffatome unterbrochen oder substituiert ist, und welcher gegebenenfalls eine end¬ ständige -COOH-, -OH- oder -NH2-Gruppe trägt, welche gegebenenfalls mit Glykolsaure oder Glykolsäureestern oder -ethern verestert oder verethert ist, wobei die Ester oder Ether mit Carbonsäuren oder Alkoholen mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen gebil¬ det werden, oder einen Phenyl- oder Cyclohexylrest darstellt, wel¬ cher gegebenenfalls in der 4-Position mit einer COOH-, NH2- oder OH-Gruppe, welche gegebenenfalls mit Carbon- säuren oder Alkoholen mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen verestert, verethert oder amidiert ist oder einem Halogenatom substituiert ist,
R2 ein Halogenatom, eine Halogenmethyl-, Methyl- carboxyl-, Trifluormethylcarboxylgruppe, eine NH2- oder eine OH-Gruppe darstellt, wobei die im Falle von R2 = OH gebildete Carboxyl-Gruppe entweder unmittelbar oder nach Veresterung mit einer α,ω-Hydroxycarbonsäure mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen über deren endständi¬ ge Carboxyl-Gruppe mit einem Biomolekül, einem Steroid, einem Ergolinderivat, einem Benzodia- zepinderivat, einem Cholecystokinin, einem Pep¬ tid, einem Protein, einem Proteohormon, einem Aminozucker, einem Endothelin, einem Endothelin-
Derivat, einem Endothelin-Antagonisten oder ei¬ nem Endothelinfragment verestert oder amidiert ist,
ein Rest der allgemeinen Formel II
ERSATZBLATT
Figure imgf000062_0001
oder der allgemeinen Formel II a
Figure imgf000062_0002
ist, wobei
R4 eine Methylen-, Propenylenamino-, Propinylen- amino- , Methylenamino- oder Methylenoxygruppe und
R8 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe be¬ deutet,
einen Rest der allgemeinen Formel III
Figure imgf000062_0003
oder der allgemeinen Formel III a
ERSATZBLATT
Figure imgf000063_0001
darstellt, worin
R5 eine -NH-, -NH-CO-N<, -NH-CO-NH- oder Methylen¬ oxygruppe,
R6 ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine Methylgruppe und
R7 ein Wasserstoffatom oder einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit bis zu 6 Kohlen¬ stoffatomen darstellt,
R3 ein Wasserstoffatom, eine Acetyl-, Benzoyl-, p- Methoxybenzyl- , Acetamidomethyl- , Benzamidomethyl- , Trimethylacetamidomethyl- , Hydroxyacetyl- , Ethoxy- ethyl-, Ethylthio-, Trityl- oder eine leicht abspalt¬ bare Schwefelschutzgruppe bedeutet
und deren Salze mit pharmazeutisch annehmbaren Säuren oder Basen.
Metallchelatkomplexe nach Anspruch 8, dadurch gekenn¬ zeichnet, daß die radioaktiven Metallionen Isotope der Elemente Tc und Re sind.
ERSATZBLATT 10. Metallchelatkomplexe nach mindestens einem der An¬ sprüche 8 und 9, dadurch gekennzeichnet, daß das Radioisotop Technetium-99m ist.
11. Verbindungen nach Anspruch 8, nämlich
[99mTc] -Mercaptoacetylsarkosin, [99mTc] -Mercaptoacetyl-sarkosyl-diglycin, [99mTc] -Mercaptoacetyl-hexyglycyl-diglycin und ["mTc] -Mercaptoacetyl-N1- [4-Bromphenyl] -glycyl- glycyl-glycin.
12. Konjugate, enthaltend Verbindungen der allgemeinen Formel I oder Metallchelatkomplexe radioaktiver Metallionen der Elemente Tc, Re, Cu, Ga, Gd, Y und In mit Verbindungen der allgemeinen Formel I und sich selektiv in erkrankten Geweben anreichernde Substan¬ zen, wobei zwischen diesen eine kovalente Bindung besteht und diese im Falle von Carboxy- oder Amino- gruppen enthaltenden Substanzen wie Peptiden, Pro¬ teinen, Antikörpern oder deren Fragmenten, amidisch oder im Falle von Hydroxygruppen enthaltenden Sub¬ stanzen wie Fettalkoholen, esterartig oder im Falle von Aldehydgruppen enthaltenden Substanzen imidisch vorliegt.
13. Konjugate nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß die sich im erkrankten Gewebe anreichernden Sub¬ stanzen Peptide wie Endotheline, Teilsequenzen von Endothelinen, Endothelin-Analoga, Endothelin-Derivate oder Endothelin-Antagonisten bedeuten.
14. Konjugate nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß die Peptide die folgenden Sequenzen
ERSATZBLATT I I
Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr- 1
Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
I I
Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Trp-Leu-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-
Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
Figure imgf000065_0001
Cys-Ser-Ala-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-
Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
-Tyr-
Figure imgf000065_0002
I I
Cys-Ser-Cys-Lys-Asp-Met-Thr-Asp-Lys-Glu-Cys-Leu-Asn-
Phe-Cys-His-Gln-Asp-Val-Ile-Trp,
Ala-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr- Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
Ala-Ser-Ala-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr- Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Trp-Leu-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr- Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
ERSATZBLATT N-Acetyl-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-Phe-Ala-His- Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,
oder die Teilsequenz
His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp
oder die cyclischen Aminosäuresequenzen
Cyclo- (DTrp-DAsp-Pro-DVal-Leu) ,
Cyclo- (DGlu-Ala-alloDIle-Leu-DTrp)
aufweisen.
15. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der allge- meinen Formel I, dadurch gekennzeichnet, daß man
a) ein Diketopiperazinderivat des Glycins oder b) Glycin
mit einem Halogencarbonsäurehalogenid und anschließend mit einem Amin der allgemeinen Formel VI
R1 - NH2 (VI)
wobei R1 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, umsetzt, erneut mit einem Halogencarbonsäurehalogenid umsetzt und anschließend mit einer Verbindung der allgemeinen Formel IV
R3 - SH (IV)
wobei R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat,
ERSATZBLATT umsetzt
oder eine Verbindung der allgemeinen Formel V
NH2-CH2-CO-R2 (V)
wobei R2 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, mit einem Halogencarbonsäurehalogenid und an- schließend mit einem Amin der allgemeinen Formel VI
R1 - NH2 (VI) ,
wobei R1 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, umsetzt, erneut mit einem Halogencarbonsäurehalogenid umsetzt und anschließend mit einer Verbindung der allgemeinen Formel IV
R3 - SH (IV)
wobei R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, umsetzt und daß man diese Verbindung gegebenenfalls mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base in deren Salz überführt.
16. Verfahren zur Herstellung von Metallchelatkomplexen radioaktiver Metallionen der Elemente Tc und Re mit Verbindungen der allgemeinen Formel I, dadurch ge¬ kennzeichnet, daß Technetium-99m oder Re in Form von Pertechnetat oder Perrhenat in Gegenwart eines Reduk¬ tionsmittels und gegebenenfalls eines Hilfsliganden mit einer Verbindung der allgemeinen Formel I
R3-S-CH2-CO-NR**-- [CH2-CO-NH]n-CH2-CO-R2 (I)
ERSATZBLATT worin R1, R2 und R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, umgesetzt wird.
17. Kit zur Herstellung von Radiopharmaka, bestehend aus einer Verbindung der allgemeinen Formel I gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7 oder einem Konjugat gemäß einem der Ansprüche 12 bis 14, sowie einem Reduktionsmittel und gegebenenfalls einem Hilfsliganden, die in trockenem Zustand oder in Lösung vorliegen, sowie einer Gebrauchsanweisung mit einer Reaktionsvor¬ schrift zur Umsetzung der beschriebenen Verbindungen mit Technetium-99m oder Re in Form einer Pertech- netatlösung oder Perrhenatlösung.
18. Radiopharmazeutische Zusammensetzung zur nicht inva- siven in vivo Darstellung von Rezeptoren und rezept- orhaltigem Gewebe und/oder von atherosklerotischen Plaques und/oder zur Nierenfunktionsprüfung, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine Verbindung nach einem der Ansprüche 8 bis 10 oder einem Konjugat gemäß ei¬ nem der Ansprüche 12 bis 14 sowie gegebenenfalls mit den in der Galenik üblichen Zusätzen enthält, wobei die Verbindung in einem Kit nach Anspruch 17 mit Technetium-99m oder Re in Form einer Pertechnetatlδ- sung oder Perrhenatlösung zubereitet wird.
ERSATZBLATT
PCT/DE1994/001295 1993-11-01 1994-10-27 N-alkyl-peptidchelatbildner, deren metallkomplexe mit radionukliden, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende radiopharmazeutische zusammensetzungen WO1995012610A1 (de)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP95900059A EP0726909A1 (de) 1993-11-01 1994-10-27 N-alkyl-peptidchelatbildner, deren metallkomplexe mit radionukliden, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende radiopharmazeutische zusammensetzungen
JP7512959A JPH09508351A (ja) 1993-11-01 1994-10-27 Ｎ‐アルキルペプチドキレート化剤、その放射性核種との金属錯体、その製造方法、およびこの化合物を含む放射性医薬
AU81038/94A AU681919B2 (en) 1993-11-01 1994-10-27 N-alkyl peptide chelate formers, their metal complexes with radionuclides, processes for producing them and radio-pharmaceutical compositions containing these compounds
KR1019960702247A KR960705842A (ko) 1993-11-01 1996-04-30 N-알킬 펩티드 킬레이트 형성제, 방사핵종을 갖는 그의 금속 착물, 이들의 제조방법 및 이들 화합물을 함유한 방사성의약 조성물(n-alkyl peptide chelate formers, their metal complexes with radionuclides, processes for producing them and radio-pharmaceutical compositions containing these compound)
NO961743A NO961743D0 (no) 1993-11-01 1996-04-30 N-alkyl-peptid-chelatdannere, deres metallkomplekser med radionuklider, fremgangsmåte ved deres fremstilling og radiofarmasöytiske sammensetninger inneholdende disse forbindelser

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DEP4337600.2 1993-11-01
DE4337600A DE4337600A1 (de) 1993-11-01 1993-11-01 N-Alkyl-Peptidchelatbildner, deren Metallkomplexe mit Radionukliden, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende radiopharmazeutische Zusammesetzungen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1995012610A1 true WO1995012610A1 (de) 1995-05-11

Family

ID=6501750

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/DE1994/001295 WO1995012610A1 (de) 1993-11-01 1994-10-27 N-alkyl-peptidchelatbildner, deren metallkomplexe mit radionukliden, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende radiopharmazeutische zusammensetzungen

Country Status (11)

Country Link
EP (1) EP0726909A1 (de)
JP (1) JPH09508351A (de)
KR (1) KR960705842A (de)
CN (1) CN1134158A (de)
AU (1) AU681919B2 (de)
CA (1) CA2173844A1 (de)
DE (1) DE4337600A1 (de)
HU (1) HUT74881A (de)
NO (1) NO961743D0 (de)
WO (1) WO1995012610A1 (de)
ZA (1) ZA948411B (de)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6162378A (en) * 1999-02-25 2000-12-19 3D Systems, Inc. Method and apparatus for variably controlling the temperature in a selective deposition modeling environment
US6171578B1 (en) 1999-04-14 2001-01-09 Diatide, Inc. Benzodiazepine derivatives for imaging thrombi
US6969728B2 (en) * 2000-05-12 2005-11-29 Genzyme Corporation Modulators of TNF-α signaling

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6241963B1 (en) * 1995-10-19 2001-06-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Dopamine and serotonin transporter ligands and imaging agents

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2077719A (en) * 1980-06-09 1981-12-23 Norton Norwich Products Inc (N-(Cycloalkyl)amino acid compounds and compositions containing same
WO1992019274A1 (en) * 1991-05-08 1992-11-12 Mallinckrodt Medical, Inc. Technetium chelates to be used for determining the renal function
JPH0570484A (ja) * 1991-09-12 1993-03-23 Hitachi Chem Co Ltd ペプチドおよびその塩
WO1993015771A1 (en) * 1992-02-06 1993-08-19 Mallinckrodt Medical, Inc. Ligands for improving metal chelate formation kinetics
WO1993023085A1 (en) * 1992-05-21 1993-11-25 Diatech, Inc. TECHNETIUM-99m LABELED PEPTIDES FOR THROMBUS IMAGING
WO1994022491A1 (de) * 1993-03-31 1994-10-13 Institut für Diagnostikforschung GmbH an der Freien Universität Berlin Bifunktionelle chelatbildner und ihre anwendung in der radiopharmazeutik

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2077719A (en) * 1980-06-09 1981-12-23 Norton Norwich Products Inc (N-(Cycloalkyl)amino acid compounds and compositions containing same
WO1992019274A1 (en) * 1991-05-08 1992-11-12 Mallinckrodt Medical, Inc. Technetium chelates to be used for determining the renal function
JPH0570484A (ja) * 1991-09-12 1993-03-23 Hitachi Chem Co Ltd ペプチドおよびその塩
WO1993015771A1 (en) * 1992-02-06 1993-08-19 Mallinckrodt Medical, Inc. Ligands for improving metal chelate formation kinetics
WO1993023085A1 (en) * 1992-05-21 1993-11-25 Diatech, Inc. TECHNETIUM-99m LABELED PEPTIDES FOR THROMBUS IMAGING
WO1994022491A1 (de) * 1993-03-31 1994-10-13 Institut für Diagnostikforschung GmbH an der Freien Universität Berlin Bifunktionelle chelatbildner und ihre anwendung in der radiopharmazeutik

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 119, no. 13, 27 September 1993, Columbus, Ohio, US; abstract no. 139794, page 947; column r; *
J.P. DIZIO ET AL.: "Progestin-Rhenium Complexes: Metal-Labeled Steroids with High Receptor Binding Affinity, Potential Receptor-Directed Agents for Diagnostic Imaging or Therapy", BIOCONJUGATE CHEMISTRY, vol. 2, no. 5, WASHINGTON US, pages 353 - 366 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6162378A (en) * 1999-02-25 2000-12-19 3D Systems, Inc. Method and apparatus for variably controlling the temperature in a selective deposition modeling environment
US6171578B1 (en) 1999-04-14 2001-01-09 Diatide, Inc. Benzodiazepine derivatives for imaging thrombi
US6969728B2 (en) * 2000-05-12 2005-11-29 Genzyme Corporation Modulators of TNF-α signaling
US7034031B2 (en) 2000-05-12 2006-04-25 Genzyme Corporation Modulators of TNF-α signaling
US8518999B2 (en) 2000-05-12 2013-08-27 Genzyme Corporation Modulators of TNF-αsignaling
US8921547B2 (en) 2000-05-12 2014-12-30 Genzyme Corporation Modulators of TNF-α signaling
US9579325B2 (en) 2000-05-12 2017-02-28 Genzyme Corporation Modulators of TNF-α signaling

Also Published As

Publication number Publication date
NO961743L (no) 1996-04-30
NO961743D0 (no) 1996-04-30
CA2173844A1 (en) 1995-05-11
HUT74881A (en) 1997-02-28
JPH09508351A (ja) 1997-08-26
AU8103894A (en) 1995-05-23
CN1134158A (zh) 1996-10-23
DE4337600A1 (de) 1995-05-04
KR960705842A (ko) 1996-11-08
HU9601140D0 (en) 1996-07-29
EP0726909A1 (de) 1996-08-21
ZA948411B (en) 1995-06-30
AU681919B2 (en) 1997-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69310733T2 (de) Technetium-99m-markierte peptide zur bilderzeugung
DE69230525T2 (de) Technetium-99m markierte Polypeptide zur Bildformung
DE69326335T2 (de) Technetium-99M-markierte peptide zur Bilderzeugung
DE69738353T2 (de) Radiometall-bindende peptide analoge
EP0692976B1 (de) Chelatbildner vom typ xn 1?s 1?o 1? für radioaktive isotope, deren metallkomplexe und ihre verwendung in diagnostik und therapie
DE19536783A1 (de) Bifunktionelle Nicotinamid-Chelatbildner vom Typ N¶2¶S¶2¶ für radioaktive Isotope
DE19536781A1 (de) Bifunktionelle sulfidhaltige Sulfonamid-Chelatbildner vom Typ XSNS für radioaktive Isotope
EP0304780A1 (de) Verfahren zur Markierung von Substanzen mit Technetium oder Rhenium
EP0692979A1 (de) Bifunktionelle chelatbildner und ihre anwendung in der radiopharmazeutik
DE19536785A1 (de) Bifunktionelle sulfidhaltige Sulfonamid-Chelatbildner vom Typ S¶2¶NY für radioaktive Isotope
DE69333611T2 (de) Radiomarkierte mehrwertige phenolverbindungen
WO1995012610A1 (de) N-alkyl-peptidchelatbildner, deren metallkomplexe mit radionukliden, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende radiopharmazeutische zusammensetzungen
EP0692981B1 (de) Chelatbildner vom typ xn 1?s 1?x&#39; für radioaktive isotope, deren metallkomplexe und ihre verwendung in diagnostik und therapie
EP1013642A2 (de) Chelatoren sowie deren Tricarbonyl-Komplexe mit Technetium und Rhenium
EP0692980B1 (de) Chelatbildner vom typ s3n2 für radioaktive isotope, deren metallkomplexe und ihre verwendung in diagnostik und therapie
EP0474323A1 (de) Reduzierende Chelatbildner, deren Technetium- und Rhenium-Komplexe, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie deren Verwendung in Diagnostik und Therapie
DE4425781A1 (de) Technetium-Sulfonamid-Komplexe, deren Verwendung, diese enthaltende pharmazeutische Mittel, sowie Verfahren zur Herstellung der Komplexe und Mittel
DE69824147T2 (de) Technetium-99m markierte Diäthylentriaminpentaessigsäure-Diester und Verfahren zu deren Herstellung
WO1997012850A2 (de) Bifunktionelle sulfidhaltige sulfonamid-chelatbildner vom typ xsny für radioaktive isotope
Baldwin et al. Structure-activity relationships of 123 I labeled o-iodobenzamide derivatives
DE2142422C3 (de) Derivate des Digoxigenins, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung zur radioimmunologischen Bestimmung von Digoxin
WO1994023757A1 (de) Verwendung von cyclopentadienylcarbonyl-übergangsmetall-carbonsäuren und deren derivaten zur markierung von proteinen
DE2142422B2 (de) Derivate des Digoxigenins, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung zur radioimmunologischen Bestimmung von Digoxin

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 94193990.1

Country of ref document: CN

AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AU CA CN HU JP KR NO US

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2173844

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1995900059

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1995900059

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 1996 637663

Country of ref document: US

Date of ref document: 19960826

Kind code of ref document: A

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: 1995900059

Country of ref document: EP