TWI660728B - 胺基喹唑啉衍生物及其醫藥組合物與用途 - Google Patents

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Abstract

一種胺基喹唑啉衍生物，該胺基喹唑啉衍生物如式(I)所示。本發明的胺基喹唑啉衍生物，其對具有EGFR突變的非小細胞肺癌及K-RAS突變的非小細胞肺癌之癌細胞的毒殺效果較Erlotinib好，因而能有效用於治療非小細胞肺癌。

Description

胺基喹唑啉衍生物及其醫藥組合物與用途
本發明是有關於一種胺基喹唑啉衍生物，以及其醫藥組合物與用途，特別是指一種能用於治療非小細胞肺癌之胺基喹唑啉衍生物，以及其醫藥組合物與用途。
肺癌是目前全世界人類發病率與致死率最高的癌症之一，也是台灣癌症致死的首位。肺癌主要可區分成小細胞肺癌 (small cell lung carcinoma, SCLC)及非小細胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)兩種類型，其中，又以非小細胞肺癌為最常見的肺癌類型，約占肺癌病例中的80~85%。大多數非小細胞肺癌之癌細胞的上皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)會有大量異常表現，所以因突變而有異常表現的EGFR則成為治療非小細胞肺癌之藥物的重要標靶。
厄洛替尼(Erlotinib)為目前用於治療非小細胞肺癌的第一線治療藥物，其是一種小分子的上皮生長因子受體(EGFR)酪胺酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitor，簡稱 EGFR-TKI)。由於Erlotinib會與ATP競爭EGFR於細胞內酪胺酸激酶區之受質結合位置，故能抑制EGFR的活性，進而能阻斷癌細胞生長及存活的訊息傳遞。研究結果顯示，Erlotinib的療效與EGFR本身的突變有關，由於非小細胞肺癌之癌細胞的EGFR在表現子19存在基因缺失(Exon 19 deletion)或在表現子21 (Exon 21)的第858胺基酸位點由原本的白胺酸突變成精氨酸(L858R)，因而使其對Erlotinib會具有敏感性。又由於會發生突變的EGFR主要存在於癌細胞中，幾乎不存在於身體的正常細胞中，因而使身體的正常細胞比較不會受到Erlotinib攻擊，所以Erlotinib相對於傳統的化療藥物會減少許多副作用。
然而，大多數的非小細胞肺癌病患雖然在開始使用EGFR-TKI標靶藥物(如Erlotinib)時會有很好的療效，但於治療一段時間後，藥效就會大幅地降低並產生抗藥性，臨床使用此類藥物的治療患者平均約延長1~2年的存活期。目前研究發現，抗藥性的產生主要是與癌細胞之EGFR上的第二個點突變有關，其是在EGFR的第790胺基酸產生突變，由原本的蘇胺酸變異成蛋胺酸(T790M)，且T790M突變點是位於EGFR與ATP結合位置上，會阻擋EGFR與EGFR-TKI藥物的結合，進而提高了EGFR與ATP的結合能力，增強EGFR的活性。臨床數據顯示，對EGFR-TKI藥物產生抗藥性的非小細胞肺癌病患中，約有50%病患之癌細胞的EGFR上的第790胺基酸會產生突變，導致癌細胞產生抗藥性並快速生長與轉移，使病情迅速惡化。此外，有其它研究也顯示，對EGFR-TKI藥物產生抗藥性的部分原因，也可能是與K-RAS等基因的異常突變有關。由前述說明可知，目前治療非小細胞肺癌之標靶藥物仍存有抗藥性問題而有待持續研發。
鑒於現有用於治療非小細胞肺癌之EGFR-TKI標靶藥物Erlotinib所具有癌細胞會因EGFR發生突變或K-RAS發生突變而產生抗藥性的問題，本案申請人首先研發出一種新穎的胺基喹唑啉衍生物，其對具有EGFR突變的非小細胞肺癌及K-RAS突變的非小細胞肺癌之癌細胞的毒殺效果較Erlotinib好，因而能有效用於治療非小細胞肺癌。
因此，本發明的第一目的，即在提供一種新穎的胺基喹唑啉衍生物。
於是，本發明胺基喹唑啉衍生物如下式(I)所示： (I) 其中，A為碘(I)或白蛋白(albumin)，且當A為碘時，m為1，n為0；以及當A為白蛋白時，m為1至7的整數，n為1。
因此，本發明的第二目的，即在提供一種用於治療非小細胞肺癌的醫藥組成物，其包含前述的胺基喹唑啉衍生物。
因此，本發明的第三目的，即在提供一種前述的胺基喹唑啉衍生物供應用於製備一用來治療非小細胞肺癌之藥物的用途。
本發明的胺基喹唑啉衍生物對於具有EGFR突變的非小細胞肺癌及K-RAS突變的非小細胞肺癌具有優於Erlotinib之癌細胞毒殺效果，因而能有效用於治療非小細胞肺癌。
以下將就本發明內容進行詳細說明：
[ 胺基喹唑啉衍生物 ]
本發明式(I)的胺基喹唑啉衍生物，其A(碘或白蛋白)與胺基喹唑啉骨架之間為共價鍵結。此外，m的數值表示會與A產生共價鍵結之基團的數量，舉例說明，當A為白蛋白且m為2及n為1時，表示式(I)會有如下式(IV)的結構式。 (IV)
較佳地，本發明式(I)中的白蛋白為血清白蛋白(serum albumin)。該血清白蛋白例如但不限於是牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)或人類血清白蛋白(human serum albumin, HSA)。
較佳地，該胺基喹唑啉衍生物如下式(II)所示。 (II)
較佳地，該胺基喹唑啉衍生物如下式(III)所示。更佳地，該式(III)的m為7。 (III)
[ 醫藥組成物 ]
較佳地，本發明用於治療非小細胞肺癌的醫藥組成物，其非小細胞肺癌是EGFR突變的非小細胞肺癌和/或K-RAS突變的非小細胞肺癌。
較佳地，本發明的醫藥組成物還包含一醫藥上可接受之載劑。該醫藥上可接受之載劑包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
[ 用途 ]
較佳地，本發明胺基喹唑啉衍生物供應用於製備一用來治療非小細胞肺癌之藥物的用途，其非小細胞肺癌是EGFR突變的非小細胞肺癌和/或K-RAS突變的非小細胞肺癌。
本發明將就以下實施例來作進一步說明，但應瞭解的是，該實施例僅為例示說明，而不應被解釋為本發明實施的限制。
＜ 比較例 1＞
比較例1的胺基喹唑啉衍生物是依據下列[反應式I]所製得。其中，反應式中的Bn表示為苄基(benzyl group)。 [ 反應式 I] 製備例 1 3- 羥基 -4- 甲氧基苯甲腈 3-hydroxy-4-methoxybenzonitrile 混合異香草醛(Isovanillin, 12.4 g, 81.5 mmol)、甲酸鈉(sodium formate, 13.3 g, 195.6 mmol)及甲酸(formic acid, 65.0 mL)並加熱至85℃，接著於30分鐘內分批加入 羥胺鹽酸鹽(hydroxylamine hydrochloride, 7.9 g, 114.1 mmol)後，於85℃下經隔夜加熱反應。使經隔夜加熱反應後的溶液冷卻至室溫並倒入飽和氯化鈉水溶液(300 mL)中，再經過濾及水清洗後，得到粗產物。接著使該粗產物溶於乙醚(ether)中並以硫酸鎂(MgSO 4)進行除水，最後利用旋轉蒸發(rotavapor)法於高度真空下乾燥後，得到呈米白色固體之製備例1 (3-羥基-4-甲氧基苯甲腈)。產率為10.3 g (85 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：7.21-7.18 (dd, J=2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.16-7.15 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.80 (br, 1H), 3.95 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：150.2, 145.9, 125.6, 119.0, 117.6, 110.8, 104.6, 56.16。 製備例 2 3- 苄氧基 -4- 甲氧基苯甲腈 3-(benzyloxy)-4-methoxybenzonitrile 先使製備例1 (5.0 g, 33.5 mmol)溶於乙腈(acetonitrile, 50.0 mL)中，再加入碳酸鉀(potassium carbonate, 9.3 g, 67.0 mmol)及溴化苄(benzyl bromide, 6.7 mL, 58.7 mmol)後，得到混合物。接著使該混合物進行迴流(reflux) 1.5小時後，冷卻並進行過濾，得到濾液。使該濾液進行減壓蒸發後，先溶於乙酸乙酯(EtOAc)並以水清洗，接著利用乙酸乙酯萃取水層，再收集所有的乙酸乙酯層並以MgSO 4進行除水後，再進行蒸發，得到粗產物。最後利用管柱層析法[固定相：230-400 mesh的矽膠(silica gel)，流動相：25-30% 乙酸乙酯/正己烷(hexane)]純化該粗產物，得到呈白色固體之製備例2 (3-苄氧基-4-甲氧基苯甲腈)。產率為8.0 g (99 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3,), δ(ppm)：7.43-7.31 (m, 5H), 7.29-7.27 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1H), 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1H), 6.92-6.90 (d, J=8.2 Hz, 1H), 5.14 (s, 2H), 3.92 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：153.5, 148.2, 135.9, 128.7, 128.3, 127.3, 126.8, 119.2, 126.8, 119.2, 116.5, 11.6, 103.7, 71.2, 56.1。 製備例 3 5- 苄氧基 -4- 甲氧基 -2- 硝基苯甲腈 5-(benzyloxy)-4-methoxy-2-nitrobenzonitrile 於冰浴下，滴加濃硝酸(70%, 50.0 mL)至製備例2 (5.0 g, 20.8 mmol)的冰醋酸(glacial acetic acid, 20.0 mL)溶液中。當濃硝酸滴加完成後，進行攪拌1小時，得到混合物。接著將該混合物倒入水中，先進行過濾再以水清洗後，得到沉澱物，最後使該沉澱物溶於乙酸乙酯中，得到混合溶液。先以水、2N氫氧化鈉溶液及鹽水(brine)清洗該混合溶液，再以MgSO 4進行除水，最後經蒸發後，得到呈淡黃白色固體之製備例3 (5-苄氧基-4-甲氧基-2-硝基苯甲腈)。產率為4.7 g (80 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：7.80 (s, 1H), 7.42-7.38 (m, 5H), 7.23 (s, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.02 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：152.7, 152.4, 142.9, 134.4, 129.0, 128.9, 127.4, 117.1, 115.5, 108.1, 100.6, 71.8, 56.8。 製備例 4 2- 胺基 -5-( 苄氧基 )-4- 甲氧基苯甲腈 2-amino-5-(benzyloxy)-4-methoxybenzonitrile 將濃鹽酸(10.0 mL)及醋酸(35.0 mL)加入無水氯化亞錫(SnCl 2, 5.0 mg, 26.4 mmol)後，得到前驅溶液。將製備例3 (2.5 g, 8.7 mmol)的二氯甲烷(DCM, 30.0 mL)溶液加入該前驅溶液中，並於60℃下攪拌1小時後，冷卻至室溫，得到混合溶液。加入2 M氫氧化鈉溶液至該混合溶液中，並調整該混合溶液呈鹼性(pH=10)後，以二氯甲烷進行萃取，並以MgSO 4進行除水，接著經蒸發後，得到粗產物。最後利用管柱層析法(固定相：70-230 mesh的矽膠，流動相：40% 乙酸乙酯/正己烷)純化該粗產物，得到呈米白色固體之製備例4 [2-胺基-5-(苄氧基)-4-甲氧基苯甲腈]。產率為1.6 g (73 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：7.41-7.29 (m, 5H), 6.81 (s, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.01 (s, 2H), 4.18 (b, 2H), 3.85 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：155.5, 146.6, 140.7, 136.6, 128.6, 128.1, 127.5, 118.1, 117.2, 99.1, 86.4, 72.2, 55.9。 比較例 1 6-( 苄氧基 )-N-(3- 乙炔苯基 )-7- 甲氧基喹唑啉 -4- 胺 6-(benzyloxy)-N-(3-ethynylphenyl)-7-methoxyquinazolin-4-amine 先將二甲基甲醯胺二甲基縮醛(dimethylformamide dimethylacetal, 4 mL)加入製備例4 (1.0 g, 3.9 mmol)中並進行迴流2小時，再於高度真空下進行旋轉蒸發及乾燥半小時除去溶劑後，得到褐色中間產物1 (formamidine)。將乙酸(AcOH, 10.0 mL)及3-胺基苯乙炔(3-ethynylaniline, 0.48 mL, 4.3 mmol)加入該中間產物1中並於130℃下進行迴流1小時後，冷卻至室溫，接著進行過濾並以水清洗過濾所得到的固體沉澱物後，即得到粗產物。使該粗產物先溶於乙酸乙酯中，並以MgSO 4進行除水，再於高度真空下進行蒸發及乾燥後，得到呈白色固體之比較例1 [6-(苄氧基)-N-(3-乙炔苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺]。產率為1.4 g (93 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：8.66 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.67 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.39-7.24 (m, 9H), 7.15 (s, 1H), 5.13 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.08 (s, 1H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：156.2, 155.4, 153.6, 148.6, 147.7, 138.7, 135.9, 129.0, 128.7, 128.3, 127.8, 127.4, 125.0, 122.8, 122.2, 109.0, 108.0, 83.3, 77.5, 71.4, 56.2；LRMS-EI +(m/z)：382 ([M+H] +, 25), 381 ([M] +, 100), 380 ([M‒H] +, 28), 290(28), 275(22), 258(19), 246(13), 230(9), 219(5), 156(4), 91(22)； HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +： C 24H 20N 3O 2的理論計算值為382.1556，實際值為382.1554。而中間產物1的 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：7.55 (s, 1H), 7.41-7.26 (m, 5H), 6.96 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.07 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.05 (s, 6H)。
＜ 比較例 2＞
比較例2的胺基喹唑啉衍生物是依據下列[反應式II]與[反應式III]所製得。 [ 反應式 II] [ 反應式 III] 製備例 5 1-氯-2- 甲氧基乙烷 1-chloro-2-methoxyethane 於蒸餾設備的圓底燒瓶中混合碳酸鈣(calcium carbonate, 27.3 g, 273.2 mmol)、硫酸二甲酯(dimethyl sulfate, 23.5 mL, 248.4 mmol)及2-氯乙醇(2-chloroethanol, 16.6 mL, 248.4 mmol)，並加熱至120-130℃，直到蒸餾停止(過夜)後，得到蒸餾物。先以乙醚稀釋該蒸餾物並以2N氫氧化鈉溶液清洗，再利用乙醚萃取水層，接著收集所有的乙醚層並以MgSO 4進行除水，最後再進行一般蒸餾[收集蒸氣溫度於88-90℃時的餾分(fractions)]後，得到呈無色液體之製備例5 (1-氯-2-甲氧基乙烷)。產率為10.2 g (43 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：3.62-3.57 (m, 4H), 3.37 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：72.5, 58.8, 42.7。 製備例 6 4- 甲氧基 -3-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯甲醛 4-methoxy-3-(2-methoxyethoxy)benzaldehyde 將製備例5 (4.1 mL, 44.7 mmol)加入含有異香草醛(4.0 g, 26.3 mmol)、碳酸鉀(6.5 g, 47.3 mmol)及二甲基甲醯胺(DMF, 30 mL)的混合物中後，於85-90℃下加熱20小時，接著冷卻至室溫，再以布氏(Büchner)漏斗過濾並以乙酸乙酯清洗殘留物，得到乙酸乙酯濾液。最後將該乙酸乙酯濾液以2N氫氧化鈉溶液、水及鹽水清洗後，先以MgSO 4進行除水，再進行濃縮後，得到呈黃色油狀物之製備例6 [4-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯甲醛]。產率為5.3 g (97 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：9.83 (s, 1H), 7.47-7.42 (m, 2H), 6.97-6.95 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.23-4.21 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.81-3.79 (m, 2H), 3.44 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：190.7, 154.9, 148.8, 129.9, 126.8, 110.8, 110.7, 70.6, 68.2, 59.0, 56.0；LRMS-EI +(m/z)：211 ([M+H] +, 13), 210 ([M] +, 100), 152(67), 123(4), 95(3), 77(5), 59(67)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 11H 15O 4理論計算值為211.0970，實際值為211.0971。 製備例 7 4- 甲氧基 -3-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯甲腈 4-methoxy-3-(2-methoxyethoxy)benzonitrile 將甲酸鈉(sodium formate, 1.5 g, 21.9 mmol)及甲酸(23 mL)加入製備例6 (2.3 g, 10.9 mmol)，並攪拌10分鐘後，得到澄清黃色溶液。將羥胺鹽酸鹽(hydroxylamine hydrochloride, 2.3 g, 32.8 mmol)加入該澄清黃色溶液中，並於85℃下攪拌12小時後，移除溶劑，得到殘留物。接著將該殘留物倒入冷水中並以乙酸乙酯(75 mL)進行萃取3次後，收集所有的乙酸乙酯層並以水及鹽水清洗，再以MgSO 4進行除水後，於高度真空下進行濃縮及乾燥，得到呈淡橘色油狀物之製備例7 [4-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯甲腈]。產率為2.2 g (97 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：7.22-7.19 (dd, J=2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J=1.6 Hz, 1H), 6.82-6.80 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4.10-4.07 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.72 (m, 2H), 3.37 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：153.4, 148.5, 126.8, 119.2, 116.0, 111.5, 103.6, 70.7, 68.7, 59.2, 56.0；LRMS-EI +(m/z)：208 ([M+H] +, 22), 207 ([M] +, 100), 149(57), 134(22), 117(8), 102(7), 77(4), 59(96)； HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +： C 11H 14NO 3理論計算值為208.0974，實際值為208.0976。 製備例 8 4- 甲氧基 -5-(2- 甲氧基乙氧基 )2- 硝基苯甲腈 4-methoxy-5-(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile 滴加製備例7 (1.0 g, 4.8 mmol)的醋酸(4 mL)溶液到冰的濃硝酸(70%, 10 mL)中並於室溫下攪拌12小時，接著倒入水中，再經過濾及大量水清洗後，得到固體沉澱物。先使該固體沉澱物溶於二氯甲烷中並以2N氫氧化鈉溶液、水及鹽水清洗，再以MgSO 4進行除水，接著在高度真空下進行濃縮及乾燥後，得到呈淡黃色粉末之製備例8。產率為1.0 g (82 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：7.78 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 4.30-4.27 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.83-3.81 (m, 2H), 3.44 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：152.9, 152.5, 142.8, 116.8, 115.5, 108.0, 100.6, 70.4, 69.4, 59.3, 56.7；LRMS-EI +(m/z)：253 ([M+H] +, 16), 252 ([M] +, 100), 207(2), 194(3), 163(3), 136(4), 121(2), 104(4), 59(99)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 11H 13N 2O 5的理論計算值為253.0824，實際值為253.0825。 製備例 9 2- 胺基 -4- 甲氧基 -5-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯甲腈 2-amino-4-methoxy-5-(2-methoxyethoxy)benzonitrile 將製備例8 (0.5 g, 2.0 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液加入二氯亞錫(1.2 g, 5.9 mmol)的濃鹽酸(2 mL)與醋酸(7 mL)溶液中，得到反應混合物。使該反應混合物於80℃下攪拌5小時，接著冷卻至冰浴溫度，並以6N氫氧化鈉溶液調整其pH值至12後，再以二氯甲烷(50 mL)萃取三次。先收集所有的二氯甲烷層並冷卻至冰浴溫度，再以6N鹽酸溶液調整其pH值至1後，即會產生分層。水層以二氯甲烷清洗後，先以6N氫氧化鈉溶液調整其pH值至12後，再以二氯甲烷(50 mL)萃取3次，接著先收集所有的二氯甲烷層並以MgSO 4進行除水，再於高度真空下進行濃縮及乾燥後，得到褐色製備例9 [2-胺基-4-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)苯甲腈]的固體。其中，產率為350.0 mg (82 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：6.85 (s, 1H), 6.21 (s, 1H), 4.22 (br, 2H), 4.04-4.02 (t, J=4.6 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.72-3.69 (t, J=4.9 Hz, 2H), 3.41 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3), δ(ppm)：155.5, 146.7, 140.9, 118.0, 116.9, 99.0, 86.3, 70.9, 69.6, 59.1, 55.8。 比較例 2 N-(3- 乙炔苯基 )-7- 甲氧基 -6-(2- 甲氧基乙氧基 ) 喹唑啉 -4- 胺 N-(3-ethynylphenyl)-7-methoxy-6-(2-methoxyethoxy) quinazolin-4-amine 先將二甲基甲醯胺二甲基縮醛(1.3 mL)加入製備例9 (0.32 g, 1.4 mmol)中並進行迴流1.5小時，再於高度真空下進行乾燥半小時，以完全除去溶劑後，得到褐色殘留物。加入醋酸(3.2 mL)及3-胺基苯乙炔(178.0 µL, 1.5 mmol)至該褐色殘留物中並於120℃下加熱1.5小時後，冷卻至室溫，接著倒入水中並以乙酸乙酯(25 mL)及二氯甲烷(25 mL)進行萃取3次。最後收集所有的有機層並以MgSO 4進行除水，及以甲醇進行濃縮與研製後，得到呈白色固體之比較例2 [N-(3-乙炔苯基)-7-甲氧基-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺]。產率為250.0 mg (50 wt%)； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)，δ(ppm)：9.44 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.91-7.89 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.41-7.37 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.21-7.19 (m, 2H), 4.28-4.26 (t, J=4.3 Hz, 2H), 4.18 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.78-3.76 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.35 (s, 3 H)； 13C NMR (100.6 MHz, DMSO-d 6)，δ(ppm)：156.5, 154.8, 153.2, 148.5, 147.5, 140.2, 129.3, 126.7, 125.1, 123.0, 122.2, 109.3, 107.8, 103.0, 83.9, 80.9, 70.5, 68.5, 58.7, 56.2；LRMS-EI +(m/z)：350 ([M+H] +, 28), 349 ([M] +, 87), 348 ([M‒H] +, 100), 290(80), 275(24), 259(6), 247(8), 230(5), 117(7), 59(10)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 20H 20N 3O 3的理論計算值為350.1505實際值為350.1504。
＜ 比較例 3＞
比較例3的胺基喹唑啉衍生物是依據下列[反應式IV]與[反應式V]所製得。其中，反應式中的Ac表示為乙醯基(acetyl group)。 [ 反應式 IV] [ 反應式 V] 製備例 10 2- 羥基 -5-(2- 甲氧基乙氧基 )-2- 硝基苯甲腈 4-hydroxy-5-(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile 於密封試管(seal tube)中放入製備例8 (1.0 g, 3.9 mmol)及氯化鋁(aluminum chloride, 1.6 g, 11.9 mmol)，再加入二氯甲烷(20 mL)並於70℃下攪拌2小時後，先以冰浴冷卻，接著以1N鹽酸溶液(10 mL)終止反應(quench)，再以二氯甲烷(50 mL)萃取3次。萃取所得到的二氯甲烷層以2N氫氧化鈉溶液調整pH值至10後，即發生分層。水層再次以二氯甲烷清洗並冷卻至冰浴溫度後，以6N鹽酸溶液調整其pH值至2，並以二氯甲烷(50 mL)萃取5次。收集所有的二氯甲烷層並以MgSO 4進行除水及進行濃縮後，得到呈黃色固體之製備例10 [2-羥基-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯甲腈]。產率為710.0 mg (75 wt%)； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)，δ(ppm)：11.31 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 4.30 (s, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.30 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, DMSO-d 6)，δ(ppm)：152.2, 151.3, 142.5, 118.4, 116.5, 112.5, 98.1, 70.4, 69.3, 58.6；LRMS-EI +(m/z)：239 ([M+H] +, 28), 238 ([M] +, 98), 206(85), 194(7), 176(9), 132(4), 104(6), 88(3), 76(5), 59 (100)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M] +： C 10H 10N 2O 5的理論計算值為238.0590，實際值為238.0590。 製備例 11 2- 溴乙基 乙酸酯 2-bromoethyl acetate 於冰浴溫度及氬氣環境下，滴加乙酸酐(acetic anhydride, 2.0 mL, 20.8 mmol)至2-溴乙醇(2-bromoethanol, 2.0 g, 16.0 mmol)及4-(氮,氮-二甲胺基)吡啶[4-(N,N-dimethylamino) pyridine, 2.6 g, 21.6 mmol]的二氯甲烷(20 mL)溶液中後，得到反應混合物。接著先於室溫下攪拌該反應混合物15小時，再倒入水中後，發生分層。水層以二氯甲烷再次萃取後，收集所有的二氯甲烷層並進行濃縮，得到呈黃色液體之製備例11(2-溴乙基乙酸酯)。產率為2.2 g (82 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：4.35-4.31 (td, J=1.6, 6.4 Hz, 2H), 3.49-3.45 (td, J=1.6, 6.4 Hz, 2H), 2.06-2.05 (d, J=1.6 Hz, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：170.4, 63.7, 28.6, 20.7。 製備例 12 2-[4- 氰基 -2-(2- 甲氧基乙氧基 )-5- 硝基苯氧 基 ] 乙酸乙酯 2-[4-cyano-2-(2-methoxyethoxy)-5-nitrophenoxy]ethyl acetate 將製備例11 (1.7 g, 10.0 mmol)加入含有製備例10(1.6 g, 6.7 mmol)、碳酸鉀(1.2 g, 8.7 mmol)及二甲基甲醯胺(16 mL)的混合物中後，於85℃下攪拌15小時，接著冷卻至室溫，再以布氏(Büchner)漏斗過濾並以乙酸乙酯清洗殘留物，得到乙酸乙酯濾液。將該乙酸乙酯濾液以飽和碳酸氫鈉(NaHCO 3)溶液、水及鹽水清洗後，再以MgSO 4進行除水並進行濃縮後，得到粗產物。最後利用管柱層析法(固定相：70-230 mesh的矽膠；流動相：40-60% 乙酸乙酯/正己烷)純化該粗產物，得到呈淡黃色固體的製備例12 {2-[4-氰基-2-(2-甲氧基乙氧基)-5-硝基苯氧基]乙酸乙酯}。產率為1.9 g (88 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：7.83 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 4.51-4.48 (t, J=4.4 Hz, 2H), 4.37-4.35 (t, J=5.0 Hz, 2H), 4.29-4.27 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.82-3.80 (t, J=3.4 Hz, 2H), 3.45 (s, 3H), 2.10 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：170.7, 153.2, 151.4, 142.6, 117.5, 115.4, 109.7, 101.2, 70.4, 69.7, 67.7, 62.0, 59.4, 20.7；LRMS-EI +(m/z)：325 ([M+H] +, 7), 324 ([M] +, 18), 281(2), 206(6), 191(6), 145(5), 87(100), 59(61)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+Na] +：C 14H 16N 2O 7Na的理論計算值為347.0855，實際值為347.0857。 製備例 13 2-[5- 胺基 -4- 胺甲醯基 -2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯氧基 ] 乙酸乙酯 2-[5-amino-4-carbamoyl-2-(2-methoxyethoxy)phenoxy] ethyl acetate 將鐵(1.2 g, 21.5 mmol)加入含有製備例12 (2.0 g, 6.2 mmol)與氯化銨(ammonium chloride, 1.7 g, 30.8 mmol)的甲醇(25 mL)與水(50 mL)溶液後，迴流1小時，得到熱的反應混合物。接著利用經熱甲醇清洗過的矽藻土床(celite bed)過濾該熱的反應混合物，得到濾液。先使該濾液蒸發後，再利用飽和碳酸氫鈉及乙酸乙酯使其分層。水層再次以乙酸乙酯(50 mL)萃取4次。收集所有的乙酸乙酯層，先以MgSO 4進行除水，再進行濃縮後，得到粗產物。最後利用管柱層析法(固定相：230-4000 mesh的矽膠；移動相：2-5% 甲醇/二氯甲烷)純化該粗產物，得到呈褐色膠質油(gummy oil)的製備例13 {2-[5-胺基-4-胺甲醯基-2-(2-甲氧基乙氧基)苯氧基]乙酸乙酯}。產率為1.6 g (83 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：7.04 (s, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.96 (br, 2H), 5.66 (br, 2H), 4.41-4.38 (t, J=4.6 Hz, 2H), 4.13-4.11 (t, J=4.7 Hz, 2H), 4.03-4.01 (t, J=4.3 Hz, 2H), 3.65-3.63 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.05 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：171.1, 170.9, 154.1, 146.9, 139.1, 118.0, 106.0, 101.8, 71.3, 71.0, 66.4, 62.4, 59.0, 20.8；LRMS-EI +(m/z)：313 ([M+H] +, 11), 312 ([M] +, 67), 226(100), 167(24), 150(9), 87(100), 59(9)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+Na] +：C 14H 20N 2O 6Na的理論計算值為335.1219，實際值為335.1219。 製備例 14 2-{[6-(2- 甲氧基乙氧基 )-4- 氧基 -3,4- 二氫喹唑啉 -7- 基 ] 氧 } 乙酸乙酯 2-{[6-(2-methoxyethoxy)-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-7- yl]oxy}ethyl acetate 混合製備例13 (167.0 mg, 0.56 mmol)及二甲基甲醯胺二甲基縮醛(0.8 mL)，並於氬氣及120℃下迴流1.5小時後，於高度真空下移除溶劑及進行乾燥半小時，得到褐色殘留物。將醋酸(1.7 mL)加入該褐色殘留物中並於130℃下加熱2.5小時及於室溫下攪拌10小時，接著倒入水中，先以2N氫氧化鈉溶液使其pH值至10後，再以二氯甲烷(20 mL)萃取4次。最後收集所有的二氯甲烷層，先以MgSO 4進行除水，再於高度真空下進行濃縮及乾燥後，得到呈黃色固體的製備例14 {2-{[6-(2-甲氧基乙氧基)-4-氧基-3,4-二氫喹唑啉-7-基]氧}乙酸乙酯}。產率為144.0 mg (79 wt%)； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)，δ(ppm)：12.09 (b, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.39-4.34 (m, 4H), 4.20-4.18 (t, J=4.1 Hz, 2H), 3.71-3.69 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.04 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：170.9, 162.3, 154.4, 148.7, 145.3, 142.7, 115.9, 109.4, 106.8, 70.6, 68.7, 66.8, 62.2, 59.3, 20.8；LRMS-EI +(m/z)：323 ([M+H] +, 20), 322 ([M] +, 86), 236(8), 22(13), 204(17), 189(16), 178(30), 148(4), 87(100), 59(43)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 15H 19N 2O 6的理論計算值為323.1243；實際值為323.1245。 比較例 3 2-{[4-((3- 乙炔苯基 ) 胺基 )-6-(2- 甲氧基乙氧基 ) 喹唑啉 -7- 基 ] 氧 } 乙酸乙酯 2-{[4-((3-ethynylphenyl)amino)-6-(2-methoxyethoxy) quinazolin-7-yl]oxy}ethyl acetate 先將氯化亞碸(thionyl chloride, 6 mL)加入製備例14 (950.0 mg, 2.9 mmol)中，再加入催化量的二甲基甲醯胺(DMF, 0.1 mL)並於120℃下加熱2小時後，於高度真空下利用旋轉蒸發進行乾燥3小時，得到褐色中間產物2。先將二甲基甲醯胺(10 mL)加入該中間產物2，再加入3-胺基苯乙炔(3-ethynylaniline, 0.4 mL, 3.2 mmol)並於120℃下攪拌2小時後，降溫至室溫，得到反應混合物。先將水加入該反應混合物並經過濾後，得到沉澱物，再以大量水清洗該沉澱物後，得到黃褐色固體。接著先將該黃褐色固體溶於二氯甲烷/甲醇溶劑中，再於高度真空下利用旋轉蒸發進行乾燥後，得到呈黃褐色固體的比較例3 {2-{[4-((3-乙炔苯基)胺基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-7-基]氧}乙酸乙酯}。產率為990.0 mg (80 wt%)； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)，δ(ppm)：9.49 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.91-7.87 (m, 2H), 7.42-7.38 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.22-7.20 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.40-4.39 (m, 4H), 4.30-4.28 (t, J=4.4 Hz, 1H), 4.21 (s, 1H), 3.79-3.77 (t, J=4.6 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 2.05 (s, 3H)； 13C NMR (100.6 MHz, DMSO-d 6)，δ(ppm)：170.7, 156.5, 153.7, 153.2, 148.5, 147.4, 140.2, 129.3, 126.8, 125.2, 109.5, 108.9, 103.9, 83.9, 81.0, 70.5, 69.0, 67.1, 62.5, 58.9, 21.1；LRMS-EI +(m/z)：422 ([M+H] +, 26), 421 ([M] +, 100), 420 ([M‒H] +, 75), 334(74), 302(15), 290(11), 276(47), 116(5), 87(83), 59(10)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 23H 24N 3O 5的理論計算值為422.1716，實際值為422.1714。而中間產物2 (粗產物)的 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：9.04 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.55 (s, br, 4H), 4.40 (s, br, 2H), 3.89 (s, br, 2H), 3.48 (s, 3H), 2.11 (s, 3H)。
＜ 實施例 1 與比較例 4~6＞
實施例1與比較例4~6的胺基喹唑啉衍生物是依據下列[反應式VI]所製得。其中，反應式中的Ac表示為乙醯基(acetyl group)；Ms表示為甲磺酸酯基(methanesulfonyl group)。 [ 反應式 VI] 比較例 4 2-{[4-((3- 乙炔苯基 ) 胺基 )-6-(2- 甲氧基乙氧基 ) 喹唑啉 -7- 基 ] 氧 } 乙 醇 2-{[4-((3-ethynylphenyl)amino)-6-(2-methoxyethoxy) quinazolin-7-yl]oxy}ethanol 先使比較例3 (750.0 mg, 1.8 mmol)溶於甲醇(20 mL)中，再加入5M氫氧化鉀水溶液(1.75 mL)並於室溫下攪拌1.5小時後，利用旋轉蒸發法移除溶劑。接著加入水(50 mL)並充分混合及攪拌15分鐘後，倒出水，得到黏狀物(此步驟需重複2次)。將乙腈加入該黏狀物中，充分混合並利用旋轉蒸發法進行共沸乾燥，以完全除去水後(此步驟需重複3次)，得到粗產物。最後使該粗產物於高度真空下進行乾燥，得到呈黃色固體的比較例4 {2-{[4-((3-乙炔苯基)胺基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-7-基]氧}乙醇}。產率為650.0 mg (97 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：8.76 (br, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.74-7.72 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.22-7.18 (t, J=7.7 Hz, 1H, 7.13-7.12 (d, J=7.4 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.56 (br, 1H), 4.07-4.03 (m, 4H), 3.89 (s, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.03 (s, 1H)； 13C NMR (100.6 MHz, DMSO-d 6)，δ(ppm)：156.5, 154.3, 153.2, 148.6, 147.4, 140.3, 129.2, 126.2, 125.2, 123.0, 122.1, 109.3, 108.5, 103.6, 84.0, 80.8, 70.8, 70.5, 68.7, 59.7, 58.8；LRMS-EI +(m/z)：380 ([M+H] +, 30), 379 ([M] +, 93), 378 ([M‒H] +, 100), 334(12), 320(47), 290(15), 276(46), 259(4), 230(5), 149(6), 59(10)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 21H 22N 3O 4的理論計算值為380.1610，實際值為380.1613。 比較例 5 2-{[4-((3- 乙炔苯基 ) 胺基 )-6-(2- 甲氧基乙氧基 ) 喹唑啉 -7- 基 ] 氧 } 甲基磺酸 乙酯 2-{[4-((3-ethynylphenyl)amino)-6-(2-methoxyethoxy) quinazolin-7-yl]oxy}ethyl methanesulfonate 於冰浴溫度及氬氣下，將甲磺醯氯(methanesulfonyl chloride, 30.0 μL, 0.39 mmol)加入比較例4 (100.0 mg, 0.26 mmol)及4-二甲胺基吡啶(DMAP, 催化劑, 10.0 mg)的吡啶(pyridine, 2.5 mL)溶液後，得到反應混合物。使該反應混合物於室溫下攪拌20小時，接著先以飽和碳酸氫鈉溶液中止反應，再以乙酸乙酯(15 mL)萃取5次。收集所有的乙酸乙酯層，先以MgSO 4進行除水，再進行過濾及濃縮後得到粗產物。最後利用管柱層析法(固定相：230-400 mesh的矽膠；流動相：100%乙酸乙酯至2%甲醇/乙酸乙酯)純化該粗產物，得到呈淡黃色固體的比較例5 {2-{[4-((3-乙炔苯基)胺基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-7-基]氧}甲基磺酸乙酯}。產率為102.0 mg (84 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：8.58 (s, 1H), 7.89 (br, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.73-7.71 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.31-7.27 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.22-7.19 (m, 2H), 7.03 (s, 1H), 4.58-4.56 (t, J=3.9 Hz, 2H), 4.18-4.16 (t, J=4.0 Hz, 2H), 4.14-4.12 (t, J=4.3 Hz, 2H), 3.71-3.69 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.14 (s, 3H), 3.08 (s, 1H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：156.3, 153.6, 153.2, 148.5, 147.0, 138.8, 129.0, 127.8, 125.1, 122.7, 122.5, 109.5, 108.4, 101.9, 83.3, 77.6, 70.7, 68.5, 68.1, 66.3, 59.1, 37.7；LRMS-EI +(m/z)：458 ([M+H] +, 7), 457 ([M] +, 26), 456 ([M‒H] +, 25), 398(44), 338(36), 302(29), 276(28), 125(24), 111(31), 97(33), 85(29), 71(29), 59(16)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 22H 24N 3O 6S的理論計算值為458.1386，實際值為458.1388。 實施例 1 N-(3- 乙炔苯基 )-7-(2- 碘乙氧基 )-6-(2- 甲氧基乙氧基 ) 喹唑啉 -4- 胺 N-(3-ethynylphenyl)-7-(2-iodoethoxy)-6-(2-methoxyethoxy)quinazolin-4-amine 先於密封試管(seal tube)中裝入比較例5 (50.0 mg, 0.1 mmol)及碘化鈉(sodium iodide, 164.0 mg, 1.0 mmol)，再加入丙酮，並於80℃下加熱24小時後，得到反應混合物。接著過濾該反應混合物，並以乙酸乙酯清洗過濾後得到的殘留物。收集所有的濾液並進行濃縮後，得到粗產物。最後利用管柱層析法(固定相：230-400 mesh的矽膠；移動相：100%乙酸乙酯)純化該粗產物，得到呈黃色固體的實施例1 [N-(3-乙炔苯基)-7-(2-碘乙氧基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺基]。產率為39.0 mg (73 wt%)； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：8.64 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.76-7.74 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.37-7.34 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.29-7.27 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 4.40-4.36 (t, J=6.8 Hz, 2H), 4.32-4.30 (t, J=4.6 Hz, 2H), 3.87-3.85 (t, J=4.7 Hz, 2H), 3.52-3.48 (m, 5H), 3.10 (s, 1H)； 13C NMR (100.6 MHz, CDCl 3)，δ(ppm)：156.1, 153.7, 153.7, 148.8, 147.4, 138.6, 129.0, 127.9, 124.9, 122.9, 122.2, 109.3, 109.1, 103.2, 83.3, 77.5, 71.0, 69.7, 69.2, 59.5, 29.7；LRMS-EI +(m/z)：490 ([M+H] +, 24), 489 ([M] +, 100), 430(9), 302(17), 288(6), 275(13), 258(8), 246(7), 230(7), 59 (6)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 21H 21N 3O 3I的理論計算值為490.0628，實際值為490.0631。 比較 例 6 7-(2- 胺基乙氧基 )-N-(3- 乙炔苯基 )-6-(2- 甲氧基乙氧基 ) 喹唑啉 -4- 胺 7-(2-aminoethoxy)-N-(3-ethynylphenyl)-6-(2- methoxyethoxy)quinazolin-4-amine 先於密封試管(seal tube)中裝入實施例1 (20.0 mg)，再加入甲醇氨(methanolic ammonia, 30 %, 3.0 mL)，接著先於室溫下攪拌5小時，再於85℃下攪拌6小時後，得到反應混合物。最後於高度真空下利用旋轉蒸發法進行乾燥，以除去溶劑後，得到比較例6 [7-(2-胺基乙氧基)-N-(3-乙炔苯基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺]的固體。產率為14.0 mg (91 wt%)； 1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4)，δ(ppm)：8.43 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.39-7.35 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.27-7.25 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 4.39-4.37 (t, J=4.2 Hz, 4H), 3.91-3.89 (t, J=4.3 Hz, 2H), 3.53 (s, 1H), 3.50-3.46 (m, 5H)； 13C NMR (100.6 MHz, MeOD-d 4)，δ(ppm)：157.0, 153.3, 152.7, 148.6, 145.9, 139.0, 128.5, 127.4, 125.7, 122.9, 122.7, 109.8, 107.7, 102.8, 82.8, 77.4, 70.3, 68.1, 65.4, 57.9, 38.7；LRMS-EI +(m/z)：379 ([M+H] +, 14), 378 ([M] +, 45), 377 ([M‒H] +, 24), 349(29), 348(93), 335(54), 334(100), 318(36), 304(26), 290(37), 276(68), 260(18), 59(11)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 21H 23N 4O 3的理論計算值為379.1770，實際值為379.1771。
＜ 實施例 2＞
實施例2的胺基喹唑啉衍生物是依據下列[反應式VII]所製得。其中，反應式中的BSA表示為牛血清白蛋白。 [ 反應式 VII] 製備 例 1 5 4-{2-[(4-((3- 乙炔苯基 ) 胺基 )-6-(2- 甲氧基乙氧基 ) 喹唑啉 -7- 基 ) 氧 ] 乙氧基 }-4- 氧丁酸 , 單琥珀 酸鹽 4-{2-[(4-((3-ethynylphenyl)amino)-6-(2-methoxyethoxy)quinazolin-7-yl)oxy]ethoxy}-4-oxobutanoic acid, monosuccinate 將吡啶(1 mL)加入比較例4及丁二酸酐(succinic anhydride, 13.1 mg, 0.13 mmol)的固體混合物中，得到澄清溶液。將4-二甲胺基吡啶(催化劑, 3.0 mg)加入該澄清溶液中並於室溫下攪拌30小時。依據薄膜層析法(TLC)分析結果，反應是於30小時後完成。接著蒸發除去溶劑後，得到呈固體的製備例15 {4-{2-[(4-((3-乙炔苯基)胺基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-7-基)氧]乙氧基}-4-氧丁酸, 單琥珀酸鹽}。產率為62.3 mg (99 wt%)； LRMS-EI +(m/z)：479 ([M] +, 25), 379(100), 378(100), 334(22), 320(99), 302(18), 290(27), 276(89), 259(9), 248 (7), 230(8), 59(18)；HRMS-TOF-ES +(m/z)，[M+H] +：C 25H 26N 3O 7的理論計算值為480.1771，實際值為480.1767。 實施例 2 將水(1 mL)加入含有製備例15 (27.0 mg, 5.6×10 -5mmol)及碳酸鈉(6.0 mg, 5.6×10 -5mmol)的圓底燒瓶中，並於室溫下攪拌10分鐘後，得到前驅溶液。先將磷酸鹽緩衝生理食鹽水(4 mL, PBS溶液, pH=7.54)加入該前驅溶液中，再加入1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳醯二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl, 10.8 mg, 5.6×10 -5mmol)及羥基苯并三唑(HOBt, 8.6 mg, 5.6×10 -5mmol)，並於室溫下攪拌1.5小時後，得到含有中間產物3的混合溶液。接著將牛血清白蛋白(BSA, 50.0 mg, 0.7×10 -6mmol)加入該混合溶液中，並於室溫下攪拌24小時，得到反應混合物。接著使該反應混合物於水中並使用spectra/pro 7透析膜(dialysis membrane, 廠商:MWCO, 型號25000)進行透析(dialysis process)2天。最後將經透析後的反應混合物進行冷凍乾燥後，得到呈白色薄片的實施例2。產率為54.0 mg；MALDI-MS [CCA matrix, (m/z)]為69679.817，即有7個製備例15的分子接至牛血清白蛋白上。
＜ 非小細胞肺癌治療效果測試 ＞
A. 細胞株與細胞 培養：本實驗為使用A549細胞株(ATCC number:CCL-185)及H1975細胞株(ATCC number:CRL-5908)進行測試。A549細胞株為表現原生型EGFR且帶有K-RAS突變(G12S)的非小細胞肺癌細胞株，H1975細胞株為表現EGFR L858R/T790M突變的非小細胞肺癌細胞株。 A549細胞株及H1975細胞株的培養方法及條件如下：將A549細胞株及H1975細胞株置於RPMI-1640培養基(來源:Gibco, Life Technologies, Grand Island, NY, USA)中，且該等細胞株是於具有37℃及5% CO 2環境的潮濕培養箱(humidified incubator；310/Thermo, Forma Scientific, Inc., Marietta, OH)中進行培養。其中，該RPMI-1640培養基添加有10%胎牛血清(FBS)、100 units/mL青黴素(penicillin)、100 µg/mL鏈黴素(streptomycin)及碳酸氫鈉。
B. 細胞存活率分析 (cell viability assay) 方法：本細胞存活率分析是以溴化噻唑藍四氮唑分析(MTT assay)進行，其分析步驟如下：先將所欲測試的細胞(A549或H1975細胞株)於密度為1×10 4cells/well的條件下，置於96-孔盤(96-well plate)中16-20小時，再於該等細胞施加所欲測試的化合物(0.1 mL/well不同濃度的Erlotinib、實施例1~2或比較例1~6，其是以細胞培養基調配不同濃度的化合物)24小時後，以PBS溶液清洗該等細胞，並重新置於新鮮完整的培養基中進行細胞培養2天。接著，使該等細胞與0.5 mg/mL的溴化噻唑藍四氮唑(MTT)於新鮮完整的培養基中進行細胞培養4小時，之後，移除各井中的液體，繼而加入0.1 mL的DMSO並予以混合均勻，存活的細胞會將溴化噻唑藍四氮唑(MTT)轉換成溶在二甲基亞碸(DMSO)時會呈藍紫色的甲䐶(formazan)，因此，本分析實驗是藉由量測甲䐶的吸收度(absorbance)再經計算而得到細胞存活率。甲䐶的吸收度是利用微量盤式分析儀(microplate reader；VERSAmax, Molecular Devices Inc., CA)量測於波長為565 nm時的吸收度；細胞存活率(%)則是將各個經處理過(施加不同濃度的Erlotinib、實施例1~2或比較例1~6)之細胞最終所測得之甲䐶的吸收度分別除以每個實驗中對照組細胞(未施加任何Erlotinib或胺基喹唑啉衍生物)最終所測得之甲䐶的吸收度後，再換算成百分比而得。
C.A549 細胞株之細胞存活率 (%) 分析結果與討論：不同濃度之Erlotinib、實施例1與比較例1~6的胺基喹唑啉衍生物經前述＜B.細胞存活率分析方法＞所得到的A549細胞株之細胞存活率(%)結果如下表1及圖1中所示；不同濃度之厄洛替尼(Erlotinib)與實施例2的胺基喹唑啉衍生物經前述＜B.細胞存活率分析方法＞所得到的A549細胞株之細胞存活率(%)結果如下表2及圖2中所示。其中，化合物濃度(µM)是指體積0.1 mL細胞培養基中之化合物濃度。 表1
化合物濃度( µM) 0 5 10 20 40 60
細胞存活率(%)
Erlotinib 100% 73.8%±2.8 71.7%±3.2 65.9%±2.1 61.2%±3.5 58.5%±3.8
比較例1 100% 79.9%±1.3 74.7%±1.5 73.0%±2.2 71.6%±0.4 63.4%±1.5
比較例2 100% 69.5%±2.5 60.9%±2.4 62.4%±2.5 64.5%±1.7 61.6%±2.8
比較例3 100% 79.3%±5.3 77.5%±1.5 70.1%±1.0 63.0%±2.2 59.5%±1.3
比較例4 100% 74.5%±4.7 68.4%±5.1 63.1%±1.2 60.7%±2.4 57.8%±3.8
比較例5 100% 73.7%±1.2 67.2%±1.3 56.1%±1.8 57.9%±0.8 60.7%±0.8
比較例6 100% 75.4%±1.7 74.8%±0.9 74.1%±1.6 62.7%±0.8 58.6%±1.1
實施例1 100% 32.8%±1.5 30.3%±0.8 26.3%±3.0 28.0%±2.1 24.3%±3.6
表2
化合物濃度( µM) 0 0.5 1 5
細胞存活率(%)
Erlotinib 100% 89.3%±2.2 89.3%±2.3 84.2%±1.7
實施例2 100% 65.3%±0.7 60.8%±1.8 49.8%±1.0
根據表1及圖1的結果可以發現，於相同濃度下，相較於現有的Erlotinib或其它結構的胺基喹唑啉衍生物(比較例1~6)，實施例1的胺基喹唑啉衍生物具有更低的A549細胞株之細胞存活率，此外，再根據表2及圖2的結果也可以發現，於相同濃度下，相較於現有的Erlotinib，實施例2的胺基喹唑啉衍生物也具有更低的A549細胞株之細胞存活率。因此，綜合前述實驗結果說明，實施例1與實施例2的胺基喹唑啉衍生物皆會具有更佳之A549細胞株(表現原生型EGFR且帶有K-RAS突變的非小細胞肺癌細胞株)毒殺效果，證實本發明的胺基喹唑啉衍生物(實施例1與實施例2)對具有K-RAS突變的非小細胞肺癌(K-RAS mutated non-small cell lung cancer)之癌細胞的毒殺效果會較現有的Erlotinib好，因而能有效用於治療非小細胞肺癌。
D.H1975 細胞株之細胞存活率 (%) 分析結果與討論：
不同濃度之Erlotinib與實施例2的胺基喹唑啉衍生物經前述＜B.細胞存活率分析方法＞所得到的H1975細胞株之細胞存活率(%)結果如下表3及圖3中所示。其中，化合物濃度(µM)是指體積0.1 mL細胞培養基中之化合物濃度。 表3
化合物濃度( µM) 0 0.5 1 5
細胞存活率(%)
Erlotinib 100% 98.4%±2.7 93.1%±2.5 75.8%±4.5
實施例2 100% 79.3%±2.2 75.1%±1.4 41.4%±3.3
根據表3及圖3的結果可以發現，於相同濃度下，相較於現有的Erlotinib，實施例2的胺基喹唑啉衍生物也具有更低的H1975細胞株之細胞存活率。因此，由前述實驗結果說明，實施例2的胺基喹唑啉衍生物會具有更佳之H1975細胞株(表現EGFR L858R/T790M突變的非小細胞肺癌細胞株)毒殺效果，證實本發明的胺基喹唑啉衍生物(實施例2)對具有EGFR突變的非小細胞肺癌(EGFR-mutated non-small cell lung cancer)之癌細胞的毒殺效果會較現有的Erlotinib好，因而能有效用於治療非小細胞肺癌。
綜上所述，本發明的胺基喹唑啉衍生物，其對具有EGFR突變的非小細胞肺癌及K-RAS突變的非小細胞肺癌之癌細胞的毒殺效果較Erlotinib好，因而能有效用於治療非小細胞肺癌，故確實能達成本發明的目的。
惟以上所述者，僅為本發明的實施例而已，當不能以此限定本發明實施的範圍，凡是依本發明申請專利範圍及專利說明書內容所作的簡單的等效變化與修飾，皆仍屬本發明專利涵蓋的範圍內。
本發明的其他的特徵及功效，將於參照圖式的實施方式中清楚地呈現，其中： 圖1是一折線圖，說明實施例1、Erlotinib與比較例1~6於不同濃度時之A549細胞株的細胞存活率(%)； 　圖2是一折線圖，說明實施例2與Erlotinib於不同濃度時之A549細胞株的細胞存活率(%)；及 　圖3是一折線圖，說明實施例2與Erlotinib於不同濃度時之H1975細胞株的細胞存活率(%)。

Claims (8)

  1. 一種胺基喹唑啉衍生物，該胺基喹唑啉衍生物如下式(III)所示：其中，為白蛋白，且m為1至7的整數。
  2. 如請求項1所述的胺基喹唑啉衍生物，其中，該白蛋白為血清白蛋白。
  3. 如請求項1所述的胺基喹唑啉衍生物，其中，式(III)的m為7。
  4. 一種用於治療非小細胞肺癌的醫藥組成物，其包含如請求項1所述的胺基喹唑啉衍生物。
  5. 如請求項4所述的醫藥組成物，其中，該非小細胞肺癌是EGFR突變的非小細胞肺癌和/或K-RAS突變的非小細胞肺癌。
  6. 如請求項4或5所述的醫藥組成物，還包含一醫藥上可接受之載劑。
  7. 一種如請求項1所述的胺基喹唑啉衍生物供應用於製備一用來治療非小細胞肺癌之藥物的用途。
  8. 如請求項7所述的用途，其中，該非小細胞肺癌是EGFR突變的非小細胞肺癌和/或K-RAS突變的非小細胞肺癌。
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