UA44261C2 - Спосіб одержання вітамін к-залежних протеїнів за допомогою методів мембранної хроматографії - Google Patents

Abstract

Пропонується спосіб одержання речовин, що містять компоненти плазми, залежні від вітаміну К та інактивовані вірусом, до яких належать протеїн C, протеїн S, фактори II, VII, IX і/або X, а також комбінації згаданих речовин, наприклад препарати PPSB, і в яких вихідний продукт, що містить згадані компоненти, піддають відповідній процедурі для виділення компонентів, зокрема за допомогою мембранної хроматографії.

Description

Настоящее изобретение относится к способу получения агентов, содержащих инактивированнье действием вируса витамин К - зависимье компоненть! плазмь! крови, такие как протеин С и протеин 5 из продукта, содержащего зти компоненть!.

Витамин К - зависимье компоненть! плазмьї, такие как протеин С, протеин 5, факторь ІІ, МІ, ЇХих являются составньми частями плазмь! крови, которне играют важную роль в патофизиологии процесса каскада тромбообразования в кровеносньїх сосудах. Даннье факторьї используются в качестве медикаментов при терапевтическом лечений пациентов, у которьїх проявляются симптомь! заболеваний, вьізванньїх соответственно дефицитом зтих факторов.

В настоящее время нельзя рассматривать плазму крови в качестве источника промьішленного получения упомянутьїх вьше факторов, ввиду ограниченности ее запасов. Итак, учитьівая зтические и зкономические причиньї, должна бьть решена задача разделения и изоляции названьїх «витамин К»- зависимьх компонентов плазмь!, таких как протеин С, протеин 5, с как можно более вьісоким вьІіходом, каждого из факторов, с одной стороньі, и с обеспечением вьіделения каждого из указанньїх факторов по отдельности, с другой сторонь!.

Предметом настоящего изобретения являєтся создание метода, способного решить поставленную задачу.

Согласно изобретению, поставленная задача решаеєется способом, признаки которого представлень в первом пункте формуль! изобретения.

В способе по данному изобретению использование мембранной хроматографии играет важную роль. В публикации ов5іс еї аїЇ. догтта! ої Спготаїдгарпу. 632 (1993), 1 - 10, описана целесообразность использования гепарин - аффинной хроматографии для разделения протеинов плазмь! от каскада сгустков крови.

Описано вьіделение антитромбина ІІ и разделение фактора ІХ и фактора Х после предварительной сепарации методом анионной хроматографии. Процесс обогащения образцов, содержащих фактор ІХ и фактор Х, осуществляется в соответствии с Н. а. .). Вгпиттеїиїв іп У. М. Сипіпд (Едйог) "Мейїод3в ої Ріазта

Ргоївїп Егасііопайоп", Асадетіс Ргезв І опдоп, Огіапао, 1980, р.117.

Вьісокоразрешающая мембранная хроматография сьворотки и плазменньїх протеинов хорошо известна из публикации довіс єї аї. догпа! ої Спготаїодгарну, 590 (1992), 59 - 76. В данной работе описан процесс разделения сьмворотки и плазменньх протеинов. Например, бьли разделень! плазменнье протейнь из тканей печени и почек.

Неожиданно бьло обнаружено, что витамин К - зависимье плазменнье ингредиенть!, такие как протейин С, протеин 5, факторь ІЇ, МІЇ, ЇХ и Х могут бьіть полученьі в больших дозах и с внісокой степенью чистотьі, благодаря использованию описьіваемого способа.

На первом зтапе осуществления способа источник, содержащий соответствующие витамин К - зависимье плазменнье компоненть, такие как протеин С и протеин 5, подвергали твердофазной зкстракции на анионообменньїх мембранах, при зтом указанньм источником прейимущественно является свежевзятая плазма крови или оттаявшая плазма крови. Как анионнообменное средство используют макрочастицьі, представляющие собой рьїхльй обьемньй материал в виде мембран или компактньх дисков. Твердофазовая зкстракция на полисахаридах, которне могут бить модифицированньї щелочньми группами или поперечно сшитьми, является предпочтительной. Более конкретно, могут бьть использовань!ї такие материаль! как полисахаридьі, модифицированнье дизтиламинозтиловьми группами (ОЕАЕ) или четвертичньїми аминами. Таким образом, могут бьіть использовань! материаль типа Зерпадех"

Р 50. В частности, ОБАЕ-модифицированнье разделительнье материаль! используются для вьіделения фактора ХІ.

При твердофазной зкстракции источник, подвергающийся процессу зкстрагирования, наносится на вьішеуказаннье твердофазньсе материаль!.

Твердофазная зкстракция осуществляется, предпочтительно, в условиях низкой ионной силь.

После зтапа промьівания, которьйй проводится факультативно, т.е. является необязательньм, злюент, так назьваемье промьівнье водь, собирают и он затем может бьть использован для дальнейшей переработки.

Так, при вьіделений фактора ІХ, образец предпочтительно фильтруют через соответствующим образом модифицированную мембрану. После зтого фильтрат может бьїть использован, в частности, например, для получения альбумина.

Протеиньї, а именно, фактор ІІ, особенно фактор ЇХ и фактор Х, связаннье с мембраной или с соответствующим материалом твердой фазьі, последовательно злюируются из них, т.е. вьімьіваются, в условиях более вьісокой ионной силь.

При использовании ОЕАЕ-мембран или мембран модифицированньїх четвертичньми аминами, раскрьшваются такие особенности, которйише демонстрируют преиймущество предлагаемого способа в сравнениий со способом твердофазной зкстракции, когда в качестве вьішеупомянутьїх зкстракционньх материалов используют материаль! в виде макрочастиц.

Материал, адсорбированньй на твердой фазе, затем десорбировали из материала-носителя действием растворов, которние имели повьішенную ионную силу. После чего ионную силу полученной фракции приспосабливают к условиям необходимьм для осуществления последующих операций разделения с помощью подходящих для зтого приемов, например, разбавлением, ультрафильтрацией или диафильтрацией, или добавлением агентов, способньїх повьішать ионную силу.

После зтого возможно применение анионообменной хроматографии или аффинной мембранной хроматографии, использующей иммобилизированнье вещества, имеющие вьсокий или низкий молекулярньій вес, которье также имеют вьісокое сродство к "витамин К" - зависимь!ім компонентам плазмь, которне должнь! бьїІть вьіделень! точно так же, как протейин С и протейн 5.

Зтот зтап хроматографической очистки может бьіть также вьиіполнен на материалах, используемьх для хроматографии, в основе которой лежит процесс гидрофобного взаймодействия.

Согласно изобретению, как анионобменнье материальй должнь бьть принятьі во внимание, в частности, мембраньї модифицированнье дизтиламинозтиловьми группами или четвертичньіми аминами.

В качестве веществ, имеющих вьісокое сродство к "витамин К" - зависимьмм компонентам плазмь, таким как протеин С и протеин 5, могут бьть использованьі лигандь, обладающие иммунньм сродством.

Лигандьії с иммунньм сродством представляют собой антитела, действие которьїх направлено против факторов, которье должнь! бьіть вьіделеньі. Так, например, для вьіделения фактора ІХ, должнь! бьть использованьї мембраньі несущие соответствующие иммобилизированнье антитела, действие которьх направлено против указанного вьіше фактора ІХ. Вещества, которне не задерживаются анионообменной мембранной или иммуноаффинной мембраной, вьімьіваются, их можно отобрать и подвергать дальнейшей обработке.

Типичнье лигандь), используемье для гидрофобной хроматографии, демонстрируют некоторье последовательнье изменения гидрофобности. Они включают, например, ациклические или алициклические алифатические соединения, имеющие, например, от Сі до Сів-алкиловне цепи или ароматические компоненть!, которне также могут бьіть модифицированьі полярньми протонньми или полярньми непротонньми лигандами, такими как циано группа. В качестве гидрофобньїх лигандов, пригодньїх для осуществления хроматографии с использованием гидрофобного взаймодействия, особенно следует отметить пропиловье, бутиловье, фенильнье группьї, посредством которьїх материал-носитель бьл модифицирован, а также подобнье им лигандьі, демонстрирующие последовательное изменение гидрофобности. Последовательное изменение гидрофобности может бьть таюже осуществлено посредством полярньїх групп. Так, в частности, 2-гидроксиаминоалкильнье группь), такие как 2- гидроксиаминопропильньсе группь, используются как гидрофобньсе лигандь! для вьіделения фактора ІХ.

Следующий зтап включает дальнейшее фракционирование адсорбированньїх компонентов плазмьї, основанньй на использований изменений в ионной силе и/или изменений значений рН и включает многоступенчатое промьівание системой растворителей вьісокой ионной силь, которне имеют различньсе значения полярности или системой растворителей, реверсирующей сродство между лигандами и субстратом. Упомянутьй вьше процесс может бьть приспособлен для корректировки ионной силь! фракции, вьімьіваемой из мембраньї, в зависимости от условий дальнейшей очистки.

Зтап ) пункта 1 включает аффинную мембранную хроматографию. Аффинную хроматографию в контексте способа, осуществляемого согласно изобретению, следуєт понимать как таковую, которая включает гидрофобную хроматографию. Соответствующие лигандь! бьіли охарактеризовань! вьіше.

Мембранная хроматография в контексте способа по настоящему изобретению, также относится к процессам хроматографии, в которьїх используют мембраньії, модифицированнье иммуноаффинньми лигандами. В частности, в данном случає, используют моноклональньюе антитела против "витамин К" - зависимьх компонентов плазмь!, таких как протеин С и протеин 5, причем даннье моноклональнье антитела предварительно иммобилизируют на мембране.

Операции хроматографического разделения витамин К - зависимьїх компонентов плазмь, таких как протеин С и протеин 5 в образце, могут осуществляться с использованием материалов субстрата, модифицированньїх ионообменньми группами, особенно анионообменньми, с одной стороньі, или с использованием модифицированньїх иммуноаффинньми лигандами материалов, с другой сторонь!.

Мембрань из указанньїх материалов для осуществления процесса хроматографирования изготавливаются с использованием любого из известньїх современньїх способов. Предпочтительно, мембрань! состоят из такого материала, как модифицированная целлюлоза или синтетическое волокно.

Более конкретно, мембрань! также как и компактнье диски изготавливаются из пористого полиглицидил метакрилата и/или из других пористьїх гидрофильньїх материалов, имеющих подобную структуру, таких как гидрофилизированньй полистирол.

Мембрань, пригоднье для разделения, состоят из набора тонких пористьїх пленок целлюлозь! или искусственного волокна, в первом случає, а во втором случає, они состоят из компактньїх дисков, сделанньїх из силикагеля или полимерньїх носителей. Материаль, из которьїх вьіполненьі! указаннье мембраньй или диски, должнь бьть снабжень соответствующими ионообменньми группами или иммунноаффинньми лигандами. В качестве ионообменньх групп, более предпочтительно, анионобменньх групп могут бьіть использованьі! четвертичноаммониевье соединения или дизтиламинозтиловье (ОЕАЕ) группьї. В качестве катионообменньїх групп, в основном, могут бьть использовань! катионообменнье группь! слабьх или сильньх кислот, так например, используют материальї! модифицированнье остатками сульфокислота или фосфорной кислоть.

Ионообменньсе группь! могут связьіваться, а могут и не связьвваться, с волокнами субстрата мембран посредством так назьваємой промежуточной пластинь. Материаль), снабженнье промежуточньми пластинами, назьваются также материалами со щупальцами. Подходящие наполнители и лигандь! описаньі в патенте ОЕ 4204694. Частицьі глюкозамина, например, могут бьїть также использовань! в качестве прокладки. Анионообменньє группь, такие как ОЕАЕ или соединения четвертичного амина, также могут связьшваться с мембранами изготовленньми из пористого глицидилметакрилата или из других вьішеупомянутьх материалов. Анионообменньсє группь! связьіваются либо непосредственно с материалом, образующим мембрану, либо через промежуточную пластину, каковой являются частиць! глюкозамина.

В другом варианте осуществления способа по данному изобретению используют аффинную мембранную хроматографию, которая осуществляется с применением иммобилизированньїх веществ с мальм и большим молекулярньім весом, имеющих вьісокую степень сродства к "витамин К" - зависимь!м компонентам плазмьї, таким как протейн С и протейн 5, которне, преимущественно, вьіделень из человека или мьішей.

Вещества, имеющие сродство к витамин К - зависимь!м компонентам - факторам ЇЇ, МІ, ЇХ или Х, а такюке протеину С и протеину 5 - иммобилизируются на носителе посредством химически активньх групп.

Предпочтительно, чтобьї даннье активнье группьі не непосредственно воздействовали на материал- носитель, а через конец промежуточной пластинь. Иммобилизация веществ, имеющих сродство к указанньмм факторам, осуществляется их связьишванием с активньіми группами, такими как тозил, трезил, гидразид и другими. Соответствующие процедурь известньй из публикации: Т. М. РийШіре "Анпйу

Спготагюдгарну", в "Снготаїодгарну", (Е. Нейтапп, Еа.), 5" едйоп, ЕІвемівї, Атв5іегдаат 1992.

Антитела могут также бьіть предварительно адсорбировань! на мембранах, несущих лигандь! протеина

А или протеина (с. Извлечение антител (опорожнение хроматографической колонки), может бьть предотвращено образованием поперечно сшитьх ковалентньх связей. Для поперечного связьівания антител и мембранньїх протеинов А и (б возможно применение способа, подобного тому, в котором используют рьїхлье носители. Преимущество иммобилизации на протеине А или протеине С состоит в том, что антитела иммобилизированньії исключительно на постоянном сегменте молекуль! (Їс). Таким образом, антиген-связанная часть остается свободной и не вовлекаєтся в процесс взаймодействия с соответствующими факторами.

Вирус-инактивация осуществляется путем обработки фракции, полученной после хроматографической очистки с детергентами, такими как ионнье и/или нейоннье поверхностно-активнье вещества, в частности, в присутствий ди- или три-алкилированньхх фосфатньх соединений, таких, как, например, три-н- бутилфосфат согласно методу, описанному в ЕР 0131740 А1. В основном, вирус-инактивация может бьть также осуществлена перед первой операцией процесса хроматографирования. Предпочтительно, для вирус-инактивации используют Топ" Х - 100 Тжееп/ТМВР (три-н-бутилфосфат). Хорошиє результать полученьі также если используют холат натрия/ТМВР. Предпочтительно, количество используемьмх детергентов по весу достигает 15905.

Однако, вирус-инактивация может бьть также обеспечена и тепловой обработкой. Согласно зтой процедуре, после первого зтапа хроматографирования витамин К - зависимье компоненть! плазмь!, такие как протеин С и протеин 5, подвергаются процессу пастеризации. Подходящий способ предложен в патентной заявке Германии Р 4318435.9. В соответствии с материалами зтой заявки, фракции, обогащеннье фактором МІ, приводят в контакт с ди- или триалкилфосфатом и дополнительно - с увлажняющим агентом в присутствии стабилизаторов, таких как сахара, аминокислотьї, двухвалентнье катионьії и/или гепарина одновременно или последовательно подвергают тепловой обработке при несколько повьішенной температуре в пределах от 557С до 70"С в течении периода времени от 5 часов до часов. И при желаний, для удаления вирусов может бьіть проведена фильтрация.

Существует возможность комбинирования двух методов вирус-инактивации, обработки детергентами и нагревания, а также фильтрации.

При изолирований фактора ІХ операцию пастеризации, предпочтительно, вбіполняют после операции по п.1 формуль. За зтим зтапом может следовать осуществлениє другого зтапа - мембранной хроматографии с целью удаления химических реагентов, использованньхх в указанной операции.

Предпочтительно, что бьї добавленнье ранее стабилизаторьй бьіли удаленьь при помощи мембран, модифицированньх ОЕАЕ или соединениями четвертичного аммония, которье располагаются на поверхности хроматографического материала-носителя при помощи прокладки.

При вьібранньїх условиях, стабилизаторь! не задерживаются указанньм анионобменньім материалом, тогда как факторьї адсорбируются на хроматографическом материале.

Стабилизаторь, которье, в основном состоят из веществ с низким молекулярньім весом, могут также бьіть удаленьї при помощи ультра или диафильтрации.

Полученнье фракции, содержащие витамин К: - зависимье компоненть! плазмьї, такие как протеин С и протеин 5, затем концентрируют, если зто необходимо. Методьі концентрации, сами по себе, являются процедурами включающими удаление растворителя, обьічно водь, при мягких условиях. Они включают, в частности, процедурь, когда растворитель удаляеєтся в условиях пониженного давления, такие как, например, лиофилизация (вьісушивание в замороженном состояний) или виісушивание распьілением. использование мембранной хроматографии в способе по настоящему изобретению, в частности, обладаєт преимуществом в сравнений с оизвестньми способами, которое состоит в том, что хроматографическое разделение происходит значительно бьістрее. Кроме того, однаждь! использованнье мембрань могут использоваться повторно несколько раз. В сравнений с предлагаемьм способом, материаль из которьїх состоит твердая фаза в способах из существующего уровня техники не могут бьть повторно использовань и должнь! бьіть удалень!ї после первого же применения.

Более детально способ по предложенному изобретению проиллюстрирован процессом вьіделения фактора ІХ.

Пример 1.

Размороженная плазма крови подвергаєтся твердофазной зкстракции на Зерпадех" Р 50. После извлечения веществ, адсорбированньїх на твердой фазе, ионная сила полученной фракции доводится до значения от 10 до 20мМ раствором цитрата натрия при рН 7.4 и подвергается хроматографированию на мембранах из ОЕАЕ СшпіскОізкК (диаметр мембрань - 25мм, толщина - Змм). Давление - приблизительно

Збара. Хроматографирование проводят при обьемной скорости потока, составляющей 5мл/мин.

Обьединеннье фракции содержат смесь фактора ІІ и фактора МІ! и может бьть подвержена дальнейшей переработке. Максимум, вьіделенньй затем из колонки, содержит смесь фактора ІХ и фактора Х.

Мембранная хроматография проводится в условиях градиента, которьій изменяется от первоначально указанного буферного раствора до буферного раствора, содержащего 1 М раствор хлорида натрия, а также от 10 до 20мМ раствора цитрата натрия с рН 7.4, используемого в качестве раствора В. Если использовать мощньй ионообменник, имеющий большую площадь размещения лигандов, то можно достичь повьішенной зффективности предложенного способа. Предельньій параметр процесса определяется селективностью хроматографического материала. Степень градиента извлечения будет зависеть от степени поверхностного расположения лигандов на носителе.

Смесь, содержащая фактор ІХ и фактор Х, затем подвергается дальнейшему хроматографированию.

Емкостная нагрузка материала, используемого при мембранной хроматографии, равна или больше емкостной нагрузки материала в виде частиц, учитьівая, что оба случая основьшваются на заданном количестве материала.

Пример 2.

Фракция, полученная в соответствий с Примером 1 и содержащая фактор ІХ и фактор Х обрабатьваеєтся затем согласно методу, изложенному в доцгпа! ої Спготайюдгарну, 632 (1993), 1 - 10.

Фракция, содержащая фактор ЇХ и фактор Х, полученная согласно способу, описанному в Примере 1, подвергается гепарин-аффинному мембранному хроматографированию на компакт-дисках. После применения буфера с относительно низкой ионной силой, материал промьввается буфером, имеющим значение ионной силь! около 500мОсм. Затем фактор ІХ вьіделяется благодаря использованию градиента, которьй стартуєт от 500мОсм до 1000мОсм. Фактор, вьіделенньій таким образом, имеет вьісокую степень чистотьі. Практический вьїход очищенного фактора ІХ, начиная от первой операции процесса обработки, составляет около 87905.

Claims (12)

1. Способ получения агентов, содержащих инактивированнье действием вируса витамин К - зависимье компоненть! плазмьї, такие как протеин С, протеин 5, факторьї ІЇ, МІЇІ, ЇХ и/или Х, как и их комбинации, такие как РРБВ - препарать, согласно которому источник, содержащий зти компонентьі, подвергают следующим зтапам обработки: а) твердофазноеє хроматографирование источников, содержащих компонентьь подлежащие разделению, проводят на анионообменньїх материалах, которне представляют собой рихлую обьемную массу, мембрань и/или компакт-диски, в условиях относительно низкой ионной силь, удаляют злюент, и, если возникает необходимость, направляют его на дальнейшую переработку с целью получения других полезньїх веществ; р) извлекают адсорбированньй на твердой фазе материал; с) произвольно, приспосабливают ионную силу и/или значение рН фракции, содержащей злюат, к условиям, необходимь!м для последующей очистки; а) осуществляют анионообменную мембранную хроматографию, аффинную мембранную хроматографию с использованием иммобилизированньїх веществ, имеющих вьісокий или низкий молекулярньй вес и проявляющих вьісокую степень сродства к витамин К - зависимьм компонентам плазмь, таким как протеин С и протейин 5, или хроматографию, основанную на гидрофобном взаймодействии; е) фракционируют отдельнье компоненть! путем ступенчатого промьшвания за счет изменения ионной силь, полярности и/или значений рН применяемьіх для зтого систем растворителей; У) произвольно осуществляют аффинную мембранную хроматографию; 9) произвольно собирают злюат, в котором содержатся не поддавшиеся разделению вещества, и повторно подвергают его процедуре Її) с использованием пригодньїх для неєе аффинньх материалов; М) извлекают связаннье с аффинньім материалом вещества, изменяя условия аффинного связьвания, после чего концентрируют полученньій злюат путем снижения количества так званьїх промьівньїх вод, использованньмх для злюции; при зтом вирус - инактивацию с помощью ионньх и/или нейонньїх детергентов проводят перед каждьм зтапом хроматографической очистки и/или осуществляют указанную вирус - инактивацию термообработкой и/или фильтрацией на стадии, требующей такую процедуру.

2. Способ по п. 17, отличающийся тем, что в качестве источника, содержащего витамин К - зависимье компоненть! плазмьї, такие как протеин С и протеин 5, используют свежевзятую плазму крови или плазму крови, хранящуюся при температуре таяния.

3. Способ по любому из пп. 1-2, отличающийся тем, что твердофазную зкстракцию проводят с использованием поперечно сшитьх полисахаридов, модифицированньхх основньми группами, таких как бЗерпадех", или с использованием анионообменньїхх мембран, соответствующим образом модифицированньх.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем; что мембранную хроматографию осуществляют с использованием мембран, которье бьли модифицировань ЮОЕАЕ или четвертичньми аминами, или с использованием мембран, которне бьли модифицированьї аффинньми лигандами с мальм или большим молекулярньім весом, способньіми избирательно связьяваться с желанньмми компонентами плазмь! ( аффинная мембранная хроматография ).

5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что в качестве аффинной хроматографии используют гепарин - аффинную мембранную хроматографию с иммунноаффинньми хроматографическими мембранами, содержащими иммобилизированнье антитела, направленнье против извлекаемьх компонентов, или мембранную аффинную хроматографию, основанную на использований гидрофобньх лигандов.

б. Способ по п. 5, отличающийся тем, что в качестве гидрофобньїх лигандов, пригодньїх для модификации носителя, используют 2-гидроксиаминоалкильньсе группь, такие как 2-гидроксиаминопропил и/или гидрофобнье лигандьї, такие как пропил, бутил, фенольнье группь! и другие подобнье лигандьі, проявляющие способность изменять свою гидрофобность.

7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что ионную силу регулируют после виіполнения операций хроматографирования разбавлением или обессоливанием, такими как диа - или ультрафильтрация или путем добавления агентов, повиишающих ионную силу.

8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что процесс вирус - инактивации фракции, полученной после хроматографической очистки, проводят детергентами, такими как ионнье и/или анионнье детергенть, в присутствий ди - или триалкилфосфатньх соединений, таких как три - н - бутилфосфат.

9. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что вирус - инактивацию осуществляют нагреванием фракции до температурь от 55"С до 70"С в течение периода времени от 5 до 30 часов в присутствий стабилизаторов, таких как сахара, аминокислоть, двухвалентньсе катионь и/или гепарин.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что стабилизаторьи удаляют путем вьполнения процессов обессоливания, таких как диафильтрация или ультрафильтрация, гепарин - аффинной хроматографией или анионообменной хроматографией или при помощи носителей, модифицированньх ОЕАЕ или четвертичноаммониевьми соединениями, или гидрофобньми лигандами.

11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что для процесса хроматографирования используют материал в виде частиц, образующих обьемную рьїхлую массу, из которой изготавливаются мембрань и/или компакт-диски.

12. Способ по любому из пп.1-41, отличающийся тем, что полученнье фракции концентрируют путем лиофилизации или их сушат распьілением.