CN104738635B

CN104738635B - 一种抗氧化的组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN104738635B
Application number: CN201510172823.7A
Authority: CN
Inventors: 陈海佳; 王飞; 王一飞; 葛啸虎; 程建强; 戴国胜; 舒辉萍
Original assignee: Guangzhou Saliai StemCell Science and Technology Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Saliai StemCell Science and Technology Co Ltd
Priority date: 2015-04-13
Filing date: 2015-04-13
Publication date: 2017-08-29
Anticipated expiration: 2035-04-13
Also published as: CN104738635A

Abstract

本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种抗氧化的组合物及其制备方法。该组合物将苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶与葡萄籽提取物进行复配后能够具有显著的抗氧化功能，实验表明，本发明提供的组合物的抗氧化效果显著优于单独使用超氧化物歧化酶或葡萄籽提取物，经为期3个月的人体试食试验研究，使用本发明组合物的人体内过氧化脂质下降4.96％、谷胱甘肽过氧化物酶升高12.97％，其效果显著优于单独使用SOD或葡萄籽提取物。并且，本发明提供的抗氧化软胶囊能够具有抗氧化的保健功能，经80例女性试用，其效果明显，认为有效的人达到91.66％。

Description

一种抗氧化的组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种抗氧化的组合物及其制备方法。

背景技术

人体衰老是一个生物学变化过程，由遗传基因和复杂的内外环境等多种因素相互作用引起，是生命周期中按照自然发展的规律发生在人体内、器官、组织细胞的形态和功能的变化过程，表现为一系列随时间增龄而显示的全身整体性、渐进性、衰退性和不可逆的集体变化和功能紊乱。研究认为，机体的衰老是生理性的，是机体生理学和解剖学方面出现衰退变化以及对体内外环境的适应能力下降和代偿力减退。

自由基学说认为：机体氧化衰老的原理之一，机体抗氧化防御系统中的各种抗氧化酶和小分子非酶抗氧化剂与自由基的产生在正常情况下处于动态平衡状态，研究发现机体随年龄的增长，自由基过剩或抗氧化剂缺乏时细胞膜中的不饱和脂肪酸被产生的自由基损害，引起脂质过氧化反应并对生物膜造成极大的破坏，使生物膜不饱和脂肪酸过氧化和膜功能受损双层结构得到破坏以及细胞器功能产生障碍，继而损伤蛋白质、脂质等生物大分子。在衰老有氧代谢过程中，由于自由基水平不断增加使机体的抗氧化能力下降，细胞毒性不同程度增加造成结构瞬间的不可逆改变损伤，环境外界刺激及线粒体、脂肪酸均可产生超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基等各种过氧化因子，可以触发生理性信号通路，诱导细胞内过氧化和细胞凋亡，加速推进衰老进程。最终，氧化衰老和细胞凋亡共同导致机体产生衰老相关的退行性疾病。

越来越多的研究显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同的健康问题。如果能够消除过多的氧化自由基，对于许多自由基引起的及老化相关疾病都能够预防。例如：医学研究已经发现氧化应激与临床上许多疾病的发生、发展相关而与年龄无关的渐进性退变。例如：常见的癌症、动脉硬化、糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆、关节炎等，这些疾病都被认为与自由基相关。

现有的抗氧化剂主要有SOD、原花青素等，其中：超氧化物歧化酶Orgotein(Superoxide Dismutase,SOD)，别名肝蛋白，是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。葡萄籽提取物的主要功效成分为“原花青素OPC”，具有良好的抗氧化效果，是维生素C和维生素E的50～70倍。超强的抗氧化效率具有清除自由基、提高人体免疫力的强力效果。但是，这些抗氧化剂作为保健品服用后效果却不甚显著。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种抗氧化的组合物及其制备方法。本发明提供的组合物具有显著的抗氧化功能。

本发明提供了一种抗氧化组合物，包括苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物。

其中，苹果干细胞具有良好的抗氧化功能，本发明将苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶与葡萄籽提取进行复配后能够具有显著的抗氧化功能，实验表明，本发明提供的组合物的抗氧化效果显著优于单独使用超氧化物歧化酶或葡萄籽提取物，经为期3个月的人体试食试验研究，使用本发明组合物的人体内过氧化脂质下降4.96％、谷胱甘肽过氧化物酶升高12.97％，其效果显著优于单独使用SOD或葡萄籽提取物。

在本发明实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为(10～20)：(8～15)：(8～15)。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为5：4：4。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为10：8：15。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为10：15：8。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为2：3：3。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为5：2：2。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为20：8：15。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为20：15：8。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为4：3：3。

本发明采用的葡萄籽提取物可为自制也可为市场直接购得，本发明对其不做限定，其实施皆在本发明的保护范围之内。

作为优选，葡萄籽提取物中原花青素的含量不低于95％。

本发明采用的苹果干细胞冻干粉可为市场购得也可采用本发明提供的方法制备，其实施皆在本发明的保护范围之内。作为优选，苹果干细胞冻干粉以本发明提供的方法制得，该方法以苹果新生枝条为原料，经诱导形成愈伤组织后增殖培养并扩大培养获得苹果干细胞，再冻干后制得。该苹果干细胞冻干后直接用于本发明提供组合物的制备，该冻干粉中黄酮和多酚类物质含量丰富。

苹果干细胞冻干粉的制备方法包括以下步骤：

步骤1：苹果新生枝条杀菌、去除木质部和髓后，接种于诱导培养基，诱导培养获得形成层细胞；

步骤2：所述形成层细胞经继代培养，接入增殖培养基，摇床培养获得单细胞；

步骤3：将所述单细胞接种于增殖培养基经扩大培养，获得苹果干细胞；

步骤4：将所述苹果干细胞反复冻融后冻干、粉碎，获得苹果干细胞冻干粉；

所述诱导培养基为含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固体培养基；

所述增殖培养基为含有2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液体培养基。

在本发明的实施例中，杀菌包括以下步骤：

步骤1：将苹果新生枝条以水冲洗后，以浓度为10～1000mg/L的L-抗坏血酸溶液浸泡；

步骤2：以体积分数为60％～95％的乙醇水溶液浸泡后以无菌水冲洗；

步骤3：以体积分数为10％～100％的过氧化氢水溶液浸泡后以无菌水冲洗。

作为优选，苹果新生枝条的长度为10cm。

作为优选，L-抗坏血酸的浓度为120mg/L。

优选的，步骤1中所述浸泡的时间为1min。

作为优选，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为75％。

优选的，步骤2中所述浸泡的时间为1min。

作为优选，步骤2中无菌水的体积为2L。

作为优选，过氧化氢水溶液中过氧化氢的体积分数为30％。

优选的，步骤3中所述浸泡的时间为20min。

优选的，步骤3中所述冲洗的时间为10min。

以本发明提供的杀菌方法对苹果新生枝条进行杀菌能够充分的杀除苹果新生枝条上所携带的真菌、细菌或病毒。以便保证苹果新生枝条在培养过程中不被干扰，从而保证苹果新生枝条上的细胞更加快速的去分化。而实验表明，本发明提供的方法能够有效将苹果新生枝条细胞去分化，经诱导和扩大培养，48天左右即可获得大量的苹果干细胞。

在本发明实施例中，NAA、BA和水解酪蛋白的质量比为0.5：2：1。

优选的，诱导培养基中NAA的浓度为0.5mg/L。

优选的，诱导培养基中BA的浓度为2.0mg/L。

优选的，诱导培养基中水解酪蛋白的浓度为1.0mg/L。

作为优选，诱导培养基为固体培养基，其中琼脂的质量分数为1％。

作为优选，诱导培养基的pH值为6.0。

在本发明的实施例中，步骤1中所述的接种为，每g去除木质部和髓的苹果新生枝条接种于10cm²的诱导培养基。

在一些实施例中，诱导培养为暗培养；温度为25℃；时间为10天。

经诱导培养后，形成层组织为均一生长的平板状组织，而其他组织则为不规则的聚集生长物。

在一些实施例中，继代培养为暗培养；温度为25℃；时间为10天。

在本发明的实施例中，继代培养采用遇到培养基，每g形成层细胞接种于10cm²的诱导培养基。

经10天的继代培养，形成层细胞形成愈伤组织，每10cm²的诱导培养基上约有愈伤组织20.8g。

一些实施例中，增殖培养基中，2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的质量比为2:1:1:1。

优选的，增殖培养基中2,4-D的浓度为2.0mg/L。

优选的，增殖培养基中BA的浓度为1.0mg/L。

优选的，增殖培养基中水解酪蛋白的浓度为1.0mg/L。

优选的，增殖培养基中活性炭的浓度为1.0mg/L。

作为优选，增殖培养基的pH值为6.0。

在本发明的实施例中，每g愈伤组织接入20mL增殖培养基。

作为优选，摇床培养时，增殖培养基中还添加经灭菌的直径为0.5cm的玻璃珠。

优选的，玻璃珠的添加量为100g/L增殖培养基。

实施例中，培养采用三角瓶，1000mL三角瓶中加入200mL增殖培养基。

在本发明的实施例中，摇床培养的条件为每小时用20W的白炽灯照射10min。

在一些实施例中，摇床培养的温度为25℃；转速为120转/分钟；时间为14天。

作为优选，在摇床培养7天后加入新鲜的增殖培养基。

作为优选，加入新鲜的增殖培养基的体积为原增殖培养基的2倍。

添加新鲜的增殖培养基后，其中细胞的密度为1×10⁵/ml。

采用本发明提供的方法进行摇床培养，愈伤组织成为单细胞悬液，细胞增殖速度较快，用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团、玻璃珠和残渣，获得细胞密度约0.5～1×10⁶/ml。

作为优选，步骤3中接种的密度为1×10⁴/ml。

在一些实施例中，扩大培养具体为：于20L的生物反应器中添加5L增殖培养基，培养7天后添加增殖培养基至细胞浓度为1×10⁵/ml，再培养7天。

本发明提供的抗氧化组合物的制备方法为，将苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物混合，制得抗氧化组合物。

本发明还提供了一种抗氧化保健品，包括本发明提供的抗氧化组合物。

本发明提供的抗氧化保健品还包括保健品中可接受的辅料。

本发明提供的抗氧化保健品的剂型为片剂或胶囊剂。

作为优选，片剂为咀嚼片；胶囊剂为软胶囊剂。

本发明提供了一种抗氧化软胶囊，包括本发明提供的抗氧化组合物、助悬剂和溶剂。

作为优选，助悬剂为蜂蜡；溶剂为大豆油。

其中，蜂蜡作为助悬剂，起到助悬作用；大豆油作为溶剂，是混悬液中的液相，与苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶(SOD)、葡萄籽提取物、蜂蜡制成软胶囊的内容物(混悬液)，使其均匀、稳定。

在本发明的实施例中，抗氧化软胶囊中，本发明提供的抗氧化组合物、助悬剂和溶剂的质量比为(26～50)：(2～3)：(50～60)。

在一些实施例中，抗氧化软胶囊中，本发明提供的抗氧化组合物、助悬剂和溶剂的质量比为38：2.5：55。

本发明提供的抗氧化软胶囊的制备方法为将本发明提供的抗氧化组合物粉碎后，与含有助悬剂的溶剂混合，经乳化后灌装，制得抗氧化软胶囊。

具体的，该方法为：将处方量的苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶(SOD)、葡萄籽提取物分别粉碎过120目筛网，蜂蜡用适量大豆油加热至65℃～70℃使其完全溶解，加入剩余的大豆油，并加入苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶(SOD)、葡萄籽提取物搅拌混合均匀，制成均质乳化物；通过软胶囊机将乳化物包裹于软胶囊囊皮中，经压制、定型、洗丸、低温干燥，制得抗氧化软胶囊。

作为优选，软胶囊胶皮中各组分的质量份为：

明胶38份～41份；

甘油19份～20份；

对羟基苯甲酸乙酯0份～0.05份；

纯化水38份～41份；

焦糖色0.03份～0.05份；

二氧化钛0.4份～0.6份。

作为优选，该软胶囊胶皮制备方法为：将甘油、纯化水、对羟基苯甲酸乙酯的乙醇溶液、焦糖色水溶液、二氧化钛，于65℃～80℃混合后，与明胶混合，经抽真空去除气泡，通过软胶囊机制备软胶囊囊皮。

本发明将苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶与葡萄籽提取进行复配后能够具有显著的抗氧化功能，实验表明，本发明提供的组合物的抗氧化效果显著优于单独使用超氧化物歧化酶或葡萄籽提取物，经为期3个月的人体试食试验研究，使用本发明组合物的人体内过氧化脂质下降4.96％、谷胱甘肽过氧化物酶升高12.97％，其效果显著优于单独使用SOD或葡萄籽提取物。并且，本发明提供的抗氧化软胶囊能够具有抗氧化的保健功能，经80例女性试用，其效果明显，认为有效的人达到91.66％。

具体实施方式

本发明提供了一种抗氧化的组合物及其制备方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。其中，葡萄籽提取物购自天津市尖峰天然产物研究开发有限公司。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1苹果干细胞冻干粉的制备

1、培养基的配方：

1.1诱导培养基：MS固体培养基+NAA0.5mg/L+BA 2mg/L+CH 1mg/L，pH值为6.0；

1.2增殖培养基：MS液体培养基+2,4-D 2.0mg/L+BA 1.0mg/L+CH1.0mg/L+AC1.0mg/L，pH值为6.0；

2、苹果枝条的杀菌

选择无化肥农药污染、绿色种植的苹果树，按照一定的评判标准挑选10支10cm长新生枝条；用无菌水2L洗涤新生枝条表面附着物；将新生枝条放进120mg/L L-抗坏血酸中浸泡1分钟；将新生枝条放入75％的乙醇溶液中杀菌1分钟，用2L无菌水冲洗干净；再放入30％的过氧化氢溶液中杀菌20分钟，并用无菌水冲洗10分钟。

3、形成层组织的诱导

将灭菌的苹果新生枝条用接种刀剥离形成层、韧皮部、皮质和表皮等组织，丢弃木质部和髓；将获得的组织接种至新鲜的固体培养基中，以每1g组织接种10cm²固体培养基的密度进行接种，在受控的暗室内25℃连续培养10天，获得形成层组织。

4、继代培养形成层组织

将再生的形成层组织与其他组织分离开；以每1g组织接种10cm²固体培养基的密度，将再生的形成层组织接种至新鲜的固体培养基中，在受控的暗室内25℃连续培养10天，获得愈伤组织。

5、单细胞培养

在1000ml三角瓶中加入200ml液体培养基、灭菌处理的20g、直径0.5cm的玻璃珠；将10g愈伤组织转移到三角瓶中；将三角瓶置于25℃、120转/分钟的摇床上进行培养，每小时用20W的白炽灯照射10分钟；第7天，加入400ml新鲜的液体培养基至细胞密度为其中细胞的密度为1×10⁵/ml，然后继续培养7天；培养后用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团、玻璃珠和残渣，得到单细胞悬液，

6、放大培养

将单细胞悬液转移至20L生物反应器中进行大规模培养，生物反应器中容纳5L的增殖培养基。培养第7天时，加入10L的新鲜液体培养基，继续培养后获得细胞悬液。

7、冻干粉的制备

苹果干细胞悬液用1um过滤器过滤，去掉培养基，收获截留的黏胶状细胞取出；将细胞放入-30℃的冰箱内预冻3小时；放入液氮罐中超低温速冻2小时；取出解冻30分钟后，再放入-30℃冰箱内预冻和液氮罐内速冻，依次2遍；将细胞取出，室温下维持10分钟，入低温冷冻真空干燥机内，真空冷冻干燥后，高速粉碎成60目冻干粉。

实施例2抗氧化组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、SOD 80g、葡萄籽提取物80g，分别进行粉碎、过120目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例3抗氧化组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、SOD 80g、葡萄籽提取物150g，分别进行粉碎、过120目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例4抗氧化组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、SOD 150g、葡萄籽提取物80g，分别进行粉碎、过120目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例5抗氧化组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、SOD 150g、葡萄籽提取物150g，分别进行粉碎、过120目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例6抗氧化组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、SOD 40g、葡萄籽提取物40g，分别进行粉碎、过120目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例7抗氧化组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、SOD 40g、葡萄籽提取物60g，分别进行粉碎、过120目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例8抗氧化组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、SOD 75g、葡萄籽提取物40g，分别进行粉碎、过120目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例9抗氧化组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、SOD 75g、葡萄籽提取物75g，分别进行粉碎、过120目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例10抗氧化软胶囊的制备

蜂蜡25g用50g大豆油加热至65℃～70℃使其完全溶解，加入500g大豆油、实施例2提供的组合物380g搅拌混合均匀，用乳化胶体磨研磨成均质乳化物；通过软胶囊机将乳化物包裹于软胶囊囊皮中，压制成具有一定形状的软胶囊，经过定型、洗丸、低温干燥等工艺，使软胶囊外观、硬度符合规定要求；将软胶囊分装于具有一定规格的内包材中，即制得抗氧化软胶囊。

其中，软胶囊胶皮配方如下：

明胶38-41份

甘油19-20份

对羟基苯甲酸乙酯0-0.05份

纯化水38-41份

焦糖色0.03-0.05份

二氧化钛0.4-0.6份

软胶囊胶皮制备方法如下

按照配方量称取上述物料，将甘油、纯化水、对羟基苯甲酸乙酯(用适量乙醇溶解)、焦糖色(用适量纯化水溶解)、二氧化钛投入化胶罐中，加热搅拌升温至65-80℃，投入明胶，保温(65-80℃)搅拌使其完全溶解，抽真空除气泡，符合要求后出料至保温桶中，用输胶管将保温桶出料口连接到软胶囊机上，通过软胶囊机制备软胶囊囊皮。

实施例11抗氧化软胶囊的制备

蜂蜡20g用50g大豆油加热至65℃～70℃使其完全溶解，加入500g大豆油、实施例3提供的组合物380g搅拌混合均匀，用乳化胶体磨研磨成均质乳化物；通过软胶囊机将乳化物包裹于软胶囊囊皮中，压制成具有一定形状的软胶囊，经过定型、洗丸、低温干燥等工艺，使软胶囊外观、硬度符合规定要求；将软胶囊分装于具有一定规格的内包材中，即制得抗氧化软胶囊。

实施例12抗氧化软胶囊的制备

蜂蜡30g用50g大豆油加热至65℃～70℃使其完全溶解，加入550g大豆油、实施例4提供的组合物500g搅拌混合均匀，用乳化胶体磨研磨成均质乳化物；通过软胶囊机将乳化物包裹于软胶囊囊皮中，压制成具有一定形状的软胶囊，经过定型、洗丸、低温干燥等工艺，使软胶囊外观、硬度符合规定要求；将软胶囊分装于具有一定规格的内包材中，即制得具有抗氧化软胶囊。

实施例13抗氧化软胶囊的制备

蜂蜡23g用50g大豆油加热至65℃～70℃使其完全溶解，加入550g大豆油、实施例5提供的组合物450g搅拌混合均匀，用乳化胶体磨研磨成均质乳化物；通过软胶囊机将乳化物包裹于软胶囊囊皮中，压制成具有一定形状的软胶囊，经过定型、洗丸、低温干燥等工艺，使软胶囊外观、硬度符合规定要求；将软胶囊分装于具有一定规格的内包材中，即制得具有抗氧化软胶囊。

实施例14抗氧化片剂的制备

取实施例6提供的组合物77g、微晶纤维素21g、甘露醇1g分别过80目筛，混合均匀，用40％乙醇溶液制软材(40％乙醇的加入量以软材手握成团、轻压即散为宜)，16目筛制粒，干燥，12目筛整粒，加入阿司巴甜0.5g、苹果香精0.7g，混合均匀，压片，即得。

实施例15抗氧化片剂的制备

取实施例7提供的组合物77g、微晶纤维素21g、甘露醇1g分别过80目筛，混合均匀，用40％乙醇溶液制软材(40％乙醇的加入量以软材手握成团、轻压即散为宜)，16目筛制粒，干燥，12目筛整粒，加入阿司巴甜0.5g、苹果香精0.7g，混合均匀，压片，即得。

实施例16抗氧化片剂的制备

取实施例8提供的组合物77g、微晶纤维素21g、甘露醇1g分别过80目筛，混合均匀，用40％乙醇溶液制软材(40％乙醇的加入量以软材手握成团、轻压即散为宜)，16目筛制粒，干燥，12目筛整粒，加入阿司巴甜0.5g、苹果香精0.7g，混合均匀，压片，即得。

实施例17抗氧化片剂的制备

取实施例9提供的组合物77g、微晶纤维素21g、甘露醇1g分别过80目筛，混合均匀，用40％乙醇溶液制软材(40％乙醇的加入量以软材手握成团、轻压即散为宜)，16目筛制粒，干燥，12目筛整粒，加入阿司巴甜0.5g、苹果香精0.7g，混合均匀，压片，即得。

对比例1对照品1的制备

蜂蜡25g用50g大豆油加热至65℃～70℃使其完全溶解，加入500g大豆油、葡萄籽提取物380g搅拌混合均匀，用乳化胶体磨研磨成均质乳化物；通过软胶囊机将乳化物包裹于软胶囊囊皮中，压制成具有一定形状的软胶囊，经过定型、洗丸、低温干燥等工艺，使软胶囊外观、硬度符合规定要求；将软胶囊分装于具有一定规格的内包材中，即制得对照品1。

对比例2对照品2的制备

蜂蜡25g用50g大豆油加热至65℃～70℃使其完全溶解，加入500g大豆油、SOD380g搅拌混合均匀，用乳化胶体磨研磨成均质乳化物；通过软胶囊机将乳化物包裹于软胶囊囊皮中，压制成具有一定形状的软胶囊，经过定型、洗丸、低温干燥等工艺，使软胶囊外观、硬度符合规定要求；将软胶囊分装于具有一定规格的内包材中，即制得对照品2。

对比例3对照品3的制备

蜂蜡25g用50g大豆油加热至65℃～70℃使其完全溶解，加入500g大豆油、苹果干细胞冻干粉380g搅拌混合均匀，用乳化胶体磨研磨成均质乳化物；通过软胶囊机将乳化物包裹于软胶囊囊皮中，压制成具有一定形状的软胶囊，经过定型、洗丸、低温干燥等工艺，使软胶囊外观、硬度符合规定要求；将软胶囊分装于具有一定规格的内包材中，即制得对照品3。

实施例18抗氧化胶囊剂的效果检测

采用卫生部《保健食品检验与评价技术规范》2003年版，对实施例10～11和对比例1～3制备的抗氧化胶囊剂进行了为期3个月的人体试食试验研究。检验评价受试者试食前、试食后过氧化脂质(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)功效指标，结果如表1～2：

表1试食品对过氧化脂质(MDA)nmol·ml^-1的影响()

分组	人数n	试食前	试食后	下降百分率/％
					实施例10	20	4.30±0.59	4.09±0.63	4.88^a
实施例11	20	4.37±0.55	4.15±0.58	5.03^a
					对比例1	9	4.28±0.56	4.18±0.67	2.34^b
对比例2	8	4.31±0.62	4.25±0.61	1.39^c
					对比例3	10	4.41±0.52	4.30±0.60	2.49^b

注：同列肩标不同字母示有显著差异(P﹤0.05)

表2试食品对谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)(酶活力)的影响()

分组	人数n	试食前	试食后	升高百分率/％
					实施例10	20	149.69±30.72	170.56±28.36	13.94^a
实施例11	20	155.69±28.13	174.37±24.36	12.00^b
					对比例1	9	152.12±23.95	160.55±31.28	5.54^d
对比例2	7	150.52±25.22	156.96±35.83	4.28^e
					对比例3	10	143.35±26.24	152.95±27.91	6.70^c

注：同列肩标不同字母示有显著差异(P﹤0.05)

讨论：经上述对比试验证明本品具有显著的抗氧化(延缓衰老)的保健功能。

实施例18抗氧化胶囊剂的效果调查

随机选取133位女性志愿者，年龄为28-55岁，均为面颊有色斑，脸色晦暗，或有粉刺，皮肤粗糙等衰老症状的人群。随机分成四组，分别服用实施例10、实施例11、对比例1～3提供的软胶囊，具体为：80例有上述症状28～55岁女性服用实施例10～11提供的软胶囊，早晚各服用一次，每次0.8g，30天为一疗程。

53例有上述症状28-55岁女性服用对比例1～3提供的软胶囊，早晚各服用一次，每次0.5g，30天为一疗程。

效果评定标准如下：

效果很好：面颊色斑明显消退，肌肤细腻红润，较以前富有弹性。

效果明显：面颊色斑变淡，脸色较红润有光。

效果可见：改善皮肤粗糙及粉刺，肌肤较以前有弹性。

无效：看不出有任何改变。

对比效果调查结果如表3：

表3：抗氧化效果调查结果

结果显示，本发明提供的软胶囊的效果优于对比例提供的软胶囊的效果，对本发明其他实施例提供的软胶囊的检测结果与此相似。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种抗氧化组合物，其特征在于，由苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物组成；

其中苹果干细胞冻干粉的制备方法包括以下步骤：

所述诱导培养基为含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固体培养基；

所述增殖培养基为含有2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液体培养基；

苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为(10～20)：(8～15)：(8～15)。

2.根据权利要求1所述的抗氧化组合物，其特征在于，苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的质量比为5：4：4。

3.如权利要求1～2任一项所述的抗氧化组合物的制备方法，其特征在于，将苹果干细胞冻干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物混合，制得抗氧化组合物。

4.一种抗氧化保健品，其特征在于，包括权利要求1～2任一项所述的组合物。

5.一种抗氧化软胶囊，其特征在于，包括权利要求1～2任一项所述的组合物、助悬剂和溶剂。

6.根据权利要求5所述的抗氧化软胶囊，其特征在于，所述助悬剂为蜂蜡；所述溶剂为大豆油。

7.根据权利要求5所述的抗氧化软胶囊，其特征在于，所述权利要求1～2任一项所述的组合物、助悬剂和溶剂的质量比为(26～50)：(2～3)：(50～60)。

8.如权利要求5～7任一项所述的抗氧化软胶囊的制备方法，其特征在于，将权利要求1～2任一项所述的组合物粉碎后，与含有助悬剂的溶剂混合，经乳化后灌装，制得抗氧化软胶囊。