PL180179B1 - Sposób wytwarzania preparatów zawierajacych wirusowo inaktywowane skladniki osocza zalezne od witaminy K PL PL PL PL PL - Google Patents
Sposób wytwarzania preparatów zawierajacych wirusowo inaktywowane skladniki osocza zalezne od witaminy K PL PL PL PL PLInfo
- Publication number
- PL180179B1 PL180179B1 PL94314801A PL31480194A PL180179B1 PL 180179 B1 PL180179 B1 PL 180179B1 PL 94314801 A PL94314801 A PL 94314801A PL 31480194 A PL31480194 A PL 31480194A PL 180179 B1 PL180179 B1 PL 180179B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- chromatography
- membrane
- eluate
- protein
- affinity chromatography
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 238000011140 membrane chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 108091005605 Vitamin K-dependent proteins Proteins 0.000 title 1
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 38
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 30
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 21
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 claims abstract description 17
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 17
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 claims abstract description 17
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 7
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 7
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 7
- -1 2-hydroxyaminopropyl Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 6
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000003014 ion exchange membrane Substances 0.000 claims abstract description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 3
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims abstract description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims abstract 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 23
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 6
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 2
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 108010012557 prothrombin complex concentrates Proteins 0.000 claims description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 abstract 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 16
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 16
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 16
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical compound [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 7
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 description 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003011 anion exchange membrane Substances 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 2
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 2
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 2
- 239000012209 synthetic fiber Substances 0.000 description 2
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 241001146702 Candidatus Entotheonella factor Species 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001260 acyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000001334 alicyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Chemical group 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 150000002734 metacrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 238000001470 plasma protein fractionation Methods 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-I triphosphate(5-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/647—Blood coagulation factors not provided for in a preceding group or according to more than one of the proceeding groups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
1 Sposób wytwarzania preparatów zawierajacych wirusowo inaktywowane skladniki osocza zalezne od witami ny K, jak równiez bialko C, bialko S, czynniki II, VII, IX i/lub X oraz ich mieszaniny, takie jak preparaty PPSB, w którym osocze krwi w stanie stalym lub rozmrozonym ekstrahuje sie w fazie stalej, rozdziela na wymieniaczu aniono- wym 1 ewentualnie przesyla sie powstajacy eluat do dalszych etapów obróbki dla odzysku innych materialów, nastepnie wymywa sie material zaadsorbowany na fazie stalej 1 dostosowuje sie moc jonowa i/lub wartosc pH frakcji zawierajacej eluat do warunków kolejnych etapów oczyszczania, po czym inaktywuje sie wirusy 1 prowadzi sie chromatografie jo- nowymienna, chromatografie powinowactwa lub chromatografie hydrofobowa, frakcjonuje sie poszczególne skladniki 1 jesli jest to pozadane, prowadzi sie chromatografie powinowactwa, nastepnie zbiera sie eluat zawierajacy produkty wczesniej me usuniete 1 prowadzi sie dalsze frakcjonowanie eluatu, powtarzajac chromatografie powinowactwa, a nastepnie wymywa sie substancje zwiazane z materialem wykazujacym swoista sorpcje, w warunkach rozrywajacych swoiste wiazania sorpcyjne 1 zateza sie eluat, ewentualnie ze zmniejszeniem ilosci srodka uzywanego do wymywania materialu wykazujacego swoista sorpcje, znamienny tym, ze stosuje sie wymieniacz anionowy w postaci membrany i/lub zbitej, upakowanej tarczki, z porowatych polimerów hydrofil owych, obejmujacych monomery, ko-monowery i ko- polimery, w warunkach wzglednie niskiej mocy jonowej i prowadzi sie jonowymienna chromatografie membranowa, heparynowa chromatografie membranowa na zasadzie swoistej sorpcji, membranowa chromatografie na zasadzie swo-- istej immunosorpcji z unieruchomionymi przeciwcialami skierowanymi przeciwko wyodrebnianym substancjom, albo membranowa chromatografie powinowactwa przy uzyciu membran z ligandami hydrofobowymi, a jako hydrofobowe ligandy modyfikujace nosnik chromatograficzny stosuje sie grupy 2-hydroksyaminoalkilowe, takie jak 2- hydroksyaminopropyl, i/albo hydrofobowe ligandy, takie jak grupy propylowa i fenylowa i stosuje sie material chro- matograficzny osadzony na membranie i/lub w postaci zbitej upakowanej tarczki, po czym poszczególne skladniki frakcjonuje sie przez stopniowe wymywanie przy zmieniajacej sie mocy jonowej, inaktywacje wirusowa prowadzi sie za pomoca jonowych i/lub niejonowych detergentów w obecnosci fosforanów di- lub trialkilowych, takich jak fosforan tri-n-butylu, i/lub poprzez obróbke cieplna, i/lub filtracje PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania preparatów zawierających inaktywowane wirusowo składniki osocza zależne od witaminy K, jak również białka C i białka S, z materiałów zawierających te składniki.
Składniki osocza zależne od witaminy K, takie jak białko C, białko S, czynniki II, VII, IX i X, są obecne w osoczu krwi i mają ważną rolę w patofizjologii kaskady krzepnienia krwi. Czynniki te używane są jako lekarstwa leczące pacjentów wykazujących objawy wywołane względnym brakiem tych czynników.
Josić i wsp. w Journal of Chromatography 632, (1993), 1-10, opisuje przydatność heparynowej chromatografii powinowactwa do wyodrębniania białek osocza z kaskady czynników krzepnięcia krwi. Opisano wyodrębnienie antytrombiny III oraz oddzielenie czynnika IX od czynnika X, po wstępnym rozdzieleniu za pomocą chromatografii anionowej. Chromatografia anionowowymienna dla wstępnego rozdzielenia czynnika IX i czynnika X dokonywana jest preparatywną HPLC. Wzbogacenie próbek zawierających czynnik IX i czynnik X wykonywane jest zgodnie z H.G.J. Brummelhuis, w J.M. Curling (wydawca), Methods of Plasma Protein Fractionation, Academic Press, London, Orlando,1980, str.117.
Wysokowydajna chromatografia membranowa białek surowicy i błony osocza znana jest z pracy Josića i wsp. w Journal of Chromatography 590, (1992), 59-76. Opisano tam rozdzielenie białek surowicy i błony osocza. Na przykład rozdzielono białka błon osocza z tkanek wątroby i nerek.
Osocze krwi nie jest dostępne jako handlowe źródło pozyskiwania czynników krzepnięcia krwi w pożądanych ilościach. Zarówno ze względów etycznych, jak i ekonomicznych, frakcjonowanie i wyodrębnianie składników osocza zależnych od witaminy K, jak również białka C i białka S, musi być prowadzone z możliwie najwyższą wydajnością przy równoczesnym umożliwianiu wyodrębniania każdego z pozostałych czynników. Przedmiotem wynalazku jest dostarczenie sposobu postępowania umożliwiającego osiągnięcie tego celu.
Niespodziewanie okazało się, że cenne składniki osocza zależne od witaminy K, takie jak białko C, białko S, czynniki II, VII, IX i X mogą być otrzymane za pomocą sposobu opisanego poniżej, przy wysokim stopniu oczyszczenia i z wysoką wydajnością. Sposób według wynalazku charakteryzuje się zastosowaniem chromatografii membranowej.
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania preparatów zawierających wirusowo inaktywowane składniki osocza zależne od witaminy K, jak również białko C, białko S, czynniki II, VII, IX i/lub X oraz ich mieszaniny, takie jak preparaty PPSB. W sposobie tym osocze krwi w stanie stałym lub rozmrożonym poddaje się następującym etapom obróbki:
a) ekstrahuje się w fazie stałej materiał zawierający składniki przeznaczone do rozdzielenia na wymieniaczu anionowym, w postaci membrany i/lub zbitej, upakowanej tarczki, w warunkach względnie niskiej mocy jonowej, usuwa się i przesyła się powstający eluat do dalszych etapów obróbki dla odzysku innych materiałów;
b) wymywa się materiał zaadsorbowany na fazie stałej;
c) dostosowuje się moc jonową i/lub wartość pH frakcji zawierającej eluat do warunków kolejnych etapów oczyszczania;
d) inaktywuje się wirusy za pomocą jonowych i/lub niejonowych detergentów w obecności fosforanów di- lub trialkilowych, takich jak fosforan tri-n-butylu, i/lub poddaje się obróbce cieplnej;
e) prowadzi się jonowymienną chromatografię membranową chromatografię membranową powinowactwa z unieruchomionymi substancjami o wysokiej lub niskiej masie cząsteczkowej, mającymi wysokie powinowactwo ze składnikami osocza zależnymi od witaminy K, jak również z białkiem C i białkiem S, albo chromatografię na zasadzie oddziaływania hydrofobowego;
f) frakcjonuje się poszczególne składniki przez stopniowe wymywanie przy zmieniającej się mocy jonowej, polarności i/lub wartości pH;
g) jeśli jest to pożądane, prowadzi się chromatografię membranową na zasadzie swoistej sorpcji;
180 179
h) jeśli jest to pożądane, zbiera się eluat zawierający produkty wcześniej nie usunięte i prowadzi się dalsze frakcjonowanie eluatu przez powtórzenie etapu g), z zastosowaniem odpowiednich materiałów wykazujących swoistą sorpcję;
i) wymywa się substancje związane z materiałem wykazującym swoistą sorpcję, w warunkach rozrywających swoiste wiązania sorpcyjne, a następnie zatęza się eluat, ewentualnie ze zmniejszeniem ilości środka używanego do wymywania materiału wykazującego swoistą sorpcję; przy czym po etapie f) ewentualnie inaktywuje się wirusy, po czym prowadzi się etap chromatografii membranowej i ewentualnie obróbkę cieplną i/lub filtrację, usuwającą wirusy na odpowiednim etapie.
W pierwszym etapie, materiały zawierające poszczególne składniki osocza zalezne od witaminy K, jak również białko C i białko S, poddawane są ekstrakcji w fazie stałej na wymieniaczu anionowym. Materiałem takim jest korzystnie świeże lub rozmrożone osocze krwi. Substancja anionowymienna może być zastosowana w postaci rozdrobnionej, luźnej masy, uformowanej membrany lub zbitej upakowanej tarczki. Korzystna jest ekstrakcja w fazie stałej na wielocukrach, zmodyfikowanych grupami zasadowymi i ewentualnie usieciowanymi. Konkretnie mogąbyć używane substancje takie, jak wielocukry zmodyfikowane grupami dwuetyloaminoetylowymi (DEAE) lub aminami czwartorzędowymi. Na przykład można używać takich substancji, jak Sephedex® P 50. Szczegółowiej, substancje zmodyfikowane DEAE stosowane są do wydzielania czynnika IX. W metodzie ekstrakcji w fazie stałej ekstrahowany materiał mieszany jest z substancją tworzącą fazę stałą.
Ekstrakcja w fazie stałej przeprowadzana jest korzystnie w warunkach niskiej mocy jonowej. Po ewentualnie przeprowadzanych operacjach przemywania, eluat jest gromadzony i może być poddawany innym etapom przeróbki.
W celu wydzielenia czynnika IX, korzystnie próbka jest przefiltrowywana przez odpowiednio zmodyfikowaną membranę. Następnie przesącz może być dalej wykorzystywany, na przykład do wytwarzania albuminy.
Białka związane z membraną lub z odpowiednią substancją fazy stałej, to znaczy czynnik II, zwłaszcza czynnik IX i czynnik X są następnie wymywane z fazy stałej, w warunkach wyższych mocy jonowych. Jeśli stosowane są membrany zmodyfikowane DEAE lub czwartorzędowe aminy, możliwość ich wielokrotnego użytkowania stanowi oczywistą korzyść, w porównaniu do ekstrakcji w fazie stałej za pomocą wcześniej wymienionych substancji przeznaczonych do ekstrakcji w fazie stałej, w szczególności w porównaniu do materiałów w postaci rozdrobnionej.
Materiał zaadsorbowany w fazie stałej jest następnie desorbowany z nośnika roztworami o wyższej mocy jonowej, przy czym moc jonowa frakcji dostosowywana jest do warunków wymaganych do przeprowadzenia następnych etapów rozdzielania, przez odpowiednie działania, takie jak rozcieńczenie, ultrafiltracja lub diafiltracja, względnie dodanie środków zwiększających moc jonową.
Następnie może być przeprowadzona anionowymienna chromatografia membranowa lub chromatografia powinowactwa z zastosowaniem substancji o wysokiej lub niskiej masie cząsteczkowej, mających wysokie powinowactwo z zależnymi od witaminy K składnikami osocza, poddawanymi oczyszczeniu, jak również z białkiem C i białkiem S.
Ten etap chromatograficznego oczyszczania może być również przeprowadzany na materiałach przeznaczonych do chromatografii wykorzystującej oddziaływania hydrofobowe.
Jako materiały anionowymienne mogą być rozważane w takim przypadku również membrany zmodyfikowane grupami dwuetyloamino-etylowymi lub aminami czwartorzędowymi. Substancje o wysokim powinowactwie z zależnymi od witaminy K składnikami osocza, jak również z białkiem C i białkiem S, mogąbyć ligandami zapewniającymi swoistą immunosorpcję. Rozważanymi ligandami zapewniającymi swoistą sorpcję są przeciwciała skierowane przeciwko żądanym czynnikom. Na przykład, dla wyodrębnienia czynnika IX mogą być użyte membrany zawierające unieruchomione przeciwciała oddziałujące z czynnikiem IX. Substancje nie zatrzymywane przez membranę aniono-wymienną lub wymyte z membrany o swoistej immunosorpcji mogąbyć zbierane i poddawane dalszej obróbce.
180 179
Typowe ligandy dla chromatografii hydrofobowej wykazują pewną stopniową zmianę hydrofobowości. Ligandami takimi są przykładowo związki acykliczne i alicykliczne, mające na przykład alkilowe łańcuchy węglowe Ci do Ci6 albo związki aromatyczne, ewentualnie zmodyfikowane polarnymi protycznymi lub polarnymi aprotycznymi ligandami, takimi jak grupy cyjanowe. Jako ligandy hydrofobowe odpowiednie dla chromatografii opartej na oddziaływaniu hydrofobowym uważa się szczególnie grupy propylową, butylową i fenylową, którymi zmodyfikowany jest materiał nośnikowy, oraz podobne ligandy wykazujące pewną stopniową zmianę hydrofobowości. Na stopniową zmianę hydrofobowości mogą także wpływać grupy polarne. Z tego względu grupy 2-hydroksyloaminoalkilowe, takie jak grupy 2-hydroksyaminopropylowe, są odpowiednie do wyodrębniania czynnika IX jako ligandy hydrofobowe.
Następny etap procesu obejmuje dalsze frakcjonowanie zaadsorbowanych składników osocza przez stopniowe wymywanie przy zmianie mocy jonowej i/lub wartości pH, za pomocą układu rozpuszczalników o wyższej mocy jonowej, rozpuszczalników o różnych polamościach albo rozpuszczalnikach odwracających powinowactwo pomiędzy ligandem immunosorpcyjnym a substratem. Powyżej wymienione sposoby postępowania mogą być adoptowane, w celu dostosowania mocy jonowej frakcji wymywanej z membrany do warunków dalszego oczyszczania.
Etap f), obejmujący chromatografię powinowactwa, może ale nie musi być stosowany. Chromatografia powinowactwa w sposobie według wynalazku obejmuje także chromatografię hydrofobową. Odpowiednie ligandy scharakteryzowano powyżej.
Chromatografia na zasadzie swoistej sorpcji w zakresie sposobu według wynalazku powiązana jest z takimi procedurami chromatograficznymi, w których stosowane są membrany zmodyfikowane ligandami immunosorpcyjnymi. Do tego celu wykorzystywane są monoklonowe przeciwciała skierowane przeciwko składnikom osocza zależnym od witaminy K, jak również białku C i białku S, przy czym przeciwciała monoklonowe są unieruchomione na membranie.
Chromatograficzne rozdzielanie w próbce składników osocza zależnych od witaminy K, jak również białka C i białka S, może być przeprowadzone z materiałami substratowymi z jednej strony zmodyfikowanymi grupami jonowymiennymi, szczególnie anionowymiennymi, a z drugiej strony zmodyfikowanymi ligandami immuno-sorpcyjnymi.
W bardzo korzystnym sposobie postępowania wymienione materiały chromatograficzne uformowane są w membrany. Korzystnie, membrana składa się z substratu, takiego jak zmodyfikowana celuloza lub włókno syntetyczne. Bardziej szczegółowo, odpowiednie są membrany, jak również zbite, upakowane tarczki, wykonane z porowatych metakryłanów poliglicydowych i/lub innych porowatych polimerów hydrofitowych o podobnej strukturze, takich jak zhydrofilowany polistyren.
Membrana odpowiednia do rozdzielania składa się ze stosu cienkich porowatych warstw, w pierwszej odmianie wykonanych z celulozy lub włókien syntetycznych, w drugiej odmianie zbite, upakowane tarczki wykonane są z żelu krzemionkowego lub polimerowych nośników. W podłoża wspomnianych membran lub tarczek wbudowane są odpowiednie grupy anionowowymienne lub ligandy immunosorpcyjne. Grupami jonowymiennymi mogą być szczególnie grupy anionowowymienne, takie jak czwartorzędowe związki amoniowe lub grupy dwuetyloaminoetylowe (DEAE). Wymieniaczami kationowymi mogą być zasadniczo słabo lub mocno kwasowe wymieniacze kationowe, takie jak materiały zmodyfikowane kwasem sulfonowym lub fosforowym.
Grupy wymieniające jony mogą, ale nie muszą, być związane z włóknem materiału podłożowego przez tak zwaną przekładkę. Materiały przekładkowe zwane są także materiałami czułkowymi. Odpowiednie przekładki i ligandy określono w DE 42 04 694. Na przykład, przekładką może być także część gluksoaminowa cząsteczki. Grupy anionowo-wymienne, takie jak DEAE lub czwartorzędowe związki amoniowe mogą być także związane z membranami wykonanymi z porowatego metakrylanu poliglicydowego lub z innych wymienionych materiałów. Grupy anionowowymienne są związane albo bezpo
180 179 średnio z materiałem tworzącym membranę, albo poprzez przekładkę, np. przez glukozoaminową część cząsteczki.
W innym wykonaniu sposobu według wynalazku stosowana jest chromatografia membranowa powinowactwa, w której wykorzystuje się unieruchomione substancje o niskiej lub wysokiej masie cząsteczkowej, mające wysokie powinowactwo ze składnikami osocza zależnymi od witaminy K, jak również z białkiem C i białkiem S, korzystnie pochodzącymi od ludzi lub myszy.
Substancje mające powinowactwo ze składnikami osocza zależnymi od witaminy K, czynnikami II, VII, IX, lub X, jak również białkiem C i białkiem S, unieruchomiane są na nośniku za pomocą chemicznie aktywnych grup. Korzystnie jest, aby aktywne grupy nie atakowały bezpośrednio materiału nośnikowego, ale reagowywały z końcem cząsteczki przekładki. Unieruchomianie substancji mających powinowactwo do czynników dokonywane zachodzi przez wytwarzanie wiązań z takimi aktywnymi grupami, jak grupa tosylowa, tresylowa, hydrazydowa i inne. Właściwe sposoby postępowania znane są z publikacji T. M. Phillipsa Affinity Chromatography w Chromatography (E. Heftmann, Ed.), 5th edition, Elsevier, Amsterdam 1992.
Przeciwciała mogą być również wstępnie adsorbowane na membranach, z przyłączonymi jako ligandami białkiem A lub białkiem G. Wymywaniu przeciwciał można zapobiec przez następujące po tym sieciowanie wypełnienia kolumny. W celu sieciowania przeciwciał z białkiem A lub białkiem G membrany można zastosować w sposób podobny do procesu wykorzystującego luźne nośniki. Korzyść unieruchomiania przez związanie z białkiem A lub białkiem G polega na tym, że przeciwciała unieruchomiane są wyłącznie stałym fragmentem cząsteczki (Fc). Dlatego wiążąca część przeciwciała (Fab) pozostaje wolna i jej oddziaływanie z odpowiednimi czynnikami nie jest hamowane.
Zgodnie ze sposobem opisanym w EP 0 131 740 Al inaktywacja wirusowa dokonywana jest przez potraktowanie detergentami frakcji otrzymywanej z oczyszczania chromatograficznego, takimi jak jonowe i/lub niejonowe związki powierzchniowo aktywne, na przykład w obecności fosforanów dwu- lub trójalkilowych, przykładowo takich jak fosforan trój-n-butylu. Zasadniczo, inaktywacja wirusowa może być także przeprowadzona przed pierwszym etapem chromatograficznym. Do inaktywacji wirusowej korzystnie jest używać Triton®X - 100 Tween/TNBP (fosforan trój-n-butylu). Dobre rezultaty uzyskuje się również z cholanianem sodowym/TNBP. Korzystnie, detergenty są używane w ilości do 15% wagowych.
Jednakże, wirusowa inaktywacja może być także dokonywana obróbką cieplną. W tym sposobie postępowania składniki osocza zależne od witaminy K, jak również białko C i białko S, po pierwszym etapie chromatografii membranowej poddawane są pasteryzacji. Odpowiedni proces zaproponowany jest w niemieckim zgłoszeniu patentowym P 43 18 435.9. Zgodnie z nim do frakcji wzbogaconych czynnikiem VIII dodawane są fosforany dwu- lub trójalkilowe i ewentualnie środki zwilżające w obecności stabilizatorów, takich jak cukry, kwasy aminowe, kationy dwuwartościowe i/lub heparyna, przy czym w tym samym czasie albo następczo po tym dodatku, frakcje te poddawane są działaniu podwyższonej temperatury, w zakresie od 55°C do 70°C, przez okres 5 do 30 godzin. Jeśli jest to pożądane, może być również przeprowadzona filtracja oddzielająca wirusy.
Korzystne może być połączenie dwóch sposobów inaktywacji, tzn. obróbki detergentami i ciepłem, jak również filtracji.
Przy wyodrębnianiu czynnika IX etap pasteryzacji korzystnie przeprowadzany jest po etapie f) według sposobu według wynalazku. Po tym może być przeprowadzany następny etap chromatografii membranowej, usuwający chemikalia używane przy pasteryzacji. Korzystne jest, aby dodane stabilizatory usuwane były za pomocą membrany zmodyfikowanej DEAE lub czwartorzędowymi związkami amoniowymi, umiejscowionymi poprzez przekładkę na powierzchni nośnika chromatograficznego. Możliwa jest także lokalizacja odpowiednich ligandów na powierzchni nośnika chromatograficznego, bez stosowania przekładki.
180 179
W wybranych warunkach, stabilizatory nie są zatrzymywane przez materiał anionowy mienny, podczas gdy czynniki są na nim adsorbowane.
Stabilizatory, które generalnie składają się z substancji o niższej masie cząsteczkowej mogą być również usuwane przez ultra- i dia-filtrację. Jeśli jest to pożądane, wytwarzane frakcje z nagromadzonymi składnikami osocza zależnymi od witaminy K, takimi jak białko C i białko S, są zatężane. Korzystnymi sposobami zatęzania są metody obejmujące usuwanie rozpuszczalnika, zazwyczaj wody, w łagodnych warunkach. Szczegółowiej, obejmują one usuwanie rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem, tak jak dzieje się to przy, na przykład, liofilizacji (suszeniu w zamrożeniu) lub suszeniu rozpryskowym.
Wykorzystanie chromatografii membranowej w sposobie według wynalazku oznacza, ze proces chromatograficzny może być przeprowadzony znacznie szybciej. Co więcej, stosowane membrany mogą być wielokrotnie wykorzystywane. W przeciwieństwie do tego, stosowanie materiału w postaci fazy stałej, zgodnie z dotychczasowym stanem wiedzy, nie zezwala na ponowne jego użycie, ale wymusza jego wyrzucenie.
Sposób według wynalazku zilustrowany jest szczegółowiej na przykładzie wyodrębniania czynnika IX.
Przykład I.
Odmrożone osocze krwi poddano ekstrakcji w fazie stałej z Sephadexem® P 50. Po wymyciu substancji zaadsorbowanej na fazie stałej, moc jonową wytworzonej frakcji dostosowywano do wartości odpowiadającej od 10 do 20 mM cytrynianu sodowego przy pH 7,4, po czym frakcję poddano chromatografii membranowej na DEAE QuickDisk (średnica 25 mm; grubość 3 mm). Ciśnienie wynosiło w przybliżeniu 0,3 MPa. Proces chromatograficzny prowadzono przy szybkości przepływu 5 ml/min. Zebrana frakcja zawiera mieszaninę czynnika II i czynnika VII i może być poddana dalszej obróbce. Pik wymywany następnie z kolumny zawiera mieszaninę czynnika IX i czynnika X. Chromatografię membranową przeprowadzono zmieniając początkowy skład buforu w kierunku roztworu B, zawierającego 1 M NaCl, niezależnie od 10 do 20 mM cytrynianu sodowego w pH 7,4. Jeśli używany jest silny wymieniacz anionowy, mający powierzchnię w znacznym stopniu zajętą Ugandami, osiąga się wysoką wydajność. Pewne czynniki ograniczające wynikają z selektywności materiału. Przebieg gradientu wymywania zależy od stopnia zajęcia powierzchni nośnika ligandami.
Mieszaninę zawierającą czynnik IX i czynnik X poddaje się następnie dalszej chromatografii. Przy tej samej ilości materiału pojemność materiału stosowanego do chromatografii membranowej jest równa lub większa od pojemności materiału w postaci luźnych cząstek.
Przykład II.
Frakcję uzyskaną zgodnie z przykładem I i zawierającą czynniki ΙΧ/Χ poddaje się przerobowi, tak jak opisano to w Journal of Chromatography, 632 (1993), 1-10. Frakcję uzyskaną w przykładzie I i zawierającą czynniki ΙΧ/Χ poddaje się heparynowej chromatografii membranowej na zasadzie swoistej sorpcji na zbitej, upakowanej tarczce. Po podaniu na kolumnę w buforze o względnie niskiej mocy jonowej, materiał jest wymywany buforem o mocy jonowej około 500 mOsm. Następnie czynnik IX jest wymywany roztworem o gradiencie wzrastającym od 500 mOsm do 1000 mOsm. Otrzymany w ten sposób czynnik IX ma wysoką czystość. Wydajność odzysku czynnika IX, zaczynając od pierwszego etapu przerobu, wynosi około 87%.
180 179
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz. Cena 2,00 zł.
Claims (5)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania preparatów zawierających wirusowo inaktywowane składniki osocza zależne od witaminy K, jak również białko C, białko S, czynniki II, VII, IX i/lub X oraz ich mieszaniny, takie jak preparaty PPSB, w którym osocze krwi w stanie stałym lub rozmrożonym ekstrahuje się w fazie stałej, rozdziela na wymieniaczu anionowym i ewentualnie przesyła się powstający eluat do dalszych etapów obróbki dla odzysku innych materiałów; następnie wymywa się materiał zaadsorbowany na fazie stałej i dostosowuje się moc jonową i/lub wartość pH frakcji zawierającej eluat do warunków kolejnych etapów oczyszczania, po czym inaktywuje się wirusy i prowadzi się chromatografię jonowymienną, chromatografię powinowactwa lub chromatografię hydrofobową, frakcjonuje się poszczególne składniki i jeśli jest to pożądane, prowadzi się chromatografię powinowactwa, następnie zbiera się eluat zawierający produkty wcześniej nie usunięte i prowadzi się dalsze frakcjonowanie eluatu, powtarzając chromatografię powinowactwa, a następnie wymywa się substancje związane z materiałem wykazującym swoistą sorpcję, w warunkach rozrywających swoiste wiązania sorpcyjne i zatęza się eluat, ewentualnie ze zmniejszeniem ilości środka używanego do wymywania materiału wykazującego swoistą sorpcję, znamienny tym, że stosuje się wymieniacz anionowy w postaci membrany i/łub zbitej, upakowanej tarczki, z porowatych polimerów hydrofitowych, obejmujących monomery, ko-monowery i ko-polimery, w warunkach względnie niskiej mocy jonowej i prowadzi się jonowymienną chromatografię membranową, heparynową chromatografię membranową na zasadzie swoistej sorpcji, membranową chromatografię na zasadzie swoistej immunosorpcji z unieruchomionymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko wyodrębnianym substancjom, albo membranową chromatografię powinowactwa przy użyciu membran z ligandami hydrofobowymi, a jako hydrofobowe ligandy modyfikujące nośnik chromatograficzny stosuje się grupy 2-hydroksyaminoalkilowe, takie jak 2-hydroksyaminopropyl, i/albo hydrofobowe ligandy, takie jak grupy propylowa i fenylowa i stosuje się materiał chromatograficzny osadzony na membranie i/lub w postaci zbitej upakowanej tarczki, po czym poszczególne składniki frakcjonuje się przez stopniowe wymywanie przy zmieniającej się mocy jonowej, inakty wację wirusową prowadzi się za pomocą jonowych i/lub niejonowych detergentów w obecności fosforanów di- lub trialkilowych, takich jak fosforan tri-n-butylu, i/lub poprzez obróbkę cieplną, i/lub filtrację.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że wirusy inaktywuje się przez ogrzewanie frakcji w temperaturze od 55°C do 70°C przez okres od 5 do 30 godzin, w obecności stabilizatorów, takich jak cukier, kwasy aminowe, kationy dwuwartościowe i/lub heparyna.
- 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, ze stabilizatory usuwa się w procesach odsalania, takich jak diafiltracja lub ultrafiltracja, heparynowa chromatografia powinowactwa, chromatografia ani ono wymienna lub na nośnikach zmodyfikowanych grupami dwuetyloaminoetylowymi (DEAE) lub czwartorzędowymi związkami amoniowymi albo na nośnikach zmodyfikowanych ligandami hydrofobowymi.
- 4. Sposób według zastrz. 1 albo 3, znamienny tym, ze otrzymane frakcje zatęża się przez liofilizację lub suszenie rozpryskowe.
- 5. Sposób według zastrz. 1 albo 3, znamienny tym, ze stosuje się grupę anionowy mienną związaną z włóknami materiału podłożowego przez przekładkę, taką jaką stanowi glukozoaminowa część cząsteczki.180 179
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4342132A DE4342132C1 (de) | 1993-12-10 | 1993-12-10 | Verfahren zur Herstellung virusinaktivierte Vitamin K abhängige Plasmakomponenten sowie Protein C und Protein S enthaltender Mittel durch Membran-Chromatographie |
PCT/EP1994/004067 WO1995016030A1 (en) | 1993-12-10 | 1994-12-07 | Purification of vitamin-k dependent proteins by membrane chromatography |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL314801A1 PL314801A1 (en) | 1996-09-30 |
PL180179B1 true PL180179B1 (pl) | 2000-12-29 |
Family
ID=6504650
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL94314801A PL180179B1 (pl) | 1993-12-10 | 1994-12-07 | Sposób wytwarzania preparatów zawierajacych wirusowo inaktywowane skladniki osocza zalezne od witaminy K PL PL PL PL PL |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20020045240A1 (pl) |
EP (1) | EP0733104B1 (pl) |
JP (1) | JPH09506256A (pl) |
KR (1) | KR100320394B1 (pl) |
CN (1) | CN1175105C (pl) |
AT (1) | ATE276357T1 (pl) |
AU (1) | AU682560B2 (pl) |
CA (1) | CA2178208C (pl) |
CZ (1) | CZ291708B6 (pl) |
DE (2) | DE4342132C1 (pl) |
DK (1) | DK0733104T3 (pl) |
ES (1) | ES2224119T3 (pl) |
HU (1) | HU222084B1 (pl) |
IL (1) | IL111925A (pl) |
PL (1) | PL180179B1 (pl) |
PT (1) | PT733104E (pl) |
UA (1) | UA44261C2 (pl) |
WO (1) | WO1995016030A1 (pl) |
ZA (1) | ZA949820B (pl) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AT409334B (de) * | 1997-09-19 | 2002-07-25 | Immuno Ag | Pharmazeutisches präparat enthaltend vitamin k-abhängige einzelfaktoren |
CA2544816A1 (en) | 2003-11-08 | 2005-05-26 | Prothera Biologics, Llc | Preparation and composition of inter-alpha inhibitor proteins from human plasma for therapeutic use |
JP2005315666A (ja) * | 2004-04-28 | 2005-11-10 | Toshihiko Hanai | 糖結合充填剤およびその製造方法 |
ES2395544T3 (es) | 2004-12-23 | 2013-02-13 | Novo Nordisk Health Care Ag | Reducción del contenido de contaminantes proteínicos en composiciones que comprenden una proteína dependiente de la vitamina K de interés |
KR100667860B1 (ko) * | 2005-10-18 | 2007-01-11 | 주식회사 녹십자 | 고순도 사람 혈액응고 제9인자의 정제 방법 |
DK2563805T3 (da) * | 2010-04-29 | 2020-05-18 | Baxalta GmbH | Oprensningsfremgangsmåde til divalente kationbindende proteiner på anionbytningsresin |
WO2012082933A1 (en) | 2010-12-15 | 2012-06-21 | Baxter International, Inc. | Eluate collection using conductivity gradient |
CN103665098B (zh) * | 2012-09-20 | 2015-08-05 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 双相柱膜蛋白质微反应器及其应用 |
CN104447975A (zh) * | 2014-11-18 | 2015-03-25 | 深圳市人口和计划生育科学研究所 | 一种提取人肿瘤细胞膜蛋白的方法 |
CN111378029B (zh) * | 2018-12-29 | 2023-05-05 | 四川远大蜀阳药业有限责任公司 | 一种人凝血因子ix的制备方法 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3173208D1 (en) * | 1980-10-06 | 1986-01-23 | Edward Shanbrom | Method of reducing undesirable activities of biological and pharmaceutical products |
DE3045153A1 (de) * | 1980-11-29 | 1982-07-08 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ix und x |
US4820805A (en) * | 1983-07-14 | 1989-04-11 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free trialkyl phosphate treated biologically active protein derivatives |
US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
DE3751605D1 (de) * | 1986-01-06 | 1996-01-04 | Blood Systems Inc | Therapeutisches Blutprodukt, Mittel und Verfahren zu dessen Erzeugung. |
ES2045167T5 (es) * | 1987-10-23 | 1996-07-01 | Centre Regional De Transfusion | Preparacion de concentrado de factor ix humano de elevada pureza y de otras proteinas plasmaticas. |
CA2001720C (en) * | 1988-10-31 | 2001-10-02 | Randal A. Goffe | Membrane affinity apparatus and purification methods related thereto |
DE3914869C1 (pl) * | 1989-05-05 | 1990-08-09 | Biotest Pharma Gmbh, 6072 Dreieich, De | |
WO1992008790A1 (en) * | 1990-11-14 | 1992-05-29 | Cargill, Incorporated | Conjugates of poly(vinylsaccharide) with proteins for the stabilization of proteins |
AT402261B (de) * | 1991-01-25 | 1997-03-25 | Immuno Ag | Komplex enthaltend den gerinnungsfaktor ix |
AT402891B (de) * | 1991-06-20 | 1997-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes |
DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
-
1993
- 1993-12-10 DE DE4342132A patent/DE4342132C1/de not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-07-12 UA UA96062228A patent/UA44261C2/uk unknown
- 1994-12-07 US US08/646,331 patent/US20020045240A1/en not_active Abandoned
- 1994-12-07 IL IL11192594A patent/IL111925A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-12-07 CZ CZ19961670A patent/CZ291708B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-12-07 AU AU12425/95A patent/AU682560B2/en not_active Ceased
- 1994-12-07 WO PCT/EP1994/004067 patent/WO1995016030A1/en active IP Right Grant
- 1994-12-07 KR KR1019960703050A patent/KR100320394B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-12-07 PL PL94314801A patent/PL180179B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-12-07 HU HU9601594A patent/HU222084B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-12-07 PT PT95903324T patent/PT733104E/pt unknown
- 1994-12-07 DK DK95903324T patent/DK0733104T3/da active
- 1994-12-07 CN CNB94194445XA patent/CN1175105C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-07 ES ES95903324T patent/ES2224119T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-07 AT AT95903324T patent/ATE276357T1/de active
- 1994-12-07 JP JP7515975A patent/JPH09506256A/ja active Pending
- 1994-12-07 CA CA002178208A patent/CA2178208C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-07 DE DE69434001T patent/DE69434001T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-07 EP EP95903324A patent/EP0733104B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-09 ZA ZA949820A patent/ZA949820B/xx unknown
-
2002
- 2002-05-02 US US10/136,468 patent/US6893856B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2178208A1 (en) | 1995-06-15 |
AU1242595A (en) | 1995-06-27 |
AU682560B2 (en) | 1997-10-09 |
ZA949820B (en) | 1995-08-16 |
US20020182582A1 (en) | 2002-12-05 |
CN1175105C (zh) | 2004-11-10 |
IL111925A0 (en) | 1995-03-15 |
UA44261C2 (uk) | 2002-02-15 |
HU9601594D0 (en) | 1996-07-29 |
DK0733104T3 (da) | 2005-01-17 |
CN1137292A (zh) | 1996-12-04 |
DE69434001D1 (de) | 2004-10-21 |
HU222084B1 (hu) | 2003-04-28 |
CZ167096A3 (en) | 1996-09-11 |
US6893856B2 (en) | 2005-05-17 |
HUT76881A (en) | 1997-12-29 |
IL111925A (en) | 2000-06-01 |
PL314801A1 (en) | 1996-09-30 |
WO1995016030A1 (en) | 1995-06-15 |
EP0733104A1 (en) | 1996-09-25 |
PT733104E (pt) | 2004-12-31 |
ATE276357T1 (de) | 2004-10-15 |
DE69434001T2 (de) | 2005-09-22 |
EP0733104B1 (en) | 2004-09-15 |
CZ291708B6 (cs) | 2003-05-14 |
ES2224119T3 (es) | 2005-03-01 |
US20020045240A1 (en) | 2002-04-18 |
DE4342132C1 (de) | 1994-11-03 |
CA2178208C (en) | 2009-06-02 |
KR100320394B1 (ko) | 2002-07-31 |
JPH09506256A (ja) | 1997-06-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101769634B1 (ko) | 재조합 adamts13 및 기타 단백질을 정제하는 방법, 그리고 이들의 조성물 | |
US4673734A (en) | Porous mineral support coated with an aminated polysaccharide polymer | |
US5714583A (en) | Factor IX purification methods | |
JPS61275210A (ja) | ウイルス及び発熱原不活性化剤を用いる固相に吸着させた生物医学的生成物及び製薬生成物の処理法 | |
EP2102335B1 (en) | Purification of factor xi | |
PL180179B1 (pl) | Sposób wytwarzania preparatów zawierajacych wirusowo inaktywowane skladniki osocza zalezne od witaminy K PL PL PL PL PL | |
Pitiot et al. | A potential set up based on histidine hollow fiber membranes for the extracorporeal removal of human antibodies | |
JP2573467B2 (ja) | 第ix因子タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物 | |
US5445958A (en) | Process for purifying blood clotting factors | |
RU2148411C1 (ru) | Способ получения с помощью хроматографических методов вирусно-инактивированной фракции, содержащей фактор viii | |
AU759379B2 (en) | Novel factor IX purification methods | |
JPS5810522A (ja) | 不活化トロンビンゲルによるアンチトロンビン3の精製法 | |
Bilbis et al. | PURIFICATION OF ALBUMIN FROM SHEEP KIDNEY CORTEX | |
JPS61291527A (ja) | ヒトα2―プラスミンインヒビターの分離回収法 | |
JPH01240185A (ja) | アンジオテンシン変換酵素の精製方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20121207 |