CN107233391A - 一种肉苁蓉提取物及其工业化制备方法和新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种肉苁蓉提取物及其工业化制备方法和新用途。所述肉苁蓉提取物通过将肉苁蓉鲜品或干品与水混合，进行酶提取，提取液浓缩至，经干燥得到。本发明制备的肉苁蓉提取物对PM 2.5颗粒物引起的心血管毒性具有较强的改善功效，能够增强吞噬纳米活性炭(PM 2.5)的巨噬细胞的功能，因此可用于制备用于预防或者治疗相关疾病的药物、食品或保健品。
Description
技术领域
本发明属于健康产品领域，涉及一种肉苁蓉提取物的制备方法，及其在抗氧化、提高机体免疫力和减轻PM 2.5对机体伤害方面的应用。本发明的提取物可以作为食品、保健食品、或药品使用。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞，以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力，是人体识别和排除“异己”的生理反应。当人体免疫功能失调，或者免疫系统不健全时，下列问题就会反复发作：感冒反复发作、扁桃体炎反复发作、哮喘反复发作、支气管炎反复发作、肺炎反复发作、腹泻反复发作。
此外，随着社会经济的快速发现，环境问题也越来越突出，尤其是近年来雾霾现象出现的频率也日益增高，对人类健康的伤害是不容忽视的。别以为雾气看似温和，其实它里面却含有各种对人体有害的细颗粒、有毒物质达20多种，包括了酸、碱、盐、胺、酚等，以及尘埃、花粉、螨虫、流感病毒、结核杆菌、肺炎球菌等，其含量是普通大气水滴的几十倍。因此，调节机体免疫系统功能，激活机体免疫系统功能是保持健康的重要手段之一。
本发明旨在寻找一种具有较好免疫调节功效和减轻PM 2.5对机体伤害的植物提取物，是以肉苁蓉为原料。肉苁蓉Cistanche Herba又名金笋、地精、苁蓉、大芸，为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight的干燥带鳞叶的肉质茎，主产于内蒙古、甘肃、新疆、青海等地。始载于《神农本草经》，列为上品，其后古典《本草经疏》、《本草汇言》、《月华子本草》等多有记载。李时珍曰：“此物补而不峻，故有从容之兮”。肉苁蓉味甘、成，性温，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能，在我国已有两千多年的使用历史。现代药理学表明，肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，更兼具有抗衰老、增强记忆、抗疲劳时等多种功能。本发明使用特殊工艺制备得到肉苁蓉提取物，经体内生物活性实验证实能明显清除自由基、提高机体免疫力和减轻PM 2.5对机体伤害的功效。
发明内容
本发明公开了一种肉苁蓉提取物的制备方法及其用途，将肉苁蓉肉质茎晾干粉碎后，使用酶提取法获得具有生物活性的肉苁蓉提取物，该提取物可以用作食品、保健食品以及药品。本发明种的制备工艺是经过长期的科学研究而总结出来的，其特点在于工艺简单、经济，绿色环保，同时用于大规模生产。
为达到上述目的，本发明是通过下述方法实现的：
一种肉苁蓉提取物，其通过下述方法制备得到：将肉苁蓉鲜品或干品与水混合，进行酶提取，提取液浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到提取物。
所述的肉苁蓉提取物的提取原料可以为新鲜的肉苁蓉的干燥肉质茎，或者其经过水(不合生物酶)或者有机溶剂提取后的药渣。
优选地，肉苁蓉肉质茎部分晾干后，粉碎、过筛，加水搅拌，调节温度和pH，加入生物蛋白酶进行酶解提取，提取完成后，煮沸，离心、过滤，上清液经浓缩干燥，得到土黄色肉苁蓉提取物。
优选地，(1)将肉苁蓉药材中的肉质茎部分晾干并粉碎，过40目以上筛网从而获得苁蓉药粉。
(2)将一定量的苁蓉药粉与纯化水按质量比为1∶10～1∶20混合，加入药粉质量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，调节pH至5～9，恒温40～55℃搅拌3～6h；
(3)提取完成后，将步骤(2)中的药材提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用；
(4)将步骤(3)中的滤液在温度为50～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到土黄色肉苁蓉提取物；所述肉苁蓉提取物的收率不低于40％。
优选地，所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物；
优选地，所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩；
优选地，所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。
本发明还提供了一种肉苁蓉提取物的提取方法，其包括下述步骤：将肉苁蓉鲜品或干品与水混合，进行酶提取，提取液浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到提取物。
优选地，所述提取方法包括下述步骤：
(1)将肉苁蓉药材中的肉质茎部分晾干并粉碎，过40目以上筛网从而获得苁蓉药粉；
(2)将一定量的苁蓉药粉与纯化水按质量比为1∶10～1∶20混合，加入药粉质量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，调节pH至5～9，恒温40～55℃搅拌3～6h；
(3)提取完成后，将步骤(2)中的药材提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用；
(4)将步骤(3)中的滤液在温度为50～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到土黄色肉苁蓉提取物；所述肉苁蓉提取物的收率不低于40％。
优选地，所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物；
优选地，所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩；
优选地，所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。
本发明还提供了一种组合物，其含有上述提取物，和可药用或食用辅料；可为任意剂型，优选其是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂及其他药学上可以接受的剂型。
所述提取物和组合物能明显清除自由基，具有抗氧化的功效；对体内巨噬细胞抑制具有明显的改善，促进巨噬细胞的吞噬功能，具有显著的免疫调节功效；对PM 2.5引起的心血管毒性具有较强的改善功效，能够增强吞噬纳米活性炭(PM 2.5)的巨噬细胞的功能。
所述的组合物可用于制备治疗或预防自由基过多引起的症状的药物、食品或保健品的应用；可用于制备增强免疫力的药物、食品或保健品；用于制备预防、治疗或者减轻PM2.5颗粒物对机体造成伤害的药物、食品或保健品。
优选地，本发明的肉苁蓉提取物的制备方法，其包括下述步骤：肉苁蓉肉质茎部分晾干后，粉碎、过筛，加水搅拌，将温度和pH调至生物蛋白酶酶提取的最佳条件后，加入一定量的生物蛋白酶进行酶解提取，提取完成后，煮沸灭活，离心、过滤，上清液经浓缩干燥，得到土黄色肉苁蓉提取物，具体制备方法如下：
(1)将肉苁蓉药材中的肉质茎部分晾干并粉碎，过40目以上筛网从而获得苁蓉药粉。
(2)将一定量的苁蓉药粉与纯化水按质量比为1∶10～1∶20混合，加入药粉质量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，调节pH至5～9，恒温40～55℃搅拌3～6h。
(3)提取完成后，将步骤(2)中的药材提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用。
(4)将步骤(3)中的滤液在温度为50～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到土黄色肉苁蓉提取物。
所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物。
所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩。
所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。
所述肉苁蓉提取物的收率在40～60％。
本发明还提供了一种组合物，其含有所述肉苁蓉提取物，药物或食品上可接受的助剂。
所述该专利中制备所得肉苁蓉提取物可以与常规预防或治疗疲劳疾病的药物如人参、黄精、枸杞、茯苓等复配组合。
所述该专利中制备所得肉苁蓉提取物可以与药用辅料组合，其是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂及其他药学上可以接受的剂型。
所述该专利中制备所得肉苁蓉提取物可以明显清除自由基，具有抗氧化的功效；对体内巨噬细胞抑制具有明显的改善，促进巨噬细胞的吞噬功能，具有显著的免疫调节功效；对PM 2.5引起的心血管毒性具有较强的改善功效，能够增强吞噬纳米活性炭(PM 2.5)的巨噬细胞的功能。因此，可以预期本发明的肉苁蓉提取物或含有它的药物组合物可以用于治疗或预防自由基过多引起的症状的药物、食品或保健品的用途；可用于制备增强免疫力的药物、食品或保健品方面的用途；用于制备预防、治疗或者减轻PM 2.5颗粒物对机体造成伤害的药物、食品或保健品方面的用途。
附图说明
图1：肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞的抑制改善作用的表型图；
图2：肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能促进作用的表型图；
图3：肉苁蓉提取物对斑马鱼体内吞噬纳米活性炭(PM 2.5)的巨噬细胞吞噬功能促进作用的表型图。
实施例
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。如无特别说明，实施例中用到的所有原料和溶剂均购为市售产品。活性实施例所用本发明产品和阳性对照药品的量，均按照试验受体的最大耐受剂量加入。
制备实施例1：
将肉苁蓉药材中的肉质茎部分(和田天力沙生药物开发有限责任公司，其它商购产品亦可)经CN 105796656 A实施例1水提后的药渣，将其晾干并粉碎，过60目筛网备用。称取100kg苁蓉药粉，与纯化水按质量比为1∶10混合，加入200g中性蛋白酶(酶活力为30万u/g)，调节pH至7～8，保持温度为45～50℃。搅拌提取3h后，将提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用。将滤液在温度为55～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.05g/mL，经喷雾干燥机进行干燥，进风温度为160～170℃，出风温度为70～80℃，干燥完成后，得到52kg土黄色肉苁蓉提取物(批号为C-1)。
制备实施例2：
将肉苁蓉药材中的肉质茎部分(和田天力沙生药物开发有限责任公司，其它商购产品亦可)晾干并粉碎，过40目筛网备用。称取100kg苁蓉药粉，与纯化水按质量比为1∶15混合，加入100g碱性蛋白酶(酶活力为40万u/g)，调节pH至8～9，保持温度为40～45℃。搅拌提取4h后，将提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用。将滤液在温度为55～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.10g/mL，经真空干燥箱进行干燥，温度为60～65℃，负压为0.08～0.1MPa，干燥12h后，得到56kg土黄色肉苁蓉提取物(批号为C-2)。
制备实施例3：
将肉苁蓉药材中的肉质茎部分(和田天力沙生药物开发有限责任公司，其它商购产品亦可)晾干并粉碎，过40目筛网备用。称取100kg苁蓉药粉，与纯化水按质量比为1∶20混合，加入150g木瓜蛋白酶(酶活力为50万u/g)，调节pH至7.5～8.5，保持温度为50～55℃。搅拌提取4h后，将提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用。将滤液在温度为55～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.08g/mL，经喷雾干燥机进行干燥，进风温度为160～170℃，出风温度为70～80℃，干燥完成后，得到42kg土黄色肉苁蓉提取物(批号为C-3)。
生物活性实施例1(抗氧化活性)：
1DPPH自由基清除实验：
1.1DPPH乙醇溶液的配制：精密称取DPPH 4mg，置于100mL棕色容量瓶中，加入50mL乙醇，超声30s，用乙醇定容至刻度，摇匀，待用。本品须现配现用。
1.2供试品溶液的配制：精密称取适量肉苁蓉提取物，加乙醇溶解后，定容，稀释成所需浓度，即可。
1.3操作步骤：准确吸取2mL供试品溶液和2mL DPPH溶液混合均匀；准确吸取2mL供试品溶液和2mL乙醇混合均匀；准确吸取2mLDPPH溶液和2mL乙醇混合均匀，室温放置30min，在515nm波长处测定吸光度，并根据以下计算公式计算自由基清除率：
IR％＝[1-(Ai-Aj)/A0]*100％；
其中，Ai表示待测溶液和DPPH混合后溶液的吸光度；
Aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；
A0表示DPPH和溶剂混合后溶液的吸光度。
2ABTS+自由基清除实验：
2.1PBS缓冲液的配制：称取氯化钠8g，氯化钾0.2g，磷酸二氢钾0.24g，十二水合磷酸氢二钠3.62g，置于1000mL烧杯中，加入800mL蒸馏水，搅怑使其溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH至7.4，转移至1000mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待用。
2.2ABTS+贮存溶液的配制：精密称取ABTS+78mg左右，置于20mL棕色容量瓶中，加入15mL蒸馏水，超声5min，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。精密称取过硫酸钾76mg左右，置于2mL棕色容量瓶中，加入1mL蒸馏水，超声使其溶解，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。精确吸取352μL过硫酸钾溶液加入至ABTS溶液中，摇匀，静置过夜。
2.3ABTS+工作溶液的配制：精确吸取贮存溶液1mL，加入65mL左右PBS缓冲液，摇匀。
2.4供试品溶液的配制：精密称取适量肉苁蓉提取物，加PBS缓冲液溶解后，定容，稀释成所需浓度，即可。
2.5操作步骤：准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL ABTS工作溶液混合均匀；准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL PBS缓冲液混合均匀；准确吸取5mL ABTS工作溶液和0.5mL PBS缓冲液混合均匀，立即在734nm处测定吸光度，并根据以下公式计算自由基清除率：
IR％＝[1-(Ai-Aj)/A0]*100％；
其中，Ai表示待测溶液和ABTS混合后溶液的吸光度；
Aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；
A0表示ABTS和溶剂混合后溶液的吸光度。
3SRSA超氧阴离子自由基清除实验：
3.1NBT溶液的配制：精密称取氯化硝基四氮唑蓝(NBT)24.5mg，置于100mL棕色容量瓶中，加入50mL蒸馏水，超声30s，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，待用。
3.2NADH溶液的配制：精密称取烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型辅酶I(NADH)33.2mg，置于100mL棕色容量瓶中，加入50mL蒸馏水，超声30s，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，待用。
3.3PMS溶液的配制：精密称取吩嗪硫酸甲酯(PMS)4.59mg，置于250mL棕色容量瓶中，加入150mL蒸馏水，超声30s，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，待用。
3.4Tris-HCl缓冲溶液的配制：精密称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)3.025g，置于500mL烧杯中，加入200mL蒸馏水，搅拌使其溶解，用1M HCl调节pH至8.0，转移至250mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，待用。使用时，取16mL上述溶液置于100mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。
3.3供试品溶液的配制：精密称取适量肉苁蓉提取物，加Tris-HCl缓冲液溶解后，定容，稀释成所需浓度，即可。
3.4吸光值检测及自由基清除率的计算：准确吸取1mL NADH溶液，1mL NBT溶液和3mL供试品溶液，对照加3mLTris-HCl缓冲溶液，分别混合均匀，各加1mL PMS溶液混匀，室温放置5min，在558nm处测定吸光度，自由基清除率计算公式如下：
IR％(SRSA)＝(1-Ai/A0)*100％
其中，Ai表示待测溶液和检测试剂混合后溶液的吸光度；
A0表示空白溶液和检测试剂混合后溶液的吸光度。
分别配制制备实施例1中的肉苁蓉提取物浓度为600μg/mL，以维生素C为阳性对照(浓度为100μg/mL)，测试结果如表1所示：
表1 肉苁蓉提取物的抗氧化活性
由表1可知，本发明方法所制备的肉苁蓉提取物对ABTS自由基和对超氧阴离子具有较强的清除活性，而对DPPH自由基具有中等强度的清除活性。
生物活性实施例2(免疫调节活性)：
1肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞抑制的改善作用
实验动物：黑色素等位基因突变型Albino品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，年龄为受精后2天(2dpf)。
实验模型的建立：斑马鱼静脉注射长春瑞滨建立斑马鱼巨噬细胞抑制模型。
实验步骤：对受精后2天(2dpf)斑马鱼静脉注射长春瑞滨建立斑马鱼巨噬细胞抑制模型。分别溶于鱼水给予肉苁蓉提取物和阳性对照药小檗胺，提取物的浓度为500μg/mL，小檗胺的浓度为1.9μg/mL；同时设置模型对照组以及正常对照组(不做任何处理)，每个实验组为30尾斑马鱼，置于28℃培养箱中培养。处理至3dpf时，对各个实验组斑马鱼进行中性红染色，染色4h后，每个实验组随机选择10尾斑马鱼在显微镜下进行观察、拍照并保存图片；利用图像处理软件进行图像分析，斑马鱼巨噬细胞数量(N)，分别定量评价肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞抑制的改善作用。供试品对斑马鱼巨噬细胞抑制的改善作用计算公式为：改善作用(％)＝(N供试品组/N模型对照组-1)×100％。计学分析采用方差分析和Dunnett’s T-检验，p＜0.05为显著性差异。实验结果如表2所示。
表2 肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞的改善作用
与模型对照组比较：**p＜0.01，***p＜0.001
由表2可知，正常对照组斑马鱼平均的巨噬细胞数量为26个，与模型对照组(15个)比较，说明斑马鱼巨噬细胞抑制模型建立成功。阳性药物小檗胺浓度为1.9μg/mL时，平均的巨噬细胞数量为20个，与模型对照组(15个)比较，对斑马鱼巨噬细胞抑制的改善作用为45.45％，说明小檗胺浓度为1.9μg/mL时，对斑马鱼巨噬细胞抑制有显著的改善作用。而肉苁蓉提取物在浓度为500μg/mL时，平均的巨噬细胞数量为22个，63.64％，说明本发明制备的肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞抑制有显著的改善作用。
2肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能的促进作用
实验动物：黑色素等位基因突变型Albino品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，年龄为受精后2天(2dpf)。
实验模型的建立：斑马鱼静脉注射墨汁建立斑马鱼巨噬细胞促进模型。
实验步骤：对受精后2天(2dpf)斑马鱼静脉注射墨汁建立斑马鱼巨噬细胞促进模型。分别溶于鱼水给予肉苁蓉提取物和阳性药匹多莫德，肉苁蓉提取物的浓度为2000μg/mL，匹多莫德的浓度为100μg/mL；同时设置模型对照组，每个实验组为30尾斑马鱼，置于28℃培养箱中培养。处理至3dpf时，对各个实验组斑马鱼进行中性红染色，染色4h后，每个实验组随机选择10尾斑马鱼在显微镜下进行观察、拍照并保存图片；利用图像处理软件进行图像分析斑马鱼巨噬细胞中的墨汁信号(N)，定量评价供试品对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能的促进作用。供试品对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能的促进作用计算公式为：促进作用(％)＝(N供试品组/N模型对照组-1)×100％。计学分析采用方差分析和Dunnett’s T-检验，p＜0.05为显著性差异。实验结果如表3所示。
表3 肉苁蓉提取物对斑马鱼吞噬墨汁的巨噬细胞的促进作用
与模型对照组比较：**p＜0.01，***p＜0.001
由表3可知，阳性药物匹多莫德浓度为100μg/mL时，平均的已吞噬墨汁的巨噬细胞数量为3.4个，与模型对照组(1.5个)比较，对斑马鱼巨噬细胞吞噬的促进作用为2.3倍，说明匹多莫德浓度为100μg/mL时对斑马鱼巨噬细胞的吞噬功能有显著的促进作用。肉苁蓉提取物浓度为2000μg/mL时，平均的已吞噬墨汁的巨噬细胞数量为4.4个，与模型对照组(1.5个)比较，对斑马鱼巨噬细胞吞噬的促进作用为2.9倍，说明肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞的吞噬功能有显著的促进作用。
生物活性实施例3(抗PM2.5活性)：
1评价肉苁蓉提取物对PM 2.5引起心血管毒性的改善作用
实验动物：1.野生型AB品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为受精后2天，共150尾，每实验组为30尾。
实验模型的建立：用PM 2.5处理2dpf野生型AB品系斑马鱼24h，建立PM 2.5诱发的心血管毒性模型。
实验步骤：随机选取150尾受精后2天(2dpf)野生型AB品系斑马鱼于六孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，水溶给予PM 2.5诱发斑马鱼心血管毒性评价模型。分别水溶给予肉苁蓉提取物，浓度为2000μg/mL，同时设置正常对照组(养鱼用水处理斑马鱼)和模型对照组，每孔(实验组)容量为3mL。分别与PM 2.5共同处理24h后，每个实验组随机选取10尾斑马鱼在显微镜下统计斑马鱼心率(N)；另随机选取10尾斑马鱼置于心跳血流分析系统下录制斑马鱼血流视频，分析统计斑马鱼血流速度(V)，根据心率和血流速度的统计学意义评价供试品对PM 2.5引起心血管毒性的改善作用。统计学处理结果用mean±SE表示，供试品对PM 2.5引起心血管毒性的改善作用计算公式为：1)对心率的增加作用：心率增加作用(％)＝(N模型对照组-N供试品组)/(N模型对照组-N正常对照组)×100％；2)对血流速度的影响：血流速度增加作用(％)＝(V供试品组-V模型对照组)/(V正常对照组-V模型对照组)×100％。用方差分析和Dunnett’s T-检验进行统计学分析，p＜0.05表明具有显著性差异，结果如表4所示。
表4 肉苁蓉提取物对PM2.5引起心血管毒性的改善作用
与模型对照组比较，＊＊＊p＜0.001
由表4可知，模型对照组斑马鱼心率(128次/分钟)与正常对照组(165次/分钟)比较p＜0.001，表明模型建立成功。肉苁蓉提取物在浓度为2000μg/mL时斑马鱼心率为152次/分钟，心率增加作用为65％，与模型对照组比较，p＜0.001，表明肉苁蓉提取物在本实验浓度条件下对PM 2.5引起的心率减慢有改善作用。模型对照组斑马鱼血流速度(540μm/s)与正常对照组(1064μm/s)比较p＜0.001，表明模型建立成功。肉苁蓉提取物在浓度为2000μg/mL时斑马鱼血流速度为856μm/s，血流速度增加作用为60％，与模型对照组比较，p＜0.001，表明肉苁蓉提取物在本实验浓度条件下对PM 2.5引起的血流速度减慢有改善作用。
2评价肉苁蓉提取物对吞噬纳米活性炭(PM 2.5)的巨噬细胞吞噬功能的促进作用
实验动物：黑色素等位基因突变型半透明Albino品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为受精后2天，共150尾，每实验组为30尾。
模型制作：将62.5mg/mL纳米活性炭(PM 2.5)作为纳米颗粒，注射到2dpf斑马鱼血液循环中(相当于人静脉注射)，每尾斑马鱼注射10nL，即以625ng/尾剂量建立斑马鱼PM2.5吞噬模型。
实验方法：随机选取150尾受精后2天(2dpf)黑色素等位基因突变型半透明Albino品系斑马鱼于六孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，静脉注射给予纳米活性炭建立斑马鱼纳米活性炭吞噬模型。分别水溶给予肉苁蓉提取物500μg/mL浓度，同时设置正常对照组(养鱼用水处理斑马鱼)和模型对照组，每孔(实验组)容量为3mL。供试品每天换液，处理2d后，加入中性红溶液对斑马鱼进行活体染色16h，染色结束，在解剖显微镜下统计吞噬了纳米活性炭的巨噬细胞数量(S)，根据吞噬纳米活性炭的巨噬细胞数量的统计学意义来评价供试品对巨噬细胞吞噬作用的影响。统计学处理结果用mean±SE表示，巨噬细胞吞噬促进作用计算公式为：巨噬细胞吞噬促进作用(％)＝(S供试品组-S模型对照组)/S模型对照组×100％。用方差分析和Dunnett’s T-检验进行统计学分析，p＜0.05表明具有显著性差异，实验结果如表5所示。
表5 肉苁蓉提取物对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能的促进作用
与模型对照组比较，＊＊＊p＜0.001
由表5可知，模型对照组吞噬纳米活性炭的巨噬细胞数量为12个，而肉苁蓉提取物浓度为500μg/mL时吞噬纳米活性炭的巨噬细胞数量为21个，巨噬细胞吞噬促进作用为70％，与模型对照组比较，p＜0.001，由此可知肉苁蓉提取物在本实验浓度条件下对斑马鱼巨噬细胞吞噬有促进作用。
Claims (8)
1.一种肉苁蓉提取物，其特征在于通过下述方法制备得到：将肉苁蓉鲜品或干品与水混合，进行酶提取，提取液浓缩至约30℃时的相对密度1.05～1.10g/mL，经干燥得到提取物。
2.根据权利要求1所述的肉苁蓉提取物，其特征在于提取原料可以为新鲜的肉苁蓉的干燥肉质茎，或者其经过水(不含生物酶)或者有机溶剂提取后的药渣。
3.权利要求1所述的肉苁蓉提取物的工业化制备方法，其特征在于包括下述步骤：肉苁蓉肉质茎部分晾干后，粉碎、过筛，加水搅拌，调节温度和pH，加入生物蛋白酶进行酶解提取，提取完成后，煮沸，离心、过滤，上清液经浓缩干燥，得到肉苁蓉提取物。
4.根据权利要求3所述的肉苁蓉提取物的工业化制备方法，其特征在于通过下述方法制备得到：
(1)将肉苁蓉药材中的肉质茎部分晾干并粉碎，过40目以上筛网从而获得苁蓉药粉。
(2)将一定量的苁蓉药粉与纯化水按质量比为1∶10～1∶20混合，加入药粉质量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，调节pH至5～9，恒温40～55℃搅拌3～6h；
(3)提取完成后，将步骤(2)中的药材提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用；
(4)将步骤(3)中的滤液浓缩至约30℃时的相对密度1.05～1.10g/mL，经干燥得到土黄色肉苁蓉提取物；所述肉苁蓉提取物的收率不低于40％。
优选地，所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物；
优选地，所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩；
优选地，所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。
5.根据权利要求3所述的肉苁蓉提取物的工业化制备方法，其特征在于包括下述步骤：将肉苁蓉鲜品或干品与水混合，进行酶提取，提取液浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，干燥得到提取物。
6.一种组合物，其含有权利要求1-2任一所述的提取物，和可药用或食用辅料；可为任意剂型，优选其是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂及其他药学上可以接受的剂型。
7.权利要求1-2任一的提取物在清除自由基；改善有害物质对体内巨噬细胞抑制，促进巨噬细胞的吞噬功能；在改善PM 2.5引起的心血管毒性；增强吞噬纳米活性炭(PM 2.5)的巨噬细胞方面的用途。
8.权利要求6所述的组合物可用于制备治疗或预防自由基过多引起的症状的药物、食品或保健品的应用；制备增强免疫力的药物、食品或保健品方面的应用；用于制备预防、治疗或者减轻PM 2.5颗粒物引起的心血管毒性；增强吞噬纳米活性炭(PM 2.5)的巨噬细胞的药物、食品或保健品方面的应用。
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110960573A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-07 | 曹敏 | 一种熊胆草提取物及其制备方法和用途 |
| CN111249338A (zh) * | 2018-12-03 | 2020-06-09 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种苁蓉提取物及其工业化制备方法和用途 |
| CN111357976A (zh) * | 2019-10-06 | 2020-07-03 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种竹荪提取物及其工业化制备方法和用途 |
| CN112694961A (zh) * | 2020-11-26 | 2021-04-23 | 江西汇仁药业股份有限公司 | 一种缓解体力疲劳保健酒 |
| CN114982887A (zh) * | 2022-05-25 | 2022-09-02 | 四川兰冰生物药业有限公司 | 一种人参黄精植物饮料及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105648016A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-06-08 | 蔡庭守 | 肉苁蓉小分子肽提取物、其制备方法及应用 |
| CN106389541A (zh) * | 2016-11-02 | 2017-02-15 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种肉苁蓉提取物及其制备方法和用途 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105648016A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-06-08 | 蔡庭守 | 肉苁蓉小分子肽提取物、其制备方法及应用 |
| CN106389541A (zh) * | 2016-11-02 | 2017-02-15 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种肉苁蓉提取物及其制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 杜鹏瑞等: "城市大气颗粒物毒性效应及机制的研究进展", 《中国环境科学》 * |
| 熊琪等: "PM2.5对肺泡巨噬细胞功能影响的研究进展", 《环境与健康杂志》 * |
| 赵金镯等: "大气PM_(2.5)对大鼠心血管系统的急性毒性作用", 《卫生研究》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111249338A (zh) * | 2018-12-03 | 2020-06-09 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种苁蓉提取物及其工业化制备方法和用途 |
| CN111357976A (zh) * | 2019-10-06 | 2020-07-03 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种竹荪提取物及其工业化制备方法和用途 |
| CN110960573A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-07 | 曹敏 | 一种熊胆草提取物及其制备方法和用途 |
| CN112694961A (zh) * | 2020-11-26 | 2021-04-23 | 江西汇仁药业股份有限公司 | 一种缓解体力疲劳保健酒 |
| CN114982887A (zh) * | 2022-05-25 | 2022-09-02 | 四川兰冰生物药业有限公司 | 一种人参黄精植物饮料及其制备方法 |
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