CN104758397A - 一种改善睡眠的组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种改善睡眠的组合物及其制备方法。本发明将苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行复配后能够具有显著的改善睡眠的功能，且无毒副作用。实验表明，本发明提供的组合物的改善睡眠的效果显著优于单独使用各组分的作用，经小鼠急性毒性试验结果显示小鼠没有发现异常，没有发生中毒或死亡现象。且本发明提供的组合物在0.5g/kg的剂量下能够有效提高戊巴比妥钠阈下剂量小鼠入睡发生率。

Description

一种改善睡眠的组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种改善睡眠的组合物及其制备方法。

背景技术

现代快节奏的生活和逐渐剧烈的各种竞争关系，使人们精神压力越来越大，精神的长期紧张和一系列的不规律生活节奏，致使的失眠一直困扰着大多数人。据统计，我国的失眠者为总人口的20％～30％，其中中老年人约占70％。长期失眠易引起心烦易乱、疲乏无力，甚至以头痛、多梦、多汗、记忆力减退，还可引起一系列临床症状，并诱发一些心身性疾病。因身体病痛而导致工作效率的降低，使失眠者心理压力增大，如此恶性循环，发生神经衰弱、内分泌失调等，甚至向更加严重的方向发展至精神病。

所以，治疗失眠的药物需求大增，治疗失眠的药物也以各种状态被发明和生产。然而这些药物不仅效果大多得不到肯定，并且，安眠药在体内大多是经过肝脏、肾脏代谢的，长期服用会增加肝肾的负担，有的还会引起肝脏肿大、肝区疼痛、黄疸、浮肿、蛋白尿、血尿及恶心、腹胀、食欲不振、便秘等肝肾功能损害及肠胃反应。有的安眠药还会导致精神不振、智力减退，血压下降等蓄积中毒症状，甚至引起呼吸循环功能障碍情况。因此，老年人应用安定类药物更应小心。

因此，提供副作用小，且改善睡眠效果显著的具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种改善睡眠的组合物及其制备方法，本发明提供的改善睡眠的组合物无副作用且改善睡眠的效果显著。

本发明提供了一种改善睡眠的组合物，包括苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸。

其中，苹果干细胞不仅可以快速激活机体内休眠的干细胞，而且还能积极修复受损的干细胞，刺激人类角质细胞和纤维母细胞的增生，增加皮肤弹性，具有抗衰老和美容生发的奇效。苹果干细胞具有植物干细胞的特性：强大的抗氧化和抗衰老活性，能显著提高人体免疫力和抗癌能力。

酸枣仁，中医典籍《神农本草经》中很早就有记载，酸枣可以“安五脏，轻身延年”。酸枣仁具有很大的药用价值，可以起到养肝、宁心、安神、敛汗的作用。医学上常用它来治疗神经衰弱、心烦失眠、多梦、盗汗、易惊等病。同时，又能达到一定的滋补强壮效果。常见的中药“镇静安眠丸”，就是以酸枣仁为主要成分制成的。酸枣仁在现有技术中大多是以炒服或是煎服，运用于调节睡眠、养心安神的作用，本发明采用的酸枣仁提取物主要有效成分是酸枣仁皂苷，其可自行制备也可购买获得，本发明对此不作限定，其实施皆在本发明的保护范围之内。

作为优选，本发明采用的酸枣仁提取物中酸枣仁皂苷的含量不小于1％。

γ-氨基丁酸，广泛分布于动植物体内。植物如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有GABA。在动物体内，GABA几乎只存在于神经组织中，其中脑组织中的含量大约为0.1-0.6mg/克组织，免疫学研究表明，其浓度最高的区域为大脑中黑质。GABA是目前研究较为深入的一种重要的抑制性神经递质，它参与多种代谢活动，具有很高的生理活性。

本发明将苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行复配后能够具有显著的改善睡眠的功能，且无毒副作用。实验表明，本发明提供的组合物的改善睡眠的效果显著优于单独使用各组分的作用，经小鼠急性毒性试验结果显示小鼠没有发现异常，没有发生中毒或死亡现象。且本发明提供的组合物在0.5g/kg的剂量下能够有效提高戊巴比妥钠阈下剂量小鼠入睡发生率。

在本发明的实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为(20～30)：(20～30)：(8～15)。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为5:5:2。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为4:4:3。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为10:15:4。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为4:6:3。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为15:10:4。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为6:4:3。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为15:15:4。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为2:2:1。

在一些实施例中，苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为25:25:13。

本发明采用的苹果干细胞冻干粉可为市场购得也可采用本发明提供的方法制备，其实施皆在本发明的保护范围之内。作为优选，苹果干细胞冻干粉以本发明提供的方法制得，该方法以苹果新生枝条为原料，经诱导形成愈伤组织后增殖培养并扩大培养获得苹果干细胞，再冻干后制得。该苹果干细胞冻干后直接用于本发明提供组合物的制备，该冻干粉中黄酮和多酚类物质含量丰富。

苹果干细胞冻干粉的制备方法包括以下步骤：

步骤1：苹果新生枝条杀菌、去除木质部和髓后，接种于诱导培养基，诱导培养获得形成层细胞；

步骤2：所述形成层细胞经继代培养，接入增殖培养基，摇床培养获得单细胞；

步骤3：将所述单细胞接种于增殖培养基经扩大培养，获得苹果干细胞；

步骤4：将所述苹果干细胞反复冻融后冻干、粉碎，获得苹果干细胞冻干粉；

所述诱导培养基为含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固体培养基；

所述增殖培养基为含有2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液体培养基。

在本发明的实施例中，杀菌包括以下步骤：

步骤1：将苹果新生枝条以水冲洗后，以浓度为10～1000mg/L的L-抗坏血酸溶液浸泡；

步骤2：以体积分数为60％～95％的乙醇水溶液浸泡后以无菌水冲洗；

步骤3：以体积分数为10％～100％的过氧化氢水溶液浸泡后以无菌水冲洗。

作为优选，苹果新生枝条的长度为10cm。

作为优选，L-抗坏血酸的浓度为120mg/L。

优选的，步骤1中所述浸泡的时间为1min。

作为优选，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为75％。

优选的，步骤2中所述浸泡的时间为1min。

作为优选，步骤2中无菌水的体积为2L。

作为优选，过氧化氢水溶液中过氧化氢的体积分数为30％。

优选的，步骤3中所述浸泡的时间为20min。

优选的，步骤3中所述冲洗的时间为10min。

以本发明提供的杀菌方法对苹果新生枝条进行杀菌能够充分的杀除苹果新生枝条上所携带的真菌、细菌或病毒。以便保证苹果新生枝条在培养过程中不被干扰，从而保证苹果新生枝条上的细胞更加快速的去分化。而实验表明，本发明提供的方法能够有效将苹果新生枝条细胞去分化，经诱导和扩大培养，48天左右即可获得大量的苹果干细胞。

在本发明实施例中，NAA、BA和水解酪蛋白的质量比为0.5：2：1。

优选的，诱导培养基中NAA的浓度为0.5mg/L。

优选的，诱导培养基中BA的浓度为2.0mg/L。

优选的，诱导培养基中水解酪蛋白的浓度为1.0mg/L。

作为优选，诱导培养基为固体培养基，其中琼脂的质量分数为1％。

作为优选，诱导培养基的pH值为6.0。

在本发明的实施例中，步骤1中所述的接种为，每g去除木质部和髓的苹果新生枝条接种于10cm²的诱导培养基。

在一些实施例中，诱导培养为暗培养；温度为25℃；时间为10天。

经诱导培养后，形成层组织为均一生长的平板状组织，而其他组织则为不规则的聚集生长物。

在一些实施例中，继代培养为暗培养；温度为25℃；时间为10天。

在本发明的实施例中，继代培养采用遇到培养基，每g形成层细胞接种于10cm²的诱导培养基。

经10天的继代培养，形成层细胞形成愈伤组织，每10cm²的诱导培养基上约有愈伤组织20.8g。

一些实施例中，增殖培养基中，2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的质量比为2:1:1:1。

优选的，增殖培养基中2,4-D的浓度为2.0mg/L。

优选的，增殖培养基中BA的浓度为1.0mg/L。

优选的，增殖培养基中水解酪蛋白的浓度为1.0mg/L。

优选的，增殖培养基中活性炭的浓度为1.0mg/L。

作为优选，增殖培养基的pH值为6.0。

在本发明的实施例中，每g愈伤组织接入20mL增殖培养基。

作为优选，摇床培养时，增殖培养基中还添加经灭菌的直径为0.5cm的玻璃珠。

优选的，玻璃珠的添加量为100g/L增殖培养基。

实施例中，培养采用三角瓶，1000mL三角瓶中加入200mL增殖培养基。

在本发明的实施例中，摇床培养的条件为每小时用20W的白炽灯照射10min。

在一些实施例中，摇床培养的温度为25℃；转速为120转/分钟；时间为14天。

作为优选，在摇床培养7天后加入新鲜的增殖培养基。

作为优选，加入新鲜的增殖培养基的体积为原增殖培养基的2倍。

添加新鲜的增殖培养基后，其中细胞的密度为1×10⁵/ml。

采用本发明提供的方法进行摇床培养，愈伤组织成为单细胞悬液，细胞增殖速度较快，用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团、玻璃珠和残渣，获得细胞密度约0.5～1×10⁶/ml。

作为优选，步骤3中接种的密度为1×10⁴/ml。

在一些实施例中，扩大培养具体为：于20L的生物反应器中添加5L增殖培养基，培养7天后添加增殖培养基至细胞浓度为1×10⁵/ml，再培养7天。

本发明提供的改善睡眠组合物的制备方法为，将苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸混合，制得改善睡眠组合物。

具体的，本发明提供的改善睡眠组合物的制备方法为：将苹果干细胞冻干粉在4℃低温中粉碎，过100目筛；将酸枣仁提取物、γ-氨基丁酸分别进行粉碎、过100目筛后与过筛后的苹果干细胞冻干粉混合。

本发明还提供了一种改善睡眠的保健品，包括本发明提供的改善睡眠的组合物。

作为优选，本发明提供的改善睡眠的保健品还包括保健品中可接受的辅料。

作为优选，本发明提供的抗辐射的保健品的剂型为片剂。

本发明提供了一种改善睡眠的片剂，包括本发明提供的改善睡眠的组合物、崩解剂、稀释剂、粘合剂、增稠剂和润滑剂。

在一些实施例中，本发明提供的改善睡眠的片剂包括本发明提供的改善睡眠的组合物、微晶纤维素、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素纳、聚维酮K30、二氧化硅和硬脂酸镁。

在一些实施例中，本发明提供的改善睡眠的片剂中，本发明提供的改善睡眠的组合物、微晶纤维素、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素纳、聚维酮K30、二氧化硅和硬脂酸镁的质量比为(48～75)：(10～20)：(10～15)：(3～6)：(2～3)：0.5：1。

作为优选，本发明提供的改善睡眠的片剂中，本发明提供的改善睡眠的组合物、微晶纤维素、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素纳、聚维酮K30、二氧化硅和硬脂酸镁的质量比为123：30：25：9：5：1：2。

本发明提供的改善睡眠的片剂的制备方法为将本发明提供给的改善睡眠的组合物、崩解剂和稀释剂混合后，加入粘合剂的水溶液制软材，经制粒、干燥后与增稠剂、润滑剂混合，压片制得改善睡眠的片剂。

具体的，该方法具体包括：

步骤1：将聚维酮K30配制成质量分数为5％～10％的水溶液，作为粘合剂；

步骤2：4℃，将本发明提供的改善睡眠的组合物、微晶纤维素、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；

步骤3：放置12小时后干燥经整粒后与二氧化硅、硬脂酸镁混合后压片制得改善睡眠的片剂。

本发明将苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行复配后能够具有显著的改善睡眠的功能，且无毒副作用。实验表明，本发明提供的组合物的改善睡眠的效果显著优于单独使用各组分的作用，经小鼠急性毒性试验结果显示小鼠没有发现异常，没有发生中毒或死亡现象。且本发明提供的组合物在0.5g/kg的剂量下能够有效提高戊巴比妥钠阈下剂量小鼠入睡发生率。

具体实施方式

本发明提供了一种改善睡眠的组合物及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1苹果干细胞冻干粉的制备

1、培养基的配方：

1.1诱导培养基：MS固体培养基+NAA0.5mg/L+BA 2mg/L+CH 1mg/L，pH值为6.0；

1.2增殖培养基：MS液体培养基+2,4-D 2.0mg/L+BA 1.0mg/L+CH1.0mg/L+AC 1.0mg/L，pH值为6.0；

2、苹果枝条的杀菌

选择无化肥农药污染、绿色种植的苹果树，按照一定的评判标准挑选10支10cm长新生枝条；用无菌水2L洗涤新生枝条表面附着物；将新生枝条放进120mg/L L-抗坏血酸中浸泡1分钟；将新生枝条放入75％的乙醇溶液中杀菌1分钟，用2L无菌水冲洗干净；再放入30％的过氧化氢溶液中杀菌20分钟，并用无菌水冲洗10分钟。

3、形成层组织的诱导

将灭菌的苹果新生枝条用接种刀剥离形成层、韧皮部、皮质和表皮等组织，丢弃木质部和髓；将获得的组织接种至新鲜的固体培养基中，以每1g组织接种10cm²固体培养基的密度进行接种，在受控的暗室内25℃连续培养10天，获得形成层组织。

4、继代培养形成层组织

将再生的形成层组织与其他组织分离开；以每1g组织接种10cm²固体培养基的密度，将再生的形成层组织接种至新鲜的固体培养基中，在受控的暗室内25℃连续培养10天，获得愈伤组织。

5、单细胞培养

在1000ml三角瓶中加入200ml液体培养基、灭菌处理的20g、直径0.5cm的玻璃珠；将10g愈伤组织转移到三角瓶中；将三角瓶置于25℃、120转/分钟的摇床上进行培养，每小时用20W的白炽灯照射10分钟；第7天，加入400ml新鲜的液体培养基至细胞密度为其中细胞的密度为1×10⁵/ml，然后继续培养7天；培养后用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团、玻璃珠和残渣，得到单细胞悬液，

6、放大培养

将单细胞悬液转移至20L生物反应器中进行大规模培养，生物反应器中容纳5L的增殖培养基。培养第7天时，加入10L的新鲜液体培养基，继续培养后获得细胞悬液。

7、冻干粉的制备

苹果干细胞悬液用1um过滤器过滤，去掉培养基，收获截留的黏胶状细胞取出；将细胞放入-30℃的冰箱内预冻3小时；放入液氮罐中超低温速冻2小时；取出解冻30分钟后，再放入-30℃冰箱内预冻和液氮罐内速冻，依次2遍；将细胞取出，室温下维持10分钟，入低温冷冻真空干燥机内，真空冷冻干燥后，高速粉碎成60目冻干粉。

实施例2改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、酸枣仁提取物100g、γ-氨基丁酸40g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例3改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、酸枣仁提取物100g、γ-氨基丁酸75g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施4改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、酸枣仁提取物150g、γ-氨基丁酸40g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例5改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、酸枣仁提取物150g、γ-氨基丁酸75g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例6改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉150g、酸枣仁提取物100g、γ-氨基丁酸40g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例7改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉150g、酸枣仁提取物100g、γ-氨基丁酸75g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例8改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉150g、酸枣仁提取物150g、γ-氨基丁酸40g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例9改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉150g、酸枣仁提取物150g、γ-氨基丁酸75g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例10改善睡眠组合物的制备

先将苹果干细胞冻干粉100g、酸枣仁提取物100g、γ-氨基丁酸52g，分别进行粉碎(其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸进行普通研磨)，过100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。

实施例11改善睡眠片剂的制备

用纯化水将9g聚维酮K30配制成质量分数为7％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，240g将实施例2提供的改善睡眠的组合物、60g微晶纤维素、45g预胶化淀粉、18g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与1.5g二氧化硅、3g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例12改善睡眠片剂的制备

用纯化水将11g聚维酮K30配制成质量分数为8％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，275g将实施例3提供的改善睡眠的组合物、72g微晶纤维素、58g预胶化淀粉、22g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与2g二氧化硅、3.5g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例13改善睡眠片剂的制备

用纯化水将12g聚维酮K30配制成质量分数为9％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，290g将实施例4提供的改善睡眠的组合物、60g微晶纤维素、60g预胶化淀粉、18g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与3g二氧化硅、6g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例14改善睡眠片剂的制备

用纯化水将13g聚维酮K30配制成质量分数为10％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，325g将实施例5提供的改善睡眠的组合物、86g微晶纤维素、64.5g预胶化淀粉、26g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与2g二氧化硅、4.3g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例15改善睡眠片剂的制备

用纯化水将12g聚维酮K30配制成质量分数为9％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，290g将实施例6提供的改善睡眠的组合物、58g微晶纤维素、62g预胶化淀粉、21g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与2.5g二氧化硅、5g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例16改善睡眠片剂的制备

用纯化水将17g聚维酮K30配制成质量分数为10％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，325g将实施例7提供的改善睡眠的组合物、68g微晶纤维素、68g预胶化淀粉、20g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与3g二氧化硅、6.7g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例17改善睡眠片剂的制备

用纯化水将14g聚维酮K30配制成质量分数为10％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，340g将实施例8提供的改善睡眠的组合物、105g微晶纤维素、84g预胶化淀粉、31g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与3.5g二氧化硅、7g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例18改善睡眠片剂的制备

用纯化水将23g聚维酮K30配制成质量分数为10％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，375g将实施例9提供的改善睡眠的组合物、140g微晶纤维素、109g预胶化淀粉、39g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与3.9g二氧化硅、7.8g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例19改善睡眠片剂的制备

用纯化水将10.5g聚维酮K30配制成质量分数为10％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，252g将实施例10提供的改善睡眠的组合物、58g微晶纤维素、58g预胶化淀粉、21g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与2.6g二氧化硅、5.3g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

对比例1对照品1的制备

用纯化水将10.5g聚维酮K30配制成质量分数为10％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，252g苹果干细胞冻干粉、58g微晶纤维素、58g预胶化淀粉、21g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与2.6g二氧化硅、5.3g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

对比例2对照品2的制备

用纯化水将10.5g聚维酮K30配制成质量分数为10％的水溶液，作为粘合剂；4℃条件下，168g酸枣仁提取物、84gγ-氨基丁酸、58g微晶纤维素、58g预胶化淀粉、21g交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与2.6g二氧化硅、5.3g硬脂酸镁混合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。

实施例20改善睡眠片剂的小鼠急性毒性试验

试验参照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)。

取体重为18-22g的小鼠，共设5组，每组10只，雌雄各半，分别按照4.64g/kg、10g/kg、21.5g/kg、46.4g/kg灌胃给予本发明实施例19提供的片剂，另设空白对照组，对照组灌胃蒸馏水，按照小鼠20ml/kgBW的量，在12小时内灌胃给药，小鼠给药前禁食15小时，不禁水，给药后3小时复食。给药停止后连续观察14天，每天观察小鼠精神、食欲、饮水、活动及中毒情况，并记录小鼠的中毒情况、死亡时间和死亡数目。结果如表1：

表1 小鼠急性毒性试验结果

结果显示：按照4.64g/kg、10g/kg、21.5g/kg和46.4g/kg的剂量对小鼠进行灌胃给药实验，观察14天，全部小鼠精神、活动、口、眼鼻未见分泌物，精神、食欲、饮水等情况和对照组比较均无异常。以上所知46.4g/kg后，没有中毒或是小鼠死亡情况。按照毒理学评价标准，可不比测定半数致死量(LD₅₀),即LD₅₀>15g/kg。结果表明，上述所得产品属于无毒类保健品。

本发明其他实施例制得的片剂测试结果与此相似。

实施例21改善睡眠片剂对小鼠体重的影响

取体重为18-22g的小鼠，雌雄各40只，分别按照1.0g/kg、3.0g/kg、5.0g/kg的剂量灌胃给予本发明实施例19提供的片剂，另设空白对照组，对照组灌胃蒸馏水，按照小鼠20ml/kgBW的量，在12小时内灌胃给药，小鼠给药前禁食15小时，不禁水，给药后3小时复食。连续给药30天，期间观察小鼠的体重变化。结果如表2：

表2 试验期间受试小鼠体重增长情况

由表2可知，实验小鼠各组剂量之间体重增长没有显著的差异，所得产品对雌雄小鼠体重无影响，可得上述所得产品对受试物体重没有影响。观察还发现，灌胃上述所得产品的小鼠与对照组相比，毛发和皮肤更加光滑，活动更加灵活。

对本发明其他实施例制得的片剂测试结果与此相似。

实施例22改善睡眠片剂延长戊巴比妥钠睡眠时间实验

雌雄小鼠各80只，随机分为4组，分别给予等剂量的实施例19提供的片剂及对比例1～3提供的对照品。

其中，实验组1～3以剂量0.1g/kg、0.5g/kg、1.5g/kg灌胃，0剂量组给予等量的水。。每天灌胃1次，连续灌胃15天。末次灌胃15min后，给各组动物腹腔注射50mg/kgBW戊巴比妥钠，注射量为0.3mL/20gBW，以翻正发射小时为入睡判断标准，观察受试样品是否延长戊巴比妥钠睡眠时间，小鼠入睡潜伏时间如表3：

表3 小鼠入睡潜伏时间的记录表

结果：由表3可见，与0剂量组相比，给予本发明提供的保健品的睡眠时间差异具有统计学意义(P<0.05)，即是实施例19在0.5g/kg的剂量组能延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间。观察还发现，灌胃上述所得产品的小鼠与0剂量组相比，毛发和皮肤更加光滑，活动更加灵活。对本发明其他实施例制得的片剂测试结果与此相似。而对照样品1～3的检测结果显示，与0剂量组相比，入睡小鼠发生率不具有统计学意义(P>0.05)，即是对照样品1～2剂量在1.5g/kg不能有效提高戊巴比妥钠阈下剂量小鼠入睡发生率。

实施例23改善睡眠片剂戊巴比妥钠阈下剂量催眠剂量试验

先通过预实验来确定戊巴比妥钠阈下催眠剂量，即是85％～90％小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠最大阈下剂量为15mg/kg。

雌雄小鼠各80只，随机分为4组，分别给予等剂量的实施例19提供的片剂及对比例1～3提供的对照品。

其中，实验组1～3以剂量0.1g/kg、0.5g/kg、1.5g/kg灌胃，0剂量组给予等量的水。每天灌胃1次，连续灌胃15天。末次灌胃后出现峰值前12min，给各组动物腹腔注射15mg/kg剂量的戊巴比妥钠，以小鼠翻正发射消失达2min以上者为入睡标准，记录20min内入睡动物数，连续记录一个月，观察上述所得产品是否能提高戊巴比妥钠阈下剂量入睡小鼠发生率。

表4 记录小鼠入睡记录表

注：*示与0剂量组相比较P<0.05，**示与0剂量组相比较P<0.01。

#示与0剂量组相比较P>0.05，##示与0剂量组相比较P>0.05。

各剂量组与对照组相比，入睡小鼠发生率具有统计学意义(P<0.05)，即是实施例19制得的片剂的剂量在0.5g/kg能提高戊巴比妥钠阈下剂量小鼠入睡发生率。对本发明其他实施例制得的片剂测试结果与此相似。

而对对比例1～3提供对照品的检测结果显示，各剂量组与0剂量组相比，入睡小鼠发生率不具有统计学意义(P>0.05)，即是对照样品1～2在1.0g/kg不能有效提高戊巴比妥钠阈下剂量小鼠入睡发生率。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种改善睡眠的组合物，其特征在于，包括苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为(20～30)：(20～30)：(8～15)。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸的质量比为25:25:13。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其中苹果干细胞冻干粉的制备方法包括以下步骤：

步骤1：苹果新生枝条杀菌、去除木质部和髓后，接种于诱导培养基，诱导培养获得形成层细胞；

步骤2：所述形成层细胞经继代培养，接入增殖培养基，摇床培养获得单细胞；

步骤3：将所述单细胞接种于增殖培养基经扩大培养，获得苹果干细胞；

步骤4：将所述苹果干细胞反复冻融后冻干、粉碎，获得苹果干细胞冻干粉；

所述诱导培养基为含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固体培养基；

所述增殖培养基为含有2,4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液体培养基。

5.如权利要求1～4任一项所述的改善睡眠组合物的制备方法，其特征在于，将苹果干细胞冻干粉、酸枣仁提取物和γ-氨基丁酸混合，制得改善睡眠组合物。

6.一种改善睡眠的保健品，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述的组合物。

7.一种改善睡眠的片剂，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述的组合物、崩解剂、稀释剂、粘合剂、增稠剂和润滑剂。

8.根据权利要求7所述的改善睡眠的片剂，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述的组合物、微晶纤维素、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素纳、聚维酮K30、二氧化硅和硬脂酸镁。

9.根据权利要求8所述的改善睡眠的片剂，其特征在于，所述权利要求1～4任一项所述的组合物、微晶纤维素、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素纳、聚维酮K30、二氧化硅和硬脂酸镁的质量比为(48～75)：(10～20)：(10～15)：(3～6)：(2～3)：0.5：1。

10.如权利要求7～9任一项所述的改善睡眠的片剂的制备方法，其特征在于，将权利要求1～4任一项所述的组合物、崩解剂和稀释剂混合后，加入粘合剂的水溶液制软材，经制粒、干燥后与增稠剂、润滑剂混合，压片制得改善睡眠的片剂。