TWI770390B - 一種猴頭菇固態培養萃取物用於製備延緩老化之組合物的用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種猴頭菇固態培養萃取物用於製備延緩老化及治療阿茲海默症之組合物的用途;其中該猴頭菇固態培養萃取物之製備方法包含:1)將猴頭菇培養於一固態培養基質中,得一猴頭菇固態培養菌絲體;2)將該猴頭菇固態培養菌絲體以一醇類溶劑,在一溫度條件及一時間條件下進行萃取;本發明所提供之猴頭菇固態培養萃取物具有促進神經細胞分化、延緩老化現象、改善學習能力及記憶能力、增加抗氧化活性、降低血液中三酸甘油脂及總膽固醇含量等功效。
Description
本發明係關於猴頭菇萃取物之用途,特別是猴頭菇固態培養萃取物用於製備延緩老化及治療阿茲海默症之組合物的用途。
老化(aging)是生物生理狀態及功能隨著時間衰老與減退的過程。造成老化的原因尚未被明確知曉,不過目前有研究認為老化與氧化壓力(oxidative stress)所造成的細胞損傷有關。
阿茲海默症(Alzheimer’s disease,AD),為不可逆、進展性的腦部神經退化性疾病,屬於失智症的一種。其病徵包括記憶及學習功能不正常衰退、認知障礙、語言障礙、情緒不穩、行為改變等。因好發於65歲以上之老年人,因此又常被稱為老年失智症。目前,對於阿茲海默症之成因,雖有數種不同假說,然尚未有明確定論,亦未有藥物或方法可根治,僅能就症狀作延緩治療。例如,使用乙醯膽鹼酯酶抑制劑提升因膽鹼性神經元死亡而下降的乙醯膽鹼濃度、使用非典型抗精神病藥緩解情緒及行為症狀等。然而,大多數用
於延緩治療之藥物皆會產生副作用,長期使用非典型抗精神病藥甚至可能增加死亡風險。因此,提供一種可用於治療阿茲海默症及延緩老化且具低副作用特性的天然組成物即為本發明所欲解決的重要課題。
猴頭菇(Hericium erinaceus),屬於齒菌科,猴頭菌屬,遍布於全球溫帶地區,其為東方盛行的藥食兩用菌之一。猴頭菇之子實體富含有多醣、萜類化合物、猴頭素及猴頭酮等多種功效性成份,具有諸如免疫調節、抗腫瘤、抗菌等效用。目前,人工培養猴頭菇之主流方式為液態培養,然而液態培養具有花費高及可能對環境產生污染之風險。而以低成本、低污染之固態培養的猴頭菇,其菌絲體之萃取物是否可用於延緩老化及治療阿茲海默症目前尚未可知。
本發明之目的在於提供一種猴頭菇固態培養萃取物用於製備延緩老化及治療阿茲海默症之組合物的用途,其中該猴頭菇固態培養萃取物之製備方法包含:步驟一、將猴頭菇在20-30℃條件下,培養於一固態培養基質中,得一猴頭菇固態培養菌絲體;步驟二、將該猴頭菇固態培養菌絲體以一醇類溶劑,在一溫度條件及一時間條件下進行萃取,所得之萃取物即為該猴頭菇固態培養萃取物;其中該醇類溶劑的體積百分濃度為20-95%,該溫度條件為
30-80℃,該時間條件為0.5-8小時。
為達前述發明目的,其中該固態培養基質包含一五穀雜糧類及一營養液;其中該營養液包括一碳源、一氮源;其中該營養液的pH值介於5.5-6.0。
為達前述發明目的,其中該老化包含行為、外表、眼睛或脊柱的功能衰退。
為達前述發明目的,其中該延緩老化及治療阿茲海默症係指促進神經細胞分化。
為達前述發明目的,其中該延緩老化及治療阿茲海默症係指增強學習能力或增強記憶能力。
為達前述發明目的,其中該延緩老化及治療阿茲海默症係指增加抗氧化能力。
為達前述發明目的,其中該延緩老化及治療阿茲海默症係指降低DNA損傷或減少脂質過氧化。
為達前述發明目的,其中該延緩老化及治療阿茲海默症係指降低血液中總膽固醇或三酸甘油脂含量。
本發明之另一目的在於提供一種延緩老化及治療阿茲海默症之組合物,其係包含一有效量之猴頭菇萃取物及一神經生長因子(NGF),該神經生長因子可與該猴頭菇萃取物產生促進神經分化之加成作用。
為達前述發明目的,其中該猴頭菇萃取物為猴頭菇固態培養萃取物,該猴頭菇固態培養萃取物之製備方法包
含:步驟一、將猴頭菇在20-30℃條件下,培養於一固態培養基質中,得一猴頭菇固態培養菌絲體;步驟二、將該猴頭菇固態培養菌絲體以一醇類溶劑,在一溫度條件及一時間條件下進行萃取,所得之萃取物即為該猴頭菇固態培養萃取物;其中該醇類溶劑的體積百分濃度為20-95%,該溫度條件為30-80℃,該時間條件為0.5-8小時。
為達前述發明目的,其中該固態培養基質包含一五穀雜糧類及一營養液;其中,該營養液包括一碳源、一氮源;其中該營養液的pH值介於5.5-6.0。
為達前述發明目的,其中該組合物可進一步包括藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。
為達前述發明目的,其中該組合物可進一步製成食品、健康食品、中草藥組合物或膳食補充品。
本發明使用低花費、低污染之方式取得猴頭菇菌絲體,用該猴頭菇菌絲體所萃取的猴頭菇固態培養萃取物,具有低副作用之優勢,不但不會對生體生化指標產生負面影響,還可降低血液中三酸甘油脂及總膽固醇含量。且本發明所提供之猴頭菇固態培養萃取物,具有促進神經細胞分化、減緩老化現象、改善學習及記憶能、增加抗氧化活性等功效,非常適合用於製備延緩老化及治療阿茲海默症之組合物的用
途。
第1圖係本發明實施例之動物實驗流程圖。
第2圖係不同濃度的猴頭菇固態培養萃取物對神經細胞株(PC-12)存活率之影響。
第3圖係不同萃取條件對猴頭素A(Erinacine A)含量之影響。
第4圖係猴頭菇固態培養萃取物在48小時促進神經細胞(PC-12)生長分化之效果。
第5圖係單次被動迴避試驗(single-trial passive avoidance test)之結果。
第6圖係主動迴避試驗(active shuttle avoidance test)之結果。
第7圖係肝臟之脂質過氧化物含量測定結果。
第8圖係肝臟之超氧化物歧化酵素(superoxide dismutase,SOD)的活性測試結果。
第9圖係肝臟之過氧化氫酵素(catalase)的活性測試結果。
第10圖係腦部粒腺體DNA之8羥基-2’-去氧鳥嘌呤核苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)含量分析結果。
第11圖係腦部脂質過氧化物含量分析結果。
本說明書中所述之所有技術性及科學術語,除非另外有所定義,皆為該所屬專業人士領域可共同瞭解的意義,其中單數用語「一」、「一個」、「該」、「所述」,除非另有說明,皆可指涉多於一個對象,此外,用語「包含」、「包括」皆為開放式連接詞;另外,除非另有說明,本案所用之材料皆市售易於取得。
本說明書中所使用之術語「萃取物」係指藉由萃取作用所製備之產物。該萃取物可以溶於溶劑中之溶液形式呈現,或萃取物可為不含或大體上不含溶劑之濃縮物或精華呈現。該萃取物亦可調配於醫藥組合物或食品中。術語萃取物可為自特定萃取步驟或一系列萃取步驟獲得之單一萃取物,或萃取物亦可為自獨立萃取步驟獲得之萃取物的組合。因此,該等經合併之萃取物亦涵蓋於術語「萃取物」。
術語「治療」係指延緩、改善、減少或逆轉目前正折磨著患者之該病症或該病症相關之任何症狀的方法以及預防該病症或其任何正出現之症狀的方法。
術語「藥學上可接受」意謂物質或組合物必須與調配物之其他成份相容,且對患者無害。
術語「藥學上可接受之賦形劑」,如本文中所用者,意指諳於此技者所知可與猴頭菇萃取物的物理和化學特性相容之任何生理學惰性,藥理學上不活性之物質。藥學上可接受之賦形劑包括,但不限於,聚合物、樹脂、增塑劑、
填料、潤滑劑、稀釋劑、黏合劑、崩解劑、溶劑、共一溶劑、界面活性劑、防腐劑、甜味劑、調味劑、藥學級的染料或顏料、及黏度劑。
術語「有效量」係指產生期望生物反應所必需之量。如彼等業內普通技術者可理解,複合物或生物活性劑之有效量可視諸如下列等因素而變化:期望生物終點、擬遞送生物活性劑、囊封基質之組成、目標組織等等。
本發明係以下面的實施例予以示範闡明,但本發明不受下述實施例所限制。
本發明所使用之猴頭菇為猴頭菌Hericium erinaceus BCRC 36470,其係購自於新竹食品工業發展研究所生資中心;並在進行固態培養前將菌種培養於PDA平板培養基活化菌種。
本發明實施例中的細胞實驗是使用大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤細胞株(PC-12,BCRC 60048),其是購自於食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection Research Center,Hsinchu,Taiwan),培養條件為每2-3天更換培養液,每5-6天進行繼代培養(比例1:5)。PC-12為一種神經細胞株,能表現出神經細胞的生理特性,遇刺激會產生細胞分化的現象。
本發明實施例中的動物實驗是以老化促進小鼠(senescence-accelerated mouse prone-8,SAMP8)為模型,
進行猴頭菇固態培養萃取物(以下簡稱猴頭菇固培萃取物)延緩衰老之功效驗證。實驗以3月齡的SAMP8小鼠為對象,隨機分成控制組和實驗組,管灌餵食13週,在實驗期間記錄攝食量、飲水量及體重變化。並於餵食第11週進行活動量(locomotion)測試及老化指數(aging score)評估;餵食第12週進行單次被動迴避試驗(single-trial passive avoidance test);餵食第13週進行主動迴避試驗(active shuttle avoidance test);第13週試驗結束後,犧牲小鼠,取其血液及臟器組織進行各項數據分析。
控制組與實驗組之餵食劑量:
A組(控制組):ddH2O。
B組(低劑量組):200mg/kg BW/day猴頭菇固培萃取物。
C組(中劑量組):400mg/kg BW/day猴頭菇固培萃取物。
D組(高劑量組):600mg/kg BW/day猴頭菇固培萃取物。
猴頭菇固培萃取物的人體有效量可依據本發明實施例所提供的小鼠有效量,使用體表面積差異(小鼠和人體換算系數為12.3倍)及美國食品藥物管理局所提出之公式計算出:假設小鼠有效量為200mg/kg BW/day,則40kg人體有效量為200/12.3 x 40=650mg/day;假設小鼠有效量為600mg/kg BW/day,則100kg人體有效量為600/12.3 x 100=4878mg。
實施例一、猴頭菇固態培養
將猴頭菇在25-27℃條件下,培養於一固態培養
基質中;其中,該固態培養基質包含一五穀雜糧類及一營養液;其中,該營養液包括一碳源、一氮源、可選擇性添加之一營養添加物,營養液的pH值介於5.5-6.0;其中,該五穀雜糧類優選為選自於蕎麥、小麥、糙米、小米、薏仁、紅豆及黑豆所組成之群組;其中,該五穀雜糧類與該營養液的重量比例介於1:1-2之間,並經過蒸熟滅菌處理。
實施例二、製備猴頭菇固培萃取物
取實施例一所培養之猴頭菇固態培養菌絲體,以一醇類溶劑,在一溫度條件及一時間條件下進行萃取,所得之萃取物即為猴頭菇固態培養萃取物(簡稱猴頭菇固培萃取物);其中,該醇類溶劑的體積百分濃度為20-95%,較佳體積百分濃度為30-85%,更佳體積百分濃度為50-85%,並以70%為最優;其中,該醇類溶劑包含乙醇、丙醇或丁醇,優選為乙醇;其中,該溫度條件為30-80℃,較佳溫度條件為40-70℃,最佳溫度條件為50℃;其中,該時間條件為0.5-8小時。不同萃取條件對萃取結果之影響如第3圖所示。
實施例三、猴頭菇固培萃取物的細胞毒性測試
取不同濃度(0、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200及400μg/mL)的猴頭菇固培萃取物對PC-12細胞分別處理24、48及72小時,並使用MTT試驗(MTT assay)測試猴頭菇固培萃取物對PC-12細胞生長的影響。
結果如第2圖所示,本發明所提供之猴頭菇固培萃取物,在200μg/mL以下之濃度對細胞不會產生毒性。
實施例四、猴頭菇固培萃取物促進神經細胞分化的活性評估
活性評估方式:對PC-12神經細胞株進行不同處理,接著觀察PC-12神經細胞株的神經突觸生長情況,當軸突(neurite)的長度超過細胞本體一倍,即判定細胞有分化的現象,並將其定義為1個”+”,以作為分化效果的標準。
試驗進行方式:取不同濃度(12.5、25、50、100μg/mL)的猴頭菇固培萃取物(H.erinaceus extract,HE),或不同濃度(3.125、6.25、12.5、25μM)的猴頭素A(Erinacine A)處理PC-12細胞,並以處理10ng/mL神經生長因子(nerve growth factor,NGF)的PC-12細胞作為控制組。於處理後24、48小時觀察PC-12細胞是否有生長神經突觸。
加成性試驗:將上述處理不同濃度之猴頭菇固培萃取物或猴頭素A的各個測試樣品同步加入NGF 10ng/mL,進行誘導神經細胞分化活性試驗,與NGF控制組比較其分化效果。
結果如表1及第4圖所示,以不同濃度的猴頭菇固培萃取物處理之神經細胞,皆有分化之現象,且其分化比率與猴頭菇固培萃取物濃度呈正相關,顯示本發明所提供之猴頭菇固培萃取物具促進神經細胞分化的能力。
由加成性試驗結果(表1)可知,NGF搭配較高濃度的猴頭菇固培萃取物,其促進神經細胞分化之效果較控制組(僅處理NGF)佳,表示較高濃度的猴頭菇固培萃取物與NGF促進神經分化之影響具加成性,可使神經細胞分化效果更佳。
實施例五、猴頭菇固培萃取物對攝食量、飲水量
及體重變化之影響。
觀察及記錄餵食猴頭菇固培萃取物對小鼠的攝食量、飲水量及體重變化之影響
結果如表2所示,各組間之小鼠的攝食量、飲水量及體重變化量無顯著差異,表示餵食猴頭菇固培萃取物不會影響小鼠的攝食、飲水及體重。
實施例六、猴頭菇固培萃取物對活動量(locomotion)之影響
評估方式:藉由觀察小鼠在光線微弱且寂靜的環境中,一時間區間內的平面步移情形,作為活動量評估依據。
測試方式:測試於餵食第11週進行。將各組小鼠分別置於25×25×25(W×D×H)cm3的鋁箱中央(Activity monitor video path analyzer,Coulbourn instruments Model E61-21),全程錄影觀察,並記錄每5分鐘區間內小鼠的平面步移時間(Locomotion,sec/5mins),全程10分鐘。
結果如表3所示,餵食小鼠中劑量或高劑量的猴頭菇固培萃取物可促進小鼠的活動量。
實施例七、猴頭菇固培萃取物對老化指數(Aging score)之影響
評估方式:在餵食第11週時,觀察小鼠在包含行為(behavior)、外表(appearance)、眼睛(eyes)、脊柱4個方面,共8個項目的情況。依照Takeda et al.(1981)Mech.Ageing Dev 17:183-194所提出之老化指數判定標準,將每個項目分成0、1、2、3、4,5個等級,依各項等級之定義給予評分。分數愈高者,則表示老化現象愈嚴重。各項目的具體評估方式:
1.行為方面:觀察小鼠的1)30秒內的探索反應(reactivity);2)被捏頸背皮膚時的逃避反應(passivity)。
2.外表方面:觀察小鼠的1)毛髮光澤度(glossiness);2)毛
髮粗糙度(coarseness);3)毛髮脫落的情形(hair loss);4)皮膚潰瘍的狀況(ulcer)。
3.眼睛方面:觀察眼睛周圍處黏膜炎或眼瞼的水腫情形(periophthalmic lesion);
4.脊柱方面:視察和觸摸小鼠脊柱前後彎的變化(spine lordokyphosis)。
結果如表4所示,實驗組在老化指數總分上顯著低於控制組(p<0.05),表示餵食猴頭菇固培萃取物可有效延緩小鼠老化。
實施例八、猴頭菇固培萃取物對學習及記憶能力之影響評估
評估方式:以單次被動迴避試驗(single-trial
passive avoidance test)及主動迴避試驗(active shuttle avoidance test)評估餵食猴頭菇固培萃取物對小鼠的學習及記憶能力之影響。
單次被動迴避試驗:於餵食第12週時,使用35(W)×17(D)×20(H)cm3之鋁箱(shuttle cage,Coulbourn instruments Model E10-15)進行。鋁箱分成明室及暗室,其中央有一7.5(W)×6.5(D)cm2之相隔並可相通的小閘門(guillotine door,Coulbourn instruments Model E10-15GD),箱底設有間隔1cm的平行排列金屬桿,並接上電流器。測試時先將小鼠放在鋁箱之明室,待10秒環境適應後,打開兩室間的小閘門,讓小鼠自由探索。由於小鼠有趨暗的夜行性行為,一旦小鼠進入暗室,小閘門迅速關上,5秒鐘後給予0.5微安培、0.5秒之電擊(shock),每次間隔5秒,連續三次,即完成學習訓練。在訓練完成後,分別測小鼠24小時、48小時及72小時的記憶能力。測試時使用同樣方法操作,但不再給予任何電擊,記錄小鼠在明室中滯留的時間,每次測試時間最大期限為180秒,滯留明室的時間越長,表示小鼠記憶能力越佳。
主動迴避試驗:在餵食第13週時進行,使用35(W)×17(D)×20(H)cm3之鋁箱(shuttle cage,Coulbourn instruments Model E10-15)進行。鋁箱分成兩室,其中央設有一7.5(W)×6.5(D)cm2之相隔並可相通的小閘門,箱底設有間隔1cm的平行排列金屬桿,並接上電流器。實驗全程由電腦程式設計控
制時間、聲光及電擊。測試時先將小鼠放置於鋁箱的一邊,待適應10秒鐘後,電腦給予10秒鐘的光及聲音的刺激(conditioned stimulus,CS),此時,處在CS系統下的小鼠,若仍停留在同一邊,無任何反應,則電腦隨即給予5秒鐘、0.3毫安培的電擊一次(unconditioned stimulus,UCS);反之,若處在CS系統下的小鼠移動進入另一邊,即不給予電擊;此過程稱為CS-UCS測試。每隻小鼠每次接受5回CS-UCS測試,待5回測試結束後,將其放回鼠籠中,待15-20分鐘後,再進行下一次5回測試,每日共4次,連續4天。小鼠於CS系統下的穿梭行為稱為迴避反應(avoidance response),若小鼠於CS系統下會進入另一邊,表示其已成功學習,並具記憶能力。迴避反應次數愈多,表示其記憶能力越好。
結果如第5圖及第6圖所示,中、高劑量組之被動及主動迴避試驗結果,與控制組相比皆有明顯的改善(p<0.05),表示餵食猴頭菇固培萃取物可增加小鼠的學習及記憶能力。
實施例九、血液一般生化指標檢驗
檢驗方式:於餵食第13週時,採集小鼠血液進行分析。小鼠於採血前一天禁食8小時,經由眼窩抽取血液樣本,置於離心管中,並於3000rpm、4℃下離心15分鐘。將上清液之血漿取出分裝,使用全自動生化分析儀器(Toshiba,TBA-200FR)分析以下項目:血糖(Glucose,GLU)、總蛋白
(Total protein)、白蛋白(Albumin)、三酸甘油脂(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、麩氨基酸草醋酸轉氨酶(Glutamic Oxaloacetic Transaminase,GOT)、麩胺酸丙酮酸轉胺酶(Glutamic Pyruvic Transaminase,GPT)、血尿素氮(Blood urine nitrogen,BUN)、肌酸酐(Creatinine,CREA)。
結果如表5所示,低、中、高劑量組之小鼠血液中的三酸甘油脂及總膽固醇含量皆較控制組低,表示猴頭菇固培萃取物具改善血液中三酸甘油脂及總膽固醇含量之功效。
實施例十、肝臟脂質過氧化物含量測定
測定方式:利用脂質過氧化時所產生之MDA(malondialdehyde),其會與TBA反應生成TBARS(TBA reactive
substance)之特性,測定脂質過氧化物含量。
TBARS測定方法:犧牲前述實施例九之採血完小鼠,取其肝臟組織。將組織均質後,以PBS清洗3次,接著加入適量體積的PBS,離心取其上清液。在該上清液中加入磷酸(phosphoric acid)混合均勻,接著加入TBA,並加熱至95℃、60分鐘。加熱完後冷卻離心,取上清液加入methanol-NaOH混合均勻,利用HPLC儀器檢測TBARS含量。
結果如第7圖所示,低、中、高劑量組之TBARS量皆低於控制組,表示猴頭菇固培萃取物具改善肝臟脂質過氧化之功效。
實施例十一、猴頭菇固培萃取物對抗氧化能力之影響
評估方式:以生物體中兩個重要之抗氧化酵素,超氧化物歧化酵素(superoxide dismutase,SOD)及過氧化氫酵素(catalase)的活性作為抗氧化生化指標,評估猴頭菇固培萃取物對抗氧化能力之影響。
超氧化物歧化酵素活性測試:取前述實施例十的組織均質液,加入ethanol/chloroform混合均勻,離心後取上清液,依序加入H2O、Tris buffer、待檢測樣品或SOD標準品、鄰苯三酚,混合均勻後,利用分光光度計檢測420nm吸光值,計算△OD/min,並對照標準品推算SOD活性。活性(specific activity)表示法:SOD IU/mg of protein。
過氧化氫酵素活性測試:取前述實施例十的組織均質液,加入ethanol/chloroform混合均勻,離心後取上清液,依序加入H2O、Tris buffer、saturated thymol、aminoantipyrine、待檢測樣品或過氧化氫酵素標準品、peroxidase、saturated thymol H2O2,混合均勻後,利用分光光度計檢測505nm吸光值,對照標準品吸光值曲線,計算出樣品中過氧化氫酵素活性。活性(specific activity)表示法:catalase nmol/min/ml。
結果如第8圖及第9圖所示,低、中、高劑量組之超氧化物歧化酵素及過氧化氫酵素的活性皆高於控制組,且結果與餵食劑量呈正相關,表示猴頭菇固培萃取物具增強肝臟抗氧化之功效。
實施例十二、腦部組織老化之生物活性指標測定
評估方式:以DNA損傷時所生成的8羥基-2’-去氧鳥嘌呤核苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)及脂質過氧化物含量作為腦部組織老化之生物活性指標,評估猴頭菇固培萃取物對腦部組織老化之影響。
腦部粒線體DNA之8-OHdG含量分析:犧牲前述實施例九之採血完小鼠,取其腦部組織。將腦部組織製備成樣品組織粒線體懸浮液,進行粒線體DNA萃取及DNA水解;將水解完之DNA樣品過濾(0.2μm HPLC濾膜)均勻混合進行分析8-OHdG含量。檢測樣品再以紫外線偵測器與電化學偵測器檢測之。
脂質過氧化物含量分析:犧牲實施例九之採血完小鼠,取其腦部組織,並以實施例十所述之TBARS測定方法測定該腦部組織的脂質過氧化物含量。
結果如第10圖及第11圖所示,在中、高劑量猴頭菇固培萃取物組之腦部組織的8-OHdG含量及TBARS量皆顯著低於控制組(p<0.05),表示猴頭菇固培萃取物可有效延緩腦部組織老化。
本發明所使用的猴頭菇固培萃取物為天然成分,副作用低,具有不會對攝食、飲水及體重產生影響,及不會對生體生化指標產生負面影響之優勢,且可降低血液中三酸甘油脂及總膽固醇含量。本發明解決了過去沒有人使用猴頭菇固培萃取物作為製備延緩老化及治療阿茲海默症之組合物的用途,並且達成以下之功效:1)促進神經細胞分化;2)減緩包含行為、外表、眼睛、脊柱等四個方面的老化現象;3)改善學習能力及記憶能力;4)增加抗氧化活性;5)減少過氧化物質產生,包含改善肝臟及腦部因活性氧物質(Reactive oxygen species,ROS)所引起的氧化損傷和減少脂質過氧化物的含量。
於本說明書較佳實施例揭示之內容,本發明所屬領域具有通常知識者可明顯得知前述實施例僅為例示;具本發明所屬技術領域通常知識者可藉由諸多變換、替換而實施,而不與本發明之技術特徵有所差異。依據說明書實施例,
本發明可有多種變換仍無礙於實施。本說明書提供之請求項界定本發明之範圍,該範圍涵蓋前述方法與結構及與其相等之發明。
上述多項功效,實屬充分符合新穎性及進步性之法定專利要件,爰依法提出申請,懇請 貴局核准本件發明專利申請案,以勵發明。
Claims (11)
- 一種猴頭菇固態培養萃取物用於製備延緩老化之組合物的用途,其係包含在該延緩老化之組合物中添加一有效量的猴頭菇固態培養萃取物,其中該猴頭菇固態培養萃取物之製備方法包含:步驟一、將猴頭菇在25-27℃條件下,培養於一固態培養基質中,得一猴頭菇固態培養菌絲體,其中該固態培養基質包含一五穀雜糧類及一營養液,該營養液包括一碳源及一氮源,該營養液的pH值介於5.5-6.0;步驟二、將該猴頭菇固態培養菌絲體以一醇類溶劑,在一溫度條件及一時間條件下進行萃取,所得之萃取物即為該猴頭菇固態培養萃取物;其中該猴頭菇寄存編號為BCRC 36470;該五穀雜糧類為選自於蕎麥、小麥、糙米、小米、薏仁、紅豆及黑豆所組成之群組;該五穀雜糧類與該營養液的重量比例介於1:1-2之間;該醇類溶劑為乙醇;該醇類溶劑的體積百分濃度為50-85%,該溫度條件為40-70℃,該時間條件為0.5-8小時;其中該有效量為32.52~48.78mg/kg BW。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該老化包含行為、外表、眼睛或脊柱的功能衰退。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該延緩老化係指促進神經細胞分化。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該延緩老化係指增強學習能力或增強記憶能力。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該延緩老化係指增加抗氧化能力。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該延緩老化係指降低DNA損傷或減少脂質過氧化。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該延緩老化係指降低血液中總膽固醇或三酸甘油脂含量。
- 一種延緩老化之組合物,其係包含一有效量之猴頭菇萃取物及一神經生長因子(NGF),該神經生長因子可與該猴頭菇萃取物產生促進神經分化之加成作用;其中該猴頭菇萃取物為猴頭菇固態培養萃取物,該猴頭菇固態培養萃取物之製備方法包含:步驟一、將猴頭菇在25-27℃條件下,培養於一固態培養基質中,得一猴頭菇固態培養菌絲體,其中該固態培養基質包含一五穀雜糧類及一營養液,該營養液包括一碳源及一氮源,該營養液的pH值介於5.5-6.0;步驟二、將該猴頭菇固態培養菌絲體以一醇類溶劑,在一溫度條件及一時間條件下進行萃取,所得之萃取物即為該猴頭菇固態培養萃取物,其中該猴頭菇寄存編號為BCRC 36470;該五穀雜糧類為選自於蕎麥、小麥、糙米、小米、薏仁、紅豆及黑豆所組成之群組;該五穀雜糧類與該營養液的重量比例介於1:1-2之間;該醇類溶劑為乙醇;該醇類溶劑的體積百分濃度為50-85%,該溫度條件為40-70℃,該時間條件為0.5-8小時;其中該猴頭菇固態培養萃取物的有效量為32.52~48.78mg/kg BW;該猴頭菇固態培養萃取物於組合物中的濃度為100μg/mL。
- 如申請專利範圍第8項所述之組合物,其中該組合物可進一步包括藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。
- 如申請專利範圍第8項所述之組合物,其中該組合物可進一步製成食品、健康食品、中草藥組合物或膳食補充品。
- 一種具延緩老化之功效的猴頭菇固態培養萃取物的製備方法,其係包含:步驟一、將猴頭菇在25-27℃條件下,培養於一固態培養基質中,得一猴頭菇固態培養菌絲體,其中該固態培養基質包含一五穀雜糧類及一營養液,該營養液包括一碳源及一氮源,該營養液的pH值介於5.5-6.0;步驟二、將該猴頭菇固態培養菌絲體以一醇類溶劑,在一溫度條件及一時間條件下進行萃取,所得之萃取物即為該猴頭菇固態培養萃取物;其中該猴頭菇寄存編號為BCRC 36470;該五穀雜糧類為選自於蕎麥、小麥、糙米、小米、薏仁、紅豆及黑豆所組成之群組;該五穀雜糧類與該營養液的重量比例介於1:1-2之間;該醇類溶劑為乙醇;該醇類溶劑的體積百分濃度為50-85%,該溫度條件為40-70℃,該時間條件為0.5-8小時。
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專書 林于箴碩士論文 ,《探討猴頭菇素A對餵食高油飲食之老化小鼠的神經保護》, 中原大學, 2016年, 上架日:2017/09/28 * |
專書 顏威揚。 猴頭菇固態發酵及其萃取物對斑馬魚腦細胞保護及修復之研究。 碩士論文,國立宜蘭大學食品科學系碩士班, 2015。 https://hdl.handle.net/11296/5gvt3x。 |
猴頭菇固態發酵及其萃取物對斑馬魚腦細胞保護及修復之研究 * |
碩士論文,國立宜蘭大學食品科學系碩士班, 2015 * |
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