CN104825575B - 一种抗辐射组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种抗辐射组合物及其制备方法。本发明将苹果干细胞冻干粉、茶多酚与番茄红素进行复配后能够具有显著的抗辐射功能，实验表明，本发明提供的组合物的抗辐射效果显著优于单独使用各组分的作用，经30天内多次辐照小鼠睾丸染色体畸变情况测试显示，空白对照组的畸变细胞率为21.0％，而采用本发明提供的组合物能够将畸变细胞率降至5.33％，其效果显著优于单独使用苹果干细胞或茶多酚与番茄红素。而经30天内多次辐照小鼠骨髓细胞微核实验情况显示，空白对照组的微核率为0.2％，而采用本发明提供的组合物能够将微核率提升至1.57％，其效果显著优于单独使用苹果干细胞或茶多酚与番茄红素。
Description
技术领域
本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种抗辐射组合物及其制备方法。
背景技术
随着社会发展，环境辐射污染的问题也越来越突出，日常生活中受到的环境辐射污染主要有：1)电磁环境辐射污染，日常生产生活中常用的设施设备，例如，胸透检测机，虽然对人体体内检测起到很大的帮助，但是其检测过程中泄漏的电磁强烈且量大，对周围环境的影响也是不可忽视。2)水质辐射超标，由于很多重金属工业选址不科学，产生的重金属废物都会不经处理直接排进河流，导致水质辐射严重超标，有研究表明，与重金属相关工厂周边区域的居民患恶性肿瘤、儿童先天畸形的情况有明显上升的趋势。3)核电站或核实验场地，核电站会产生大量的核废料，具有极高的辐射值，对人体产生极大危害。日本福岛核电站泄漏，周边的海水放射性浓度达到国家法定限度的24.8倍，且该浓度值一年内不会降到安全水平。
当今越来越突出的亚健康问题，与环境辐射污染有十分密切的关系。在辐射损伤中，机体产生大量的自由基，这些自由基系含有未成对电子的原子或原子团。在正常的生命过程中，自由基为维持生命所必需，但自由基也是细胞和生物组织危险的杀手。正常的生理情况下，体内自由基不断产生，但也不断地被清除，使之维持在一个正常生理水平，过多或避少都会给机体造成损伤。而长时间受到辐射所产生的自由基急剧增加，破坏体内的氧化应激系统的平衡，导致处于亚健康状态。研究表明，机体氧化应激系统的平衡被破坏可能是形成躯体亚健康主要机制之一。亚健康所导致的危害巨大：大多数恶性肿瘤、心脑血管疾病和糖尿病等是由亚健康人群转入；机体处于亚健康状态会影响正常的生活、学习及工作。通过清除这些自由基，而达到减轻和消除辐射带来的损伤。
现有技术认为，番茄红素、β胡萝卜素、多糖类物质、多酚类、黄酮类、维生素、硒、胶原弹性物质等能够具有抗辐射的功能。而市售的保健品中也多以富含这些物质的原料加工而成，但是，虽然这些抗辐射保健品的配方各有不同，其抗辐射的效果并不理想，多数人群服用后表示感受不到效果。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种抗辐射组合物及其制备方法，本发明提供的抗辐射组合物能够具有显著的抗辐射效果。
本发明提供了一种抗辐射组合物，包括苹果干细胞冻干粉、茶多酚和番茄红素。
其中，苹果干细胞不仅可以快速激活机体内休眠的干细胞，而且还能积极修复受损的干细胞，刺激人类角质细胞和纤维母细胞的增生，增加皮肤弹性，具有抗衰老和美容生发的奇效。苹果干细胞具有植物干细胞的特性：强大的抗氧化和抗衰老活性，能显著提高人体免疫力和抗癌能力。
茶多酚的化学结构特点决定其具有极强的清除自由基的能力，它的氧化还原电位低，其多邻位酚羟基可提供氢中断或终止自由基的链式反应。同时，茶多酚可激活自由基的清除体系，并可通过抑制氧化酶系、络合诱导氧化的过渡金属离子来抑制自由基的产生可通过清除自由基，调节基因表达及蛋白合成等途径来发挥抗辐射作用，是天然高效抗氧化剂。
番茄红素(lycopene)是类胡萝卜素的一种，广泛存在于自然界中，作为一种功能性天然色素，具有抗氧化生理活性，其抗氧化作用主要表现在它能淬灭单线态氧和清除自由基。
其中，苹果干细胞具有良好的清除自由基的功能，本发明将苹果干细胞冻干粉、茶多酚与番茄红素进行复配后能够具有显著的抗辐射功能，实验表明，本发明提供的组合物的抗辐射效果显著优于单独使用各组分的作用，经30天内多次辐照小鼠睾丸染色体畸变情况测试显示，空白对照组的畸变细胞率为21.0％，而采用本发明提供的组合物能够将畸变细胞率降至5.33％，其效果显著优于单独使用苹果干细胞或茶多酚与番茄红素。而经30天内多次辐照小鼠骨髓细胞微核实验情况显示，空白对照组的微核率为0.2％，而采用本发明提供的组合物能够将微核率提升至1.57％，其效果显著优于单独使用苹果干细胞或茶多酚与番茄红素。
在本发明实施例中，苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为(20～30)：(20～30)：(0.6～2)。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为20：20：0.6。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为10：10：1。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为20：30：0.6。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为10：15：1。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为30：20：0.6。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为15：10：1。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为30：30：0.6。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为15：15：1。
在一些实施例中，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为25：25：1.3。
本发明采用的苹果干细胞冻干粉可为市场购得也可采用本发明提供的方法制备，其实施皆在本发明的保护范围之内。作为优选，苹果干细胞冻干粉以本发明提供的方法制得，该方法以苹果新生枝条为原料，经诱导形成愈伤组织后增殖培养并扩大培养获得苹果干细胞，再冻干后制得。该苹果干细胞冻干后直接用于本发明提供组合物的制备，该冻干粉中黄酮和多酚类物质含量丰富。
苹果干细胞冻干粉的制备方法包括以下步骤：
步骤1：苹果新生枝条杀菌、去除木质部和髓后，接种于诱导培养基，诱导培养获得形成层细胞；
步骤2：所述形成层细胞经继代培养，接入增殖培养基，摇床培养获得单细胞；
步骤3：将所述单细胞接种于增殖培养基经扩大培养，获得苹果干细胞；
步骤4：将所述苹果干细胞反复冻融后冻干、粉碎，获得苹果干细胞冻干粉；
所述诱导培养基为含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固体培养基；
所述增殖培养基为含有2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液体培养基。
在本发明的实施例中，杀菌包括以下步骤：
步骤1：将苹果新生枝条以水冲洗后，以浓度为10～1000mg/L的L-抗坏血酸溶液浸泡；
步骤2：以体积分数为60％～95％的乙醇水溶液浸泡后以无菌水冲洗；
步骤3：以体积分数为10％～100％的过氧化氢水溶液浸泡后以无菌水冲洗。
作为优选，苹果新生枝条的长度为10cm。
作为优选，L-抗坏血酸的浓度为120mg/L。
优选的，步骤1中所述浸泡的时间为1min。
作为优选，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为75％。
优选的，步骤2中所述浸泡的时间为1min。
作为优选，步骤2中无菌水的体积为2L。
作为优选，过氧化氢水溶液中过氧化氢的体积分数为30％。
优选的，步骤3中所述浸泡的时间为20min。
优选的，步骤3中所述冲洗的时间为10min。
以本发明提供的杀菌方法对苹果新生枝条进行杀菌能够充分的杀除苹果新生枝条上所携带的真菌、细菌或病毒。以便保证苹果新生枝条在培养过程中不被干扰，从而保证苹果新生枝条上的细胞更加快速的去分化。而实验表明，本发明提供的方法能够有效将苹果新生枝条细胞去分化，经诱导和扩大培养，48天左右即可获得大量的苹果干细胞。
在本发明实施例中，NAA、BA和水解酪蛋白的质量比为0.5：2：1。
优选的，诱导培养基中NAA的浓度为0.5mg/L。
优选的，诱导培养基中BA的浓度为2.0mg/L。
优选的，诱导培养基中水解酪蛋白的浓度为1.0mg/L。
作为优选，诱导培养基为固体培养基，其中琼脂的质量分数为1％。
作为优选，诱导培养基的pH值为6.0。
在本发明的实施例中，步骤1中所述的接种为，每g去除木质部和髓的苹果新生枝条接种于10cm2的诱导培养基。
在一些实施例中，诱导培养为暗培养；温度为25℃；时间为10天。
经诱导培养后，形成层组织为均一生长的平板状组织，而其他组织则为不规则的聚集生长物。
在一些实施例中，继代培养为暗培养；温度为25℃；时间为10天。
在本发明的实施例中，继代培养采用遇到培养基，每g形成层细胞接种于10cm2的诱导培养基。
经10天的继代培养，形成层细胞形成愈伤组织，每10cm2的诱导培养基上约有愈伤组织20.8g。
一些实施例中，增殖培养基中，2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的质量比为2:1:1:1。
优选的，增殖培养基中2,4-D的浓度为2.0mg/L。
优选的，增殖培养基中BA的浓度为1.0mg/L。
优选的，增殖培养基中水解酪蛋白的浓度为1.0mg/L。
优选的，增殖培养基中活性炭的浓度为1.0mg/L。
作为优选，增殖培养基的pH值为6.0。
在本发明的实施例中，每g愈伤组织接入20mL增殖培养基。
作为优选，摇床培养时，增殖培养基中还添加经灭菌的直径为0.5cm的玻璃珠。
优选的，玻璃珠的添加量为100g/L增殖培养基。
实施例中，培养采用三角瓶，1000mL三角瓶中加入200mL增殖培养基。
在本发明的实施例中，摇床培养的条件为每小时用20W的白炽灯照射10min。
在一些实施例中，摇床培养的温度为25℃；转速为120转/分钟；时间为14天。
作为优选，在摇床培养7天后加入新鲜的增殖培养基。
作为优选，加入新鲜的增殖培养基的体积为原增殖培养基的2倍。
添加新鲜的增殖培养基后，其中细胞的密度为1×105/ml。
采用本发明提供的方法进行摇床培养，愈伤组织成为单细胞悬液，细胞增殖速度较快，用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团、玻璃珠和残渣，获得细胞密度约0.5～1×106/ml。
作为优选，步骤3中接种的密度为1×104/ml。
在一些实施例中，扩大培养具体为：于20L的生物反应器中添加5L增殖培养基，培养7天后添加增殖培养基至细胞浓度为1×105/ml，再培养7天。
本发明提供的抗辐射组合物的制备方法，将苹果干细胞冻干粉、茶多酚和番茄红素混合，制得抗辐射组合物。
本发明还提供了一种抗辐射保健品，包括本发明提供的抗辐射组合物。
本发明提供的抗辐射保健品还包括保健品中可接受的辅料。
本发明提供的抗辐射保健品的剂型为片剂或胶囊剂。
作为优选，片剂为咀嚼片或普通压制片。
作为优选，胶囊剂为软胶囊或普通胶囊剂。
本发明提供了一种抗辐射胶囊，包括本发明提供的抗辐射组合物、润滑剂和崩解剂。
作为优选，润滑剂为硬脂酸镁；崩解剂为淀粉、交联羧甲基纤维素纳或交联聚维酮。
崩解剂可用来填充制剂的体积，以便于制剂成型，且能促使制剂在胃肠道中迅速崩解成小粒子的辅料，润滑剂能够降低制备过程中药物与胶囊填充机中冲模孔壁之间摩擦力的物质。
本发明的实施例中，抗辐射胶囊中，本发明提供的抗辐射组合物、崩解剂和润滑剂的质量比为(40.6～62)：(40～50)：0.5。
在一些实施例中，抗辐射胶囊中，本发明提供的抗辐射组合物、崩解剂和润滑剂的质量比为51.3：45：0.5。
本发明提供的抗辐射胶囊的制备方法为将本发明提供的抗辐射组合物粉碎后，与崩解剂和润滑剂混合，填充胶囊，制得抗辐射胶囊。
本发明将苹果干细胞冻干粉、茶多酚与番茄红素进行复配后能够具有显著的抗辐射功能，实验表明，本发明提供的组合物的抗辐射效果显著优于单独使用各组分的作用，经30天内多次辐照小鼠睾丸染色体畸变情况测试显示，空白对照组的畸变细胞率为21.0％，而采用本发明提供的组合物能够将畸变细胞率降至5.33％，其效果显著优于单独使用苹果干细胞或茶多酚与番茄红素。而经30天内多次辐照小鼠骨髓细胞微核实验情况显示，空白对照组的微核率为0.2％，而采用本发明提供的组合物能够将微核率提升至1.57％，其效果显著优于单独使用苹果干细胞或茶多酚与番茄红素。
具体实施方式
本发明提供了一种抗辐射组合物及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1苹果干细胞冻干粉的制备
1、培养基的配方：
1.1诱导培养基：MS固体培养基+NAA0.5mg/L+BA 2mg/L+CH 1mg/L，pH值为6.0；
1.2增殖培养基：MS液体培养基+2,4-D 2.0mg/L+BA 1.0mg/L+CH1.0mg/L+AC1.0mg/L，pH值为6.0；
2、苹果枝条的杀菌
选择无化肥农药污染、绿色种植的苹果树，按照一定的评判标准挑选10支10cm长新生枝条；用无菌水2L洗涤新生枝条表面附着物；将新生枝条放进120mg/L L-抗坏血酸中浸泡1分钟；将新生枝条放入75％的乙醇溶液中杀菌1分钟，用2L无菌水冲洗干净；再放入30％的过氧化氢溶液中杀菌20分钟，并用无菌水冲洗10分钟。
3、形成层组织的诱导
将灭菌的苹果新生枝条用接种刀剥离形成层、韧皮部、皮质和表皮等组织，丢弃木质部和髓；将获得的组织接种至新鲜的固体培养基中，以每1g组织接种10cm2固体培养基的密度进行接种，在受控的暗室内25℃连续培养10天，获得形成层组织。
4、继代培养形成层组织
将再生的形成层组织与其他组织分离开；以每1g组织接种10cm2固体培养基的密度，将再生的形成层组织接种至新鲜的固体培养基中，在受控的暗室内25℃连续培养10天，获得愈伤组织。
5、单细胞培养
在1000ml三角瓶中加入200ml液体培养基、灭菌处理的20g、直径0.5cm的玻璃珠；将10g愈伤组织转移到三角瓶中；将三角瓶置于25℃、120转/分钟的摇床上进行培养，每小时用20W的白炽灯照射10分钟；第7天，加入400ml新鲜的液体培养基至细胞密度为其中细胞的密度为1×105/ml，然后继续培养7天；培养后用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团、玻璃珠和残渣，得到单细胞悬液，
6、放大培养
将单细胞悬液转移至20L生物反应器中进行大规模培养，生物反应器中容纳5L的增殖培养基。培养第7天时，加入10L的新鲜液体培养基，继续培养后获得细胞悬液。
7、冻干粉的制备
苹果干细胞悬液用1um过滤器过滤，去掉培养基，收获截留的黏胶状细胞取出；将细胞放入-30℃的冰箱内预冻3小时；放入液氮罐中超低温速冻2小时；取出解冻30分钟后，再放入-30℃冰箱内预冻和液氮罐内速冻，依次2遍；将细胞取出，室温下维持10分钟，入低温冷冻真空干燥机内，真空冷冻干燥后，高速粉碎成60目冻干粉。
实施例2抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉100g、茶多酚100g、番茄红素3g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例3抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉100g、茶多酚100g、番茄红素10g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例4抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉100g、茶多酚150g、番茄红素3g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例5抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉100g、茶多酚150g、番茄红素10g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例6抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉150g、茶多酚100g、番茄红素3g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例7抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉150g、茶多酚100g、番茄红素10g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例8抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉150g、茶多酚150g、番茄红素3g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例9抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉150g、茶多酚150g、番茄红素10g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例10抗辐射组合物的制备
先将苹果干细胞冻干粉150g、茶多酚150g、番茄红素7.8g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，番茄红素和茶多酚进行普通研磨)，过30目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
实施例11抗辐射胶囊的制备
将实施例2制得的抗辐射组合物203g、淀粉200g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例12抗辐射胶囊的制备
将实施例9制得的抗辐射组合物310g、交联羧甲基纤维素纳300g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例13抗辐射胶囊的制备
将实施例5制得的抗辐射组合物260g、交联聚维酮228g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例14抗辐射胶囊的制备
将实施例3制得的抗辐射组合物210g、淀粉225g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例15抗辐射胶囊的制备
将实施例4制得的抗辐射组合物253g、交联羧甲基纤维素纳240g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例16抗辐射胶囊的制备
将实施例6制得的抗辐射组合物253g、交联聚维酮245g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例17抗辐射胶囊的制备
将实施例7制得的抗辐射组合物260g、交联聚维酮230g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例18抗辐射胶囊的制备
将实施例8制得的抗辐射组合物303g、交联羧甲基纤维素纳245g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例19抗辐射胶囊的制备
将实施例10制得的抗辐射组合物307.8g、淀粉225g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
对比例1对照样品1的制备
将苹果干细胞冻干粉307.8g、淀粉225g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
对比例2对照样品2的制备
将茶多酚307.8g、淀粉225g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
对比例3对照样品3的制备
将番茄红素307.8g、淀粉225g和硬脂酸镁2.5g，放进混合机中混合均匀。选取0号胶囊，用全自动胶囊填充机进行填充，每颗胶囊含0.5g粉末。
实施例20小鼠睾丸染色体畸变试验
选取96只雄性清洁级昆明小鼠，适应性饲养5天，随机分成8组，即空白对照组，对照组1～3、阳性对照组、实验组1～3，每组12只。
用金龙鱼食用调和油溶解本发明提供的保健品胶囊内容物和对照样品，浓度为0.10mg/ml，给小鼠灌胃，。
其中，实验组1将本发明实施例19提供的保健品胶囊内容物溶解，根据小鼠体重，按1mL/kg溶解物进行灌胃。
实验组2将本发明实施例19提供的保健品胶囊内容物溶解，根据小鼠体重，按4mL/kg溶解物进行灌胃。
实验组3将本发明实施例19提供的保健品胶囊内容物溶解，根据小鼠体重，按9mL/kg溶解物进行灌胃。
对照组1将对比例1制备的胶囊剂内容物溶解至浓度为0.1mg/mL，根据小鼠体重，按4mL/kg溶解物进行灌胃。
对照组2将对比例2制备的胶囊剂内容物溶解至浓度为0.1mg/mL，根据小鼠体重，按4mL/kg溶解物进行灌胃。
对照组3将对比例3制备的胶囊剂内容物溶解至浓度为0.1mg/mL，根据小鼠体重，按4mL/kg溶解物进行灌胃。
阳性对照组和空白对照组不灌胃。
连续灌胃30天，每天一次。除空白对照组外，其余7组在灌胃第7天，14天，21天，28天给予X线全身照射。照射条件：照射距离1m，单次剂量300cGy。
灌胃的第30天，脱颈椎处死小鼠，处死动物前6h，按5mg/kg腹腔注射秋水仙碱。取两侧睾丸，去净脂肪放进1％柠檬酸三钠低渗液中，经甲醇-冰乙酸固定，吉姆萨(Giemsa)染色制片。
在光学显微镜下观察，每只动物计数100个中期染色体细胞，观察染色体畸变细胞率、染色体结构的改变，以及染色体单价体。
实验结果如表1所示：
表1 30天内多次辐照小鼠睾丸染色体畸变情况
注：*对照组1与实验组2畸变细胞率对比
**对照组2与实验组2畸变细胞率对比
***对照组3与实验组2畸变细胞率对比
苹果干细胞胶囊实验组小鼠睾丸细胞染色体畸变率与对照组有显著性差异(P<0.01)，实验组畸变细胞率均低于对照组。相同剂量下，实验组2的畸变细胞率仅有对照组1的二分之一，是对照组2和3的一半以下。采用本发明其他实施例制得的抗辐射胶囊的实验结果与此相似。
实施例21小鼠骨髓细胞微核试验
选取96只雄性清洁级昆明小鼠，适应性饲养5天，随机分成8组，即空白对照组，对照组1～3、阳性对照组、实验组1～3，每组12只。
用金龙鱼食用调和油溶解本发明提供的保健品胶囊内容物和对照样品，浓度为0.10mg/ml，给小鼠灌胃，。
其中，实验组1将本发明实施例19提供的保健品胶囊内容物溶解，根据小鼠体重，按1mL/kg溶解物进行灌胃。
实验组2将本发明实施例19提供的保健品胶囊内容物溶解，根据小鼠体重，按4mL/kg溶解物进行灌胃。
实验组3将本发明实施例19提供的保健品胶囊内容物溶解，根据小鼠体重，按9mL/kg溶解物进行灌胃。
对照组1将对比例1制备的胶囊剂内容物溶解至浓度为0.1mg/mL，根据小鼠体重，按4mL/kg溶解物进行灌胃。
对照组2将对比例2制备的胶囊剂内容物溶解至浓度为0.1mg/mL，根据小鼠体重，按4mL/kg溶解物进行灌胃。
对照组3将对比例3制备的胶囊剂内容物溶解至浓度为0.1mg/mL，根据小鼠体重，按4mL/kg溶解物进行灌胃。
阳性对照组和空白对照组不灌胃。
连续灌胃30天，每天一次。除空白对照组外，其余7组在灌胃第7天，14天，21天，28天给予X线全身照射。照射条件：照射距离1m，单次剂量300cGy。
灌胃的第30天，脱颈椎处死小鼠，取下小鼠两侧股骨，剔去肌肉，用滤纸或纱布擦去血污和肌肉，减去股骨两端。用配有6号针头1ml注射器吸取小牛血清约0.05ml，冲洗骨髓腔数次，将冲洗物滴在载玻片上。涂片均匀，然后固定，1:10的吉姆萨(Giemsa)-磷酸缓冲液(pH6.4)染色。
在光学显微镜下观察，每只动物计数1000个嗜多染红细胞中微核细胞数。实验结果如表2所示：
表2 30天内多次辐照小鼠骨髓细胞微核试验情况
注：*对照组1与实验组2畸变细胞率对比
**对照组2与实验组2畸变细胞率对比
***对照组3与实验组2畸变细胞率对比
苹果干细胞胶囊实验组小鼠骨髓细胞微核率与对照组有显著性差异(P<0.01)，实验组微核率均低于对照组。结合实例2结果，可综合判定该保健品对小剂量多次辐射有拮抗作用。
苹果干细胞胶囊实验组小鼠骨髓细胞微核率与苹果干细胞各对照组有显著性差异(P<0.01)，实验组微核率均低于苹果干细胞各对照组，相同剂量下，苹果干细胞保健品的微核率为苹果干细胞各对照组的三分之二。结合实例2结果，可证明苹果干细胞本身具有抗辐射功效，在该保健品抗辐射功效上起着主导地位，配合番茄红素和茶多酚，使得苹果干细胞胶囊更为有效。
采用本发明其他实施例制得的抗辐射胶囊的实验结果与此相似。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种抗辐射组合物，其特征在于，由苹果干细胞冻干粉、茶多酚和番茄红素组成；所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为(20～30)：(20～30)：(0.6～2)。
2.根据权利要求1所述的抗辐射组合物，其特征在于，所述苹果干细胞冻干粉、茶多酚、番茄红素的质量比为25：25：1.3。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其中苹果干细胞冻干粉的制备方法包括以下步骤：
步骤1：苹果新生枝条杀菌、去除木质部和髓后，接种于诱导培养基，诱导培养获得形成层细胞；
步骤2：所述形成层细胞经继代培养，接入增殖培养基，摇床培养获得单细胞；
步骤3：将所述单细胞接种于增殖培养基经扩大培养，获得苹果干细胞；
步骤4：将所述苹果干细胞反复冻融后冻干、粉碎，获得苹果干细胞冻干粉；
所述诱导培养基为含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固体培养基；
所述增殖培养基为含有2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液体培养基。
4.如权利要求1～3任一项所述的抗辐射组合物的制备方法，其特征在于，将苹果干细胞冻干粉、茶多酚和番茄红素混合，制得抗辐射组合物。
5.一种抗辐射保健品，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的组合物。
6.一种抗辐射胶囊，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的组合物、润滑剂和崩解剂。
7.根据权利要求6所述的抗辐射胶囊，其特征在于，所述润滑剂为硬脂酸镁；所述崩解剂为淀粉、交联羧甲基纤维素纳或交联聚维酮。
8.根据权利要求6所述的抗辐射胶囊，其特征在于，所述权利要求1～3任一项所述的组合物、崩解剂和润滑剂的质量比为(40.6～62)：(40～50)：0.5。
9.如权利要求6～8任一项所述的抗辐射胶囊的制备方法，其特征在于，将权利要求1～3任一项所述的组合物粉碎后，与崩解剂和润滑剂混合，填充胶囊，制得抗辐射胶囊。
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