UA120846C2 - Вибір штаму молочнокислих бактерій, який модулює гастроінтестинальний біль - Google Patents
Вибір штаму молочнокислих бактерій, який модулює гастроінтестинальний біль Download PDFInfo
- Publication number
- UA120846C2 UA120846C2 UAA201608948A UAA201608948A UA120846C2 UA 120846 C2 UA120846 C2 UA 120846C2 UA A201608948 A UAA201608948 A UA A201608948A UA A201608948 A UAA201608948 A UA A201608948A UA 120846 C2 UA120846 C2 UA 120846C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- activation
- pain
- spontaneous
- strain
- bacterial strain
- Prior art date
Links
- 206010017999 Gastrointestinal pain Diseases 0.000 title claims abstract description 105
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 133
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 92
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 76
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims abstract description 73
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 53
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 38
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims abstract description 38
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 28
- YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N capsaicin Chemical compound COC1=CC(CNC(=O)CCCC\C=C\C(C)C)=CC=C1O YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N 0.000 claims description 114
- 229960002504 capsaicin Drugs 0.000 claims description 57
- 235000017663 capsaicin Nutrition 0.000 claims description 57
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 46
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 38
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 claims description 29
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 claims description 23
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 20
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 claims description 12
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 claims description 11
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 claims description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 6
- 208000017228 Gastrointestinal motility disease Diseases 0.000 claims description 5
- 230000004941 influx Effects 0.000 claims description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 13
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 abstract description 5
- 102000003566 TRPV1 Human genes 0.000 abstract 2
- 101150016206 Trpv1 gene Proteins 0.000 abstract 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 abstract 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 abstract 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 127
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 43
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 38
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 31
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 23
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 23
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 22
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 16
- 230000004044 response Effects 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 12
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 12
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 10
- 230000008991 intestinal motility Effects 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 230000005176 gastrointestinal motility Effects 0.000 description 8
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 8
- 208000009935 visceral pain Diseases 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 7
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 7
- 230000008050 pain signaling Effects 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 5
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 5
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- ZBBHBTPTTSWHBA-UHFFFAOYSA-N Nicardipine Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OCCN(C)CC=2C=CC=CC=2)C1C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 ZBBHBTPTTSWHBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 5
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 5
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 5
- 229960001783 nicardipine Drugs 0.000 description 5
- 208000027753 pain disease Diseases 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 5
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 4
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 4
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 4
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 description 4
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 210000000929 nociceptor Anatomy 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 4
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 4
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 3
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 3
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 3
- 206010061958 Food Intolerance Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 3
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 3
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 3
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 3
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 3
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 3
- 108091008700 nociceptors Proteins 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 3
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 3
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 3
- 208000034347 Faecal incontinence Diseases 0.000 description 2
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 2
- 206010021746 Infantile colic Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 208000019430 Motor disease Diseases 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 208000027520 Somatoform disease Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000009460 calcium influx Effects 0.000 description 2
- UBAZGMLMVVQSCD-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide;molecular oxygen Chemical compound O=O.O=C=O UBAZGMLMVVQSCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 2
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 238000000556 factor analysis Methods 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003040 nociceptive effect Effects 0.000 description 2
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 231100000735 select agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C1C(C(O)=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)CC1NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 description 1
- 108091005462 Cation channels Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 208000019399 Colonic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011469 Crying Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 208000012258 Diverticular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010013554 Diverticulum Diseases 0.000 description 1
- 206010049119 Emotional distress Diseases 0.000 description 1
- 206010015137 Eructation Diseases 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010052402 Gastrointestinal hypermotility Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- AAORACFZMYMFCG-UHFFFAOYSA-N N-[(4-hydroxy-2-iodo-5-methoxyphenyl)methyl]nonanamide Chemical compound CCCCCCCCC(=O)NCC1=CC(OC)=C(O)C=C1I AAORACFZMYMFCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229920005372 Plexiglas® Polymers 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000015815 Rectal disease Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003502 anti-nociceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- -1 as defined above Substances 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 208000027687 belching Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036471 bradycardia Effects 0.000 description 1
- 208000006218 bradycardia Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001390 capsicum minimum Substances 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 210000005216 enteric neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 208000023506 generalized abdominal pain Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 210000004326 gyrus cinguli Anatomy 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000030214 innervation Effects 0.000 description 1
- 208000018936 intestinal hypermotility Diseases 0.000 description 1
- 230000037036 intestinal hypermotility Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004184 ketamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000001785 maturational effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000007150 microbiota gut brain axis Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000000118 neural pathway Anatomy 0.000 description 1
- 230000010004 neural pathway Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001473 noxious effect Effects 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008058 pain sensation Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 208000024335 physical disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000001141 propulsive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 210000005250 spinal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000008925 spontaneous activity Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000007473 univariate analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001515 vagal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
- G01N33/5041—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects involving analysis of members of signalling pathways
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/06—Gastro-intestinal diseases
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Винахід стосується способу вибору бактеріального штаму роду Lactobacillus для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини, в якому зазначений спосіб включає вибір штаму, здатного зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію транзиторного рецепторного потенціалу по ванілоїду 1, TRPV1, або кондиціонованого середовища із зазначеного штаму молочнокислої бактерії, здатного зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію TRPV1.
Description
спосіб включає вибір штаму, здатного зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію транзиторного рецепторного потенціалу по ванілоїду 1, ТКРМІ, або кондиціонованого середовища із зазначеного штаму молочнокислої бактерії, здатного зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ЯКОЇ СТОСУЄТЬСЯ ВИНАХІД
Даний винахід насамперед стосується модулювання гастроінтестинального болю і зокрема вибору агентів, таких як молочнокислі бактерії, здатні модулювати гастроінтестинальний біль, і застосування даних агентів.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Гастроіїнтестинальний біль є симптомом багатьох патологічних станів, захворювань і розладів, пов'язаних з шлунково-кишковим трактом. Функціональний абдомінальний біль стосується рецидивуючого абдомінального болю. У переважної більшості пацієнтів з рецидивуючим абдомінальним болем має місце "функціональний" або "неорганічний" біль, що означає, що біль не викликаний соматичними порушеннями. Низка розладів моторики також пов'язана з болем і запором або проносом. Термін застосовують для опису низки розладів, при яких кишка не розвивалася правильно або втратила свою здатність координувати м'язову активність внаслідок низки причин.
Дані розлади можуть виявлятися різними шляхами і включають, але без обмеження, таке:
Здуття живота
Рецидивуючу непрохідність
Абдомінальну коліку
Запор
Гастроезофагеальну рефлюксну хворобу
Рецидивуюче блювання, яке не купірується
Пронос
Синдром подразненої кишки (ІВ5)
Запальне захворювання кишечнику
Нетримання калу
Коліку немовляти
Частий рецидивуючий абдомінальний біль (ЕКАР)
Відрижку
Непереносимість харчових продуктів
У широкому значенні, будь-яка значна зміна в пасажі їжі і секреції в травний тракт може
Зо мати на увазі порушення моторики кишечнику і являє собою тип розладів, часто пов'язаний з гастроінтестинальним болем.
Власні координовані рухи шлунку і кишечнику необхідні, щоб перетравлювати і просувати кишковий вміст травним трактом. Моделі скорочення і розслаблення, необхідного для правильної моторики шлунково-кишкового тракту (ШКТ), є складними і задіюють нерви і мускулатуру стінок ШКТ. Щодня в будь-який час на моторику ШКТ може впливати множина чинників, наприклад, фізичні вправи і емоційний дистрес. У новонароджених дітей в ШКТ має розвиватися складна система моторики. Порушення функції шлунково-кишкової моторики часто пов'язане з гастроінтестинальним болем.
Старіння, деменція, інсульт, хвороба Паркінсона, пошкодження спинного мозку, розриви стінок прямої кишки в пологах, діабет, хірургічні ускладнення і нейром'язові розлади, наприклад, важка псевдопаралітична міастенія, можуть викликати розлади моторики, пов'язані з болем.
Синдром подразненої кишки (ІВ5), найчастіше діагностований розлад моторики кишечнику і гастроінтестинального болю, має на увазі захворювання товстої кишки протягом десятиліть, але дослідження моторики ШКТ продемонструвало, що порушення моторики, які лежать в основі, можуть також виникати в тонкій кишці. ІВ5 часто може супроводжуватися гастроінтестинальним болем, і було показано, що імунореактивність ТЕРМІ у пацієнтів ІВ5 значно підвищена (АкКбаг,
Міапдои еї а!., сзиї 2008).
Запор, часто пов'язаний з гастроінтестинальним болем, є найпоширенішою скаргою з боку травного тракту в Сполучених Штатах, але незважаючи на свою частоту, часто залишається нерозпізнаним доти, доки у пацієнта не розвинуться повторні порушення, такі як аноректальні розлади або дивертикулярна хвороба. Як зазначалося вище, гастроінтестинальний біль є частим симптомом запору.
Запор є досить поширеним явищем під час вагітності. М'язові скорочення, які в нормі переміщують їжу по кишечнику, сповільнюються через вищі рівні гормону прогестерону і, можливо, надмірного заліза, що приймається у вигляді вітамінів для вагітних. Це часто також супроводжується абдомінальним болем в нижніх ділянках живота.
Запор також пов'язаний зі старшим віком, і так званий "старіючий кишечник" часто виявляють у людей переважно старше 70 років і в установах постійного догляду.
На іншому кінці спектра вікових розладів моторики кишечнику постійний або надмірний плач бо від колік немовляти є однією з найболючіших проблем грудного віку. Це є болісним для немовляти, для батьків і залучає працівників охорони здоров'я. Коліки часто починаються і закінчуються раптово.
Гіпермоторика кишечнику на фоні передбачуваного порушення вегетативної регуляції запропонована як одна з етіології коліки. Багато з механізмів, які регулюють моторику, у дітей грудного віку є незрілими. Незрілість даних механізмів може призводити до підвищеної чутливості до непереносимості їжі. Таким чином, коліка може являти собою основний клінічний прояв у субпопуляції дітей грудного віку, у яких порушена функція дозрівання в одному або більше аспектів регуляції моторики і що часто призводить до гастроінтестинального болю у немовляти.
Розлади моторики кишечнику накладаються на патологічні скорочення кишечнику, часто пов'язані з гастроінтестинальним болем, існує багато різних видів лікування і рекомендацій для різних розладів, деякі з яких працюють краще, ніж багато інших.
Таким чином, існує загальна потреба у вирішенні конкретних проблем стосовно низки розладів моторики, а саме больових розладів: як найкращим чином підібрати агенти для запобігання або зменшення гастроінтестинального болю?
Транзиторний рецепторний потенціал з ванілоїду 1 (ТКРМІ) являє собою проникний для
Са: катіонний канал, який експресується, наприклад, в периферичній нервовій системі (ПНО), центральній нервовій системі (ЦНС), дихальній системі і шлунково-кишковому тракті. ТКЕРМ1 активується фізичними і хімічними стимулами, наприклад, температурою, зміною рнН і капсаїцином, і відіграє найважливішу роль в розпізнаванні ноцицептивного і термічного запального болю. У шлунково-кишковому тракті імунореактивність до ТЕРМІ може, наприклад, бути виявлена у вісцеральних чутливих аферентах, і ТЕРМ1-клітини передають, наприклад, відчуття болю в шлунку у розташовані вище центри головного мозку. Як передбачається,
ТКРМІ1 задіяний при деяких патологічних станах шлунково-кишкового тракту, які пов'язані з больовими відчуттями, і було показано, що імунореактивність до ТЕРМІ значно підвищена, наприклад, при ІВ5 (АКраг, Міапдои еї аї, си 2008). Як приклад цього, пацієнти з діагностованим активним запальним захворюванням кишечнику демонструють значно підвищену імунореактивність до ТКРМ1 в нервових волокнах товстої кишки (Умапо, Міуагез5 апа
Апет, 2005 9. Рпузіо!.).
Зо Незважаючи на припущення, що ТЕРМІ є потенційною мішенню для розробки лікарських препаратів для лікування болю різних модальностей, повсюдна експресія рецептора може призводити до небажаних явищ, що обмежують застосування системних антагоністів ТЕРМІ в лікуванні гастроінтестинального болю. Зокрема, внаслідок зниженого вивільнення вазоактивного пептиду надання рецептору властивостей антагоніста потенційно може призводити до серцево-судинних ускладнень.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Загальною задачею є знаходження агентів, придатних для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю.
Конкретна задача полягає в наданні способу для вибору агентів, переважно штамів бактерій і більш переважно, молочнокислих бактерій, ефективних в зменшенні або запобіганні гастроінтестинального болю.
Дані та інші цілі досягаються варіантами здійснення, як розкрито в даній заявці.
Аспект варіантів здійснення стосується способу для вибору агента, ефективного в зменшенні або запобіганні гастроінтестинального болю у людини. Спосіб включає вибір агента, здатного зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію транзиторного рецепторного потенціалу по ванілоїду 1 (ТКРМ1).
Інший аспект варіантів здійснення стосується агента, вибраного за допомогою визначеного вище способу.
Додатковий аспект варіантів здійснення стосується агента, отримуваного за допомогою визначеного вище способу вибору для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини.
Додатковий аспект варіантів здійснення стосується композиції, яка містить агент, отримуваний за допомогою визначеного вище способу вибору, і щонайменше один додатковий компонент, вибраний з групи, яка складається з фармацевтично прийнятного носія, фармацевтично прийнятного розріджувача, фармацевтично прийнятного ексципієнта, харчового продукту, біологічно активної харчової домішки та іншого превентивного або терапевтичного агента.
Споріднений аспект варіантів здійснення визначає агент, за визначенням вище, або композицію, за визначенням вище, для застосування з метою зменшення або запобігання 60 гастроінтестинальному болю у людини.
Інший споріднений аспект варіантів здійснення визначає застосування агента, отримуваного за допомогою визначеного вище або за визначенням вище способу вибору, або композиції, за визначенням вище, для виготовлення лікарського засобу, харчового продукту або біологічно активної харчової домішки для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини.
Додатковий аспект варіантів здійснення стосується способу зменшення або запобігання гастроіїнтестинальному болю у людини. Спосіб включає введення ефективної кількості агента, отримуваного за допомогою визначеного вище способу вибору або за визначенням вище, або композиції, за визначенням вище, людині.
Дані варіанти здійснення надають ефективну методику, яку можна застосовувати для вибору або ідентифікації агентів, зокрема штамів бактерій, таких як молочнокислі бактерії, які можна застосовувати для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у хворих, переважно у хворих людей, які страждають від розладу або захворювання, викликаного або пов'язаного з гастроінтестинальним болем.
КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР
Варіанти здійснення, разом з його додатковими цілями і перевагами, можуть бути найкраще зрозумілі за допомогою посилання на наступний опис, взятий разом з супроводжувальними фігурами, на яких:
Фігура 1 показує спонтанну активацію брижових множинних нейронів після додавання 1 х108 одиниць (КУОбОщ)у/мл ОМ 17938 (А) 1їх109 КУО/мл 0О5М 17938 (В), розбавленого (1:5) кондиціонованого середовища Ю5М 17938 (С), 1х109 КУО/мл у-опроміненого ОБМ 17938 (0) і тільки розбавленого середовища (1:5) (ЕЕ) (Критерії Вілкоксона).
Фігура 2 показує дію ОМ 17938 на частоту спонтанної активації спинномозкових аферентів.
А) Частота активації множинних нейронів знизилася, коли у просвіт додали 11х107 КУО/Мл ЮО5М 17938 (Критерій Вілкоксона). В) Ліва панель, активація спинномозкових одиночних нейронів зменшувалася за допомогою ОМ 17938 (Критерій Вілкоксона). С) Верхні панелі, типові сліди спонтанного розряду множинних нейронів до і після додавання ЮО5М 17938; нижні панелі, накладені форми хвиль одного єдиного нейрону, які виникали у час, позначений "о" у верхніх слідах.
Зо Фігура З показує, що ОМ 17938 протидіє збудливій відповіді спинномозкових волокон за допомогою додавання капсаїцину до серозного суперфузату. А) Крива залежності "доза-ефект" капсаїцину у 113 спинномозкових окремих одиночних нейронів нанесена на графік (Ф, і супроводжується трипараметричним логістичним рівнянням, ЕС5о-200 нМ. Мах-238-27 95; при цьому на графік додатково нанесли додаткову криву залежності "доза-ефект" 116 волокон для капсаїцину в присутності 1х109 КУО/мл ОМ 17938 (й ), ії супроводжували таким самим логістичним рівнянням, для якого ЕСво-500 нМ і Мах-129-417 95 (Р-0,7 і Р-0,004 для відмінностей між ЕСвхо і Мах відповідно, Е-критерій за додатковою сумою квадратів). В) Сумарні діаграми розкиду зі середніми і стандартними помилками середніх значень, що показують, як відповіді одиночних нейронів змінювалися зі зростаючими дозами капсаїцину за відсутності або наявності 1їх109 КУО/мл О5М. (п) означає співвідношення одиночних нейронів для кожної групи.
Фігура 4 показує, що О5М 17938 або антагоніст ТКРУ1 зменшує індуковану розтягненням збудливу відповідь в спинномозкових одиночних нейронах. А) Графіки розсіювання, які показують, що додавання їх109 О5М 17938 у просвіт зменшує підвищення частоти активації спинномозкових одиночних нейронів, спровоковане зростаючим внутрішньопросвітним тиском до 48 гПа. В) Додавання 10 мкм антагоніста ТКРМ1 6б-йодонордигідрокапсаїцину в просвіт імітує дію додавання ОМ 17938 (Критерії Вілкоксона).
Фігура 5 показує, що О5М 17938 зменшує індукований капсаїцином підйом Са2" в соматичних нейронах задніх корінців спинного мозку. А) 1 мкм капсаїцину викликав підвищення надходження Са2" в нейронах ОКО, яке дозозалежно знижувалося під дією внутрішньопросвітного О5М 17938 і не змінювалося під дією 1х107 КУО/мл УВ-1. В) Зведений графік, що показує, як співвідношення (Е/Ео) максимальної Са?" флуоресценції (Є), викликаної капсаїцином, до початкової Са?" флуоресценції (Ро) змінюється залежно від концентрації О5М 17938 або УВ-1. (Значення Р, критерій множинного порівняння Бонферроні).
Фігура 6 показує, що на 9 день годування О5М 17938 зменшувалася брадикардія, викликана розтягненням шлунку. А) Підсумкові значення для відсоткового зниження частоти серцевих скорочень в спокої, викликаного розтягненням шлунку 40 ії 60 мм рт. ст. (Значення Р, критерій
Ст'юдента для однієї вибірки). В) Зведені графіки, що показують, як частота серцевих скорочень в спокої змінюється з плином часу у відповідь на розтягнення шлунку 60 мм рт. ст. (Р-0,01, двофакторний дисперсійний аналіз).
Фігура 7 показує, що кондиціоноване середовище ОМ 17938 імітувало Ю5М 17938, індукуючи зниження збудливої дії капсаїцину на спинномозкові аференти. Зведений графік, що показує збільшення частоти активації одиночних нейронів спинномозкових волокон індукованої 1 мкм капсаїцину в контрольних умовах, з кондиціонованим середовищем ОЮЗМ 17938 (1:5) або з 1х109 КУО/мл О5М 17938 (Р-0,02, однофакторний дисперсійний аналіз; апостеріорні значення
Р, критерій множинного порівняння Хольма-Сідака).
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС
Для полегшення розуміння винаходу нижче визначена низка термінів. "Гастроінтестинальний біль", який також називається шлунково-кишковим болем, означає біль в шлунково-кишковому тракті хворого. Даний гастроінтестинальний біль часто викликаний або пов'язаний, тобто є симптомом або хворобливим компонентом низки захворювань і розладів, як правило, шлунково-кишкового тракту. Гастроінтестинальний біль включає генералізований біль в шлунково-кишковому тракті, що часто означає генералізований гастроінтестинальний біль в даній ділянці, біль, пов'язаний з розладами моторики кишечнику, біль внаслідок запальних захворювань кишечнику і синдрому подразненої кишки, біль в шлунку, генералізований абдомінальний біль, вісцеральний біль, функціональний абдомінальний біль, частий рецидивуючий абдомінальний біль і біль при інших функціональних шлунково-кишкових розладах. "Функціональний абдомінальний біль" стосується рецидивуючого абдомінального болю.
Переважну більшість пацієнтів з рецидивуючим абдомінальним болем мають "функціональний" або "неорганічний" біль, який означає, що біль не викликаний фізичними порушеннями. "Розлади моторики кишечнику" застосовують для опису низки розладів, при яких кишка не розвивалася правильно або втратила свою здатність координувати м'язову активність внаслідок низки причин. Дані розлади можуть виявлятися різними шляхами, і включають, але без обмеження, таке: - Здуття живота - Рецидивуючу непрохідність - Абдомінальну коліку - Запор
Зо - Гастроезофагеальну рефлюксну хворобу - Рецидивуюче блювання, яке не купірується - Пронос - Синдром подразненої кишки (ІВ5) - Запальне захворювання кишечнику - Нетримання калу - Коліку немовляти - Частий рецидивуючий абдомінальний біль (ЕКАР) - Відрижку - Непереносимість харчових продуктів
У широкому значенні, будь-яка значна зміна в пасажі їжі і секреції в травний тракт може мати на увазі порушення моторики кишечнику і являє собою тип розладів, часто пов'язаний з гастроінтестинальним болем. "Біль в шлунку" являє собою збірний термін, що застосовується для опису болю або дискомфорту у верхніх ділянках живота.
У варіанті здійснення причина болю в шлунку вибрана з групи, яка, наприклад складається з, невиразкової диспепсії, пептичної виразки, гастроезофагеальної рефлюксної хвороби і гастриту.
У конкретному варіанті здійснення причиною болю в шлунку є невиразкова диспепсія і/або гастрит.
Як використовується в даній заявці, термін "частота активації" застосовують для вимірювання послідовностей сенсорних спайків у головний мозок.
Як використовується в даній заявці, термін "внутрішньопросвітний піковий тиск" (РРг) грунтується на реєстрації внутрішньопросвітного тиску, де зміни внутрішньопросвітного тиску вимірюють в серединній точці поздовжньої осі сегмента кишки. Сигнал тиску аналізують, і внутрішньопросвітний піковий тиск (РРг) ідентифікують і вимірюють.
Як використовується в даній заявці, термін "частота мігруючого моторного комплексу" (частота ММС) розраховується шляхом підрахунку кількості темних смуг МС на просторово- часових картах.
Як використовується в даній заявці, термін "швидкість мігруючого моторного комплексу" (швидкість ММС) вимірюється з нахилу (нахилів) кожної смуги на просторово-часовій карті, що генерується мігруючими моторними комплексами.
Як використовується в даній заявці, термін "агент" застосовують для позначення будь-якої речовини або матеріалу, включаючи цільні клітини; мікроорганізми; кондиціоноване середовище; білки, пептиди, ферменти і/або молекули, отримувані з даного кондиціонованого середовища; білків, пептидів, ферментів і/або молекул, які секретуються або отримуються з цільних клітин або мікроорганізмів; або іншого біологічного або хімічного матеріалу, який можна застосовувати для модулювання гастроінтестинального болю в шлунково-кишковому тракті ссавця. Прикладом переважних агентів є штами бактерій, наприклад, штами пробіотичних бактерій, і зокрема штами молочнокислих бактерій. Іншим прикладом переважного агента є кондиціоноване середовище з штамів бактерій, наприклад, штамів пробіотичних бактерій, і зокрема штамів молочнокислих бактерій.
Кондиціоноване середовище, що іноді також називається як кондиціоноване поживне середовище, являє собою (поживне) середовище, в якому клітини культивують протягом періоду часу. Клітини, що культивуються в середовищі, "кондиціонують" середовище за допомогою вивільнення або вироблення низки компонентів або молекул, такого як білки, пептиди, ферменти, цитокіни, хемокіни, хімічні речовини тощо.
Починають визнавати, що кишкові мікроорганізми посилають сигнали у головний мозок як частину так званої осі мікробіота-кишечник-мозок. Проте, відомо дуже мало про роль кишкової мікробіоти в розвитку та функціонуванні нервової системи. На даний момент лише дуже трохи відомо про кількісний характер нервового сигналу, що передається від кишечника до центральної нервової системи.
Одиночні чутливі нейрони, включаючи такі серед волокон блукаючого нерву, ретранслюють безперервні фізичні стимули у вигляді впорядкованої послідовності спайків, які кодують природу та інтенсивність стимулу. На додаток до цього, стимули можуть бути представлені в коді популяції, що визначається кількістю активних волокон в пучку. Вся інформація, що досягає головного мозку через первинні аференти, має кодуватися мовою послідовності нейронних спайків. Внаслідок цього, знання, як на послідовності сенсорних спайків впливає низка агентів,
Зо такі як симбіонти, пробіотичні штами і різні речовини, дає можливість авторам винаходу ідентифікувати нові благотворні кишкові мікроорганізми та їхні активні молекули за допомогою їхнього впливу на первинну аферентну активацію, а також нові лікарські препарати та інші сполуки, які можуть у різний спосіб втручатися в дану сигнальну систему, зокрема за допомогою модулювання активації ТЕРМІ.
Спосіб варіантів здійснення в даній заявці використовується для вибору агента для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю за допомогою інгібування передачі сигналів через ТКРМ1-рецептор. Спосіб варіантів здійснення таким чином можна застосовувати для оцінки агентів, які можуть бути потенційно ефективні в запобіганні гастроїнтестинальному болю і/або ефективні в зменшенні, пригніченні або лікуванні гастроїнтестинального болю. Таким чином, спосіб можна застосовувати для ідентифікації ефективних агентів, здатних модулювати гастроінтестинальний біль, пов'язаний з периферичною (ентеральною) і/або центральною нервовою системою.
Таким чином, аспект варіантів здійснення стосується способу для вибору агента, ефективного, тобто для застосування, для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини. Спосіб включає вибір агента, здатного зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію транзиторного рецепторного потенціалу по ванілоїду 1 (ТКЕРМ'1).
Варіанти здійснення таким чином грунтуються на застосуванні сигнального шляху ТКРМ1 як інструмента вибору при ідентифікації агентів, які є ефективними при модулюванні, зокрема запобіганні або зменшенні, такому як пригнічення або лікування, гастроінтестинального болю у хворих, які страждають від захворювань або розладів, що включають або що викликають даний гастроінтестинальний біль, і які можна визначити гастроінтестинальні больові захворювання або розлади.
Спосіб варіантів здійснення, як правило, виконується іп мйго або ех мімо, як додатково розкрито в даній заявці. Проте, агент переважно здатний зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТКРМ1 у хворого при введенні хворому.
Спосіб варіантів здійснення можна, таким чином, застосовувати для пошуку придатних агентів для зменшення або запобігання гастроїнтестинальному болю при різних гастроіїнтестинальних больових розладах і захворюваннях. Агенти вибирають для впливу на активацію ТЕРМІ хворого у сприятливий спосіб з метою модулювання, тобто переважно 60 запобігання, зменшення або лікування гастроінтестинального болю.
У варіанті здійснення розлад або захворювання, пов'язане з гастроінтестинальним болем, що підлягає запобіганню або лікуванню агентом, вибраним за допомогою способу, являє собою гастроінтестинальний больовий розлад або захворювання.
У варіанті здійснення гастроінтестинальний біль являє собою біль в шлунку.
У варіанті здійснення гастроінтестинальний біль являє собою вісцеральний біль.
У варіанті здійснення гастроіїнтестинальний біль може бути присутнім у людини, яка страждає від коліки.
У варіанті здійснення гастроіїнтестинальний біль може бути присутнім у людини, яка страждає від синдрому подразненої кишки (ІВ5).
У варіанті здійснення гастроінтестинальний біль може бути присутнім у людини, яка страждає від запору. Гастроінтестинальний біль може бути присутнім у хворих, які страждають розладами моторики кишечнику, за визначенням вище.
Таким чином, у варіанті здійснення хворий страждає порушенням моторики кишечнику, асоційованої з гастроінтестинальним болем.
Спосіб варіантів здійснення грунтується на несподіваному відкритті, що гастроінтестинальний біль, який включає біль, пов'язаний з різними патологічними станами і розладами, такими як розлади моторики, і яка проявляється центрально або периферично, пов'язана з активацією ТКРМ1, яку можна модулювати за допомогою раніше невідомих агентів, таких як молочнокислі бактерії.
Одним видом гастроінтестинального болю є вісцеральний біль, який є результатом активації ноцицепторів внутрішніх органів черевної порожнини (органів). Вісцеральні структури є високо чутливими до здуття (розтягнення), ішемії і запалення, але відносно нечутливі до інших стимулів, які в нормі викликають біль. Вісцеральний біль є дифузним, важким для локалізації і часто пов'язаний з віддаленою, звичайно поверхневою, структурою. Він може супроводжуватися симптомами, такими як нудота, блювота, змінами показників життєво важливих функцій, а також емоційними проявами. Біль можна описати як нудотний, глибокий, стискальний і ниючий.
Виразні структурні порушення або біохімічні порушення пояснюють даний тип болю лише у частини пацієнтів. Дані захворювання іноді відносять до групи шлунково-кишкових нейром'язових захворювань (СІММО). Люди можуть також відчувати вісцеральний біль, часто
Зо вельми інтенсивний за природою, без якої-небудь очевидної структурної, біохімічної або патогістологічної причини для даних симптомів.
Ноцицептор являє собою чутливий рецептор, який реагує на потенційно пошкоджувальні стимули, посилаючи потенціали дії специфічним ноцицептивним нейронам (Аб або С), які передаються передньобічним трактам спинного мозку (плюс малій вагусній проекції) і потім до таламусу і прозенцефалону, включаючи острівцеву і поясну кору. Особливо важливим для сприйняття болю, що походить від патології кишечнику, є активація больових повідомлень з кишечнику до центральної нервової системи за зовнішніми первинними аферентними волокнами, які йдуть в мезентеріальних аферентних нервових пучках.
Спосіб можна застосовувати для відбору агентів з метою вибору агентів з бажаними властивостями, наприклад, зменшення активації ТКРМІ1, для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю. Параметр, який підлягає вимірюванню в способі, тобто спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ, можна спостерігати в динаміці і визначати в різних моделях і системах. Використовуючи дану інформацію, можна отримати профіль, корисний для визначення докладної і можливо деталізованої дії, яку конкретні агенти вчиняють на передачу больових сигналів при гастроінтестинальному болю.
Інші параметри, які можна виміряти в способі, включають загальну передачу больових сигналів, імпульсну активність нервів, наприклад, аналіз брижового нервового пучка, і, можливо, застосування різних моделей гастроінтестинального болю іп мімо.
У варіанті здійснення активацію ТКРМ1 вимірюють в клітинах, які експресують ТЕРМІ, таких як нейрони спинномозкових гангліїв (ОКО), СаСо» клітини або інша стандартна кишкова епітеліальна клітинна лінія людини. Можна виміряти як спонтанну активацію ТКРМ1, так і активацію ТЕРМІ після індукування, наприклад, капсаїцином, зміною рН або температури.
Загалом, згідно з варіантами здійснення, для вимірювання активації ТКРМ1 можна застосовувати будь-яку клітину або тканину, яка експресує ТЕРМІ.
Таким чином, у варіанті здійснення спосіб включає контактування клітини, яка експресує
ТЕРМІ, з агентом, що підлягає дослідженню. Спосіб також включає вимірювання спонтанної і/або індукованої активації ТКРМ1 в клітині слідом за, тобто після, контактуванням клітини з агентом, що підлягає дослідженню. Спосіб додатково включає порівняння виміряної спонтанної іабо індукованої активації ТЕРМІ з контрольною активацією ТКРМ1. У даному варіанті 60 здійснення спосіб додатково включає вибір агента, що підлягає дослідженню, як агента,
ефективного для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю, якщо виміряна спонтанна і/або індукована активація ТКРМУ1 менше контрольної активації ТЕРМІ.
Контрольну активацію ТКРМ1 можна визначати відповідно до різних варіантів здійснення.
Наприклад, активацію ТЕРМІ можна було б визначити заздалегідь і визначати у експресувальних ТЕРМІ клітин з рівнем активації, який представляє нормальну або вихідну активацію, відповідну, наприклад, по суті відсутності гастроінтестинального болю.
Проте, переважний варіант здійснення визначення контрольної активації ТКкРМ1 призначений для застосування клітини, яка експресує ТКРМІ1, як внутрішній контрольний зразок.
Отже, у варіанті здійснення спосіб включає вимірювання спонтанної і/або індукованої активації
ТЕРМІ в клітині перед контактуванням клітини з агентом, що підлягає дослідженню. Спосіб також включає визначення контрольної активації ТКРМ1, грунтуючись на спонтанній і/або індукованій активації ТКРМ1, виміряній в клітині перед контактуванням клітини з агентом, що підлягає дослідженню.
При даному підході вимірювання спонтанної і/або індукованої активації ТЕРМІ внаслідок цього переважно виконують двічі: перед контактуванням клітини з агентом, що підлягає дослідженню, і після контактування клітини з агентом, що підлягає дослідженню.
Як альтернатива, вимірювання спонтанної і/або індукованої активації ТЕРМІ можуть бути виконані в двох паралельних експериментах: один експеримент, в якому клітина контактувала з агентом, що підлягає дослідженню, і один контрольний експеримент, в якому клітина не контактувала з агентом. Клітини, що використовуються в двох експериментах, в такому випадку є такого самого типу, як і нейрони ОКО, клітини СаСо» або інша стандартна кишкова епітеліальна клітинна лінія людини. Спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ вимірюють в обох експериментах і потім порівнюють одну з одною.
Клітина, що підлягає застосуванню в способі, може являти собою будь-яку клітину, яка експресує ТЕРМ1, включаючи, без обмеження, препарати ех мімо, клітинні лінії, які експресують
ТЕРМІ, такі як кишкові епітеліальні клітинні лінії людини, які експресують ТЕРМІ, і зародкові клітини, які експресують ТАРМ'І1.
Виміряну спонтанну і/або індуковану активацію ТКРМІ1 і контрольну активацію ТЕРМІ загалом можна виражати у вигляді відповідного значення параметру або критерію, включаючи
Зо значення, що представляє рівень спонтанної і/або індукованої активації ТЕРМІ.
У варіанті здійснення для аналізу активації ТКРМУ1 застосовують зародкові клітини, такі як, наприклад, нейрони спинномозкових гангліїв (ОКО).
У іншому варіанті здійснення для аналізу активації ТКРМ1 застосовують клітинні лінії, які експресують ТЕРМІ, такі як СаСог або інша стандартна кишкова епітеліальна клітинна лінія людини.
У інших варіантах здійснення для аналізу активації ТКРМУ1 застосовують клітинні лінії, що є в продажу, які експресують ТЕРМІ, див., наприклад, саї: по СТ6Є105 від Спапіеві.
Також можливо використати клітини репортерних генів, також позначувані репортерні клітини в даній ділянці, які можна застосовувати для динамічного спостереження і вимірювання експресії ТЕРМІ і/або спонтанної і/або індукованої активації ТЕРМІ.
Для дослідження активації ТКРМ1 можна застосовувати декілька різних способів, включаючи, але без обмеження, функціональний аналіз, що використовує, наприклад, надходження кальцію, індуковане, наприклад, капсаїцином і/або його запобігання за допомогою агента в клітинах, які експресують ТКРМ1, і частоти активації брижових нервових пучків, спонтанної і/або індукованої, наприклад, капсаїцином. У іншому варіанті здійснення для аналізу активації ТКРМІ можна застосовувати функціональну оцінку регульованою температурою роботи іонних каналів із застосуванням приладу ПЛР в режимі реального часу, як описано у
Кеибізп, ЕЄтегіїпу еї аї., ВіоТесппідцез 2009. У іншому варіанті здійснення для дослідження активації ТКРМ1 можна застосовувати репортерну мишу для ТКРМ1-каналу. Низку моделей іп мімо також можна застосовувати для аналізу дії на біль у винаході. Дані способи включають, наприклад, розтягнення шлунку і дію на частоту серцевих скорочень (див. Приклад 3) і моделі колоректального розтягнення.
Отже, у варіанті здійснення спосіб включає вимірювання надходження Са?" в клітину, індукованого капсаїцином або іншою речовиною, здатною включати активацію ТКРМІ1, наприклад, аналогом капсаїцину, або іншими речовинами, здатними активувати ТКРМ1. Також для індукування активації ТЕРМІ можна застосовувати вплив на клітину вибраних фізичних станів, включаючи зміну рН або температури. Таким чином, вплив на клітину кислого рн, лужний рн і/або нагрівання (підвищених температур, як правило, вище приблизно 42 "С) може індукувати активацію ТКРМІ1. В даному варіанті здійснення надходження в клітину бо експресувальної ТКРМ1, таким чином застосовують як параметр, що відображає активацію
ТЕРМІ. Зниження активації ТКРМІ1, і зокрема зниження рН-індукованої, індукованої нагріванням іабо капсаїцин-індукованої активації ТКРМІ1 можна потім виміряти у вигляді зниження надходження Са". В іншому варіанті здійснення спосіб включає вимірювання регульованою температурою роботи іонних каналів в клітині. В даному варіанті здійснення регульовану температурою роботу іонних каналів в клітині, яка експресує ТЕРМІ, застосовують як параметр, що відображає активацію ТЕРМІ. Регульована температурою робота іонних каналів може бути спонтанною або індукованою, така як індукована підвищеною температурою. Зниження активації ТКРМІ1 може бути виміряне у вигляді зниження регульованою температурою роботи іонних каналів в клітині.
У варіанті здійснення активацію ТКРМ1 вимірюють, застосовуючи експерименти на брижовому аферентному нервовому пучку. Таким чином, іншим параметром, який можна виміряти, є частота спонтанної і/або індукованої, наприклад, капсаїцином, зміною рН або нагріванням, активації брижових аферентних нервових пучків. Дану методику можна застосовувати для визначення змін збудливості брижових нервових волокон, індукованих різними агентами, що підлягають дослідженню. У варіанті здійснення шлунково-кишковий сегмент вирізають з аркадою брижі або без неї, що містить нервовий пучок, інервувальний сегмент, який складається як зі спинномозкових, так і вагусних волокон для реєстрації даних нервового пучку ех мімо (див. Приклад 1).
У деяких варіантах здійснення є важливою регіональна специфічність шлунково-кишкового тракту. Відповідні сегменти для аналізу брижових нервів способу переважно включає відповідний нервовий пучок для забезпечення можливості вимірювання активації аферентного брижового нерву. Це може бути зручно надане за допомогою наявності шлунково-кишкового сегмента з прикріпленою брижовою тканиною (див. Приклад 1). Таким чином, даний варіант здійснення зручно здійснюється на сегментах ех мімо від відповідної експериментальної тварини, наприклад, на шлунково-кишкових сегментах миші (наприклад, сегменти ободової або порожньої кишки миші). Здатність проводити порівняння дії агента на тонку в порівнянні з товстою кишкою могло би бути переважним, зокрема, залежно від розладу кишкової моторики, що підлягає лікуванню, і його клінічної стадії і симптомів, при цьому могло б бути сприятливим лікування, яке є специфічним для окремої ділянки, наприклад, специфічним для або тонкої, або
Зо товстої кишки.
У варіанті здійснення проаналізований спінальний трафік аферентного брижового нерву для конкретних і вибраних частин кишки. Несподівано було виявлено, що різні агенти, такі як молочнокислі бактерії, здатні впливати або модулювати сигнальні системи гастроінтестинального болю в одній частині, але не в іншій частині ШКТ, і через різні нервові шляхи, такі як вагусний, або для вісцерального болю через спинномозкові ганглії.
Таким чином, у варіанті здійснення спосіб включає контактування шлунково-кишкового сегмента ех мімо з прикріпленою брижовою тканиною з агентом, що підлягає дослідженню.
Спосіб також включає вимірювання спонтанної і/або індукованої активації брижових аферентів в шлунково-кишковому сегменті ех мімо після контактування шлунково-кишкового сегмента ех мімо з агентом, що підлягає дослідженню. Спосіб додатково включає порівняння виміряної спонтанної і/або індукованої активації брижових аферентів з контрольною активацією брижових аферентів. У даному варіанті здійснення спосіб додатково включає вибір агента, що підлягає дослідженню як агент, ефективний для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю, якщо виміряна спонтанна і/або індукована активація брижових аферентів нижча контрольної активації брижових аферентів.
Контрольну активацію брижових аферентів можна визначити, як обговорювалося у вищевикладеному застосуванні шлунково-кишкового сегмента ех мімо як внутрішній контроль. У цьому випадку спосіб включає вимірювання спонтанної і/або індукованої активації брижових аферентів в шлунково-кишковому сегменті ех мімо перед контактуванням шлунково-кишкового сегмента ех мімо з агентом, що підлягає дослідженню. Спосіб також включає визначення контрольної активації брижових аферентів на основі спонтанної і/або індукованої активації брижових аферентів, виміряній в шлунково-кишковому сегменті ех мімо перед контактуванням шлунково-кишковою сегмента ех мімо з агентом, що підлягає дослідженню.
Як альтернатива можуть бути проведені два паралельних експерименти. У одному з них гастроіїнтестинальний сегмент ех мімо контактує з агентом, що підлягає дослідженню, а в іншому, контрольному експерименті, гастроінтестинальний сегмент ех мімо не контактує з агентом. У обох експериментах вимірюють і порівнюють одну з одною спонтанну і/або індуковану активацію брижових аферентів.
Аналіз одного або більше з даних параметрів вище призведе до способу вибору агентів, 60 ефективних для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю.
У конкретному варіанті здійснення шлунково-кишковий сегмент ех мімо вибирають з сегмента ободової або порожньої кишки ех мімо. У цьому випадку спосіб включає контактування сегмента ободової або порожньої кишки ех мімо з прикріпленою брижовою тканиною з агентом, що підлягає дослідженню.
Приклади відповідних способів і пристрій для аналізу спонтанної і/або індукованої активації
ТЕРМІ описані в Прикладах і Фігурах.
Таким чином, в переважних способах представлений аналіз надасть дані про спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ. Аналіз одного або декількох з даних параметрів призведе до переважного способу вибору агентів, ефективних для зменшення і/або запобігання гастроінтестинальному болю.
Спосіб варіантів здійснення можна, таким чином, застосовувати для пошуку агентів, придатних для лікування, запобігання і/або зменшенню гастроінтестинального болю, за допомогою застосування моделі в даній заявці.
Представлений спосіб буде надавати дані про спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ із застосуванням різних моделей. Аналіз даного параметра призведе до способу вибору агентів, ефективних для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю.
У варіанті здійснення спосіб аналізує дію агента на активацію ТЕРМІ (спонтанної і/або індукованої, наприклад, капсаїцином, зміною рН і/або нагріванням та її запобігання за допомогою агента) і може таким чином використовуватися як зчитування передачі сигналу гастроїнтестинального болю, тобто чи має агент з великою ймовірністю дію на гастроіїнтестинальний біль, наприклад, вісцеральний біль, або не має. Підвищення або відсутність вираженої дії на спонтанну або індуковану активність (наприклад, капсаїцином, зміною рН і/або нагріванням) ТЕРМІ вказує на агент, який з великою ймовірністю призведе до посилення гастроінтестинального болю або відсутності вираженої дії на гастроінтестинальний біль, відповідно, тоді як зменшення спонтанної і/або індукованої активності (наприклад, капсаїцином, зміною рн і/або нагріванням) ТЕРМІ вказує на агент, який зменшить гастроінтестинальний біль. Таким чином, переважними агентами є агенти, які призводять до зменшення спонтанної і/або індукованої (наприклад, капсаїцином) активності ТКРМІ1.
У іншому варіанті здійснення спосіб аналізує дію агента на активність ТКРМІ1 за допомогою
Зо аналізу спонтанної і/або індукованої (наприклад, капсаїцином, зміною рН і/або нагріванням) активації брижового аферентного нерву (передачу больових сигналів) і, таким чином, може застосовуватися як зчитування гастроінтестинального болю, тобто чи має агент з великою ймовірністю дію на гастроінтестинальний біль, наприклад, вісцеральний біль, або не має.
Підвищення або відсутність вираженої дії на активацію аферентного нерву вказує на агент, який з великою ймовірністю призведе до посилення гастроінтестинального болю або відсутності вираженої дії на гастроінтестинальний біль, відповідно, тоді як зменшення активації аферентного нерву вказує на агент, який зменшить гастроінтестинальний біль. Таким чином, переважними агентами є агенти, які призводять до зменшення активації аферентного нерву, наприклад, зменшення спонтанної і/або індукованої частоти активації аферентних нервових пучків.
Агент, що підлягає дослідженню, додають до вибраної системи для аналізу активності
ТЕРМІ у будь-який відповідний спосіб. З метою аналізу дії агента на передачу больового сигналу способи є зручно здійснюваними за наявності і відсутності агента. Наприклад, етап способу здійснюється до і після застосування агента. Таким чином, в даних способах дію агента порівнюють з відповідним контролем, наприклад, результати в присутності досліджуваного агента порівнюють з результатами за відсутності досліджуваного агента, наприклад, результати тільки з буферним розчином порівняно з буферним розчином плюс агент.
Автори винаходу несподівано виявили, що певні штами молочнокислих бактерій, наприклад,
ОМ 17938, можуть знижувати активацію ТКРМ1 в різних моделях ех мімо і іп міго (див. Приклад 1 ї 2). Отже, в переважному варіанті здійснення агент являє собою бактеріальний штам, більш переважно молочнокислі бактерії. Таким чином, спосіб варіантів здійснення можна переважно застосовувати для дослідження низки молочнокислих бактерій з метою ідентифікації і вибору одного або більше штамів молочнокислих бактерій, які є ефективними для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини, як визначено у спосіб відносно здатності зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМ1.
Іншим аспектом варіантів здійснення є агент, вибраний за допомогою способу варіантів здійснення, тобто якого отримують за допомогою способу вибору.
Переважний агент являє собою мікроорганізм, більш переважно бактеріальний штам, переважно молочнокислі бактерії, включаючи їхні частини і метаболіти. бо Інший переважний агент являє собою кондиціоноване середовище з даного мікроорганізму.
Споріднений аспект варіантів здійснення визначає агент, який отримують за допомогою способу вибору варіантів здійснення для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини.
У конкретному варіанті здійснення агент отримують за допомогою способу вибору варіантів здійснення, здатних зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ЕРТМІ1 для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини.
У варіанті здійснення для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю буде вибраний агент, який переважно діє, щоб зменшити передачу больового сигналу, що оцінюють за допомогою динамічного спостереження за дією агента на спонтанну і/або індуковану активацію ТКРМ1. Даний агент буде переважно діяти, щоб знизити або зменшити активацію
ТЕРМІ в нейронах ОКО або інших ТКЕРМУ1-експресувальних клітинах або тканині. Переважно агент буде діяти, щоб зменшити спонтанну і/або індуковану (наприклад, капсаїцином, зміною рн іабо нагріванням) активність ТЕРМІ, використовуючи різні системи або моделі іп міго, включаючи але без обмеження, первинні клітини і клітинні лінії, які експресують ТКРМ1- рецептор, як обговорювалося раніше.
У варіанті здійснення буде вибраний агент, який переважно діє, щоб знизити або зменшити активацію ТЕРМІ в брижових аферентних нервових пучках. Агент буде діяти, щоб зменшити частоту спонтанної і/або індукованої (наприклад, капсаїцином, зміною рН і/або нагріванням) активації брижових аферентних нервових пучків.
З вищезазначеного ясно, що спосіб варіантів здійснення можна також застосовувати для відбору або ідентифікації агентів, які не підходять для лікування гастроінтестинального болю, наприклад, агентів, які не мають благотворну дію на зменшення передачі больового сигналу.
Зокрема, малоймовірно, що такі агенти, які не демонструють дію на даний параметр, є придатними для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю. На додаток, малоймовірно, що такі агенти, які мають дію на посилення передачі больового сигналу, як оцінено за допомогою підвищення спонтанної і/або індукованої активності ТЕРМІ, є придатними для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю.
Додатковий аспект варіантів здійснення стосується композиції, що містить агент, вибраний за допомогою способу варіантів здійснення, і щонайменше один додатковий компонент. Таким
Зо чином, щонайменше один додатковий компонент переважно вибраний з групи, що складається з фармацевтично прийнятного носія, фармацевтично прийнятного розріджувача, фармацевтично прийнятного ексципієнта, харчового продукту, біологічно активної харчової домішки та іншого превентивного або терапевтичного агента.
Таким чином, варіант здійснення стосується композиції, яка містить агент, що отримують за допомогою способу вибору варіантів здійснення, і щонайменше один додаткової компонент, вибраний з групи, що складається з фармацевтично прийнятного носія, фармацевтично прийнятного розріджувача, фармацевтично прийнятного ексципієнта, харчового продукту, біологічно активної харчової домішки та іншого превентивного або терапевтичного агента для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини.
Щонайменше один додатковий компонент можна вводити разом з агентом, вибраним згідно з варіантами здійснення, або можна вводити окремо. На додаток, щонайменше один додатковий компонент можна вводити одночасно з агентом, вибраним згідно з варіантами здійснення, або в різні часові точки. Кваліфікований фахівець в даній галузі може легко визначити придатні режими введення і час введення залежно від додаткового компонента, що розглядається.
У варіанті здійснення щонайменше один додатковий компонент являє собою будь-який відповідний нутритивний компонент, наприклад, харчовий продукт або біологічно активну харчову домішку.
У варіанті здійснення інший превентивний або терапевтичний агент може являти собою будь-який додатковий агент, який є придатним для запобігання або зменшення, такого як лікування, гастроінтестинального болю, що розглядається.
У іншому варіанті здійснення інший превентивний або терапевтичний агент являє собою агент, здатний впливати на шлунково-кишкову моторику і/або перемішування. Інший превентивний або терапевтичний агент тоді переважно здатний модулювати (збільшувати або зменшувати, залежно від патологічного стану, що підлягає лікуванню, як відомо в даній галузі і описано нижче) шлунково-кишкової моторики і/або перемішування.
У додатковому варіанті здійснення агент варіантів здійснення може мати подвійний вплив, тобто мати дію як на гастроінтестинальний біль, так і на шлунково-кишкову моторику і/або перемішування.
Агент, вибраний відповідно до даних варіантів здійснення з метою бути ефективним для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю, може також бути об'єктом іншого або додаткового аналізу або способу вибору з метою визначення, чи є агент додатково ефективним при модулюванні шлунково-кишкової моторики і/або перемішування. Даний агент може бути цікавим для запобігання або лікування, наприклад, розладу моторики, оскільки він спрямований як на гастроінтестинальний біль, так і на зміну моторики в сукупності. Способи аналізу моторики і/або перемішування є відомими в даній галузі. Параметри, що підлягають аналізу, включають, але без обмеження, частоту ММС, швидкість ММС, внутрішньопросвітний тиск, такий як РР"г, та інші функціональні моделі.
При аналізі моторики зміни шлунково-кишкової моторики, індуковані агентом, можна, наприклад, визначити як зміну патерну моторики або амплітуд скорочення. Деякі агенти взагалі не будуть мати дію. Агент, який може посилити шлунково-кишкову моторику, наприклад, за допомогою підвищення частоти ММС і/або швидкості ММС і/або внутрішньопросвітного тиску, такого як РРг, з великою ймовірністю буде придатним для лікування розладів, пов'язаних з гастроїнтестинальним болем, при яких переважним є посилення пропульсивної моторики по травній трубці, таких як запор і коліка.
Як альтернатива, наприклад, якщо розлад кишкової моторики, що підлягає лікуванню, являє собою розлад, при якому необхідно збільшити час транзиту матеріалу по кишечнику, наприклад, розлади, які задіюють швидкий пасаж, такі як ІВ5 або пронос, коли агент, що досліджується на додаток до своєї дії на модулювання гастроінтестинального болю буде діяти з метою зменшення шлунково-кишкової моторики, наприклад, за допомогою зниження частоти ММС або швидкості ММС або внутрішньопросвітного тиску, наприклад, РРг. Переважні агенти будуть зменшувати щонайменше швидкість ММС. Переважні агенти будуть зменшувати два або більше даних параметрів, наприклад, будуть зменшувати швидкість ММС і частоту ММС або будуть зменшувати частоту ММС і внутрішньопросвітний тиск (наприклад, РРг) або будуть зменшувати швидкість ММС і внутрішньопросвітний тиск (наприклад, РРгі). Найбільш переважні агенти будуть зменшувати всі дані параметри, наприклад, будуть зменшувати частоту ММС, швидкість ММС і внутрішньопросвітний тиск (наприклад, РРг). Аналіз моторики може бути оцінений на відповідному шлунково-кишковому сегменті від тонкої або товстої кишки, наприклад, сегменті порожньої кишки для тонкої кишки або сегмента ободової кишки для товстої кишки. У деяких варіантах здійснення застосування сегментів товстої кишки, наприклад, ободової кишки, є переважним.
Додатковий аспект варіантів здійснення стосується агента, вибраного за допомогою способу варіантів здійснення, або композиції, за визначенням вище, для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини.
Споріднений аспект варіантів здійснення визначає застосування агента, вибраного за допомогою способу варіантів здійснення, наприклад, отримуваного за допомогою способу вибору згідно з варіантами здійснення, або композиції, за визначенням вище, для виготовлення лікарського засобу, харчового продукту або біологічно активної харчової домішки для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у людини.
Інший споріднений аспект варіантів здійснення визначає спосіб зменшення або запобігання гастроіїнтестинальному болю у людини. Спосіб включає введення ефективної кількості агента, вибраної за допомогою способу варіантів здійснення, наприклад, отримуваного за допомогою способу вибору згідно з варіантами здійснення, або композиції, за визначенням вище, людині.
У варіанті здійснення даних аспектів агент являє собою бактеріальний штам, переважно штам молочнокислих бактерій і більш переважно штам Іасіорасійн5 гешегі, такий як бактеріальний штам, здатний зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ, переважно штам молочнокислих бактерій, здатних зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ, і більш переважно штам І асіорасійц5 гешіегі, здатний зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ.
У варіанті здійснення даних аспектів агент являє собою переважно І асіобасійн5 гешегі О5М 17938. У іншому варіанті здійснення агент являє собою інший штам молочнокислих бактерій, тобто агент являє собою штам молочнокислих бактерій, який не є І асіобасійни5 гешегі О5М 17938, переважно штам ГІ асіобасіїйи5 гешегі, який не є І асіорасійи5 гешегі ОМ 17938.
У варіанті здійснення даних аспектів агент являє собою кондиціоноване середовище з бактеріального штаму, переважно зі штаму молочнокислих бактерій, і більш переважно їхнього штаму Іасіорасійиє гецшіегі, таке як кондиціоноване середовище з бактеріального штаму, здатного зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ, переважно зі штаму молочнокислих бактерій, здатних зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ, і більш переважно зі штаму І асіобасійи5 гешіегі, здатного зменшувати спонтанну і/або індуковану активацію ТЕРМІ.
У варіанті здійснення агент являє собою кондиціоноване середовище від штаму молочнокислих бактерій, переважно з І асіорасійи5 гешегі О5М 17938 або штаму І асіорасійи5 гешегі, який не є ІГасіобасійи5 гешегі ОБМ 17938. Середовище, що застосовується для даного кондиціонованого середовища, може являти собою будь-яке середовище, відповідне для культивування штаму молочнокислих бактерій, відому в даній галузі. У варіанті здійснення середовище МЕ5 (де Мап, Кодоза 5 ЗПагре) застосовують як вихідний матеріал для виготовлення кондиціонованого середовища зі штаму молочнокислих бактерій, переважно з
І асторасіїйи5 гешегі ОБМ 17938. У варіанті здійснення винаходу кондиціоноване середовище зі штаму молочнокислих бактерій, переважно з Іасіорасійиє5 гешегі О5М 17938, ліофілізують перед введенням або застосуванням у вигляді композиції.
У іншому варіанті здійснення один або декілька компонентів кондиціонованого середовища зі штаму молочнокислих бактерій, переважно з І асіобасійи5 гешегі ОЗМ 17938, виділяють і вводять хворому у вигляді очищених і/або збагачених компонентів в формі відповідної композиції. Приклади даних компонентів включають білки, пептиди, ферменти та інші молекули, що переважно виділяються штамом молочнокислих бактерій в середовище. Також дані компоненти, виділені безпосередньо зі штаму молочнокислих бактерій, можна застосовувати згідно з варіантами здійснення.
Відповідний спосіб введення і лікарську форму агента або композиції вибирають залежно від локалізації захворювання. Переважним способом введення є пероральний, проте, в рівній мірі для деяких видів лікування будуть придатні внутрішньовенна або внутрішньом'язова ін'єкція.
Відповідні дози агента або композиції можуть бути легко вибрані або визначені кваліфікованим фахівцем в даній галузі залежно від розладу, що підлягає лікуванню, способу введення і передбачуваної лікарської форми.
У одному варіанті здійснення ТКРМ1-рецептор модулюють локально, наприклад, за допомогою застосування перорально молочнокислих бактерій, що вводяться, які можуть селективно модулювати активацію ТКРМІ в ШКТ, у людини, яка страждає від
Зо гастроіїнтестинального болю, і таким чином мінімізуючи будь-які несприятливі ефекти у зазначеного хворого. Можна вважати, що даний переважний шлях введення агента, зокрема штаму молочнокислих бактерій, вибраного за допомогою способу варіантів здійснення, буде головним чином локально впливати на активацію ТЕРМУ1, тобто в межах шлунково-кишкового тракту. Таким чином, тоді агент буде мати благотворну дію з метою запобігання або зменшення гастроінтестинального болю, мінімізуючи при цьому будь-яке небажане модулювання ТЕРМІ за межами шлунково-кишкового тракту.
У способах і застосуваннях даних варіантів здійснення, описаних в даній заявці, терміни "підвищувати", "зменшувати", "знижувати" тощо стосуються вимірюваної зміни рівнів, переважно значної зміни рівнів, більш переважно статистично значущої зміни, переважно зі значенням ймовірності 50,05.
Переважними хворими є ссавці, більш переважно люди.
Там, де розлад кишкової моторики, пов'язаний з гастроінтестинальним болем, що підлягає лікуванню, являє собою запор, тоді переважними хворими є пацієнти похилого віку або вагітні жінки. Під пацієнтом похилого віку зазвичай слід розуміти пацієнта у віці 70 років або старше.
Там, де розлад кишкової моторики, пов'язаний з гастроінтестинальним болем, що підлягає лікуванню, являє собою коліку, переважно це буде коліка немовляти.
Застосування агентів, переважно штамів молочнокислих бактерій, вибраних відповідно до способу варіантів здійснення, включає зменшення, запобігання або полегшенню розладу, що розглядається, або симптомів розладу (наприклад, може призвести до модулювання симптомів захворювання). Дане зменшення, запобігання або полегшення розладу або його симптомів можна виміряти за допомогою будь-якого відповідного аналізу.
Метою варіанту здійснення є пошук агентів, таких як молочнокислі бактерії, включаючи їхні частини і метаболіти, такі як присутні або виділені з кондиціонованого середовища, придатні для лікування, зменшення, запобігання або модулювання гастроінтестинального болю, наприклад, при специфічних розладах моторики і/або інших гастроінтестинальних больових розладах/захворюваннях, за допомогою застосування моделі в даній заявці, грунтуючись на дії агента на спонтанну і/або індуковану активність ТЕРМІ.
У варіанті здійснення метою є підбір бактеріального пробіотичного штаму, такого як штам молочнокислих бактерій, який може бути ефективним для запобігання або зменшення гастроінтестинального болю, пов'язаного із запором, у людей, особливо хворих похилого віку або вагітних жінок.
У варіанті здійснення метою є підбір агента, наприклад, штам молочнокислих бактерій, який може бути ефективним для запобігання або зменшення гастроінтестинального болю, пов'язаного з колькою немовляти.
У варіанті здійснення метою є підбір агента, наприклад, штаму молочнокислих бактерій, який може бути ефективним для запобігання або зменшення симптомів гастроінтестинального болю, пов'язаного із синдромом подразненої кишки (ІВ5).
Представлені наступні приклади варіантів здійснення, які не мають на увазі обмеження застосуванням варіантів здійснення в даній заявці, але детально показують практичні приклади, як можна застосовувати винахід. Приклад 1 стосується експерименту на брижовому нервовому пучку, який показує, що Ю5М 17938 пригнічує частоту активації брижового нерву. Приклад 2 показує, що О5М 17938 блокує індуковане капсаїцином надходження кальцію у первинні культури ОКО. Приклад З демонструє, що О5М 17938 пригнічує сповільнення частоти серцевих скорочень, викликане розтягненням шлунку.
ПРИКЛАДИ
ПРИКЛАД 1
Експерименти на брижовому нервовому пучку
Позаклітинна реєстрація даних
Дорослі самці швейцарських мишей Вебстер (20-30 г) були закуплені у Спагіез5 Кімег
І арогагогіез (ММІтіпдіоп, МА). Мишей умертвили за допомогою цервікальної дислокації. Всі подальші процедури проходили ех мімо.
Сегменти дистальної частини порожньої кишки (52,5 см) з прикріпленою брижовою тканиною витягували з щойно убитих тварин і вміщували в чашку Петрі, покриту Силгардом, заповнену буфером Кребса (в мМ): 118 масі, 4,8 КСІ, 25 МанНсо», 1,0 МаНгРО», 1,2 М950х, 11,1 глюкози і 2,5 Сасі», спіненим карбогеном (95 95 О»5 - 5 95 СО»2). Проксимальний і дистальний кінці кожного сегмента канюлювали пластмасовими трубками і спорожнювали. Тканину приколювали до Силгарду і виділяли брижовий нервовий пучок. Чашку Петрі вміщували на столик інвертованого мікроскопу, і через просвіт самопливом при 0,5-1 мл/хв. пропускали
Зо оксигенований розчин Кребса або розчин Кребса з додатковими компонентами (Реге7-Вигдо5
А.,, МУапд В сеї аї., Атегісап |оигпа! ої рпузіоїоду Сабігоіїпіезіїпаї апа ІІймег о рпузіоіюоду 2013:304:2211-20). Через серозний компартмент окремо пропускали струмінь попередньо нагрітого (34 "С) розчину Кребса при 3-5 мл/хв. Нервовий пучок обережно втягували в скляну піпетку, прикріплену до держателя електроду патч-клемп (СУ-7В; МоїІєсшаг Оемісез5, Зиппумаїе,
СА), і проводили позаклітинну реєстрацію даних нерву із застосуванням підсилювача Микі-
Сіатр 7008 і перетворювач сигналу Оідідаа 1440А (МоїІесшаг ЮОемісе5). Електричні сигнали фільтрували за допомогою смугово-пропускних фільтрів при 0,1-2 кГц, дискретизували при 20 кГц ії зберігали в персональному комп'ютері, задіюючи програмне забезпечення рСіатр 10 (МоІесшаг Оемісе5). Повторювані розтягнення сегментів здійснювали за допомогою наростаючого внутрішньопросвітного тиску вище 2 гПа. До розчину Кребса, що протікає по просвіту, застосовували механізм з постійним гравітаційним тиском, який дорівнює 48 гПа, і тиск підвищували за допомогою закриття відвідної трубки протягом 1 хв. до максимум З розтягнень, що йдуть одне за одним. Сегменти залишали в спокої протягом 9 хв. між розтягненнями.
Конститутивну електричну активність множинних нейронів реєстрували за відсутності позитивного внутрішньопросвітного тиску.
Ваготомія
Піддіафрагмальну ваготомію проводили, як описано раніше (мап аег КієїїЇ Н, О'Мапопу З еї а. Атегпсап |оитта! ої рнузіоїоду Недшіаїгу, іпіведгайме апа сотрагаїме рпузіоїоду 2008;295:81131-7). Тваринам дозволяли відновитися протягом 10-14 днів перед взяттям порожньої кишки і брижової тканини для електрофізіологічних експериментів. Хибні ваготомії виконали З тваринам. Після операції щодня вимірювали масу тіла і загальний стан здоров'я мишей. Автори винаходу не виявили очевидних ознак виражених відмінностей в наборі маси через 1 тиждень після операції ані у ваготомованих, ані у хибнооперованих тварин (дані не показані). Всіх ваготомованих мишей досліджували на повноту виконання процедури за допомогою реєстрації після кожного експерименту відповідей на нанесення холецистокініну (ССК) на серозну оболонку. Ваготомію вважали ефективною, тільки якщо ССК не підвищував частоту активації брижового нерву (Реге2-Вигдоз А., УМапод В еї аї., Атегісап |ошигпаї ої рпузіоїоду
Савзігоіпіевіїпа! апа Імег рпузіоїоду 2013;304:(с1211-20).
Лікарські препарати і бактерії
О5М 17938 були безоплатно надані Віосаійа АВ (5іосКкКПпоЇт, Змедеп), тоді як Гасіорасійи5
Патповзиз УВ-1 були взяті з запасів Вгіап-Воду Іпзійше МеоМавіег Опімегейу (Опіагіо, Сапада). Всі процедури були такими, як описано раніше (Кипле МА, Мао УК еї аї., Чоигпаї! ої сеїЇшіаг і тоїесшіаг тедісіпе 2009:13:2261-70, Ма Х, Мао УК еї аї., Атегісап |ошгтпа! ої рпузіоіоду
Савзігоіпіевіїпа! апа Імег рпузіоїсду 2009:296:2868-75, ММапд В, Мао УК, ЕАЗЕВ |іошигпаї!: ойісіа! рибіїсайоп ої Ше ГРедегайоп ої Атегісап 5осіейев ог Ехрегітепіа! Віоїоду 2010;24:4078-88).
Кількість бактерій визначали візуально, а життєздатність перевіряли після посіву в чашки з поживним агаровим середовищем. Бактерії із заморожених запасів піддавали відтаванню, центрифугували при 2000 об/хв. протягом 15 хв. і осад суспендували в розчині Кребса і знову центрифугували і ресуспендували. Перед застосуванням бактерії розбавляли до робочих концентрацій розчином Кребса. Сульфатований холецистокінін (25-33) (ССК) був отриманий від
Апазрес (Егетопі, СА); нікардипін, капсаїцин і б-йодонордигідрокапсаїцин від 5ідта-Аїйагісй і 0- конотоксин СМІА (шф-Са-сМІА) ії ф-конотоксин ММІС (ш-Са-ММІ!ІсС) від Аіотопе І аб5 (дегизаІет,
Івгає!). б6-йодонордигідрокапсаїцин і ССК розчиняли в ЮОМ5О; капсаїцин розчиняли в етанолі, щоб зробити аліквоти базового розчину. В день експерименту аліквоти розбавляли розчином
Кребса до робочих концентрацій з підсумковими концентраціями ОМ5О і етанолу, що становлять «0,01 Фо і «0,1 У, відповідно.
Аналіз даних в автономному режимі
Частоти спонтанної активації множинних і одиночних нейронів вимірювали, застосовуючи програмне забезпечення Сіатріїй 10.2 (МоїІесшаг Оемісев) і Огідіп 8.5 (Моппатріоп, МА).
Реєстрацію спайків множинних і одиночних нейронів в повсякденній практиці застосовували, щоб визначити зміни частот активації волокон брижового нерву, індуковані впливом на кишку різних стимулів або фармакологічних агентів (Реге7-Вигдо5 А., УМмапо В еї аі!., Атегісап |оигпаї ої рпузіоїоду Савігоіпієевіїпа! апа Імег рпузіоїюду 2013:304:3211-20). Розрахунок часу спайків при реєстрації множинних нейронів визначали, використовуючи модуль виявлення піка від Сіатрії, а середню частоту активації розраховували, виходячи з інтервалів між спайками. З сигналу множинних нейронів виділили одиночні нейрони за допомогою збігу форми спайків, використовуючи інструмент виявлення моделі форми спайків від Сіатрії (комп'ютеризований аналіз форми хвилі). Після проходження алгоритму виявлення моделі розпізнавання спайків
Зо одиночних нейронів завжди перевіряли за допомогою візуального огляду і відбраковували випадки незбіжних спайків («0,2 Ус) (Реге2-Вигдоз А., УМапо В еї а!., Атегісап |оигпаї ої рпузіоїоду
Савзігоіпіевіїпа! апа Імег рпузіоїоду 2013;304:(с1211-20).
Статистичні дані
Дані виражали у вигляді середніх - СО, причому М стосується загальної кількості сегментів порожньої кишки, з яких проводилася реєстрація, а п стосується показника активності одиничних волокон, виділеному з реєстрації даних множинних нейронів. Автори винаходу максимально виділили б одиночних нейронів з кожної реєстрації даних множинних нейронів.
Для порівняння парних або непарних даних застосовували критерій Вілкоксона або критерій
Стюдента для однієї вибірки, відповідно; для порівняння безлічі груп застосовували однофакторний і двофакторний дисперсійний аналіз з апостеріорним критерієм Бонферроні, відповідно. Оскільки між одним препаратом та іншим в нейронній активності множинних нейронів можуть існувати великі відхилення спонтанної активності, порівняння були парними, при цьому проводили реєстрацію даних до і після лікування, коли кожний нервовий пучок слугував як свій власний контроль для достовірності істотних змін кожної обробки або лікарської дози. Відсоткове значення підвищення активації вище вихідної частоти залежно від концентрації капсаїцину (за наявності або відсутності бактерій) наносили на графік, і його доповнювали логістичним рівнянням доза-ефект (М-Войот -- (Тор-Войоту/1--101с9Ес50-Х3), Параметри, які описують логістичну підгонку, порівнювали, використовуючи Е-критерій за додатковою сумою квадратів. Всі статистичні тести проводили, використовуючи програмне забезпечення Ргізт 5.0 (програмне забезпечення сгарпРад, Зап Оіедо, СА).
Дія О5М 17938 на спонтанну частоту активації брижового нерву
Порожнинний ЮО5М 17938 впливав на спонтанний розряд множинних нейронів брижового нерву (Реге2-Вигдоз А., УМапу В еї аї., Атегісап |оигпа! ої рпузіоїоду Савігоїпіезіпа! апа Імег рпузіоїюду 2013;304:2211-20). 1х109 КУО/мл внутрішньопросвітного ОЗМ 17938 викликав зменшення спонтанної частоти активації множинних нейронів на 22 95 від 36,3-8,4 до 28,2-7,2
Гц (М-7, Р-0,02, Фігура 1А); О5М 17938 при 1х108 КУО/мл змінював спонтанний розряд на 19 95 від 21,6--5,1 до 17,6-6 Гц, М-6, Р-0,09, Фігура 18). Кондиціоноване середовище ЮО5М О5М 17938 (1:5) також зменшувало спонтанний розряд на 37 95 від 22,6-4,2 до 14,17-2,4 Гц (М-7,
Р-0,03, Фігура 1С). Проте вбитий у- випромінюванням ЮОЗМ 17938 або один лише бульйон не знижував аферентну збудливість: з 17,84--5,3 до 18,25-4,1 Гу (М-6, Р-0,84), і з 20,48-1,6 до 21,49-2,8 Гц (М-6, Р-0,10) відповідно (Фігури 10-Е).
Ваготомія і м'язовий параліч не пригнічують зменшення за допомогою ОМ 17938 спонтанної активації брижового нерву
Автори винаходу дослідили, чи була дія О5М 17938 1х107 КУО/мл на спонтанний розряд нейтралізована попередньої ваготомією. Для того, щоб контролювати можливу безпосередню дію Ю5М 17938 на гладком'язові клітини, автори винаходу додали сюди і у всі подальші експерименти зі спонтанної активації блокатор Са?" каналів І-типу нікардипін (3 мкМ), який пригнічує м'язові скорочення. Таким чином, після ваготомії та додавання нікардипіну О5М 17938 зменшував частоту активації множинних нейронів на 18 95 з 16,72-41,9 до 13,77-1,9 Гц (М-17,
Р-0,001, Фігура 2А, 2С). Потім дані від ваготомованих тварин і паралізованих м'язів аналізували відносно частоти активації одиночних нейронів. ЮО5М 17938 зменшував частоту активації одиночних нейронів на 19 95 з 0,36--0,05 до 0,29--0,03 Гу (М-30, Р-0,02, Фігура 2В, 23); в даних волокнах більшість (20/30) продемонструвала зменшення частоти на 3695 з 0,42-0,06 до 0,27-0,04 Гу (Р«0,0001), але менша фракція волокон, що залишилися, підвищувала свою частоту активації на 29 95 з 0,24--0,04 до 0,31-0,06 Гц (М-10/30, Р-0,006).
ОМ 17938 знижував частоту активації спинномозкових одиночних нейронів і відповідь на капсаїцин за допомогою неконкурентного часткового антагонізму ТКРМ1-рецепторів
Автори винаходу дослідили, чи може Ю5М 17938 модифікувати індуковане капсаїцином збільшення частоти активації збудження одиночних нейронів в тканині, взятій у попередньо ваготомованих мишей. Капсаїцин, нанесений на серозний компартмент, підвищував спонтанну частоту активації множинних і одиночних нейронів, з початком латентних періодів, що становлять -60 с, і дозозалежним чином. Враховуючи, що чутливі до капсаїцину ТКРМ1- рецептори втрачають чутливість, і що подальше застосування агоніста може викликати зменшену дію, автори винаходу вивчили відповіді на діапазон доз капсаїцину (100 нмМ-100 мкм) в окремих сегментах порожньої кишки. Автори винаходу зробили це з 20-хвилинним попереднім внутрішньопросвітним введенням О5М 17938 1х109 КУО/мл і без нього (М-25 для кожної кривої, 5 сегментів на кожну концентрацію; для кожного сегмента проаналізовані 46 спинномозкових одиночних нейронів). Відсоток підвищення частоти активації залежно від концентрації
Зо капсаїцину або концентрації капсаїцину плюс ОМ 17938 були нанесені на графік і супроводжувалися трипараметричним логістичним рівнянням форми М-Войот -- (Тор-
Войот)/(1--1 0'с92с50-Х), ЕС50О для одного капсаїцину становила 200 нМ порівняно з 500 нМ для капсаїцину в присутності О5М 17938 (Р-0,71). Максимальна відповідь (Тор), отримана з капсаїцином, становила 238,4--27,5 95 м5. 129--17 95, отриманого з капсаїцином плюс ОМ 17938 (Р-0,004, Фігура ЗА). Узгоджуючись з попередніми повідомленнями, деякі спинномозкові волокна не збуджувалися капсаїцином. Автори винаходу перевірили, чи може капсаїцин безпосередньо збуджувати спинномозкові волокна, або чи залежить збудження від інтрамуральної синаптичної передачі від ентеральних нейронів до внутрішньогангліонарних спинномозкових закінчень. Автори винаходу додали 1 мкМ капсаїцину на серозний компартмент після блокування інтрамуральної синаптичної передачі за допомогою додавання 500 нм кожного з Са? блокаторів Фш-С9-аМІА ї Ф-С9-ММІИС. Інтрамуральний синаптичний блок не зменшував індуковане капсащцщином збудження, яке становило 187,5-42,995 (М-17) при відсутності конотоксинів і 219,1--72,6 (М-12) в їхній присутності (Р-0,947, Фігура ЗВ). Автори винаходу дійшли висновку, що дія ЮО5М 17938 на спинномозкові аференти не впливає на інтрамуральну синаптичну передачу.)
Дія кондиціонованого середовища ЮЗМ 17938, що містить продукти вивільнення бактерій
ОМ 17938, зменшує дію капсаїцину на спинномозкові волокна
Автори винаходу досліджували на брижових аферентах, чи лежать в основі антагонізму до
ТЕРМІ бактеріальні продукти О5М 17938. Мішенню ЮО5М 17938 в брижових аферентах були переважно спинномозкові волокна, враховуючи, що відсоток індукованого О5М 17938 зменшення спонтанної частоти активації був доволі схожий з попередньої ваготомією і без неї (18 95 ї 22 95, відповідно); потім автори винаходу ввели 1 мкМ капсаїцину в неваготомовані брижові волокна, які отримали попереднє внутрішньопросвітне введення кондиціонованого середовища О5М 17938 протягом 20 хв. Кондиціоноване середовище ОМ 17938 (1:5) сповільнювало підвищення індукованої капсаїцином частоти активації (У) на одиночних брижових волокнах з 187,5--43 95 (контрольна група, М-17) до 74,89--22 95 (М-14) і була схожа з відсотком підвищення індукованої капсаїцином на спинномозкових волокнах з 1х107 КУО/мл
О5М 17938 лікування (80,29--22 96, М-17) (Р-0,02, однофакторний дисперсійний аналіз; Фігура 7).
Антагонізм ОМ 17938 або ТЕРМУ1 зменшував індуковану розтягненням активацію
У відсутності нікардипіну для забезпечення м'язового скорочення автори винаходу зареєстрували частоту активації множинних і одиночних нейронів волокон, які ймовірно є ноцицепторами (Сгипау 0, сії 200453 Биррі 2:ії5-8). Автори винаходу досліджували, чи може
ОМ 17938 зменшувати їхню збудливу відповідь, спровоковану зростаючим внутрішньопросвітним тиском до ноцицептивної інтенсивності, яка становить 48 гПа (36 мм рт. ст.) (Реге2-Вигдо5 А., УМмапд В еї аї., Атегісап |оигпа! ої рпузіоїюду Савігоіїптезііпа! апа Іймег рпузіоїоду 2013;304:2211-20). Перша відповідь даних волокон на розтягнення кишки є загалом вищою, ніж отримана з подальшим розтягненням, але залишається постійною аж до З додаткового розтягнення (Реге2-Вигдо5 А., ММапд В еї аї., Атегісап |оигпа! ої рпузіоіоду
Савігоіїпіевіїпа апа мес рНнузіоюду 2013;304:4211-20). Автори винаходу таким чином використали 22 з З розтягнень, які йдуть один за одним, для порівняння. Активація множинних нейронів становила 111,5--16,7 Гц під час розтягнення, але після додавання Ю5М 17938 протягом 20 хв. розтягнення посилило активацію лише до 86,5--10,6 Гц (М-5, Р-:0,31). Частота активації спинномозкових одиночних нейронів становила 3,01--0,44 Гц під час розтягнення, але в присутності ОБМ 17938 активація становила 1,71-0,16 під час розтягнення (М-28, Р-0,008,
Фігура 4А). Частота активації перед розтягненням становила 0,31--0,05 для контролю і 0,25--0,07
Гц для додавання О5М 17938 (М-28, Р-0,053, Фігура 4А). Антагоніст ТКРМ1 (6- йодонордигідрокапсаїцин (10 мкМ) імітує дію О5М 17938 на відповідь одиночних нейронів за допомогою зменшення відповіді на розтягнення з 3,26--0,73 до 2,23--0,50 Гц (М-13, Р-0,0002,
Критерій Вілкоксона, Фігура 48В за відсутності нікардипіну).
ПРИКЛАД2
ОМ 17938 блокує індуковане капсаїцином збільшення Са" в первинних культурах нейронів рва
Первинні культури спинномозкових гангліїв (ОКО)
Хребетний стовп відокремили від тіла, перенесли в лабораторну склянку, що містить крижаний розчин Кребса, і подовжньо розітнули. ОКО виділили і зібрали від грудиннопоперекових рівнів. Цілі ОКО двічі промили середовищем Лейбовіца І-15 (СІВСО,
Сайпегзбиго, МО) та інкубували протягом 40 хв. в колагеназі 1 типу при 1 мг/мл (Зідта-Аїйагсн;
Зо ОакКмійе, ОМ, Сапада) і 0,5 мл трипсину (0,2595, СБІВСО) в 20 мл І-15 при 37 "б. Після додаткового додавання 5 мл 1-15, що містить 10 96 фетальну бичачу сироватку (ЕВ5, СІВСО), ганглії центрифугували протягом 5 хв. при 1000 об/хв., потім двічі промивали поживним середовищем (І -15, що містить 10 95 ЕВ5, 1 95 пеніциліну/стрептоміцину/глутаміну, 1 95 НЕРЕЗ і 195 пірувата Ма). ОКО вміщували в 2 мл поживного середовища і 10 разів розтирали. Потім ганглії центрифугували протягом 10 с при 500 об/хв., а супернатант переносили до стерильної пробірки. Їх ресуспендували в 2 мл поживного середовища, повторно розтирали доти, доки об'єм перенесеного супернатанту не становив 10 мл, центрифугували протягом 5 хв. при 1000 об/хв., і підсумковий осад ресуспендували в З мл поживного середовища. Нейрони наносили на
З чашки Петрі зі скляним дном, покритим поли-й-лізином (МаїТек, АзпІапа, МА). Через 30 хв. у кожну чашку додатково додавали 1,5 мл поживного середовища і цілком інкубували протягом 24 год. при 37 "С з карбогеном.
Візуалізація Са?
Нейрони ОКО помістили в плексигласову чашку для реєстрації і завантажили індикатор Са--
Еіно-4-АМ (8 мкМ), розбавлений в розчині Кребса з 0,1 95 плюроніловою кислотою (в ОМ5О) при 37 "С протягом 60 хв. Чашку вміщували у відділення для реєстрації і заливали свіжим розчином
Кребса (34 "С) на 15 хв., щоб вимити барвник. Клітини розглядали в інвертованому мікроскопі (Мікоп єсіїрзе ТЕ 2000-5, Меїміе, МУ) і отримували зображення, використовуючи камеру Коїега-
ХЕ (Зштеу, ВС, Сапада). Інтенсивність флуоресценції в окремих нейронах реєстрували за допомогою програмного забезпечення Зітріеє РСІ 6 (Сотріх Іпс, Ітадіпуд 5увзіет5, Зем/іскКієу,
РА). Лікарські препарати доставляли за допомогою мікропіпетки, прикріпленої до імпульсного розпилювача з електронним регулюванням тиску (Рісозргйїгег ІІ; Сепега! Маме, Раїпівід, М) з кінчиком «100 мкМ з клітини. Зображення, зареєстровані при 0,9 кадрів/с, зберігали на локальному жорсткому диску. Файли зображень аналізували в автономному режимі, використовуючи програмне забезпечення Ітаде У (МІН, О5А, пер:/Лтаде).пій.дом/|). Збільшення
Еіно-4 Са: при введенні капсаїцину вимірювали у вигляді співвідношення (Р/Ео) інтенсивності флуоресценції після капсаїцину (Е), поділену на інтенсивність до капсаїцину (Ро). Бактеріями і лікарськими препаратами маніпулювали, як в Прикладі 1.
Результати
Специфічність дії ОМ 17938 на спинномозкові нейрони додатково досліджували шляхом бо дослідження здатності бактерій пригнічувати відповідь ТКРМ1-рецептора на капсаїцин. У дані експерименти також включили .8-1. 8-1 (Іасіорасійй5 гпатпоб5и5), як раніше було продемонстровано, зменшує біль і активуючий розряд одиночних волокон ОКО, індуковані розтягненням шлунку (ЮипскКег еї аї., Те доигпаї! ої Мишїщйіоп 2011). Оскільки відкриття ТКРМ1- каналів підвищує концентрацію внутрішньоклітинного Са, автори винаходу використали візуалізацію Са? первинної культури нейронів ОКО для даних експериментів. Розпилення 1
МКМ капсаїцину на нейрони ОКО викликало підвищення внутрішньоклітинного Са?" протягом -30 с (Фігура 5А). Оскільки у ТКРМ1-каналу може зменшуватися чутливість з повторним впливом ліганду, автори винаходу лише одноразово вводили капсаїцин у кожну чашку для культивування. Потім за 30 хв. перед введенням капсаїцину автори винаходу додали або О5М 17938, або 2В-1. О5БМ 17938 при 1х107 КУО/мл знижував коефіцієнт зростання флуоресценції з 2,36-0,31 контрольна група, М-14) до 1,25--0,04 Е/Ро. Але 1х108 КУО/мл ЮО5М 17938 змінило Е/ЕРо до 2,67-0,35, а 1х10855 КУО/мл Ю5М 17938 до 2,07-0,27. Додавання 1х107 КУО/мл УВ-1 мало невелику дію і змінило співвідношення Г/Ро до 2,48--0,19 (М-9), яке є схожим зі співвідношенням, отриманим з одним капсаїцином (Фігура 58). Дані результати демонструють, що ОМ 17938 може блокувати підвищення Са", індуковане капсаїцином, в первинних культурах нейронів рава.
ПРИКЛАД З
ОМ 17938 пригнічує сповільнення частоти серцевих скорочень, викликане розтягненням шлунку
Загалом 17 щурів поділили на 2 групи. Після прибуття щурам давали акліматизуватися протягом 1 тижня з подальшою обробкою протягом 1 тижня (10 хв./доб.) для мінімізації дії стресу під час експериментів. Щурів годували через шлунковий зонд протягом 9 днів або з 0,2 мл (1х109 КУО/мл) живого ОЗМ 17938 в розчині Кребса, або тільки розчином Кребса як контроль (носій). Способи розтягнення шлунку опубліковані раніше (Тоцда5, У/апду, Атегісап Уоигпаї ої
РПузіоюду 1999:277:8272-8). Коротко, щури сголодували протягом ночі, були інтраперитонеально анестезовані сумішшю кетаміну гідрохлориду (75 мг/кг маси тіла) і ксилазину (10 мг/кг маси тіла). За необхідністю давали підтримуючу анестезію. Після серединної лапаротомії пристрій для розтягнення, що складається з кулястого шлункового балону (внутрішній діаметр 2 см), прикріпленого до тефлонового катетера (20 см), вставляли у шлунок
Зо через маленький розріз в проксимальній частині дванадцятипалої кишки і з'єднували з системою баростат (Оібзієеєпаег, 58) ЕІесігопіс, Тогопіо, Сапада). Відповідь серця вимірювали, роздуваючи при цьому балон повітрям до тиску, що становить 40 і 60 мм рт. ст. протягом 60 м.
Для відновлення після кожного розтягнення давали десять хвилин відпочинку. З метою уникнення можливих компенсаторних механізмів кожному щуру наносили тільки одну серію розтягнень, і після вимірювання щурів умертвляли до повернення до тями. Безперервну реєстрацію частоти серцевих скорочень виконували за допомогою електрокардіограми з поверхні тіла, що складається з З голчастих електродів, накладених на ліву і праву передні кінцівки і праву задню кінцівку. Сигнал посилювали і реєстрували на персональному комп'ютері, використовуючи комерційну програму збору даних (Ехрегітепіес5 ММо(Ккрепсі, БРаїау/аме
Тесппоодієв, Гомеїапа, СО). Частоту серцевих скорочень вимірювали протягом 60 с до, під час і після кожного розтягнення лише протягом 180 с. Реєстрація частоти серцевих скорочень (НК) перед кожним розтягненням дозволяла коректувати можливі вихідні зміни внаслідок відмінностей в рівнях анестезії і забезпечувала, що відповідь будь-якої частоти серцевих скорочень може бути пов'язана з розтягненням. Для контролю дії розтягнення шлунку протягом часу дані були представлені у вигляді середньої зміни від НК в спокої (100 95-спокій), використовуючи середню НЕ, зареєстровану в період 10 с під час розтягнення (10, 20, 30, 40, 50, і 60 с). Групи порівнювали, використовуючи середні зміни НК (відсоток НК в спокої) у всіх щурів тієї самої групи протягом 60 с кожного розтягнення (40 і 60 мм рт. ст.). Бактеріями і лікарськими препаратами маніпулювали, як в Прикладі 1.
Результати
Зменшення частоти серцевих скорочень, викликане 40 мм рт. ст., введення ОМ 17938 через шлунковий зонд не змінювало (Р-0,121, Фігура бА) (М-8 і 9 з носієм ії О5М 17938, відповідно). Роздування до 60 мм рт. ст. знижувало частоту серцевих скорочень протягом 10 с, яке зберігалося протягом 30 с під час розтягнення (Фігура 68). Введення О5М 17938 через шлунковий зонд протягом 9 дн. до дослідження пом'якшувало відповідь на 60 мм рт. ст. (Р-0,028, критерій Стюдента для однієї вибірки, Фігура бА, 6В). Податливість шлунку (об'єм/тиск) не відрізнялася у тварин, оброблених носієм і О5М 17938, для тиску розтягнення шлунку, що становить 40 або 60 мм рт. ст. (дані не показані). Дані результати демонструють антиноцицептивну дію бактерій. (510)
Claims (7)
1. Спосіб вибору бактеріального штаму роду І асіорасіїш5 для застосування з метою зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю у суб'єкта, де зазначений спосіб включає: контактування клітини, яка експресує ТКРМІ, зі штамом бактерій Іасіобасійи5 або кондиціонованим середовищем із зазначеного штаму бактерій, який підлягає дослідженню; вимірювання спонтанної і/або індукованої активації ТЕРМІ у зазначеній клітині після контактування зазначеної клітини із зазначеним штамом бактерій або зазначеним кондиціонованим середовищем із зазначеного штаму бактерій, який підлягає дослідженню; і порівняння зазначеної виміряної спонтанної і/або індукованої активації ТРЕМІ з контрольною активацією ТРЕКМІ, при цьому вибір зазначеного штаму бактерій або зазначеного кондиціонованого середовища із зазначеного штаму бактерій включає вибір зазначеного штаму бактерій або зазначеного кондиціонованого середовища із зазначеного штаму бактерій, який підлягає дослідженню, як штаму молочнокислих бактерій або кондиціоноване середовище із зазначеного штаму молочнокислих бактерій, ефективного для зменшення або запобігання гастроїнтестинальному болю, якщо зазначена виміряна спонтанна і/або індукована активація ТРЕМ'І нижча зазначеної контрольної активації ТРЕМ'І1.
2. Спосіб за п. 1, в якому вимірювання зазначеної спонтанної і/або індукованої активації ТЕРМІ включає вимірювання надходження Са": у зазначеній клітині, індукованого капсаїцином, зміною рН і/або нагріванням.
3. Спосіб за п. 1, який додатково включає: контактування ех мімо шлунково-кишкового сегмента з прикріпленою брижовою тканиною зі штамом молочнокислих бактерій або кондиціонованим середовищем із зазначеного штаму молочнокислих бактерій, який підлягає дослідженню; вимірювання спонтанної і/або індукованої активації брижових аферентів у зазначеному ех мімо шлунково-кишковому сегменті після контактування зазначеного ех мімо шлунково-кишкового сегмента із зазначеним штамом бактерій або зазначеним кондиціонованим середовищем із зазначеного штаму бактерій, який підлягає дослідженню; і порівняння зазначеної спонтанної і/або індукованої виміряної активації брижових аферентів з Зо контрольною активацією брижових аферентів, при якому вибір зазначеного штаму бактерій або зазначеного кондиціонованого середовища із зазначеного штаму бактерій включає вибір зазначеного штаму бактерій або зазначеного кондиціонованого середовища із зазначеного штаму бактерій, який підлягає дослідженню, як зазначений штам бактерій або зазначене кондиціоноване середовище із зазначеного штаму бактерій, ефективного для зменшення або запобігання гастроінтестинальному болю, якщо зазначена виміряна спонтанна і/або індукована активація брижових аферентів нижча зазначеної контрольної активації брижових аферентів.
4. Спосіб за п. 1, в якому зазначений штам бактерій І асіобасіїш5 являє собою штам І асіорасіи5 гешегі, здатний знижувати спонтанну і/або індуковану активацію ТКРМ1.
5. Спосіб за п. 4, в якому зазначений штам І асіорасіїш5 гешіегі являє собою штам І асіобасіїй5 гешієті ОБМ 17938.
6. Спосіб за будь-яким з пп. 1-5, в якому зазначений суб'єкт страждає на порушення моторики кишечнику, яке викликало зазначений гастроінтестинальний біль у зазначеного суб'єкта.
7. Спосіб за будь-яким з пп. 1-6, в якому зазначений суб'єкт страждає на захворювання, вибране з групи, яка складається з колік, синдрому подразненої кишки і запору, який викликає зазначений гастроінтестинальний біль у зазначеного суб'єкта.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE1450065 | 2014-01-23 | ||
| SE1450813 | 2014-07-01 | ||
| PCT/SE2015/050064 WO2015112083A1 (en) | 2014-01-23 | 2015-01-23 | Selection of agents modulating gastrointestinal pain |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA120846C2 true UA120846C2 (uk) | 2020-02-25 |
Family
ID=52465569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201608948A UA120846C2 (uk) | 2014-01-23 | 2015-01-23 | Вибір штаму молочнокислих бактерій, який модулює гастроінтестинальний біль |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20160334391A1 (uk) |
| EP (2) | EP3629026B1 (uk) |
| JP (1) | JP6635925B2 (uk) |
| KR (1) | KR102154382B1 (uk) |
| CN (1) | CN106164674B (uk) |
| AU (1) | AU2015209763B2 (uk) |
| BR (1) | BR122023013786B1 (uk) |
| CA (1) | CA2936560C (uk) |
| CL (1) | CL2016001878A1 (uk) |
| DK (1) | DK3629026T3 (uk) |
| ES (2) | ES2767060T3 (uk) |
| IL (1) | IL246563B (uk) |
| MX (1) | MX369105B (uk) |
| NZ (1) | NZ721882A (uk) |
| PL (1) | PL3629026T3 (uk) |
| RU (1) | RU2692671C2 (uk) |
| SG (1) | SG11201605378TA (uk) |
| UA (1) | UA120846C2 (uk) |
| WO (1) | WO2015112083A1 (uk) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11179427B2 (en) | 2013-01-21 | 2021-11-23 | Eth Zurich | Baby food composition comprising viable propionic acid-producing bacteria |
| WO2018074514A1 (ja) * | 2016-10-20 | 2018-04-26 | ビオフェルミン製薬株式会社 | 腸管のイオン経細胞輸送体への作用剤、クロライドチャネル活性化剤、腎疾患の予防もしくは治療剤、又は排便促進剤 |
| CN112739814B (zh) * | 2018-07-24 | 2023-12-08 | 生命大地女神有限公司 | 使用能够增加腺苷水平的细菌菌株的治疗方法 |
| CN117487686A (zh) * | 2018-07-24 | 2024-02-02 | 生命大地女神有限公司 | 选择和使用褪黑素支持细菌以减少婴儿绞痛 |
| CN111484982A (zh) * | 2020-05-14 | 2020-08-04 | 西南民族大学 | 一种人结直肠腺癌细胞trpv1基因敲除细胞株及应用 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1289984B1 (it) | 1997-02-27 | 1998-10-19 | Proge Farm Srl | Ceppi di lattobacilli utili nel trattamento di disfunzioni del sistema gastrointestinale |
| AU2006232931A1 (en) * | 2005-04-01 | 2006-10-12 | Board Of Trustees Of Southern Illinois University | Intermetallic bonded diamond composite composition and methods of forming articles from same |
| US7344867B2 (en) | 2005-04-15 | 2008-03-18 | Eamonn Connolly | Selection and use of lactic acid bacteria for reducing inflammation in mammals |
| US20080051454A1 (en) | 2006-04-21 | 2008-02-28 | The Board Of Trustees Operating Michigan State University | Compositions and methods for transient receptor potential vanilloid (TRPV) channel mediated treatments |
| US7374924B2 (en) * | 2006-06-05 | 2008-05-20 | Biogaia Ab | Use of selected lactic acid bacteria for reducing infantile colic |
| WO2008090434A1 (en) | 2007-01-25 | 2008-07-31 | Pfizer Japan Inc. | Substituted n-bicyclicalkyl bicyclic carboxyamide compounds |
| EP2307042B1 (en) * | 2008-06-25 | 2014-03-26 | H. Lundbeck A/S | Modulation of the trpv : vps10p-domain receptor system for the treatment of pain |
| KR101091810B1 (ko) | 2009-09-11 | 2011-12-12 | 고려대학교 산학협력단 | 신규 활성제를 이용한 ｔｒｐｖ1 활성화 방법 |
| JP5681533B2 (ja) * | 2011-03-14 | 2015-03-11 | ビオフェルミン製薬株式会社 | 消化管痛の予防又は軽減剤 |
| US8889659B2 (en) * | 2011-09-09 | 2014-11-18 | Api Genesis, Llc | Pain relief compositions, manufacture and uses |
| JPWO2013141202A1 (ja) | 2012-03-21 | 2015-08-03 | 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター | 筋増加剤、及び筋増加物質のスクリーニング方法 |
-
2015
- 2015-01-23 EP EP19207905.1A patent/EP3629026B1/en active Active
- 2015-01-23 BR BR122023013786-8A patent/BR122023013786B1/pt active IP Right Grant
- 2015-01-23 MX MX2016009613A patent/MX369105B/es active IP Right Grant
- 2015-01-23 NZ NZ721882A patent/NZ721882A/en unknown
- 2015-01-23 ES ES15703840T patent/ES2767060T3/es active Active
- 2015-01-23 CN CN201580005611.8A patent/CN106164674B/zh active Active
- 2015-01-23 DK DK19207905.1T patent/DK3629026T3/da active
- 2015-01-23 SG SG11201605378TA patent/SG11201605378TA/en unknown
- 2015-01-23 WO PCT/SE2015/050064 patent/WO2015112083A1/en active Application Filing
- 2015-01-23 ES ES19207905T patent/ES2874479T3/es active Active
- 2015-01-23 EP EP15703840.7A patent/EP3097423B1/en active Active
- 2015-01-23 PL PL19207905T patent/PL3629026T3/pl unknown
- 2015-01-23 AU AU2015209763A patent/AU2015209763B2/en active Active
- 2015-01-23 KR KR1020167022947A patent/KR102154382B1/ko active IP Right Grant
- 2015-01-23 US US15/111,930 patent/US20160334391A1/en not_active Abandoned
- 2015-01-23 CA CA2936560A patent/CA2936560C/en active Active
- 2015-01-23 RU RU2016134215A patent/RU2692671C2/ru active
- 2015-01-23 JP JP2016548146A patent/JP6635925B2/ja active Active
- 2015-01-23 UA UAA201608948A patent/UA120846C2/uk unknown
-
2016
- 2016-07-03 IL IL24656316A patent/IL246563B/en active IP Right Grant
- 2016-07-22 CL CL2016001878A patent/CL2016001878A1/es unknown
-
2018
- 2018-05-16 US US15/981,244 patent/US10656141B2/en active Active
-
2020
- 2020-03-30 US US16/834,278 patent/US11371985B2/en active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rieder et al. | Microbes and mental health: A review | |
| US11371985B2 (en) | Selection of agents modulating gastrointestinal pain | |
| Kunze et al. | Lactobacillus reuteri enhances excitability of colonic AH neurons by inhibiting calcium‐dependent potassium channel opening | |
| Fukudo | Stress and visceral pain: focusing on irritable bowel syndrome | |
| Cryan et al. | Mind-altering microorganisms: the impact of the gut microbiota on brain and behaviour | |
| JP6476328B2 (ja) | 腸運動障害及び疼痛に影響を及ぼす薬剤の選択方法 | |
| Darch et al. | Gut microbiome effects on neuronal excitability & activity: Implications for epilepsy | |
| Kannampalli et al. | Neonatal bladder inflammation induces long-term visceral pain and altered responses of spinal neurons in adult rats | |
| Klass et al. | Acute effect of noradrenergic modulation on motor output adjustment in men | |
| BR112016016969B1 (pt) | Método para selecionar um agente para uso na redução ou prevenção da dor gastrointestinal em um indivíduo, uso de uma cepa bacteriana ou meio condicionado de dita cepa bacteriana, e, uso de uma composição | |
| Neufeld et al. | Psychoactive bacteria Lactobacillus rhamnosus (JB-1) elicits rapid frequency 1 facilitation in vagal afferents 2 | |
| Pal et al. | Pearls and Pitfalls in the Evaluation of Patients with Bulbar Muscle Weakness | |
| Pradhananga | Plasticity of Vagal Afferent Neurons During Gut Microbial Dysbiosis and Inflammation | |
| Bartholdi | The role of sensorimotor afferent feedback in mediating functional recovery after spinal cord injury | |
| Cryan et al. | Manipulation of gut microbiota blunts the ventilatory response to hypercapnia in adult rats | |
| HOFMANN et al. | These abstracts have been co–published with permission in Neurogastroenterology & Motility and in Journal of Neurogastroenterology & Motility. All rights reserved.© The Author 2014. | |
| HEIDT et al. | 26. THE GUT MICROBIOME AND THE NERVOUS SYSTEM | |
| VIGNERI et al. | Are functional GI disorders gastroenterological or neurological diseases? |