CN110960573A - 一种熊胆草提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种熊胆草提取物及其制备方法和用途。所述制备方法包括熊胆草晾干后,粉碎、过筛,进行酶解提取,得到熊胆草提取物。本发明制备的熊胆草提取物具有较好的抗疟疾活性。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取领域,具体而言,涉及一种熊胆草提取物的制备方法和用途,本发明的提取物可以作为药品使用。
背景技术
金龙胆草(学名:熊胆草,拉丁学名:Conyza blinii)为菊科白酒草属一年生草本植物。产于云南、四川及贵州。常生长于海拔1800-2600 米的山坡草地,荒地路旁或旷野。全草供药用,有消炎止血,截疟之功效。中文学名是熊胆草,拉丁学名Conyza blinii,别称是苦蒿尖、苦龙胆、苦蒿、金龙胆草,属于被子植物门、双子叶植物纲、合瓣花亚纲的桔梗目,菊科里的管状花亚科分布区域在云南、四川、贵州等地。一年生草本。主根圆柱状,不分枝或稀分枝,有多数纤维状根。茎直立,高40-90(100)厘米,基部径4-5毫米,有条纹,分枝或不分枝,全株被白色开展的长毛和密腺毛。叶密集,下部叶有柄,花期常枯萎;纸质,中部叶及上部叶卵形或卵。状长圆形,长4-7.5(10)厘米,宽2.5-3(4)厘米,无柄,基部狭,全部叶羽状深裂,稀浅裂,裂片通常4-6对,线形或线状披针形,极偏斜,顶端稍尖,全缘或有疏齿,顶端的裂片大,倒卵状披针形,具疏齿,叶脉在背面明显,两面被长毛和密腺毛。它产于云南(昆明、东川、弥渡、漾濞、思茅、蒙自)、四川(汉源、石棉、泸定、西昌)及贵州。常生长于海拔1800-2600米的山坡草地,荒地路旁或旷野。模式标本采自贵州。全草供药用,有消炎止血,截疟之功效。果实为长圆形,长约1毫米,扁压,边缘脉状,两面被微毛;冠毛1层,污白色,糙毛状,稍长于花冠,基部连合成环。花头状花序径7-10毫米,在茎和枝端排成狭而短的圆锥状花序;花序梗短,密被开展的长毛及腺毛;总苞半球状钟形,长约6毫米,宽约10毫米;总苞片3-4层。绿色,线形,顶端渐尖,有白色膜质的边缘,背面被密长毛和腺毛。
本发明使用特殊工艺制备得到熊胆草提取物,经体内生物活性实验证实其具有显著抗疟疾的功效。
发明内容
本发明公开了一种熊胆草提取物的制备方法及其用途,将熊胆草晾干粉碎后,使用酶提取法获得具有生物活性的熊胆草提取物,该提取物可以用作抗疟疾的药品。本发明种的制备工艺是经过长期的科学研究而总结出来的,其特点在于工艺简单、经济,绿色环保,同时用于大规模生产。
本发明的目的之一提供了一种熊胆草提取物。
本发明的另一目的在提供了制备所述熊胆草提取物的方法。
本发明的另一目的在提供了一种抗疟疾的化合物。
本发明还有一目的是提供了一种含有上述化合物或提取物的组合物。
本发明还有一目的是提供了上述化合物或所述组合物的用途。
本发明另一目的是提供了利用上述化合物或组合物防治疟疾的方法。
为实现上述目的,本发明采用了下述技术方案:
一种熊胆草提取物,其通过下述方法制备得到:将熊胆草粉碎后,再与一定比例的水混合,加入生物酶进行提取,分1-3次提取,每次1-2 小时,合并提取液,提取液浓缩至85℃时的相对密度1.10~1.20g/mL,得到浸膏,然后经喷雾干燥,得到浸膏粉。
优选地,喷雾干燥前加入辅料淀粉。
所述过滤液浓缩至85℃时的相对密度为1.15~1.20。
所述熊胆草选自叶、花、果和茎。
所述的熊胆草提取物,优选地,通过下述方法制备得到:
(1)将一定量的熊胆草与水按质量比为1:10~1:20混合,加入熊胆草质量的0.1%~0.5%的生物蛋白酶,调节pH至7~9,恒温40~55℃搅拌3~6h;
(2)提取完成后,将步骤(1)中的提取液煮沸5~10min,待冷却至室温,离心过滤,滤液待用;
(3)将步骤(2)中的滤液浓缩至30℃时的相对密度1.10~1.20g/mL,经喷雾干燥得到乳白色熊胆草浸膏粉。
所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物,优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物;
本发明还提供了一种制备疟疾的化合物,其通过下述方法制备得到:将所述的浸膏粉进行柱层析即得,所述化合物如下所示:
优选地,所述柱层析的洗脱剂是石油醚和乙酸乙酯,其体积比为 1:2。
本发明还提供了一种组合物,其含有所述的提取物,或含有所述的化合物,以及药学上可用的助剂;所述组合物可为任意剂型,优选其是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂。
所述的化合物可用于制备抗疟疾药物。
所述提取物、化合物和组合物可以明显抗疟疾。
所述的组合物可用于制备抗疟疾的药物。
本发明还公开了熊胆草提取物的制备方法,其包括下述步骤:将熊胆草粉碎后,再与一定比例的水混合,加入生物酶进行提取,分1-3次提取,每次1-2小时,合并提取液,提取液浓缩至85℃时的相对密度 1.10~1.20g/mL,得到浸膏,然后经喷雾干燥,得到浸膏粉。
具体制备方法如下:
(1)将一定量的熊胆草与水按质量比为1:10~1:20混合,加入熊胆草质量的0.1%~0.5%的生物蛋白酶,调节pH至7~9,恒温40~55℃搅拌 3~6h;
(2)提取完成后,将步骤(1)中的提取液煮沸5~10min,待冷却至室温,离心过滤,滤液待用;
(3)将步骤(2)中的滤液浓缩至30℃时的相对密度1.10~1.20g/mL,经喷雾干燥得到乳白色熊胆草浸膏粉。
所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物,优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶中的一种或者它们的混合物。
所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩。
所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。
实施例
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是,本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明,而不是对本发明的限制,在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。如无特别说明,实施例中用到的所有原料和溶剂均为市售分析纯产品。
制备实施例1:
将新鲜的熊胆草晾干、粉碎后,过筛,将称取10Kg熊胆草与水按质量比为1:10混合,加入10g中性蛋白酶(酶活力为30万u/g),调节pH至8,恒温45~50℃搅拌提取;5小时后,提取液煮沸5分钟,冷却至室温后,离心过滤;将滤液浓缩至85℃时的相对密度为1.10g/mL时,经喷雾干燥机进行干燥,进风温度为160~170℃,出风温度为70~80℃,干燥完成后,得到3.5Kg熊胆草粉(C-1)。
制备实施例2:
将新鲜的熊胆草晾干、粉碎后,过筛,称取10kg熊胆草与水按质量比为1:20混合,加入200g碱性蛋白酶(酶活力为40万u/g),调节pH 至9,恒温40~45℃搅拌提取;3小时后,提取液煮沸10分钟,冷却至室温后,离心过滤;将滤液浓缩至30℃时的相对密度为1.20g/mL时,经真空干燥箱进行干燥,温度为60~65℃,负压为0.08~0.1MPa,干燥 12h后,得到2.6kg熊胆草粉(C-2)。
制备实施例3:
取制备实施例1所述的编号为C-1的熊胆草粉5g,用50mL无水乙醇加热溶解,缓慢滴加石油醚25-30mL;获得黄色结晶状固体之后,再次用50mL无水乙醇溶解,并缓慢滴加石油醚25-30mL得到黄色颗粒状固体化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H,N-CH=C),9.36(s,1H, N-CH=N),7.75(s,1H,benzene),7.49(s,1H,benzene),6.77(s,1H,-OH), 6.57(m,1H,C=CH),6.07(d,1H,C=CH),4.7(s,1H,-OH),4.01(t,1H, CH),3.95(s,3H,CH3),3.80(t,2H,CH2),3.72(m,1H,CH),3.41(s,3H, CH3),3.28(m,1H,CH),3.19(m,2H,CH2),2.68(m,1H,CH),2.63(m,2H, CH2),2.35(m,2H,CH2),1.68(q,2H,CH2).
生物活性实施例1:
在体外用RMPI 1640培养基和体积分数10%人血清培养人恶性疟原虫3D7药物敏感株,红细胞压积为5%左右。用质量分数5%D-山梨醇将疟原虫同步化到环状体时期,然后铺板,初始感染率1%,红细胞压积为5%。将C-1、C-2和制备实施例3化合物用DMSO配制成母液,再用培养基稀释,活性检测时,浓度梯度采取三倍梯度稀释,药液占培养体系的体积分数10%(DMSO的浓度小于体积分数0.5%)。培养48h 后涂片,Gimsa染色,镜检,计数感染率。
抑制率=(空白对照感染率-药物组感染率)/空白对照组感染率×100%
将抑制率和药物浓度进行非线性回归(Graphpad Prism 3.0),计算 IC50。同时以同样方法制备的氯喹药液和青蒿素药液作为阳性对照,结果如下表所示。
由上表可知,与阳性对照药相比,IC50值高于青蒿素,但低于氯喹,经提纯后的化合物相对于提取物浸膏粉对疟疾原虫更具有预防和治疗作用。
Claims (10)
1.一种熊胆草提取物,其特征在于通过下述方法制备得到:将熊胆草粉碎后,再与一定比例的水混合,加入生物酶进行提取,分1-3次提取,每次1-2小时,合并提取液,提取液浓缩至85℃时的相对密度1.10~1.20g/mL,得到浸膏,然后经喷雾干燥,得到浸膏粉。
2.根据权利要求1所述的熊胆草提取物,其特征在于:喷雾干燥前加入辅料淀粉。
3.根据权利要求1所述的熊胆草提取物,其特征在于:过滤液浓缩至85℃时的相对密度为1.15~1.20。
4.根据权利要求1所述的熊胆草提取物,其特征在于:所述熊胆草选自叶、花、果和茎。
5.根据权利要求1所述的熊胆草提取物,其特征在于通过下述方法制备得到:
(1)将一定量的熊胆草与水按质量比为1:10~1:20混合,加入熊胆草质量的0.1%~0.5%的生物蛋白酶,调节pH至7~9,恒温40~55℃搅拌3~6h;
(2)提取完成后,将步骤(1)中的提取液煮沸5~10min,待冷却至室温,离心过滤,滤液待用;
(3)将步骤(2)中的滤液浓缩至30℃时的相对密度1.10~1.20g/mL,经喷雾干燥得到乳白色熊胆草浸膏粉。
6.根据权利要求5所述的熊胆草提取物,其特征在于:所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物,优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物。
8.根据权利要求7所述的一种制备疟疾的化合物,其特征在于:所述柱层析的洗脱剂是石油醚和无水乙醇,其体积比为1:2。
9.一种组合物,其特征在于含有权利要求1-7任一所述的提取物,或含有权利要求7-8任一所述的化合物,以及药学上可用的助剂;所述组合物可为任意剂型,优选其是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂。
10.权利要求7-8任一所述的化合物在制备抗疟疾药物方面的用途。
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