UA126852C2 - Лікування атопічного дерматиту собак - Google Patents

Лікування атопічного дерматиту собак Download PDF

Info

Publication number
UA126852C2
UA126852C2 UAA201809978A UAA201809978A UA126852C2 UA 126852 C2 UA126852 C2 UA 126852C2 UA A201809978 A UAA201809978 A UA A201809978A UA A201809978 A UAA201809978 A UA A201809978A UA 126852 C2 UA126852 C2 UA 126852C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
amino acid
specified
acid sequence
polypeptide
protein
Prior art date
Application number
UAA201809978A
Other languages
English (en)
Inventor
Каспарс Тарс
Original Assignee
Бенчмарк Енімал Хелс Лтд.
Бенчмарк Энимал Хелс Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бенчмарк Енімал Хелс Лтд., Бенчмарк Энимал Хелс Лтд. filed Critical Бенчмарк Енімал Хелс Лтд.
Publication of UA126852C2 publication Critical patent/UA126852C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/00022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/00023—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/00034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/14011—Bromoviridae
    • C12N2770/14022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/14011—Bromoviridae
    • C12N2770/14023—Virus like particles [VLP]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Винахід стосується застосування композиції в способі профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у тварин сімейства псових, переважно домашньої собаки, причому композиція містить: (a) корову частинку з щонайменше одним першим сайтом приєднання, при цьому зазначена корова частинка являє собою VLP; і (b) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген cIL-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген cIL-31 містить або переважно складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з SEQ ID NO:22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 %, переважно щонайменше 92 %, ще більш переважно щонайменше 95 % і ще більш переважно щонайменше 98 % ідентичності амінокислотної послідовності відносно SEQ ID NO:22; причому (a) і (b) зв’язані через зазначений щонайменше один перший та зазначений щонайменше один другий сайт приєднання за допомогою щонайменше одного не пептидного ковалентного зв’язку.

Description

більш переважно щонайменше 95 95 і ще більш переважно щонайменше 98 95 ідентичності амінокислотної послідовності відносно ЗЕО ІЮ МО:22; причому (а) і (Б) зв'язані через зазначений щонайменше один перший та зазначений щонайменше один другий сайт приєднання за допомогою щонайменше одного не пептидного ковалентного зв'язку.
Даний винахід відноситься до композицій, імуногенних або вакцинних композицій та фармацевтичних композицій для профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС). Крім того, у даному винаході запропоновані способи профілактики або лікування АДС.
Композиції згідно з даним винаходом викликають ефективну імунну відповідь, зокрема, гуморальну відповідь, в собак і, таким чином, є підходящими для лікування та/або профілактики
АДС.
ПОПЕРЕДНІЙ РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Атопічний дерматит собак (АДС) за визначенням являє собою запальне та свербляче алергійне захворювання шкіри, що викликається взаємодією генетичних факторів і факторів навколишнього середовища та вражаюче до 10 95 всіх собак (Непзеє! Р еї аї., (2015) ВМС
Меїегіпагу Везеєагсі 11:196-209; Мешгу 5 евї а!., (2011) Меї Оєсптац! 22: 327-334; Модімесді А, еї аї., (2007) Ргем Меї Меа 78: 210-222). Це друге за поширеністю алергійне захворювання шкіри у представників сімейства псових, зокрема, домашніх собак, що поступається тільки алергії на бліх. Алергійні симптоми проявляються як екзематозне враження шкіри; крім того, представники сімейства псових, наприклад, домашні собаки з атопічним дерматитом часто страждають від пруриту, або сильної сверблячки, випадіння шерсті, подряпин через глибоке розчісування, часто лижуть лапи та продукують надлишкову кількість слізної рідини. Крім того, часто зустрічаються вторинні проблеми зі шкірою, в тому числі шкірні інфекції та надлишкове виділення шкірного сала.
Клінічні ознаки зазвичай розвиваються у молодому віці; піковий вік їх прояву зазвичай становить від шести місяців до трьох років. Морда, вуха, лапи, кінцівки, черево та згинальні поверхні зазвичай вражаються сверблячкою й еритемою (Стійіп СЕ, ЮОероєг 0) (2001) Меїегіпагу
Іттипоїоду апа Іттипораїпоіоду 81: 255-269). Це захворювання у типовому випадку являє собою хронічний рецидивуючий стан, і більшість собак потребують тривалої, зазвичай довічної терапії (Мипаї Т., еї а!., Меїегіпагу Несога (2014) 174 (в5иррі 2), 3-12).
До теперішнього часу описано декілька засобів лікування АДС і сверблячки, в тому числі застосування антигістамінних засобів, наприклад, фексофенадину, або таких лікарських засобів, як циклоспорин. Крім того, для лікування АДС є недавно зареєстрований продукт, відомий як інгібітор янус-кінази, або ЗАК (Мипаї! Т., еї аї!., Меїегіпагу Весога (2014)
Зо 174 (виррі 2), 3-12); МО 2015/042596).
Хоча ці лікарські засоби, вочевидь, ефективні, в них є істотні побічні ефекти, які можуть перешкоджати їх довгостроковому застосуванню. Наприклад, ці лікарські засоби пригнічують імунну систему представників сімейства псових, наприклад, домашніх собак, що може призвести до розвитку інфекцій. Кортикостероїди також можуть викликати остеопороз, проблеми з ендокринною системою та катаракту у представників сімейства псових і домашніх собак. Крім того, у кортикостероїдів є тенденція до стимуляції частого приймання їжі, рідини та сечовипускання у представників сімейства псових, наприклад, домашніх собак, що власники собак вважають небажаним. Більше того, багато з цих лікарських засобів необхідно вводити перорально та щодня, що робить їх застосування дуже незручним. Оскільки АДС часто являє собою хронічний стан, ці проблеми з безпекою та побічні ефекти обумовлюють значну незадоволену потребу у безпечному й ефективному засобі для довгострокового лікування. Крім того, додатковим питанням, що викликає інтерес, є не тільки безпека, але і зручність застосування. Таким чином, залишається потреба у варіантах лікування АДС. Даний винахід задовольняє цю потребу.
КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
У даному винаході запропоновані композиції для профілактики та лікування атопічного дерматиту у представників сімейства псових, у тому числі, переважно, домашніх собак (Сапів
Іприв Татіїагі5 або Сапів Татіїаг ів) й інших членів даного сімейства. Зокрема, у даному винаході запропоновані композиції та їх застосування для профілактики і лікування атопічного дерматиту собак (АДС), причому переважні композиції згідно з даним винаходом містять антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген сіЇ/-31), експонований на вірусоподібних частинках вірусу рослини (вірусу мозаїки огірка, СМУ), модифікованих шляхом вбудовування епітопів ТН-клітин, зокрема, універсальних епітопів Т-клітин. Крім того, ці модифіковані МР використовуються в якості вакцин для індукції імунної відповіді, зокрема, гуморальної відповіді проти сіІ!-31. Присутність епітопів Т-клітин, зокрема, універсальних епітопів Т-клітин, призводить до подальшого посилення викликаної імунної відповіді та, таким чином, сприятливого ефекту з погляду профілактики і лікування АДС.
Таким чином, введення композицій згідно з даним винаходом представникам сімейства псових, зокрема, домашнім собакам, призводить до ефективного ослаблення параметрів і 60 симптомів захворювання АДС. Зокрема, введення композицій згідно з даним винаходом представникам сімейства псових, зокрема, домашнім собакам, не тільки призводить до індукції автоантитіл і зниження рівня собачого інтерлейкіну-31 в крові та шкірі представників сімейства псових, зокрема, домашніх собак, але зазначене зниження рівня сі!-31 корелює зі зниженням симптомів захворювання АДС. Крім того, введення композицій згідно з даним винаходом представникам сімейства псових, зокрема, домашнім собакам, призводить до ослаблення сверблячки й ефективного зниження ступеня тяжкості враження шкіри в собак з АДС.
Лікування відповідно до даного винаходу призводить до зниження показника вражень при атопічному дерматиті або АбБІЇ і візуального аналогового бального показника сверблячки або
РМА5 у представників сімейства псових, яких лікують, зокрема, домашніх собак. Показник А0ОІ являє собою перевірений об'єднаний показник шести клінічних симптомів, асоційованих з атопічним дерматитом собак й оцінюваних за п'ятьма зазначеними частинами тіла. Експерт виконує бальну оцінку кожного параметра в кожній зазначеній частині тіла за шкалою від нуля до п'яти, причому оцінка "нуль" означає відсутність осередків, а оцінка "п'ять" - важкі/великі осередки. Експерт виконує бальну оцінку РМАБ за аналоговою шкалою від нуля до десяти, причому оцінка "нуль" являє собою відсутність сверблячки/ викушування, а оцінка "десять" - безперервна інтенсивна сверблячка/ викушування.
Безвідносно до даного пояснення, вважають, що даний винахід впливає на АДС, який вважається багатоаспектним захворюванням. Вважається, що комбінація поляризації ТН2 і наявності мікроорганізмів при АДС може призводити до сіЇ/-31 -опосередкованих ефектів, що обумовлюють запалення та прурит за рахунок імунних клітин, кератиноцитів і прямої нейронної стимуляції, що викликає сверблячку. Таким чином, індукція автоантитіл до сіЇ-31 композицій та способів згідно з даним винаходом у представників сімейства псових, наприклад, зокрема, в домашніх собак, знижує рівень сіЇ-31 і, тим самим, впливає на АДС шляхом ослаблення сверблячки і, отже, розчісування в собаки, пригнічуючи всі явища, обумовлені розчісуванням, у тому числі запалення й інфекцію.
Таким чином, у першому аспекті даного винаходу запропонована композиція для застосування в способі профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у представників сімейства псових, переважно домашньої собаки, причому ефективну кількість зазначеної композиції вводять зазначеній тварині сімейства псових, переважно зазначеній
Зо домашній собаці, і зазначена композиція містить (а) корову частинку з щонайменше одним першим сайтом приєднання; і (Б) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген
СІ/-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сії -31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕО
ІО МО: 22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95, переважно щонайменше 92 95, більше переважно - щонайменше 95 95, і ще більше переважно - щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до
ЗЕО ІЮО МО: 22; причому компоненти (а) і (р) зв'язані за допомогою зазначених щонайменше одного першого та щонайменше одного другого сайту приєднання за рахунок щонайменше одного непептидного ковалентного зв'язку.
У переважному варіанті реалізації зазначена корова частинка являє собою вірусоподібну частинку (МІ Р), переважно рекомбінантну МІ Р. У додатковому переважному варіанті реалізації зазначена МІ Р являє собою модифіковану МІ Р вірусу мозаїки огірка (СМУ), причому зазначена модифікована МІ Р СММ містить, складається з або по суті складається з щонайменше одного модифікованого поліпептиду СМУ, причому зазначений модифікований поліпептид СММ містить або, переважно, складається з (а) поліпептиду СММ й (Б) епітопу Т-хелпера; причому зазначений поліпептид СММ містить або, переважно, складається з (ї) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою амінокислотну послідовність білка оболонки СМУ, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначений білок оболонки СММ демонструють ідентичність послідовності щонайменше 9095, переважно щонайменше 9595, більше переважно щонайменше 9895, і ще більше переважно - щонайменше 99595. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СММУ містить або, переважно, складається з (а) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУМ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або, переважно, складається з 5ЕО ІО МО: 1, або (р) амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності щонайменше 90 96 по відношенню до 5ЕО ІЮО МО: 1; і зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту формули винаходу, містить ЗЕО ІО МО: 23; або зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту формули винаходу, містить область амінокислотної послідовності, причому зазначена область 60 амінокислотної послідовності має ідентичність послідовності щонайменше 90 95 по відношенню до 5ЕО ІЮ МО: 23. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначена МІ Р являє собою модифіковану МІР вірусу мозаїки огірка (СМУ), причому зазначений модифікований поліпептид СММУ містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО 10
МО: 6 або 5ЕО І МО: 7.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сіЇ/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а) БЕО ІЮ МО: 18; (Б) 5ЕО ІО МО: 21; (с) БЕО І МО: 22; або (4) 5ЕО І МО: 25-30.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген
СІ -31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (аа БЕО ІЮ МО: 18; (Б) 5ЕО І МО: 21; (с) БЕО ІЮ МО: 22; (й) 5ЕО ІЮ МО: 25 або (є) 5ЕО І МО: 26. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції зазначеного антигена сіЇ-31 із М-сукцинімідил-Б- ацетилтіоацетатом (5АТА). У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції залишку лізину із зазначеним антигеном
СІ -31.
У додатковому аспекті даного винаходу запропонована імуногенна або вакцинна композиція, яка містить ефективну кількість зазначеної композиції згідно 3 даним винаходом, причому, переважно, зазначена імуногенна або вакцинна композиція додатково містить ад'ювант.
У додатковому аспекті даного винаходу запропонована фармацевтична композиція, яка містить: (а) композицію згідно з даним винаходом або імуногенну, або вакцинну композицію; і (Б) фармацевтично прийнятний носій.
У додатковому аспекті даного винаходу запропонований спосіб імунізації, причому зазначений спосіб включає введення людині композиції згідно з даним винаходом, імуногенної або вакцинної композиції за даним винаходом або фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом.
У додатковому аспекті даного винаходу запропонована композиція згідно з даним винаходом, імуногенна або вакцинна композиція згідно з даним винаходом або фармацевтична композиція згідно з даним винаходом для застосування в якості лікарського засобу.
У додатковому аспекті даного винаходу запропонована композиція згідно з даним винаходом, імуногенна або вакцинна композиція згідно з даним винаходом або фармацевтична композиція згідно з даним винаходом для застосування в способі профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у домашньої собаки, причому ефективну кількість зазначеної композиції згідно з даним винаходом, зазначеної імуногенної або вакцинної композиції згідно з даним винаходом або зазначеної фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом вводять зазначеній домашній собаці. Переважно зазначене введення зазначеної композиції згідно з даним винаходом, зазначеної імуногенної або вакцинної композиції згідно з даним винаходом або зазначеної фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом послабляє щонайменше один симптом зазначеного атопічного дерматиту собак (АДС) у порівнянні з щонайменше одним симптомом до зазначеного введення.
У додатковому аспекті даного винаходу запропонований спосіб профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у домашньої собаки, причому зазначений спосіб включає введення ефективної кількості зазначеної композиції згідно 3 даним винаходом, зазначеної імуногенної або вакцинної композиції згідно з даним винаходом або зазначеної фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом зазначеній домашній собаці.
В ще одному аспекті даного винаходу запропоноване застосування зазначеної композиції згідно з даним винаходом, зазначеної імуногенної або вакцинної композиції згідно з даним винаходом або зазначеної фармацевтичної композиції для виробництва лікарського засобу для профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у домашньої собаки, причому в типовому та переважному випадку ефективну кількість зазначеної композиції згідно з даним винаходом, зазначеної імуногенної або вакцинної композиції згідно з даним винаходом або зазначеної фармацевтичної композиції вводять зазначеній домашній собаці.
В ще одному аспекті даного винаходу запропонована композиція для застосування в способі профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у домашньої собаки, причому ефективну кількість зазначеної композиції вводять зазначеній домашній собаці, і зазначена композиція містить (а) корову частинку з щонайменше одним першим сайтом приєднання, причому зазначена корова частинка переважно являє собою вірусоподібну частинку (МІР), більше переважно - рекомбінантну МІ Р; і (Б) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну- бо 31 (антиген сіЇ-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сіЇ/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕО ІЮО МО: 22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95, переважно щонайменше 9295, більше переважно -щонайменше 9595, і ще більше переважно - щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до
ЗЕО ІЮ МО: 22; причому компоненти (а) і (р) зв'язані за допомогою зазначених щонайменше одного першого та щонайменше одного другого сайту приєднання за рахунок щонайменше одного непептидного ковалентного зв'язку.
У додатковому аспекті даного винаходу запропонована композиція, яка містить (а) вірусоподібну частинку (МІР) з щонайменше одним першим сайтом приєднання; (бр) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген сі!/-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сіЇ-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕО ІЮО МО: 22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 9095, переважно щонайменше 92 95, більше переважно - щонайменше 95 95, і ще більше переважно - щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІЮО МО: 22; і, більше переважно, зазначений антиген містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 22; причому компоненти (а) і (р) зв'язані за допомогою зазначених щонайменше одного першого та щонайменше одного другого сайту приєднання за рахунок щонайменше одного непептидного ковалентного зв'язку.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначена МІР являє собою модифіковану МІ Р вірусу мозаїки огірка (СМУ), причому зазначений модифікований поліпептид
СММУ містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮО МО: 6 або
ЗЕО ІЮ МО: 7.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сіЇ/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а) БЕО ІЮ МО: 18; (Б) 5ЕО І МО: 21; (с) БЕО І МО: 22; або (а) 5ЕО І МО: 25-30.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген
СІ -31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а) БЕО ІО МО: 18; (Б) БЕО ІО МО: 21; (с) БЕО ІО МО: 22; (4) БЕО ІО МО: 25 або (є) БЕО ІЮ МО:
Зо 26. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції зазначеного антигена сіЇ-31 із М-сукцинімідил-8- ацетилтіоацетатом (5АТА). У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції залишку лізину із зазначеним антигеном
СІ -31.
Додаткові аспекти та варіанти реалізації даного винаходу стануть очевидні в міру продовження даного опису.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
ФІГ. 1 Карта плазміди рРЕТ-СММУУї. Позначені відносні положення важливих генів і сайти ферментів рестрикції.
ФІГ. 2А Динамічне світлорозсіювання очищених МІ Р СМУмі. Розмір частинок визначали за допомогою 7еїавігег Мапо 25 (Маїмет Іпвігитепів Ца., Великобританія).
ФІГ. 28 Електронно-мікроскопічний аналіз очищених МІР СММУулї. Для морфологічного аналізу МІ Р використовували електронний мікроскоп "ЕМ-1230 (Чео! ПЮ)., Токіо, Японія).
ФІГ. З Мас-спектрометричний аналіз очищених МІ Р, отриманих з СМУ. Аналіз за допомогою часопролітної мас-спектрометрії з лазерною іонізацією та десорбцією з матриці (МАГ ОІ-ТОБЕ) виконували на Аціойех М5 (ВгикКег РаіюЮпікК, Німеччина). Для визначення маси використовували калібрувальний стандарт ІЇ молекулярної маси (ММ) білка (22,3-66,5 кДа; ВгиКег РаїюпікК).
ФІГ. ЗА СММУ дикого типу ("дт"); теоретична ММ-24069; знайдена ММ-24058
ФІГ. ЗВ СМУ-Мраадіг; теоретична ММ-24161 (без першого залишку Меї); знайдена
МІМ-24160 ФІГ. ЗС СМУ-МНВ830; теоретична ММ-24483 (без першого залишку Меї); знайдена
ММ-24477
ФІГ. 4А Динамічне світлорозсіювання очищених МІР СММУ-МИ830. Розмір частинок визначали за допомогою 7еїавзі7ег Мапо 75 (Маїмет Іпвігитепів І ю., Великобританія).
ФІГ. 48 Електронно-мікроскопічний аналіз очищених МР СМУ-МН830. Для морфологічного аналізу МІ Р використовували електронний мікроскоп "ЕМ-1230 (Чео! ПЮ)., Токіо, Японія).
ФІГ. 5А Динамічне світлорозсіювання очищених МІ Р СМУ-Мрааіг. Розмір частинок визначали за допомогою 7еїазігег Мапо 75 (МаїЇмет Іпвігитепів І ю., Великобританія).
ФІГ. 58 Електронно-мікроскопічний аналіз очищених МІ Р СЄМУ-Мрадг. Для морфологічного аналізу МІ Р використовували електронний мікроскоп "ЕМ-1230 (Чео! ПЮ)., Токіо, Японія).
ФІГ. 6 Продукція сі -31 з маркером 6бхХНізв і С-кінцевим залишком цистеїну в Е.соїї. Доріжка 1 - загальний лізат клітин до індукції, доріжка 2 - загальний лізат клітин після індукції, доріжка З - маркер. Положення білка сіІ -31 зазначене стрілкою.
ФІГ. 7 Очищення сі!/-31 з маркером бхНів і С-кінцевим залишком цистеїну. Доріжка 1 - маркер, доріжка 2 - лізат клітин (розчинна фракція), доріжка 2 - екстракція осаду у буфері для промивання МУВ1, доріжка 2 - екстракція осаду у буфері для промивання М/В2, доріжка З - екстракція осаду у буфері для елюювання ЕВ, що містить 8 М сечовини.
ФІГ. ВА Рефолдінг сі! -31 з маркером 6бхНів і С-кінцевим залишком цистеїну. Доріжка 1 - маркер, доріжка 2 - нерозчинна фракція після рефолдінгу, доріжка З - розчинна фракція після рефолдінгу.
ФІГ. 88 Профіль гель-фільтрації сі! -31 з маркером бхНів і С-кінцевим залишком цистеїну після рефолдінгу. Пік відповідає виключеному об'єму колонки, що вказує на агрегацію матеріалу.
ФІГ. 9 Продукція нативного рекомбінантного сіЇ -31 собаки. Доріжка 1 - загальний лізат клітин до індукції, доріжка 2 - загальний лізат клітин після індукції, доріжка З - маркер. Положення білка
СІ -31 зазначене стрілкою.
ФІГ. 10А Очищення нативного рекомбінантного сі! -31 після рефолдінгу на колонці для гель- фільтрації. Білок елюювався значно пізніше виключеного об'єму колонки, що вказувало на відсутність агрегації матеріалу.
ФІГ. 108 Аналіз фракцій піків електрофорезом у ДСН-ПААГ.
ФІГ. 11 Аналіз сі! -31, приєднаного до МІ Р СМУ, електрофорезом у ДСН-ПААГ. Доріжка 1 - маркер, доріжка 2-МІ Р СМУ, доріжка 3-МІ Р СМИУ, оброблені 5МРН, доріжка 4-сіІ 31, доріжка 5-
СІ -31, приєднаний до МІ Р СМУ. Продукт приєднання на доріжці 5 зазначений стрілками.
ФІГ. 12 Електронна мікроскопія МІ Р СММУ-МНВ830 і тих самих МІ Р із приєднаним сії -31.
ФІГ. 13А Вакцинація проти сі!/-31 різко послабляє розчісування у вакцинованих собак з алергією. Розчісування протягом 6 годин після стимуляції екстрактом кліща домашнього пилу до та після вакцинації.
Зо ФІГ. 138 Кореляція відсутності розчісування з індукцією сії -31-специфічних антитіл.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Якщо не зазначено інше, всі технічні та наукові терміни, використані у даному документі, мають значення, що збігається із загальноприйнятим серед фахівців у галузі, до якої відноситься даний винахід.
Вірусоподібна частинка (МІ Р): Термін "вірусоподібна частинка (МІ Р)" у даному документі відноситься до частинки, що не реплікується або не інфекційна, переважно до вірусної частинки, що не реплікується та не інфекційна, або до структури, що нагадує вірусну частинку, яка не реплікується або не інфекційна, переважно до структури, що нагадує вірусну частинку, яка не реплікується та не інфекційна, переважно капсиду вірусу. Термін "що не реплікується" у даному документі відноситься до нездатності реплікувати геном, що міститься у МІ Р. Термін "не інфекційна" у даному документі відноситься до нездатності проникати в клітину-хазяїна.
Вірусоподібна частинка відповідно до даного винаходу є такою, що не реплікується та не інфекційна, оскільки в неї повністю або частково відсутній геном вірусу або функція геному.
Вірусоподібна частинка відповідно до даного винаходу може містити нуклеїнову кислоту окремо від свого геному. Рекомбінантні вірусоподібні частинки зазвичай містять РНК з клітини-хазяїна.
Типовий та переважний варіант вірусоподібної частинки відповідно до даного винаходу являє собою капсид вірусу, що складається з поліпептидів згідно з даним винаходом. Вірусоподібна частинка зазвичай являє собою макромолекулярний блок з білка оболонки вірусу, який зазвичай містить 60, 120, 180, 240, 300, 360 або більше 360 субодиниць білка на вірусоподібну частинку. У типовому та переважному випадку взаємодія цих субодиниць веде до утворення вірусного капсиду або структури, подібної вірусному капсиду, з властивою йому повторюваною організацією. Однією з особливостей вірусоподібної частинки є її висока впорядкованість та повторюване компонування її субодиниць.
Вірусоподібна частинка СМУ: Термін "вірусоподібна частинка СМУ" або МР. СМУ відноситься до вірусоподібної частинки, що містить або, переважно, в основному, складається з, або, переважно, складається з щонайменше одного поліпептиду СМУМУ. Переважно вірусоподібна частинка СММ містить зазначений поліпептид СМУМ в якості основного, і ще більше переважно - єдиного білкового компонента структури капсиду. У типовому та переважному випадку вірусоподібні частинки СМУМ нагадують структуру капсиду СМУ. бо Вірусоподібні частинки СММУ є такими, що не реплікуються та не інфекційні, і в них відсутні щонайменше ген або гени, що кодують механізми реплікації СМУ, а також зазвичай відсутні ген або гени, що кодують білок або білки, відповідальні за приєднання вірусу до хазяїна або за проникнення в нього. У це визначення також входять вірусоподібні частинки, в яких вищезгадані ген або гени як і раніше присутні, але неактивні. Переважні способи надання вірусоподібним частинкам властивостей не реплікованості та/або не інфекційності являють собою фізичну або хімічну інактивацію, наприклад, УФ-опромінення, обробку формальдегідом. Переважно у МІ Р
СММУ відсутні ген або гени, що кодують механізми реплікації СМУ, а також відсутні ген або гени, що кодують білок або білки, відповідальні за приєднання вірусу до хазяїна або за проникнення в нього. Більше переважно вірусоподібні частинки, що не реплікуються та/або не інфекційні, одержують з використанням рекомбінантної генної технології. Рекомбінантні вірусоподібні частинки СММУ згідно з даним винаходом у типовому та переважному випадку не містять геному вірусу. Даний винахід також охоплює вірусоподібні частинки, що містять поліпептиди більше ніж одного виду, що зазвичай називаються мозаїчними МІР. Так, в одному варіанті реалізації вірусоподібна частинка згідно з даним винаходом містить поліпептиди щонайменше двох різних видів, причому щонайменше один із зазначених видів поліпептидів являє собою поліпептид
СМУ. Переважно, МЕР СММ являє собою макромолекулярний блок, що складається з білка оболонки СМУМ і зазвичай містить 180 субодиниць білка оболонки на МІР. У типовому переважному випадку МІР СММУ у даному документі містить, складається з або по суті складається з щонайменше одного поліпептиду СМУ, що містить або, переважно, складається з () амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою амінокислотну послідовність білка оболонки СМУ, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, демонструють ідентичність послідовності щонайменше 90 95, переважно щонайменше 95 95, більше переважно щонайменше 98 95, і ще більше переважно -щонайменше 99 95.
Поліпептид: Термін "поліпептид" у даному документі відноситься до полімеру, що складається з амінокислотних мономерів, лінійно з'єднаних пептидними зв'язками (також відомими як амідні зв'язки). Термін "поліпептид" відноситься до послідовного ланцюга амінокислот, а не до продуктів конкретної довжини. Таким чином, визначення поліпептиду
Зо включає пептиди та білки.
Поліпептид вірусу мозаїки огірка (СМУ): Термін "поліпептид вірусу мозаїки огірка (СММ)" у даному документі відноситься до поліпептиду, що містить або, переважно, складається з: (Її) амінокислотної послідовності білка оболонки вірусу мозаїки огірка (СМУ); або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою амінокислотну послідовність білка оболонки СМУ, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, тобто зазначений білок оболонки СМУ, демонструють ідентичність послідовності щонайменше 90 95, переважно щонайменше 9595, більше переважно щонайменше 9895, і ще більше переважно - щонайменше 99595. У типовому переважному випадку поліпептид СММ може утворювати вірусоподібну частинку СММ при експресії шляхом самоскладання.
Білок оболонки (СР) вірусу мозаїки огірка (СММ): Термін "білок оболонки (СР) вірусу мозаїки огірка (СММ)" у даному документі відноситься до білка оболонки вірусу мозаїки огірка, що зустрічається у природі. Через украй широке коло хазяїнів вірусу мозаїки огірка відома велика кількість різних штамів й ізолятів СМУ, і послідовності білків оболонки зазначених штамів й ізолятів визначені та, таким чином, також відомі фахівцям уданій галузі техніки. Описані послідовності зазначених білків оболонки (СР) СМУ; їх можна одержати з відомих баз даних, наприклад, Сепрапк, м/мли.арумжер.пеї, або м/млу.пеобрі.піт.пій.дом/ргоївєїп/. Приклади описані в заявці ЕРМо 14189897.3. Типові приклади білків оболонки СММ наведені у 5ЕО ІЮ МО 1-3. Слід зазначити, що ці штами й ізоляти характеризуються високою аналогією послідовностей білків оболонки в різних доменах білка, у тому числі на М-кінці білка оболонки. Зокрема, 98,1 95 всіх повністю секвенованих ізолятів СММ мають більше ніж 85 95 ідентичність послідовності в межах перших 28 амінокислот послідовності білка оболонки, і 79,5 95 всіх повністю секвенованих ізолятів СММ мають більше ніж 90 95 ідентичність послідовності в межах перших 28 амінокислот послідовності білка оболонки. У типовому переважному випадку білок оболонки СМУ, застосовуваний у даному винаході, може утворювати вірусоподібну частинку СММ при експресії шляхом самоскладання. Переважно, білок оболонки СМУ, застосовуваний у даному винаході, може утворювати вірусоподібну частинку СММУ при експресії шляхом самоскладання в Е.соїї.
Модифікована вірусоподібна частинка (МІР) вірусу мозаїки огірка (СМУ) Термін "модифікована вірусоподібна частинка (МІ Р) вірусу мозаїки огірка (СММУ)" у даному документі 60 відноситься до МІ Р СМУ, модифікованої таким чином, що вона містить або, переважно, по суті б складається з або, переважно, складається з щонайменше одного модифікованого поліпептиду
СМУ, причому зазначений модифікований поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з поліпептиду СМУ, й епітопу Т-хелпера. У типовому переважному випадку зазначений епітоп Т-хелпера () приєднаний до М-кінця зазначеного поліпептиду СМУ, (ії) приєднаний до С-кінця зазначеного поліпептиду СМУ, (іїї) заміщає область послідовних амінокислот зазначеного поліпептиду СМУ, причому ідентичність послідовності між зазначеною заміщеною областю послідовних амінокислот зазначеного поліпептиду СММ й епітопом Т- хелпера становить щонайменше 1595, переважно щонайменше 20 95, або (ім) заміщає М- кінцеву область зазначеного поліпептиду СМУ, причому зазначена М-кінцева область, що заміщається, зазначеного поліпептиду СМУМ складається з 5-15 послідовних амінокислот.
Переважно зазначений епітоп Т-хелпера заміщає М-кінцеву область зазначеного поліпептиду
СМУ, причому зазначена М-кінцева область, що заміщається, зазначеного поліпептиду СМУ складається з 5-15 послідовних амінокислот, переважно з 9-14 послідовних амінокислот, більше переважно - з 11-13 послідовних амінокислот, і найбільше переважно -3з 11,12 або 13 послідовних амінокислот. Переважно зазначена модифікована МІР СМУМ згідно з даним винаходом являє собою рекомбінантну модифіковану МІ Р СМУ.
Модифікований поліпептид СМУМ: Термін "модифікований поліпептид СММУ" у даному документі відноситься до поліпептиду СМУ, модифікованому, як зазначено у даному документі, так, що зазначений модифікований поліпептид СММ містить або, переважно, складається з поліпептиду СММ й епітопу Т-хелпера. У типовому випадку модифікований поліпептид СММУ може утворювати вірусоподібну частинку СМУМ при експресії шляхом самоскладання.
Переважно, модифікований поліпептид СММ являє собою рекомбінантний модифікований поліпептид СММ і може утворювати вірусоподібну частинку СММ при експресії шляхом самоскладання в Е. соїї.
М-кінцева область поліпептиду СМУ: Термін "М-кінцева область поліпептиду СМУ" у даному документі відноситься до М-кінця зазначеного поліпептиду СМ М ії, зокрема, М-кінця білка оболонки СМУ, або до області М-кінця зазначеного поліпептиду СММ або зазначеного білка оболонки СМУ, але починається з другої амінокислоти з М-кінця зазначеного поліпептиду СМУ або зазначеного білка оболонки СМУ, якщо зазначений поліпептид СММ або зазначений білок
Зо оболонки містить М-кінцевий залишок метіоніну. Переважно, у випадку, якщо зазначений поліпептид СММ або зазначений білок оболонки містить М-кінцевий залишок метіоніну, з практичної точки зору стартовий кодон, що кодує метіонін, зазвичай делетують та додають до
М-кінця епітопу Тр-клітини. У більше переважному випадку необов'язково можна вставити одну, дві або три додаткові амінокислоти, переважно одну амінокислоту, між стартовим залишком метіоніну й епітопом ТН-клітини з метою клонування. Термін "М-кінцева область мутованої амінокислотної послідовності поліпептиду СММ або білка оболонки СМУ" у даному документі відноситься до М-кінця зазначеної амінокислотної послідовності зазначеного поліпептиду СММ або зазначеного білка оболонки СМУ, або до області М-кінця зазначеної мутованої амінокислотної послідовності зазначеного поліпептиду СММ або зазначеного білка оболонки
СМУ, але починається з другої амінокислоти з М-кінця зазначеної мутованої амінокислотної послідовності зазначеного поліпептиду СММ або зазначеного білка оболонки СМУ, якщо зазначена мутована амінокислотна послідовність містить М-кінцевий залишок метіоніну.
Переважно, у випадку, якщо зазначений поліпептид СММ або зазначений білок оболонки містить М-кінцевий залишок метіоніну, з практичної точки зору стартовий кодон, що кодує метіонін, зазвичай делетують та додають до М-кінця епітопу ТН-клітини. У більше переважному випадку необов'язково можна вставити одну, дві або три додаткові амінокислоти, переважно одну амінокислоту, між стартовим залишком метіоніну й епітопом ТйИ-клітини з метою клонування.
Рекомбінантний поліпептид: У контексті даного винаходу термін "рекомбінантний поліпептид" відноситься до поліпептиду, отриманого з використанням процесу, що включає щонайменше один етап технології рекомбінантних ДНК. У типовому переважному випадку рекомбінантний поліпептид продукують у прокаріотичній системі експресії. Для фахівця очевидно, що рекомбінантно продуковані поліпептиди, експресовані у прокаріотичній системі експресії, наприклад, Е.соїї., можуть містити М-кінцевий залишок метіоніну. М-кінцевий залишок метіоніну зазвичай відщеплюється від рекомбінантного поліпептиду в експресуючому хазяїні під час дозрівання рекомбінантного поліпептиду. Однак відщеплення М-кінцевого залишку метіоніну може бути неповним. Таким чином, препарат рекомбінантного поліпептиду може містити суміш поліпептидів з М-кінцевим залишком метіоніну та без нього, в іншому ідентичних один одному. У типовому переважному випадку препарат рекомбінантного поліпептиду містить менше 10 95,
більше переважно - менше 595, і ще більше переважно - менше 1 95 рекомбінантного поліпептиду з М-кінцевим залишком метіоніну.
Рекомбінантний поліпептид СМУ: Термін "рекомбінантний поліпептид СМУ" відноситься до поліпептиду СМУ, визначення якого наведене вище, отриманого з використанням процесу, який включає щонайменше один етап технології рекомбінантних ДНК. У типовому переважному випадку препарат рекомбінантного поліпептиду СММ містить менше 10 95, більше переважно - менше 5 95, і ще більше переважно - менше 1 95 рекомбінантного поліпептиду СММУ з М-кінцевим залишком метіоніну. Отже, рекомбінантна вірусоподібна частинка згідно 3 даним винаходом може містити рекомбінантні поліпептиди з М-кінцевим залишком метіоніну та без нього, в іншому ідентичні один одному.
Рекомбінантний модифікований поліпептид СМУ: Термін "рекомбінантний модифікований поліпептид СМУ" відноситься до модифікованого поліпептиду СМУ, визначення якого наведене вище, отриманого з використанням процесу, який включає щонайменше один етап технології рекомбінантних ДНК. У типовому переважному випадку препарат рекомбінантного модифікованого поліпептиду СММ містить менше 10 95, більше переважно - менше 5 95, і ще більше переважно - менше 1 95 рекомбінантного модифікованого поліпептиду СММ з М-кінцевим залишком метіоніну. Отже, рекомбінантна вірусоподібна частинка згідно 3 даним винаходом може містити рекомбінантні поліпептиди з М-кінцевим залишком метіоніну та без нього, в іншому ідентичні один одному.
Рекомбінантна вірусоподібна частинка: У контексті даного винаходу термін "рекомбінантна вірусоподібна частинка" відноситься до вірусоподібної частинки (МІР), отриманої з використанням процесу, який включає щонайменше один етап технології рекомбінантних ДНК.
У типовому переважному випадку рекомбінантна вірусоподібна частинка містить щонайменше один рекомбінантний поліпептид, переважно рекомбінантний поліпептид СММ або рекомбінантний модифікований поліпептид МУ. У найбільше переважному випадку рекомбінантна вірусоподібна частинка містить або складається з рекомбінантних поліпептидів
СММУ або рекомбінантних модифікованих поліпептидів СММУ. Отже, якщо у контексті даного винаходу визначення рекомбінантних МІ Р згідно з даним винаходом оформлене з посиланням на конкретні амінокислотні послідовності, що містять М-кінцевий залишок метіоніну, область цих рекомбінантних МІР згідно з даним винаходом охоплює МІР, утворені зазначеними конкретними амінокислотними послідовностями без зазначеного М-кінцевого залишку метіоніну, а також, зазвичай в незначній кількості, як зазначено у даному документі, МІ Р, утворені зазначеними конкретними амінокислотними послідовностями із зазначеним М-кінцевим залишком метіоніну. Більше того, якщо визначення рекомбінантних МІР оформлене з посиланням на конкретні амінокислотні послідовності, що містять М-кінцевий залишок метіоніну, область даного винаходу охоплює Мі Р, які містять як амінокислотні послідовності, що містять зазначений М-кінцевий залишок метіоніну, так і амінокислотні послідовності без М-кінцевого залишку метіоніну.
Мутована амінокислотна послідовність: Термін "мутована амінокислотна послідовність" відноситься до амінокислотної послідовності, отриманої шляхом впровадження заданого набору мутацій в мутовану амінокислотну послідовність. У контексті даного винаходу зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, у типовому переважному випадку являє собою амінокислотну послідовність білка оболонки СМУ. Таким чином, мутована амінокислотна послідовність відрізняється від амінокислотної послідовності білюа оболонки СММ щонайменше на один амінокислотний залишок, причому зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена амінокислотна послідовність демонструють ідентичність послідовності, рівну щонайменше 9095. У типовому переважному випадку зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, демонструють ідентичність послідовності, рівну щонайменше 91 Фо, 92 95, 93 Фо, 94 95, 95 95, 96 95, 97 95, 98 Фо або 9995. Переважно зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена послідовність, що мутується, відрізняються не більше ніж на 11, 10, 9, 8, 7, 6, 4, 3, 2 або 1 амінокислотний залишок, причому, більше переважно, зазначена відмінність вибрана з інсерції, делеції й амінокислотної заміни. Переважно мутована амінокислотна послідовність відрізняється від амінокислотної послідовності білюла оболонки СММ щонайменше на одну амінокислоту, причому зазначена відмінність являє собою амінокислотну заміну.
Положення, що відповідає залишкам...: Положення в амінокислотній послідовності, що відповідає заданим залишкам іншої амінокислотної послідовності, можна встановити шляхом вирівнювання послідовностей, у типовому переважному випадку з використанням алгоритму
ВІ АТР, найбільше переважно - з використанням стандартних налаштувань. Типові та бо переважні стандартні налаштування являють собою: поріг очікування: 10; розмір слова: 3;
максимальна кількість збігів у діапазоні запиту: 0; матриця: ВІ О5ИОМб62; штраф за розрив: наявність 11, продовження 1; композиційна корекція: умовна композиційна корекція на основі бальної матриці.
Ідентичність послідовності: Ідентичність послідовності двох заданих амінокислотних послідовностей визначають на підставі вирівнювання обох послідовностей. Алгоритми визначення ідентичності послідовностей доступні для фахівців. Переважно ідентичність двох амінокислотних послідовностей визначають з використанням загальнодоступних комп'ютерних програм оцінки гомології, наприклад, програми "ВІ АБТ" (пир//ріавзі. пері. піт.пій.дом/Віаві.сді) або "СГОБТАСМУ" (пер/Лимлу.депоте.|р/Лооів/сіивіа!м/), і, у даному документі, програми "ВІ АБТ", представленої на головній сторінці МСВІ НЕр:/ріаві.пеобрі.піт.пій.дом/Віавзі.сді, з використанням налаштувань за замовчуванням, представлених у цій програмі. Типові та переважні стандартні налаштування являють собою: поріг очікування: 10; розмір слова: 3; максимальна кількість збігів у діапазоні запиту: 0; матриця: В О5ИМб62; штраф за розрив: наявність 11, продовження 1; композиційна корекція: умовна композиційна корекція на основі бальної матриці.
Амінокислотна заміна: Термін "амінокислотна заміна" відноситься до заміни заданого амінокислотного залишку в амінокислотній послідовності іншим амінокислотним залишком, що має іншу хімічну структуру, переважно іншим протеогенним амінокислотним залишком. Таким чином, на відміну від інсерції або делеції амінокислоти, амінокислотна заміна не змінює загальної кількості амінокислот зазначеної амінокислотної послідовності. У контексті даного винаходу вкрай переважна заміна амінокислотного залишку зазначеної амінокислотної послідовності, що мутується, залишком лізину або залишком цистеїну.
Епітоп: Термін "епітоп" відноситься до безперервних або переривчастих фрагментів антигена, переважно поліпептиду, причому зазначені фрагменти можуть бути специфічно зв'язані антитілом або Т-клітинним рецептором у контексті молекули МНС. По відношенню до антитіл специфічне зв'язування виключає неспецифічне зв'язування, але не обов'язково виключає перехресну реакційну здатність. Епітоп зазвичай містить 5-20 амінокислот у просторовій конформації, унікальній для антигенного сайту.
Епітоп Т-хелпера (Тр-клітини): Термін "епітоп Т-хелпера (ТНи-клітини)" у даному документі відноситься до епітопу, який може розпізнавати хелперна Тр-клітина. В ще одному
Зо переважному варіанті реалізації зазначений епітоп Т-хелпера являє собою універсальний епітоп Т-хелпера.
Універсальний епітоп ТН-клітини: Термін "універсальний епітоп ТН-клітини" у даному документі відноситься до епітопу Ти-клітини, який може зв'язуватися з щонайменше однією, переважно -більше ніж з однією молекулою МН ІІ класу. Найпростіший спосіб визначити, чи є пептидна послідовність універсальним епітопом Тр-клітини, - виміряти здатність цього пептиду зв'язуватися з окремими молекулами МНС ІІ класу. Це вимірювання можна виконати за здатністю пептиду конкурувати за зв'язування з відомим пептидом епітопу Тр-клітини з молекулою МНС І класу. Типовий вибір молекул НГА-ОМК описаний, наприклад, в статті
АІехапаег -, еї аї!., Іттипйу (1994) 1:751-761. Спорідненість епітопів Тр-клітин до молекул МН ІЇ класу повинна становити щонайменше 105 М. Альтернативний, більше трудомісткий, але і більше обгрунтований спосіб визначення "універсальності" епітопу Тп-клітини - демонстрація того, що у більшої частки людей (»30 95) генерується вимірювана Т-клітинна відповідь при імунізації та повторній імунізації через місяць білком, що містить епітоп ТА-клітини, в складі з
ІРА. Типова колекція молекул МНС І класу, присутніх в різних індивідів, наведена в статті
Рапіпа-Вогаідпоп о Р, еї а). Ей У ІттипоЇї (1989) 19:2237-2242. Як наслідок, термін "універсальний епітоп ТИ-клітини" у даному документі переважно відноситься до епітопу Тр- клітини, що генерує вимірювану Т-клітинну відповідь при імунізації та повторній імунізації (через один місяць, білком, що містить епітоп Тр-клітини, в складі з ІЕ А) у більше ніж 30 95 індивідів у вибраній групі, як описано в статті Рапіпа-Вогаїдпоп Р, еї аї., Єиг ) Іттипої (1989) 19:2237-2242.
Крім того, у більше переважному випадку, термін "універсальний епітоп ТН-клітини" у даному документі переважно відноситься до епітопу Гр-клітини, здатному зв'язуватися з щонайменше одним, переважно щонайменше двома, більше переважно-щонайменше трьома алелями ОВ, вибраними з ОВ, ОА2гм2р, ОВАЗ, ОВА4ма4, ОВ4мі4, ОВО, 087, ОВАБ5га, Опуи53, ОН2мга; і переважно вибраними з ОВІ, ОВ2мж2Ь, ОВ4м4, ОВ4мі4, ОВО, ОВ, Опм53, ОВ2мга, зі спорідненістю, що становить щонайменше 500 нМ (як описано в статті АІехапаєг У, еї аї.,
Ітітипійу (1994) 1:751-761 ії джерелах, що цитуються у даному документі); переважний аналіз зв'язування для оцінки зазначеної спорідненості являє собою аналіз, описаний в роботі бейе А, еї а!., У Іттипої! (1989) 142:35-40. Ще більше переважним чином, термін "універсальний епітоп
Тр-клітини" у даному документі відноситься до епітопу Ти-клітини, здатному зв'язуватися з бо щонайменше одним, переважно щонайменше двома, більше переважно - щонайменше трьома алелями ОВ, вибраними з ОВІ1, ОН2гмж2гр, ОН4м4, ОВ4мі4, ОА5, 087, Опу53, ОВ2мга, зі спорідненістю, що становить щонайменше 500 нМ (як описано в статті АІехапаєг У, еї аї.,
Ітітипійу (1994) 1:751-761 ії джерелах, що цитуються у даному документі); переважний аналіз зв'язування для оцінки зазначеної спорідненості являє собою аналіз, описаний в роботі бейе А, еї а!ї., У Іттипої! (1989) 142:35-40.
Універсальні епітопи Ти-клітин відомі фахівцям у даній галузі техніки й описані, наприклад, в роботах АІехапаег .), єї а!., Іттипйу (1994) 1:751-761, Рапіпа-Вогаідпоп Р, єї аї., Єиг У Іттипої (1989) 19:2237-2242, Саімо-СайПе УМ, еї аї., У Іттипої (1997) 159:1362-1373, і МаІтогі О, єї аї.,/
Іттипої (1992) 149:717-721.
Ад'ювант: Термін "ад'ювант" у даному документі відноситься до не специфічних стимуляторів імунної відповіді або речовин, що забезпечують утворення депо в організмі хазяїна, які в комбінації з вакциною та фармацевтичною композицією, відповідно, згідно з даним винаходом, можуть забезпечити індукцію посиленої імунної відповіді Переважними ад'ювантами є повний та неповний ад'ювант Фрейнда, алюмінійвмісний ад'ювант, переважно, гідроксид алюмінію, і модифікований мурамілдипептид. Додаткові переважні ад'юванти являють собою мінеральні гелі, наприклад, гідроксид алюмінію, поверхнево-активні речовини, наприклад, лізолецитин, плюронілові поліоли, поліаніони, пептиди, масляні емульсії, гемоціанін лімфи равлика, динітрофенол, й ад'юванти для медичного застосування, наприклад, БЦЖ (бацила Кальмета-Герена) і Согуперасієтішт раг/ит. Такі ад'юванти добре відомі у даній галузі техніки. Додаткові ад'юванти, які можна вводити з композиціями згідно з даним винаходом, включають монофосфорилліпідний імуномодулятор, Аа|їиМах 100а, 05-21, 05-18, СВІ 1005, солі алюмінію (галуни), МЕ-59, ОМ- 174, ОМ- 197, ОМ-294 і технологію віросомальних ад'ювантів, але не обмежуються ними. Ад'юванти також можуть містити суміші цих речовин. Вірусоподібні частинки у загальному випадку описуються як ад'ювант. Однак термін "ад'ювант" у контексті даної заявки відноситься до ад'юванту, що не є вірусоподібною частинкою згідно з даним винаходом. Замість цього термін "ад'ювант" має відношення до додаткового окремого компонента композицій згідно з даним винаходом, вакцин або фармацевтичних композицій.
Ефективна кількістьх У даному документі термін "ефективна кількість" відноситься до кількості, необхідної або достатньої для одержання бажаного біологічного ефекту. Ефективна
Зо кількість композиції, або, в альтернативному випадку, фармацевтичної композиції, повинна являти собою кількість, що дозволяє досягти вибраного результату, і таку кількість може визначити фахівець у даній галузі техніки за допомогою якого-небудь способу або процедури.
Переважно термін "ефективна кількість" у даному документі відноситься до кількості, необхідної або достатньої для ефективного зниження рівня сіЇ-31 до рівня, що викликає ослаблення сверблячки в собак і поліпшення АДС. Переважно термін "ефективна кількість" у даному документі відноситься до кількості, необхідної або достатньої для ефективної нейтралізації активності сіЇ -31 в областях запалення. Ефективна кількість залежить від конкретної композиції, що вводиться, і розміру суб'єкта. Фахівець може емпірично визначити ефективну кількість конкретної композиції згідно з даним винаходом, не потребуючи зайвих експериментів.
Лікування: У даному документі терміни "лікування", "лікувати", "що одержав лікування" або "що зазнає лікування" відносяться до профілактики і/або терапії. В одному варіанті реалізації терміни "лікування", "лікувати", "до одержав лікування" або "що зазнає лікування" відносяться до терапевтичного лікування. В ще одному варіанті реалізації терміни "лікування", "лікувати", "що одержав лікування" або "що зазнає лікування" відносяться до профілактичного лікування.
Сайт приєднання, перший: У даному документі фраза "перший сайт приєднання" відноситься до елемента, що зустрічається у вірусоподібній частинці у природніх умовах або штучно доданого до вірусоподібної частинки, з яким можна зв'язати другий сайт приєднання.
Перший сайт приєднання переважно являє собою білок, поліпептид, амінокислоту, пептид, вуглевод, полінуклеотид, природний або синтетичний полімер, вторинний метаболіт або сполуку (біотин, флуоресцеїн, ретинол, дигоксигенін, іони металів, поліметиленсульфонілфторид) або хімічно реакційноздатну групу, наприклад, аміногрупу, карбоксильну групу, сульфгідрильну групу, гідроксильну групу, гуанідильну групу, гістидинільну групу або їх комбінацію. Переважний варіант реалізації хімічно реакційноздатної групи, що є першим сайтом приєднання, являє собою аміногрупу амінокислотного залишку, переважно залишку лізину. Перший сайт приєднання зазвичай розташований на поверхні, переважно на зовнішній поверхні МІ Р. Множинні перші сайти приєднання присутні на поверхні, переважно на зовнішній поверхні МІР, зазвичай у повторюваній конфігурації. У переважному варіанті реалізації перший сайт приєднання асоціюється з МІР за рахунок щонайменше одного ковалентного зв'язку, переважно за рахунок щонайменше одного пептидного зв'язку. У бо додатковому переважному варіанті реалізації перший сайт приєднання зустрічається у МІР у природніх умовах. В якості альтернативи, у переважному варіанті реалізації перший сайт приєднання штучно доданий до МІР. У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений перший сайт приєднання являє собою аміногрупу залишку лізину амінокислотної послідовності зазначеного поліпептиду МІ Р.
Сайт приєднання, другий: У даному документі фраза "другий сайт приєднання" відноситься до елемента, що зустрічається у природніх умовах або штучно доданого до антигена сії -31, з яким можна зв'язати перший сайт приєднання. Другий сайт приєднання антигена сії! -31 переважно являє собою білок, поліпептид, пептид, амінокислоту, вуглевод, полінуклеотид, природний або синтетичний полімер, вторинний метаболіт або сполуку (біотин, флуоресцеїн, ретинол, дигоксигенін, іони металів, поліметиленсульфонілфторид) або хімічно реакційноздатну групу, наприклад, аміногрупу, карбоксильну групу, сульфгідрильну групу, гідроксильну групу, гуанідильну групу, гістидинільну групу або їх комбінацію. Переважний варіант реалізації хімічно реакційноздатної групи, що є другим сайтом приєднання, являє собою сульфгідрильну групу, переважно сульфгідрильну групу амінокислоти цистеїну, найбільше переважно "- сульфгідрильну групу залишку цистеїну. Таким чином, термін "антиген із щонайменше одним другим сайтом приєднання" або "антиген сіЇ-31 із щонайменше одним другим сайтом приєднання" відноситься до конструкта, що містить антиген сіЇ/-31 і щонайменше один другий сайт приєднання. У той самий час, зокрема, для другого сайту приєднання, що не зустрічається в антигені сіЇ/-31 у природніх умовах, такий конструкт у типовому переважному випадку додатково містить "лінкер': В ще одному переважному варіанті реалізації другий сайт приєднання асоціюється з антигеном сі!/-31 за рахунок щонайменше одного ковалентного зв'язку, переважно за рахунок щонайменше одного пептидного зв'язку. У додатковому варіанті реалізації другий сайт приєднання зустрічається в антигені сіЇ/-31 у природніх умовах. В ще одному додатковому вкрай переважному варіанті реалізації другий сайт приєднання штучно доданий до антигена сіЇ-31 за допомогою лінкера, причому зазначений лінкер містить або, в альтернативному випадку, складається з цистеїну. Переважно цей лінкер приєднаний до антигена сіЇ-31 за допомогою пептидного зв'язку або доданий шляхом утворення хімічного зв'язку.
Зв'язаний: Терміни "зв'язаний" або "зв'язування" у даному документі відносяться до всіляких способів, переважно хімічної взаємодії, за допомогою яких щонайменше один перший сайт приєднання та щонайменше один другий сайт приєднання з'єднуються один з одним. Хімічна взаємодія включає ковалентні та не ковалентні взаємодії. Типові приклади не ковалентної взаємодії являють собою іонні взаємодії, гідрофобні взаємодії або водневі зв'язки, у той час як ковалентні взаємодії засновані, наприклад, на ковалентних зв'язках, наприклад, складноефірних, ефірних, фосфоефірних зв'язках, зв'язках вуглець-фосфор, зв'язках вуглець- сірка, наприклад, тіоефірних або імідних зв'язках. У деяких переважних варіантах реалізації перший сайт приєднання та другий сайт приєднання зв'язані за допомогою щонайменше одного ковалентного зв'язку, переважно щонайменше одного не пептидного зв'язку, і ще більше переважно - за допомогою винятково не пептидного(их) зв'язка(ів). У той самий час термін "зв'язаний" у даному документі не повинен відноситися тільки до безпосереднього зв'язку щонайменше одного першого сайту приєднання та щонайменше одного другого сайту приєднання, але і, в альтернативному переважному випадку, до непрямого зв'язку щонайменше одного першого сайту приєднання та щонайменше одного другого сайту приєднання за допомогою проміжних(ої) молекул(іи), й у типовому переважному випадку з використанням щонайменше одного, переважно одного гетеробіфункціонального перехресного лінкера. В інших переважних варіантах реалізації перший сайт приєднання та другий сайт приєднання зв'язані за допомогою щонайменше одного ковалентного зв'язку, переважно щонайменше одного пептидного зв'язку, і ще більше за допомогою винятково пептидного(их) зв'язку(ів).
Лінкер: "Лінкер" у даному документі з'єднує другий сайт приєднання з антигеном сіЇ-31 або вже містить, по суті складається з або складається з другого сайту приєднання. Переважно "лінкер" у даному документі вже містить другий сайт приєднання, у типовому переважному випадку, але не обов'язково - у вигляді одного амінокислотного залишку, переважно у вигляді залишку цистеїну. Переважні лінкери є амінокислотними лінкерами, тобто лінкерами, що містять щонайменше один амінокислотний залишок. Термін "амінокислотний лінкер" не має на увазі, що такий лінкер складається винятково з амінокислотних залишків. У той самий час лінкер, що складається винятково з амінокислотних залишків, є переважним варіантом реалізації даного винаходу. Амінокислотні залишки лінкера переважно складаються з природніх амінокислот або не природніх амінокислот, відомих у даній галузі техніки, всіх І- або всіх О-амінокислот або їх сумішей. Додаткові переважні варіанти реалізації лінкера відповідно до даного винаходу бо являють собою молекули, що містять сульфгідрильну групу або залишок цистеїну, і такі молекули, отже, входять в область даного винаходу. Асоціація лінкера з антигеном сії! -31 переважно здійснюється за допомогою щонайменше одного ковалентного зв'язку, більше переважно - за допомогою щонайменше одного пептидного зв'язку.
Впорядкована та повторювана антигенна матриця: У даному документі термін "впорядкована та повторювана антигенна матриця" відноситься до повторюваного малюнка з молекул антигена сіЇ-31, у типовому переважному випадку, що характеризується високим ступенем однорідності просторового розташування таких молекул антигена стосовно корової частинки і МІ Р, відповідно. В одному варіанті реалізації даного винаходу цей повторюваний малюнок може являти собою геометричний малюнок. Крім того, переважні впорядковані та повторювані антигенні матриці характеризуються суворо повторюваними паракристалічними послідовностями молекул антигена сіЇ-31, переважно з проміжком від 1 до З0 нанометрів, переважно від 2 до 15 нанометрів, більше переважно - від 2 до 10 нанометрів, ще більше переважно - від 2 до 8 нанометрів, і ще більше переважно - від 1,6 до 7 нанометрів.
Імуностимулююча речовина: У даному документі термін "імуностимулююча речовина" відноситься до речовини, здатної індукувати і/або підсилювати імунну відповідь.
Імуностимулюючі речовини у даному документі включають речовини, що активують ТоїІ-подібні рецептори, і речовини, що індукують секрецію цитокінів, але не обмежуються ними. Речовини, що активують ТоїІ-подібні рецептори, включають імуностимулюючі нуклеїнові кислоти, пептидоглікани, ліпополісахариди, ліпотейхоєві кислоти, імідазохінолінові сполуки, флагеліни, ліпопротеїни й імуностимулюючі органічні сполуки, наприклад, таксол.
Їмуностимулююча нуклеїнова кислота (ІЗ5-НК) У даному документі термін "їмуностимулююча нуклеїнова кислота" відноситься до нуклеїнової кислоти, здатної індукувати іМабо підсилювати імунну відповідь. Імуностимулюючі нуклеїнові кислоти включають рибонуклеїнові кислоти і, зокрема, дезоксирибонуклеїнові кислоти, причому як рибонуклеїнові, так і дезоксирибонуклеїнові кислоти можуть бути дволанцюговими або одноланцюговими.
Переважні ІЗ5-НК являють собою дезоксирибонуклеїнові кислоти, причому в додатковому переважному випадку зазначені дезоксирибонуклеїнові кислоти Є одноланцюговими.
Переважно імуностимулюючі нуклеїнові кислоти містять щонайменше один Сра-мотив, що містить не метильований С. Вкрай переважні імуностимулюючі нуклеїнові кислоти містять
Зо щонайменше один Сра-мотив, причому зазначений щонайменше один Сра-мотив містить або, переважно, складається з щонайменше одного, переважно одного динуклеотиду СО, причому С є не метильованим. Переважно, але не обов'язково зазначений динуклеотид СС є частиною паліндромної послідовності. Термін "імуностимулююча нуклеїнова кислота" також відноситься до нуклеїнових кислот, що містять модифіковані основи, переважно 4-бромцитозин. Особливо переважними у контексті даного винаходу є ІЗ5-НК, здатні стимулювати продукцію ІФН-альфа в дендритних клітинах. Імуностимулюючі нуклеїнові кислоти, що підходять для цілей даного винаходу, описані, наприклад, у заявці УУО 2007/068747 А1.
Олігонуклеотид: У даному документі термін "олігонуклеотид" відноситься до нуклеотидної послідовності, що містить 2 або більше нуклеотидів, переважно від приблизно 6 до приблизно 200 нуклеотидів, більше переважно - від 20 до приблизно 200 нуклеотидів, і найбільше переважно - від 20 до 40 нуклеотидів. У вкрай переважному випадку олігонуклеотиди містять приблизно 30 нуклеотидів, більше переважно олігонуклеотиди містять рівно 30 нуклеотидів, і найбільше переважно олігонуклеотиди складаються з рівно 30 нуклеотидів. Олігонуклеотиди являють собою полірибонуклеотиди або полідезоксирибонуклеотиди, переважно вибрані з (а) не модифікованої РНК або ДНК їі (Б) модифікованої РНК або ДНК. Ця модифікація може включати аналоги каркасу або нуклеотидів. Олігонуклеотиди переважно вибирають з групи, що складається з (а) одно- або дволанцюгової ДНК, (Б) ДНК, що є сумішшю, одно- і дволанцюгових областей, (с) одно- або дволанцюгової РНК, (4) РНК, що є сумішшю, одно- і дволанцюгових областей, та (є) гібридних молекул, що містять ДНК і РНК, що є одноанцюговими або, більше
БО переважно, дволанцюговими або, являють собою суміш одно- та дволанцюгових областей.
Переважні модифікації/аналоги нуклеотидів вибирають з групи, що складається з (а) пептидної нуклеїнової кислоти, (Б) інозину, (с) тритильованих основ, (4) фосфортіоатів, (є) алкілфосфортіоатів, (Її) 5-нітроіндолдезоксирибофуранозилу, (4) 5-метилдезоксицитозину та (ПМ) 5,6-дигідро-5,6-дигідродезокситимідину. Фосфортіоатні нуклеотиди захищені від розкладання в клітині або організмі та тому є переважними модифікаціями нуклеотидів. Не модифіковані олігонуклеотиди, що складаються винятково з нуклеотидів, з'єднаних фосфодіефірними зв'язками, зазвичай більше активні, ніж модифіковані нуклеотиди, і тому в загальному випадку є переважними в контексті даного винаходу. Найбільше переважні олігонуклеотиди, що складаються винятково з дезоксинуклеотидів, з'єднаних фосфодіефірними зв'язками, причому бо більше переважні зазначені олігонуклеотиди є одноанцюговими. Ще більше переважні олігонуклеотиди, здатні стимулювати продукцію ІФН-альфа в клітинах, переважно в дендритних клітинах. Вкрай переважні олігонуклеотиди, здатні стимулювати продукцію ІФН-альфа в клітинах, вибирають з Сра типу А та Сра типу С. Ще більше переважними є молекули РНК без кепа.
Мотив Сра: У даному документі термін "мотив Сра" відноситься до нуклеотидної структури, що включає не метильований центральний Сра, тобто не метильований динуклеотид Сра, у якому С є не метильованим, оточений щонайменше однією основою, переважно щонайменше одним або двома нуклеотидами, що фланкують (з 3'- і 5-сторони) центральний Сра. У типовому переважному випадку мотив Сраї у даному документі містить або, в альтернативному випадку, складається з не метильованого динуклеотиду Сраї і двох нуклеотидів на його 5'- і 3'-кінцях.
Безвідносно до теоретичних уявлень, основи, що фланкують Ср, обумовлюють значну частину активності олігонуклеотиду Сра.
Олігонуклеотид, що містить не метильований Ср: У даному документі термін "олігонуклеотид, що містить не метильований Сра" або "Сра" відноситься до олігонуклеотиду, переважно до олігодезоксинуклеотиду, що містить щонайменше один мотив Сра. Таким чином,
Сра містить щонайменше один динуклеотид з не метильованого цитозину та гуаніну. Переважні бра стимулюють/активують, наприклад, виявляють мітогенну дію на клітини, що походять з кісткового мозку хребетних, або індукують або збільшують експресію цитокінів цими клітинами.
Наприклад, Сраї можна застосовувати для активації В-клітин, МК-клітин й антигенпрезентуючих клітин, наприклад, дендритних клітин, моноцитів і макрофагів. Переважно Ср мають відношення до олігодезоксинуклеотиду, переважно до одноланцюгового олігодезоксинуклеотиду, що містить не метильований цитозин, після якого з 3'-сторони розташований гуанозин, причому зазначений не метильований цитозин і зазначений гуанозин з'єднані фосфатним зв'язком, причому, у переважному випадку, зазначений фосфатний зв'язок являє собою фосфодіефірний зв'язок або фосфотіоатний зв'язок, і, більше переважно, зазначений фосфатний зв'язок являє собою фосфодіефірний зв'язок. бро можуть містити аналоги нуклеотидів, наприклад, аналоги, що містять фосфортіоефірні зв'язки, і можуть бути дволанцюговими або одноланцюговими. У загальному випадку дволанцюгові молекули більше стабільні іп мімо, у той час як одноланцюгові молекули мають підвищену імунну активність.
Зо Переважно у даному документі Ср являє собою олігонуклеотид довжиною щонайменше десять нуклеотидів, що містить щонайменше один мотив Сра, причому довжина більше переважного зазначеного Сраї становить від 10 до 60, більше переважно - від 15 до 50, більше переважно - від 20 до 40, ще більше переважно - приблизно 30, і найбільше переважно - рівно нуклеотидів. Срії може складатися з метильованих і/або не метильованих нуклеотидів, причому зазначений щонайменше один мотив Сраї містить щонайменше один динуклеотид Са, у якому С є не метильованим. Срії може також містити метильовані та не метильовані ділянки послідовності, причому зазначений щонайменше один мотив Ср містить щонайменше один динуклеотид СОї, у якому С є не метильованим. У вкрай переважному випадку Ср має відношення до одноланцюгового олігодезоксинуклеотиду, що містить не метильований цитозин, після якого з 3'-сторони розташований гуанозин, причому зазначений не метильований цитозин і зазначений гуанозин зв'язані фосфодіефірним зв'язком. Ср можуть містити аналоги нуклеотидів, наприклад, аналоги, що містять фосфортіоефірні зв'язки, і можуть бути дволанцюговими або одноланцюговими. У загальному випадку фосфодіефірні Ср являють собою Ср типу А, як зазначено нижче, у той час як фосфортіоефірні стабілізовані Сра являють собою Ср типу В. Переважні СрО-олігонуклеотиди у контексті даного винаходу являють собою Сраї типу А. бра типу А: У даному документі термін "Ср типу А" або "Ср типу 0" відноситься до олігодезоксинуклеотиду (ОДН), що містить щонайменше один мотив Ср. бро типу А переважно стимулюють активацію Т-клітин і дозрівання дендритних клітин і можуть стимулювати продукцію ІФН-альфа. В Сраї типу А нуклеотиди щонайменше одного мотиву Сраї зв'язані щонайменше одним фосфодіефірним зв'язком. Срії типу А містять щонайменше один мотив Ср з фосфодіефірним зв'язком, який може бути фланкований за 5'-кінцем і/або, переважно, за 3-кінцем нуклеотидами, зв'язаними фосфортіоатним зв'язком. Переважно мотив
Сра і, переважно, динуклеотид СС й області, які безпосередньо фланкують його, що містять щонайменше один, переважно два нуклеотиди, складаються з фосфодіефірних нуклеотидів.
Переважні Ср типу А складаються винятково з нуклеотидів, з'єднаних фосфодіефірними зв'язками (РО). У типовому переважному випадку мотив "полі-(4" містить або, в альтернативному випадку, складається з щонайменше одного, переважно щонайменше трьох, щонайменше 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 або 15 Сі (молекул гуанозину), найбільше переважно щонайменше 10 с. Переважно Сра типу А згідно з даним винаходом містить або, в альтернативному випадку, складається з паліндромної послідовності.
Упакований: Термін "упакований" у даному документі відноситься до стану поліаніонної макромолекули або імуностимулюючих речовин стосовно корової частинки і МІ Р, відповідно.
Термін "упакований" у даному документі включає зв'язування, яке може бути ковалентним, наприклад, шляхом хімічного приєднання, або не ковалентним, наприклад, іонні взаємодії, гідрофобні взаємодії, водневі зв'язки і т.д. Даний термін також включає оточення або часткове оточення поліаніонної макромолекули. Так, поліаніонна макромолекула або імуностимулюючі речовини можуть бути оточені МІР при відсутності фактичного зв'язування, зокрема, ковалентного зв'язування. У переважних варіантах реалізації щонайменше одна поліаніонна макромолекула або імуностимулюючі речовини упаковані у МІ Р, найбільше переважно - не ковалентним чином. У випадку, якщо зазначені імуностимулюючі речовини являють собою нуклеїнову кислоту, переважно ДНК, термін "упакований" має на увазі, що зазначена нуклеїнова кислота недоступна для нуклеазного гідролізу, переважно недоступна для ДНКазного гідролізу (наприклад, з використанням ДНКази | або бензонази), причому зазначену доступність аналізують відповідно до опису у прикладах 11-17 заявки УУО 2003/024481 А2.
Таким чином, у першому аспекті даного винаходу запропонована композиція для застосування в способі профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у представників сімейства псових, переважно домашньої собаки, причому ефективну кількість зазначеної композиції вводять зазначеній тварині сімейства псових, переважно зазначеній домашній собаці, і зазначена композиція містить (а) корову частинку з щонайменше одним першим сайтом приєднання; і (Б) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген
СІ/-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сії -31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕО
ІО МО: 22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95, переважно щонайменше 9295, більше переважно - щонайменше 9595, і ще більше переважно - щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІЮО МО: 22; причому компоненти (а) і (р) зв'язані за допомогою зазначених щонайменше одного першого та щонайменше одного другого сайту приєднання за рахунок щонайменше одного непептидного
Зо ковалентного зв'язку.
У переважному варіанті реалізації зазначена корова частинка являє собою вірусоподібну частинку (МІ Р), переважно рекомбінантну МІ Р. У додатковому переважному варіанті реалізації зазначена МІ Р являє собою модифіковану МІ Р вірусу мозаїки огірка (СМУ), причому зазначена модифікована МІ Р СММ містить, складається з або по суті складається з щонайменше одного модифікованого поліпептиду СМУ, причому зазначений модифікований поліпептид СММ містить або, переважно, складається з (а) поліпептиду СММ й (Б) епітопу Т-хелпера; причому зазначений поліпептид СММ містить або, переважно, складається з (ї) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою амінокислотну послідовність білка оболонки СМУ, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначений білок оболонки СММ демонструють ідентичність послідовності щонайменше 90 95, переважно щонайменше 9595, більше переважно щонайменше 9895, і ще більше переважно - щонайменше 99595. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СММУ містить або, переважно, складається з (а) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУМ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або, переважно, складається з 5ЕО ІО МО: 1, або (р) амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності щонайменше 90 96 по відношенню до 5ЕО ІЮО МО: 1; ії зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту формули винаходу, містить ЗЕО ІО МО: 23; або зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту формули винаходу, містить область амінокислотної послідовності, причому зазначена область амінокислотної послідовності має ідентичність послідовності щонайменше 90 95 по відношенню до 5ЕО ІЮ МО: 23. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначена МІ Р являє собою модифіковану МІР вірусу мозаїки огірка (СМУ), причому зазначений модифікований поліпептид СММУ містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО 10
МО: 6 або 5ЕО І МО: 7.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сіЇ/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а) БЕО ІО МО: 18; (Б) 5ЕО ІЮО МО: 21; (с) 5ЕО І МО: 22; (4) 5ЕО ІЮ МО: 25-30. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сії - 60 31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а)
ЗЕО ІЮ МО: 18; (Б) 5ЕО ІЮО МО: 21; (с) БЕО ІО МО: 22; (4) 5ЕО ІЮ МО: 25; або (є) БЕО І МО: 26.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції зазначеного антигена сіЇ-31 із М-сукцинімідил-8- ацетилтіоацетатом (ЗАТА). У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції залишку лізину із зазначеним антигеном
СІ -31.
В ще одному аспекті даного винаходу запропонована композиція для застосування в способі профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у домашньої собаки, причому ефективну кількість зазначеної композиції вводять зазначеній домашній собаці, і зазначена композиція містить (а) корову частинку з щонайменше одним першим сайтом приєднання, причому зазначена корова частинка переважно являє собою вірусоподібну частинку (МІР), більше переважно - рекомбінантну МІ Р; і (Б) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну- 31 (антиген сіЇ-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сіЇ/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕО ІЮО МО: 22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95, переважно щонайменше 92 95, більше переважно - щонайменше 9595, і ще більше переважно - щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до
ЗЕО ІО МО: 22; причому компоненти (а) і (Б) зв'язані за допомогою зазначених щонайменше одного першого та щонайменше одного другого сайту приєднання за рахунок щонайменше одного не пептидного ковалентного зв'язку.
У переважному варіанті реалізації зазначена вірусоподібна частинка (МІ Р) походить від вірусу рослини. В ще одному переважному варіанті реалізації зазначена МІ Р є рекомбінантною
МІ Р, і, переважно, зазначена рекомбінантна МІ Р походить від вірусу рослини. В ще одному переважному варіанті реалізації зазначена МІ Р являє собою МІ Р вірусу мозаїки огірка (СМУ).
У переважному варіанті реалізації зазначена МІР являє собою модифіковану МІР, що містить, по суті, складається з або, в альтернативному випадкові, складається з щонайменше одного модифікованого поліпептиду МІ Р, причому зазначений модифікований поліпептид МІ Р
Зо містить або, переважно, складається з (а) поліпептиду МІ Р й (Б) епітопу Т-хелпера, причому зазначений поліпептид МІР містить або, переважно, складається з (ї) амінокислотної послідовності білка оболонки вірусу, переважно амінокислотної послідовності білка оболонки вірусу рослини; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою амінокислотну послідовність зазначеного білка оболонки вірусу, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначений білок оболонки вірусу демонструють ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 90 95, переважно щонайменше 95 95, більше переважно щонайменше 98 95 і ще більше переважно - щонайменше 99 95.
У переважному варіанті реалізації зазначена МІ Р являє собою модифіковану МІ Р вірусу мозаїки огірка (СМУ), причому зазначена модифікована МІ Р СММУ містить, складається з або по суті складається з щонайменше одного модифікованого поліпептиду СМУ, причому зазначений модифікований поліпептид СММУ містить або, переважно, складається з (а) поліпептиду СММ й (Б) епітопу Т-хелпера; причому зазначений поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з (ї) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою амінокислотну послідовність білка оболонки СМУ, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначений білок оболонки СММУ демонструють ідентичність послідовності щонайменше 90 95, переважно щонайменше 95 95, більше переважно щонайменше 98 95, і ще більше переважно - щонайменше 99 95.
У переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ. В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СММ містить, переважно, складається з мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою амінокислотну послідовність білка оболонки СМУ, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначений білок оболонки СММ демонструють ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 90 956, переважно щонайменше 95 95, більше переважно щонайменше 98 95, і ще більше переважно - щонайменше 99 95. У типовому переважному випадку зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, відрізняються щонайменше на один і не більше ніж на 11, 10,9,8, 7,6,5,4, З або 2 амінокислотних залишки, причому переважно дані відмінності вибрані з (ї) інсерції, (ії) делеції, (ії) амінокислотної заміни і (ім) комбінації (і) - (Іїї).
В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з (ії) (а) амінокислотної послідовності білка оболонки СМ У, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або, переважно, складається з 5ЕО ІО МО: 1, або (Б) амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 7595, переважно щонайменше 8095, більше переважно щонайменше 85 95, більше переважно - щонайменше 90 95, ще більше переважно - щонайменше 95 95, ще більше переважно - щонайменше 98 95, і ще більше переважно - щонайменше 99 95 по відношенню до
ЗЕБО 10 МО: 1; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою зазначену амінокислотну послідовність, визначену в (ї) даного пункту формули винаходу, причому зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, демонструють ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 95595, переважно щонайменше 98 95, і більше переважно - щонайменше 99 95.
В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з (а) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або, переважно, складається з 5ЕО ІО МО: 1, або (Б) амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 7595, переважно щонайменше 8095, більше переважно щонайменше 85 95, більше переважно - щонайменше 90 95, ще більше переважно - щонайменше 95 95, ще більше переважно - щонайменше 98 95, і ще більше переважно - щонайменше 99 95 по відношенню
АоБЕОІОЮМО: 1.
В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СММ містить або, переважно, складається з (ії) (а) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або, переважно, складається з 5ЕО ІЮО МО: 23, або (Б) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ, що містить область амінокислотної послідовності, причому зазначена область амінокислотної послідовності має ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 7595, переважно щонайменше 8095, більше
Зо переважно щонайменше 85 95, більше переважно - щонайменше 90 95, ще більше переважно - щонайменше 9595, ще більше переважно - щонайменше 9895, і ще більше переважно - щонайменше 9995 по відношенню до 5ЕО ІО МО: 23; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою зазначену амінокислотну послідовність, визначену в (ї) даного пункту формули винаходу, причому зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, демонструють ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 95 95, переважно щонайменше 98 95, і більше переважно - щонайменше 99 95.
У додатковому переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СМУ містить або, переважно, складається з (а) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить 5ЕСО ІО МО: 23, або (Б) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ, що містить область амінокислотної послідовності, причому зазначена область амінокислотної послідовності має ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 7595, переважно щонайменше 8095, більше переважно щонайменше 85 95, більше переважно - щонайменше 90 95, ще більше переважно - щонайменше 95 95, ще більше переважно - щонайменше 98 95, і ще більше переважно -щонайменше 99 95 по відношенню до
ЗЕО І МО: 23.
В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з (ії) (а) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або, переважно, складається з 5ЕО ІО МО: 1, або (Б) амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 7595, переважно щонайменше 8095, більше переважно щонайменше 85 95, більше переважно - щонайменше 90 95, ще більше переважно - щонайменше 95 95, ще більше переважно - щонайменше 98 95, і ще більше переважно - щонайменше 99 95 по відношенню до
ЗЕО ІО МО: 1; причому зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту формули винаходу, містить 5ЕО ІО МО: 23; або зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту формули винаходу, містить область амінокислотної послідовності, причому зазначена область амінокислотної послідовності має ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 7595, переважно щонайменше 8095, більше переважно щонайменше 85 95, більше переважно - щонайменше 90 95, ще більше переважно - бо щонайменше 9595, ще більше переважно - щонайменше 9895, і ще більше переважно -
щонайменше 9995 по відношенню до 5ЕО ІО МО: 23; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, являє собою зазначену амінокислотну послідовність, визначену в (ї) даного пункту формули винаходу, причому зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначена амінокислотна послідовність, що мутується, демонструють ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 98 9о, переважно - щонайменше 99 9.
В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з (а) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або, переважно, складається з 5ЕО ІО МО: 1, або (р) амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності щонайменше 90 95 по відношенню до 5ЕО ІЮ МО: 1; і зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту формули винаходу, містить 5ЕО ІО МО: 23; або зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту формули винаходу, містить область амінокислотної послідовності, причому зазначена область амінокислотної послідовності має ідентичність послідовності щонайменше 90 95 по відношенню до 5ЕО ІО МО: 23.
В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений епітоп Т-хелпера заміщає М- кінцеву область зазначеного поліпептиду СММУ. В ще одному переважному варіанті реалізації кількість амінокислот у зазначеній заміщеній М-кінцевій області дорівнює або менше кількості амінокислот, з якого складається зазначений епітоп Т-хелпера.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп Т-хелпера заміщає
М-кінцеву область зазначеного поліпептиду СМУ, причому кількість амінокислот у зазначеній заміщеній М-кінцевій області дорівнює або менше кількості амінокислот, з якого складається зазначений епітоп Т-хелпера. У типовому переважному випадку зазначена М-кінцева область, що заміщається, зазначеного поліпептиду СММ складається з 5-15 послідовних амінокислот, переважно з 9-14 послідовних амінокислот, більше переважно - з 11-13 послідовних амінокислот.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначена М-кінцева область зазначеного поліпептиду СММУ відповідає 2-12 амінокислотам 5ЕО ІЮО МО: 1.
В ще одному вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп Т-хелпера являє
Зо собою універсальний епітоп Т-хелпера. В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений епітоп Т-хелпера складається з не більше ніж 20 амінокислот.
У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп ТП-клітини являє собою послідовність РАОНЕ. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп
Тр-клітини містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 5. В ще одному вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп ТН-клітини являє собою послідовність РАЮВЕ, причому зазначений епітоп ТН-клітини містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 5.
В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений епітоп Т-хелпера отриманий з вакцини для медичного застосування. У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп ТП-клітини походить від токсину правця. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп Тр-клітини містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮ МО: 4. В ще одному вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп ТА-клітини походить від токсину правця, причому зазначений епітоп Тр-клітини містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО 10 МО: 4.
У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений епітоп ТН-клітини являє собою послідовність РАЮВЕ, причому зазначений епітоп ТН-клітини містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮО МО: 5; або зазначений епітоп ТП-клітини походить від токсину правця, причому зазначений епітоп Тр-клітини містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 4.
У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з (а) амінокислотної послідовності білюка оболонки СМУ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або, переважно, складається з 5ЕО ІО МО: 1, або (р) амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності щонайменше 95 95 по відношенню до 5ЕО ІЮО МО: 1; причому зазначена амінокислотна послідовність містить 5БЕО 10
МО: 23; і зазначений епітоп Т-хелпера заміщає М-кінцеву область зазначеного поліпептиду
СМУ, причому зазначена заміщена М-кінцева область зазначеного поліпептиду СММУ складається з 11-13 послідовних амінокислот, переважно - 11 послідовних амінокислот, і, більше переважно, зазначена М-кінцева область зазначеного поліпептиду СММ відповідає 2-12 амінокислотам 5ЕО І МО: 1.
В ще одному вкрай переважному варіанті реалізації зазначений модифікований поліпептид
СМУ містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 6. В ще одному вкрай переважному варіанті реалізації зазначений модифікований поліпептид. СМУ містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО 10 МО: 7.
Застосування композиції за будь-яким із пп. 6-8, яке відрізняється тим, що зазначений модифікований поліпептид СМУМ містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮ МО: 6 або 5ЕО ІО МО: 7.
У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений перший сайт приєднання та зазначений другий сайт приєднання зв'язані за допомогою щонайменше одного ковалентного не пептидного зв'язку. В ще одному вкрай переважному варіанті реалізації зазначений перший сайт приєднання містить або, переважно, являє собою аміногрупу, переважно - аміногрупу лізину. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання містить або, переважно, являє собою сульфгідрильну групу, переважно - сульфгідрильну групу цистеїну.
У вкрай переважному варіанті реалізації щонайменше один перший сайт приєднання являє собою аміногрупу, переважно - аміногрупу залишку лізину, і щонайменше один другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, переважно - сульфгідрильну групу залишку цистеїну або сульфгідрильну групу, хімічно приєднану до антигена сі!/-31. У додатковому переважному варіанті реалізації лише один із зазначених других сайтів приєднання зв'язується із зазначеним першим сайтом приєднання за допомогою щонайменше одного не пептидного ковалентного зв'язку, що призводить до єдиного й однорідного типу зв'язування зазначеного антигена сі! -31 із зазначеною модифікованою вірусоподібною частинкою, причому зазначений лише один другий сайт приєднання, що зв'язується із зазначеним першим сайтом приєднання, являє собою сульфгідрильну групу, і зазначений антиген сіЇ-31 ії зазначена модифікована вірусоподібна частинка взаємодіють за допомогою цього зв'язування з утворенням упорядкованої та повторюваної антигенної матриці, тобто впорядкованої та повторюваної матриці антигенів сіЇ -31.
В одному переважному варіанті реалізації даного винаходу антиген сіЇ/-31 пов'язаний з модифікованою МІР за допомогою хімічного перехресного зв'язування, у типовому
Зо переважному випадку -3з використанням гетеробіфункціонального перехресного лінкера. У переважних варіантах реалізації гетеробіфункціональний перехресний лінкер містить функціональну групу, яка може реагувати з переважними першими сайтами приєднання, переважно - з аміногрупою, більше переважно - з аміногрупами залишку(ів) лізину модифікованої МІ Р, ії додаткову функціональну групу, здатну реагувати з переважним другим сайтом приєднання, тобто сульфгідрильною групою, переважно - залишку(ів) цистеїну, що містяться в або штучно додані до антигена сії -31, і, необов'язково, активованої для реакції за допомогою відновлення. У даній галузі техніки відомо декілька гетеробіфункціональних перехресних лінкерів. Вони включають переважні перехресні лінксери 5МРН (Рієгсє), сульфо-
МВ5, сульфо-ЕМСОС5, сульфо-СМВ5, сульфо-5ІАВ, сульфо-ЗМРВ, сульфо-5МОС, сульфо-
КМІО5 5М5В, 5ІА й інші перехресні лінкери, наприклад, доступні в компанії Рієтсєе СНетісаї
Сотрапу, і містять одну функціональну групу, реакційноздатну по відношенню до аміногруп, й одну функціональну групу, реакційноздатну по відношенню до сульфгідрильних груп. Усі вищезгадані перехресні лінкери призводять до утворення амідного зв'язку після реакції з аміногрупою та тіоефірного зв'язування з сульфгідрильними групами. Ще один клас перехресних лінкерів, що підходять для реалізації даного винаходу, характеризується впровадженням дисульфідного зв'язку між антигеном сіЇ-31 і модифікованою МІР при приєднанні. Переважні перехресні лінкери, що належать до цього класу, включають, наприклад,
ЗРОР і сульфо-ЇС-5РОР (Рієгсе). У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений гетеробіфункціональний перехресний лінкер являє собою ЗМРН.
Зв'язування антигена сі -31 З модифікованою МІР З використанням гетеробіфункціонального перехресного лінкера відповідно до переважних способів, описаних вище, забезпечує приєднання антигена сі! -31 до модифікованої МІ Р в специфічній орієнтації.
Інші способи зв'язування антигена сіЇ/-31 з модифікованою МІР включають способи, в яких антиген сії -31 перехресно зв'язується з модифікованою Мі Р з використанням карбодіїіміду ЕОС і МН5. Крім того, антиген сії -31 можна спочатку тіоліювати за допомогою реакції, наприклад, з
ЗАТА, 5АТР або імінтіоланом. Антиген сіІ/-31, при необхідності - після зняття захисту, потім можна приєднати до модифікованої МІР у такий спосіб. Після відділення надлишкового тіоліюючого реагенту антиген сіЇ/-31 взаємодіє з модифікованою МІР, раніше активованою гетеробіфункціональним перехресним лінкером, що містить реакційноздатну групу цистеїну, і, бо отже, що містить щонайменше одну або декілька відкритих функціональних груп,
реакційноздатних по відношенню до залишків цистеїну, з якими може взаємодіяти тіолійований антиген сії -31, як описано вище. В реакційну суміш необов'язково включають невеликі кількості відновлювача. У подальших способах антиген сі!/-31 приєднують до модифікованої МІР з використанням гомобіфункціонального перехресного лінкера, наприклад, глутаральдегіду, ОБО,
ВМІРЕФІЯ, 853, (Рієгсе) або інших відомих гомобіфункціональних перехресних лінкерів з функціональними групами, реакційноздатними по відношенню до аміногруп або карбоксильних груп модифікованої МІ Р.
У додатковому переважному варіанті реалізації зазначена композиція додатково містить щонайменше одну імуностимулюючу речовину. У вкрай переважному варіанті реалізації зазначена імуностимулююча речовина упакована у модифіковану МІР згідно з даним винаходом. В ще одному переважному варіанті реалізації імуностимулююча речовина змішана з модифікованою Мі Р згідно з даним винаходом. Імуностимулюючі речовини, що підходять для даного винаходу, в цілому відомі у даній галузі техніки й описані, крім іншого, у УМО 2003/024481
Аг.
В ще одному варіанті реалізації даного винаходу зазначена імуностимулююча речовина складається з ДНК або РНК не еукаріотичного походження. В ще одному переважному варіанті реалізації зазначена імуностимулююча речовина вибрана з групи, що складається 3: (а) імуностимулюючої нуклеїнової кислоти; (Б) пептидоглікану; (с) ліпополісахариду; (4) ліпотейхоєвої кислоти; (е) імідазохінолінової сполуки; (Її) флагеліну; (4) ліпопротеїну; та (НМ) будь- яких сумішей щонайменше однієї речовини (а) - (4). В ще одному переважному варіанті реалізації зазначена імуностимулююча речовина являє собою імуностимулюючу нуклеїнову кислоту, причому зазначена нуклеїнова кислота вибрана з групи, що складається з: (а) рибонуклеїнових кислот; (Б) дезоксирибонуклеїнових кислот; (с) химерних нуклеїнових кислот; і (94) будь-якої суміші (а), (Б) і/або (с). У додатковому переважному варіанті реалізації зазначена імуностимулююча нуклеїнова кислота являє собою рибонуклеїнову кислоту, причому зазначена рибонуклеїнова кислота являє собою РНК бактеріального походження. У додатковому переважному варіанті реалізації зазначена імуностимулююча нуклеїнова кислота являє собою полі-ЧІХ) або його похідну. У додатковому переважному варіанті реалізації зазначена імуностимулююча нуклеїнова кислота являє собою дезоксирибонуклеїнову кислоту, причому
Зо зазначена дезоксирибонуклеїнова кислота являє собою оолігонуклеотид, що містить не метильований Сра.
У вкрай переважному варіанті реалізації зазначена імуностимулююча речовина являє собою олігонуклеотид, що містить не метильований Ср. У додатковому переважному варіанті реалізації зазначений олігонуклеотид, що містить не метильований Сраї, являє собою Сра типу
А. У додатковому переважному варіанті реалізації зазначений Сра типу А містить послідовність
САССАТСИТО (5ЕО ІЮ МО: 24). У додатковому переважному варіанті реалізації зазначена паліндромна послідовність фланкована за 5'-кінцем і З'-кінцем одиницями гуанозину. У додатковому переважному варіанті реалізації зазначена паліндромна послідовність фланкована за 5'і-кінцем щонайменше З і не більше ніж 15 одиницями гуанозину та за 3'-кінцнем щонайменше
З і не більше ніж 15 одиницями гуанозину.
В ще одному переважному варіанті реалізації зазначена імуностимулююча речовина являє собою олігонуклеотид, що містить не метильований Ср, причому переважно зазначений олігонуклеотид, що містить не метильований Сра, містить паліндромну послідовність, і, більше переважно, мотив Сраї зазначеного олігонуклеотиду, що містить не метильований Сра, входить до складу паліндромної послідовності, і, більше переважно, зазначена паліндромна послідовність являє собою СДССАТСИТО (5ЕО ІО МО: 24).
У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сії! -31 зв'язаний за допомогою сульфгідрильної групи із зазначеною коровою частинкою, переважно із зазначеною МІР, більше переважно - із зазначеною модифікованою МІР СМУ, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група міститься в зазначеному другому сайті приєднання та зазначена сульфгідрильна група не зустрічається в зазначеному антигені сі -31 у природніх умовах, і, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції зазначеного антигена сіІ/-31 із ТМ-сукцинімідил-8-ацетилтіоацетатом (5АТА), М-сукцинімідил-8- ацетилтіопропіонатом (5АТР) або імінтіоланом, більше переважно -зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції антигена сі/-31 із М-сукцинімідил-Б-ацетилтіоацетатом (ЗАТА). У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції залишку лізину із зазначеним антигеном
СІ -31.
В інших переважних варіантах реалізації даного винаходу антиген сі!/-31 приєднаний за допомогою залишку цистеїну, доданого до М-кінця або С-кінця, або природного залишку цистеїну в складі антигена сіІ-31, до залишків лізину модифікованої вірусоподібної частинки. У переважному варіанті реалізації композиція згідно з даним винаходом додатково містить лінкер, причому зазначений лінкер з'єднує зазначений антиген сіІ-31 з другим сайтом приєднання та, переважно, зазначений лінкер містить або, в альтернативному випадку, складається із зазначеного другого сайту приєднання.
У переважному варіанті реалізації зазначений антиген сі/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІЮО МО: 22. В ще одному переважному варіанті реалізації зазначений антиген сі!-31 містить, або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 9295 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІЮ МО: 22. У додатковому переважному варіанті реалізації зазначений антиген сіЇ/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 95595 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІЮ МО: 22. У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений антиген сії - 31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІЮО МО: 22.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений антиген містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 22. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сі/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО: 18. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сії - 31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІО МО: 21.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції зазначеного антигена сіЇ-31 їз М-сукцишмщил-5- ацетилтюацетатом (ЗАТА). У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена
Зо сульфгідрильна група отримана в результаті реакції залишку лізину із зазначеним антигеном
СІ -31.
У додатковому аспекті даного винаходу запропонована композиція, яка містить (а) вірусоподібну частинку (МІР) з щонайменше одним першим сайтом приєднання; (бр) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген сі!/-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сіЇ-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕО ІЮО МО: 22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95, переважно щонайменше 92 95, ще більше переважно - щонайменше 95 95, і ще більше переважно - щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5БЕСО ІО МО: 22; і, більше переважно, зазначений антиген містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 22; причому компоненти (а) і (р) зв'язані за допомогою зазначених щонайменше одного першого та щонайменше одного другого сайту приєднання за рахунок щонайменше одного не пептидного ковалентного зв'язку.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначена МІР являє собою модифіковану МІ Р вірусу мозаїки огірка (СМУ), причому зазначений модифікований поліпептид
СММУ містить або, переважно, складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮО МО: 6 або
ЗЕО ІЮ МО: 7.
У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сіЇ/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а) БЕО ІО МО: 18; (Б) 5ЕО ІО МО: 21; (с) 5ЕО ІО МО: 22; (04) 5ЕО ІЮ МО: 25-30. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сії - 31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а)
ЗЕО ІЮ МО: 18; (Б) 5ЕО ІЮО МО: 21; (с) БЕО ІО МО: 22; (4) 5ЕО ІЮ МО: 25; або (є) БЕО І МО: 26.
У додатковому переважному варіанті реалізації зазначений антиген сі!/-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 95 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕБЕО ІЮ МО: 22. У вкрай переважному варіанті реалізації зазначений антиген сії -31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІЮ МО: 22. У додатковому вкрай переважному варіанті 60 реалізації зазначений антиген містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 22. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сії! -31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 18. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений щонайменше один антиген сії! -31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 21. У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції зазначеного антигена сі/-31 із М- сукцинімідил-5-ацетилтіосацетатом (ЗАТА). У додатковому вкрай переважному варіанті реалізації зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому, переважно, зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції залишку лізину із зазначеним антигеном сії -31.
В ще одному аспекті даного винаходу запропонований спосіб профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у представників сімейства псових, переважно домашньої собаки, який включає введення ефективної кількості композиції зазначеній тварині сімейства псових, переважно зазначеній домашній собаці, і зазначена композиція містить (а) корову частинку з щонайменше одним першим сайтом приєднання; і (Б) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген сі!/-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сіЇ-31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕБЕО ІО МО: 22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95, переважно щонайменше 92 95, більше переважно - щонайменше 95 95, і ще більше переважно - щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІО МО: 22; причому компоненти (а) і (Б) зв'язані за допомогою зазначених щонайменше одного першого та щонайменше одного другого сайту приєднання за рахунок щонайменше одного не пептидного ковалентного зв'язку, причому, переважно, зазначений спосіб або зазначена композиція додатково задана згідно з описом у даному документі.
В ще одному аспекті даного винаходу запропоноване застосування композиції, яка містить (а) корову частинку з щонайменше одним першим сайтом приєднання; і (Б) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген сіЇ-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сі! -31 містить або, переважно, складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕБЕО ІО МО: 22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95, переважно щонайменше 92 95, більше переважно - щонайменше 95 95, і ще більше переважно - щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності по відношенню до 5ЕО ІО МО: 22; причому компоненти (а) і (р) зв'язані за допомогою зазначених щонайменше одного першого та щонайменше одного другого сайту приєднання за рахунок щонайменше одного не пептидного ковалентного зв'язку, для виробництва медикаменту для профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у тварин сімейства псових, переважно домашньої собаки, причому ефективну кількість зазначеної композиції вводять зазначеній тварині сімейства псових, переважно домашній собаці, причому, переважно, зазначений спосіб або зазначена композиція додатково задана згідно з описом у даному документі.
ПРИКЛАДИ ПРИКЛАД 1
Виділення та клонування білка оболонки (СР) вірусу мозаїки огірка (СММУ)
Загальну РНК із листків лілії, зараженої СММУ, виділяли з використанням реагенту ТВ (бБідта, Сент-Луїс, США) відповідно до інструкцій виробника. Для синтезу кДНК використовували набір для ЗТ-ПЛР Опебієр ВТ-РСА (Оіадеп, Венло, Нідерланди). Для ампліфікації гена СР СММУ вибрали послідовності праймерів після аналізу послідовностей СММ з
Сепрапк: СмМерЕ (САССАТасСАСАААТСТаААТСААССАСТасСтТОаст) (5ЕБО ІЮ МО: 8) і СМерА (САААДИСТТАТСАААСтТасавАасСАССССАСАТа та А) (ЗБО ІО МО: 9); сайта Мсої і Ніпагії підкреслені. Відповідні продукти ПЛР клонували у векторі рГ2757В8/1 (Рептепіав, Вільнюс,
Литва). Клітини БЕ. соїї ХГІ-Віне використовували в якості хазяїна для клонування й ампліфікації плазміди. Щоб уникнути вибору клонів, що містять помилки ПЛР, окремі клони плазміди рТ2757, що містять ген СР, секвенували з використанням набору для циклічного секвенування Відбує та генетичного аналізатора АВІ Рігізт 3100 (Арріїєй Віозувієте, Карлсобад, США). Після секвенування кКкДНК гена СР СММУ без помилок послідовності (5ЕО ІО МО: 10), що кодує білок оболонки СММУ 5ЕО ІО МО: 1, субклонували в сайти МеоИНіпа| експресуючого вектора рЕТ2ва(т) (Момадеп, Сан-Дієго, США), одержуючи експресуючу плазміду РЕТ-СМУмі/ (ФІГ. 1).
ПРИКЛАД 2
Експресія СР 5ЕО ІО МО: 1 в Е.соїї. призводить до одержання МІ Р СМУ
Для одержання МІР СМУМ клітини Е. соїї Сб2566 (Мем Епдіапа Віоіаб5, Іпсвіч, США) трансформували плазмідою рЕТ-СММУУл, що містить ген СР СМУ. Після вибору клонів з максимальним рівнем експресії білка-мішені культури Е. соїї вирощували в середовищі 2ХТУ, що містить канаміцин (25 мг/л) на качалці (200 об/хв; Іптег5, Боттмінген, Швейцарія) при 30 "С до оптичної щільності 00600, рівної 0,8-1,0. Потім клітини індукували 0,2 мм ІПТ" їі в середовище додавали 5 мМ МаосСі2. Інкубування продовжували на качалці при 20 "С протягом 18 год.
Отриману біомасу збирали центрифугуванням при невеликій швидкості та заморожували при - 20 С. Після розморожування на льоді клітини суспендували у буфері, що містить 50 мМ цитрату натрію, 5 мМ борату натрію, 5 мМ ЕДТА, 5 мм меркаптоетанолу (рН 9,0, буфер А) і руйнували шляхом обробки ультразвуком. Нерозчинні білки та фрагменти клітин видаляли центрифугуванням (13000 об/хв, 30 хв при 5 "С). Розчинний білок СР СМУ у проясненому лізаті осаджували з використанням насиченого розчину сульфату амонію (1:1, об/об) протягом ночі при 4 "С. Осаджені білки солюбілізували в тому самому буфері А (без меркаптоетанолу) протягом 4 год. при --44 "С. Нерозчинні білки видаляли центрифугуванням при невеликій швидкості (13000 об/хв, 15 хв при 4 "С). Розчин, що містить розчинний білок СР СМУ, відокремлювали від клітинних білків ультрацентрифугуванням (ротор 5М/28, ВесКтап, Пало
Альто, США; при 25000 об/хв, б год., 5 "С) у градієнті сахарози (20-60 95 розчин сахарози у буфері А, без меркаптоетанолу, з додаванням 0,5 95 тритону Х-100). Градієнт розділяли на шість фракцій, починаючи з нижньої частини градієнта, фракції аналізували електрофорезом у
ДСН-ПААГ (дані не показані). Фракції Ме 2 і Мо 3, що містили рекомбінантний СР СМУ, поєднували та діалізували проти 200 об'ємів буфера (5 мМ борату натрію, 2 мМ ЕДТА, рн 9,0) для видалення сахарози та тритону Х-100. Після діалізу розчин СР СМУ стерилізували фільтруванням через 0,2-мкм фільтр. Потім СР СММ концентрували ультрацентрифугуванням з використанням ротора Туре70 (ВесКтап, Пало Альто, США) через "подушку" 20 до сахарози в стерильних умовах (50000 об/хв, 4 год., 5 "С). Концентрацію очищеного СМУмі оцінювали за допомогою флуориметра ОиВії відповідно до рекомендацій виробника (Іпийгодеп, Юджин,
США). Концентровані розчини МІР (прибл. З мг/мл) зберігали при 14 "С у буфері з 5 мМ боратом натрію, 2 мМ ЕДТА (рН 9,0). Всі етапи експресії й очищення МІ Р відслідковували за допомогою електрофорезу в ДСН-ПААГ з використанням 12,5 95 гелів.
Зо Білок оболонки СММ можна успішно експресувати у клітинах Е.соїї. й одержати його значну частину в розчинній фракції. Крім того, ці білки знаходяться безпосередньо в клітинних екстрактах Е.соїї. у вигляді ізомерних МІ Р, що продемонстровано аналізом в градієнті сахарози (ФІГ. 2А), динамічним світлорозсіюванням й електронно-мікроскопічним аналізом (ФІГ. 2В).
ПРИКЛАД З
Клонування модифікованого білка оболонки СМУ, що містить епітоп правцевого анатоксину (СМУ-МИ830)
З метою заміщення вихідних амінокислот на М-кінці СР СММ згідно з БЕО ІЮО МО: 1 кодуючою послідовністю епітопу правцевого анатоксину використовували плазміду РЕТ-СМУУЯ для ПЛР- ампліфікаціїта мутагенезу. Сайт Заї!Ї, розташований в гені СМУм/ (ФІГ. 1), використовували для клонування відповідних продуктів ПЛР.
Для впровадження кодуючої послідовності епітопу правцевого анатоксину в ген СМУУмі використовували двоетапний ПЛР-мутагенез. Для першого етапу ампліфікації використовували наступні праймери: рЕТ-220 (АИСАССОаСССОССОсСААсСсАА (5БО 10 МО: 11) - вище полілінкера, ампліфікована область містила сайт вані) і СМУ-нв3-18 (АТТТаСАСТТОаСССТТААТАТАСТОВСССАТаСТАТАТСТОСТТСТТАААСТ) (ЗЕБЕО ІЮО МО: 12).
Для другого раунду продукт ПЛР, отриманий при першій ампліфікації, розбавляли в співвідношенні 1:50 і повторно ампліфікували з використанням праймерів рЕТ-220 (5ЕО І МО: 11) ї СМУ-НВЗЗа!І-Н2 (сАСсатосАдсастоааЙтТААТССССО,АТАААТТТасХьтТаассСТТААТАТАСТО) (5ЕБЕО ІЮ МО: 13). Отриманий продукт ПЛР (КДНК 5ЕО І МО: 14, що кодує СМУ-МИНВ830 згідно з ФЕО ІЮО МО: 6) субклонували в сайтах ВоПШ/бЗа! плазміди рЕТ-СММУУЛ. Потрібний клон ідентифікували секвенуванням і позначили як рЕТ-Сту-МИ830.
ПРИКЛАД 4
Експресія СМУ-МК830 в Е.соїї. призводить до одержання модифікованих МІ Р СММУ
Для одержання МІР СМУ-МИНВ8З30 клітини Е. соїї С2566 (Мем Епаіапа Віоїабрв, Іпсвіч, США) трансформували плазмідою РЕТ-СММУУлЛ-МН830, що містить ген СМУ-МНВ830. Після вибору клонів з максимальним рівнем експресії білка-мішені культури Е. соїї вирощували в середовищі 2хХТУ, що містить канаміцин (25 мг/л) на качалці (200 об/хв; Іптег5, Боттмінген, Швейцарія) при 30 "С до оптичної щільності 00600, рівної 0,8-1,0. Потім клітини індукували 0,2 мм ІПТ" їі в середовище бо додавали 5 мМ Мас. Інкубування продовжували на качалці при 20 С протягом 18 год.
Отриману біомасу збирали центрифугуванням при невеликій швидкості та заморожували при - 20 С. Після розморожування на льоді клітини суспендували у буфері, що містить 50 мМ цитрату натрію, 5 мМ борату натрію, 5 мМ ЕДТА, 5 мМ меркаптоетанолу (рН 9,0, буфер А) та руйнували шляхом обробки ультразвуком. Нерозчинні білки та фрагменти клітин видаляли центрифугуванням (13000 об/хв, 30 хв при 5 "С). Розчинний білок СМУ-МН8З3О у проясненому лізаті осаджували з використанням насиченого розчину сульфату амонію (1:1, об/об) протягом ночі при 4 "С. Осаджені білки солюбілізували у буфері А (без меркаптоетанолу) протягом 4 год. при 44 "С. Нерозчинні білки видаляли центрифугуванням при невеликій швидкості (13000 об/хв, 15 хв при 4 "С). Розчин, що містить розчинний білок СММУ-МК830, відокремлювали від клітинних білків ультрацентрифугуванням (ротор 5М/28, ВесКтап, Пало Альто, США; при 25000 об/хв, б год., 5"С) в градієнті сахарози (20-60 95 розчин сахарози у буфері А, без меркаптоетанолу, з додаванням 0,5 95 тритону Х-100). Градієнт розділяли на шість фракцій, починаючи з нижньої частини градієнта. Фракції, що містили рекомбінантний. СМУ-МИНВЗО, поєднували та діалізували проти 200 об'ємів 5 мМ борату натрію, 2 мМ ЕДТА (рн 9,0) для видалення сахарози та тритону Х-100. Після діалізу розчин СМУ-МН830О стерилізували фільтруванням через 0,2-мкм фільтр. Потім СМУ-МНВЗ3О концентрували ультрацентрифугуванням з використанням ротора Туре70 (ВесКтап, Пало Альто, США) через "подушку" 20 95 сахарози в стерильних умовах (50000 об/хв, 4 год., 45 7С). Концентрацію очищеного СММУ-МН83О оцінювали за допомогою флуориметра ОиВії відповідно до рекомендацій виробника (Іпийгодеп, Юджин, США). Концентровані розчини МІ Р (прибл. З мг/мл) зберігали при 4 "С у буфері з 5 мМ боратом натрію, 2 мМ ЕДТА (рн 9,0). Всі етапи експресії й очищення МІР відслідковували за допомогою електрофорезу в ДСН-ПААГ з використанням 12,5 95 гелів. Для демонстрації присутності епітопу правцевого анатоксину в МІР СМУ використовували мас-спектрометричний аналіз очищених МІ Р СММУ-МН830. Як показано на ФІГ.
ЗС, основний отриманий пік відповідав теоретичній молекулярній масі білка за умови видалення першого залишку метіоніну при синтезі білка в клітинах Е.соїї. Динамічне світлорозсіювання й електронна мікроскопія підтвердили ізометричну морфологію частинок, аналогічних М Р СМУУЛ (ФІГ. 4А і 4В).
ПРИКЛАД 5
Клонування модифікованого білка оболонки СМУ, що містить епітоп РАОВЕ (СММ-Мрааг)
Для впровадження кодуючої послідовності епітопу РАЮОВЕ в ген СММУлЛ виконали ПЛР- мутагенез із використанням плазміди рЕТ-СММУУЛ в якості матриці для ампліфікації та субклонування (див. також приклад 2 і 3). Для ампліфікації використовували наступні праймери: рЕТ-220 (5ЕО ІЮ МО: 11) і СМУ-радізаі-Я (СаАСатосАсасеаСса,ассс,асстталааИатоСАСас аайсСАСАААТТТСассСАТИИТТ) (ЗЕО ІЮ МО: 15). Отриманий продукт ПЛР (КДНК 5ЕО ІО МО: 16, що кодує СМУ-Мрааіг згідно з ФЕО ІО МО: 7) повторно субклонували в сайтах ВоП/зЗаї! плазміди рРЕТ-СМУМі. Потрібний клон ідентифікували секвенуванням і позначили як РЕТ-СМУ-Мрааг.
ПРИКЛАД 6
Експресія СМУ-Мраа в Е.соїї. призводить до одержання модифікованих МІ Р ММ
Процедури експресії й очищення СМУ-Мрадг були практично аналогічні процедурам для
СМУ-МН830 й описані у прикладі 4. Для демонстрації присутності епітопу РАОВЕ у МЕР СМУ використовували мас-спектрометричний аналіз очищених МІ Р. СМУ-Мрааіг. Як показано на фіг.
ЗВ, основний отриманий пік відповідав теоретичній молекулярній масі білка за умови видалення першого залишку метіоніну при синтезі білка в клітинах Е.соїї. Динамічне світлорозсіювання й електронна мікроскопія підтвердили ізометричну морфологію частинок (ФІГ. 5А і ФІГ. 58).
ПРИКЛАД 7
Клонування та продукція ІІ -31 собаки з маркером бхНіз і С-кінцевим залишком цистеїну
Послідовність кКДНК І 31 собаки з кодонами, оптимізованими для Б.соїї., М-кінцевим маркером бхНіз, сайтом розщеплення протеазою ТЕМ, С-кінцевим залишком цистеїну та фланкуючими сайтами рестрикції Мсої! і Рей (5ЕО І МО: 17) одержали в компанії ІОТ. Потім фрагмент Месо1/Р5ІІ лігували у відповідні сайти вектора рЕТ42. Конструкт трансформували в хімічно компетентні клітини Е.соїї. ОНба і висіювали колонії на чашки з І В-агаром, що містить ампіцилін. Послідовність отриманих клонів перевіряли секвенуванням за Сенгером. Потім отриманий конструкт рЕТ42 6бНсіІЇ/31С трансформували в хімічно компетентні клітини Е.соїї.
ВІ 21-ОЕ3З.
Біомасу посівного матеріалу одержали шляхом висіву клітин ВІ 31-ОЕЗ, трансформованих
І. 31-рРЕТ42, в середовище І В, що містило 50 мкг/мл ампіциліну, й інкубували протягом ночі при -37 "С. Потім біомасу внесли в середовище 21 при співвідношенні об'ємів 1:20. Клітини вирощували при «37 "С і перемішуванні до досягнення оптичної щільності при довжині хвилі 540 60 нм, рівної 0,7 одиниць. Потім індукували експресію білка (ЗЕО ІЮ МО: 18) з використанням 1 мМ
ІПТГ ії вирощували клітини протягом ще 4 годин при «37 "С і перемішуванні. Продукцію білка підтверджували шляхом завантаження загального клітинного екстракту для електрофорезу в
ДСН-ПААГ (ФІГ. 6).
Біомасу збирали центрифугуванням і суспендували у крижаному лізуючому буфері, що містив 40 мМ трис-НСЇІ (рН 8,0), 200 мМ Масі, 20 мМ Ма505, 0,1 мг/мл ДНКази І, 1 мм ФМоФф і 195 тритон Х-100, підтримуючи співвідношення 1 г сирих клітин на 5 мл лізуючого буфера.
Клітини лізували шляхом обробки ультразвуком на льоді, отриманий лізат центрифугували протягом 40 хв при 15000 9, надосадову рідину викидали. До осаду додавали буфер для промивання М/В1, що містив 20 мМ трис-НСІ, рнН-8,0, і 1 М Масі, підтримуючи співвідношення З мл М/В1 на 1 г вихідної маси сирих клітин. Осад ресуспендували шляхом струшування на вортексі, інкубували на качалці протягом 1 год. при кімнатній температурі та центрифугували протягом 15 хв при 15000 9. Промивання осаду повторювали ще раз із використанням буфера для промивання М/В2, що містив 20 мМ трис-НСІ, рН-8,0, 200 мМ Масі і 1 М сечовини. Білок- мішень виявляли в осадженій фракції. Потім осад ресуспендували у буфері для елюювання
ЕВІ, що містив 8 М сечовини, 20 мМ трис-НСІ, рН-8, і 100 мМ МанНгРо»х, підтримуючи співвідношення З мл ЕВІ на 1 г вихідної маси сирих клітин, й інкубували на качалці при кімнатній температурі протягом ночі. Після центрифугування надосадова рідина містила білок приблизно 90 95 чистоти (ФІГ. 7). 1 мл отриманої надосадової рідини по краплях додавали до 20 мл буфера для рефолдінгу ВВ, що містив 20 мМ трис-НСІ, рнН-8,0, 50 мМ Масі, 1 М гліцину та 5
ММ В-меркаптоетанолу, й інкубували протягом 2 год. при кімнатній температурі при перемішуванні. Потім надосадову рідину концентрували до об'єму 1 мл на фільтруючому блоці
Атісоп (номінальне відсікання за молекулярною масою 10 кдДа) і діалізували протягом 48 год. при 44 "С проти 1000 мл РВ5. Після цього зразок центрифугували та завантажували на колонку зЗирегдехТ М 200 10/300 СІ у РВ5. Профіль колонки вказував, що білок-мішень елюювався у виключений об'єм, таким чином, цілком ймовірно, утворюючи розчинні агрегати (ФІГ. 8).
ПРИКЛАД 8
Клонування та продукція рекомбінантного нативного ІІ -31 собаки
І/-31 собаки ампліфікували з плазміди, що містила 5ЕО ІЮ МО: 17, за допомогою ПЛР з використанням праймерів сі 31 МАТ? (ТАСАССАТаСОСТСССАСАТа,СТОСААСа, 5ЕО І МО:
Зо 19) ї сІ/"ЗМАТг (САТАСТИСАаТтТАСТасасаТтОСАСТОаТТтТАдО, ЗЕО ІЮ МО: 20), що містили сайти Ро ї МсоІЇ. Отриманий ПЛР-фрагмент сі/-31 гідролізували з використанням ферментів рестрикції Раї! ї Мсої і лігували у відповідні сайти вектора рЕТ42. Конструкт трансформували в хімічно компетентні клітини Е. соїї ОН5ба і висіювали колонії на чашки з І В-агаром, що містить ампіцилін. Позитивні клони виявляли секвенуванням за Сенгером. Потім конструкт сі! 31-рЕТ42 трансформували в хімічно компетентні клітини Е. соїї ВІ 21-ОЕЗ.
Біомасу посівного матеріалу одержали шляхом висіву клітин ВІ 31-ОЕЗ, трансформованих
СІ 31-рРЕТ42, в середовище І В, що містило 50 мкг/мл ампіциліну, й інкубували протягом ночі при -37 "С. Потім біомасу внесли в середовище 21 при співвідношенні об'ємів 1:20. Клітини вирощували при «37 "С і перемішуванні до досягнення оптичної щільності при довжині хвилі 540 нм, рівної 0,7 одиниць. Потім індукували експресію білка (ЗЕО ІЮ МО: 21) з використанням 1 мМ
ІПТГ ії вирощували клітини протягом ще 4 годин при «37 "С і перемішуванні. Продукцію білка підтверджували шляхом завантаження загального клітинного екстракту для електрофорезу в
ДСН-ПААГ (ФІГ. 9).
Біомасу збирали центрифугуванням і суспендували у крижаному лізуючому буфері, що містив 40 мМ трис-НСЇІ (рН 8,0), 200 мМ Масі, 20 мМ Ма505, 0,1 мг/мл ДНКази І, 1 мм ФМоФф і 195 тритон Х-100, підтримуючи співвідношення 1 г клітин на 5 мллізуючого буфера. Клітини лізували шляхом обробки ультразвуком на льоді, отриманий лізат центрифугували протягом 40 хв при 15000 4. Надосадову рідину викидали, до осаду додавали лізуючий буфер, підтримуючи співвідношення 1,5 мл лізуючого буфера на 1 г вихідної маси сирих клітин. Осад суспендували в розчин шляхом обробки ультразвуком, розчин центрифугували протягом 20 хв при 15000 49.
Надосадову рідину викидали, осад 5-кратно промивали лізуючим буфером, як описано вище.
Після етапів промивання осад ресуспендували в 6,86 М сечовині та 20 мМ дитіотрейтолі за допомогою обробки ультразвуком. Розчин центрифугували протягом 20 хв при 15000 а, надосадову рідину розбавляли буфером для рефолдінгу, що містив 50 мМ трис-НСІ, 1 М гліцину, 1 мМ ЕДТА та 5 мМ ВД-меркаптоетанолу, підтримуючи співвідношення 75 мл буфера для рефолдінгу на 1 мл розчину сечовини та дитіотрейтолу. Рефолдінг виконували протягом ночі при 14 "С і перемішуванні. Потім розчин фільтрували з використанням 22-мкм фільтра та концентрували ультрафільтрацією з використанням пристрою з відсіченням за молекулярною масою 10 кДа (Атісоп) з 200 мл до 4 мл. Потім розчин центрифугували при 15000 у протягом 10 60 хвилин для видалення залишкового осаду. Розчин завантажували на колонку 5ирегдех 200 для гель-фільтрації (16 х 600 мм), раніше врівноважену буфером для рефолдінгу, і фракціонували (2 мл на фракцію, швидкість потоку 2 мл/хв). Фракції, що містили білок сі!/-31, виявляли електрофорезом у ДСН-ПААГ, поєднували та концентрували ультрафільтрацією з використанням пристрою з відсіченням за молекулярною масою 10 кДа (Атісоп) до об'єму З мл.
Повторну хроматографію виконували на тій самій колонці Бирегаех 200 для гель-фільтрації, як і раніше. Колонку на етапі повторної хроматографії врівноважували у буфері РВ5 (01 М фосфату натрію, рН 7,2, і 0,15 М масі). Фракції аналізували електрофорезом у ДСН-ПААГ (ФІГ. 10), чотири фракції, що містили найбільше чистий білок сі! -31 (5ЕО ІЮ МО: 21), поєднували, концентрували до 4 мг/мл шляхом ультрафільтрації на пристрої з відсіченням за молекулярною масою 10 кДа (Атісоп) і використовували надалі для експериментів з приєднання до МІ Р СМУ.
ПРИКЛАД 9
Приєднання рекомбінантних конструктів ІЇ-31 собаки до М Р СММ-Мрааг і М Р СМУ-МНВ83О0 й імунізація мишей та собак
А. Приєднання сіїЇ -31 до МІ Р 100 мкл розчину (4 мг/мл у буфері РВ5) білка сі! -31 (5ЕО ІО МО: 21), отриманого у прикладі 8, змішували з 4,8 мкл 55 мМ М-сукцинімідил-5-ацетилтіосацетату (ЗАТА, ТНепто РівНег
Зсіепіййс) у ДМСО й інкубували протягом 30 хв при кімнатній температурі (КТ).
Непрореагувавший 5АТА видаляли 4х заміною буфера на РВ5 (0,1 М натрій-фосфатний буфер, рН 7,2, і 0,15 М масі) з використанням блоку для фільтрації Атісоп Ойга-0.5 ЗК (Метгек-МіПіроге), кінцевий об'єм доводили до 100 мкл. З сульфгідрильних груп знімали захист шляхом додавання 10 мкл розчину для деацетилювання (0,5 М гідроксиламіну та 25 мМ ЕДТА у РВЕ) й інкубування протягом 2 год. при КТ. Розчин для деацетилювання видаляли 4х заміною буфера на РВ5 з використанням блоків для фільтрації Атісоп ОПга-0.5 ЗК (Мегек-МіїПрогє), кінцевий об'єм доводили до 100 мкл.
МІР СМУ-МЕ830 в об'ємі 250 мкл з концентрацією 1,5 мг/мл в 5 мМ МанНРСИ, рн 7,5, 2 мМ
ЕДТА, змішували з З мкл 50 мМ розчину сукцинімідил-6-(б-малеімідпропіонамід)гексаноату (5МРН) в ДМСО й інкубували протягом 1 години при КТ. Кількість 5МРН відповідало 7,5х молярному надлишку по відношенню до мономера МІР, тобто одному поліпептиду СМУ.
Непрореагувавший 5МРН видаляли 4х заміною буфера на 5 мМ МанНРО», рН 7,5, 2 мМ ЕДТА,
Зо рН 8,0, з використанням блоків фільтрації Атісоп ШПйга-0.5 ЗК (Мегок-МіПрогеє), кінцевий об'єм доводили до 250 мкл.
Для реакції приєднання 100 мкл МІ Р, оброблених 5МРН, змішували з 43 мкл обробленого 8АТАтадеацетильованогосіь-31 згідно з БЕО ІЮ МО: 21 й інкубували протягом З год. при КТ.
Отриманий продукт перевіряли електрофорезом у ДСН-ПААГ (ФІГ. 11) й електронною мікроскопією (ФІГ. 12). Аналіз у гелі із ДСН підтвердив присутність продукту хімічного приєднання з очікуваною молекулярною масою, а аналіз за допомогою ЕМ підтвердив присутність інтактних МІ Р.
В. Імунізація мишей сі! -31, приєднаним до МІ Р СМУ-Мрааіг і СМУ-МиН830
Групи з п'яти самок мишей Ваї!р/с імунізували в 0 день і 14 день шляхом п/ш введення 50 мкг
МІР СМУ-Мрааг ії М Р СМУ-МНВ830, приєднаних за допомогою 5АТА до сії -31 згідно з БЕО ІЮ
МО: 21 в складі з РВ5. Пробовідбір крові в мишей виконували в 0 день (до імунізації), 14 день і 28 день, сироватку аналізували за допомогою твердофазного ІФА, специфічного по відношенню до сі -31.
Твердофазний ІФА. Гуморальну відповідь аналізували в сироватці мишей у зазначений час.
Антитіла, специфічні по відношенню до сії! -31, аналізували іммобілізацією рекомбінантного сії - 31 на планшетах для твердофазного 1ФА в концентрації 5 мкг/мл в об'ємі 100 мкл у РВ5 (рН 7,2) при 4 "С протягом ночі. Планшети для твердофазного ІФА 5х промивали 200 мкл РВ5, що містить 0,05 95 твін-20 (рН 7,2, РВ5ОТ). Щоб уникнути не специфічного зв'язування планшети для твердофазного ІФА блокували 200 мкл 2 95 БСА у РВ5Т й інкубували протягом 2 годин при КТ.
Зразки сироватки розбавляли 2 95 БСА/РВ5Т. Попередньо розведену сироватку переносили на покриті планшети та надалі послідовно розбавляли з одержанням титрів антитіл на підставі розрахунків 0050. Через 2 години інкубування при КТ планшети для твердофазного ІФА 5х промивали 200 мкл РВ5Т. Зв'язування антитіл сироватки виявляли з використанням антитіл кози проти Ід; миші, кон'югованих з пероксидазою хрону (Часкзоп ІттипоВезеагсін).
Детектуюче антитіло розбавляли в співвідношенні 1:1000 2 95 БСА/РВ5Т і переносили об'єм 100 мкл на зразок. Планшети інкубували протягом 1 години при КТ. Планшети для твердофазного
ІФА промивали відповідно до вищенаведеного опису. Перед промиванням одержували розчин субстрату. Для цього 1 таблетку (10 мг) ОФД (дигідрохлориду 1,2-фенілендіаміну) і 9 мкл 30 95
НгО2 розчиняли в 25 мл буфера на основі лимонної кислоти (0,066 М МагНРО4, 0,035 М бо лимонної кислоти, рН 5,0). 100 мкл розчину субстрату переносили піпеткою на планшети й інкубували протягом рівно 7 хвилин при КТ. Для зупинки реакції 50 мкл стоп-розчину (5 95 Нг5О4 в НгО) переносили піпеткою безпосередньо на планшети. Виконували аналіз показань оптичної щільності кольорової реакції дигідрохлориду 1,2-фенілендіаміну при довжині хвилі 450 нм.
С. Імунізація собак сіЇ-31, приєднаним до М Р СМУ-Мрааіг і СМУ-МИН830 Групи з п'яти собак імунізували в 0 день і 14 день, 28 день і 42 день шляхом п/ш введення 50 мкг МІ Р СМУ-Мраєвй і
МІР СМУ-МНВ830, приєднаних за допомогою 5АТА до сі! -31 згідно з «ЕС ІЮО МО: 21 в складі з
РВ5. Пробовідбір крові в собак виконували в 0 день (до імунізації), 14 день, 28 день, 42 день та 56 день, сироватку аналізували за допомогою твердофазного ІФА, специфічного по відношенню до сі -31.
Твердофазний ІФА. Гуморальну відповідь аналізували в сироватці собак у зазначений час.
Антитіла, специфічні по відношенню до сії! -31, аналізували іммобілізацією рекомбінантного сії - 31 на планшетах для твердофазного ІФА в концентрації 5 мкг/мл в об'ємі 100 мкл у РВ5 (рН 7,2) при 4 "С протягом ночі. Планшети для твердофазного ІФА 5х промивали 200 мкл РВ5, що містить 0,05 95 твін-20 (рН 7,2, РВ5ОТ). Щоб уникнути не специфічного зв'язування планшети для твердофазного ІФА блокували 200 мкл 2 95 БСА у РВ5Т й інкубували протягом 2 годин при КТ.
Зразки сироватки розбавляли 2 95 БСА/РВ5Т. Попередньо розведену сироватку переносили на покриті планшети та надалі послідовно розбавляли з одержанням титрів антитіл на підставі розрахунків 0050. Через 2 години інкубування при КТ планшети для твердофазного ІФА 5х промивали 200 мкл РВ5Т. Зв'язування антитіл сироватки виявляли з використанням антитіл кози проти Ідс собаки, кон'югованих з пероксидазою хрону (Часкзоп І|ттипогезеагсн).
Детектуюче антитіло розбавляли в співвідношенні 1:1000 2 95 БСА/РВ5Т і переносили об'єм 100 мкл на зразок. Планшети інкубували протягом 1 години при КТ. Планшети для твердофазного
ІФА промивали відповідно до вищенаведеного опису. Перед промиванням одержували розчин субстрату. Для цього 1 таблетку (10 мг) ОФД (дигідрохлориду 1,2-фенілендіаміну) і 9 мкл 30 95
НгО» розчиняли в 25 мл буфера на основі лимонної кислоти (0,066 М МагНРО»:, 0,035 М лимонної кислоти, рН 5,0). 100 мкл розчину субстрату переносили піпеткою на планшети й інкубували протягом рівно 7 хвилин при КТ. Для зупинки реакції 50 мкл стоп-розчину (5 95 Нг5О4 в НгО) переносили піпеткою безпосередньо на планшети. Виконували аналіз показань оптичної щільності кольорової реакції дигідрохлориду 1,2-фенілендіаміну при довжині хвилі 450 нм.
ПРИКЛАД 10
Терапевтична імунізація собак рекомбінантними конструктами ІІ -31 собаки, приєднаними до
МІР СМУ-МНВЗ0О, для лікування атопічного дерматиту собак
Групи з 15 собак імунізували в 0 день і 14 день, 28 день, 56 день і 80 день шляхом п/ш введення 50 мкг МІ Р СММУ-МЕ830, приєднаних за допомогою 5АТА до сії! -31 згідно з ФЕО ІЮ МО: 21, або тільки СММУ-МИН830 в складі з галунами. Важкість захворювання вимірювали шляхом візуального огляду перед імунізацією та в 28 день, 56 день, 80 день та 120 день.
ПРИКЛАД 11
Бальна оцінка АДС
Для бальної оцінки симптомів АДС у піддослідних собак використовували показник уражень при атопічному дерматиті (АОІІ) та візуальний аналоговий бальний показник сверблячки (РМАБ). Показник АОІЇ являє собою перевірений об'єднаний показник шести клінічних симптомів, асоційованих з атопічним дерматитом собак й оцінюваних за п'ятьма зазначеними частинами тіла. Оцінювач виконував бальну оцінку кожного параметра в кожній зазначеній частині тіла за шкалою від нуля до п'яти, причому оцінка "нуль" означала відсутність осередків, а оцінка "п'ять" - важкі/великі осередки. Оцінювач виконував бальну оцінку РУА5 за аналоговою шкалою від нуля до десяти, причому оцінка "нуль" являла собою відсутність сверблячки/викушування, а оцінка "десять" - безперервна інтенсивна сверблячка/викушування.
Бальний показник АДС в собак, що зазнають лікування, порівнювали з вихідним рівнем, а також з показниками в собак, що одержували плацебо.
ПРИКЛАД 12
Вакцинація собак з алергією на кліщів домашнього пилу з використанням МІ Р. СІ -31-СМУ-
МН830 і наступна повторна імунізація
Шість собак з алергією імунізували 100 мкг МІ Р. СІ -31-СММУ-МНВ830 в складі з галунами, і шість собак з алергією обробили плацебо (галунами). Через три тижні собак повторно імунізували 300 мкг вакцини або плацебо. Пробовідбір крові виконували в 28 день. В 28 день зі шкіри на череві видаляли шерсть липкою стрічкою та виконували стимуляцію кліщами домашнього пилу раз на день протягом десяти хвилин п'ять днів підряд. Бальну оцінку уражень шкіри та сверблячки виконували в 12 собак у ході клінічного обстеження за допомогою відеозапису собак протягом шести годин/день.
На ФІГ. 13А показана поведінка собак, пов'язана з розчісуванням, до та після вакцинації.
Спостерігалося сильне зниження розчісування, причому 5/6 вакцинованих собак практично припинили розчісуватися, в той час як поведінка тварин, що одержували плацебо, не змінилася.
Визначення титрів сі!/-31-специфічних дс. Гуморальну відповідь в сироватці собак аналізували на 28 день. Антитіла, специфічні по відношенню до сі/-31, аналізували іммобілізацією рекомбінантного сіЇ-31 на планшетах для твердофазного ІФА в концентрації З мкг/мл в об'ємі 100 мкл у РВ5 (рН 7,2) при 4 "С протягом ночі. Планшети для твердофазного
ІФА 5х промивали 200 мкл РВ5, що містить 0,05 95 твін-20 (рН 7,2, РВ5Т). Щоб уникнути не специфічного зв'язування планшети для твердофазного ІФА блокували 200 мкл 2 95 БСА у
РВ5ОТ й інкубували протягом 2 годин при КТ. Зразки сироватки розбавляли 2 95 БСА/РВ5Т.
Попередньо розведену (10-кратно) сироватку переносили на покриті планшети та надалі послідовно розбавляли (етапи 3-кратного розведення) з одержанням титрів антитіл на підставі розрахунків 0050. Через 2 години інкубування при КТ планшети для твердофазного ІФА 5х промивали 200 мкл РВ5Т. Зв'язування антитіл сироватки виявляли з використанням антитіл кози проти Ідс собаки, кон'югованих з пероксидазою хрону (Часкзоп Іттипогезеагсн).
Детектуюче антитіло розбавляли в співвідношенні 1:1000 2 95 БСА/РВ5Т і переносили об'єм 100 мкл на зразок. Планшети інкубували протягом 1 години при КТ. Планшети для твердофазного
ІФА промивали відповідно до вищенаведеного опису. Перед промиванням одержували розчин 5 субстратів. Для цього 1 таблетку (10 мг) ОФД (дигідрохлориду 1,2-фенілендіаміну) і 9 мкл 30 95
НгО» розчиняли в 25 мл буфера на основі лимонної кислоти (0,066 М МагНРО», 0,035 М лимонної кислоти, рН 5,0). 100 мкл розчину субстрату переносили піпеткою на планшети й інкубували протягом рівно 7 хвилин при КТ. Для зупинки реакції 50 мкл стоп-розчину (5 95 Нг5О4 у Н2гО) переносили піпеткою безпосередньо на планшети. Показання оптичної щільності кольорової реакції дигідрохлориду 1,2-фенілендіаміну при довжині хвилі 450 нм аналізували та виражали у вигляді 093 в 10-кратно попередньо розведеній сироватці (ФІГ. 138). На фіг. 138 показана кореляція між титрами 1 -31-специфічних антитіл й інтенсивністю розчісування. В однієї собаки, яка продовжувала розчісуватися, підтримувалася найнижча гуморальна відповідь, і 5 виявлено, що орієнтовний титр « 1/300 був протективним.
Зо ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ «110» Вепсптаїк Апіта! Неаци (а
Тагв, Казраїтїв «120» Лікування атопічного дерматиту собак «-1305» Р5139РСОО «150» ЕР16167264.7 «1515 27.04.2016 -160» 30 «170» Версія Раїепінп 3.5 -2105 1 «2115 218 «212» БІЛОК -2135» вірус мозаїки огірка «4005 1
Меї Ар обу зве біб Зее ТбБе оБагб вів сі АБ обек АБЕ АгЕ АгЕ АГ
Рета Акв Аве біУ Бек дев хе йіа го бБег бер Аза АБО Аза Ахв вне
АгвВ о Жаї Бе бег щіфій бій бер оБеб дев Бен ода Бу ТБ Обво діа Віа піу АгБЕ оБго Те гів А Ні бго Бе о РНе уві б1у бебі дбЕ Сух а ВХ цО
: Кк є т жах ті ма я хх Ж ті Кожух за Ким ким боузаи У же РгОо бі Ту Те о ББе Тве бек бів Тв? ого їух БРо БР гук Ті п ся зе ех
Ба я Ка що ше Моска Ж соду Жухех стук тку дужі ож хіх її: грук м ди м х
АхроаАгЕ Біу Баг оТугт Тук ПпІу ух АГРЕ ОБец без фев бко АБО его Уді щ ща ЗУ як кл че Лоту хи її маки ТК хара Ма Му аа ж я х ГА. Кук
ТР обій Тугб Ер їух бух зіец Уві зе др 038 бій їі АгЕ Уві дев її М що гео дру 5 ум шо ЖУмом шк Кок "вх кх 5 жк тех її йо і х«хсесо ха га ів Рг іт вне од ЗБК ТК УВІ ТР УВА ТНК УВІ АГЕ ук МД. 115 Її 185 ту жо тку Шехе Моя Кк Ж оких дк й шо А СМ о Ка ке же ТКУ я
Бго від Бек Бег Ах Кей обеє Уві Аів Аза бів зви Аза Ме ваз АЗа ди жк п
Іа 3 зда пуд хх п'я жу Мура і-ї З ж ба жагу свя ож З я ик кг хі
Ак Бі Аів Ве во УВІ фе Уві Ту бі Ту Аїа вій бБег обБтіу чУах 145 5 їз ї15а мож МО мое хе: фору су -кг ух Є ї ше Кк М Де УЖ З дузує ціп дів ап абп ге бе гео туго АБО фен о Заб ді Меї дев діЗ Ах яке дух дя їв В 175 т дви й Хкиш и я Жіугум що кА кт НТ т з : же Мо їі біу Ах Меї АБ фе Лук Аїв Уві во Уві ТУб баб губ Ар Ар
З вза ЗУ
МК о 138 че Кос моду т Хе М суку Ек яку їі - йшу й Лу Ві и аа Сен сі їмйе ав а баз УМ КЕ) Мія Уді дБ Ма» зі МІВ І як ле ке їх за 5 дк но Кен уля Мк. «люде тету ан кож ут в ага зів БрО їйбозеб лу У Бе бро УВУ я як
В -- і 5 -21052 «2115 217 «212» БІЛОК -213» вірус мозаїки огірка жо фо Жук ух гт: Єжи Бу Са ві 3 дру дк 5 мер. т жу ме Шк аще бух За" Бі Заб Те ЗвеФб Ада БІ» дРВ А5В о АБЕ АгЕ АКВА рго
Х 5 а 15
Жах ач се дух Жсзм й Жум о Жовм Жов. ла пса Мі дес сне тхЕх
АББОАГЕ біу Зес АГЕ его АЇВ деб о ЗВе хеБ Аза АО Аія дей пе АГ
Б Бика Ех 2 о а и М о о о їні Жук: уч 2. Щбна во у ге хе йохію у чаї ізи б5екосів вів Ківі зве Аг ів; да Бу Того ів АВ лі КУ «кв ке ках 35 й що
Мих Киї Женя Ж, деку Ма духу Кв вх г жк ух їі: ду га фу
АЕРО ТвгожІв Аа Мі бе оТвг о Бне о УВЬ лу ес БІБ АР ОСУВ Був куА ж в
Феохиу ха я хі Мод Кдхух кю пмрук: - с кур я вах г ще
ВгРа БУ ТУб тТве Ба бЗеб о зЗеб фі Те зн БУХ Ро Ро Муз 1385 АБр ек чув с ніх
Зх У Я Би
Ще іх г. тт г г ех де ямі Бк: хр; ух; пост де іх ме
АгЕ фу Бек оТуб Туг Бу іух дгРЕ ЦБ фе о бец о рка дво бег УДО ТИг ге їі гу к ох ак кл са х х Км У с гц її їх й с г у Ко пе: А жк г ЩО їх доку Фо музу:
ЧО Ра Ар ої бух без Маі бЗеєг ден бів біз Ті АбБоМаХ Ап ге
Ж ЕЕ ча ща ах ЕЕ ху Муетк ше тх Фк Кк "Кк що жу у хяю сих, - ху жкиких ви го бух ВВ АБО зве їй Уві То Уві ТБ УВІ аРЕ Ку У БГО ччЕ Зв дк
А 158 МОХ
Ж би Жозе м Коші сушку й - Ко м ут Ля Кн Же У дів Бек бек Або гер обеє уді йіл дій Ті баб із Меї бБе Ав Аа
КЕ. 1 за тк х ке к Фк ах я ди КУ ч с я с їж іа Ж Су ї- сі 47 ук Й со жк М зу их вх іл 5іЖ АМа заго УВІ ем Уві тує бій їУу Азв діа его щу маї щжиа и яке зу. 5 т45 АБО 155 ї658
ІІ се код ЗК ще зу Кі й іі См АТ Му іх ре де су
Вів А Ач ух Ге) Без Тук дрів Заб дів Мет аБЕ дід АБО 18 55 зу 175 «1. йкк Ма й вик ше АВРаУ а гм а тТюю башу с йсюм дкм ді х шу АБИ мес дрЕ ув Ту" Аза Уві ім Уді Тук бБег їУх АХ Ак ДВ з ак а ща 5 м їх» КйН Же Дак В Кк хан БК шо їх яд Жах ту аю ЛЕ їх їжи щім їйг ойхв бій їжа Мазї іец МНі5 шаї АБ Оїів біб нів БІВ АгЕ ща 2 жу ту ни но НА як Ж КЕ їі БгОо ТВе обев дію Узі Без йго Жді ее ЖУЙ
«2105 З «2115 218 «212» БІЛОК -213» вірус мозаїки огірка «400» З
МОХ АБО Гу баб БІіц бег о Вго дп А1а бег АБО Тс обег Абе о дго ВгЕ
З В їв т
Мк кю Джо ко ШО Су Ак че Кен жу Ах Мод З я х ек
ЗБЕ РРО Аг аРв о Біу его АгЕ 5ее Аїв его біу ліз яр Аїя Б1іу во еВ 25 за ку З їх їжі: ще Ук У Му 5 ї ах. Хо М ах Зуб е ше К З - Мк я ги вів ви ївб офі п Мей Кец обу йей ай МКух Тиб об) Аза тів ча 45 кт ух при ха у с ді Во твоя ія Ку Ж М км шк Ки сім ден оБео ТНнеогбви да Мі Вч Те рве жа пу бак о АТя бе Су
Ба 55 о ур за як ку ох кою КК коня жи кв Соя божа рем куски ОК
Куй го біу ТУ ївгб о Бве о тївпбе бак Кв тТпбоїяи бу Бе Бро бі; (Це
Б та ях ще лк. - «фу СК не шо мяч дутит о і її Не чь оз те хе Мо Те сл
БЦ бу віу ЗакбоЇїУє Вб обі АКБ ОАЕ ву Хекб бек Бго ар оБаб Уді ях ска зе ча Мах Би Кг ких зшх Ко. БУЧІ Шо я ге М я Ж зн М шк ут и Мох
Ве дар Ту вар бух бух сви Уді бек аг 3 Бій Те дб ТІВ дв
Та ї1855 КН ех та КЕкхг - Кат й СФШмух Же 3128 жи «її ке АЛ: «у жук ге
БгРО безе Бга Бу БП Ах Зве ТНР о УЗ; ТеБоУВі ТвБоМУпі дев оба Уві че «тв зх їх 1 5 їх Ск Ж и хе фак Же їжу М у. ух М я ку КО вл я зе ч
Рко Заб дег зе йар сви Заг Уві бів Таб бі бЗегб Аія МехХ Бе біу «су Ук а Ж 13 135 ї59 аез БІ1У йшй зеб Вр Чі зо Уві Те Бій Тув Тв: дДеВ 5еб бішж Уві біп віз Аа дв фу БеО бе Тук дев сви беб бів Меб Аг Дів Ей їБ5 7 їТ5 їЇїе іт дер Меї Агв БУЄ ТуК Віз Уві Беи Уві Туб бе Бу АБО Ар їі5а їх5 їі
Бу їв ІВ Фіз Азр офі Ті УЗ фев МНіх ді др оо ЦЕ НІВ оди ї155 2ае зи
Ага бів Бро Щ)6 Зегб Аби о Меї фею го та «21054 «2115 14 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» епітоп правцевого анатоксину 830 «4005» 4 ціп Тут Ті фу дія Ап о Звг губ не тів біу Ті Те пі 1 5 ща «21055 -2115 13 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» РАОВЕ «400» 5 кіз цу5 Ре Уві дів діа Тер о пгоєеу бує АЇз АЇВ АТ «2105 6 «2115 222 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» СМУ-МИ830 «4005» 6 хи т. ую усу Ж м її де че хх іди би ту ті тв ії,
Меї біж сів оту Кі Буб АіВ яв бег іш БВ тів бі Бі Тве обі у й їі ї5
Моря Мем й в БЖ у ех х схо духо ту Кк пожзию Коиюю. УК Зачг Фе КЖіІУую КТ»
АГ ОАгЕ Аг ОАГЕ КГ АгРЕ АГ ОСіУу БЕР ОАгЕ Зб ОАТа го Заг бек АЇа за Ж в ши ку дит Мас йду збу сумі. Ж ре їж; Ше для Вір дю бе до дів Ав ве дв УВІ ів бесбобіп діє се) беб АБ фен ока хх 35 ще 35 тив; тої шо АОС Тл шу ик Че ж шк Кл Ек з г - ска
Їнг сен віз Аза бі АгРЕОоБКО Тне тів дж Ні РБео ївВе о РБе Уві щЕу п ще не в ве я шо й дод жу фол тих м по ші Зо фея ЖК а я в зак обій св Сук бу Рг обу ТУуб Твена тТНб екв ТР Те їв бух 55 та ях ще ки Жфісжух хе Кн шу Мих СЛ ух у Жук псує КУ кт фс 5 фохжія ох Вода
ВР ВгО Бух 16 Ахр АР о біж БВ Тув Ту Б3У уз АгБВ Се сен сек що З щих
В хат мак мат жі: Жахи двух о Би ї рі 3251 Ша ди Кі ел го дер ев Уві Таб Обі ТУ А ух ух зем Уа Беб дев ГБ був че жде їла їде 185 КУ тід х чі ку ня іі в зх БУК У ше Ка уж зу фе АгЕ МВІ АБ Бго ів Ре рух Ре ве) бек тв жа Тер маю ТВРе 115 Іще ї25 дух ее АЮ жу Я яю ух их Візу оп ду 2 дя дж жі м чві агЕ уз Ві ргоО діа бег обег Аш Бе бек УЗ Аза Ара Обі ее
Іа 35 ща ло ме чу лм дя ЩІ 4-х бути и СИЧ у в Хе хх ХО дів МЕ РЕ ВІЗ А бу АВ ОГО г У) бец очах тТУуБ БЖ ТУК дід ї45 ХО ї55 іп кА Ж кі: зи Кк хату йде гу ші СКаутих што фа: Ж й від заг чі УВЮ ЗАВ АЛІ Би Ай фу бебі ТУР АВ оївц ЗР дів
Де чу а і ТУ 5
Яд ею дл Дод ЗЛ пл й Му друк. ше тоже тро я ще кю. Зм
Мас ага Аа А Те біу АБО Ме дге ух ту" Абз Узі бе Мат тут
З тик Зх ще ї85 Ач зм ак Я де ПК пі: Жар тах о вату г ії км ЦК 1 и ме 1253 аг 5ег бує йзр Ар АХ Сем сім ТВ оАБо сіб фїев Уді ер нів ад АяВ аа заз їх тео Як де Тв НАХ Тре ер су 3: щЕї хи хх
Уві біч нів Бій АбВ бів Бра твг зве бІту Уві ер оБго Уді зяа гру рр
ІВ іх жк
«?2И» 220 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» СМУ-Мрааіг «4005 7
Мет дів іу5 Бе Уші йів дія Тго о ТМгРоїєз ух Аза Аза АЇВ АББ Аге ї 5 1 ї5 дев оагЕ о РгОо Ага о дгв ЗЛУ Зег оаги Баг Дія Бгео баб Щвг дів Зо дів зи ях за
Ахп о Бне агЕ ДІ ви Зве о Біп бі Без бе дер ів дал обує Те овво 42 45 діа йівз біу АКБ о бко ТК оті депо ні ББо ТАБ оБне уві біу Бек 51; й нн ца
ЗГЕ СУ ух Бо сту Туб тре ББе ТвгРобее Зі їм ви фу Бго ро ак ТВ 5 ща ух Ті дав дКЕ біу зем тує Тук Бі гу ДК Без Бер би БР АЕо 5 за З
Зег Чаї Те Біб Ту? Д3О бух їх їви УБЬ зем ги ів бів Т16 Аве їа8 1855 118 узр дк Бго іву БгРо ух ББе дав 5ек тб УВХ ТБ Ві тб ота АгЕ
Зк За я Зк ей ЖАХ ями
Ку» Уві йо діз ее беє дев фен бек Уві вів вів Бі Бег Діз Мех
Ма 3 ідо
Вне дів йо БіУ Аід Зек вро Маїф їв Уві Тер бів Ту АЗВ Аве Баг 145 Її ї55 їв піу Мщі віз Аів дк Аж фух фей їв Те дар о гец бег Аів Меї Аг зх ща Ул діа Абр ііе С1у АвроМеї Агв Буз Ту АТ Уві сен омаї Туг его бух іа і Те деп оахов віх сви сіб Те або Бі; іа) Узі ев Ні Узі Аврв мі Бі 155 зав аа
Ні бів дбв Щіе бро Те бак Ху Маї Без во ді
ІВ іх еВ «210» 8 «2115 34 «212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» праймер СМерЕ «400» 8 саспатвває зватсівватє саассзвінс ВВЕ За 2105» 9 «2115 37 «212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» праймер СМер!А «4005» 9 сваашстівВї сзаавосВЕиЗ всвосссака ЕСЕ а Я? -2105 10 -2115» 660 «212» ДНК -213» вірус мозаїки огірка «4005» 10 азіввзсваах ствавісває савтівствис свозассвІс васвтсВТЄЄ Все свсвеЕ щи
Тсссвстссв сс с сесвааВсК ВассЄЄвове ЗСтТнОсновВ ровВисКсВ 158 свастїізаса зваскісяво звсбввсвс сесеастеєсз вссасссваає стек арее о
ЗЕ т ваша Ка ї ї ще ства зіщвгсасняеК ЗК Екаска сестаадасє вегаддааа, Х ЗНЗ ваше Божик свЕ ВЕК шишка соска чина СЕК вассеЕтенЕт сттвісзЕв Тзазавентв тв зсссв зЕтсзвЕсяє Кая КаТКаЄ За завазаскте жтЕсСЕсвсає ссазаазїтсва ВІВ соосвааасЄ свасесаасс за
ВІВІвЕВІва сзЕБІССВтаа ЗвЕТсстТвсс СсттсеЕВех Тасссвеквс сеспакККЕХ Я
ЕСТаАТЕЖТЕТЕ секасвнаВС стсвсснВОВ Стрес саЄс зетасестиЄ аск еваво ака газастяяся зсааяссвВеЕ вес К свист ис всвсхвакак аввсвасаке ав зизазківск ссвісссове втаїесаний васеесвсак Седасвасава сан СЕК
ОжКаснссв зсвісвзвса ссзасвїа: сссасВістеЕ вдЕасссс ВЕК БО «2105 11 «2115 20 «212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» праймер рЕТ-220 «400» 11 «210512 «211552 «212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» праймер СМУ-Н83-ІВ «400» 12 актах вессткзава каствессса сЕВОЗОВІС СКС ВЕ ща -2105 13 «211552 «212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» праймер СММУ-Н8З5За!І-Н2 -4005 13 ов пвситсвасВ сстесвЕтавссо ссватавакх тре свве сстаасвіАс ТВ е «210» 14 «2115 672 «212» ДНК 213» штучна послідовність
Зо «220» «223» КДНК, кодуюча СМУ-МИН8З30 «400» 14 люфууриви или пре лрелулусуттих ел рр ох лет л ою дк ху Кк ек зу ух ух ах ги дет тутсу ви о путвЕщесадс зас саавик «чат каа сстастсвева тІавссваЕсВ СЕЗ що век ива пе весе 2 КЕ кв вег жесвсви г завгтттвзе ЗЕ З іх те щх т кевсКисККВ БК КВК свои СІВ ЗВУКИ ко свисащетЕЕ сЕсвасєстаа ТазвасвткВ ссавссеВіс віссВастВх тазове ї188 сю У ня ефлуєх М оку туту ку тутутькоя я о го ди а фура и ура ук зудІх внесе кзе везиїкзася сстетавасст вес свЕ сс секта еВ ка дяк дк ків ин му т ж между туту тю М туту о схе ух кутю б ому «ву йу рер лена соассажне савазссвтве Вісткастаї ватазавЕшу сист уоос сваКОсНКуЄ с ск дих ку я пу ртуттю фо уі ин пику уд ин тк тк ких сир ф фе фе уки ев уоит ит я ЗЕ зскезаТати зізавазВеї свт свсвс весла наростає Тібвосивав Ба
НК пут муки ту фут сфулх тв дей пдв и у как Ук Кк аранине КК ие уж КМ АН
ТЕтваттїсвза ссвівТвВВг васавтТссЕЄ ваашіїсстр ссжсттсвра ссквіссвіх ча й ДЖ ж ери куки г. ооо писк аж вивих дев пи и и дА весВсКа Є стро асехє Треоввасвра всстсвссвЕ сВсТЕесКвА тслитасасх м «жу - ор ема ож ож в - шу сут ву у В ру студе оусуй и фе ут ерудит ху лу кретев ик в туту пла вас тссаансав савсаватв Тв сват тека к Вис аЄ ми й ж ее У ко перш кін мер я фу р вх ди щи о я ке ди аж З е зівЕвсваси твивалавтя свссвссссс вста азвасвасвес ЗслсЕЗЕаса оаа вдос ттаЕ таАстТсаТЕї вас сассавсвів стсссасвіс свв ща шими ММС рем ювив Мова хво ЕВ ТЄ се едикт ник вад яти
ЕК С ах чи ж 2105 15 -2115 55 212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» праймер СММУ-раагза!І-В «4005 15 зу уки вк и ук уки редут куки и если Вимити ща ще щ-Е дасСЕеКаСВ Се БВССВСЄ тЄвлЕВЕ кс исвсввссає заасоКсЕсс ах та «210516 «2115» 666 212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» КДНК, кодуюча СІМУ-Мрааг «4005 16
«фуру иує ть ту ери вужчим м и вия ек уже у ж у ус ач дж ких дж Де жо мол дян оці ж сх их асевсвиаає СсрХтовссвс тва зссстс заввсввссВ сЕсЕссваВсВ СеВЕсСВсВХ мк су. феша а сфе чад дк и дж жд ж у при пу тут Я сту у фут кит зе секс вес сосен катеставсї їтававтст всвсавсав хе
КУ КУКУ У ХХ шХ г» Б а її т Сх
ХОМ ОК м кутю ту В паю ФУ туту лк у фе а у отут пий пу лу в ко же я их лу ля див в чих см сеЕ вас ставіззвас вттаксвасї ввісвіссва стат сс ие
Ту 5 Ю Ех 5 ЕжСЕ її сек оУ жюукііх Уест У я Уже іх с пику и уки сть о у и Ах візвенавств авсествтав асстввевсас сво ссВКах Хассе зааВсКа аку о «ух зх ах и их 0 аж ож ик их Мод зх пу ах Ух з зак Мр я а Ко ач і КК и ун в ут у и п я чу ЕІ залйаєвЕзсс ктЕБЕТСТТта СтаєЕВТаВа зЕВЕТВЕТаХ тйасстватес ВЕссВсекаВ зав твіззісдава зво с всесвіт сва вЕтсваветта асеежексЕт над иВ БІ
МЕ Му МАЗІ ЕМ ку ММК ум ук лою скх ЗВ дО КК ск ОК. жНЯМ МААКИХ М ХХХ, ан НН жу и у и мив Ж уко дк доб дж фут с дефсдолудодя уж пд сд дме де, аз чкавосикХ ВБІК КсКсаззаВУ СКС сви СВК яке нн о Пр о о о и в А ИН АК НИ ЧК АНЯ аих же а ТЕКС сенавсстКа сет вЕ ас зЗвта сСвсвсаСх м
Тх Х ХУСТ УЗАХ ХХХ ХУ жо ЇВ д т 7 ж Он нн а о п нн ні и пи ке я пекли фу мова Я
ВЕ хезчнн стзасавзвеаа Зо сВКах ВаТстТессве свеУкаКЕКиК свЕесасеНЕЄ БЕ м в и НИ ИН НИ зику фу диню и и и уж домх квсзтнзваз зкізсвссВт сстсвтЕКаХ ссллазвасвВ зКВсасКсва Зо саВ ве кхЗЕІВсТс Вів твасех свавсассва ситніїссса свісівввит вобсссввух у -ММмдуМяМиМ ема МЕМ МЕТ МІ БО» вишу КК де з до свя Бе «2105 17 «2115 464 212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» КДНК Нізб/ТЕМ/С «4005 17 вам п ек паж жа у ом коки у в Ж Ух я хек НО о вв ою руду и о стаквиссса тсаксвссак сеасасваза всстЕсастту ссавскссас ато їуз джу З ка Як оф Ж яку ту У ох гу з суфкку вх З сх де тд аа ЖЕ сх В де Ж ЕЕ В поки ик Ве щи ї за семи ДСК ВСІ СВсСя явяуКасссх кквасхксаБ ССС Я зу пе фе ревом зейхс хор ур и и фер ииЯ оджах их ту ух прик рух ска ух еЕУ вІввастТвВУС звивин севазаваааи За евеВеТ сс Зав асе іх
ОО - - Х їх З І ХУХУКУЮМО їх го їх жити какає с Ківі ЗК крики оо кохана АХ систвствтЕ сетраскавс вабавссавс стсстсвст заасавотсє всизесттаЄ ме ее фр ким рр яю ку чи сн и НН Не НН тела «ссхасЖжЕхсвВ твресакссвЄ сс тссв азтавваатає тТасКвасини Сас ЗБ -х ж практ жи хе ту ду тютюн КА ав ту кри ви уж с я ож п кем п уу я І сх ЗІ авсївваїза всіваавстї савсвасвавс сіваваснез ваїїзвівїє ссвнснвава зви декж Я аву ау Ку сур ув ВК вхк кер пику сви р кох гу сах схо гу ух «ВЕЖА АСК галас ассстсвсвя октава Вс твсв Вста х чав поет дивом дупу ирих зоре ср сажі де свита стай віссссзовс звсвнассВс асо нов ЕК «2105 18 «2115151 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» сі -31-Нізїб/ТЕМ/С «4005 18
Мет дів Мі ні Мі МІ Ні Ні біз АФ обев Тур Бе бій беБ Ні
А 5 їй ї5
Мет дів ве Те ні бій Єву реє го его дао Уві дено бух Ті Тів за 5 З
Би БМ: бер Бій Бебоїви зве Абе о біу ее о бве бів Яще Тук біл гу ща У іУу5 Бі їв щі Уві Бго біц бег аб АгЕ Та сен се їв оСух Це
Б 5 БО
ТВе бе абов 5ев біб реО га Абр осв) аАшп Бегозег Ада Пе зву Рго о а 5 Ба
Те вне дРЕ Аа тів Аг Рг ів 5ег АБробуз дов її із Азо уз
Ті Ті біз біп гео в5о Бу5 Гео суб Бе осіб Ні біз бо 010 ТВг 18а 185 11 піз Сів Зк Уві Бго Афіз дО о їМе бе 0іб Суб Суб бег о Ббе бе їв
І1ї5 15 175 їйг сів Ба іп пів ве ба із Се гео бів бек уві бно гбух Бевг ща М ї5а во вай аб Біу БрРОо Біт Сух 145 ща 2105» 19 -2115» 30 5 «212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» прямий праймер сі! З1МАТІ «400» 19 іІасассаща ссісссасаї ддсіссаасд -210» 20 -2115 32 «212» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» зворотній праймер сі! 31 МАТ «400» 20 саїасюсад Насідсдаї ссасідша ад
«2105 21 -2115 138 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» сі -31/А «4005» 21
Меї дів без Ні Меї діз Бео ТВе о МІ5 біз гер БгОо бро 5ег Ав Уві 3 як а ї5 аГЕ фу Зі їі бец бів сво Філ Бго ї8о бек збе БУ Би бе БІВ
АВ Отут Бій бух Ку БіШ ТР оБіу уві го біш бегс дев АБО Тве Гей 35 за ах ін іви Суб баи Тве о бее дз бек бів РгБо Рі) агЕ фей деп обЗег о бег 5 55 БА
Аїя 18 Бе оБго Тує Бе агри дія ТіК др БгОо ів зей Ар гу ах ща та ТА во
Ті Ті дО ух Ті Ті біб Біб сцеб Або губ фей о гує Бпе БІТ нів ях А 5 біб Бго біб ТВе біб ї1е Зев уві Бра лів Арон? бне бів Сух Ту за їа5 їх
Зак обнв ї1іе Єви Таб гів рве бій біб Бнє бе? Аіз бух івц біб ее 15 ще 175
У Впе Ку бек Бай Ажи Зб беж Бра дій їз ї35 -2105 22 -2115 136 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» СІ! 31 «4005» 22 щен Ні Меї дів рРгОо ТвеонНіз Бій сви Бе Без зе? хр Уві АРЕ фух
Е З її 15
Те ге їв Біб ен бій Бе сво 5Зег дб біу їв вен бін АхВ оТує а а 38 біп БУ Куб бін Те Б3У Уві Бео бій баб ап деш Те га ів бер ча 4х
Сух Га ТБгобег Ахо баг бів БеРо Бго дев во б» беб бее діа Ї18 5 55 Ба
Ківо Роб тує Не агв дів Єв дев о бко гез аг зо вух ав ів 118 55 а 5 а
Азо бу Ті Те біб бів (во АБО імя ец овбух ве Ів НІ5 0Іу Бго ни ща З сій Те ба бів 5ве Уа Бго дів Ар оївВе Ве біб Суб фу дев вне тав 185 118 їі вен о тТВР о Бо бій бів Ре ЗБ віз Суб сем бін беб УДО вла
Муз бег беу АбпоЗек у РКО Та ще їз 2105 23 «211527 5 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» АК 2-28 5ЕО ІЮ МО «400» 23
Аза у 5Зег бін баб ТИР обег Ада бі аг о ЗеК" дке древо кв АгЕ рка і 5 18 15 аАгЕ Аг БІіУу баг АкЕ баг АЗів рго бев Зер о дів еВ а «2105» 24 -2115 10 «2125» ДНК 213» штучна послідовність «220» «223» паліндромний Сра
«400» 24 дасдаїсдіс «2105» 25 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» СІ -31-А/Н156/ТЕМ/С «400» 25 діа Ніх ніх Ні НІХ Ні Ні біо дябобеу Туб БВо бів 5еБ Ні5 Меє ї 5 ща ТУ дів Бге тївконНІЗ біп ів Бра бро дев дез Уві йрЕ ої ТЦ ТВ ви тв З за їй ву іа го ізо беб Ага щі Бе; зе) бі) Аз їує бів Бу Бу а ча 45 вій іїнебові Уві Бе) біз ее дека дека ТБ фев обвоа бец оСує ву о тве ха а ва дес дз бег бів Бро Бго йРЕ іо йвп бек бе аа тів Ба) бгє Ту 5 та В ща вне АгВОоАБа щі дев Бго ів Зеб а5б рух дв Зі 216 зр бує Ще 85 ЗО За їі Бі: бій оібв Ар ої ви фу вне бів Ні біб бво щів Те 51 за 15 312
Ті зе» уві Бго дів дер їйе вве іц Сух ів Беб ВЕ Ті Бен Те ї5 5 а 154 їів вч бій біб Бе бЗеб діз Сух їз біз БебБ УВі БЕ бу бак Се 135 ї35 та се шу о я ях вапозек су РгОо сі Су 145 а «210» 26 «2115 137 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» сі -31/АоМ «400» 26 діа зег ніх Ме Афа рео ТБе Мі5 бій їеб бБо бро Беєб Аяв Уі АгЕ ї 5 ї8 15 бо Ех КТ хм: жі: т КИ їТУює ї ях Жуки ум. Ж сої гр М БТ дек бу ів бів фе біб Без біб Бго Бей беб ага біу ви іви Бій Ахо 28 5 за
ТУук бів бу рух «(и Таб оЄЇу ча го біз баб вза АБЕ о ТвБ ів їв ї5 ча дх їви бух Бер тТНг ее да бе бів ко Бго АБ іен дБ Забобак лід ща 55 58
Кіе гец вРО Ту" вра Ага Дів Щі Ага Ба Бер баб АЗОВ гу ААУ Дів та ТВ по ж Не іт Хе Те ек АК де сх дра ге о Он КН о НН Я НК У т1е дев вує 112 ів біз бій ев АБ оку Сеи вух ВВЕ бра НЕ 0 во Бі ТВБ обі бів бег Уві Вге вія дБ Те РНаЕ бій сСух вух бег і: Ж сб; бігу ка ги жу Кун бони о мух мале; фо в вве (18 беб таб оті База іп Бій Бе баб ді бух БО ОБ бас Уві 115 ї2а 55 рю «дя док яд и
Бе уз век ген Абп о бев біУу БО Бій іа 35 «2105 27 5 -2115 150 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» СІ -31-Нізб/ТЕМ «4005 27
Й ехо, й Іа ден 8 ен ен Я - (4-4, ду і т Ж у М Та Ж ЕХ м
Мет дів Мі Ні Ніх Мія Ні Мі бі Азпобвеу Ту КВе Зіз ев НІ ї к з їх
Кашу в їзкчих СЕ МЕ ва» тії Є ту с мк пом У оо ем ха Тл Ж
Мет Аза вБо ївеоМі5 бів ів вго го Бек Ар Уві вгЕ фу БА ОБІВ «у я гу 2 о за
Кох пл ; я хо м я Код її доки КН ті шує Док уз їх їжи ім Б бі обо ви баб од біУ КГБ Ге ФО АВ тує ої ув 35 о 45 і їїтЬь тТвркоїів зі фур, із; Мам ку ач ТВі фам; фанів: єю мі
У У БА ІВ ОХ У щі вч ЗА ЗВ ма ОБГ ев оц ОХ ух жи ке КІ
Ви ЗО БО. ж У У КЕ гі ге ; с хо пух оби у А жо щі дик
Тпгобаг йо бек ій Бго бро Або оіви дп бег оЗаб дів ЗіБ ву го а 5 що
Зегм ТМХ и Ху дл - я Хана Мр їх ща: Ж дю їз - че ж хе фр їук Раз голів її АгЕ го іо зеб дробу Ба дів Кіе АБр ух мех т Ух я Кок: Ха і фу їн ї дк згж ЗК ї г» ек жаху У у. Ж
Її Те біб ія гей одер уз гей гу Бопе Зі Мі Бі БгРО бін о Тиг ди де ча їв ЖЕ 118 пт ж о кох А дже, Кл Джем Фі Кури чи фу в хгх см Ге ЗУ їж піз їі Зав уві Без дів Азов оТве ВВв о б0іо Су» фу ев Ве тів Ге ча мія не
МЕ ке Аз зу чи ї Ох ж ща ско ик ДС жуки ОВУ у: дух ре Ук чех Фо
Таб тів іез Бі Бій бе зегб Дій Сух зви біз беб Узі БОБ фу дег ї58 335 1 ї з во ою Фо ЯчЕоу У а кит, ри Ч іви АБЗ зе бі ка бій їа5 їй 210» 28 «2115 149 5 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» СІ -31-А/Нізб/ТЕМ «400» 28 кт ці фе пф ці ці це мі ке зло тя мА ЧК ж рю кед ів ніж Ні ні НІХ Ні Ні Біб дей їву ТУЄ ББе бій бе МІВ мех
А 5 їй її
Аіїв Бго їв оНі5 бій гез Вго Бго беб Азов Уві АбВ обу Ра тів ве
М ай за ін боб іп бе вв Баг о АгЕ Бім Ба фе Біб АБО тує бін Бу ух 35 48 45 кі жи й ЗР при жі дім дещо ж Ж зії фл. фі тд ру жи піц тве біу Узі Ве 530 Зве Ах дев о тТВБ ген генної Суб бе тв ще Б Ба дак джр хек іп рРго Ре АгЕ Беводео Баг обег Азія Ті ву БР Туг
БВ Уа їв ща
Бпе АгЕ Лід ТІ АгЕ БВГО іш) бебБ аз бух вх Ті Те Або Уух ів
З : ВО З за з тів Бі біт ви до іже їжу ух фе піп ніх бітів бро сів ТВе обі їва та5 11
МКУ с ї хв с я о Ух тХ ТУ я пік явки С хо КЕ сх г їі Зв уві бРОо Аза Ах Те вве обі Су фу дес оКНна Тра Бей тн 156 195 ті їн; ім ію йнаЖш сш бло жк Кк піц Ск ми Бве фоє Каево бе їіш свв бів бій ВнЕ оз ві бух ГБ брак уд Бе Куб Бер геу 138 135 ІВ
Авп обер біфу БРО бій ї45 210» 29 -2115 139 5 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «223» сі -31/А/С «400» 29 меж Аза ек Мі5 Мек АТ Бго бе нів Бій Бео Бге ро Бегб А мі ї 5 їв ї5 аг гу ТТ Ті ів Фів їв біа РРО їв Бек Ак БРу ів бе) бів а йо За
АВ отТує БІЛ оїУує ух со ТВб Бе Уві Бе біз зве да або тве веу 4 45 іви ви сКух ів отве Зее Аж ЗеК пін бБго бБго АР бе) деп обВеб баг 5 55 Ба
Аів їіе бецобка ТУБ Бе дге дів Кі агв о Бго во бБегб Ах ог ух дл
БУ Та 75 ва
Що ру хуя х р зх і М іх: т гато рес ТА су У; г
Її Гі Азов оБбуб5 Ті Ті бій біб бви йб5р сум Без бує Бо бій НІ5 5 а Зв
Бін рго щі ТЕ бій 0іе беб о мві РБго дата бо ТпроРнпе отв Куз Бух ї98 зах що
Зве Бне Ті ген То їі без біт бій Ба За" Аза бух Бе обі увб 115 ХО 125 чаї вне ух заг мем ах ее дІУ РБгро обі сСух вай 5 -2105 30 «2115 138 5 «212» БІЛОК 213» штучна послідовність «220» «р2З» сі -31/АомМ/С «400» 30
Аква бег Ні Меє Аіз Бго тТче Ніх бів ге) рго рго Зег од МВі Ага ї 5 18 ї5
Куб Те ЗТ Геб сів Беб бій Без їви ЗвеодгЕ біу во їво біб дав
ТукК шій Бу гуря біз тТпРоФіу Уггі Бго бій бегбойеа дв Твого без ів Сух ів їве Зев йо дев бів бро Бго аг ів Ап Зеє Зеб дід
Бен 5 ті ре жи МК їіе его бго ТУубБ ббе агв дів Фе АбБ бе ізо ве Ар о іуз да її
БЕ та 75 й ів Ар бух Ті Ті бів біл ів йо фу їв Ге Ре Фів Ні БІ це ща зх
Бго бім ТВгБоб1о) Ті бег Уві Бго дід вро оїпг БВ обічц Сух фух Зве
Рне (іє їви Те бів ін бів бів Бе зве дів Суб бе с 5ег Уді
ПЕ ух Зб ву АБО ді Рка бів Сув

Claims (15)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Застосування композиції в способі профілактики або лікування атопічного дерматиту собак (АДС) у тварин сімейства псових, переважно домашньої собаки, причому ефективну кількість зазначеної композиції вводять зазначеним тваринам сімейства псових, переважно зазначеній домашній собаці, і зазначена композиція містить: (а) корову частинку з щонайменше одним першим сайтом приєднання, при цьому зазначена корова частинка являє собою МІ Р; і (б) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген сі--31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сіЇ-31 містить або переважно складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕО ІЮ МО:22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 95, переважно щонайменше 92 95, ще більш переважно щонайменше 95 95 і ще більш переважно щонайменше 98 95 ідентичності амінокислотної послідовності відносно 5ЕО ІЮ МО:22; причому (а) і (Б) зв'язані через зазначений щонайменше один перший та зазначений щонайменше один другий сайт приєднання за допомогою щонайменше одного непептидного ковалентного зв'язку.
2. Застосування композиції за п. 1, яке відрізняється тим, що зазначена МІ Р являє собою рекомбінантну МІ Р.
3. Застосування композиції за п. 2, яке відрізняється тим, що зазначена МІ Р походить від вірусу рослини.
4. Застосування композиції за будь-яким із пп. 2-3, яке відрізняється тим, що зазначена МІ Р являє собою модифіковану МІР, що містить, по суті, складається з або, в альтернативному випадку, складається з щонайменше одного модифікованого поліпептиду МІР, причому зазначений модифікований поліпептид МІ Р містить або переважно складається з: (а) поліпептиду МІ Р й (р) епітопа Т-хелпера, причому зазначений поліпептид МІ Р містить або переважно складається з: () амінокислотної послідовності білка оболонки вірусу, переважно амінокислотної послідовності білка оболонки вірусу рослини, або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, яку мутують, являє собою амінокислотну послідовність зазначеного білка оболонки вірусу, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначений білок оболонки вірусу демонструють ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 90 95, переважно щонайменше 95 95, більш переважно щонайменше 98 95 і ще більш переважно щонайменше 99 95.
5. Застосування композиції за будь-яким із пп. 2-4, яке відрізняється тим, що зазначена МІ Р являє собою модифіковану МІ Р вірусу мозаїки огірка (СММ), причому зазначена модифікована МІР СММ містить, по суті, складається з або, в альтернативному випадку, складається з щонайменше одного модифікованого поліпептиду СММ, причому зазначений модифікований поліпептид СММ містить або переважно складається з: (а) поліпептиду СММ й (р) епітопа Т-хелпера; і причому зазначений поліпептид СММ містить або переважно складається 3: (ї) амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ; або (ії) мутованої амінокислотної послідовності, причому амінокислотна послідовність, яку мутують, являє собою амінокислотну послідовність білка оболонки СМУ, і зазначена мутована амінокислотна послідовність та зазначений білок оболонки СММ демонструють ідентичність послідовності, яка складає щонайменше 90 95, переважно щонайменше 95 95, більш переважно Зо щонайменше 98 95 і ще більш переважно щонайменше 99 95.
6. Застосування композиції за пп. 1-4, яке відрізняється тим, що зазначений поліпептид СММУ містить або переважно складається з: (а) амінокислотної послідовності білька оболонки СМУМ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або переважно складається з 5ЕО ІЮ МО-1, або (Б) амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності відносно ЗЕ ІЮ МО:1, рівну щонайменше 90 90; і причому зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту, містить ЗЕО ІЮ МО:23; або зазначена амінокислотна послідовність, визначена в (а) або (Б) даного пункту, містить область амінокислотної послідовності, причому зазначена область амінокислотної послідовності має ідентичність послідовності відносно ЗЕО ІЮ МО:23, рівну щонайменше 90 95.
7. Застосування композиції за будь-яким із пп. 5-6, яке відрізняється тим, що зазначений епітоп Т-хелпера заміщає М-кінцеву область зазначеного поліпептиду СМУ, причому зазначена М-кінцева область зазначеного поліпептиду СММ відповідає 2-12 амінокислотам 5ЕО ІЮ МО:1.
8. Застосування композиції за будь-яким із пп. 5-7, яке відрізняється тим, що зазначений епітоп Тп-клітини являє собою послідовність РАЮОКЕ, причому зазначений епітоп Трп-клітини містить або переважно складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮ МО:5; або зазначений епітоп ТП-клітини походить від токсину правця, причому зазначений епітоп ТА- клітини містить або переважно складається з амінокислотної послідовності зЕО ІЮ МО 4.
9. Застосування композиції за будь-яким із пп. 5-8, яке відрізняється тим, що зазначений поліпептид СММ містить або переважно складається з амінокислотної послідовності білка оболонки СМУ, причому зазначена амінокислотна послідовність містить або переважно складається з ЗЕО ІЮО МО:1, або амінокислотної послідовності, що має ідентичність послідовності щонайменше 95 96 відносно ЗЕО ІЮ МО:1; причому зазначена амінокислотна послідовність містить ЗЕО ІЮ МО:23; і зазначений епітоп Т-хелпера заміщає М-кінцеву область зазначеного поліпептиду СММУ, причому зазначена заміщена М-кінцева область зазначеного поліпептиду СММ складається з 11-13 послідовних амінокислот, переважно 11 послідовних амінокислот, і більш переважно зазначена М-кінцева область зазначеного поліпептиду СМУ відповідає 2-12 амінокислотам 5ЕО ІО МО:1.
10. Застосування композиції за будь-яким із пп. 5-9, яке відрізняється тим, що зазначений модифікований поліпептид СММ містить або переважно складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮ МО:6 або 5ЕО ІЮ МО:7.
11. Застосування композиції за будь-яким із попередніх пунктів, яке відрізняється тим, що зазначений щонайменше один антиген сіЇ-31 містить або переважно складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а) БЕО ІЮ МО 18; (5) БЕО ІЮ МО21; (с) ЗЕО ІЮ МО:22; або (4) БЕО ІЮ МО 26.
12. Застосування композиції за будь-яким із попередніх пунктів, яке відрізняється тим, що зазначене введення зазначеної композиції знижує щонайменше один параметр або симптом АДС у порівнянні із зазначеним щонайменше одним параметром або симптомом АДС до зазначеного введення, причому переважно зазначений щонайменше один параметр або симптом АДС являє собою рівень або ступінь тяжкості уражень шкіри або сверблячки, і більш переважно зазначене зниження зазначеного рівня або ступеня тяжкості уражень шкіри визначають шляхом тесту бальної оцінки симптому й ураження.
13. Композиція, яка містить: (а) вірусоподібну частинку (МІ Р) з щонайменше одним першим сайтом приєднання; (5) щонайменше один антиген собачого інтерлейкіну-31 (антиген сіЇ-31) з щонайменше одним другим сайтом приєднання, причому зазначений антиген сіЇ-31 містить або переважно складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з 5ЕО ІЮ МО:22, або білка з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 90 956, переважно щонайменше 92 95, більш переважно щонайменше 95 95 і ще більш переважно щонайменше 98 95 ідентичність амінокислотної послідовності відносно ЗЕО ІЮ МО:22, і ще більш переважно зазначений антиген містить або переважно складається з білка з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:22; причому (а) і (Б) зв'язані через зазначений щонайменше один перший та зазначений щонайменше один другий сайт приєднання за допомогою щонайменше одного непептидного ковалентного зв'язку. Зо
14. Композиція за п. 13, яка відрізняється тим, що зазначена Мі Р являє собою модифіковану МІ Р вірусу мозаїки огірка (СММ), причому зазначений модифікований поліпептид СММ містить або переважно складається з амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО:6 або 5ЕО ІО МО:7.
15. Композиція за п. 13 або 14, яка відрізняється тим, що зазначений другий сайт приєднання являє собою сульфгідрильну групу, причому переважно зазначена сульфгідрильна група отримана в результаті реакції зазначеного антигену сіЇ-31 із М-сукцинімідил-5- ацетилтіоацетатом (5АТА) і при цьому переважно зазначений щонайменше один антиген сії -31 містить або переважно складається з білка з амінокислотною послідовністю, вибраною з: (а) БЕО ІЮ МО 18; (5) БЕО ІЮ МО 21; (с) ЗЕО ІЮ МО:22; або (4) БЕО ІЮ МО 26. 3 пкеекн Ба ре ау, МСО1(5О69) з сМУсе ьь Как ж г теж Ох ВНІ 1 рЕТ-СМУМН
Фіг. 1
Козин о ав 0 кових Почув и о си ст им ет х пк. й лх 7 т ш ії ДУЖЛМЕИМЕ КН ЛКЛВТХ, ВК ЗХ Вк ча н й МО иа Пр Мих а а З МАКИ ВУЖ МК. ТК тя зх да шт : г НІ У т. АКТ Дшчеть резерви іо т : пами рел МЕ Кука : ОВ їх : Жов: ої ї т т хх : ї : га й ї : ї: Бої фр діленні кв ти ко . ща ; те те ТК тдотутуттуєкоснююю и хни : Шо йо ще ще : БозмН км:
Фіг. 2А ня В КК п, ті ПДК с. ОО А а Е ши Що М Ба ДК ВО ПЕ КН Ще ШО: ОМ о ок Ж їх Мт ОЕМ В В м о ще ОО САМО ПОХМИН Пи ох СКК В КЕ ХОМ ХО т х ех АК МЕДИКИ сокрвеююю В ЛИШНИВИИХ ОН ПЕВ КЕ я ПАЙ п с оон ЕХ ПАХ ПИ ОПТдЕНИНІ Док с ОККО ЕН: Є Ми р КК М БО ПОВ СПЕ ОО : ОККО тв ВН Пен КН зо НКИ ОККО сх В ВНИХ КЕН дев ОХ КО я й ПЕ ЕН ВО ШК В КК ее ПО ІОВ МКК В ВН ПК ж ПМК ооо ЯНВ о к с кан я ЗУ ПЕН дп ОККО СК В ВВ ПОТ ПЦМ СКХККН КАК Ки КОНЯ ШТ ТИКИ, Еш, НН Но ен о ВВ ТОК рвв шо ШЕ ПЕК ЕК ще ОВ . КК ПЕКИ ПТПОИК ТИКИ ПИММИШИСНТ М ПИВО ІМК В По, ще ПЕ В - иа ПИТ ПЕВ ПИ ПИ, В В М В КК По ВХ пи ОН пл, ПІКИ МКМ ОО ПК ПИ ЛИПИ СШИО ТЕ ВВВВВННВ фест ПИПИЖВИНИ ПОКИ ПМЖ ПИШИ. п От; ПВХ, ФЕН ДО ЕК т ПШНИВЕИ ПИ ПОВ х ОО КУ В ОО ПН НК КВ. п ев и В ОО - ПЕЖОЖЕКУ ЕТ МЕ Ж ОО и шк
Фіг. 265 в: : Е ї ; ! : х : ї : х : х
: . : М х щі МОХ й КЗ : щ : ї п ї ї Не ї ї с : : хз -х с НЯ х
Фіг. ЗА " і тих Ж: ! : ; І : Її : : і і І і : 1 І: і : і : і 1 З 3 : ; Ж ех х о х ТЕ ї : к щ- Ж пе ж
Фіг. ЗВ
ІГ.
хЖ. : п т Ж: і ї : ї ї : ї : Її ї ї ї їх : ї ШО Е її я ї Е ї ска х ЕМ х я їх МЖК Ж дк Ярі ї ПЕ АК ПЕ т : о це Жкекох АК. -- ж Бк ж ж
І. судо р Же КК кий хх КУКМЖ ПЗ НХ. ОКУ Ж МАВ Ж он МН ТЕН. ЖЕ Кк п - ТД Доти ук пет сок чн им МОМ ПЕ ОлЕК М УК діжа. пкт дрожхоюю. сш мк, т ТК Кдювовоюмй здрюю ПЕВ ОПО 0 ЩО ва ва Зах; ток К Ж КИ Мате ХМКП ТИ НИ МОЮ ЕКО КУ ВЕ КЕН по: і Бе - Ж: : КУ ї ОО : ШКО ха Х У -к Мах. ххх Мена НА Фі АА
ІС. 4
- НК КК КОКО 005 ; ня ПОВ х. КК «ЕК ПЕД ПО В. ДЖИНСИ ОПЕК ИН ОХ ОК ВК, її. МИНА я З Ж КОЖ ПЕД дЕЩК АЖ Ки оо с КЕ ПВ З ПМ зокре шо 5 НВ ПО 0 КЕ ПОТОКУ ВК ЗХ БЕ п Ж: ТО Ко ШИК о ще шо КК п ЩО ВЗ ЕВ Бе Зо Ж КК ех МК що: КК щи і , | с З ПІ ЗК Ж ПИ ДК вве, ЛИПИ МНИХ ПИПИИИИ и: ПИ ТВА ВЕ но В во Чо о . ВЕ С нов ще Ко ЖЕ ПЕПОЖЕВНИ Я З ХО
Фіг. 48 ' ї доми. ММК. ОВО МК МДЕ ВЕ гляК ВО ЖИ ТК ие щих МЕ . МО ШЛН ПК дак це а пеки ак ККЕ ік ІК пи ОКХ Мккеух пев СЕК, 7 ми БеХНЯЯВ ПюКЛО щі е ЗВ ОК ко хе Уа - сх ой Й що : В ОЇ : : щих їх з ях ПКУ Ж Жозе м за и
Фіг. 5А
КК КК Ко ЗОВ В ВЗ КК о вн о . СО . ХХ . ОХ В й шт г. сх ВО нс М о 1. її пн ПЕ ЕЕ З КО с ОО з он У 252 о г о с с Мф с. 2. М я ЕС ОК ТЕ о МЕД и в В о В оБаОВ 5 її. я. КК п ОКО поши МОЖ оо В в 0 с о ПК о НН п - т. о 3. МИХ В МЖК ПВХ пня СО п ще ПЕК ЖЕ ЗВ ЩО а в
Фіг. ЗВ 1 2 3 ЩЕ вва яко МЕ зара шк нев М те ЛВ Щ
Фіг. 6 шк я вн
0. ваз що а (б
Фіг. 7 їх з в
Фіг. ВА
Виклечацня об'єм Оп са У х ГУ ї Е З -- - : Е їх х : : ТУ хх їз х. «2 я Е я ї ї : жв-н ЩЕ КВ ї КА їх 3 ї До фотон шо меми ен оунутетьтнях за да я ча зва Зк щи я ;
Фіг. 38 1 и 3 ПУ КИНИКНи В ЕЕ
Фіг. З
Викпюченно об'єм Ощ мов ї зве: . І зе ! і і; щі їз Ї Що я
Фіг. 10А
Фіг. 106 її й 5 й в ОО МК НМ ще с. В п ОеНН Во КФК я о В пох п М а ПОВ КН ще С КЕ ово
Фіг. 11 СМУ- МИ се АСВ У МВИЗО ЕМО В КК В КВК ко ВК В КК В КВ кВ нн КЕ с БЕК МК Ж ЗК КК
-5. що с я Ес Ж ОН о А В В АВ ОК ох З Ше ще и Вінн че чт ще фіг. 12 ' ж - " ж ; - о х Ея юн тк ш а НИ З з З хх шесетфнсння ОВК
8. іже ке - Я в та: лі Ки ж З ЯК те ре хх | жі і ві З ! ; ЩЕ ! ї щ РИ ше ШИ. ! ! і ШЕ їв. чу щ Ка х х г ї ХО у
Фіг. 15А 7 І-ї й З вана вва на що БОКВ й : о - С Її х - ї К Я в АК ж они ток в : я я дошк Ж ї ей ж У А КУ МУ сенннвс обпекти реоноеооосоооереосососоеостососо ев ем Ко
Фіг. 136
ФМГ. -
UAA201809978A 2016-04-27 2017-04-26 Лікування атопічного дерматиту собак UA126852C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16167264 2016-04-27
PCT/EP2017/059977 WO2017186813A1 (en) 2016-04-27 2017-04-26 Treatment of canine atopic dermatitis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126852C2 true UA126852C2 (uk) 2023-02-15

Family

ID=56024099

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201809978A UA126852C2 (uk) 2016-04-27 2017-04-26 Лікування атопічного дерматиту собак

Country Status (17)

Country Link
US (1) US10946078B2 (uk)
EP (1) EP3448422A1 (uk)
JP (2) JP7039561B2 (uk)
KR (2) KR20220162800A (uk)
CN (2) CN109562156B (uk)
AR (1) AR108333A1 (uk)
AU (2) AU2017256727B2 (uk)
BR (1) BR112018071965A2 (uk)
CA (1) CA3019653A1 (uk)
CL (1) CL2018002960A1 (uk)
CO (1) CO2018011087A2 (uk)
EA (1) EA201892003A1 (uk)
MX (1) MX2022009171A (uk)
NZ (1) NZ747512A (uk)
UA (1) UA126852C2 (uk)
WO (1) WO2017186813A1 (uk)
ZA (1) ZA201806503B (uk)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210009296A (ko) * 2017-12-11 2021-01-26 유비아이 아이피 홀딩스 아토피성 피부염의 치료 및/또는 예방을 위한 il-31의 펩타이드 면역원 및 이의 제형물
US11433139B2 (en) 2018-03-16 2022-09-06 Zoetis Services Llc Peptide vaccines against interleukin-31
BR112020017703A2 (pt) 2018-03-16 2021-03-09 Zoetis Services Llc Anticorpos monoclonais de interleucina-31 para uso veterinário
MX2021007285A (es) * 2018-12-20 2021-09-23 Saiba AG Particulas similares a virus del cmv modificadas por fusion.

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040024004A1 (en) 2001-05-04 2004-02-05 Sherman Barry M. Novel compositions and methods for enhancing potency or reducing adverse side effects of opioid agonists
WO2003024481A2 (en) 2001-09-14 2003-03-27 Cytos Biotechnology Ag Packaging of immunostimulatory substances into virus-like particles: method of preparation and use
CN101023103A (zh) * 2004-09-21 2007-08-22 赛托斯生物技术公司 包含ap205外壳蛋白和抗原性多肽的融合蛋白的病毒样颗粒
NZ554387A (en) 2004-09-21 2009-09-25 Cytos Biotechnology Ag Virus-like particles comprising a fusion protein of the coat protein of AP205 and an antigenic polypeptide
JP2008530132A (ja) 2005-02-14 2008-08-07 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Ｉｌ−３１ｒａアンタゴニストを用いて皮膚障害を治療する方法
EP1973608A1 (en) 2005-12-14 2008-10-01 Cytos Biotechnology AG Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
WO2008112674A1 (en) 2007-03-12 2008-09-18 Irm Llc Compounds and compositions as inhibitors of cannabinoid receptor 1 activity
US8465756B2 (en) * 2009-08-12 2013-06-18 National Health Research Institutes Immunogenic peptides of tumor associated antigen L6 and uses thereof in cancer therapy
US8790651B2 (en) * 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
JP2016509671A (ja) 2013-01-04 2016-03-31 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ オピオイド受容体のポジティブアロステリックモジュレーターおよびサイレントアロステリックモジュレーター
WO2015042596A1 (en) 2013-09-23 2015-03-26 Kindred Biosciences, Inc Treatment of atopic dermatitis in non-human animals
MA40824A (fr) * 2014-10-22 2017-08-29 Saiba Gmbh Particules de cmv de type virus modifié

Also Published As

Publication number Publication date
CN116688110A (zh) 2023-09-05
EP3448422A1 (en) 2019-03-06
MX2022009171A (es) 2022-08-17
AU2022291431A1 (en) 2023-03-30
JP2019515957A (ja) 2019-06-13
ZA201806503B (en) 2019-07-31
AR108333A1 (es) 2018-08-08
CN109562156B (zh) 2023-03-10
JP7273214B2 (ja) 2023-05-12
JP7039561B2 (ja) 2022-03-22
KR102469478B1 (ko) 2022-11-23
KR20220162800A (ko) 2022-12-08
US20190209668A1 (en) 2019-07-11
AU2017256727B2 (en) 2022-09-29
CA3019653A1 (en) 2017-11-02
BR112018071965A2 (pt) 2019-03-06
US10946078B2 (en) 2021-03-16
AU2017256727A1 (en) 2018-11-15
CL2018002960A1 (es) 2019-01-25
KR20190003948A (ko) 2019-01-10
EA201892003A1 (ru) 2019-05-31
NZ747512A (en) 2023-05-26
CN109562156A (zh) 2019-04-02
WO2017186813A1 (en) 2017-11-02
JP2022078254A (ja) 2022-05-24
CO2018011087A2 (es) 2019-02-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6655626B2 (ja) 新規な免疫原性ペプチド
JP6942313B2 (ja) Ｃｍｖ由来改変ウイルス様粒子
BE1023087B1 (fr) Antigenes du cytomegalovirus et leurs utilisations
JP3608642B2 (ja) 核酸製剤
CN110167587A (zh) 流感疫苗
UA126852C2 (uk) Лікування атопічного дерматиту собак
EP2252329B1 (en) Elimination of immune responses to viral vectors
CN110381994A (zh) 用于诱导针对寨卡病毒的免疫应答的核苷修饰的rna
CN109069605A (zh) 新免疫原性CD1d结合肽
US20090087388A1 (en) Immune regulatory oligonucleotide (iro) compounds to modulate toll-like receptor based immune response
JP2007508848A (ja) ソラレン不活化ｈｉｖに基づく免疫原性組成物及びワクチンの開発方法
JP2022538673A (ja) アフリカ豚熱ワクチン
CN101325966A (zh) 功能性流感病毒样颗粒(vlp)
JPH05328967A (ja) Ａｉｄｓワクチン及びその製法
Mikalsen et al. Protective effects of a DNA vaccine expressing the infectious salmon anemia virus hemagglutinin-esterase in Atlantic salmon
US8383598B2 (en) Immune regulatory oligonucleotide (IRO) compounds to modulate toll-like receptor based immune response
CA2466937C (fr) Antigene mycobacterien recombinant de type hemagglutinine de liaison a l'heparine methylee, procedes de preparation et compositions immunogenes comprenant un tel antigene
WO2022212659A1 (en) Multi-genic mrna vaccine compositions and methods of use
CN116583296A (zh) 使用核苷修饰mrna的通用流感疫苗
EP0783038B1 (fr) Pseudo-particules virales recombinantes et applications vaccinales et antitumorales
WO2023098679A1 (zh) 预防突变株的新型冠状病毒mRNA疫苗
KR101908905B1 (ko) 인플루엔자 바이러스의 h9 및 h5의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신
CA2204511A1 (fr) Production de peptides recombinants, analogues de peptides naturels hydrophobes
KR102211077B1 (ko) 바이러스 유사 입자를 이용한 슈도-타입 광견병 백신
WO2022043449A1 (en) Vaccines based on an antigen protein fused to a nanostructuring scaffold