ES2767060T3 - Selección de agentes que modulan el dolor gastrointestinal - Google Patents
Selección de agentes que modulan el dolor gastrointestinal Download PDFInfo
- Publication number
- ES2767060T3 ES2767060T3 ES15703840T ES15703840T ES2767060T3 ES 2767060 T3 ES2767060 T3 ES 2767060T3 ES 15703840 T ES15703840 T ES 15703840T ES 15703840 T ES15703840 T ES 15703840T ES 2767060 T3 ES2767060 T3 ES 2767060T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- trpv1
- pain
- lactobacillus reuteri
- gastrointestinal
- agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010017999 Gastrointestinal pain Diseases 0.000 title claims abstract description 104
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 130
- 102000003566 TRPV1 Human genes 0.000 claims abstract description 96
- 101150016206 Trpv1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 96
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 74
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims abstract description 71
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 claims abstract description 42
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 claims abstract description 41
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 claims abstract description 33
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N capsaicin Chemical compound COC1=CC(CNC(=O)CCCC\C=C\C(C)C)=CC=C1O YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N 0.000 claims description 112
- 229960002504 capsaicin Drugs 0.000 claims description 56
- 235000017663 capsaicin Nutrition 0.000 claims description 56
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 49
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 39
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 35
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 claims description 25
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 claims description 16
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 14
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 claims description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 10
- 230000008991 intestinal motility Effects 0.000 claims description 10
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 claims description 9
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 64
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 53
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 39
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 38
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 32
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 32
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 28
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 28
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 26
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 22
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 20
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 19
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 18
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 17
- 230000004044 response Effects 0.000 description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 15
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 13
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 11
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000008050 pain signaling Effects 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 208000009935 visceral pain Diseases 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 8
- 230000036397 gastrointestinal physiology Effects 0.000 description 8
- 230000003910 liver physiology Effects 0.000 description 8
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 7
- 230000005176 gastrointestinal motility Effects 0.000 description 7
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 6
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 6
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 6
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 5
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 5
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 5
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 5
- ZBBHBTPTTSWHBA-UHFFFAOYSA-N Nicardipine Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OCCN(C)CC=2C=CC=CC=2)C1C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 ZBBHBTPTTSWHBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 5
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 5
- 229960001783 nicardipine Drugs 0.000 description 5
- 210000000929 nociceptor Anatomy 0.000 description 5
- 208000027753 pain disease Diseases 0.000 description 5
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 5
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 5
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- AAORACFZMYMFCG-UHFFFAOYSA-N N-[(4-hydroxy-2-iodo-5-methoxyphenyl)methyl]nonanamide Chemical compound CCCCCCCCC(=O)NCC1=CC(OC)=C(O)C=C1I AAORACFZMYMFCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010025083 TRPV1 receptor Proteins 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 208000037903 inflammatory enteropathy Diseases 0.000 description 4
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 108091008700 nociceptors Proteins 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 3
- 206010021746 Infantile colic Diseases 0.000 description 3
- PJAAESPGJOSQGZ-DZGBDDFRSA-N Isovelleral Chemical compound O=CC1=C[C@@H]2CC(C)(C)C[C@@H]2[C@@]2(C)C[C@]21C=O PJAAESPGJOSQGZ-DZGBDDFRSA-N 0.000 description 3
- 229940126422 TRPV1 antagonist Drugs 0.000 description 3
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 208000027819 intestinal motility disease Diseases 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 3
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 3
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- 230000001515 vagal effect Effects 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 208000034347 Faecal incontinence Diseases 0.000 description 2
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 2
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 206010067171 Regurgitation Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000009460 calcium influx Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 231100000735 select agent Toxicity 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 102000042565 transient receptor (TC 1.A.4) family Human genes 0.000 description 2
- 108091053409 transient receptor (TC 1.A.4) family Proteins 0.000 description 2
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C1C(C(O)=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)CC1NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010444 Acidosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010003840 Autonomic nervous system imbalance Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine group Chemical group N[C@H](CCCCN)C(=O)O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 208000012258 Diverticular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010013554 Diverticulum Diseases 0.000 description 1
- 238000001134 F-test Methods 0.000 description 1
- OUVXYXNWSVIOSJ-UHFFFAOYSA-N Fluo-4 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C2=C3C=C(F)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(F)C=C32)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 OUVXYXNWSVIOSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061958 Food Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010052402 Gastrointestinal hypermotility Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150111783 NTRK1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229920005372 Plexiglas® Polymers 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000015815 Rectal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010064993 Rectal fissure Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 208000027520 Somatoform disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 102000003563 TRPV Human genes 0.000 description 1
- 108060008564 TRPV Proteins 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 102100029613 Transient receptor potential cation channel subfamily V member 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- QOMNQGZXFYNBNG-UHFFFAOYSA-N acetyloxymethyl 2-[2-[2-[5-[3-(acetyloxymethoxy)-2,7-difluoro-6-oxoxanthen-9-yl]-2-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]phenoxy]ethoxy]-n-[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]-4-methylanilino]acetate Chemical compound CC(=O)OCOC(=O)CN(CC(=O)OCOC(C)=O)C1=CC=C(C)C=C1OCCOC1=CC(C2=C3C=C(F)C(=O)C=C3OC3=CC(OCOC(C)=O)=C(F)C=C32)=CC=C1N(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O QOMNQGZXFYNBNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007950 acidosis Effects 0.000 description 1
- 208000026545 acidosis disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000037007 arousal Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940071604 biogaia Drugs 0.000 description 1
- 230000036471 bradycardia Effects 0.000 description 1
- 208000006218 bradycardia Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- UBAZGMLMVVQSCD-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide;molecular oxygen Chemical compound O=O.O=C=O UBAZGMLMVVQSCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- -1 commensals Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 210000005216 enteric neuron Anatomy 0.000 description 1
- 208000037902 enteropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 208000024469 excessive crying of infant Diseases 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018936 intestinal hypermotility Diseases 0.000 description 1
- 230000037036 intestinal hypermotility Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004184 ketamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001785 maturational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000008035 nerve activity Effects 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 230000007433 nerve pathway Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000001473 noxious effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008058 pain sensation Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 208000037921 secondary disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000002265 sensory receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091008691 sensory receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000027509 sensory receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 210000005250 spinal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000008925 spontaneous activity Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
- G01N33/5041—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects involving analysis of members of signalling pathways
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/06—Gastro-intestinal diseases
Abstract
Método para seleccionar un agente para su uso en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto, comprendiendo dicho método: poner en contacto una célula que expresa TRPV1 con una cepa de Lactobacillus reuteri o un medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba; medir la activación espontánea y/o inducida del receptor de potencial transitorio vaniloide 1, TRPV1, en dicha célula tras poner en contacto dicha célula con dicha cepa de Lactobacillus reuteri o dicho medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba; comparar dicha activación espontánea y/o inducida de TRPV1 medida con una activación de TRPV1 de control; y seleccionar, como dicho agente, dicha cepa de Lactobacillus reuteri o dicho medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba como cepa de Lactobacillus reuteri o medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri eficaz en reducir o evitar el dolor gastrointestinal si dicha activación espontánea y/o inducida de TRPV1 medida es menor que dicha activación de TRPV1 de control.
Description
DESCRIPCIÓN
Selección de agentes que modulan el dolor gastrointestinal
Campo técnico
La presente invención se refiere principalmente a la modulación del dolor gastrointestinal y, en particular, a la selección de agentes, tales como bacterias del ácido láctico, que pueden modular el dolor gastrointestinal y al uso de tales agentes.
Antecedentes
El dolor gastrointestinal es un síntoma de muchos estados, enfermedades y trastornos asociados con el tracto gastrointestinal. El dolor abdominal funcional se refiere a dolor abdominal recurrente. La gran mayoría de pacientes con dolor abdominal recurrente tienen dolor “funcional” o “no orgánico”, lo que significa que el dolor no está provocado por anomalías físicas. Diversos trastornos de motilidad también se asocian con dolor y estreñimiento o diarrea. El término se usa para describir una variedad de trastornos en los que el intestino no ha desarrollado adecuadamente o ha perdido su capacidad para coordinar la actividad muscular debido a diversos motivos.
Tales trastornos pueden manifestarse en una variedad de maneras, e incluyen, pero no se limitan a, las siguientes: Distensión abdominal
Obstrucción recurrente
Dolor cólico abdominal
Estreñimiento
Enfermedad por reflujo gastroesofágico
Vómitos recurrentes, incoercibles
Diarrea
Síndrome del intestino irritable (IBS, por sus siglas en inglés Irritable Bowel Syndrome)
Enteropatía inflamatoria
Incontinencia fecal
Cólicos del lactante
Dolor abdominal recurrente frecuente (FRAP, por sus siglas en inglés Frequent Recurrent Abdominal Pain) Regurgitación
Intolerancia alimentaria
En un sentido amplio, cualquier alteración significativa en el tránsito de alimentos y secreciones en el tubo digestivo puede considerarse un trastorno de motilidad intestinal y este es el tipo de trastorno que a menudo se asocia con el dolor gastrointestinal.
Se requieren movimientos coordinados adecuados del estómago y los intestinos para digerir y propulsar el contenido intestinal a lo largo del tubo digestivo. Los patrones de contracción y relajación necesarios para la motilidad adecuada del tracto gastrointestinal (GI) son complejos y usan los nervios y músculos dentro de las paredes gastrointestinales. Cada día, en cualquier momento, pueden influir muchos factores en la motilidad gastrointestinal, por ejemplo, el ejercicio físico y el malestar psíquico. Los recién nacidos tienen que desarrollar el complejo sistema de motilidad en el tracto gastrointestinal. La motilidad gastrointestinal disfuncional a menudo se asocia con el dolor gastrointestinal.
El envejecimiento, la demencia, el accidente cerebrovascular, la enfermedad de Parkinson, lesiones de la médula espinal, el desgarro rectal durante el alumbramiento, la diabetes, complicaciones quirúrgicas y trastornos neuromusculares, por ejemplo, miastenia grave, pueden provocar trastornos de motilidad que se asocian con el dolor.
El síndrome de intestino irritable (IBS), un trastorno comúnmente diagnosticado de motilidad intestinal y dolor gastrointestinal, se ha considerado una enfermedad del colon durante décadas, pero la investigación en la motilidad gastrointestinal ha demostrado que también pueden producirse problemas de motilidad subyacentes en el intestino delgado. El IBS a menudo puede ir acompañado de dolor gastrointestinal y se ha mostrado que la inmunorreactividad de TRPV1 aumenta notablemente en pacientes con IBS (Akbar, Yiangou et al., Gut 2008).
El estreñimiento, a menudo asociado con el dolor gastrointestinal, es la dolencia digestiva más común en los Estados Unidos, pero, a pesar de su frecuencia, a menudo permanece no reconocida hasta que el paciente desarrolla trastornos secundarios, tales como trastornos anorrectales o enfermedad diverticular. Tal como se mencionó anteriormente, el dolor gastrointestinal es un síntoma común de estreñimiento.
El estreñimiento es bastante común durante el embarazo. Las contracciones musculares que normalmente mueven el alimento a través de los intestinos se ralentizan debido a los mayores niveles de la hormona progesterona y posiblemente al hierro adicional tomado como vitamina prenatal. A menudo, esto también va acompañado de dolor de la parte inferior del abdomen.
El estreñimiento también se asocia con la edad aumentada y el denominado “intestino envejecido” comúnmente encontrado especialmente en personas mayores de 70 y en instituciones para enfermos crónicos.
En el otro extremo de los trastornos de motilidad intestinal del espectro de envejecimiento, el llanto persistente o excesivo de cólicos del lactante es uno de los problemas más angustiosos de la infancia. Es angustioso para el lactante, los padres y los profesionales asistenciales involucrados. El dolor cólico a menudo comienza y se detiene de manera brusca.
La hipermotilidad intestinal secundaria a un presunto desequilibrio autónomo también se ha propuesto como una causa de cólico. Muchos de los mecanismos que regulan la actividad motora son inmaduros en los lactantes. La inmadurez de estos mecanismos puede dar como resultado vulnerabilidad aumentada a la intolerancia alimentaria. Por tanto, el cólico puede ser una manifestación clínica común en la subpoblación de lactantes que tienen disfunción madurativa en uno o más de los aspectos de regulación de la motilidad y a menudo que conducen a dolor gastrointestinal para el lactante.
Los trastornos de motilidad intestinal se aplican a las contracciones intestinales anómalas a menudo asociadas con el dolor gastrointestinal, existen muchos tipos diferentes de tratamientos y recomendaciones para los diferentes trastornos, algunos de los cuales funcionan mejor que muchos otros.
Por tanto, existe una necesidad general y problemas específicos para resolver diversos trastornos de motilidad y trastornos del dolor concretamente; ¿Cómo seleccionar mejor agentes para evitar o reducir el dolor gastrointestinal? El receptor de potencial transitorio vaniloide 1 (TRPV1) es un canal catiónico permeable para Ca2+ expresado en, por ejemplo, el sistema nervioso periférico (SNP), el sistema nervioso central (SNC), el aparato respiratorio y el tracto gastrointestinal. El TRPV1 se activa mediante estímulos físicos y químicos, por ejemplo, temperatura, cambio de pH y capsaicina, y es crítico para la detección de dolor inflamatorio nocisensible y térmico. En el tracto gastrointestinal, la inmunorreactividad de TRPV1 puede, por ejemplo, encontrarse en aferentes sensoriales viscerales y las células de TRPV1 transmiten, por ejemplo, sensación de dolor gástrico a los centros superiores del cerebro. Se cree que el TRPV1 está involucrado en varios estados gastrointestinales que se asocian con sensaciones de dolor y se ha demostrado que la inmunorreactividad de TRPV1 aumenta de manera notable en, por ejemplo, IBS (Akbar, Yiangou et al., Gut 2008). Como un ejemplo de estos, pacientes diagnosticados con enteropatía inflamatoria activa demuestran una inmunorreactividad de TRPV1 aumentada en gran medida en fibras nerviosas del colon (Wang, Miyares y Ahern, 2005 J. Physiol.).
Aunque se considera que el TRPV1 es una posible diana para el desarrollo de fármacos para tratar diferentes modalidades de dolor, la expresión generalizada del receptor puede dar como resultado acontecimientos adversos que limitan el uso de antagonistas de TRPV1 sistémicos en el tratamiento de dolor gastrointestinal. En particular, antagonizar el receptor podría conducir posiblemente a complicaciones cardiovasculares como resultado de la liberación de péptido vasoactivo disminuida.
El documento WO 2009/155932 se refiere al uso de un agente que puede unirse e inhibir la formación de un receptor binario del dominio Vps10p:complejo del receptor T rpV y/o la formación de un receptor ternario del dominio Vps10p:TrkA:complejo del receptor TrpV adicional para la preparación de un medicamento para la inhibición del dolor y la señalización del dolor.
Pharmacology & Therapeutics, 2011, 131: 142-170 da a conocer que cambios en la expresión o función del canal de TRP se asocian con una variedad de enfermedades/trastornos del aparato digestivo. Por consiguiente, los canales de TRP se identifican como dianas farmacológicas prometedoras para el manejo de varias patologías gastrointestinales.
European Journal of Pharmacology, 2004, 500: 231-241 da a conocer que TRPV1 se activa no sólo por vaniloides sino también por calor, acidosis y mediadores lipídicos intracelulares nocivos. TRPV1 se identifica como una diana atractiva de terapias novedosas para el dolor abdominal crónico.
Biochimica et Biophysica Acta, 2012, 1822: 74-84 da a conocer la participación de mediadores de mastocitos en la sensibilización de canales de TRP.
Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2009, 296: G868-G875 da a conocer que la ingesta de Lactobacillus reuteri evita la hiperexcitabilidad de neuronas de DRG de colon inducidas por estímulos nocivos.
Gut, 2006, 55: 191 -196 da a conocer que la administración oral de bacterias probióticas o bien vivas o bien muertas o medio acondicionado inhibió la respuesta cardio-autónoma constitutiva a la distensión colorrectal en ratas a través de efectos sobre los nervios entéricos. El hallazgo puede proporcionar una explicación novedosa para los efectos probióticos beneficiosos sobre el dolor visceral.
Journal of Paediatrics and Child Health, 2014, 50: E68-E71 da a conocer que la complementación con Lactobacillus reuteri DSM 17938 en niños con dolor abdominal funcional redujo significativamente la intensidad del dolor.
Zdravniski Vestnik, 2013, 82, suplemento 1: I-83-93 revisa estudios clínicos sobre la eficacia de Lactobacillus reuteri en la terapia de trastornos gastrointestinales funcionales en lactantes, niños y adolescentes. Los estudios sugieren que la posible utilidad de cepas de L. reuteri específicas para el alivio del estreñimiento y el dolor abdominal funcional.
Sumario de la invención
Es un objetivo general encontrar agentes adecuados para reducir o evitar el dolor gastrointestinal.
Es un objetivo particular proporcionar un método para seleccionar agentes, preferiblemente cepas bacterianas y más preferiblemente bacterias del ácido láctico, eficaces en reducir o evitar el dolor gastrointestinal.
Estos y otros objetivos se cumplen mediante las realizaciones tal como se da a conocer en el presente documento. Un aspecto de las realizaciones se refiere a un método para seleccionar un agente eficaz en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto. El método comprende seleccionar un agente que puede reducir la activación espontánea y/o inducida del receptor de potencial transitorio vaniloide 1 (TRPV1).
Las presentes realizaciones proporcionan una tecnología eficiente que puede usarse para seleccionar o identificar agentes, en particular cepas bacterianas, tales como bacterias del ácido láctico, que pueden usarse para reducir o evitar el dolor gastrointestinal en sujetos, preferiblemente sujetos humanos, que padecen un trastorno o una enfermedad que provoca o se asocia con dolor gastrointestinal.
Breve descripción de las figuras
Las realizaciones, junto con objetos y ventajas adicionales de las mismas, pueden entenderse mejor haciendo referencia a la siguiente descripción tomada junto con las figuras adjuntas, en las que:
La figura 1 muestra la descarga espontánea de unidades múltiples mesentéricas después de la adición de 1x108 unidades de DSM 17938 (ufc)/ml (A), 1x109 ufc/ml de DSM 17938 (B), diluidas con medio acondicionado con DSM 17938 (1:5) (C), 1x109 ufc/ml de Ds M 17938 irradiadas con □ (D) y medio diluido solo (1:5) (E) (pruebas de Wilcoxon).
La figura 2 muestra efectos de DSM 17938 sobre la tasa de descarga espontánea de aferentes espinales. A) La tasa de descarga de unidades múltiples disminuyó cuando se añadieron 1x109 ufc/ml de DSM 17938 a la luz (prueba de Wilcoxon). B) Panel izquierdo, la descarga de la unidad individual espinal se redujo por DSM 17938 (prueba de Wilcoxon). C) Paneles superiores, trazas representativas de descarga espontánea de unidades múltiples antes y después de añadir DSM 17938; paneles inferiores, formas de onda superpuestas de una unidad individual que se produjo en los momentos marcados por “o" en los perfiles superiores.
La figura 3 muestra que DSM 17938 antagonizó la respuesta excitadora de fibras espinales al añadir capsaicina al superfusato seroso. A) La curva dosis-respuesta de capsaicina de 113 unidades individuales espinales se representó gráficamente (•) y se ajustó con una ecuación logística de tres parámetros, CE50= 200 nM. Máx = 238 ± 27%; con 116 fibras adicionales se representó gráficamente de manera adicional una curva dosis-respuesta para la capsaicina en presencia de 1x109 ufc/ml de DSM 17938 (■) y se ajustó con la misma ecuación logística, para la cual CE50= 500 nM y Máx = 129 ± 17% (P = 0,7 y P = 0,004 para las diferencias en CE50 y Máx, respectivamente, prueba F de suma de cuadrados extra). B) Gráficos de dispersión a modo de resumen con medias y EEM que muestran cómo variaron las respuestas de unidades individuales con las dosis crecientes de capsaicina en ausencia
o presencia de 1 x109 ufc/ml de DSM. (n) indica la proporción de unidades individuales para cada grupo.
La figura 4 muestra que DSM 17938 o un antagonista de TRPV1 reduce la respuesta excitadora provocada por la distensión en unidades individuales espinales. A) Gráficos de dispersión que muestran que la adición de 1x109 de DSM 17938 a la luz redujo el aumento en la tasa de descarga de la unidad individual espinal provocada al elevar la presión intraluminal hasta 48 hPa. B) Adición de 10 pM del antagonista de TRPV1 6-yodonordihidrocapsaicina al lumen que imitaba el efecto de la adición de DSM 17938 (pruebas de Wilcoxon).
La figura 5 muestra que DSM 17938 redujo el aumento de Ca2+ provocado por la capsaicina en somas de ganglios nerviosos de la raíz posterior. A) Capsaicina 1 pM provocó un aumento en la entrada de Ca2+ en neuronas de DRG que disminuyó de manera dependiente de la dosis por DSM 17938 intraluminal y no se vio afectada por 1x109 ufc/ml de JB-1. B) Gráfico a modo de resumen que muestra cómo la razón (F/F0) de la fluorescencia de Ca2+ máxima (F) provocada por capsaicina con respecto a la fluorescencia de Ca2+ inicial (F0) varió con la concentración de DSM 17938 o de JB-1. (Valores de P, prueba de comparaciones múltiples de Bonferroni).
La figura 6 muestra que la alimentación de 9 días con DSM 17938 redujo la bradicardia provocada por distensión gástrica. A) Valores a modo de resumen para las disminuciones en porcentaje en la frecuencia cardiaca en reposo provocada por una distensión gástrica de 40 y 60 mmHg (valores de P, pruebas de la t para datos independientes). B) Gráficos a modo de resumen que muestran cómo cambió la frecuencia cardiaca en reposo a lo largo del tiempo en respuesta a una distensión gástrica de 60 mmHg. (P = 0,01, prueba ANOVA de dos vías).
La figura 7 muestra que la disminución inducida por DSM 17938 de las acciones excitadoras de la capsaicina sobre los aferentes espinales se imitó mediante medio acondicionado con DSM 17938. Gráfico a modo de resumen que muestra que el aumento de la frecuencia de descarga de fibras espinales de unidades individuales inducido por capsaicina 1 pM en condiciones de control, con medio acondicionado con DSM 17938 (1:5) o con 1x109 ufc/ml de DSM 17938 (P = 0,02, prueba ANOVA de una vía; valores de P a posteriori, prueba de comparaciones múltiples de Holm-Sidak).
Descripción detallada
Para facilitar el entendimiento de la invención, se define a continuación un número de términos.
“Dolor gastrointestinal”, también denominado dolor GI, indica el dolor en el aparato digestivo de un sujeto. Tal dolor gastrointestinal a menudo está provocado por o asociado con, es decir es un síntoma de o un componente de dolencia de, diversas enfermedades y trastornos, normalmente del aparato digestivo. El dolor gastrointestinal incluye dolor general en el aparato digestivo, a menudo indicado como dolor gastrointestinal general en la técnica, dolor asociado con trastornos de motilidad intestinal, dolor de enteropatías inflamatorias y síndrome del intestino irritable, dolor gástrico, dolor abdominal general, dolor visceral, dolor abdominal funcional, dolor abdominal recurrente frecuente y dolor en otros trastornos gastrointestinales funcionales.
“Dolor abdominal funcional” se refiere a dolor abdominal recurrente. La gran mayoría de pacientes con dolor abdominal recurrente tienen dolor “funcional” o “no orgánico”, lo que significa que el dolor no está provocado por anomalías físicas.
“Trastornos de motilidad intestinal” se usa para describir una variedad de trastornos en los que el intestino no se ha desarrollado adecuadamente o ha perdido su capacidad para coordinar la actividad muscular debido a diversas causas. Tales trastornos pueden manifestarse en una variedad de maneras, e incluyen, pero no se limitan a, las siguientes:
• Distensión abdominal
• Obstrucción recurrente
• Dolor cólico abdominal
• Estreñimiento
• Enfermedad por reflujo gastroesofágico
• Vómitos recurrentes, incoercibles
• Diarrea
• Síndrome del intestino irritable (IBS)
• Enteropatía inflamatoria
• incontinencia fecal
• Cólicos del lactante
• Dolor abdominal recurrente frecuente (FRAP)
• Regurgitación
• Intolerancia alimentaria
En un sentido amplio, cualquier alteración significativa en el tránsito de alimentos y secreciones en el tubo digestivo puede considerarse un trastorno de motilidad intestinal y este a menudo se asocia con dolor gastrointestinal.
“Dolor gástrico” es un término colectivo usado para describir dolor o molestia en la parte superior del abdomen. En una realización, el motivo del dolor gástrico se selecciona del grupo que comprende, tal como que consiste en, dispepsia no ulcerosa, úlcera péptica, enfermedad por reflujo gastroesofágico y gastritis.
En una realización particular, el motivo del dolor gástrico es dispepsia no ulcerosa y/o gastritis.
Tal como se usa en el presente documento, el término “frecuencia de descarga” se usa para medir los trenes de espigas sensoriales al cerebro.
Tal como se usa en el presente documento, el término “presión máxima intraluminal” (PPr) se basa en los registros de presión intraluminal, en los que los cambios de presión intraluminal se miden en el punto medio del eje longitudinal del segmento del intestino. La señal de presión se analiza y se identifica y se mide la presión máxima intraluminal (PPr).
Tal como se usa en el presente documento, el término “frecuencia del complejo motor migratorio” (frecuencia de MMC) se calcula contando el número de bandas de MC oscuras en mapas espaciotemporales.
Tal como se usa en el presente documento, el término “velocidad del complejo motor migratorio” (velocidad de MMC) se mide a partir de la(s) pendiente(s) de cada banda en el mapa espaciotemporal generado por los complejos motores migratorios.
Tal como se usa en el presente documento, el término “agente” se usa para referirse a cualquier sustancia o material incluyendo células completas; microorganismos; medio acondicionado; proteínas, péptidos, enzimas y/o moléculas derivadas de un medio acondicionado de este tipo; proteínas, péptidos, enzimas y/o moléculas secretadas o derivadas de células completas o microorganismos; u otro material biológico o químico que puede usarse para modular el dolor gastrointestinal en el aparato digestivo de un mamífero. Un ejemplo de agentes preferidos son cepas bacterianas, por ejemplo, cepas bacterianas probióticas, y en particular cepas de bacterias del ácido láctico. Otro ejemplo de agente preferido es un medio acondicionado de cepas bacterianas, por ejemplo, cepas bacterianas probióticas, y en particular cepas de bacterias del ácido láctico.
Un medio acondicionado, a veces también denominado medio de cultivo acondicionado, es un medio (de cultivo) en el que las células se han cultivado durante un periodo de tiempo. Las células cultivadas en el medio “acondicionan” el medio liberando o secretando diversos componentes o moléculas, tales como proteínas, péptidos, enzimas, citocinas, quimiocinas, sustancias químicas, etc.
Está empezándose a aceptar que los microorganismos intestinales envían señales al cerebro como parte del así denominado eje microbioma-intestino-cerebro. Sin embargo, se conoce muy poco sobre el papel del microbioma del intestino en el desarrollo o la función del sistema nervioso. Actualmente, se conoce poco sobre la naturaleza cuantitativa de la señal nerviosa transmitida desde el intestino hasta el sistema nervioso central.
Las neuronas sensoriales individuales, incluyendo aquellas entre las fibras del vago, representan estímulos físicos continuos como trenes de espigas con patrones que codifican la naturaleza y la intensidad del estímulo. Además de esto, los estímulos pueden representarse en un código de población determinado por el número de fibras activas en el haz. Toda la información que llega al cerebro a través de aferentes primarios debe codificarse en el lenguaje de trenes de espigas neuronales. Por tanto, saber cómo los trenes de espigas sensoriales se ven afectados por diversos agentes, tales como comensales, cepas probióticas y diferentes sustancias, permite identificar nuevos microorganismos del intestino beneficiosos y sus moléculas activas por sus efectos sobre la descarga aferente primaria, así como nuevos fármacos y otros compuestos que pueden intervenir de diversas maneras en este sistema de señalización, particularmente modulando la activación de TRPV1.
El método de las realizaciones en el presente documento se emplea para seleccionar un agente para su uso en la
reducción o prevención del dolor gastrointestinal inhibiendo la señalización a través del receptor TRPV1. Por tanto, el método de las realizaciones puede usarse para evaluar agentes que pueden ser potencialmente eficaces en la prevención del dolor gastrointestinal y/o eficaces en reducir, inhibir o tratar el dolor gastrointestinal. Por tanto, el método puede usarse para identificar agentes eficaces que pueden modular el dolor gastrointestinal asociado con el sistema nervioso periférico (entérico) y/o central.
Por tanto, un aspecto de las realizaciones se refiere a un método para seleccionar un agente eficaz en, es decir para su uso en, reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto. El método comprende seleccionar un agente que puede reducir la activación espontánea y/o inducida del receptor de potencial transitorio vaniloide 1 (TRPV1).
Por tanto, las realizaciones se basan en usar la ruta de señalización de TRPV1 como una herramienta de selección en la identificación de agentes que son eficaces en modular, en particular evitar o reducir, tal como inhibir o tratar, el dolor gastrointestinal en sujetos que padecen enfermedades o trastornos que implican o que provocan tal dolor gastrointestinal y que pueden indicarse como enfermedades o trastornos del dolor gastrointestinal.
El método de las realizaciones se realiza normalmente in vitro o ex vivo tal como se da a conocer adicionalmente en el presente documento. Sin embargo, el agente preferiblemente puede reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 en el sujeto cuando se administra al sujeto.
Por tanto, el método de las realizaciones puede usarse para encontrar agentes adecuados para reducir o evitar el dolor gastrointestinal en diferentes trastornos y enfermedades del dolor gastrointestinal. Los agentes se eligen para afectar a la activación de TRPV1 del sujeto de una manera beneficiosa con el fin de modular, es decir, preferiblemente evitar, reducir o tratar, el dolor gastrointestinal.
En una realización, el trastorno o la enfermedad asociada con el dolor gastrointestinal que va a evitarse o tratarse con un agente seleccionado mediante el método es un trastorno o una enfermedad del dolor gastrointestinal.
En una realización, el dolor gastrointestinal es dolor gástrico.
En una realización, el dolor gastrointestinal es dolor visceral.
En una realización, el dolor gastrointestinal puede estar presente en un sujeto que padece cólico.
En una realización, el dolor gastrointestinal puede estar presente en un sujeto que padece síndrome del intestino irritable (IBS).
En una realización, el dolor gastrointestinal puede estar presente en un sujeto que padece estreñimiento. El dolor gastrointestinal puede estar presente en sujetos que padecen trastornos de motilidad intestinal tal como se definió anteriormente.
Por tanto, en una realización el sujeto padece un trastorno de motilidad intestinal con dolor gastrointestinal asociado. El método de las realizaciones se basa en el descubrimiento inesperado de que el dolor gastrointestinal, incluyendo dolor asociado con diferentes estados y trastornos tales como trastornos de motilidad, y manifestado de manera central o periférica, está conectado con la activación de TRPV1, que puede modularse por agentes previamente desconocidos, tales como bacterias del ácido láctico.
Una clase de dolor gastrointestinal es dolor visceral que da como resultado la activación de nociceptores de las vísceras abdominales (órganos). Las estructuras viscerales son altamente sensibles a la distensión (estiramiento), isquemia e inflamación, pero relativamente insensibles a otros estímulos que normalmente provocan dolor. El dolor visceral es difuso, difícil de localizar y a menudo se refiera a una estructura distante, normalmente superficial. Puede estar acompañado por síntomas tales como náuseas, vómitos, cambios en las constantes vitales, así como manifestaciones emocionales. El dolor puede describirse como repugnante, profundo, opresivo y sordo. Distintas lesiones estructurales o anomalías bioquímicas explican este tipo de dolor en sólo una proporción de pacientes. A veces, estas enfermedades se agrupan en enfermedades neuromusculares gastrointestinales (GINMD). Las personas también pueden experimentar dolores viscerales, a menudo muy intensos en naturaleza, sin ninguna evidencia de motivo estructural, bioquímico o histopatológico para tales síntomas.
Un nociceptor es un receptor sensorial que responde a estímulos potencialmente dañinos enviando potenciales de acción a neuronas nociceptoras específicas (AS o C) que transmiten a los tractos anterolaterales de la médula espinal (más una proyección vagal menor) y luego al tálamo, y al prosencéfalo incluyendo las cortezas insular y cingulada. Es fundamental para la percepción del dolor que se origina en la enteropatía la activación de mensajes de dolor desde el intestino hasta el sistema nervioso central a través de fibras aferentes primarias extrínsecas que viajan en haces nerviosos aferentes mesentéricos.
El método puede usarse para detectar agentes con el fin de seleccionar agentes con propiedades deseadas, por
ejemplo, reducción en la activación de TRPV1, para su uso en reducir o evitar el dolor gastrointestinal. El parámetro que va a medirse en el método, es decir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1, puede monitorizarse y determinarse en diferentes modelos y sistemas. Usando esta información, puede obtenerse un perfil útil para definir los efectos detallados y potencialmente matizados que tienen agentes específicos sobre la señalización del dolor en el dolor gastrointestinal.
Otros parámetros que pueden medirse en el método incluyen señalización del dolor general, actividad de descarga nerviosa, por ejemplo, análisis del haz nervioso mesentérico, y posiblemente usando diferentes modelos in vivo de dolor gastrointestinal.
En una realización, la activación de TRPV1 se mide en células que expresan TRPV1, tal como neuronas de los ganglios nerviosos de la raíz posterior (DRG), células CaCo2 u otra línea celular epitelial intestinal humana convencional. Puede medirse tanto la activación espontánea de TRPV1 como la activación de TRPV1 después de la inducción mediante, por ejemplo, capsaicina, cambio de pH o temperatura. Generalmente, cualquier célula o tejido que expresa TRPV1 puede usarse para medir la activación de TRPV1 según las realizaciones.
Por tanto, en una realización, el método comprende poner en contacto una célula que expresa TRPV1 con un agente que va a someterse a prueba. El método también comprende medir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 en la célula tras, es decir después de, poner en contacto la célula con el agente que va a someterse a prueba. El método comprende además comparar la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 medida con una activación de TRPV1 de control. En esta realización, el método comprende además seleccionar el agente que va a someterse a prueba como agente eficaz en reducir o evitar el dolor gastrointestinal si la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 medida es menor que la activación de TRPV1 de control.
La activación de TPRV1 de control puede determinarse según diversas realizaciones. Por ejemplo, la activación de TPRV1 puede definirse previamente y determinarse a partir de células que expresan TRPV1 con un nivel de activación que representa la activación normal o inicial correspondiente a, por ejemplo, dolor sustancialmente no gastrointestinal.
Sin embargo, una realización preferida de la determinación de la activación de TRPV1 de control es usar la célula que expresa TRPV1 como control interno. Por tanto, en una realización el método comprende medir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 en la célula antes de poner en contacto la célula con el agente que va a someterse a prueba. El método también comprende determinar la activación de TRPV1 de control basándose en la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 medida en la célula antes de poner en contacto la célula con el agente que va a someterse a prueba.
En este enfoque, las mediciones de activación espontánea y/o inducida de TRPV1, por tanto, se realizan preferiblemente dos veces: antes de poner en contacto la célula con el agente que va a someterse a prueba y tras poner en contacto la célula con el agente que va a someterse a prueba.
Alternativamente, las mediciones de activación espontánea y/o inducida de TRPV1 pueden realizarse en dos experimentos en paralelo: un experimento en el que una célula se pone en contacto con el agente que va a someterse a prueba y un experimento de control en el que una célula no se pone en contacto con el agente. Por tanto, las células usadas en los dos experimentos son del mismo tipo, tal como ambas neuronas de DRG, células CaCo2 u otra línea celular epitelial intestinal humana convencional. La activación espontánea y/o inducida de TRPV1 se mide en ambos experimentos y después se comparan entre sí.
La célula que va a usarse en el método puede ser cualquier célula que expresa TRPV1 incluyendo, pero sin limitarse a, preparaciones ex vivo, líneas celulares que expresan TRPV1, tales como líneas celulares epiteliales intestinales humanas que expresan TRPV1, y células primarias que expresan TRPV1.
La activación espontánea y/o inducida de TRPV1 medida y la activación de TRPV1 de control pueden expresarse generalmente como un valor o una métrica del parámetro respectivo, incluyendo un valor que representa el nivel de activación espontánea y/o inducida de TRPV1.
En una realización, se usan células primarias tales como, por ejemplo, neuronas de los ganglios nerviosos de la raíz posterior (DRG) para analizar la activación de TPRV1.
En otra realización, se usan líneas celulares que expresan TRPV1 tal como CaCo2 u otra línea celular epitelial intestinal humana convencional para analizar la activación de TPRV1.
En otras realizaciones, se usan líneas celulares que expresan TRPV1 comercialmente disponibles para analizar la activación de TPRV1, véase por ejemplo n.° de cat. CT6105 de Chantest.
También es posible usar células de gen indicador, también denominadas células indicadoras en la técnica, que pueden usarse para monitorizar y medir la expresión de TRPV1 y/o la activación espontánea y/o inducida de TRPV1.
Pueden usarse varios métodos diferentes para estudiar la activación de TPRV1, incluyendo, pero sin limitarse a, análisis funcional usando, por ejemplo, flujo de entrada de calcio inducido por, por ejemplo, capsaicina y/o su prevención mediante un agente en células que expresan TRPV1 y frecuencias de descarga de haces nerviosos mesentéricos, espontáneas y/o inducidas por, por ejemplo, capsaicina. En otra realización, puede usarse la evaluación funcional de la actividad de canales iónicos regulados por temperatura usando una máquina de PCR en tiempo real, tal como se describe en Reubish, Emerling et al., BioTechniques 2009, para analizar la activación de TPRV1. En otra realización, pueden usarse ratones indicadores para el canal de TRPV1 para investigar la activación de TPRV1. También pueden usarse diversos paradigmas in vivo para analizar los efectos sobre el dolor en la invención. Estos métodos incluyen, por ejemplo, distensión gástrica y efectos sobre la frecuencia cardiaca (véase el ejemplo 3) y modelos de distensión colorrectal.
Por tanto, en una realización, el método comprende medir el flujo de entrada de Ca2+ en la célula inducido por capsaicina u otra sustancia que puede inducir la activación de TPRV1, por ejemplo, un análogo de capsaicina u otras sustancias que pueden activar a TRPV1. También puede usarse la exposición de la célula a condiciones físicas seleccionadas para inducir la activación de TPRV1, incluyendo cambio de pH o de temperatura. Por tanto, la exposición de la célula a pH ácido, pH básico y/o calor (temperaturas elevadas, normalmente por encima de aproximadamente 42°C) pueden inducir la activación de TPRV1. Por tanto, en esta realización, el flujo de entrada de Ca2+ en la célula que expresa TRPV1 se usa como un parámetro que representa la activación de TPRV1. A continuación, puede medirse una reducción en la activación de TPRV1, y en particular una reducción en la activación de TPRV1 inducida por pH, inducida por calor y/o inducida por capsaicina, como una reducción en el flujo de entrada de Ca2+. En otra realización, el método comprende medir la actividad de canales iónicos regulados por temperatura en la célula. En esta realización, la actividad de canales iónicos regulados por temperatura en la célula que expresa TRPV1 se usa como un parámetro que representa la activación de TPRV1. La actividad de canales iónicos regulados por temperatura puede ser espontánea o inducida, tal como inducida por temperatura aumentada. A continuación, puede medirse una reducción en la activación de TPRV1 como una reducción en la actividad de canales iónicos regulados por temperatura en la célula.
En una realización, la activación de TPRV1 se mide usando experimentos de haces nerviosos aferentes mesentéricos. Por tanto, otro parámetro que puede medirse es la frecuencia de descarga espontánea y/o inducida, por ejemplo, por capsaicina, cambio de pH o calor, de los haces nerviosos aferentes mesentéricos. Esta técnica puede usarse para determinar cambios en la excitabilidad de las fibras nerviosas mesentéricas inducida por diferentes agentes que van a someterse a prueba. En una realización, se corta un segmento gastrointestinal con o sin la arcada mesentérica que contiene el haz nervioso que suministra el segmento compuesto por fibras tanto espinales como vagales para los registros de haces nerviosos ex vivo (véase el ejemplo 1).
En algunas realizaciones, la especificidad regional del tracto gastrointestinal es de importancia. Los segmentos apropiados para el análisis de nervios mesentéricos del método comprenden preferiblemente un haz nervioso apropiado para permitir la medición de la descarga de los nervios aferentes mesentéricos. Esto puede proporcionarse de manera conveniente teniendo un segmento gastrointestinal con tejido mesentérico unido (véase el ejemplo 1). Por tanto, esta realización se lleva a cabo de manera conveniente en segmentos ex vivo de un animal experimental apropiado, por ejemplo, en segmentos gastrointestinales de ratón (por ejemplo, segmentos de colon o yeyuno de ratón). La capacidad para llevar a cabo una comparación del efecto de un agente sobre el intestino delgado frente al grueso puede ser ventajosa, particularmente como, dependiendo del trastorno de motilidad intestinal que va a tratarse y el estadio clínico y los síntomas del mismo, un tratamiento que es específico de región, por ejemplo, específico para el intestino o bien delgado o bien grueso puede ser beneficioso.
En una realización, se analiza el tráfico espinal de los nervios mesentéricos para determinar las partes del intestino específicas y seleccionadas. Ha sido sorprendente encontrar que diferentes agentes, tales como bacterias del ácido láctico, pueden influir en o modular los sistemas de señalización del dolor gastrointestinal en una parte, pero no en otra parte del tracto gastrointestinal, y por medio de diferentes rutas nerviosas tales como vagal o para dolor visceral a través del ganglio nervioso de la raíz posterior.
Por tanto, en una realización, el método comprende poner en contacto un segmento gastrointestinal ex vivo con tejido mesentérico unido con un agente que va a someterse a prueba. El método también comprende medir la descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida en el segmento gastrointestinal ex vivo tras poner en contacto el segmento gastrointestinal ex vivo con el agente que va a someterse a prueba. El método comprende además comparar la descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida medida con una descarga aferente mesentérica de control. En esta realización, el método comprende además seleccionar el agente que va a someterse a prueba como agente eficaz en reducir o evitar el dolor gastrointestinal si la descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida medida es menor que la descarga aferente mesentérica de control.
La descarga aferente mesentérica de control puede determinarse tal como se comentó anteriormente usando el segmento gastrointestinal ex vivo como control interno. En un caso de este tipo, el método comprende medir la descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida en el segmento gastrointestinal ex vivo antes de poner en contacto el segmento gastrointestinal ex vivo con el agente que va a someterse a prueba. El método también
comprende determinar la descarga aferente mesentérica de control basándose en la descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida medida en el segmento gastrointestinal ex vivo antes de poner en contacto el segmento gastrointestinal ex vivo con el agente que va a someterse a prueba.
Alternativamente, pueden llevarse a cabo dos experimentos en paralelo. En uno de ellos, se pone en contacto un segmento gastrointestinal ex vivo con el agente que va a someterse a prueba y, en el otro, el experimento de control, no se pone en contacto un segmento gastrointestinal ex vivo con el agente. La descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida se mide en ambos experimentos y se comparan entre sí.
El análisis de uno o más de estos parámetros anteriores dará como resultado un método de selección de agentes eficaces en reducir o evitar el dolor gastrointestinal.
En una realización particular, el segmento gastrointestinal ex vivo se selecciona de un segmento de colon o yeyuno ex vivo. En un caso de este tipo, el método comprende poner en contacto un segmento de colon o yeyuno ex vivo con tejido mesentérico unido con el agente que va a someterse a prueba.
Los ejemplos de métodos apropiados y aparatos para analizar la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 se describen en los ejemplos y las figuras.
Por tanto, en métodos preferidos, el análisis presentado proporcionará datos sobre la activación espontánea y/o inducida de TRPV1. El análisis de uno o varios de estos parámetros dará como resultado un método preferido de selección de agentes eficaces en reducir y/o evitar el dolor gastrointestinal.
Por tanto, el método de las realizaciones puede usarse para encontrar agentes adecuados para el tratamiento, la prevención y/o la reducción del dolor gastrointestinal, usando el modelo en el presente documento.
El método presentado proporcionará datos sobre la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 usando diferentes modelos. El análisis de este parámetro dará como resultado un método de selección de agentes eficaces en reducir o evitar el dolor gastrointestinal.
En una realización, el método analiza el efecto de un agente sobre la activación de TPRV1 (espontánea y/o inducida por, por ejemplo, capsaicina, cambio de pH y/o calor, y su prevención por un agente) y, por tanto, puede usarse como una lectura de la señalización del dolor gastrointestinal, es decir si es probable que un agente tenga o no un efecto sobre el dolor gastrointestinal, por ejemplo, dolor visceral. Un aumento o ningún efecto significativo en la actividad espontánea o inducida (por ejemplo, por capsaicina, cambio de pH y/o calor) de TRPV1 es indicativo de un agente que es probable que dé como resultado un aumento en el dolor gastrointestinal o ningún efecto significativo sobre el dolor gastrointestinal, respectivamente, mientras que una disminución en la actividad espontánea y/o inducida (por ejemplo, por capsaicina, cambio de pH y/o calor) de TRPV1 es indicativa de un agente que reducirá el dolor gastrointestinal. Por tanto, los agentes preferidos son aquellos que dan como resultado una disminución en la actividad espontánea y/o inducida (por ejemplo, por capsaicina) de TRPV1.
En otra realización, el método analiza el efecto de un agente sobre la actividad de TPRV1 analizando la descarga espontánea y/o inducida (por ejemplo, por capsaicina, cambio de pH y/o calor) de los nervios aferentes mesentéricos (señalización del dolor) y, por tanto, puede usarse como una lectura para el dolor gastrointestinal, es decir si es probable que un agente tenga o no un efecto sobre el dolor gastrointestinal, por ejemplo, dolor visceral. Un aumento o ningún efecto significativo en la descarga de los nervios aferentes es indicativo de un agente que es probable que dé como resultado un aumento en el dolor gastrointestinal o ningún efecto significativo sobre el dolor gastrointestinal, respectivamente, mientras que una disminución en la descarga de los nervios aferentes es indicativa de un agente que reducirá el dolor gastrointestinal. Por tanto, los agentes preferidos son aquellos que dan como resultado una disminución en la descarga de los nervios aferentes, por ejemplo, una disminución en la frecuencia de descarga espontánea y/o inducida de los haces nerviosos aferentes.
El agente que va a someterse a prueba se añade al sistema elegido para el análisis de la actividad de TRPV1 de cualquier manera apropiada. Con el fin de analizar el efecto del agente sobre la señalización del dolor, los métodos se llevan a cabo de manera conveniente en presencia y ausencia del agente. Por ejemplo, la etapa del método se lleva a cabo antes y después de que se aplique el agente. Por tanto, en tales métodos el efecto del agente se compara con un control apropiado, por ejemplo, los resultados en presencia del agente de prueba se comparan con los resultados en ausencia de un agente de prueba, por ejemplo, los resultados con tampón solo frente a tampón más agente.
Los inventores han encontrado sorprendentemente que determinadas cepas de bacterias del ácido láctico, por ejemplo, DSM 17938, pueden reducir la activación de TPRV1 en diferentes modelos ex vivo e in vitro (véase el ejemplo 1 y 2). Por tanto, en una realización preferida, el agente es una cepa bacteriana, más preferiblemente una bacteria del ácido láctico. Por tanto, el método de las realizaciones puede usarse ventajosamente para someter a prueba diversas bacterias del ácido láctico con el fin de identificar y seleccionar una o más cepas de bacterias del ácido láctico que son eficaces en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto tal como se determina
mediante el método en cuanto a poder reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1.
Otro aspecto de las realizaciones es un agente seleccionado mediante el método de las realizaciones, es decir que puede obtenerse mediante el método de selección.
Un agente preferido es un microorganismo, más preferiblemente una cepa bacteriana, preferiblemente una bacteria del ácido láctico, incluyendo partes o metabolitos de los mismos
Otro agente preferido es un medio acondicionado de un microorganismo de este tipo.
Un aspecto relacionado de las realizaciones define un agente que puede obtenerse mediante el método de selección de las realizaciones para su uso en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto.
En una realización particular, el agente puede obtenerse mediante el método de selección de las realizaciones que puede reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 para su uso en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto.
En una realización, para la reducción o prevención del dolor gastrointestinal, se seleccionará un agente que preferiblemente actúe para disminuir la señalización del dolor tal como se evalúa monitorizando el efecto del agente sobre la activación espontánea y/o inducida de TRPV1. Un agente de este tipo actuará preferiblemente para reducir o disminuir la activación de TPRV1 en neuronas de DRG, u otro tejido o células que expresan TRPV. Preferiblemente, el agente actuará para reducir la actividad espontánea y/o inducida (por ejemplo, por capsaicina, cambio de pH y/o calor) de TRPV1 usando diferentes sistemas o modelos in vitro incluyendo, sin limitarse a, células primarias y líneas celulares que expresan el receptor TRPV1 tal como se comentó anteriormente.
En una realización, se seleccionará un agente que actúe preferiblemente para reducir o disminuir la activación de TPRV1 en los haces nerviosos aferentes mesentéricos. El agente actuará para reducir las frecuencias de descarga espontánea y/o inducida (por ejemplo, por capsaicina, cambio de pH y/o calor) de los haces nerviosos aferentes mesentéricos.
Resulta evidente a partir de lo anterior que el método de las realizaciones también puede usarse para seleccionar o identificar agentes que no son apropiados para el tratamiento de dolor gastrointestinal, por ejemplo, agentes que no tienen un efecto beneficioso sobre la reducción de la señalización del dolor. En particular, es improbable que aquellos agentes que no muestran un efecto sobre este parámetro sean adecuados para la reducción o prevención del dolor gastrointestinal. Además, es improbable que aquellos agentes que tengan un efecto de aumento de la señalización del dolor, tal como se mide mediante un aumento en la actividad espontánea y/o inducida de TRPV1, sean adecuados para la reducción o prevención del dolor gastrointestinal.
Un aspecto adicional de las realizaciones se refiere a una composición que comprende un agente seleccionado mediante el método de las realizaciones y al menos un componente adicional. Por tanto, al menos un componente adicional se selecciona preferiblemente de un grupo que consiste en un portador farmacéuticamente aceptable, un diluyente farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable, un producto alimenticio, un complemento alimenticio y otro agente preventivo o terapéutico.
Por tanto, una realización se refiere a una composición que comprende un agente que puede obtenerse mediante el método de selección de las realizaciones y al menos un componente adicional seleccionado de un grupo que consiste en un portador farmacéuticamente aceptable, un diluyente farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable, un producto alimenticio, un complemento alimenticio y otro agente preventivo o terapéutico para su uso en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto.
El al menos un componente adicional puede administrarse junto con el agente seleccionado según las realizaciones o puede administrarse de manera separada. Además, el al menos un componente adicional puede administrarse al mismo tiempo que el agente seleccionado según las realizaciones o en puntos de tiempo diferentes. Los regímenes de administración y los momentos adecuados pueden determinarse fácilmente por el experto en la técnica dependiendo del componente adicional en cuestión.
En una realización, el al menos un componente adicional es cualquier componente nutricional apropiado, por ejemplo, un producto alimenticio o un complemento alimenticio.
En una realización, el otro agente preventivo o terapéutico puede ser cualquier agente adicional, que es útil en la prevención o reducción, tal como el tratamiento, del dolor gastrointestinal en cuestión.
En otra realización, el otro agente preventivo o terapéutico es un agente que puede afectar a la motilidad y/o el mezclado gastrointestinal. Entonces, el otro agente preventivo o terapéutico puede preferiblemente modular (aumentar o reducir, dependiendo del estado que va a tratarse tal como se conoce en la técnica y se describe a continuación) la motilidad y/o el mezclado gastrointestinal.
En una realización adicional, el agente de las realizaciones puede tener funciones duales, es decir, tener función sobre tanto el dolor gastrointestinal como la motilidad y/o el mezclado gastrointestinal.
El agente seleccionado según las presentes realizaciones con el propósito de ser eficaz en reducir o evitar el dolor gastrointestinal también puede someterse a análisis o métodos de selección distintos o adicionales con el propósito de determinar si el agente es eficaz adicionalmente en modular la motilidad y/o el mezclado gastrointestinal. Un agente de este tipo puede ser interesante para su uso en la prevención o el tratamiento de, por ejemplo, trastornos de motilidad, ya que aborda tanto el dolor gastrointestinal como la alteración de la motilidad en conjunto. Los modos de analizar la motilidad y/o el mezclado se conocen en la técnica. Los parámetros que van a analizarse incluyen, pero no se limitan a, frecuencia de MMC, velocidad de MMC, presión intraluminal tal como PPr y otros modelos funcionales.
En análisis de motilidad, los cambios en la motilidad gastrointestinal inducida por un agente pueden detectarse, por ejemplo, como una alteración en el patrón de motilidad o las amplitudes de contracción. Algunos agentes no tendrán ningún efecto. Un agente que puede aumentar la motilidad gastrointestinal, por ejemplo, aumentando la frecuencia de MMC y/o la velocidad de MMC y/o la presión intraluminal tal como PPr, probablemente serán útiles para tratar trastornos asociados con el dolor gastrointestinal en los que sería ventajoso aumentar la motilidad propulsora a lo largo del tubo digestivo, tal como estreñimiento y cólico.
Alternativamente, si por ejemplo el trastorno de motilidad intestinal para el tratamiento es uno en el que se desea aumentar el tiempo de tránsito de material a través del intestino, por ejemplo trastornos que implican el tránsito rápido, tal como IBS o diarrea, entonces un agente de interés actuará, además de sus efectos sobre la modulación del dolor gastrointestinal, para disminuir la motilidad gastrointestinal, por ejemplo disminuyendo la frecuencia de MMC o la velocidad de MMC o la presión intraluminal, por ejemplo PPr. Los agentes preferidos disminuirán al menos la velocidad de MMC. Los agentes preferidos disminuirán dos o más de estos parámetros, por ejemplo, disminuirán la velocidad de MMC y la frecuencia de MMC o disminuirán la frecuencia de MMC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr) o disminuirán la velocidad de MMC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr). Los agentes más preferidos disminuirán todos estos parámetros, por ejemplo, disminuirán la frecuencia de MMC, la velocidad de MMC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr). El análisis de motilidad puede evaluarse en un segmento gastrointestinal apropiado del intestino delgado o grueso, por ejemplo, un segmento de yeyuno para el intestino delgado o un segmento de colon para el intestino grueso. En algunas realizaciones, se prefiere el uso de segmentos de intestino grueso, por ejemplo, colon.
Un aspecto adicional de las realizaciones se refiere a un agente seleccionado mediante el método de las realizaciones o una composición tal como se definió anteriormente para su uso en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto.
Un aspecto relacionado de las realizaciones define el uso de un agente seleccionado mediante el método de las realizaciones, por ejemplo, que puede obtenerse mediante el método de selección según las realizaciones, o una composición tal como se definió anteriormente para la fabricación de un medicamento, un producto alimenticio o un complemento alimenticio para reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto.
Otro aspecto relacionado de las realizaciones define un método de reducción o prevención del dolor gastrointestinal en un sujeto. El método comprende administrar una cantidad eficaz de un agente seleccionado mediante el método de las realizaciones, por ejemplo, que puede obtenerse mediante el método de selección según las realizaciones, o una composición tal como se definió anteriormente para el sujeto.
En una realización de estos aspectos, el agente es una cepa bacteriana, preferiblemente una cepa de bacterias del ácido láctico y más preferiblemente una cepa de Lactobacillus reuteri, tal como una cepa bacteriana que puede reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1, preferiblemente una cepa de bacterias del ácido láctico que puede reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 y más preferiblemente una cepa de Lactobacillus reuteri que puede reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1.
En una realización de estos aspectos, el agente es preferiblemente Lactobacillus reuteri DSM 17938. En otra realización, el agente es otra cepa de bacterias del ácido láctico, es decir el agente es una cepa de bacterias del ácido láctico distinta de Lactobacillus reuteri DSM 17938, preferiblemente una cepa de Lactobacillus reuteri distinta de Lactobacillus reuteri DSM 17938.
En una realización de estos aspectos, el agente es un medio acondicionado de una cepa bacteriana, preferiblemente de una cepa de bacterias del ácido láctico y más preferiblemente de una cepa de Lactobacillus reuteri, tal como un medio acondicionado de una cepa bacteriana que puede reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1, preferiblemente de una cepa de bacterias del ácido láctico que puede reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1 y más preferiblemente de una cepa de Lactobacillus reuteri que puede reducir la activación espontánea y/o inducida de TRPV1.
En una realización, el agente es un medio acondicionado de cepas de bacterias del ácido láctico, preferiblemente de Lactobacillus reuteri DSM 17938 o una cepa de Lactobacillus reuteri distinta de Lactobacillus reuteri DSM 17938. El medio usado para tal medio acondicionado puede ser cualquier medio apropiado para cultivar cepas de bacterias del ácido láctico conocido en la técnica. En una realización, se usa medio MRS (de Man, Rogosa y Sharpe) como material de partida para producir medio acondicionado de cepas de bacterias del ácido láctico, preferiblemente de Lactobacillus reuteri DSM 17938. En una realización de la invención, se liofiliza medio acondicionado de cepas de bacterias del ácido láctico, preferiblemente de Lactobacillus reuteri DSM 17938, antes de introducirse en o usarse como una composición.
En otra realización, se aísla uno o varios componentes del medio acondicionado de cepas de bacterias del ácido láctico, preferiblemente de Lactobacillus reuteri DSM 17938, y se administran como componentes purificados y/o enriquecidos a un sujeto en forma de una composición adecuada. Los ejemplos de tales componentes incluyen proteínas, péptidos, enzimas y otras moléculas preferiblemente secretadas de la cepa de bacterias del ácido láctico en el medio. También pueden usarse tales componentes extraídos directamente de las cepas de bacterias del ácido láctico según las realizaciones.
Se elige un modo apropiado de administración y formulación del agente o la composición dependiendo del sitio de la enfermedad. Un modo preferido de administración es por vía oral, sin embargo, serán igualmente apropiados para algunos tratamientos la inyección intravenosa o intramuscular.
Las dosis apropiadas del agente o la composición pueden elegirse o determinarse fácilmente por el experto en la técnica dependiendo del trastorno que va a tratarse, el modo de administración y la formulación en cuestión.
En una realización, el receptor TRPV1 se modula de manera local, por ejemplo, usando bacterias del ácido láctico administrada por vía oral que pueden modular la activación de TPRV1 de manera selectiva en el tracto gastrointestinal, en un sujeto que padece dolor gastrointestinal y, por tanto, se minimiza cualquier efecto secundario en dicho sujeto. Se cree que esta vía de administración preferida del agente, en particular una cepa de bacterias del ácido láctico seleccionada mediante el método de las realizaciones, afectará principalmente a la activación de TPRV1 de manera local, es decir dentro del aparato digestivo. Por tanto, el agente tendrá entonces un efecto beneficioso en la prevención o reducción del dolor gastrointestinal a la vez que se minimiza cualquier modulación de TRPV1 no deseada fuera del aparato digestivo.
En los métodos y usos de las presentes realizaciones descritos en el presente documento, los términos “aumentar”, “disminuir”, “reducir”, etc., se refieren a cambios en niveles que pueden medirse, preferiblemente un cambio significativo en los niveles, más preferiblemente un cambio estadísticamente significativo, preferiblemente con un valor de probabilidad de <0,05.
Los sujetos preferidos son mamíferos, más preferiblemente seres humanos.
Cuando el trastorno de motilidad intestinal asociado con el dolor gastrointestinal que va a tratarse es estreñimiento, entonces los sujetos preferidos son pacientes de edad avanzada o mujeres embarazadas. En general, se entenderá que un paciente de edad avanzada es un paciente de 70 años o más.
Cuando el trastorno de motilidad intestinal asociado con el dolor gastrointestinal que va a tratarse es cólico, preferiblemente este es cólicos del lactante.
Los usos de los agentes, preferiblemente cepas de bacterias del ácido láctico, seleccionados según el método de las realizaciones, incluyen la reducción, la prevención o el alivio del trastorno o los síntomas del trastorno relevantes (por ejemplo, puede dar como resultado la modulación de los síntomas de la enfermedad). Tal reducción, prevención o alivio de un trastorno o síntomas del mismo puede medirse mediante cualquier ensayo apropiado.
Es un objetivo de una realización encontrar agentes, tales como bacterias del ácido láctico, incluyendo partes o metabolitos de las mismas, tales como los presentes en o los extraídos de un medio acondicionado, adecuados para el tratamiento, la reducción, la prevención o la modulación del dolor gastrointestinal en, por ejemplo, trastornos de motilidad específicos y/u otros trastornos/enfermedades de dolor gastrointestinal, usando el modelo en el presente documento basándose en el efecto del agente sobre la actividad espontánea y/o inducida de TRPV1.
En una realización, el objetivo es seleccionar una cepa bacteriana probiótica, tal como cepa de bacterias del ácido láctico, que puede ser eficaz en evitar o reducir el dolor gastrointestinal asociado con el estreñimiento en seres humanos, especialmente sujetos de edad avanzada o mujeres embarazadas.
En una realización, el objetivo es seleccionar un agente, por ejemplo, una cepa de bacterias del ácido láctico, que puede ser eficaz en evitar o reducir el dolor gastrointestinal asociado con cólicos del lactante.
En una realización, el objetivo es seleccionar un agente, por ejemplo, una cepa de bacterias del ácido láctico, que puede ser eficaz en tratar, evitar o reducir los síntomas del dolor gastrointestinal del síndrome del intestino irritable
(IBS).
Los siguientes son algunos ejemplos de las realizaciones, que no pretenden ser limitativos del uso de las realizaciones en el presente documento sino mostrar ejemplos prácticos en detalle de cómo puede usarse la invención. El ejemplo 1 se refiere a un experimento de haces nerviosos mesentéricos que muestra que DSM 17938 inhibe la frecuencia de descarga del nervio mesentérico. El ejemplo 2 muestra que DSM 17938 bloquea el flujo de entrada de calcio inducido por capsaicina en cultivos primarios de DRG. El ejemplo 3 demuestra que DSM 17938 inhibe la reducción de la frecuencia cardiaca provocada por la distensión gástrica.
Ejemplos
Ejemplo 1
Experimentos de haces nerviosos mesentéricos
Registros extracelulares
Se adquirieron ratones Swiss Webster macho adultos (20-30 g) de Charles River Laboratories (Wilmington, MA). Los ratones se sacrificaron mediante luxación cervical. Todos los procedimientos subsiguientes fueron ex vivo.
Se extirparon segmentos de la porción distal del yeyuno (~2,5 cm) con tejido mesentérico unido de animales recién sacrificados y se colocaron en una placa de Petri recubierta con Sylgard llena con tampón de Krebs (en mM): NaCl 118, KCl 4,8, NaHCO325, NaH2PO41,0, MgSO41,2, glucosa 11,1 y CaCl22,5, burbujeado con carbógeno (95% de O2 - 5% de CO2). Se insertó una cánula de tubo de plástico a los extremos oral y anal de cada segmento y se vaciaron. El tejido se fijó al Sylgard, y se expuso el haz nervioso mesentérico. La placa de Petri se colocó sobre la platina de un microscopio invertido y la luz se perfundió por gravedad a 0,5-1 ml/min con Krebs oxigenado o Krebs con aditivos (Perez-Burgos A., Wang B et al., American journal of physiology Gastrointestinal and liver physiology 2013;304:G211-20). El compartimento seroso se perfundió de manera separada con Krebs calentado previamente (34°C) a 3-5 ml/min. El haz nervioso se succionó con cuidado en una pipeta de vidrio unida a un portaelectrodos de registro electrofisiológico de fijación de voltaje (CV-7B; Molecular Devices, Sunnyvale, CA), y se realizaron registros de los nervios extracelulares usando un amplificador Multi-Clamp 700B y un convertidor de señales Digidata 1440A (Molecular Devices). Las señales eléctricas se filtraron por paso de banda a 0,1-2 kHz, se muestrearon a 20 kHz y se almacenaron en un ordenador personal que ejecuta el software pClamp 10 (Molecular Devices). Se realizaron repetidas distensiones de segmentos elevando la presión intraluminal por encima de 2 hPa. Se aplicó un cabezal de presión de gravedad constante de 48 hPa al Krebs que perfunde el lumen y se elevó la presión cerrando el tubo de salida durante 1 min a un máximo de 3 distensiones consecutivas. Se dejaron reposar los segmentos durante 9 min entre distensiones. Se registró la actividad eléctrica de unidades múltiples constitutivas en ausencia de presión intraluminal positiva.
Vagotomía
La vagotomía subdiafragmática se llevó a cabo tal como se describió anteriormente (van der Kleij H, O’Mahony C et al. American journal of physiology Regulatory, integrative and comparative physiology 2008;295:R1131-7). Se permitió que los animales se recuperaran durante 10-14 días antes de recoger el yeyuno y tejido mesentérico para experimentos electrofisiológicos. Se realizaron vagotomías simuladas en 3 animales. Después de la operación, se midieron diariamente el peso corporal y la salud general de los ratones. No se encontró evidencia de diferencias significativas en aumento de peso 1 semana tras la cirugía en animales o bien sometidos a vagotomía o bien tratados de manera simulada (datos no mostrados). Todos los ratones sometidos a vagotomía se sometieron a prueba para completar el procedimiento registrando después de cada experimento las respuestas a la aplicación serosa de colecistoquinina (CCK). Sólo se consideró que la vagotomía había sido eficaz cuando la CCK no aumentó la tasa de descarga del nervio mesentérico (Perez-Burgos A., Wang B et al., American journal of physiology Gastrointestinal and liver physiology 2013;304:G211 -20).
Fármacos y bacterias
DSM 17938 se donaron por BioGaia AB (Estocolmo, Suecia), mientras que Lactobacillus rhamnosus JB-1 se tomaron de una reserva en el Instituto Brian-Body de la Universidad McMaster (Ontario, Canadá). Todos los procedimientos fueron tal como se notificó previamente (Kunze WA, Mao YK et al., Journal of celular and molecular medicine 2009;13:2261-70, Ma X, Mao YK et al., American journal of physiology Gastrointestinal and liver physiology 2009;296:G868-75, Wang B, Mao YK, FASEB journal: publicación oficial de la Federación de Sociedades Americana de Biología Experimental 2010;24:4078-88). Los números bacterianos se determinaron mediante inspección visual, y la viabilidad se comprobó después de la siembra en placas de agar con medio de crecimiento. Se descongelaron bacterias de reservas congeladas, se centrifugaron a 2000 rpm durante 15 min y se suspendió el sedimento en Krebs y de nuevo se centrifugó y se volvió a suspender. Antes de su uso, las bacterias se diluyeron hasta concentraciones de trabajo con Krebs. Se obtuvo colecistoquinina (25-33) sulfatada (CCK) de AnaSpec (Fremont, CA); nicardipina, capsaicina y 6-yodonordihidrocapsaicina de Sigma-Aldrich y m-conotoxina GVIA (m-Cg-GVIA) y mconotoxina MVIIC (rn-Cg-MVIIC) de Alomone Labs (Jerusalén, Israel). Se disolvieron 6-yodonordihidrocapsaicina y CCK en DMSO; se disolvió capsaicina en etanol para preparar alícuotas de disolución de reserva. El día del experimento, se diluyeron las alícuotas en Krebs hasta concentraciones de trabajo con concentraciones finales de DMSO y de etanol de < 0,01% y < 0,1%, respectivamente.
Análisis de datos fuera de línea
Las frecuencias de descarga espontánea de unidades individuales y múltiples se midieron usando el software Clampfit 10.2 (Molecular Devices) y Origin 8.5 (Northampton, MA). Los registros máximos de unidades individuales y múltiples se usaron de manera rutinaria para determinar los cambios en las tasas de descarga de las fibras nerviosas mesentéricas inducidos mediante la exposición del intestino a diferentes estímulos o agentes farmacológicos (Perez-Burgos A., Wang B et al., American journal of physiology Gastrointestinal and liver physiology 2013;304:G211-20). Los momentos de los máximos en el registro de unidades múltiples se determinaron usando el módulo de detección de máximos de Clampfit, y se calculó la frecuencia de descarga promedio a partir de los intervalos entre máximos. Las unidades individuales se extrajeron de la señal de unidades múltiples haciendo coincidir la forma de máximo usando la herramienta de detección de plantilla de forma de máximo de Clampfit (análisis computarizado de forma de onda). Después de la ejecución del algoritmo de detección de plantilla, se comprobó siempre la discriminación de máximos de unidades individuales mediante inspección visual, y se descartaron los casos de máximos no coincidentes (<0,2%) (Perez-Burgos A., Wang B et al., American journal of physiology Gastrointestinal and liver physiology 2013;304:G211 -20).
Estadística
Los datos se expresan como medias ± DE, con N refiriéndose al número total de los segmentos de yeyuno registrado, y n refiriéndose al número de actividad de fibras individuales extraídas de registros de unidades múltiples. Se extrajo un máximo de 6 unidades individuales de cada registro de múltiples unidades. Se usaron las pruebas de Wilcoxon o de la t de datos independientes para comparaciones de datos emparejados o no emparejados, respectivamente; se usaron ANOVA de una vía y de dos vías con prueba de Bonferroni a posteriori para comparar múltiples grupos según corresponda. Dado que pueden producirse grandes variaciones en la actividad espontánea entre una preparación y otra en la actividad nerviosa de unidades múltiples, se emparejaron las comparaciones antes y después de los registros de tratamiento realizados en los que cada haz nervioso sirvió como su propio control para garantizar cambios significativos en cada tratamiento o dosis de fármaco. Se representó gráficamente el porcentaje de aumento en la descarga por encima de la frecuencia inicial frente a la concentración de capsaicina (en presencia o ausencia de bacterias) y esto se ajustó mediante una ecuación logística de dosis-respuesta [Y = parte inferior (parte superior - parte inferior/1 10LogCE50-x)]. Los parámetros que describen los ajustes logísticos se compararon usando una prueba F de suma de cuadrados extra. Todas las pruebas estadísticas se realizaron usando el software Prism 5.0 (Graph-Pad software, San Diego, CA).
Efectos de DSM 17938 sobre la frecuencia de descarga espontánea del nervio mesentérico
DSM 17938 luminal influyó en la descarga espontánea de unidades múltiples del nervio mesentérico (Perez-Burgos A., Wang B et al., American journal of physiology Gastrointestinal and liver physiology 2013;304:G211-20).
1x109 ufc/ml de DSM 17938 intraluminal provocaron una disminución en la frecuencia de descarga espontánea de unidades múltiples en un 22% desde 36,3 ± 8,4 hasta 28,2 ± 7,2 Hz (N = 7, P = 0,02, figura 1A); DSM 17938 a 1x108 ufc/ml cambió la descarga espontánea en un 19% desde 21,6 ± 5,1 hasta 17,6 ± 6 Hz, N = 6, P = 0,09, figura 1B). El medio acondicionado con DSM 17938 (1:5) también disminuyó la descarga espontánea en un 37% desde 22,6 ± 4,2 hasta 14,17 ± 2,4 Hz (N = 7, P = 0,03, figura 1C). Sin embargo, DSM 17938 destruido por irradiación y o caldo solo no disminuyó la excitabilidad aferente: desde 17,84 ± 5,3 hasta 18,25 ± 4,1 Hz (N = 6, P = 0,84), y desde 20,48 ± 1,6 hasta 21,49 ± 2,8 Hz (N = 6, P = 0,10), respectivamente (figuras 1D-E).
La vagotomía y la parálisis muscular no inhibieron la reducción por DSM 17938 de la descarga espontánea del nervio mesentérico
Se investigó si el efecto de 1x109 ufc/ml de DSM 17938 sobre la descarga espontánea se suprimió por vagotomía. previa Para controlar las posibles acciones directas de DSM 17938 en células de músculo liso, se añadió en este y en todos los experimentos posteriores de descarga espontánea el bloqueador de canales de Ca2+ de tipo L nicardipina (3 pM) que inhibe las contracciones musculares. Por tanto, después de la vagotomía y de la adición de nicardipina, DSM 17938 redujo la frecuencia de descarga de unidades múltiples en un 18% desde 16,72 ± 1,9 hasta 13,77 ± 1,9 Hz (N = 17, P = 0,001, figura 2A, 2C). A continuación, se analizaron los datos de los animales sometidos a vagotomía y con músculos paralizados con respecto a las tasas de descarga de unidades individuales. DSM 17938 redujo la frecuencia de descarga de unidades individuales en un 19% desde 0,36 ± 0,05 hasta 0,29 ± 0,03 Hz (n = 30, P = 0,02, figura 2B, 2C); de estas fibras, la mayoría (20/30) mostró una disminución en la frecuencia del 36% desde 0,42 ± 0,06 hasta 0,27 ± 0,04 Hz (P < 0,0001), pero la fracción más pequeña de fibras restantes aumentó su tasa de descarga en un 29% desde 0,24 ± 0,04 hasta 0,31 ± 0,06 Hz (n = 10/30, P = 0,006).
DSM 17938 disminuyó la frecuencia de descarga de unidades múltiples espinales y la respuesta a la capsaicina
mediante antagonismo parcial insuperable de los receptores TRPV1
Se sometió a prueba si DSM 17938 podía modificar el aumento de frecuencia de descarga inducida por capsaicina en la excitación de unidades individuales en tejidos tomados de ratones previamente sometidos a vagotomía. La capsaicina aplicada al compartimento seroso aumentó la tasa de descarga espontánea de unidades individuales y múltiples, con latencias de aparición de ~60 s y de una manera dependiente de la dosis. Dado que los receptores sensibles a capsaicina TRPV1 se desensibilizan, y aplicaciones posteriores del agonista pueden dar lugar a un efecto disminuido, se examinaron las respuestas a un intervalo de dosis de capsaicina (100 nM-100 pM) en segmentos de yeyuno individuales. Esto se realizó con y sin 20 min de aplicación intraluminal previa de 1x109 ufc/ml de DSM 17938 (N=25 para cada curva, 5 segmentos por cada concentración; se analizaron ~6 unidades individuales espinales para cada segmento). Se representó gráficamente el porcentaje de aumento en la frecuencia de descarga frente a la concentración de capsaicina o concentración de capsaicina más DSM 17938 y se ajustó con una ecuación logística de tres parámetros de la forma Y = parte inferior (parte superior-parte inferior)/(1 10LogCE50-X). La CE50 para capsaicina sola fue de 200 nM en comparación con 500 nM para capsaicina en presencia de DSM 17938 (P = 0,71). La respuesta máxima (parte superior) obtenida con capsaicina fue de 238,4 ± 27,5% frente a 129 ± 17% obtenida con capsaicina más DSM 17938 (P = 0,004, figura 3A). Según informes previos, algunas fibras espinales no se excitaron por la capsaicina. Se examinó si la capsaicina excitaba fibras espinales directamente, o si la excitación dependía de la transmisión sináptica intraparietal desde neuronas entéricas hasta terminaciones nerviosas intraganglionares. Se añadió capsaicina 1 pM en el compartimento seroso después de que la transmisión sináptica intraparietal se bloqueara al añadir 500 nM de cada de los bloqueadores de Ca2+ m-Cg-GVIA y m-Cg-MVIIC. El bloqueo sináptico intraparietal no disminuyó la excitación provocada por la capsaicina que fue de 187,5 ± 42,9% (n = 17) en ausencia de las conotoxinas y de 219,1 ± 72,6 (n= 12) en su presencia (P = 0,947, figura 3B). Se concluyó que la acción de DSM 17938 sobre los aferentes espinales no implica transmisión sináptica intraparietal.
Los efectos del medio acondicionado con DSM 17938 que contiene productos de liberación de bacterias DSM 17938 redujeron las acciones de la capsaicina sobre las fibras espinales
Se sometió a prueba si los productos de bacterias DSM 17938 subyacen al antagonismo de TRPV1 en aferentes mesentéricos. La diana de DSM 17938 en los aferentes mesentéricos son predominantemente fibras espinales, dado que el porcentaje de reducción inducida por DSM 17938 de frecuencia de descarga espontánea fue muy similar con y sin vagotomía previa (el 18% frente al 22 %, respectivamente); a continuación, se aplicó capsaicina 1 pM en fibras mesentéricas no sometidas a vagotomía que recibieron una aplicación intraluminal previa de medio acondicionado con DSM 17938 durante 20 min. El medio acondicionado con DSM 17938 (1:5) inhibió el aumento de frecuencia de descarga inducida por capsaicina (%) en fibras individuales mesentéricas desde 187,5 ± 43% (grupo de control, N = 17) hasta 74,89 ± 22% (N = 14), y fue similar al porcentaje de aumento inducido por capsaicina en fibras espinales con tratamiento con 1x109 ufc/ml de DSM 17938 (80,29 ± 22%, N = 17) (P = 0,02, prueba ANOVA de una vía; figura 7).
DSM 17938 o el antagonismo de TRPV1 redujeron la descarga provocada por distensión
En ausencia de nicardipina para permitir la contracción muscular, se registró la frecuencia de descarga de unidades individuales y múltiples de fibras que se supone que son nociceptores (Grundy D, Gut 2004;53 Supl. 2:ii5-8). Se sometió a prueba si DSM 17938 podía reducir su respuesta excitadora provocada al elevar la presión intraluminal hasta una intensidad nociceptora de 48 hPa (36 mmHg) (Perez-Burgos A., Wang B et al., American journal of physiology Gastrointestinal and liver physiology 2013;304:G211-20). La primera respuesta de estas fibras a la distensión del intestino es generalmente mayor que la obtenida con una distensión posterior, pero permanece constante durante hasta 3 distensiones adicionales (Perez-Burgos A., Wang B et al., American journal of physiology Gastrointestinal and liver physiology 2013;304:G211-20). Por tanto, se usó la 2a de 3 distensiones sucesivas para comparación. La descarga de unidades múltiples fue de 111,5 ± 16,7 Hz durante la distensión, pero después de añadir DSM 17938 durante 20 min, la distensión aumentó la descarga hasta sólo 86,5 ± 10,6 Hz (N = 5, P = 0,31). La frecuencia de descarga de unidades individuales espinales fue de 3,01 ± 0,44 Hz durante la distensión, pero en presencia de DSM 17938 la descarga fue de 1,71 ± 0,16 durante la distensión (n = 28, P = 0,008, figura 4A). La frecuencia de descarga previa a la distensión fue de 0,31 ± 0,05 frente a 0,25 ± 0,07 Hz (n = 28, P = 0,053, figura 4A) para el control frente a DSM 17938 añadida. El antagonista de TRPV1 6-yodonordihidrocapsaicina (10 pM) imitó el efecto de DSM 17938 sobre la respuesta de unidades individuales disminuyendo la respuesta a la distensión desde 3,26 ± 0,73 hasta 2,23 ± 0,50 Hz (n = 13, P = 0,0002, prueba de Wilcoxon, figura 4B en ausencia de nicardipina).
Ejemplo 2
DSM 17938 bloqueó el aumento de Ca2+ inducido por capsaicina en cultivos primarios de neuronas DRG
Cultivos primarios de ganglios nerviosos de la raíz posterior (DRG)
La columna vertebral se retiró del cuerpo, se transfirió a un vaso de precipitados que contenía Krebs enfriado con
hielo y se bisecó longitudinalmente. Se expusieron las DRG y se recogieron de los niveles toracolumbares. Se lavaron dos veces las DRG completas con medio estéril L-15 de Leibovitz (GIBCO, Gaithersburg, MD) y se incubaron durante 40 min en colagenasa tipo 1 a 1 mg/ml (Sigma-Aldrich; Oakville, ON, Canadá) y 0,5 ml de tripsina (0,25%, GIBCO) en 20 ml de L-15 a 37°C. Después de la adición adicional de 5 ml de L-15 que contenía suero fetal bovino al 10% (FBS, GIBCO), los ganglios se centrifugaron durante 5 min a 1.000 rpm, después se lavaron dos veces con medio de crecimiento (L-15, que contenía FBS al 10%, penicilina/estreptomicina/glutamina al 1%, HEPES al 1% y piruvato de Na al 1%). Las DRG se colocaron en 2 ml de medio de crecimiento y se trituraron 10 veces. A continuación, se centrifugaron los ganglios durante 10 s a 500 rpm y el sobrenadante se transfirió a un tubo estéril. Se volvieron a suspender en 2 ml de medio de crecimiento, se trituraron de manera repetida hasta que el volumen de sobrenadante transferido fue de 10 ml, se centrifugaron durante 5 min a 1.000 rpm y el sedimento final se volvió a suspender en 3 ml de medio de crecimiento. Las neuronas se sembraron en placa sobre 3 placas de Petri con fondo de vidrio recubiertas con poli-d-lisina (MatTek, Ashland, MA). Se añadieron 1,5 ml adicionales de medio de crecimiento a cada placa después de 30 min y se incubó todo durante 24 h a 37°C con carbógeno.
Obtención de imágenes de Ca2+
Las neuronas DRG se colocaron dentro de una placa de registro de plexiglás y se cargaron con el indicador de Ca2+ Fluo-4-AM (8 pM) diluido en Krebs con ácido plurónico al 0,1% (en DMSO) a 37°C durante 60 min. La placa se colocó en el compartimento de registro y se superfundió con Krebs nuevo (~342C) durante 15 min para permitir el lavado del tinte. Se observaron las células en un microscopio invertido (Nikon eclipse TE 2000-S, Melville, NY) y se obtuvieron imágenes usando una cámara Rolera-XR (Surrey, BC, Canadá). Se registró la intensidad de fluorescencia en neuronas individuales mediante el software Simple PCI 6 (Compix Inc, Imaging systems, Sewickley, PA). Se administraron fármacos a través de una micropipeta unida a un impulsor de presión controlado electrónicamente (Picospritzer II; General Valve, Fairfield, NJ) con la punta de <100 pm de la célula. Las imágenes, registradas a 0,9 fotogramas/s, se almacenaron en un disco duro local. Se analizaron fuera de línea los archivos de imágenes usando el software Image J (NIH, EE.UU., http://imagej.nih.gov/ij). El aumento en Fluo-4 Ca2+ cuando se aplicó capsaicina se midió como la razón (F/F0) de intensidad de fluorescencia después de capsaicina (F) dividido por la intensidad antes de capsaicina (F0). Las bacterias y los fármacos se manipularon como en el ejemplo 1.
Resultados
La especificidad del efecto de DSM 17938 sobre las neuronas espinales se investigó adicionalmente sometiendo a prueba la capacidad de las bacterias en la inhibición de la respuesta del agonista del receptor TRPV1 capsaicina. En estos experimentos, también se incluyó JB-1. JB-1 (Lactobacillus rhamnosus) ha mostrado previamente que reduce el dolor y la descarga de fibras individuales de DRG inducida por distensión gástrica (Duncker et al., The Journal of Nutrition 2011). Dado que la apertura de los canales de TRPV1 aumenta la concentración de Ca2+ intracelular, se usó la obtención de imágenes de Ca2+ de cultivo primario de neuronas DRG para estos experimentos. Al impulsar capsaicina 1 pM sobre las neuronas DRG se provocó un aumento en Ca2+ intracelular en un plazo de ~30 s (figura 5A). Dado que el canal de TRPV1 puede desensibilizarse con exposiciones repetidas de ligando, sólo se aplicó capsaicina una vez a cada placa de cultivo. A continuación, se añadió o bien DSM 17938 o bien JB-1 30 min antes de aplicar capsaicina. DSM 17938 a 1x109 ufc/ml disminuyó la razón de aumento de fluorescencia F/F0 desde 2,36 ± 0,31 (grupo de control, N = 14) hasta 1,25 ± 0,04. En cambio, 1x108 ufc/ml de DSM 17938 cambió F/F0 a 2,67 ± 0,35 y 1x108,5 ufc/ml de DSM 17938 a 2,07 ± 0,27. La adición de 1x109 ufc/ml de JB-1 tuvo un pequeño efecto y cambió la razón F/F0 a 2,48 ± 0,19 (N = 9), que es similar a la razón obtenida con capsaicina sola (figura 5B). Estos resultados demuestran que DSM 17938 puede bloquear el aumento de Ca2+ inducido por capsaicina en cultivos primarios de neuronas DRG.
Ejemplo 3
DSM 17938 inhibió la disminución de la frecuencia cardiaca provocada por distensión gástrica
Se asignaron un total de 17 ratas a 2 grupos. A su llegada, se permitió que las ratas se aclimataran durante 1 semana seguido por la manipulación durante 1 semana (10 min/d) para minimizar efectos de estrés durante los experimentos. A las ratas se les alimentó por sonda cada mañana durante 9 d con o bien 0,2 ml (1x109 ufc/ml) de DSM 17938 vivas en Krebs o bien Krebs solo como control (vehículo). Los métodos para GD se han publicado anteriormente (Tougas, Wang, American Journal of Physiology 1999;277:R272-8). De manera breve, se privó de alimentos a las ratas durante la noche, se anestesiaron con una mezcla de clorhidrato de ketamina (75 mg/kg de peso corporal) y xilazina (10 mg/kg de peso corporal) por vía intraperitoneal. Se proporcionó anestesia complementaria según fuera necesario. Después de una laparotomía en la línea media, se insertó un dispositivo de distensión que consistía en un globo gástrico con forma de bola (d.i. de 2 cm) fijado a un catéter de Teflon (20 cm) en el estómago a través de una pequeña incisión en la zona proximal del duodeno y se conectó a un sistema de baróstato (Distender, G&J Electronic, Toronto, Canadá). Se midió la respuesta cardiaca a medida que se inflaba el globo con aire a presiones de 40 y 60 mmHg durante 60 s. Se permitieron diez minutos de descanso para la recuperación después de cada distensión. Se aplicó sólo un conjunto de distensiones a cada rata para evitar posibles mecanismos compensatorios y se sacrificaron las ratas después de las mediciones antes de que recuperaran la conciencia. Se realizaron registros continuos de frecuencia cardiaca a través de un
electrocardiograma de superficie que consistía en 3 electrodos de aguja aplicados a los hombros izquierdo y derecho y a las patas traseras derechas. Se amplificó la señal y se registró en un ordenador personal usando un programa de adquisición de datos comercial (Experimenter’s Workbench, DataWave Technologies, Loveland, CO). Se midió la frecuencia cardiaca 60 s antes, durante y después de cada distensión durante un total de 180 s. El registro de la frecuencia cardiaca (FC) antes de cada distensión permitió la corrección de posibles cambios del valor inicial debido a variaciones en los niveles de anestesia y garantizó que cualquier respuesta de frecuencia cardiaca podía estar ligada a la distensión. Para controlar el efecto de GD a lo largo del tiempo, los datos se presentaron como cambio medio de la FC en reposo (100% = reposo) usando la FC media registrada durante un periodo de 10 s durante la distensión (10, 20, 30, 40, 50 y 60 s). Los grupos se compararon usando la media de los cambios de FC (porcentaje de FC en reposo) en todas las ratas del mismo grupo durante los 60 s de cada distensión (40 y 60 mmHg). Las bacterias y los fármacos se manipularon como en el ejemplo 1.
Resultados
La disminución en la frecuencia cardiaca provocada por 40 mmHg no se cambió al alimentar por sonda DSM 17938 (P = 0,121, figura 6A) (N = 8 y 9 con vehículo y DSM 17938, respectivamente). La insuflación con 60 mmHg disminuyó la frecuencia cardiaca en un plazo de 10 s que persistió durante 30 s durante la distensión (figura 6B). La alimentación por sonda con DSM 17938 durante 9 d antes de la prueba moderó la respuesta a 60 mmHg (P = 0,028, prueba de la t para datos independientes, figura 6A, 6B). La distensibilidad gástrica (volumen/presión) no difirió entre animales tratados con vehículo o DSM 17938, para presiones de distensión gástrica de 40 ó 60 mmHg (datos no mostrados). Estos resultados demuestran un efecto antinociceptor de las bacterias.
Claims (1)
- REIVINDICACIONESMétodo para seleccionar un agente para su uso en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto, comprendiendo dicho método:poner en contacto una célula que expresa TRPV1 con una cepa de Lactobacillus reuteri o un medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba; medir la activación espontánea y/o inducida del receptor de potencial transitorio vaniloide 1, TRPV1, en dicha célula tras poner en contacto dicha célula con dicha cepa de Lactobacillus reuteri o dicho medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba; comparar dicha activación espontánea y/o inducida de TRPV1 medida con una activación de TRPV1 de control; yseleccionar, como dicho agente, dicha cepa de Lactobacillus reuteri o dicho medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba como cepa de Lactobacillus reuteri o medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri eficaz en reducir o evitar el dolor gastrointestinal si dicha activación espontánea y/o inducida de TRPV1 medida es menor que dicha activación de TRPV1 de control.Método según la reivindicación 1, en el que medir dicha activación espontánea y/o inducida de TRPV1 comprende medir el flujo de entrada de Ca2+ en dicha célula inducida por capsaicina, cambio de pH y/o calor.Método para seleccionar un agente para su uso en reducir o evitar el dolor gastrointestinal en un sujeto, comprendiendo dicho método:poner en contacto un segmento gastrointestinal ex vivo con tejido mesentérico unido con una cepa de Lactobacillus reuteri o un medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba;medir la descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida en dicho segmento gastrointestinal ex vivo tras poner en contacto dicho segmento gastrointestinal ex vivo con dicha cepa de Lactobacillus reuteri o dicho medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba;comparar dicha descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida medida con una descarga aferente mesentérica de control; yseleccionar, como dicho agente, dicha cepa de Lactobacillus reuteri o dicho medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri que va a someterse a prueba como cepa de Lactobacillus reuteri o medio acondicionado de dicha cepa de Lactobacillus reuteri eficaz en reducir o evitar el dolor gastrointestinal si dicha descarga aferente mesentérica espontánea y/o inducida medida es menor que dicha descarga aferente mesentérica de control.Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho sujeto padece un trastorno de motilidad intestinal que provoca dicho dolor gastrointestinal en dicho sujeto.Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho sujeto padece una enfermedad seleccionada de un grupo que consiste en cólico, síndrome del intestino irritable y estreñimiento que provoca dicho dolor gastrointestinal en dicho sujeto.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE1450065 | 2014-01-23 | ||
| SE1450813 | 2014-07-01 | ||
| PCT/SE2015/050064 WO2015112083A1 (en) | 2014-01-23 | 2015-01-23 | Selection of agents modulating gastrointestinal pain |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2767060T3 true ES2767060T3 (es) | 2020-06-16 |
Family
ID=52465569
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES15703840T Active ES2767060T3 (es) | 2014-01-23 | 2015-01-23 | Selección de agentes que modulan el dolor gastrointestinal |
| ES19207905T Active ES2874479T3 (es) | 2014-01-23 | 2015-01-23 | Agentes que modulan el dolor gastrointestinal |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES19207905T Active ES2874479T3 (es) | 2014-01-23 | 2015-01-23 | Agentes que modulan el dolor gastrointestinal |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20160334391A1 (es) |
| EP (2) | EP3629026B1 (es) |
| JP (1) | JP6635925B2 (es) |
| KR (1) | KR102154382B1 (es) |
| CN (1) | CN106164674B (es) |
| AU (1) | AU2015209763B2 (es) |
| BR (1) | BR122023013786B1 (es) |
| CA (1) | CA2936560C (es) |
| CL (1) | CL2016001878A1 (es) |
| DK (1) | DK3629026T3 (es) |
| ES (2) | ES2767060T3 (es) |
| IL (1) | IL246563B (es) |
| MX (1) | MX369105B (es) |
| NZ (1) | NZ721882A (es) |
| PL (1) | PL3629026T3 (es) |
| RU (1) | RU2692671C2 (es) |
| SG (1) | SG11201605378TA (es) |
| UA (1) | UA120846C2 (es) |
| WO (1) | WO2015112083A1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11179427B2 (en) | 2013-01-21 | 2021-11-23 | Eth Zurich | Baby food composition comprising viable propionic acid-producing bacteria |
| WO2018074514A1 (ja) * | 2016-10-20 | 2018-04-26 | ビオフェルミン製薬株式会社 | 腸管のイオン経細胞輸送体への作用剤、クロライドチャネル活性化剤、腎疾患の予防もしくは治療剤、又は排便促進剤 |
| US20230057324A1 (en) * | 2018-07-24 | 2023-02-23 | Biogaia Ab | Therapeutic Methods Using Bacterial Strains Which are Capable of Increasing Adenosine Levels |
| HRP20221209T1 (hr) * | 2018-07-24 | 2022-12-09 | Biogaia Ab | Odabir i upotreba bakterija koje povisuju razinu melatonina za smanjenje dojenačkih kolika |
| CN111484982A (zh) * | 2020-05-14 | 2020-08-04 | 西南民族大学 | 一种人结直肠腺癌细胞trpv1基因敲除细胞株及应用 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1289984B1 (it) | 1997-02-27 | 1998-10-19 | Proge Farm Srl | Ceppi di lattobacilli utili nel trattamento di disfunzioni del sistema gastrointestinale |
| CN101194036A (zh) * | 2005-04-01 | 2008-06-04 | 南伊利诺斯大学董事会 | 金属间结合金刚石复合材料及该复合材料件的形成方法 |
| US7344867B2 (en) * | 2005-04-15 | 2008-03-18 | Eamonn Connolly | Selection and use of lactic acid bacteria for reducing inflammation in mammals |
| US20080051454A1 (en) | 2006-04-21 | 2008-02-28 | The Board Of Trustees Operating Michigan State University | Compositions and methods for transient receptor potential vanilloid (TRPV) channel mediated treatments |
| US7374924B2 (en) * | 2006-06-05 | 2008-05-20 | Biogaia Ab | Use of selected lactic acid bacteria for reducing infantile colic |
| WO2008090434A1 (en) | 2007-01-25 | 2008-07-31 | Pfizer Japan Inc. | Substituted n-bicyclicalkyl bicyclic carboxyamide compounds |
| DK2732823T3 (da) * | 2008-06-25 | 2019-09-16 | H Lundbeck As | Modulering af TrpV : Vps10p-domæne-receptorsystemet til behandlingen af smerte |
| KR101091810B1 (ko) | 2009-09-11 | 2011-12-12 | 고려대학교 산학협력단 | 신규 활성제를 이용한 ｔｒｐｖ1 활성화 방법 |
| JP5681533B2 (ja) | 2011-03-14 | 2015-03-11 | ビオフェルミン製薬株式会社 | 消化管痛の予防又は軽減剤 |
| BR112014005358A8 (pt) * | 2011-09-09 | 2017-10-03 | Propella Therapeutics Inc | Composições compreendendo agonista seletivo de trpv1 e seus usos |
| JPWO2013141202A1 (ja) | 2012-03-21 | 2015-08-03 | 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター | 筋増加剤、及び筋増加物質のスクリーニング方法 |
-
2015
- 2015-01-23 EP EP19207905.1A patent/EP3629026B1/en active Active
- 2015-01-23 EP EP15703840.7A patent/EP3097423B1/en active Active
- 2015-01-23 BR BR122023013786-8A patent/BR122023013786B1/pt active IP Right Grant
- 2015-01-23 WO PCT/SE2015/050064 patent/WO2015112083A1/en active Application Filing
- 2015-01-23 DK DK19207905.1T patent/DK3629026T3/da active
- 2015-01-23 UA UAA201608948A patent/UA120846C2/uk unknown
- 2015-01-23 CN CN201580005611.8A patent/CN106164674B/zh active Active
- 2015-01-23 ES ES15703840T patent/ES2767060T3/es active Active
- 2015-01-23 KR KR1020167022947A patent/KR102154382B1/ko active IP Right Grant
- 2015-01-23 MX MX2016009613A patent/MX369105B/es active IP Right Grant
- 2015-01-23 CA CA2936560A patent/CA2936560C/en active Active
- 2015-01-23 AU AU2015209763A patent/AU2015209763B2/en active Active
- 2015-01-23 JP JP2016548146A patent/JP6635925B2/ja active Active
- 2015-01-23 US US15/111,930 patent/US20160334391A1/en not_active Abandoned
- 2015-01-23 SG SG11201605378TA patent/SG11201605378TA/en unknown
- 2015-01-23 NZ NZ721882A patent/NZ721882A/en unknown
- 2015-01-23 RU RU2016134215A patent/RU2692671C2/ru active
- 2015-01-23 PL PL19207905T patent/PL3629026T3/pl unknown
- 2015-01-23 ES ES19207905T patent/ES2874479T3/es active Active
-
2016
- 2016-07-03 IL IL24656316A patent/IL246563B/en active IP Right Grant
- 2016-07-22 CL CL2016001878A patent/CL2016001878A1/es unknown
-
2018
- 2018-05-16 US US15/981,244 patent/US10656141B2/en active Active
-
2020
- 2020-03-30 US US16/834,278 patent/US11371985B2/en active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2767060T3 (es) | Selección de agentes que modulan el dolor gastrointestinal | |
| JP6476328B2 (ja) | 腸運動障害及び疼痛に影響を及ぼす薬剤の選択方法 | |
| Kannampalli et al. | Neonatal bladder inflammation induces long-term visceral pain and altered responses of spinal neurons in adult rats | |
| Yi et al. | Role of insular cortex in visceral hypersensitivity model in rats subjected to chronic stress | |
| BR112016016969B1 (pt) | Método para selecionar um agente para uso na redução ou prevenção da dor gastrointestinal em um indivíduo, uso de uma cepa bacteriana ou meio condicionado de dita cepa bacteriana, e, uso de uma composição | |
| Okabe et al. | KCC2-mediated regulation of respiration-related rhythmic activity during postnatal development in mouse medulla oblongata | |
| Pistilli | Mechanisms underlying rhythmic activities of the gastrointestinal tract | |
| Liu | Mechanisms and novel therapies in cervical spinal cord injury. | |
| Neufeld et al. | Psychoactive bacteria Lactobacillus rhamnosus (JB-1) elicits rapid frequency 1 facilitation in vagal afferents 2 | |
| Chen | Relationships among afferent neural processing, peristalsis and bolus clearance in the human oesophagus: implications for symptom perception and dysphagia |