TWI567076B - 經雙取代之苯并噻吩基－吡咯并三及其用途 - Google Patents

經雙取代之苯并噻吩基－吡咯并三及其用途 Download PDF

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Description

經雙取代之苯并噻吩基-吡咯并三 及其用途
本發明係有關具有蛋白質酪胺酸激酶抑制劑活性之新穎之經取代之5-(1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺衍生物、此等化合物之製法、包含此等化合物之醫藥組合物、及此等化合物或組合物於治療增生性病變，特定言之癌症與腫瘤疾病上之用途。
癌症為全世界之第一大死因，於2008年有760萬人(佔所有死亡人數約13%)死於癌症。到2030年全世界因癌症死亡的人數將持續上升超過1100萬人(2011年2月WHO來源第297號文件(Fact Sheet No.297))。
有很多種方式可能造成癌症，其也成為癌症不容易治療的原因。其中一種可能發生細胞轉形的方式為遺傳改變。人類基因體計劃完成後，已顯示人類癌症基因之基因體不穩定性與異質性。最近判別此等遺傳變化之策略已加速發現癌症-基因過程。基因異常可能例如：造成蛋白質過度表現，因此造成此等蛋白質之非生理性活化。有一類會衍生許多種致癌蛋白質之蛋 白質家族為酪胺酸激酶，特定言之受體酪胺酸激酶(RTK)。過去20年來，有許多研究已證實RTK所介導訊號轉導於造成癌症之不良細胞生長上之重要性。近年來，已使用酪胺酸激酶之選擇性小分子抑制劑作為新一類之抗腫瘤生成劑達成臨床上可靠之結果[Swinney與Anthony,Nature Rev.Drug Disc.10(7),507-519(2011)]。
纖維母細胞生長因子(FGF)與其受體(FGFR)已形成獨特且不同之訊號轉導系統之一部分，在涵蓋胚胎發育及成人病理生理學各種不同方面之各種不同生物過程中扮演重要角色[Itoh與Ornitz,J.Biochem.149(2),121-130(2011)]。FGF透過FGFR結合性，以空間與時間的方式刺激寬廣範圍之細胞功能，包括移動、增生、分化與存活。
FGF家族包括18種分泌之多肽生長因子，其會與表現在細胞表面上之4種高度保留之受體酪胺酸激酶(FGFR-1至-4)結合。此外，FGFR-5可與FGF結合，但沒有激酶功能部位，因此不需要細胞內訊號轉導。有許多轉錄與轉譯過程會加強配位體/受體交互作用之特異性，經由交替起始轉錄、交替黏接與截斷C-末端，產生多種同功型。各種不同硫酸乙醯肝素醣蛋白(例如：連接素(syndecans))可為FGF/FGFR複合物之一部份，且強力影響FGF誘發訊號轉導反應之能力[Polanska等人之Developmental Dynamics 238(2),277-293(2009)]。FGFR為由三個細胞外似免疫球蛋白功能部位、一個單次穿膜功能部位、與一個細胞內二聚合酪胺酸激酶功能部位組成之細胞表面受體。FGF之結合作用可以更接近細胞內激酶，使其可以彼此進行轉磷酸化作用。已經判別出7種磷酸化部位(例如：FGFR -1中之Tyr463、Tyr583、Tyr585、Tyr653、Tyr654、Tyr730與Tyr766)。
有些此等磷酸酪胺醯基係作為下游訊號轉導分子之停靠部位，其本身亦可被FGFR直接磷酸化，因而活化多種訊號轉導途徑。因此，MAPK訊號轉導串聯過程涉及細胞生長與分化，PI3K/Akt訊號轉導串聯過程涉及細胞存活及決定細胞命運，而PI3K與PKC訊號轉導串聯過程具有控制細胞極性之功能。現已判別FGF訊號轉導之數種回饋抑制劑，且包括Spry(Sprouty)與Sef(類似FGF之表現)家族之成員。此外，在某些情況下，係由前-Golgi成員釋出FGFR至細胞質液中。受體與其配位體(FGF-2)係共同轉運至細胞核內，其機轉涉及轉運受體(importin)，且參與CREB-結合性蛋白質(CBP)複合物(其係作為基因活化閘控因子之常見且必需之轉錄共活化子)。已觀察到FGF-2、FGFR-1及FGFR-2之免疫組織表現與其細胞質及細胞核腫瘤細胞定位之間之相關性。例如：亦在肺腺癌瘤之細胞核階段發現此關係，更強調該複合物在細胞核之活性角色[Korc與Friesel,Curr.Cancer Drugs Targets 5,639-651(2009)]。
FGF廣泛表現在發展中及成人組織中，並在各種不同正常與病理過程(包括組織發展、組織再生、血管新生、腫瘤變性、細胞移動、細胞分化、與細胞存活)中扮演重要角色。此外，作為促血管新生因子之FGF亦涉及對血管內皮生長因子受體-2(VEGFR-2)抑制作用產生抗性之現象[Bergers與Hanahan,Nat.Rev.Cancer 8,592-603(2008)]。
最近之訊號轉導網路之致癌基因體型態分析證實異常FGF訊號轉導在造成有些常見人類癌症中扮演重要角色 [Wesche等人之Biochem.J.437(2),199-213(2011)]。許多人類癌症(如：腦癌、頭與頸癌、胃癌與卵巢癌)中已說明依賴配位體之FGFR組成型訊號轉導。已在惡性病(如：骨髓增生性疾病)中判別FGFR-突變型及FGFR-基因內轉位。值得注意的是，亦在腫瘤細胞中發現此相同突變為許多種發展病變之原因(例如：出現在軟骨發育不全與發育不全性侏儒中之突變，其導致二聚合化，且因此組成型活化FGFR-3，亦經常出現在膽囊癌中)。促進二聚合化之突變係一種可提高FGFR之配位體依賴性訊號轉導之機轉。其他位在FGFR之激酶功能部位內部或外部之突變均可能改變功能部位之構形，產生永久性活性激酶。
染色體區8p11-12(FGFR-1之基因體位置)之擴增為常出現在乳癌中之局部擴增，其發生在約10%乳癌中，主要出現在雌激素受體-陽性癌症。亦有報告指出FGFR-1擴增出現在非小細胞肺部鱗狀細胞癌，且以低發生率出現在卵巢癌、膽囊癌與橫紋肌肉瘤中。同樣地，約10%胃癌出現FGFR-2擴增，其與預後差之擴散型癌症有關。此外，發現位在FGFR-1至-4之多種單一核苷酸多型性(SNP)與發展出選擇性癌症之風險提高相關，或有報告指出其與預後差(例如：乳癌、結腸癌與肺腺癌中之FGFR-4 G388R對偶基因)相關。此等SNP促成癌症之直接角色仍有爭議。
總言之，已進行許多活體外與活體內試驗，其證實FGFR-1至-4為重要之癌症標靶，且已有深入的文獻綜合說明此等發現[參見例如：Heinzle等人之Expert Opin.Ther.Targets 15(7),829-846(2011)；Wesche等人之Biochem.J.437(2),199-213(2011)；Greulich與Pollock,Trends in Molecular Medicine 17(5), 283-292(2011)；Haugsten等人之Mol.Cancer Res.8(11),1439-1452(2010)]。已採用數種策略來減弱人類腫瘤中異常FGFR-1至-4訊號轉導，其中特別包括阻斷性抗體與小分子抑制劑。目前臨床上發展許多種選擇性小分子FGFR抑制劑，如：AZD-4547(AstraZeneca)與BJG-398(Novartis)。
儘管近年來癌症療法已達到顯著之進步，但仍需繼續判別出具有改善性質之新穎抗癌化合物，如：更高效力、更高選擇性、降低毒性與/或更佳耐受性。因此，根據本發明計畫解決之技術問題在於提供對FGFR激酶具有抑制活性之替代化合物，因此可為治療FGFR-介導之疾病(特定言之癌症與其他增生性病變)提供新的醫療選項。
具有9-或10-員雙環狀雜芳基取代基之稠合雜-5,6-雙環激酶抑制劑已分別揭示於WO 2007/061737-A2與WO 2005/097800-A1。此等化合物基於其對mTOR(雷帕黴(Rapamycin)之哺乳動物標靶)與/或IGF-1R(第1型似胰島素生長因子受體)激酶之抑制作用，因此據稱適用於治療癌症與其他疾病。此外，與抑制激酶有關之雜-5,6-雙環狀模板結構已特別說明於WO 01/19828-A2、WO 2007/079164-A2與WO 2010/051043-A1。
對許多種蛋白質激酶具有多種不同抑制型態之4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三衍生物已特別說明於WO 00/71129-A1、WO 2007/056170-A2、WO 2007/061882-A2、WO 2007/064932-A2、WO 2009/136966-A1與WO 2010/126960-A1。
WO 2005/121147-A1、WO 2007/064883-A2與 WO 2007/064931-A2中說明在5-位置具有經取代之二芳基脲基團之4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三衍生物具有FGFR-1抑制活性。然而，其他受體酪胺酸激酶(尤指VEGFR、PDGFR與Tie-2激酶)亦受到此類特別化合物顯著抑制。由於推斷此等多重激酶活性可能加重治療期間之可能負作用，因此本發明之目的為判別對FGFR激酶具有改善之選擇性之新穎藥劑，以便為較容易耐受之癌症療法提供新的選項。
現已驚人地發現，某些在5-位置具有明確之經取代之苯并噻吩-2-基殘基之4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三衍生物可以強效且選擇性抑制FGFR激酶，尤指FGFR-1與FGFR-3激酶，其使得此等化合物特別適用於治療增生性病變，如：癌症與腫瘤疾病。
因此本發明一項態樣係有關一種通式(I)之6,7-經雙取代之5-(1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺衍生物 其中R1 為氫、氯、甲基或甲氧基，R2 為氫或甲氧基， 但其限制條件為R1與R2中至少一者不為氫，G1 代表氯、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基羰基、5-員氮雜-雜芳基或基團-CH2-OR3、-CH2-NR4R5或-C(=O)-NR4R6，其中R3 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基或苯基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、(C1-C4)-烷氧基、羥基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、胺基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基、二-(C1-C4)-烷基胺基羰基、(C3-C6)-環烷基或至多三個氟原子取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及(iii)該苯基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：氟、氯、溴、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷基與(C1-C4)-烷氧基，R4 為氫或(C1-C4)-烷基，R5 為氫、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-環烷基或4-至6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、(C1-C4)-烷氧基、羥基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基、二-(C1-C4)-烷基胺基羰基或(C3-C6)-環烷基取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基， 及(iii)該4-至6-員雜環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基、側氧基與胺基，R6 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基或4-至6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、(C1-C4)-烷氧基、羥基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、胺基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基、二-(C1-C4)-烷基胺基羰基或(C3-C6)-環烷基取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及(iii)該4-至6-員雜環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基、側氧基與胺基，或R4與R5、或R4與R6，其分別結合且與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至7-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R7)與O，且其環碳原子上可經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、側氧基、羥基、胺基與胺基羰基，且其中R7 為氫、(C1-C4)-烷基、甲醯基或(C1-C4)-烷基羰基，及 G2 代表氯、氰基、(C1-C4)-烷基，或基團-CR8AR8B-OH、-CH2-NR9R10、-C(=O)-NR11R12或-CH2-OR15，其中R8A與R8B 係分別獨立地選自下列所組成群中：氫、(C1-C4)-烷基、環丙基與環丁基，R9 為氫或(C1-C4)-烷基，R10 為氫、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-環烷基或4-至6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、胺基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基或二-(C1-C4)-烷基胺基羰基取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及(iii)該4-至6-員雜環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基、側氧基與胺基，R11 為氫或(C1-C4)-烷基，R12 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基或4-至6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、胺基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基或二-(C1-C4)-烷基胺基羰基取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及 (iii)該4-至6-員雜環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基、側氧基與胺基，或R9與R10、或R11與R12，其分別結合且與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至7-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R13)、O、S與S(O)2，且其環碳原子上可經至多三個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：氟、(C1-C4)-烷基、側氧基、羥基、胺基與胺基羰基，且其中R13 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基、甲醯基或(C1-C4)-烷基羰基，及R15 為(C1-C4)-烷基，但其限制條件當G2為氯或氰基時，為G1不為氯。
根據本發明化合物亦可呈其鹽型、溶劑合物與/或該鹽型之溶劑合物。
根據本發明化合物為式(I)化合物與其鹽型、溶劑合物、與該鹽型之溶劑合物；包括在式(I)中之如下述式(I-A)、(I-B)、(I-C)、(I-D)與(I-E)化合物，與其鹽型、溶劑合物、與該鹽型之溶劑合物；及包括在式(I)中與如下述製法產物與/或具體實施例中述及之化合物，與其鹽型、溶劑合物、與該鹽型之溶劑合物，其中包括在式(I)中及下文述及之化合物尚未呈鹽型、溶劑合物與該鹽型之溶劑合物。
為了本發明之目的，鹽類較佳為根據本發明化合物之醫藥 上可接受之鹽類(例如：參見S. M. Berge等人之"醫藥用鹽類(Pharmaceutical Salts)",J.Pharm.Sci. 1977,66,1-19)。亦包括本身不適用於醫藥，但可用於例如：單離或純化根據本發明化合物之鹽類。
醫藥上可接受之鹽類包括無機酸、羧酸與磺酸之酸加成鹽類，例如：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸及苯甲酸之鹽類。
醫藥上可接受之鹽類亦包括習知鹼類之鹽類，如，例如：較佳為鹼金屬鹽類(例如：鈉與鉀鹽類)、鹼土金屬鹽類(例如：鈣與鎂鹽類)，及衍生自氨或有機胺類之銨鹽類，如：其較佳實例為乙基胺、二乙基胺、三乙基胺、N,N-二異丙基乙基胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基胺基乙醇、二乙基胺基乙醇、普魯卡因、二環己基胺、二苯甲基胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、精胺酸、離胺酸與1,2-乙二胺。
本發明內容中，溶劑合物係指彼等由根據本發明化合物與溶劑分子之化學計量配位所形成固態或液態錯化物之型式。水合物為與水配位之特定溶劑合物型式。本發明內容中之較佳溶劑合物為水合物。
本發明化合物可能基於不對稱中心或呈限制旋轉之性質而呈異構物型式(對映異構物、非對映異構物)。任何異構物均可在不對稱中心呈(R)-、(S)-、或(R,S)-組態。
亦咸瞭解，當本發明化合物中出現兩個或更多個不對稱中心時，所例舉之結構式經常可能出現數種非對映異構物與對映 異構物，且以純非對映異構物與純對映異構物代表較佳之具體實施例。本發明範圍內計畫包括所有純立體異構物、純非對映異構物、純對映異構物與其混合物。
基於雙鍵或環上取代基性質而出現之幾何異構物可呈順式(=Z-)或反式(=E-)型，且這兩種異構型均包括在本發明範圍內。
本發明化合物之所有異構物不論是否分離、純化、部份純化、或呈消旋混合物，均包括在本發明範圍內。該異構物之純化法與該異構性混合物之分離法均可採用相關技藝上已知之標準技術達成。例如：非對映異構性混合物可利用層析法或結晶法分離成個別異構物，且消旋物可於對掌性相上進行層析法或利用解析法，分離成個別之對映異構物。
此外，根據本發明化合物包括上述化合物之所有可能互變異構型。
本發明亦涵蓋根據本發明化合物之所有合適之同位素變異體。根據本發明化合物之同位素變異體意指根據本發明化合物中至少一個原子被另一個與天然界經常出現或主要出現之原子數相同，但原子質量不同之原子置換。可進入根據本發明化合物中之同位素實例為彼等氫、碳、氮、氧、氟、氯、溴及碘之同位素，如：2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I及131I。根據本發明化合物之特定同位素變異體，尤指彼等其中已納入一個或多個放射性同位素者可能比較有利，例如：用於探討作用機轉或體內之活性化合物分佈；基於相對之製備難易度及可檢測度，尤以標記3H或14C同位素之化合物適合本目的。此外，納入例如：氘之同 位素可能得到提高化合物代謝安定性之特別醫療效益，例如：延長其在體內之半衰期或降低所需活性成份之劑量；因此根據本發明化合物之此等修飾法有時候亦可以構成本發明之較佳具體實施例。根據本發明化合物之同位素變異體可依熟悉此相關技藝之人士習知之方法製備，例如：下文說明之方法及操作實例中說明之方法，在其中採用經過相應同位素修飾之特定試劑及/或起始化合物製備。
本發明內容中，除非另有說明，否則取代基定義如下：
本發明內容中，(C1-C4)-烷基為具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基。較佳實例包括：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基與第三丁基。
本發明內容中，(C1-C4)-烷氧基代表具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷氧基。其較佳實例可述及：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基與第三丁氧基。
本發明內容中，單-(C1-C4)-烷基胺基代表帶有一個具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基取代基之胺基。其較佳實例可述及：甲基胺基、乙基胺基、正丙基胺基、異丙基胺基、正丁基胺基，與第三丁基胺基。
本發明內容中，二-(C1-C4)-烷基胺基代表帶有兩個相同或相異且分別具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基取代基之胺基。其較佳實例可述及：N,N-二甲基胺基、N,N-二乙基胺基、N-乙基-N-甲基胺基、N-甲基-N-正丙基胺基、N-異丙基-N-甲基胺基、N-異丙基-N-正丙基胺基、N,N-二異丙基胺基、N-正丁基-N-甲基胺基，與N-第三丁基-N-甲基胺基。
本發明內容中，(C1-C4)-烷基羰基代表由具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基利用羰基[-C(=O)-]鍵結其餘分子。其較佳實例可述及：乙醯基、丙醯基、正丁醯基、異丁醯基、正戊醯基與特戊醯基。
本發明內容中，(C1-C4)-烷氧基羰基代表由具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷氧基利用羰基[-C(=O)-]鍵結其餘分子。其較佳實例可述及：甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基與第三丁氧基羰基。
本發明內容中，單-(C1-C4)-烷基胺基羰基代表利用羰基[-C(=O)-]鍵結其餘分子並帶有具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基取代基之胺基。其較佳實例可述及：甲基胺基羰基、乙基胺基羰基、正丙基胺基羰基、異丙基胺基羰基、正丁基胺基羰基與第三丁基胺基羰基。
本發明內容中，二-(C1-C4)-烷基胺基羰基代表利用羰基[-C(=O)-]鍵結其餘分子並帶有兩個相同或相異且分別具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基取代基之胺基。其較佳實例可述及：N,N-二甲基胺基羰基、N,N-二乙基胺基羰基、N-乙基-N-甲基胺基羰基、N-甲基-N-正丙基胺基羰基、N-異丙基-N-甲基胺基羰基、N,N-二異丙基胺基羰基、N-正丁基-N-甲基胺基羰基，與N-第三丁基-N-甲基胺基羰基。
本發明內容中，(C3-C6)-環烷基代表具有3至6個環碳原子之單環狀飽和碳環。其實例可述及：環丙基、環丁基、環戊基與環己基。較佳為環丙基與環丁基。
本發明內容中，4-至7-員雜環烷基與4-至6-員雜環烷基代表分別具有共4至7個或4至6個環原子之單環狀飽和雜環， 其中包含一或兩個選自N、O、S與S(O)2系列之相同或相異環雜原子且利用環碳原子或環氮原子(若存在時)鍵結。以包含一個環氮原子與可視需要包含另一個選自N、O或S(O)2系列之環雜原子之4-至6-員雜環烷基較佳。以包含一個環氮原子與可視需要包含另一個選自N或O系列之環雜原子之5-或6-員雜環烷基特別佳。其實例可述及：氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基、硫雜環丁烷基、吡咯啶基、吡唑啶基、咪唑啶基、四氫呋喃基、硫雜環戊烷基、1,1-二氧離子基硫雜環戊烷基、1,2-唑啶基、1,3-唑啶基、1,3-噻唑啶基、哌啶基、哌基、四氫哌喃基、四氫硫哌喃基、1,3-二氧雜環己烷基、1,4-二氧雜環己烷基、1,2-氧氮雜環己烷基、嗎啉基、硫嗎啉基、1,1-二氧離子基硫嗎啉基、氮雜環庚烷基、1,4-二氮雜環庚烷基與1,4-氧氮雜環庚烷基。較佳為氮雜環丁烷基、吡咯啶基、吡唑啶基、咪唑啶基、1,2-唑啶基、1,3-唑啶基、哌啶基、哌基、1,2-氧氮雜環己烷基、嗎啉基與硫嗎啉基。特別佳為吡咯啶基、哌啶基、哌基與嗎啉基。
本發明內容中，5-員氮雜-雜芳基代表具有共5個環原子之芳香系雜環基(雜芳香系)，其中包含至少一個環氮原子與可視需要另包含一或兩個選自N、O與/或S系列之環雜原子且係利用環碳原子或可視需要利用環氮原子(當價數容許時)鍵結。以包含一個環氮原子且另包含一或兩個選自N與/或O系列之環雜原子之5-員氮雜-雜芳基較佳。其實例可述及：吡咯基、吡唑基、咪唑基、唑基、噻唑基、異唑基、異噻唑基、三唑基、二唑基與噻二唑基。較佳為吡唑基、咪唑基、唑基、異唑基與二唑基。
本發明內容中，側氧基取代基代表利用雙鍵連接碳原子之氧原子。
本發明內容中，所有出現數次之基團均具有彼此分別獨立地之定義。若根據本發明化合物中之基團經取代時，該基團可經過單取代或多取代，除非另有說明。以經過1或2或3個相同或相異取代基取代較佳。以經過1或2個相同或相異取代基取代特別佳。
較佳具體實施例中，本發明係有關一種通式(I)化合物，其中R1 為氯、甲基或甲氧基，R2 為氫或甲氧基，G1 代表氯、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基羰基或選自下列所組成群中之5-員氮雜-雜芳基：吡唑基、咪唑基、唑基、異唑基與二唑基、或代表基團-CH2-OR3或-CH2-NR4R5，其中R3 為氫、(C1-C4)-烷基或(C3-C6)-環烷基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、(C1-C4)-烷氧基、羥基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、胺基、胺基羰基、(C3-C6)-環烷基或至多三個氟原子取代，R4 為氫或(C1-C4)-烷基，R5 為氫、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-環烷基或5-或6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、羥基羰基或(C3-C6)-環烷基取代，及 (ii)該5-或6-員雜環烷基可視需要經側氧基取代，或R4與R5共同結合並與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R7)與O，且其環碳原子上可經側氧基或羥基取代，且其中R7 為氫或(C1-C4)-烷基，及G2 代表氯、氰基、(C1-C4)-烷基，或基團-CR8AR8B-OH、-CH2-NR9R10、-C(=O)-NR11R12或-CH2-OR15，其中R8A與R8B係分別獨立地選自下列所組成群中：氫、(C1-C4)-烷基與環丙基，R9 為氫或甲基，R10 為氫、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-環烷基或5-或6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基或胺基羰基取代，及(ii)該5-或6-員雜環烷基可視需要經側氧基取代，R11 為氫或甲基，R12 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基或5-或6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基取代，及(ii)該5-或6-員雜環烷基可視需要經側氧基取代，或 R9與R10、或R11與R12，其分別結合且與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R13)、O、S與S(O)2，且其環碳原子上可經至多三個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：氟、(C1-C4)-烷基、側氧基、羥基、胺基與胺基羰基，且其中R13 為氫、(C1-C4)-烷基、環丙基、環丁基、甲醯基或(C1-C4)-烷基羰基，及R15 為甲基或乙基，但其限制條件為當G2為氯或氰基時，G1不為氯。
在特別佳具體實施例中，本發明係有關一種通式(I)化合物，其中R1 為甲基，R2 為甲氧基，G1 代表甲基、唑-5-基或基團-CH2-OR3或-CH2-NR4R5，其中R3 為氫、(C1-C4)-烷基、環丙基或環丁基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、甲氧基、乙氧基、羥基羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、胺基、胺基羰基、環丙基、環丁基或至多三個氟原子取代，R4 為氫、甲基或乙基，R5 為氫、(C1-C4)-烷基、乙醯基、環丙基、環丁基或2-側氧基吡咯啶-3-基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、羥基羰基、環丙基 或環丁基取代，或R4與R5共同結合並與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和5-或6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：NH與O，且其環碳原子上可經側氧基或羥基取代，及G2 代表甲基或基團-CR8AR8B-OH、-CH2-NR9R10或-C(=O)-NR11R12，其中R8A與R8B分別獨立地為氫或甲基，R9 為氫，R10 為氫、(C1-C4)-烷基、乙醯基、環丙基、環丁基或2-側氧基吡咯啶-3-基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基或胺基羰基取代，R11 為氫或甲基，R12 為氫、(C1-C4)-烷基、環丙基、環丁基或2-側氧基吡咯啶-3-基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基取代，或R9與R10、或R11與R12，其分別結合且與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R13)、O與S(O)2，且其環碳原子上可經至多三個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：氟、甲基、側氧基、羥基、胺基與胺基羰基，且其中R13 為氫、甲醯基或乙醯基。
一項具體實施例中，本發明係有關一種通式(I)化合物，其 中R1 為甲基，及R2 為甲氧基。
另一項具體實施例中，本發明係有關一種通式(I)化合物，其中G1 代表基團-CH2-OR3，其中R3 為氫或(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、甲氧基、胺基、胺基羰基或至多三個氟原子取代。
另一項具體實施例中，本發明係有關一種通式(I)化合物，其中G1 代表基團-CH2-NR4R5，其中R4 為氫或甲基，R5 為(C1-C4)-烷基、乙醯基、環丙基、環丁基或2-側氧基吡咯啶-3-基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基取代，或R4與R5共同結合並與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和5-或6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：NH與O，且其環碳原子上可經側氧基或羥基取代。
另一項具體實施例中，本發明係有關一種通式(I)化合物，其中G2 代表基團-CH2-NR9R10，其中R9 為氫，R10 為乙醯基或2-側氧基吡咯啶-3-基， 或R9與R10共同結合並與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和5-或6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R13)與O，且其環碳原子上可經至多2個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：甲基、側氧基、羥基與胺基，且其中R13 為氫、甲醯基或乙醯基。
再另一項具體實施例中，本發明係有關一種通式(I)化合物，其中G2 代表基團-C(=O)-NR11R12，其中R11 為氫，R12 為(C1-C4)-烷基或2-側氧基吡咯啶-3-基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基取代，或R11與R12共同結合並與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：NH與O，且其環碳原子上可經側氧基或羥基取代。
特別佳具體實施例中，本發明係有關一種通式(I)化合物，其中R1 為甲基，R2 為甲氧基，G1 代表基團-CH2-OR3，其中R3 為(C1-C4)-烷基，其可視需要經羥基、胺基或胺基羰基取代，及 G2 代表基團-CH2-NR9R10或-C(=O)-NR11R12，其中R9 為氫，R10 為2-側氧基吡咯啶-3-基，或R9與R10共同結合並與其所附接之氮原子共同形成哌-1-基、3-側氧基哌-1-基或4-乙醯基哌-1-基環，R11 為氫，R12 為2-側氧基吡咯啶-3-基，或R11與R12共同結合並與其所附接之氮原子共同形成3-羥基氮雜環丁烷-1-基、4-羥基哌啶-1-基或3-側氧基哌-1-基環。
在殘基之個別組合或較佳組合中明確說明之殘基定義係與該指定殘基之特別組合分別獨立地，亦可依需要被其他組合之殘基定義置換。以如上述二種或多種較佳範圍之組合特別佳。
通式(I)化合物可依所選用之特定G1與G2基團(參見上述定義)，依各種不同合成途徑製備。
因此，另一項具體實施例中，本發明係有關一種製備通式(I)化合物之方法，其特徵在於[A]由式(II)6-經取代之4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三 其中R3如上述說明之定義，先與甲醛及式(III)胺 其中R9與R10如上述說明之定義，於酸之存在下反應，產生式(IV)化合物 其中R3、R9與R10如上述說明之定義，然後由式(V)化合物進行溴化反應 其中R3、R9與R10如上述說明之定義，且隨後與式(VI)二羥硼酸苯并噻吩-2-基酯 其中R1與R2如上述說明之定義，及R14 代表氫或(C1-C4)-烷基，或兩個R14殘基共同連接形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-、-CH2-C(CH3)2-CH2-或-C(=O)-CH2-N(CH3)-CH2-C(=O)-橋連，於鈀觸媒與鹼之存在下偶合，產生式(I-A)目標化合物 其中R1、R2、R3、R9與R10如上述說明之定義，或[B]由式(II)6-經取代之4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三 其中R3如上述說明之定義，先使用N,N-二甲基甲醯胺於磷醯氯之存在下進行甲醯化，產生式(VII)醛 其中R3如上述說明之定義，然後由式(VIII)化合物進行溴化反應 其中R3如上述說明之定義，且隨後與式(VI)二羥硼酸苯并噻吩-2-基酯 其中R1、R2與R14如上述說明之定義，於鈀觸媒與鹼之存在下偶合，產生式(IX)化合物 其中R1、R2與R3如上述說明之定義，然後抑或[B-1]與式(III)胺 其中R9與R10如上述說明之定義，於酸與還原劑之存在下反應，產生式(I-A)目標化合物 其中R1、R2、R3、R9與R10如上述說明之定義，或[B-2]氧化成式(X)羧酸 其中R1、R2與R3如上述說明之定義，最後再與式(XI)胺 其中R11與R12如上述說明之定義，於縮合劑之存在下偶合，產生式(I-B)目標化合物 其中R1、R2、R3、R11與R12如上述說明之定義，或[C]由式(XII)6-經取代之4-胺基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三 先與式(VI)二羥硼酸苯并噻吩-2-基酯 其中R1、R2與R14如上述說明之定義，於鈀觸媒與鹼之存在下偶合，產生式(XIII)化合物 其中R1與R2如上述說明之定義， 然後再與甲醛及式(III)胺 其中R9與R10如上述說明之定義，於酸之存在下反應，產生式(I-C)化合物 其中R1、R2、R9與R10如上述說明之定義，其繼續抑或[C-1]氧化成式(XIV)醛 其中R1、R2、R9與R10如上述說明之定義，並使用式(XV)胺 其中R4與R5如上述說明之定義， 於酸與還原劑之存在下處理，產生式(I-D)目標化合物 其中R1、R2、R4、R5、R9與R10如上述說明之定義，或[C-2]轉化成相應之式(XVI)6-(鹵代甲基)衍生物 其中R1、R2、R9與R10如上述說明之定義，及X 為氯、溴或碘，並使用式(XVII)醇 其中R3A係如上述R3之定義，但不為氫，於鹼之存在下處理，產生式(I-E)目標化合物 其中R1、R2、R3A、R9與R10分別如上述定義，若適當時，可視需要(i)由所得式(I)化合物分離成其對映異構物及/或非對映異構物，較佳係採用層析法分離，及/或(ii)使用相應之溶劑或酸或鹼處理，轉化成其各水合物、溶劑合物、鹽類及/或其鹽類之水合物或溶劑合物。
可依上述方法製備之式(I-A)、(I-B)、(I-C)、(I-D)與(I-E)化合物分別代表特別一組通式(I)化合物。
製程步驟[A](II)→(IV)與[C](XIII)→(I-C)，代表曼尼希(Mannich)型胺基甲基化反應，其一般進行方式係由個別起始化合物與甲醛水溶液及胺組份(III)之混合物於酸觸媒(如：甲酸或乙酸)之存在下反應。較佳係使用乙酸同時作為觸媒與溶劑。該反應通常在+20℃至+80℃之溫度範圍下進行。
作為製程步驟[A](IV)→(V)與[B](VII)→(VIII)之溴化劑較佳為使用N-溴代琥珀醯亞胺(NBS)、1,3-二溴-5,5-二甲基乙內醯脲(DBDMH)或元素態溴。該反應通常在惰性溶劑中(如：二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙腈或N,N-二甲基甲醯胺(DMF))，在-78℃至+20℃之溫度範圍下進行。
偶合反應[A](V)+(VI)→(I-A)，[B](VIII)+(VI)→(IX)與[C] (XII)+(VI)→(XIII)["鈴木-宮浦(Suzuki-Miyaura)偶合反應"]通常在惰性溶劑中，利用鈀觸媒與鹼水溶液之助進行。適合此目的之鈀觸媒包括例如：乙酸鈀(II)、氯化鈀(II)、雙(三苯基膦)鈀(II)氯化物、雙(乙腈)鈀(II)氯化物、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂絡鐵]鈀(II)氯化物、肆(三苯基膦)鈀(0)、雙(二亞苯甲基丙酮)鈀(0)、與參(二亞苯甲基丙酮)二鈀(0)，可視需要組合使用其他膦配位體，如，例如：2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯(X-Phos)、2-二環己基膦基-2',6'-二甲氧基聯苯(S-Phos)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫噸(Xantphos)、或4-(二-第三丁基膦基)-N,N-二甲基苯胺。亦可使用鈀前觸媒，其可在如：(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦之反應條件下產生催化活性物質[參見例如：S. Kotha等人之Tetrahedron 58,9633-9695(2002)；T. E. Barder等人之J.Am.Chem.Soc.127(13),4685-4696(2005)；S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010)，及其中進一步引用之文獻]。
適合此等偶合反應之鹼類特定言之為鹼金屬碳酸鹽，如：碳酸鈉、-鉀或-銫，鹼金屬磷酸鹽，如：磷酸鈉或-鉀，或鹼金屬氟化物，如：氟化鉀或-銫。通常此等鹼類係呈水溶液使用。該反應係在對反應條件呈惰性之有機溶劑中進行。較佳係使用水相容性有機溶劑，如：1,2-二甲氧基乙烷、四氫呋喃、1,4-二烷、乙腈、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)或二甲亞碸(DMSO)，但亦可使用其他惰性溶劑，如：二氯甲烷或甲苯。
製程步驟[B](II)→(VII)["菲斯邁-哈克(Vilsmeier-Haack)甲醯化反應"]係依一般方式進行，其係由吡咯并三(II)於N,N-二甲基甲醯胺(DMF)溶劑中，使用磷醯氯處理。該反應通常在0℃至+80℃之 溫度下進行。
適合此還原性胺化反應[B-1](IX)+(III)→(I-A)與[C-1](XIV)+(XV)→(I-D)之還原劑通常為鹼金屬氫硼化物，如：氫硼化鋰、氫硼化鈉、氫硼化鉀、氰基氫硼化鈉或三乙醯氧基氫硼化鈉。該轉化法通常在酸(較佳為乙酸)之存在下，於醇或醚溶劑(如：甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃或1,4-二烷)中，於0℃至+80℃之溫度範圍內進行，分別依胺組份(III)與(XV)之反應性及/或所使用之特定氫硼化物而定。
製程步驟[B-2](IX)→(X)之氧化反應中，於次氯酸鹽清除劑之存在下(如：2-甲基-2-丁烯)使用次氯酸鈉進行之氧化反應代表所選擇之方法[參見H. W. Pinnick等人之Tetrahedron 37,2091-2096(1981)；A. Raach與O. Reiser,J.Prakt.Chem.342(6),605-608(2000)，及其中引用之文獻]。該反應通常在四氫呋喃/水混合物中，於0℃至環境溫度之溫度間進行。
適合製程步驟[B-2](X)+(XI)→(I-B)[醯胺形成法]之縮合劑包括例如：碳化二亞胺(如：N,N'-二乙基-、N,N'-二丙基-、N,N'-二異丙基-、N,N'-二環己基碳化二亞胺(DCC)或N-(3-二甲基胺基丙基)-N'-乙基碳化二亞胺(EDC))、光氣衍生物(如：N,N'-羰基二咪唑(CDI)或氯甲酸異丁基酯)、α-氯烯胺類(如：1-氯-2-甲基-1-二甲基胺基-1-丙烯)、磷化合物(如：丙烷膦酸酐、氰基膦酸二乙酯、雙(2-側氧基-3-唑啶基)磷醯氯、苯并三唑-1-基氧-參(二甲基胺基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)或苯并三唑-1-基氧-參(吡咯啶基)鏻六氟磷酸鹽(PyBOP))、與糖醛鎓化合物(如：O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基糖醛鎓四氟硼酸鹽(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基糖醛鎓六氟磷酸鹽(HBTU)、2-(2-側氧基-1-(2H)-吡啶基)-1,1,3,3-四甲基糖醛鎓 四氟硼酸鹽(TPTU)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基糖醛鎓六氟磷酸鹽(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基糖醛鎓四氟硼酸鹽(TCTU))，若適當時，可組合使用其他輔劑，如：1-羥基苯并三唑(HOBt)或N-羥基琥珀醯亞胺(HOSu)、與/或鹼類(如：鹼金屬碳酸鹽，例如：碳酸鈉或-鉀)、或有機胺鹼類(如：三乙基胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉(NMM)、N,N-二異丙基乙基胺(DIPEA)、吡啶或4-N,N-二甲基胺基吡啶(DMAP))。較佳為組合使用O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基糖醛鎓六氟磷酸鹽(HATU)或O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基糖醛鎓四氟硼酸鹽(TBTU)與N,N-二異丙基乙基胺(DIPEA)與視需要選用之1-羥基苯并三唑(HOBt)。
製程步驟[B-2](X)+(XI)→(I-B)之惰性溶劑為例如：醚類(如：乙醚、第三丁基甲基醚、四氫呋喃、1,4-二烷或1,2-二甲氧基乙烷)、烴類(如：苯、甲苯、二甲苯、己烷或環己烷)、鹵化烴類(如：二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯)、或其他溶劑(如：丙酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N'-二甲基伸丙基脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)。亦可使用此等溶劑之混合物。較佳係使用二氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺或其混合物。該反應通常在0℃至+-60℃，較佳為+10℃至+40℃之溫度範圍下進行。
可以在溫和條件下轉化一級醇(I-C)形成醛(XIV)(製程[C-1])之氧化劑包括：1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮("迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)")、2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧化物(TEMPO)組合使用二級氧化劑(如：氧碘苯-I,I-二乙酸鹽或次氯酸鈉)，及基於二甲亞碸(DMSO)之氧化系統(如：DMSO/三氟 乙酸酐或DMSO/N,N'-二環己基碳化二亞胺(DCC))。較佳為1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮。該反應通常在惰性溶劑中，較佳係使用二氯甲烷進行。
在製程步驟[C-2](I-C)→(XVI)中羥基轉化鹵素之反應中，可採用相關技藝上已知之各種不同標準方法與試劑。所選用之試劑為亞硫醯氯[當X=Cl]、四溴甲烷/三苯基膦[當X=Br]、與碘/三苯基膦[當X=I]。基於操作方便性與化合物穩定性，較佳係製備6-(氯甲基)衍生物(XVI)[X=Cl]。
適合製程步驟[C-2](XVI)+(XVII)→(I-E)[醚形成法]之鹼類特定言之為鹼金屬碳酸鹽(如：碳酸鋰、-鈉、-鉀或-銫)、鹼金屬乙酸鹽(如：乙酸鈉或-鉀)、或習知三級胺鹼類(如：三乙基胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙基胺或吡啶)。較佳為N,N-二異丙基乙基胺(DIPEA)。該反應(XVI)+(XVII)→(I-E)係在惰性溶劑(如：四氫呋喃)中，或不使用溶劑，但改用過量醇(XVII)，於+20℃至+200℃，較佳為+50℃至+150℃之溫度範圍下進行。該轉化反應宜利用微波反應器裝置進行。
反應順序(I-C)→(XVI)→(I-E)可分成兩個步驟進行，亦即單離及純化中間物化合物(XVI)，或可採用單鍋製程進行，亦即使用製備反應中所得之粗製中間物(XVI)。
若一級或二級胺部份基團形成式(I)目標化合物中G1或G2基團之一部份時，有時候可能適合在上述製備反應使用此胺之受保護之衍生物替代游離胺作為反應組份。為了此目的，可使用常見之暫時胺基保護基，如：醯基(例如：乙醯基或三氟乙醯基)或胺基甲酸酯型保護基(例如：Boc-、Cbz-或Fmoc-基團)。較佳係使用Boc(第三丁氧基羰基)。同樣地，形成G1或G2基團之一部份之羥基官能基可 在前體化合物與製程中間物中暫時封阻，例如：形成四氫哌喃基(THP)醚或呈矽烷基醚衍生物，如：三甲基矽烷基或第三丁基二甲基矽烷基醚。
此等保護基可在水溶液之操作及純化製程期間同時脫除，或其可在接續之分離反應步驟中採用相關技藝上已知之標準方法脫除。此等來自相應游離胺或醇之受保護中間物之製法同樣地很容易依據文獻中說明之一般製程進行[參見例如：T. W. Greene與P. Wuts之”有機合成法之保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)”,Wiley,New York,1999]。
某些類型之受保護(亦即醯化)胺衍生物本身即具有顯著之FGFR-抑制活性。因此，此等化合物亦包括在如上述定義之通式(I)內。
本發明化合物之製法可利用下列反應圖說明：
式(II)6-經取代之4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三可例如：採用兩種不同途徑製備，如下列反應圖5所示。第一種途徑中，由4-胺基-6- 氰基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三(XVIII)經由酸媒介之醇解反應轉化成酯(XIX)，然後再使用三乙基氫硼化鋰還原成6-(羥基甲基)化合物(IIa)[(II)中R3=H]。經過標準轉化法形成相應之6-(鹵代甲基)吡咯并三(如：氯化合物(XX))，然後使用式(XVII)醇，於鹼之存在下處理，很容易產生式(IIb)醚衍生物[(II)中R3≠H]。起始化合物(XVIII)之製法過去已有說明[參見國際專利申請案WO 2007/064883(中間物AX/步驟3)]。
第二種途徑始於受保護之1-胺基-4-溴-2-氰基吡咯(XXI)[其製法示於國際專利申請案WO 2007/064883(中間物AAE，步驟3)]。由脲烷態氮脫除質子後，於4-位置進行金屬化，再與甲醛反應，產生4-(羥基甲基)衍生物(XXII)。使用鹽酸處理後，添加醇(XVII)，採用單鍋製程，與甲脒縮合後，產生式(IIb)目標化合物。此途徑特別適合製備烷基醚衍生物[(IIb)中R3A=(C1-C4)-烷基]，其中醇反應物(XVII)亦可在此等例子中作為反應溶劑。
式(XII)4-胺基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三衍生物很容易自4-胺基-6-(羥基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三(IIa)(參見反應圖5)製得，其係先使用1,3-二溴-5,5-二甲基乙內醯脲胺進行5,7-二溴化反應，然後經由與正丁基鋰進行鹵素-金屬交換反應，選擇性脫除7-溴後，使用甲醇中止反應(參見下列反應圖6)。
式(VI)二羥硼酸苯并噻吩-2-基酯宜由式(XXIV)經取代硫酚衍生物開始製備(參見下列反應圖7)。使用溴縮醛(XXV)烷基化後，進行聚磷酸媒介之環化反應，產生式(XXVII)苯并噻吩中間物，其再於2-位置上金屬化，與硼酸三烷基酯反應。操作鹼溶液，產生游離之式(VIa)(苯并噻吩-2-基)二羥硼酸，若需要時，其再藉由相關技藝上已知之標準製程轉化成環狀二羥硼酸酯，例如：所謂之式(VIb)MIDA二羥硼酸酯[參見例如：D. M. Knapp等人之J.Am.Chem.Soc.131(20),6961-6963(2009)]。
[參見P. A. Plé與L. J. Marnett,J.Heterocyclic Chem.25(4),1271-1272(1988)；A. Venturelli等人之J.Med.Chem.50(23),5644-5654(2007)]。
式(III)、(XI)、(XV)、(XVII)、(XXIV)與(XXV)化合物可自商品購得、自文獻中已知、或很容易引用文獻中已知之方法從起始物製得。有關起始物製法之詳細製程及文獻亦可參見本文中實驗部份有關起始化合物及中間物製法之說明。
通式(I)化合物之另一子群之製法說明於下列反應圖8-14中。其所需之吡咯并三前體很容易採用相關技藝上已知之方法及進一步合成轉化法合成，大多數情況下係依據已在上述製程章節中說明之製備途徑，採用類似反應型態(如，例如：溴化反應、二羥硼酸酯偶合法、胺基甲基化反應、還原性胺化反應、氧化與/或醚或醯胺形成反應)進行。進一步詳細說明提供於”實驗部分”之具體實施例與其個 別前體化合物之製法中。
[R8A,R8B=(C1-C4)-烷基、環丙基或環丁基]。
[R8A=(C1-C4)-烷基、環丙基或環丁基；X=Cl、Br或I]。
[R=(C1-C4)-烷基]。
[R=氯或(C1-C4)-烷基；起始物(XXVIII)之製法可分別參見國際專利申請案WO 2007/064883與WO 2007/056170]。
[起始化合物(XXIX)之製法可參見下列反應圖14]。
本發明化合物具有有價值之藥理性質，可用於預防及治療人類與其他哺乳動物之病變。
本發明化合物為受體酪胺酸激酶(特別指FGFR激酶，最針對FGFR-1與FGFR-3激酶)之活性或表現之強力抑制劑。因此，在另一項具體實施例中，本發明提供一種為需要此等治療之患者治療與FGFR激酶活性相關或受其介導之病變之方法，其包括對該患者投 與有效量之如上述定義之式(I)化合物。某些具體實施例中，該與FGFR激酶活性相關之病變為增生性病變，特定言之癌症與腫瘤疾病。
本發明內容中，術語“治療”或“處理”包括疾病、病變、病症、或狀態、其發展與/或進展、與/或其症狀受到抑制、延緩、解除、減輕、遏止、降低、或消退。術語"預防"包括降低其發生、罹患、或經歷疾病、病變、病症、或狀態、其發展與/或進展、與/或其症狀之風險。該術語”預防”包括預防療法。病變、疾病、病症、或狀態可能部份或完全治療或預防。
術語"增生性病變"包括涉及不期望或失控之細胞增生之病變。本發明化合物可用於預防、抑制、阻斷、減輕、降低、控制，等等細胞增生與/或細胞分化，及/或產生細胞凋亡。此方法包括對有此需要之個體(包括哺乳動物，包括人類)投與治療或預防該病變有效量之本發明化合物、或其醫藥上可接受之鹽、異構物、多形物、代謝物、水合物或溶劑合物。
本案中，為了簡便起見，應先採用單數語法來替代複數語法，但其通常意欲包括複數語法，除非另有說明。例如："一種治療患者疾病之方法包括對該患者投與有效量之式(I)化合物"係包括同時治療一種以上之疾病及投與超過一種式(I)化合物。
可使用本發明化合物治療與/預防之增生性病變包括(但不限於)：癌症與腫瘤疾病之族群。咸瞭解其特別指下列疾病(但沒有任何限制)：乳房癌瘤與乳房腫瘤(導管型與小葉型，及原位型)、呼吸道腫瘤(小細胞與非小細胞肺癌瘤、小細胞與非小細胞癌瘤、枝氣管癌瘤、枝氣管腺瘤、肋膜肺臟原胚瘤))、腦腫瘤(例如：腦幹與下視丘之腫瘤、星形細胞瘤、神經髓母細胞瘤、骨髓母細胞瘤、室管膜 瘤、及神經外胚層與松果體腫瘤)、消化器官腫瘤(食道、胃、膽囊、小腸、大腸、直腸、肛門)、肝腫瘤(包括：肝細胞癌瘤、膽管癌瘤及混合肝細胞與膽管細胞癌瘤)、頭與頸部腫瘤(喉、下嚥部、鼻咽部、口咽部、唇與口腔)、皮膚腫瘤(鱗狀上皮細胞癌瘤、卡波西氏肉瘤、惡性黑色素瘤、梅克爾(Merkel)細胞皮膚癌與非黑色素瘤皮膚癌)、軟組織腫瘤(包括軟組織肉瘤、骨肉瘤、惡性纖維性組織細胞瘤、淋巴肉瘤與橫紋肌肉瘤)、眼睛腫瘤(包括眼內黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤與視網膜母細胞瘤)、內分泌腺與外分泌腺腫瘤(例如：甲狀腺與副甲狀腺、胰臟與唾液腺)、泌尿道腫瘤(膀胱、陰莖、腎、腎盂與輸尿管之腫瘤)及生殖器官腫瘤(女性之子宮內膜、子宮頸、卵巢、陰道、外陰與子宮之癌瘤，及男性之攝護腺與睪丸之癌瘤)及其遠距轉移。其亦包括實體型及循環血液細胞之增生性血液疾病，如：淋巴瘤、白血病及骨髓增生性疾病，例如：急性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴母細胞白血病、慢性骨髓性白血病、與毛狀細胞白血病，及與AIDS相關之淋巴瘤、霍奇金氏(Hodgkin’s)淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、柏奇氏(Burkitt’s)淋巴瘤及中樞神經系統淋巴瘤。
基於其活性與選擇性型態，咸信本發明化合物特別適合治療乳房、肺、胃、膽囊與卵巢之癌症與腫瘤疾病。此外，本發明化合物尤其適合預防或抑止腫瘤普遍轉移。
使用本發明化合物及方法治療與/或預防之其他增生性病變包括：乾癬、瘢痕瘤及其他影響皮膚之過度增生疾病、與表皮起泡有關之水皰病變(包括水皰天皰瘡、多形性紅斑與皰疹樣皮炎)、纖維化病變(如：肺纖維化、動脈粥狀硬化、術後再狹窄與肝硬化)、腎臟疾病(包括腎小球系膜細胞增生性病變、腎絲球病變、腎絲球腎 炎、糖尿病性腎病變、惡性腎硬化與多囊性腎病)、良性攝護腺肥大(BPH)、血管源性或血管增生性病變與血栓性小血管病變症候群。
本發明化合物亦適用於治療與/或預防眼睛疾病，如，例如：老年性黃斑部病變(AMD)、非出血性黃斑退化病、缺血型視網膜靜脈阻塞、糖尿病黃斑水腫、糖尿病視網膜病變、早產兒視網膜病變、與其他視網膜病變。
可以藉由投與本發明化合物治療與/或預防之其他病症包括婦科疾病(如：子宮內膜異位症、肌瘤與卵巢囊腫)、與脂肪細胞生合成、膽汁代謝、磷酸鹽代謝、鈣代謝與/或骨代謝與/或骨礦物質化有關之代謝性病變、骨骼病變(如，例如：侏儒症、先天性軟骨症與菲佛症候群(Pfeiffer syndrome))、軟骨疾病(如：骨性關節炎與多關節炎)、類風濕關節炎、禿髮與移植排斥。
上述疾病已在人體中完整判別，但亦成為其他哺乳動物體內之病因，且可採用本發明化合物與方法治療。
因此本發明進一步係有關一種以根據本發明化合物於治療及/或預防病變(尤指上述病變)上之用途。
本發明進一步係有關一種以根據本發明化合物於製造醫藥組合物上之用途，供治療及/或預防病變(尤指上述病變)。
本發明進一步係有關一種以根據本發明化合物於治療及/或預防病變(尤指上述病變)上之方法上之用途。
本發明進一步係有關一種治療及/或預防病變(尤指上述病變)之方法，其係使用有效量之至少一種根據本發明化合物。
本發明化合物可作為單獨藥劑使用，或與一種或多種其他醫藥劑組合投藥，只要此組合不會產生不期望與/或不可接受之副作用即可。此等組合療法包括投與包含如上述定義之式(I)化合物與一或多 種其他醫療劑之單一醫藥劑量調配物，及以分開之醫藥劑量調配物投與式(I)化合物與各其他醫療劑。例如：式(I)化合物與醫療劑可以呈同一(固定)口服劑型組合物(如：錠劑或膠囊)共同投與患者，或各藥劑可呈分開劑量調配物投藥。
若採用分開之劑量調配物時，式(I)化合物與一或多種其他醫療劑可以基本上在同一時間投藥(亦即同時)或在分隔時間投藥(亦即依序)。
特定言之，本發明化合物可與其他抗癌劑形成固定或分開之組合投藥，如：烷化劑、抗代謝藥、源於植物之抗腫瘤劑、激素療法藥劑、拓樸異構酶抑制劑、微管蛋白抑制劑、激酶抑制劑、標靶藥物、抗體、抗體-藥物偶聯劑(ADC)、免疫法、生物反應修飾劑、抗血管新生性化合物與其他抗增生性、抑制細胞生長性與/或細胞毒性物質。基於此點，下文列出可與本發明化合物組合使用之第二藥劑之非限制性實例：阿巴瑞克(Abarelix)、阿比特龍(abiraterone)、阿克拉魯比西(aclarubicin)、阿法替尼(afatinib)、阿柏西普(aflibercept)、阿地白介素(aldesleukin)、阿來組單抗(alemtuzumab)、阿利維甲酸(alitretinoin)、阿福拉定(alpharadin)、阿草特胺(altretamine)、胺基格魯米特(aminoglutethimide)、氨萘非特(amonafide)、氨柔比星(amrubicin)、胺苯吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、安卓慕汀(andromustine)、阿加來本(arglabin)、天冬醯胺酶、阿西替尼(axitinib)、5-氮胞苷(5-azacitidine)、巴厘昔單抗(basiliximab)、貝洛替康(belotecan)、苯達莫司汀(bendamustine)、貝伐單抗(bevacizumab)、蓓薩羅丁(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、博萊黴素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)、博 舒替尼(bosutinib)、丙胺酸布立尼布(brivanib alaninate)、布舍瑞林(buserelin)、白消安(busulfan)、卡巴他賽(cabazitaxel)、CAL-101、亞葉酸鈣、左亞葉酸鈣(calcium levofolinate)、喜樹鹼(camptothecin)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑(carboplatin)、卡莫氟(carmofur)、卡氯芥(carmustine)、卡妥索單抗(catumaxomab)、西地尼布(cediranib)、西莫白介素(celmoleukin)、希特單抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯地孕酮(chlormadinone)、氮芥(chlormethine)、西多福韋(cidofovir)、順鉑(cisplatin)、克拉屈濱(cladribine)、氯屈膦酸(clodronic acid)、氯法拉濱(clofarabine)、克勃抑制素(combretastatin)，克立他酶(crisantaspase)、克裏唑蒂尼(crizotinib)、環磷醯胺、環丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素D(dactinomycin)、阿法達貝汀(darbepoetin alfa)、達雷那新(darinaparsin)、達沙替尼(dasatinib)、道諾黴素(daunorubicin)、丁西他濱(decitabine)、地加瑞克(degarelix)、地尼白介素-2(denileukin diftitox)、地諾單抗(denosumab)、地洛瑞林(deslorelin)、二溴螺氯銨(dibrospidium chloride)、多烯紫杉醇(docetaxel)、多韋替尼(dovitinib)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、阿黴素(doxorubicin)、度他雄胺(dutasteride)、艾庫組單抗(eculizumab)、依決洛單抗(edrecolomab)、依氟鳥胺酸(eflornithine)、依利醋銨(elliptinium acetate)、艾曲波帕(eltrombopag)、內皮抑素(endostatin)、依諾他濱(enocitabine)、依諾他濱(enocitabine)、表柔比星(epimbicin)、環硫雄醇(epitiostanol)、阿法依伯汀(epoetin alfa)、貝他依伯汀(epoetin beta)、埃博黴素(epothilone)、依鉑(eptaplatin)、抑利靈(eribulin)、埃羅替尼(erlotinib)、雌二醇(estradiol)、雌二醇氮芥(estramustine)、依託泊苷 (etoposide)、維莫司(everolimus)、依喜替康(exatecan)、依西美坦(exemestane)、抑速林(exisulind)、法倔唑(fadrozole)、芬維A胺(fenretinide)、惠爾血添(filgrastim)、菲那雄胺(finasteride)、夫拉平度(flavopiridol)、阿氟酸(fludarabine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、氟利尼(foretinib)、福美斯坦(formestane)、福莫司汀(fotemustine)、氟維司群(fulvestrant)、加尼瑞克(ganirelix)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他濱(gemcitabine)、吉妥單抗(gemtuzumab)、吉米替康(gimatecan)、吉美拉西(gimeracil)、葡磷醯胺(glufosfamide)、氧化型谷胱甘肽(glutoxim)、戈舍瑞林(goserelin)、組胺瑞林(histrelin)、羥基脲、伊班膦酸(ibandronic acid)、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、艾達黴素(idarubicin)、異環磷醯胺(ifosfamide)、伊馬替尼(imatinib)、咪喹莫特(imiquimod)、英丙舒凡(improsulfan)、抑丹尼(intedanib)、干擾素α、干擾素α-2a、干擾素α-2b、干擾素β、干擾素γ、介白素-2、伊匹單抗(ipilimumab)、伊立替康(irinotecan)、易莎平(ixabepilone)、奧曲肽(lanreotide)、拉帕替尼(lapatinib)、拉索昔芬(lasofoxifene)、來那度胺(lenalidomide)、來格司亭(lenograstim)、香菇多醣(lentinan)、利伐替尼(lenvatinib)、來他替尼(lestaurtinib)、來曲唑(letrozole)、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑(levamisole)、利尼凡(linifanib)、靈斯替尼(linsitinib)、麥角乙脲(lisuride)、洛鉑(lobaplatin)、洛莫司丁(lomustine)、氯尼達明(lonidamine)、勒托替康(lurtotecan)、馬磷醯胺(mafosfamide)、馬特單抗(mapatumumab)、馬賽替尼(masitinib)、馬索羅酚(masoprocol)、甲孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、硫胂蜜胺(melarsoprol)、馬法蘭(melphalan)、美雄烷(mepitiostane)、巰基嘌呤 (mercaptopurine)、甲胺喋呤(methotrexate)、胺基乙醯丙酸甲酯、甲基睪丸酮、米伐木肽(mifamurtide)、美服培酮(mifepristone)、米替福新(miltefosine)、米鉑(miriplatin)、二溴甘露醇(mitobronitol)、丙酮雙脒腙(mitoguazone)、二溴衛矛醇(mitolactol)、絲裂黴素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、雙羥蒽醌(mitoxantrone)、莫拉司亭(molgramostim)、莫替沙尼(motesanib)、諾龍(nandrolone)、奈達鉑(nedaplatin)、奈拉濱(nelarabine)、來那替尼(neratinib)、尼祿替尼(nilotinib)、尼魯米特(nilutamide)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、尼莫司汀(nimustine)、二胺硝吖啶(nitracrine)、諾拉曲特(nolatrexed)、歐福單抗(ofatumumab)、奧普瑞白介素(oprelvekin)、益樂鉑(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇|(paclitaxel)、帕利夫明(palifermin)、帕米膦酸(pamidronic acid)、帕尼單抗(panitumumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、培門冬酶(pegaspargase)、聚乙二醇化貝他依伯汀(peg-epoetinβ)、聚乙二醇化非格司亭(pegfilgastrim)、聚乙二醇化干擾素α-2b、培立曲(pelitrexol)、培美曲唑(pemetrexed)、帕尼單抗(pemtumomab)、噴司他丁(pentostatin)、培洛黴素(peplomycin)、培磷醯胺(perfosfamide)、呱立福新(perifosine)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、必醫你舒(picibanil)、吡柔比星(pirambicin)、吡喃阿黴素(pirarubicin)、普樂沙福(plerixafor)、光輝黴素(plicamycin)、聚胺葡糖(poliglusam)、聚膦酸雌二醇、普納替尼(ponatinib)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、普拉曲沙(pralatrexate)、潑尼莫司汀(prednimustine)、丙卡巴肼(procarbazine)、丙考達唑(procodazole)、PX-866、喹高利特(quinagolide)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲塞(raltitrexed)、雷珠單抗(ranibizumab)、雷尼司汀(ranimustine)、雷佐生(razoxane)、瑞格非尼(regorafenib)、利塞膦酸(risedronic acid)、利 妥昔單抗(rituximab)、羅米地辛(romidepsin)、羅米司亭(romiplostim)、魯比替康(rubitecan)、塞卡替尼(saracatinib)、沙格司亭(sargramostim)、沙鉑(satraplatin)、司美替尼(selumetinib)、舒樂(sipuleucel)-T、斥消靈(sirolimus)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、蕾莎瓦(sorafenib)、鏈脲菌素(streptozocin)、紓癌特(sunitinib)、他拉泊芬(talaporfin)、他米巴羅汀(tamibarotene)、他莫昔芬(tamoxifen)、坦度替尼(tandutinib)、他索爾明(tasonermin)、替西白介素(teceleukin)、替加氟(tegafur)、替拉替尼(telatinib)、替莫泊芬(temoporfin)、帝盟多(temozolomide)、特西羅莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、睾內酯(testolactone)、睪丸酮、替曲膦(tetrofosmin)、沙利竇邁(thalidomide)、硫替派(thiotepa)、胸腺法新(thymalfasin)、硫鳥嘌呤(tioguanine)、替吡法尼(tipifarnib)、替法散尼(tivozanib)、托西尼布(toceranib)、托珠單抗(tocilizumab)、托泊替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫單抗(tositumomab)、他比特定(trabectedin)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、曲奧舒凡(treosulfan)、維甲酸(tretinoin)、曲阿平(triapine)、曲洛司坦(trilostane)、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林(triptorelin)、曲洛磷胺(trofosfamide)、烏苯美司(ubenimex)、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、伐普肽(vapreotide)、凡利替尼(varlitinib)、瓦他拉尼(vatalanib)、維慕菲尼(vemurafenib)、阿糖腺苷(vidarabine)、長春花堿(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春地新(vindesine)、長春氟寧(vinflunine)、溫諾平(vinorelbine)、弗樂單抗(volociximab)、伏立諾他(vorinostat)、新制癌菌素(zinostatin)、唑來膦酸(zoledronic acid)與佐柔比星(zorubicin)。
通常，採用本發明化合物與其他抗癌劑之組合可達成下列目標：˙相較於使用單一活性化合物治療時，其在減緩腫瘤生長、縮小腫瘤大小或甚至完全消除腫瘤上，具有改良之活性；˙化療劑之用量可以低於單方療法時之劑量；˙相較於單獨投藥時，可以降低副作用，成為較可耐受之療法；˙可以擴大癌症與腫瘤疾病之治療範圍；˙提高對該療法之反應速率；˙相較於標準療法，可延長患者存活時間。
因此，本發明另一項具體實施例係有關一種醫藥組合物，其包含至少一種根據本發明化合物與一或多種其他醫療劑，供治療與/或預防病變(尤指上述病變)。
在治療癌症時，本發明化合物亦可與放射療法與/或手術干預法組合使用。
此外，式(I)化合物可呈其本身或呈組合物用於研究與診斷，或作為分析參考標準物，等等，如相關技藝上習知者。
當本發明化合物作為醫藥投與人類與其他哺乳動物時，其可呈其本身或呈醫藥組合物投藥，其中包含例如：0.1%至99.5%(更佳係0.5%至90%)之活性成份與一或多種醫藥上可接受之賦形劑之組合。
因此在其他態樣中，本發明係有關一種醫藥組合物，其包含至少一種根據本發明化合物，宜共同包含一或多種惰性無毒之醫藥上適宜之賦形劑，並有關其於治療與/或預防病變(尤指上述病變)上之用途。
根據本發明化合物可以經全身及/或局部投藥。基於此目的，其可依合適方式投藥，如，例如：經口、非經腸式、經肺、鼻、舌、舌下、頰內、直腸、皮膚、穿皮式、結膜、耳朵或局部途徑投藥， 或呈植入物或支架。
本發明化合物可呈適合此等投藥途徑之投藥劑型投藥。
適合口服之投藥劑型為彼等可依先前技藝發揮功能之劑型，其可依快速及/或依經過修飾之方式釋放本發明化合物，且其包含呈晶型、非晶型及/或溶解型之本發明化合物，如，例如：錠劑(無包衣或有包衣錠劑，例如：腸溶性包衣或不可溶解或延緩溶解之包衣，以控制根據本發明化合物之釋放)、可在口腔中快速崩解之錠劑、或膜錠/粉片、膜錠/凍乾物、或膠囊(例如：硬式或軟式明膠囊)、糖衣錠、粒劑、丸劑、粉劑、乳液、懸浮液、氣霧劑或溶液。
非經腸式投藥法可以繞過吸收步驟(例如：經靜脈內、經動脈內、經心臟內、經脊柱內或經腰內)或包括吸收步驟(例如：肌內、皮下、皮內、經皮膚或經腹膜內)。適合非經腸式之投藥劑型包括注射製劑及呈溶液、懸浮液、乳液、凍乾物或無菌粉劑之輸液劑型。
其他投藥途徑之合適劑型為例如：可吸入之醫藥劑型(例如：粉末吸入劑、氣霧劑)、鼻滴液、溶液或噴液、錠劑、供經舌、舌下或頰內投藥之錠劑或膠囊(例如：口含錠、喉錠)、栓劑、耳朵或眼睛用製劑(例如：滴劑、油膏)、陰道用膠囊、水性懸浮液(洗液、搖溶混合物)、親脂性懸浮液、油膏、乳霜、乳劑、糊劑、泡沫劑、噴灌粉、穿皮式醫療系統(例如：貼布)、植入物與支架。
較佳具體實施例中，該包含如上述定義之式(I)化合物之醫藥組合物係呈適合經口投藥之型式提供。另一項較佳具體實施例中，該包含如上述定義之式(I)化合物之醫藥組合物係呈適合經靜脈內投藥之型式提供。
根據本發明化合物可依本身已知方式，與惰性無毒性醫藥上合適之賦形劑混合，轉化成上述投藥劑型。此等賦形劑特別包括載劑(例 如：微晶纖維素、乳糖、甘露糖醇)、溶劑(例如：液態聚乙二醇)、乳化劑(例如：十二烷基硫酸鈉)、表面活性劑(例如：聚氧山梨糖醇酐油酸酯)、分散劑(例如：聚乙烯吡咯烷酮)、合成性及天然聚合物(例如：白蛋白)、安定劑(例如：抗氧化劑，如，例如：抗壞血酸)、著色劑(例如：無機色素，如，例如：氧化鐵)，及香料及/或矯味劑。
本發明化合物之較佳劑量為患者可以耐受且不會發展出嚴重副作用時之最大劑量。例如：本發明化合物之非經腸式投藥劑量為約0.001 mg/kg至約1 mg/kg，較佳為約0.01 mg/kg至約0.5 mg/kg體重。經口投藥時，劑量範圍實例為約0.01至100 mg/kg，較佳為約0.01至20 mg/kg，更佳為約0.1至10 mg/kg體重。其範圍內之中間數值至所述之限值均亦為本發明之一部份。
儘管如此，本發明醫藥組合物中活性成份之確實劑量程度與投藥時程仍可能改變，以使所得之活性成份用量可以讓特定患者、組合物及投藥模式有效達到所需醫療效力，不會對患者產生毒性。因此可能有必要偏離所述用量，特定言之隨患者之年齡、性別、體重、飲食與一般健康狀況、該特定化合物之生體可用率與藥物動力性特性、及其投藥模式與途徑、投藥之時間與間隔、所選擇之劑量療程、個別患者對活性成份之反應、所涉及之特定疾病、該疾病之程度或涉及之嚴重性、併行治療之型態(亦即本發明化合物與其他共同投與之療法之交互作用)、及其他相關環境條件變化。
因此有時候可能需要採用低於上述最低劑量，而其他病例中可能必需超過最高劑量。可從低於化合物最佳劑量之較低劑量開始。然後可小量逐漸增加劑量，直到達成該環境條件下最佳效力為止。為了方便，每日總劑量可以分成小劑量，在一天內分開投藥。
下列實例係說明本發明。但本發明不受此等實例限制。
下列試驗及實例中所採用之百分比除非另有說明，否則均為重量百分比；份量數係以重量計。液態/液態溶液之溶劑比、稀釋比及濃度數據均分別基於體積計。
A.實例
縮寫及縮語：
LC-MS與GC-MS方法：
方法1(LC-MS)：
儀器：Micromass Quattro Premier，配備Waters UPLC Acquity；管柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ，50 mm x 1 mm；溶離液A：1 L 水+0.5 mL 50%甲酸水溶液，溶離液B：1 L乙腈+0.5 ml 50%甲酸水溶液；梯度：0.0 min 90%A→0.1 min 90%A→1.5 min 10%A→2.2 min 10%A；溫度：50℃；流速：0.33 mL/min；UV檢測：210 nm。
方法2(LC-MS)：
儀器：Waters Acquity SQD UPLC系統；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ，50 mm x 1 mm；溶離液A：1 L水+0.25 mL 99%甲酸，溶離液B：1 L乙腈+0.25 mL 99%甲酸；梯度：0.0 min 90%A→1.2 min 5%A→2.0 min 5%A；烘箱：50℃；流速：0.40 mL/min；UV檢測：210-400 nm。
方法3(LC-MS)：
儀器：Micromass Quattro Micro，配備HPLC Agilent 1100系列；管柱：YMC-Triart C18 3μ，50 mm x 3 mm；溶離液A：1 L水+0.01 mol碳酸銨，溶離液B：1 L乙腈；梯度：0.0 min 100%A→2.75 min 5%A→4.5 min 5%A；烘箱：40℃；流速：1.25 mL/min；UV檢測：210 nm。
方法4(LC-MS)：
儀器：Waters Acquity SQD UPLC系統；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ，30 mm x 2 mm；溶離液A：1 L水+0.25 mL 99%甲酸，溶離液B：1 L乙腈+0.25 mL 99%甲酸；梯度：0.0 min 90%A→1.2 min 5%A→2.0 min 5%A；烘箱：50℃；流速：0.60 mL/min；UV檢測：208-400 nm。
方法5(LC-MS)：
儀器：Micromass Quattro Premier，配備Waters UPLC Acquity；管柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ，50 mm x 1 mm；溶離液A：1 L水+0.5 mL 50%甲酸水溶液，溶離液B：1 L乙腈+0.5 ml 50%甲酸水溶液；梯度：0.0 min 97%A→0.5 min 97%A→3.2 min 5%A→4.0 min 5%A；溫度：50℃；流速：0.3 mL/min；UV檢測：210 nm。
方法6(GC-MS)：
儀器：Micromass GCT，GC6890；管柱：Restek RTX-35，15 m x 200 μm x 0.33 μm；氦氣之恆定流速：0.88 mL/min；烘箱：70℃；入口：250℃；梯度：70℃，30℃/min→310℃(維持3 min)。
方法7(LC-MS)：
儀器MS：Waters Micromass QM；儀器HPLC：Agilent 1100系列；管柱：Agilent ZORBAX Extend-C18 3.0 mm x 50 mm，3.5μ；溶離液A：1 L水+0.01 mol碳酸銨，溶離液B：1 L乙腈；梯度：0.0 min 98%A→0.2 min 98%A→3.0 min 5%A→4.5 min 5%A；溫度：40℃；流速：1.75 mL/min；UV檢測：210 nm。
方法8(LC-MS)：
儀器MS：Waters Micromass ZQ；儀器HPLC：Agilent 1100系列；管柱：Agilent ZORBAX Extend-C18 3.0 mm x 50 mm，3.5μ；溶離液A：1 L水+0.01 mol碳酸銨，溶離液B：1 L乙腈；梯度：0.0 min 98%A→0.2 min 98%A→3.0 min 5%A→4.5 min 5%A；溫度：40℃；流速：1.75 mL/min；UV檢測：210 nm。
一般純化方法(參見下表I與II)：
方法P1：
製備性RP-HPLC(Reprosil C18，梯度：乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。
方法P2：
製備性RP-HPLC(XBridge C18，梯度：乙腈/水+0.1%氨水溶液)。
方法P3：
製備性RP-HPLC(Sunfire C18，梯度：乙腈/水)。
方法P4：
製備性RP-HPLC(XBridge C18，梯度：乙腈/水+0.05%氨水溶液)。
方法P5：
取先前RP-HPLC純化法所得產物溶於甲醇中，通過陰離子交換卡管(Stratospheres SPE，PL-HCO3 MP-樹脂)過濾。該卡管使用甲醇溶離，取濾液蒸發。
方法P6：
取含產物之乙酸乙酯溶液依序經飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，過濾與蒸發。
起始物與中間物：
中間物1A
2-甲氧基-4-甲基苯胺
取含5-甲基-2-硝基苯甲醚(265 g,1.58 mol)與10%Pd/C(39.75 g)之THF(1.32 L)混合物於室溫與1 atm氫氣下攪拌一夜。經矽藻土過濾，與蒸發，產生216.1 g粗產物，其未進一步純化即用於下一個步驟。
LC-MS(方法3)：Rt=2.39 min；MS(ESIpos)：m/z=138(M+H)+ 1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=6.45-6.63(m,3H),4.46(s,2H),3.72(s,3H),2.16(s,3H)ppm。
中間物2A
2-甲氧基-4-甲基苯硫醇
方法1：
取含亞硝酸鈉(7 g,101.4 mmol)之水(25 ml)溶液滴加至含中間物1A(13.7 g,100 mmol)之濃鹽酸(30 ml)與水(85 ml)之冷卻(0°-5℃)溶液中。於0℃下攪拌10 min後，添加乙酸鈉(15 g,182.8 mmol)。所得混合物滴加至含O-乙基二硫代碳酸鉀(30 g,187.1 mmol)之水(140 ml)熱溶液(70°-80℃)中，於70℃至80℃之間攪拌1小時後，冷卻 至室溫。混合物使用乙酸乙酯萃取2次，合併之有機萃液經硫酸鈉脫水，與蒸發。殘質溶於1.3 M氫氧化鉀之乙醇溶液(300 ml)。添加葡萄糖(8 g)，所得混合物回流3 h。然後，蒸發乙醇溶劑，殘質加水稀釋，使用6 N硫酸水溶液稀釋。小心添加鋅粉(15 g)，所得混合物加熱至50℃ 30 min。混合物冷卻至室溫，使用二氯甲烷稀釋，與過濾。濾液使用二氯甲烷萃取2次，與合併之有機萃液經硫酸鈉脫水，與蒸發，產生14.3 g粗產物，其未進一步純化即用於下一個步驟。
方法2：
添加2.9 L THF至含355 ml(6.67 mol)濃硫酸之1.1 L水之溫熱溶液中。於50℃下，攪拌添加293 g(1.33 mol)2-甲氧基-4-甲基苯磺醯氯。然後，小心分批添加521 g(7.97 mol)鋅粉(起泡)，該微放熱反應於水浴中冷卻，以維持50°-55℃之溫度。混合物隨後於55℃下攪拌3 h。採用TLC追蹤反應進度(矽膠，石油醚/乙酸乙酯95：5)。反應混合物倒至13.6 L水中，添加6.8 L二氯甲烷，混合物攪拌5 min。與其餘鋅傾析分離及分相後，水相再經6.8 L二氯甲烷萃取一次。合併之有機相經10%鹽水洗滌，脫水，於40℃下減壓蒸發，產生237 g粗產物。此產物未進一步純化即用於下一個步驟。經過矽膠層析法，使用石油醚/乙酸乙酯(97：3)作為溶離液，得到分析級樣本。
LC-MS(方法1)：Rt=1.21 min；MS(ESIneg)：m/z=153(M-H)- 1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.17(d,1H),6.81(s,1H),6.66(d,1H),4.63(br.s,1H),3.80(s,3H),2.26(s,3H)ppm。
中間物3A
1-[(2,2-二乙氧基乙基)硫基]-2-甲氧基-4-甲基苯
取237 g來自中間物2A之粗產物、287 g(1.46 mol)溴乙醛-二乙基縮醛與862 g(2.65 mol)碳酸銫懸浮於2 L DMF中。先升高反應溫度至40℃，然後於環境溫度下持續攪拌一夜。反應混合物分溶於10 L水與2.7 L乙酸乙酯之間。水相再經一份2.7 L乙酸乙酯萃取。合併之有機相經10%鹽水洗滌，脫水與蒸發。所得油狀殘質經矽膠層析法，使用石油醚/乙酸乙酯(95：5)為溶離液純化。
產量：236 g油狀物(理論值之66%)
GC-MS(方法6)：Rt=6.03 min；MS(EIpos)：m/z=270(M)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.16(d,1H),6.82(s,1H),6.73(d,1H),4.55(t,1H),3.80(s,3H),3.52-3.64(m,2H),3.39-3.51(m,2H),2.96(d,2H),2.33(s,3H),1.09(t,6H)ppm。
中間物4A
7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩
在含13 g聚磷酸與150 ml氯苯之回流混合物中滴加5.2 g(19.2 mmol)中間物3A之溶液，並繼續回流一夜。冷卻後，傾析有機層，殘質與燒瓶使用DCM潤洗2次。合併之有機相減壓蒸發。殘質(3.76 g)使用己烷/0-10%乙酸乙酯為溶離液進行矽膠層析法。
產量：1.69 g油狀物(理論值之49%)
GC-MS(方法6)：Rt=5.20 min；MS(EIpos)：m/z=178(M)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.68(d,1H),7.34(d,1H),7.28(s,1H),6.78(s,1H),3.93(s,3H),2.43(s,3H)ppm。
中間物5A
(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)二羥硼酸
於氬氣下，取26.7 g(150 mmol)中間物4A溶於270 ml THF，並冷卻至-70℃。在-70℃至-65℃之間，以20分鐘時間滴加66 ml(165 mmol)2.5 N正丁基鋰之己烷溶液，有白色沉澱形成。於-70℃下攪拌1 h後，於此溫度下，以10分鐘時間添加41.5 ml(180 mmol)硼酸三異丙基酯(產生濃稠懸浮液)。持續於-70℃下攪拌1 h後，讓反應.混合物回升至室溫一夜。然後，添加400 ml飽和氯化銨溶液，分層，水層再經THF萃取一次。合併之有機相減壓蒸發。在所得殘質中添加200 ml水與86 ml 2 N氫氧化鈉水溶液。溶液經過DCM洗滌2次後，使用35 ml 3 M硫酸酸化，激烈攪拌所得懸浮液1 h。抽吸濾出沉澱，於45℃下真空乾燥一夜。
產量：28.25 g無色固體(由LC-MS測定純度94%，理論值之80%)
LC-MS(方法2)：Rt=0.87 min；MS(ESIpos)：m/z=223(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.17(d,1H),6.81(s,1H),6.66(d,1H),4.63(br.s,1H),3.80(s,3H),2.26(s,3H)ppm。
中間物6A
2-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-甲基-1,3,6,2-二氧氮硼雜辛烷-4,8-二酮
取6.3 g(28.4 mmol)中間物5A與4.2 g(28.4 mmol)2,2'-(甲基亞胺基)二乙酸溶於含45 ml DMSO與400 ml甲苯之混合物中，並使用迪恩-史塔克收集器(Dean-Stark trap)回流16 h。蒸發後，殘質溶於乙酸乙酯，使用水洗滌3次，使用鹽水洗滌一次。有機相經硫酸鎂脫水，並蒸發至200 ml體積。過濾白色固體沉澱，以乙酸乙酯洗滌，及真空乾燥，產生第一批(5.52 g)標題化合物。取母液蒸發後，經過矽膠急驟層析法，使用環己烷/0-100%乙酸乙酯作為溶離液，得到第二批(3.32 g)化合物。
產量：8.84 g(由LC-MS測定總純度為92.5%，理論值之87%)
LC-MS(方法2)：Rt=0.93 min；MS(ESIpos)：m/z=334(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.42(s,1H),7.26(s,1H),6.76(s,1H),4.40(d,2H),4.17(d,2H),3.92(s,3H),2.63(s,3H),2.42(s,3H)ppm。
中間物7A
4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-羧酸乙酯
取含4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-甲腈(3.9 g,24.5 mmol；依PCT國際專利申請案WO 2007/064883之說明製備)之乙醇(124.8 ml)溶液與濃硫酸(62.4 ml)於80℃下攪拌一夜。冷卻至室溫後，反應混合物倒至800 g冰上，使用濃縮之氫氧化鈉水溶液調至pH 6-7。添加乙酸乙酯(500 ml)與二氯甲烷(500 ml)至懸浮液中，所得混合物經過矽藻土過濾。分離有機層與水層。固體溶於熱水(1 L)，水層經過乙酸乙酯萃取2次。合併之有機層經硫酸鈉脫水，與蒸發。殘質與異丙醇/乙醚混合物磨製，濾出固體，產生2.5 g(理論值之49%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.59 min；MS(ESIpos)：m/z=206(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.11-7.97(m,3H),7.88(s,1H),7.34(br.s,1H),4.27(q,2H),1.30(t,3H)ppm。
中間物8A
(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基)甲醇
取含中間物7A(3.0 g,14.5 mmol)之THF(30 ml)之冰冷溶液使用1 M三乙基氫硼化鋰之THF溶液(58 ml)處理，於室溫下攪拌45 min。反應混合物再冷卻至0℃，使用甲醇中止反應，慢慢回升至室溫，並吸附在矽藻土上。經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇 20：1→4：1梯度)，產生2.21 g(理論值之92.5%)標題化合物。
LC-MS(方法3)：Rt=1.46 min；MS(ESIpos)：m/z=164(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.75(s,1H),7.64(br.s,2H),7.50(br.d,1H),6.79(br.d,1H),5.01(t,1H),4.50(d,2H)ppm。
中間物9A
[2-氰基-4-(羥基甲基)-1H-吡咯-1-基]胺基甲酸第三丁基酯
於氬氣下，以15分鐘時間添加1 M甲基鎂化溴之THF溶液(13.3 ml)至已冷卻至-60℃之含(4-溴-2-氰基-1H-吡咯-1-基)胺基甲酸第三丁基酯(3.7 g,12.09 mmol；其製法說明於PCT國際專利申請案WO 2007/064883，中間物AAE，步驟3)之THF(37 ml)溶液中。30 min後，以10分鐘時間添加1.6 M正丁基鋰之己烷溶液(15.1 ml,24.2 mmol)至反應中，所得混合物在-60℃至-40℃之間攪拌1 h。然後添加多聚甲醛(1.09 g,36.3 mmol)至反應中，讓反應混合物慢慢回升至室溫，並攪拌一夜。使用飽和氯化銨水溶液中止反應後，水層使用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯2：1→1：1)，產生2.04 g(理論值之69%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.70 min；MS(ESIpos)：m/z=238(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.79(br.s,1H),7.09(d,1H),6.86(d,1H),4.97(t,1H),4.28(d,2H),1.45(s,9H)ppm。
中間物10A
6-(甲氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
方法1：
取含中間物8A(1.3 g,7.9 mmol)之THF(25 ml)溶液使用亞硫醯氯(1.15 ml,15.8 mmol)處理，於室溫下攪拌2 h。蒸發後，殘質溶於甲醇(25 ml)，以乙酸鈉(1.3 g,15.8 mmol)處理。混合物於65℃下攪拌3 h後，再蒸發一次。經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇100：2)，產生787 mg(理論值之55%)標題化合物。
方法2：
取含中間物9A(6.14 g,25.88 mmol)之4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(15 ml)於室溫下攪拌5 h。使用甲醇(73 ml)稀釋後，繼續於室溫下攪拌一夜。然後添加磷酸鉀(54.9 g,258.65 mmol)與甲脒鎓乙酸鹽(13.46 g,129.32 mmol)，所得混合物於65℃下攪拌17 h。反應混合物蒸發，添加飽和氯化鈉水溶液，混合物依序使用二氯甲烷與乙酸乙酯萃取。合併之有機相經硫酸鈉脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇40：1→20：1)，產生2.36 g(理論值之49%)標題化合物。
LC-MS(方法3)：Rt=1.72 min；MS(ESIpos)：m/z=179(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.77(s,1H),7.69(br.s,2H),7.57(s,1H),6.81(s,1H),4.42(s,2H),3.25(s,3H)ppm。
中間物11A
4-胺基-6-(甲氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲醛
添加磷醯氯(13.7 ml,147.18 mmol)至0℃之含中間物10A(5.24 g,29.43 mmol)之DMF(80 ml)溶液中。所得混合物於60℃下攪拌8 h後，小心加水中止反應，以4 M氫氧化鈉水溶液中和。水層使用乙酸乙酯萃取。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發。取含殘質之甲醇溶液(50 ml)經過乙酸鈉(2.41 g,29.43 mmol)處理，並於回流一夜。反應混合物加水稀釋，使用乙酸乙酯萃取。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發，產生2.66 g粗產物，其未進一步純化即用於下一個步驟。
LC-MS(方法4)：Rt=0.50 min；MS(ESIpos)：m/z=207(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.35(s,1H),8.20(br.s,2H),8.07(s,1H),7.06(s,1H),4.72(s,2H),3.39(s,3H)ppm。
中間物12A
4-胺基-5-溴-6-(甲氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲醛
取含中間物11A(粗產物，2.66 g)之DMF(30 ml)溶液，冷卻至 -30℃，使用含N-溴琥珀醯亞胺(NBS；2.52 g,14.19 mmol)之DMF(14 ml)溶液處理。讓所得混合物慢慢回升至0℃。1小時後，混合物回升至室溫，再攪拌15 min後，使用1 M硫代硫酸鈉水溶液中止反應。濾出沉澱，使用乙酸乙酯洗滌，產生1.1 g(100%純度，理論值之30%)第一批標題化合物。其餘濾液使用乙酸乙酯萃取。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉脫水，與蒸發。殘質經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯1：1→1：3)，再產生1.39 g(70%純度，理論值之26%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.67 min；MS(ESIpos)：m/z=283/285(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.36(s,1H),8.63(br.s,1H),8.13(s,1H),7.23(br.s,1H),4.64(s,2H),3.26(s,3H)ppm。
中間物13A
4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲醛
於氬氣下，添加脫氣之0.5 M磷酸鉀水溶液(9.9 ml)至含中間物12A(710 mg,2.49 mmol)、中間物5A(921 mg,3.73 mmol)與(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；196 mg,249 μmol；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40), 14073-14075(2010))之脫氣THF(28.4 ml)溶液中。所得混合物於60℃下攪拌2 h後，蒸發。殘質經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯5：1→1：1)，產生550 mg(理論值之51%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.06 min；MS(ESIpos)：m/z=383(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.50(s,1H),8.43(br.s,1H),8.21(s,1H),7.42(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),6.09(br.s,1H),4.58(s,2H),3.96(s,3H),3.19(s,3H),2.46(s,3H)ppm。
中間物14A
6-(乙氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
方法1：
於室溫下，以20秒時間，在含2 g(12.2 mmol)中間物8A之40 ml THF懸浮液中添加1.78 ml(24.4 mmol)亞硫醯氯。攪拌混合物1.5 h後，蒸發至乾，殘質溶於40 ml乙醇中。添加2 g(24.4 mmol)乙酸鈉，混合物於70℃下攪拌1 h 45 min。反應混合物再蒸發一次，添加飽和碳酸氫鈉水溶液。混合物使用乙酸乙酯萃取5次。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經過硫酸鎂脫水，與蒸發至乾，產生2.02 g粗產物，經過矽膠管柱層析法使用二氯甲烷/甲醇(0-2%)為溶離液純化。
產量：1.37 g(理論值之58%)。
方法2：
步驟1：取含中間物9A(2.3 g,9.69 mmol)之1,4-二烷(5 ml) 溶液經過4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(24 ml,96.9 mmol)處理，於室溫下攪拌130 min。然後過濾該懸浮液，沉澱物使用1,4-二烷(5 ml)洗滌，及真空乾燥，產生1.01 g(理論值之54%)中間物化合物1-胺基-4-(氯甲基)-1H-吡咯-2-甲腈鹽酸鹽。
步驟2：取來自步驟1之新鮮製備之1-胺基-4-(氯甲基)-1H-吡咯-2-甲腈鹽酸鹽(0.3 g,1.82 mmol)溶於乙醇(10 ml)，於室溫下攪拌5 min。使用甲脒乙酸鹽(813 mg,7.81 mmol)與磷酸鉀(1.66 g,7.81 mmol)處理該溶液，先於室溫下攪拌3天後，再於80℃下攪拌10.5 h。再添加甲脒乙酸鹽(488 mg,4.69 mmol)，混合物於80℃下攪拌18 h。混合物冷卻至室溫，添加水與乙酸乙酯。分離有機相，水相使用使用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經過硫酸鎂脫水，與蒸發。殘質溶於甲醇與二氯甲烷之混合物中，吸附在矽藻土上，真空乾燥，最後經矽膠層析法純化(梯度0-10%甲醇/二氯甲烷)，產生260 mg(理論值之78%)標題化合物。
LC-MS(方法3)：Rt=2.02 min；MS(ESIpos)：m/z=193(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.77(s,1H),7.59-7.74(br.s,2H),7.56(s,1H),6.82(s,1H),5.76(s,1H),4.46(s,2H),3.46(q,2H),1.13(t,3H)ppm。
中間物15A
4-胺基-6-(乙氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲醛
在含2.1 g(10.9 mmol)中間物14A之40 ml無水DMF溶液中， 於0℃與氬氣下滴加5.1 ml(54.6 mmol)磷醯氯。混合物於60℃下攪拌10 h。然後小心添加水，混合物於環境溫度下攪拌至所有反應性中間物均破壞為止(以HPLC監控)。酸性溶液使用1 M氫氧化鈉水溶液中和，以乙酸乙酯萃取3次。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與減壓蒸發。
產量：1.94 g(純度90%，理論值之81%)
LC-MS(方法5)：Rt=1.49 min；MS(ESIpos)：m/z=221(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.35(s,1H),8.14-8.26(m,2H),8.07(s,1H),7.07(s,1H),4.76(s,2H),3.58(q,2H),1.20(t,3H)ppm。
中間物16A
4-胺基-5-溴-6-(乙氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲醛
於-15℃下，在含73 g(0.33 mol)中間物15A之1.9 L DMF溶液中滴加含65 g(0.37 mol)NBS之200 ml DMF溶液。讓混合物回升至0℃，並於此溫度下攪拌3 h。反應混合物於攪拌下倒至2%硫代硫酸鈉水溶液中，濾出沉澱物，以水洗滌，經五氧化磷真空乾燥。
產量：85.6 g(理論值之86%)
LC-MS(方法2)：Rt=0.76 min；MS(ESIpos)：m/z=299/301(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.36(s,1H),8.62(br.s,1H),8.13(s,1H),7.22(br.s,1H),4.68(s,2H),3.49(q,2H),1.10(t,3H)ppm。
中間物17A
4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲醛
於氬氣下，取714 mg(純度85%,2.03 mmol)中間物16A、946 mg(2.84 mmol)中間物6A與160 mg(0.2 mmol)(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))懸浮於15.5 ml THF中。然後添加15.5 ml脫氣之0.5 M磷酸鉀水溶液，混合物於50℃下攪拌16 h。加水後，以乙酸乙酯萃取混合物，合併之有機相經硫酸鎂脫水，與減壓蒸發。殘質經矽膠管柱層析法(100 g)，使用10-50%乙酸乙酯/環己烷為溶離液純化。
產量：452 mg(經HPLC測定純度為75%，理論值之42%)
LC-MS(方法5)：Rt=2.38 min；MS(ESIpos)：m/z=397(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.50(s,1H),8.42(br.s,1H),8.21(s,1H),7.43(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),6.07(br.s,1H),4.63(s,2H),3.96(s,3H),3.40(q,2H),2.46(s,3H),1.02(t,3H)ppm。
中間物18A
(4-胺基-5,7-二溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基)甲醇
取含中間物8A(5 g,30.4 mmol)之THF(100 ml)溶液經過1,3-二溴-5,5-二甲基乙內醯脲(9.58 g,33.5 mmol)處理，於室溫下攪拌2 h。濾出沉澱物，及真空乾燥，產生6.60 g(理論值之64%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.56 min；MS(ESIpos)：m/z=321/323/325(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.23(br.s,1H),7.96(s,1H),6.94(br.s,1H),5.09(br.s,1H),4.43(s,2H)ppm。
中間物19A
(4-胺基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基)甲醇
取含中間物18A(3.7 g,11.5 mmol)之THF(800 ml)懸浮液於攪拌下加熱直到完全溶解。混合物隨後冷卻至-78℃，滴加1.6 M正丁基鋰之己烷溶液(20 ml,32.1 mmol)。5 min後，再加一份1.6 M正丁基鋰溶液(1.5 ml,2.29 mmol)。所得混合物於-78℃下攪拌5 min後，使用甲醇(5 ml)中止反應，並回升至室溫。反應混合物使用飽和氯化銨水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液與乙酸乙酯稀 釋。分相後，有機層使用飽和氯化鈉水溶液洗滌。合併之水相再使用乙酸乙酯萃取。合併之有機相再使用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次，經硫酸鎂脫水，與蒸發，產生2.87 g粗產物，其未進一步純化即用於下一個步驟。
LC-MS(方法3)：Rt=1.73 min；MS(ESIpos)：m/z=243/245(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.41-7.89(br.s,1H),7.82(s,1H),7.66(s,1H),7.13-6.48(br.s,1H),5.11(t,1H),4.45(d,2H)ppm。
中間物20A
[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲醇
取含中間物19A(70%純度，2.52 g,7.26 mmol)、中間物6A(3.63 g,10.9 mmol)與氟化銫(5.51 g,36.3 mmol)之THF/水混合物(10：1；80 ml)之懸浮液於氬氣下脫氣。添加4-(二-第三丁基膦基)-N,N-二甲基苯胺-二氯鈀(2：1；176 mg,0.248 mmol)，所得混合物再脫氣一次，於50℃下攪拌16 h。反應混合物使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，分離有機層，經硫酸鎂脫水，過濾與蒸發。殘質懸浮於甲醇中，濾出所得固體，及真空乾燥，產生1.97 g(90%純度，理論值之72%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.85 min；MS(ESIpos)：m/z=340(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.91(s,1H),7.5-8.1(br.s,1H), 7.72(s,1H),7.35(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),5.5-6.0(br.s,1H),5.06(t,1H),4.49(d,2H),3.95(s,3H),2.45(s,3H)ppm。
中間物21A
6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含中間物20A(400 mg,1.17 mmol)之二氯甲烷(12 ml)溶液使用亞硫醯氯(128 μl,1.76 mmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質溶於甲醇(12 ml)中，使用DIPEA(409 μl,2.35 mmol)處理。混合物回流一夜後，再蒸發一次。經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇98：2→95：5)，產生388 mg(理論值之93%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.00 min；MS(ESIpos)：m/z=355(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.93(s,1H),7.82(s,1H),7.35(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),4.38(s,2H),3.95(s,3H),3.22(s,3H),2.45(s,3H)ppm。
中間物22A
6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含中間物20A(200 mg,587 μmol)之二氯甲烷(5 ml)溶液使用亞硫醯氯(64 μl,881 μmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質於乙醇(5 ml)中回流1 h後，使用DIPEA(204 μl,1.17 mmol)處理，再回流一夜。反應混合物蒸發，粗產物經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇98：2→95：5)，產生202 mg(理論值之90%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=2.32 min；MS(ESIpos)：m/z=369(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.31-7.59(br.s,1H),7.93(s,1H),7.81(s,1H),7.35(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),6.20-5.50(br.s,1H),4.41(s,2H),3.95(s,3H),3.41(q,2H),2.45(s,3H),1.08(t,3H)ppm。
中間物23A
4-{[4-胺基-6-(羥基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-羧酸第三丁基酯
取含中間物20A(9.5 g,27.9 mmol)之乙酸(136.8 ml)溶液使用哌-1-羧酸第三丁基酯(6.24 g,33.49 mmol)與37%甲醛水溶液(2.5 ml,33.49 mmol)處理。混合物於60℃下攪拌2.5 h。蒸發後，殘質溶於乙酸乙酯，混合物使用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌2次，經硫酸鈉脫水，與蒸發。殘質使用沸騰之乙醇(100 ml)磨製。濾出固體，以乙醇與乙醚洗滌，產生9.70 g(理論值之58%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.88 min；MS(ESIpos)：m/z=539(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,CDCl3)：δ=7.94(s,1H),7.13-7.35(m,2H，與CHCl3波峰重疊)，6.67(s,1H),5.86(br.s,1H),5.54(br.s,2H),4.68(s,2H),4.08(s,2H),4.00(s,3H),3.45(br.s,4H),2.59-2.48(m,7H),1.45(s,9H)ppm。
中間物24A
4-({4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-[(2-甲氧基-2-側氧基乙氧基)甲基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基}甲基)哌-1-羧酸第三丁基酯
取含中間物23A(300 mg,556 μmol)之二氯甲烷(12 ml)溶液使用亞硫醯氯(81 μl,1.11 mmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質溶於新鮮蒸餾之乙醇酸甲酯(2.5 ml)中，以DIPEA(485 μl,2.78 mmol)處理。混合物於70℃下攪拌2 h後，再蒸發一次，蒸餾排除過量乙醇酸甲酯。殘質經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯1：5)，產生136 mg(理論值之33%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.88 min；MS(ESIpos)：m/z=611(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,1H),7.39(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.58(s,2H),4.11(s,2H),3.96(s,3H),3.93(s,2H),3.57(s,3H),3.30-3.24(m,4H),2.45-2.38(m,7H),1.39(s,9H)ppm。
中間物25A
4-{[4-胺基-6-甲醯基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-羧酸第三丁基酯
取含中間物23A(300 mg,556 μmol)之二氯甲烷(4.2 ml)溶液使用迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮；307 mg,724 μmol)處理，於室溫下攪拌2 h。反應混合物使用飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和硫代硫酸鈉水溶液(1：1)中止反應，於室溫下攪拌30 min。水層使用二氯甲烷萃取3次，合併之有機層經硫酸鎂脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯1：1→100%乙酸乙酯)，產生273 mg(理論值之87%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.87 min；MS(ESIpos)：m/z=537(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.02(s,1H),8.44-8.18(br.s,1H),8.08(s,1H),7.51(s,1H),7.32(s,1H),6.88(s,1H),6.01-5.74(br.s,1H),4.16(s,2H),3.96(s,3H),3.30-3.22(m,4H),2.48-2.40(m,7H),1.38(s,9H)ppm。
中間物26A
4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-甲醛雙(甲酸鹽)
取含中間物23A(80 mg,148 μmol)之THF(3.9 ml)溶液使用迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮；94 mg,222 μmol)處理，於室溫下攪拌30 min。反應混合物使用飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和硫代硫酸鈉水溶液(1：1)中止反應。水層使用乙酸乙酯萃取3次，合併之有機層經硫酸鎂脫水，與蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(4 ml)，於室溫下攪拌1 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC(Reprosil C18，梯度10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生34 mg(理論值之52%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.78 min；MS(ESIpos)：m/z=437(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=10.02(s,1H),8.29(br.s,2H),8.09(s,1H),7.50(s,1H),7.33(s,1H),6.88(s,1H),4.17(s,2H),3.96(s,3H),2.90-2.81(m,4H),2.63-2.56(m,4H),2.46(s,3H)ppm。
中間物27A
4-({4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-[(3-側氧基哌-1-基)甲基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基}甲基)哌-1-羧酸第三丁基酯
取含中間物25A(185 mg,344 μmol)之THF(4.6 ml)溶液使用2-側氧基哌(344 mg,3.4 mmol)、三乙醯氧基氫硼化鈉(365 mg,1.7 mmol)與乙酸(39 μl,689 μmol)處理。所得混合物於室溫下攪拌2 h後，吸附在矽藻土上，經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇100：8)，產生221 mg(全收量)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.77 min；MS(ESIpos)：m/z=621(M+H)+.
中間物28A
4-胺基-7-{[4-(第三丁氧基羰基)哌-1-基]羰基}-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-羧酸N-乙基乙胺鎓鹽
取含中間物25A(70 mg,130 μmol)之THF/水(10：1,4.85 ml)溶液使用2 M 2-甲基-2-丁烯之THF溶液(521 μl,1.04 mmol)與二氫磷酸鈉(107 mg,783 μmol)處理，於室溫下攪拌5 min。添加次氯酸鈉(70 mg,783 μmol)，所得混合物於室溫下攪拌一夜。加水稀釋後，水相使用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機層經硫酸鈉脫水，與蒸發，殘質經製備性RP-HPLC純化(XBridge C18，梯度5-50%乙腈/水+0.05%二乙基胺)，產生18 mg(理論值之21%)標題化合物。
LC-MS(方法1)：Rt=1.14 min；MS(ESIpos)：m/z=567(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.26-7.89(br.s,1H),7.94(s,1H),7.33(s,1H),7.28(s,1H),6.83(s,1H),5.64-5.33(br.s,1H),3.95(s,3H),2.80(q,4H),2.45(s,3H),1.40(s,9H),1.09(t,6H)ppm。
中間物29A
4-{[4-胺基-6-(疊氮基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-羧酸第三丁基酯
取含中間物23A(150 mg,0.278 mmol)之二氯甲烷(7.5 ml)溶液使用亞硫醯氯(40 μl,0.56 mmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質溶於DMF(6 ml)，以疊氮化鈉(362 mg,5.57 mmol)與碘化鈉(208 mg,1.39 mmol)處理。混合物加熱至80℃ 1 h後，加水稀釋，使用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機層經過水與飽和氯化鈉水溶液洗滌後，經硫酸鎂脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯98：2→100%乙酸乙酯)，產生95.8 mg(理論值之57%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.99 min；MS(ESIpos)：m/z=564(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.20-7.80(br.s,1H),8.01(s,1H),7.39(s,1H),7.33(s,1H),6.86(s,1H),6.05-5.55(br.s,1H),4.50(s,2H),3.96(s,3H),3.94(s,2H),3.32-3.25(m,4H),2.45(s,3H),2.43-2.36(m,4H),1.39(s,9H)ppm。
中間物30A
4-{[6-(乙醯胺基甲基)-4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-羧酸第三丁基酯
取含中間物29A(320 mg,567 μmol)、10%Pd/C(320 mg)與乙酸酐(106 μl,1.13 mmol)之甲醇(32 ml)混合物於室溫與1 atm氫氣下攪拌90 min。混合物經過矽藻土過濾，濾液蒸發。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯1：1→100%乙酸乙酯)，產生440 mg(全收量)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.91 min；MS(ESIpos)：m/z=580(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.02-7.97(m,2H),7.38(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.27(br.d,2H),3.95(s,3H),3.89(s,2H),3.31-3.24(m,4H),2.45(s,3H),2.43-2.36(m,4H),1.74(s,3H),1.39(s,9H)ppm。
中間物31A
7-[(4-乙醯基哌-1-基)甲基]-4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-甲醛
取含實例55(678 mg，純度89%,1.26 mmol)之含分子篩(4Å)之二氯甲烷(4 ml)溶液使用迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮；623 mg,1.47 mmol)處理，於室溫下攪拌5 min。反應混合物隨後吸附在矽藻土上，經矽膠管柱層析法純化(梯度：30-100%乙酸乙酯/環己烷後，0-10%甲醇/二氯甲烷)，產生449 mg(理論值之49%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.70 min；MS(ESIpos)：m/z=479(M+H)+。
中間物32A
4-{[4-胺基-6-(疊氮基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮
取含實例13(59 mg,130 μmol)之二氯甲烷(3.5 ml)溶液使用亞硫醯氯(19 μl,261 μmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質溶於DMF(2.8 ml)中，使用碘化鈉(97 mg,652 μmol)與疊氮化鈉(169 mg,2.6 mmol)處理。混合物於80℃下攪拌1 h。使用飽和氯化鈉水溶液稀釋後，水相使用乙酸乙酯萃取4次，合併之有機層經硫酸鎂脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇98：2→90：10)，產生35 mg(理論值之56%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=2.04 min；MS(ESIpos)：m/z=478(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.02(s,1H),7.75(br.s,1H),7.41(s,1H),7.33(s,1H),6.86(s,1H),4.51(s,2H),4.01(s,2H),3.96(s,3H),3.16-3.08(m,2H),3.04-2.98(m,2H),2.65-2.58(m,2H),2.45(s,3H)ppm。
中間物33A
4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(嗎啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-甲醛
取含實例50(710 mg，純度70%,1.13 mmol)之含分子篩(4Å)之二氯甲烷(5 ml)溶液使用迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮；623 mg,1.47 mmol)處理，於室溫下攪拌5 min。反應混合物隨後吸附在矽藻土上，經矽膠管柱層析法純化(梯度：30-100%乙酸乙酯/環己烷)，產生386 mg(理論值之72%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.76 min；MS(ESIpos)：m/z=438(M+H)+.
中間物34A
(4-胺基-7-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基)甲醇
取含1,3-二溴-5,5-二甲基乙內醯脲(87 mg,0.305 mmol)之THF(1 ml)溶液滴加至-78℃之含中間物8A(100 mg,0.609 mmol)之THF(4 ml)與甲醇(2 ml)溶液中。混合物於-78℃下攪拌16 h後，加水稀釋，使用乙酸乙酯萃取。合併之有機層使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇 20：1→10：1)，產生55 mg(理論值之32%)標題化合物。
LC-MS(方法3)：Rt=1.71 min；MS(ESIpos)：m/z=243/245(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.74-7.94(m,3H),7.04(s,1H),5.12(t,1H),4.48(d,2H)ppm。
中間物35A
7-溴-6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含中間物34A(885 mg,3.64 mmol)之DMF(11 ml)溶液使用第三丁基二甲基矽烷基氯化物(823 mg,5.46 mmol)與咪唑(743 mg,10.92 mmol)處理，於室溫下攪拌2 h。反應混合物與使用100 mg試樣進行測試之反應混合物合併，加水稀釋，使用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機相經水與飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯2：1→100%乙酸乙酯)，產生1.36 g(理論值之93%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.13 min；MS(ESIpos)：m/z=357/359(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.98-7.68(m,3H),7.04(s,1H),4.68(s,2H),0.89(s,9H),0.09(s,6H)ppm。
中間物36A
4-胺基-6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
於氬氣下，取含中間物35A(880 mg,2.46 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂絡鐵]二氯鈀(II)-二氯甲烷複合物[PdCl2(dppf)x DCM](120 mg,0.148 mmol)、雙(二亞苯甲基丙酮)鈀[Pd(dba)2](135 mg,0.148 mmol)、氰化鋅(578 mg,4.92 mmol)、鋅粉(64 mg,0.985 mmol)與乙酸鋅(180 mg,0.985 mmol)之脫氣DMF/水(100：1,9.2 ml)混合物於160℃下攪拌一夜。反應混合物再與使用100 mg試樣進行測試之反應混合物合併，合併之混合物吸附在矽藻土上，再經過另一層矽藻土過濾，以第三丁基甲基醚溶離。濾液使用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，水層再使用第三丁基甲基醚萃取3次。合併之有機相經硫酸鈉脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯1：1)，產生453 mg(理論值之44%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.09 min；MS(ESIpos)：m/z=304(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.22-8.35(m,2H),8.06(s,1H),6.95(s,1H),4.83(s,2H),0.91(s,9H),0.11(s,6H)ppm。
中間物37A
4-胺基-5-溴-6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
取含1,3-二溴-5,5-二甲基乙內醯脲(621 mg,2.17 mmol)之THF (20 ml)溶液滴加至-50℃之含中間物36A(1.1 g,3.62 mmol)之THF(80 ml)溶液中。讓所得混合物慢慢回升至室溫，攪拌2 h後，使用10%硫代硫酸鈉水溶液與飽和碳酸氫鈉水溶液中止反應。水相使用乙酸乙酯萃取3次。濾出自乙酸乙酯溶液中沉澱之固體，使用乙酸乙酯洗滌，產生508 mg(100%純度，理論值之36%)，為第一份標題化合物。其餘濾液經硫酸鈉脫水，與蒸發。殘質自DMSO中沉澱，使用DMSO與乙酸乙酯洗滌，再產生498 mg(85%純度，理論值之26%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=2.70 min；MS(ESIpos)：m/z=382/384(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.10(s,1H),4.76(s,2H),0.90(s,9H),0.12(s,6H)ppm。
中間物38A
4-胺基-6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
於氬氣下，添加含中間物37A(459 mg,1.29 mmol)之脫氣THF(14.8 ml)溶液至(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；152 mg,0.19 mmol；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))與中間物6A (647 mg,1.94 mmol)中。滴加脫氣之0.5 M磷酸鉀水溶液(5.1 ml)，所得混合物於60℃下攪拌2 h。反應混合物與前一次使用70 mg、90 mg與500 mg試樣進行測試之反應混合物合併，與蒸發。殘質經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯3：1→100%乙酸乙酯)，產生1.0 g(理論值之58%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.49 min；MS(ESIpos)：m/z=480(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.57-8.35(br.s,1H),8.18(s,1H),7.41(s,1H),7.30(s,1H),6.86(s,1H),6.28-6.03(br.s,1H),4.74(s,2H),3.95(s,3H),2.44(s,3H),0.83(s,9H),0.00(s,6H)ppm。
中間物39A
4-胺基-6-甲醯基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
取含實例68(250 mg,0.684 mmol)之二氯甲烷(5 ml)溶液使用迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮；377 mg,0.889 mmol)處理，於室溫下攪拌1 h。反應混合物與使用50 mg試樣進行測試之反應混合物合併，使用飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和硫代硫酸鈉水溶液(1：1)中止反應，於室溫下攪拌30 min。水相使用乙酸乙酯萃取3次，合併之 有機相經硫酸鈉脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/25%乙酸乙酯→100%乙酸乙酯)，產生102 mg(理論值之24%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.02 min；MS(ESIpos)：m/z=364(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=9.86(s,1H),8.78(br.s,1H),8.30(s,1H),7.62(s,1H),7.36(s,1H),6.91(s,1H),6.51(br.s,1H),3.97(s,3H),2.46(s,3H)ppm。
中間物40A
4-胺基-6-(疊氮基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
取含實例68(100 mg,273 μmol)之二氯甲烷(5 ml)溶液使用亞硫醯氯(39 μl,547 μmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質溶於DMF(6 ml)中，使用碘化鈉(205 mg,1.36 mmol)與疊氮化鈉(355 mg,5.47 mmol)處理。混合物於80℃下攪拌一夜後，加水稀釋，使用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機層依序使用水、飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉脫水，與蒸發，產生91 mg粗產物，其未進一步純化即用於下一個步驟。
LC-MS(方法2)：Rt=1.13 min；MS(ESIpos)：m/z=391(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：d=8.65-8.45(br.s,1H),8.23(s,1H),7.46(s,1H),7.34(s,1H),6.88(s,1H),6.41-6.10(br.s,1H),4.57(s,2H),3.96(s,3H),2.46(s,3H)ppm。
中間物41A
5,7-二溴-6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含中間物18A(2 g,6.21 mmol)之DMF(20 ml)溶液使用咪唑(846 mg,12.4 mmol)與第三丁基二甲基矽烷基氯化物(1.12 g,7.45 mmol)處理，於室溫下攪拌20 h。反應混合物加水(200 ml)稀釋，於室溫下再攪拌2 h。濾出固體，產生2.46 g(理論值之88%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.37 min；MS(ESIpos)：m/z=437(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.49-8.05(br.s,1H),7.96(s,1H),7.15-6.76(br.s,1H),4.64(s,2H),0.87(s,9H),0.09(s,6H)ppm。
中間物42A
2-[4-胺基-5-溴-6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]丙烷-2-醇
於氬氣下，取含中間物41A(1 g,2.29 mmol)之THF(40 ml)溶液冷卻至-78℃，使用1.6 M甲基鋰之乙醚溶液(1.5 ml,2.40 mmol)處理。於-78℃下攪拌10 min後，添加1.6 M正丁基鋰之己烷溶液(1.58 ml,2.52 mmol)，繼續攪拌10 min。添加丙酮(1.68 ml,22.92 mmol)，讓所得混合物慢慢回升至室溫，於室溫下攪拌18 h。加水中止反應，水相使用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發。經矽膠急驟層析法純化(環己烷/乙酸乙酯2：1)，產生306 mg(理論值之30%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=1.39 min；MS(ESIpos)：m/z=415/417(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.23-7.85(br.s,1H),7.89(s,1H),7.05-6.82(br.s,1H),5.49(s,1H),4.88(s,2H),1.66(s,6H),0.87(s,9H),0.08(s,6H)ppm。
中間物43A
2-[4-胺基-5-溴-6-(羥基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]丙烷-2-醇
取含中間物42A(304 mg,0.732 mmol)之THF(15 ml)溶液使用 1 M四-正丁基銨化氟之THF溶液(768 μl,768 μmol)處理，於室溫下攪拌2 min。反應混合物經過乙腈(20 ml)稀釋後，蒸發，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度10-30%乙腈/0.2%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE，PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，取濾液蒸發，產生180 mg(理論值之67%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.55 min；MS(ESIpos)：m/z=301/303(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.21-7.90(m,1H),7.87(s,1H),7.09-6.60(br.s,1H),5.90(br.s,1H),5.03(br.s,1H),4.63(s,2H),1.66(s,6H)ppm。
中間物44A
4-胺基-7-(2-羥基丙烷-2-基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-甲醛
取含實例73(135 mg，純度89%,302 μmol)之二氯甲烷(7 ml)溶液使用迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮；166 mg,392 μmol)處理，於室溫下攪拌70 min。反應混合物與使用18 mg(45 μmol)試樣進行 測試之反應混合物合併，使用飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和硫代硫酸鈉水溶液(1：1)中止反應。水相使用二氯甲烷萃取3次。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發，產生143 mg(純度77%，理論值之92%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.08 min；MS(ESIpos)：m/z=397(M+H)+.
中間物45A
6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含1.5 g(9.14 mmol)中間物8A之15 ml無水DMF溶液使用1.65 g(10.96 mmol)第三丁基二甲基矽烷基氯化物與1.24 g(18.27 mmol)咪唑處理，於室溫下攪拌一夜。反應混合物倒至250 ml水中，攪拌5 min。濾出所得沉澱，於45℃下真空乾燥。產量：2.28 g(理論值之90%)。
LC-MS(方法5)：Rt=2.12 min；MS(ESIpos)：m/z=279(M+H)+.
中間物46A
6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)-7-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含2 g(7.18 mmol)中間物45A之20 ml THF溶液，於-10℃下，以60分鐘時間，使用893 mg(6.47 mmol)N-氯琥珀醯亞胺分成6份處理。持續於-10℃下攪拌15 min後，讓混合物回升至室溫。於室溫下再添加192 mg(1.44 mmol)N-氯琥珀醯亞胺，續攪拌一夜。取約十分之一反應混合物蒸發至乾後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生94 mg(理論值之4%)標題化合物。大部份反應混合物吸附在矽膠上，使用異己烷/乙酸乙酯5-66%為溶離液，進行矽膠層析法，產生899 mg(理論值之40%)標題化合物。總產量：993 mg(理論值之44%)。
LC-MS(方法5)：Rt=2.45 min；MS(ESIpos)：m/z=313(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.69-8.04(m,3H),7.0(s,1H),4.70(s,2H),0.88(s,9H),0.08(s,6H)ppm。
中間物47A
5-溴-6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)-7-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含890 mg(2.85 mmol)中間物46A之20 ml DMF溶液，於-10℃下，以1小時時間使用506 mg(2.85 mmol)N-溴琥珀醯亞胺分批處理。持續於-10℃下攪拌3 h後，於室溫下一夜。加水(200 ml)，混合物攪拌2 h。濾出沉澱固體，以水洗滌，及於45℃下真空乾燥。
產量：997 mg(理論值之89%)。
LC-MS(方法5)：Rt=2.82 min；MS(ESIpos)：m/z=391/393/395 (M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.32(br.s,1H),7.97(s,1H),6.97(br.s,1H),4.66(s,2H),0.87(s,9H),0.09(s,6H)ppm。
中間物48A
6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)-7-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
於氬氣下，在燒瓶中添加800 mg(2.04 mmol)中間物47A、680 mg(2.04 mmol)中間物6A、80 mg(0.1 mmol)(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))與1.3 g(6.13 mmol)磷酸鉀。然後添加30 ml脫氣之1,4-二烷/水混合物(5：1)，溶液於70℃下攪拌1 h。再添加680 mg(2.04 mmol)中間物6A與32 mg(0.04 mmol)(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1)，再繼續於70℃下攪拌1 h。重覆此過程3次，直到起始物已消耗為止(以LC-MS監控)。使用最後一份試劑，亦即1.6 ml 5 M氫氧化鈉水溶液加至pH值達到8至9。反應期結束時，添加30 ml水與5 M甲酸水溶液(pH 3-4)，此時有油分離。取一部份此油狀物經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度10-95% 乙腈/0.1%甲酸水溶液)。得到兩份標題化合物：103 mg固體(以LC-MS測定為89%純度，理論值之9%)與23 mg固體(以LC-MS測定為100%純度，理論值之2%)。其餘油狀物與上清液加水稀釋，使用飽和碳酸氫鈉水溶液調至pH 8-9，使用二氯甲烷萃取3次。合併之有機相經水洗滌，脫水與減壓蒸發，產生2.1 g油狀物。此物質經矽膠管柱層析法，使用二氯甲烷/0-5%甲醇為溶離液純化，再產生709 mg(以LC-MS測定為43%純度，理論值之31%)標題化合物。
總產量：理論值之42%
LC-MS(方法2)：Rt=1.57 min；MS(ESIpos)：m/z=489(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.08(s,1H),7.43(s,1H),7.32(s,1H),6.88(s,1H),4.66(s,2H),3.98(s,3H),2.47(s,3H),0.84(s,9H),-0.03(s,6H)ppm。
中間物49A
4-胺基-7-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-甲醛
於0-5℃下，在含166 mg(0.44 mmol)實例79與分子篩(3Å)之3 ml二氯甲烷懸浮液中添加207 mg(0.49 mmol)迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜 環戊烯-3(1H)-酮)。於此溫度下攪拌混合物10 min後，再加56 mg(0.13 mmol)迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)，持續於5℃下攪拌15 min，及於環境溫度下攪拌10 min。然後讓混合物吸附在矽藻土上，經矽膠管柱層析法，使用二氯甲烷/0-10%甲醇為溶離液純化。產量：100 mg固體(以LC-MS測定為92.7%純度，理論值之56%)。
LC-MS(方法2)：Rt=1.08 min；MS(ESIpos)：m/z=373(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=9.90(s,1H),8.46(br.s,1H),8.15(s,1H),7.54(s,1H),7.34(s,1H),6.89(s,1H),6.07(br.s,1H),3.96(s,3H),2.46(s,3H)ppm。
中間物50A
7-氯-6-(氯甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
標題化合物係在製備實例79(參見下文)中單離之副產物。產量：9.2 mg(理論值之10%)。
LC-MS(方法3)：Rt=2.98 min；MS(ESIpos)：m/z=393/395(M+H)+.
中間物51A
6-({[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧}甲基)-7-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
於氬氣下，在含3 g(8.4 mmol)中間物35A之60 ml 1,4-二烷溶液中添加171 mg(0.21 mmol)PdCl2(dppf)x DCM後，以10 min時間滴加16.8 ml 2 M二甲基鋅之甲苯溶液(造成溫度從22℃上升至31℃)。先在環境溫度下攪拌10 min後，於90℃下攪拌13 h。然後添加水(10 ml)至室溫下之反應混合物中，攪拌懸浮液1 h。混合物減壓蒸發，殘質溶於水與乙酸乙酯中，再攪拌1 h。濾出沉澱物，並棄置不要，分相，水層使用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機相脫水與蒸發，產生2.45 g(以LC-MS測定為92%純度，理論值之92%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=2.18 min；MS(ESIpos)：m/z=293(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.98-7.78(m,3H),7.04(s,1H),4.68(s,2H),0.89(s,9H),0.09(s,6H)ppm。
中間物52A
(4-胺基-7-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基)甲醇
方法1：
於氬氣下，在含100 mg(0.28 mmol)中間物35A之2 ml 1,4-二烷溶液中添加6 mg(0.01 mmol)PdCl2(dppf)x DCM後，以10 min時間滴加0.56 ml 2 M二甲基鋅之甲苯溶液。混合物於90℃下攪拌一夜後，蒸發，殘質使用乙腈與5 M甲酸水溶液處理。濾出沉澱，濾液蒸發，殘質溶於DMSO/乙腈中，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)。產量：33 mg(理論值之66%)。
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.79(s,1H),7.47(br.s,2H),6.80(s,1H),4.84(t,1H),4.49(d,2H),2.36(s,3H)ppm。
方法2：
於氬氣下，在微波反應容器中添加750 mg(3.1 mmol)中間物34A、515 μl(3.7 mmol)三甲基硼雜環己烯、786 mg(3.7 mmol)磷酸鉀與73 mg(0.09 mmol)(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))。然後添加13 ml脫氣之1,4-二烷/水混合物(5：1)，密封該容器，混合物於微波爐(4巴，50瓦)中加熱至140℃ 20 min。再加50 mg(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1)，混合物再於微波爐中加熱至140℃ 20 min。再加一份515 μl三甲基硼雜環己烯，容器再加熱至140℃ 20 min。再重覆後述製程2次，每次加熱時間30 min，直到LC-MS顯示僅剩少量起始物時為止。混合物經過矽藻土過濾，使用1,4-二烷洗滌，取合併之濾液蒸發至乾。取此殘質與先前使用100 mg試樣進行測試之殘質合併，經製備性RP-HPLC純化(XBridge C18，梯度5-42%乙腈/0.05%氫氧化銨水溶液)。產量：238 mg(理論 值之38%)。
LC-MS(方法5)：Rt=0.51 min；MS(ESIneg)：m/z=177(M-H)-
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.79(s,1H),7.48(br.s,2H),6.80(s,1H),4.84(t,1H),4.49(d,2H),2.36(s,3H)ppm。
中間物53A
(4-胺基-5-溴-7-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基)甲醇
取含245 mg(1.38 mmol)中間物52A之8.8 ml DMF溶液，於-10℃下，以2 h時間使用288 mg(1.62 mmol)N-溴琥珀醯亞胺分批處理。持續於-10℃下攪拌30 min後，於環境溫度下攪拌2 h。混合物倒至50 ml水中，使用乙酸乙酯萃取。合併之有機相脫水與蒸發。殘質經過矽膠急驟層析法，使用二氯甲烷/0-15%甲醇為溶離液純化。
產量：148 mg(理論值之42%)。
LC-MS(方法4)：Rt=0.42 min；MS(ESIpos)：m/z=257/259(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.85(s,1H),6.14-8.22(broad,2H),4.88(t,1H),4.45(d,2H),2.43(s,3H)ppm。
中間物54A
4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-甲醛
於0-5℃下，在含175 mg(0.49 mmol)實例75與分子篩(3Å)之3.5 ml二氯甲烷懸浮液中添加230 mg(0.54 mmol)迪斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜環戊烯-3(1H)-酮)。於此溫度下攪拌混合物5 min後，於室溫下30 min。然後讓混合物吸附在矽藻土上，經過矽膠急驟層析法，使用異己烷/10-100%乙酸乙酯為溶離液純化。產量：139 mg固體(理論值之79%)。
LC-MS(方法5)：Rt=2.34 min；MS(ESIpos)：m/z=353(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=9.93(s,1H),8.06(s,1H),7.50(s,1H),7.33(s,1H),6.88(s,1H),3.96(s,3H),2.71(s,3H),2.46(s,3H)ppm。
中間物55A
4-[(4-胺基-6-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基)甲基]哌-1-羧酸第三丁基酯
取含6-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺(500 mg,3.3 mmol；其製法說明於PCT國際專利申請案WO 2007/056170)之乙酸(8 ml)溶液使用37%甲醛水溶液(328 μl,4.04 mmol)與哌-1-羧酸第三丁基酯(754 mg,4.04 mmol)處理。混合物於60℃下攪拌一夜。蒸發後，殘質溶於乙酸乙酯，使用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。水層使用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機相經硫酸鎂脫水與蒸發，產生1.2 g粗產物，其未進一步純化即用於下一個步驟。
LC-MS(方法2)：Rt=0.56 min；MS(ESIpos)：m/z=347(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.79(s,1H),7.51(br.s,2H),6.67(s,1H),3.76(br.s,2H),3.29-3.17(m,4H),2.36-2.29(m,4H),2.22(s,3H),1.37(s,9H)ppm。
中間物56A
4-[(4-胺基-5-溴-6-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基)甲基]哌-1-羧酸第三丁基酯
取含中間物55A(1.17 g,3.37 mmol)之THF(20 ml)溶液冷卻至-60℃，使用1,3-二溴-5,5-二甲基乙內醯脲(5.78 mg,2.02 mmol)處理。混合物於-60℃至-20℃下攪拌4 h。然後，反應混合物使用10%硫代硫酸鈉水溶液中止反應。蒸發大部份THF溶劑，此時有固體沉澱。過濾，自丙酮中再結晶，產生862 mg(理論值之59%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.66 min；MS(ESIpos)：m/z=425/427(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.29-7.62(br.s,1H),7.85(s,1H),7.17-6.44(br.s,1H),3.80(s,2H),3.29-3.22(m,4H),2.37-2.27(m,4H),2.16(s,3H),1.37(s,9H)ppm。
中間物57A
4-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-羧酸第三丁基酯
取含中間物56A(100 mg,235 μmol)之脫氣1,4-二烷(3 ml)溶液使用中間物6A(93 mg,282 μmol)、二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(S-Phos；9.6 mg,23 μmol)與二乙酸鈀(2.6 mg,11 μmol)處理。添加脫氣之3 M磷酸鉀水溶液(588 μl)，所得混合物於60℃下攪拌 1 h。再加一份中間物6A(78 mg,235 μmol)，持續於60℃下攪拌一夜。反應混合物使用2 M氫氧化鈉水溶液中止反應，水相使用乙酸乙酯萃取。合併之有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯3：2)，產生82 mg(理論值之62%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.97 min；MS(ESIpos)：m/z=523(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.94(s,1H),7.34(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),3.95(s,3H),3.84(s,2H),3.30-3.23(m,4H，與水波峰重疊)，2.45(s,3H),2.42-2.33(m,4H),2.19(s,3H),1.39(s,9H)ppm。
中間物58A
4-[(4-胺基-6-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基)甲基]哌-1-羧酸第三丁基酯
依據中間物55A之製程，使用4 g(23.7 mmol)6-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺(其製法說明於PCT國際專利申請案WO 2007/064883)反應，產生11.2 g標題化合物。化合物為粗產物，其未進一步純化即用於下一個步驟。
LC-MS(方法5)：Rt=0.74 min；MS(ESIpos)：m/z=367(M+H)+
取100 mg上述得到之粗產物經過製備性RP-HPLC單離(Reprosil C18，梯度10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，得到67 mg相應之甲酸 鹽：4-[(4-胺基-6-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基)甲基]哌-1-羧酸第三丁基酯甲酸鹽。
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.14(s,1H),7.91(s,1H),7.83(br.s,2H),6.95(s,1H),3.80(s,2H),3.17(s,2H),2.38(br.s,4H),1.37(s,9H)ppm。
中間物59A
4-[(4-胺基-5-溴-6-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基)甲基]哌-1-羧酸第三丁基酯
依據中間物56A之製程，由11 g(30 mmol)中間物58A反應，經過矽膠急驟層析法(二氯甲烷/甲醇10：1)與隨後之製備性RP-HPLC(Daiso C18，梯度40-65%乙腈/水)，得到1.17 g(理論值之9%)標題化合物。。
LC-MS(方法2)：Rt=0.74 min；MS(ESIpos)：m/z=445/447/449(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=7.96(s,1H),3.84(s,2H),2.37(br.s,4H),1.37(s,9H)ppm。
中間物60A
4-{[4-胺基-6-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-羧酸第三丁基酯
於氬氣下，在燒瓶中添加140 mg(0.31 mmol)中間物59A、102 mg(0.46 mmol)中間物5A、16 mg(0.02 mmol)PdCl2(dppf)x DCM與122 mg(1.15 mmol)碳酸鈉。添加3 ml脫氣之1,2-二甲氧基乙烷/水(3：1)，後，懸浮液於60℃下攪拌2.5 h。再加一份中間物5A(50 mg,0.23 mmol)與PdCl2(dppf)x DCM(8 mg,0.01 mmol)，繼續於40℃下攪拌2.5 h。再重覆一次後述之製程，直到起始物消耗為止。然後減壓蒸發反應混合物，加水，混合物使用二氯甲烷萃取。合併之有機相使用水與飽和氯化鈉水溶液洗滌，脫水與減壓蒸發。殘質(322 mg)經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生49 mg標題化合物與脫除Boc保護基之衍生物(6-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺)之混合物。此混合物直接用於下一個反應步驟(參見實例85)。
LC-MS(方法2)：Rt=1.00 min；MS(ESIpos)：m/z=543(M+H)+，與Rt=0.81 min；MS(ESIpos)：m/z=443(M+H)+.
中間物61A
4-{[4-胺基-6-(甲氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌 -2-酮
取含中間物10A(5 g,28.1 mmol)與哌-2-酮(3.09 g,30.9 mmol)之乙酸(85 ml)溶液使用37%甲醛水溶液(3.15 ml,42.1 mmol)處理，於60℃下攪拌16 h。減壓蒸發揮發物，殘質溶於甲醇，吸附在矽藻土上。經矽膠管柱層析法純化(5-10%甲醇/二氯甲烷)，產生3.91 g(理論值之46%)標題化合物。
LC-MS(方法3)：Rt=1.68 min；MS(ESIpos)：m/z=291(M+H)+.
中間物62A
4-{[4-胺基-5-溴-6-(甲氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮
取含中間物61A(3.9 g,13.4 mmol)之DMF(50 ml)溶液冷卻至0℃，使用N-溴琥珀醯亞胺(2.63 g,14.8 mmol)之DMF(6 ml)溶液處理。混合物於0℃下攪拌1 h。然後蒸發溶劑，殘質溶於甲醇，吸附在矽藻土上。經矽膠管柱層析法純化(5-10%甲醇/二氯甲烷)，產生1.99 g(理論值之39%)標題化合物。
LC-MS(方法3)：Rt=1.86 min；MS(ESIpos)：m/z=369/371(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.96-8.23(br.s,1H),7.90(s,1H),7.71(s,1H),6.72-6.98(br.s,1H),4.45(s,2H),3.91(s,2H),3.27(s,3H),3.07(br.s,2H),2.96(s,2H),2.56(br.s,2H)ppm。
中間物63A
7-(氯甲基)-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺鹽酸鹽
取含實例86(1 g,2.51 mmol)之甲苯(60 ml)懸浮液，滴加亞硫醯氯(1.83 ml,25.1 mmol)處理，於室溫下攪拌混合物一夜。減壓蒸發揮發物。殘質與甲苯於減壓下共同蒸發3次，產生0.85 g(理論值之74%)標題化合物。化合物未進一步純化即用於下一個步驟。
中間物64A
4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-羧酸
取含中間物17A(5 g,12.6 mmol)之THF/水(10：1,220 ml)懸浮液使用2 M 2-甲基-2-丁烯之THF溶液(31.5 ml,63.1 mmo1)與二氫磷酸鈉(6.96 g,50.4 mmol)處理。混合物於室溫下攪拌5 min。然後添加次氯酸鈉(4.56 g,50.44 mmol)，所得混合物於室溫下攪拌20 h。過濾懸浮液，使用水洗滌所得固體，產生4.24 g(理論值之74%)標題化合物。其未進一步純化即用於下一個步驟。
LC-MS(方法4)：Rt=1.06 min；MS(ESIpos)：m/z=413(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=13.22(br.s,1H),8.53-8.00(br.s,1H),8.14(s,1H),7.41(s,1H),7.33(s,1H),6.86(s,1H),6.28-5.65(br.s,1H),4.61(s,2H),3.96(s,3H),3.36(q,2H),2.46(s,3H),1.01(t,3H)ppm。
中間物65A
5,7-二甲氧基-1-苯并噻吩
於氬氣下，在含1-苯并噻吩-5,7-二醇(1.16 g,6.98 mmol)之丙酮(20 ml)溶液中添加碳酸鉀(2.89 g,20.9 mmol)與碘甲烷(912 μl,14.6 mmol)。所得混合物於回流下攪拌18 h。冷卻至室溫後，混合物使用7 M氨之甲醇溶液(10 ml)處理30 min後，吸附在矽膠上。經矽膠管柱層析法純化(環己烷/乙酸乙酯40：1)，產生0.52 g(理論值之32%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=1.02 min；MS(ESIpos)：m/z=195(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.69(d,1H),7.35(d,1H),7.02(d,1H),6.57(d,1H),3.92(s,3H),3.81(s,3H)ppm。
中間物66A
(5,7-二甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)二羥硼酸
於氬氣下，滴加1.6 M正丁基鋰之己烷溶液(1.84 ml,2.95 mmol)至-70℃之含中間物65A(520 mg,2.68 mmol)之無水THF(5 ml)溶液中。於-70℃下1 h後，添加硼酸三異丙基酯(742 μl,3.21 mmol)，混合物攪拌16 h，同時慢慢回升至室溫。添加二氯甲烷與飽和氯化銨水溶液，添加1 M鹽酸調整pH值至6。分離有機相，水相使用二氯甲烷萃取。合併之有機相經過硫酸鎂脫水，過濾與蒸發。所得殘質經矽膠管柱層析法純化(依序使用二氯甲烷/甲醇40：1、甲醇溶離後，最後使用甲醇/4 M鹽酸之1,4-二烷溶液10：1溶離)，產生631 mg(71%純度，理論值之71%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.83 min；MS(ESIpos)：m/z=239(M+H)+.
中間物67A
4-胺基-6-(氯甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲醛
中間物67A為合成中間物11A時，經過矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/丙酮8：2→7：3)後單離之副產物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.6 min；MS(ESIpos)：m/z=211/213(M+H)+.
中間物68A
4-胺基-6-[(3-側氧基哌-1-基)甲基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲醛
取含中間物67A(11.03 g,52.4 mmol)與2-側氧基哌(6.82 g,68.1 mmol)之331 ml DMF溶液於室溫下使用DIPEA(13.7 ml,78.6 mmol)處理，攪拌一夜。濾出沉澱物，使用DMF與乙醚洗滌後，真空乾燥，產生11.64 g標題化合物(89%純度，理論值之72%)。
LC-MS(方法7)：Rt=1.30 min；MS(ESIpos)：m/z=275(M+H)+.
中間物69A
4-{[4-胺基-7-(羥基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2- 酮
於室溫下，在含中間物68A(10.17 g，89%純度，33.01 mmol)之1 M鹽酸(370 ml)與甲醇(370 ml)溶液中添加鋅粉(12.1 g,185 mmol)，混合物於室溫下攪拌18 h。添加矽膠(100 g)，減壓蒸發揮發物。殘質懸浮於甲醇中，再次減壓蒸發揮發物，殘質真空乾燥。固體經過矽膠管柱層析法(梯度：二氯甲烷/7 M氨之甲醇溶液10：1→3：1)，產生6.39 g標題化合物(理論值之60%)。
LC-MS(方法8)：Rt=1.12 min；MS(ESIpos)：m/z=277(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.83(s,1H),7.76(br.s,1H),7.64(br.s,2H),6.83(s,1H),5.01(br.s,1H),4.74(s,2H),3.64(br.s,2H),3.14(br.s,2H),2.95(br.s,2H),2.58(br.s,2H)ppm。
中間物70A
4-{[4-胺基-5-溴-7-(羥基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮三氟乙酸鹽
取含中間物69A(1 g)之甲醇/水(10：1,33 ml)懸浮液使用三氟乙酸(0.56 ml,7.24 mmol)處理，產生澄清溶液。於0℃下滴加含N- 溴琥珀醯亞胺(708 mg,3.98 mmol)之甲醇(30 ml)溶液，混合物於0℃下攪拌1 h。濾出所形成之沉澱物，及真空乾燥，產生700 mg標題化合物(理論值之41%)。
LC-MS(方法7)：Rt=1.38 min；MS(ESIpos)：m/z=355/357(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=7.90(s,1H),5.00(s,2H),4.44(s,2H),3.85(s,2H),3.58(br.t,2H),3.50(br.t,2H)ppm。
製備實例：
實例1
4-{[4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮
方法1：
取含中間物13A(3 g,7.84 mmol)之甲醇(87 ml)溶液使用乙酸(0.898 ml,15.68 mmol)、2-側氧基哌(1.17 g,11.76 mmol)與三乙醯氧基氫硼化鈉(4.98 g,23.53 mmol)處理。混合物於室溫下攪拌4.5 h。再加一份2-側氧基哌(392 mg,3.9 mmol)與三乙醯氧基氫硼化鈉(3.3 g,15.68 mmol)，所得混合物於60℃下攪拌一夜。蒸發後，殘質溶於飽和碳酸氫鈉水溶液中，以乙酸乙酯萃取。合併之有機相 經硫酸鈉脫水，與蒸發，殘質經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇40：1→10：1)。所得產物於甲醇中磨製，並濾出，產生540 mg(理論值之14%)標題化合物。取含甲醇之母液蒸發，殘質經兩次RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)。合併含產物之溶離份，使用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。蒸發乙腈溶劑，水相經乙酸乙酯萃取。合併之有機相經硫酸鈉脫水，與蒸發，產生395 mg(理論值之13%)之第二批標題化合物。
方法2：
取含中間物21A(291 mg,0.82 mmol)之乙酸(2.9 ml)溶液使用37%甲醛水溶液(104 μl,1.39 mmol)與2-側氧基哌(139 mg,1.39 mmol)處理。混合物於60℃下攪拌3 h後，蒸發。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生184 mg(理論值之44%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.77 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.00(s,1H),7.73(br.s,1H),7.37(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),4.41(s,2H),3.97(s,2H),3.96(s,3H),3.20(s,3H),3.15-3.08(br.s,2H),3.01(s,2H),2.64(br.t,2H),2.45(s,3H)ppm。
實例2
4-{[4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮二鹽酸鹽
取含實例1(100 mg,214 μmol)之1,4-二烷(2 ml)溶液使用4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml,8 mmol)處理。蒸發溶劑，留下130 mg(全收量)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.79 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.39(br.s,1H),8.31-8.53(br.s,1H),8.17(s,1H),7.38(s,1H),7.34(s,1H),6.87(s,1H),6.21-6.42(br.s,1H),4.81(br.s,2H),4.52(br.s,2H),3.96(s,3H),3.57(s,2H),3.32-3.72(m,4H),3.26(s,3H),2.46(s,3H)ppm。
實例3
(3R)-3-({[4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}胺基)吡咯啶-2-酮二鹽酸鹽
取含中間物13A(520 mg,1.36 mmol)之甲醇(15 ml)與乙酸(156 μl,2.7 mmol)溶液使用(R)-3-胺基吡咯啶-2-酮(503 mg,5.0 mmol)與三乙醯氧基氫硼化物(1.06 g,5.0 mmol)處理。混合物於室溫下攪拌一夜後，蒸發。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，所得產物自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生272 mg(理論值之36%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.70 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：d=9.62(br.s,1H),9.46(br.s,1H),8.56-8.22(br.s,1H),8.44(s,1H),8.19(s,1H),7.38(s,1H),7.34(s,1H),6.87(s,1H),6.54-6.12(br.s,1H),4.89-4.65(m,2H),4.58-4.46(m,2H),4.17-4.07(br.s,1H，與水波峰重疊)，3.96(s,3H),3.36-3.16(m,2H),3.25(s,3H),2.48-2.39(m,1H),2.46(s,3H),2.23-2.06(m,1H)ppm。
實例4
(3R)-3-({[4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}胺基)吡咯啶-2-酮
取含中間物13A(2.0 g,5.2 mmol)之甲醇(58 ml)與乙酸(0.6 ml)溶液使用(R)-3-胺基吡咯啶-2-酮(785 mg,7.8 mmol)與三乙醯氧基氫硼化物(3.32 g,15.6 mmol)處理。混合物於室溫下攪拌一夜。然後使用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋反應混合物，使用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機相經硫酸鈉脫水，與蒸發。殘質經兩次矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇40：1至10：1)，產生957 mg(理論值之37%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.72 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.01(s,1H),7.75(s,1H),7.35(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.46-4.34(m,2H),4.24-4.02(m,2H),3.96(s,3H),3.24-3.04(m,3H),3.21(s,3H),2.45(s,3H),2.40-2.27(m,1H),1.80-1.65(m,1H)ppm。
實例5
4-{[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮
方法1：
取含中間物17A(2 g,5.05 mmol)之THF(100 ml)溶液，於0℃下使用2-側氧基哌(1.01 g,10.1 mmol)、三乙醯氧基氫硼化鈉(1.07 g,5.04 mmol)與乙酸(0.29 ml,5.04 mmol)處理。所得混合物於0℃下攪拌30 min。每30分鐘添加三乙醯氧基氫硼化鈉(1.07 g,5.04 mmol)與乙酸(0.29 ml,5.04 mmol)共四份，所得混合物再於0℃下攪拌30 min，然後於35℃下攪拌25 min，最後於室溫下攪拌一夜。使用10%氯化鈉水溶液中止反應，使用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機層蒸發。殘質經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇95：5→90：10)，在分開之溶離份中產生360 mg(理論值之17%)實例86說明之化合物(參見下文)與1.82 g標題化合物。取所得標題產物懸浮於乙醇(20 ml)中，回流2 h後，冷卻至15℃。濾出固體，使用乙醇洗滌，產生1.63 g(理論值之67%)純標題化合物。
方法2：
取含實例13(930 mg,1.9 mmol)之二氯甲烷(18 ml)溶液使用亞硫醯氯(210 μl,2.8 mmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質溶於乙醇(18 ml)，使用DIPEA(670 μl,3.8 mmol)處理。混合物於70℃下攪拌2 h後，蒸發。殘質經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇 98：2→90：10)。所得產物於乙腈/乙醚混合物中磨製與過濾。濾液蒸發，殘質經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇98：2→90：10)。所得產物再次於乙腈/乙醚中磨製與過濾。再重覆此製程一次。合併依此方式得到之三批固體，再次於乙腈/乙醚中磨製，最後濾出，產生600 mg(理論值之62%)標題化合物。
方法3：
取含中間物22A(720 mg，純度89%,1.74 mmol)之乙酸(10 ml)溶液與哌-2-酮(261 mg,2.61 mmol)於60℃下攪拌。分別在0、3與12 h後添加37%甲醛水溶液(260 μl,3.48 mmol)，共3份，混合物於60℃下攪拌共24 h。然後，減壓排除揮發物，殘質分溶在乙酸乙酯與飽和碳酸氫鈉水溶液之間。有機相經飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發。殘質溶於甲醇與二氯甲烷之混合物中，吸附在矽藻土上，真空乾燥，經矽膠急驟層析法純化(梯度：0-6%甲醇/二氯甲烷)。合併含產物溶離份，蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：30-50%乙腈/0.2%TFA水溶液)。再次合併含產物溶離份，使用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋，使用乙酸乙酯萃取。有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發，產生281 mg(理論值之31%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.86 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.01(s,1H),7.8-8.05(br.s,1H),7.74(br.s,1H),7.38(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),5.6-5.9(br.s,1H),4.45(s,2H),3.97(s,2H),3.94(s,3H),3.41(q,2H),3.09-3.13(m,2H),3.02(s,2H),2.63-2.69(br.s,2H),2.45(s,3H),1.07(t,3H)ppm。
實例6
4-{[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮二鹽酸鹽
取含中間物17A(60 mg，純度69%,104 μmol)之甲醇(6 ml)溶液使用2-側氧基哌(22 mg,209 μmol)、氰基氫硼化鈉(33 mg,522 mmol)與乙酸(12 μl,209 μmol)處理。混合物於60℃下攪拌16 h後，過濾。濾液與殘質分別經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：40-60%乙腈/0.2%TFA水溶液)。合併產物溶離份，使用1 M鹽酸(3 ml)稀釋與蒸發至乾，產生46 mg(理論值之79%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.87 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.37(br.s,1H),8.31(br.s,1H),8.14(s,1H),7.38(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),6.13(br.s,1H),4.80(br.s,2H),4.52(s,2H),3.96(s,3H),3.86(br.s,2H),3.36-3.51(m,5H),2.46(s,3H),1.11(t,3H)ppm。
實例7
(3R)-3-({[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2- 基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}胺基)吡咯啶-2-酮二鹽酸鹽
取含中間物17A(60 mg，純度69%,104 μmol)之甲醇(3 ml)溶液使用(R)-3-胺基吡咯啶-2-酮(22 mg,209 μmol)、氰基氫硼化鈉(33 mg,522 μmol)與乙酸(12 μl,209 μmol)處理。混合物於60℃下攪拌4 h後，過濾。濾液經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：40-60%乙腈/0.2%TFA水溶液)。合併產物溶離份，使用1 M鹽酸稀釋，蒸發至乾，產生46 mg(理論值之79%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.74 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=9.58-9.75(m,1H),9.33-9.54(m,1H),8.44(s,1H),8.27-8.71(br.s,1H),8.19(s,1H),7.38(s,1H),7.34(s,1H),6.87(s,1H),6.18-6.48(br.s,1H),4.68-4.87(m,2H),4.49-4.62(q,2H),3.96(s,3H),3.45(q,2H),3.18-3.35(m,2H),2.46(s,4H),2.08-2.22(m,1H),1.10(t,3H)ppm。
實例8
(3R)-3-({[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}胺基)吡咯啶-2-酮
取含中間物17A(226 mg，純度75%,428 μmol)之甲醇(4 ml)溶液使用(R)-3-胺基吡咯啶-2-酮(85 mg,855 μmol)、氰基氫硼化鈉(134 mg,2.14 mmol)與乙酸(49 μl,855 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌1.5 h。然後直接經製備性RP-HPLC分離混合物(Reprosil C18，梯度：40-60%乙腈/0.2%TFA水溶液)。合併產物溶離份，使用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋，以乙酸乙酯萃取。合併之有機相經飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發至乾，產生180 mg(理論值之88%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.74 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.00(s,1H),7.76(s,1H),7.8-8.1(br.s,1H),7.35(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),5.6-5.9(br.s,1H),4.39-4.49(m,2H),4.04-4.23(m,2H),3.96(s,3H),3.41(q,2H),3.05-3.23(m,3H),2.45(s,3H),2.31-2.40(m,1H),1.68-1.79(m,1H),1.08(t,3H)ppm。
實例9
N 2 -{[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基) 吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}甘胺醯胺二鹽酸鹽
取含中間物17A(60 mg，純度69%,104 μmol)之甲醇(3 ml)溶液使用甘胺醯胺鹽酸鹽(23 mg,209 μmol)、氰基氫硼化鈉(32 mg,522 mmol)與乙酸(12 μl,209 μmol)處理。混合物於60℃下攪拌16 h。過濾後，濾液經製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。合併產物溶離份，使用1 M鹽酸稀釋，蒸發至乾，與來自過濾步驟之殘質合併。此產物再經兩次製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。再次合併含產物溶離份，使用1 M鹽酸稀釋與蒸發至乾，產生7.4 mg(理論值之13%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.80 min；MS(ESIpos)：m/z=455(M+H)+
1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)：δ=9.33(br.s,2H),9.05(br.s,1H),8.31(s,1H),7.93(br.s,1H),7.58(br.s,1H),7.40(s,1H),7.35(s,1H),7.05(br.s,1H),6.88(s,1H),4.65(br.m,2H),4.56(s,2H),3.96(s,3H),3.74(br.m,2H),3.46(q,2H),2.46(s,3H),1.10(t,3H)ppm。
實例10
6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(嗎啉-4-基 甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含中間物17A(55 mg，純度73%,101 μmol)之甲醇(3 ml)溶液使用嗎啉(18 mg,202 μmol)、氰基氫硼化鈉(19 mg,303 mmol)與乙酸(18 μl,304 μmol)處理。混合物於60℃下攪拌18 h。再加一份嗎啉(18 mg,202 μmol)、氰基氫硼化鈉(19 mg,303 mmol)與乙酸(18 μl,304 μmol)，續於60℃下再攪拌3 h。所得混合物使用THF稀釋，使沉澱物溶解，經製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。合併產物溶離份與蒸發至乾。殘質溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE，PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生32 mg(理論值之68%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.78 min；MS(ESIpos)：m/z=468(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.98(s,1H),7.9(br.s,1H),7.37(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),5.75(br.s,1H),4.45(s,2H),3.95(s,3H),3.88(s,2H),3.51-3.56(m,4H),3.40(q,2H),2.4-2.5(m,4H),2.45(s,3H),1.06(t,3H)ppm。
實例11
1-(4-{[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-基)乙酮二鹽酸鹽
取含中間物17A(130 mg,0.328 mmol)之甲醇(8 ml)溶液使用N-乙醯基哌(63 mg,0.492 mmol)、氰基氫硼化鈉(103 mg,1.63 mmol)與乙酸(37 μl,0.655 mmol)處理。混合物於60℃下攪拌3 h。然後與使用30 mg試樣進行測試之反應混合物合併，蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)。所得產物自1,4-二烷中冷凍乾燥後，溶於乙酸乙酯，使用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。有機層經硫酸鎂脫水，蒸發，再次自1,4-二烷中冷凍乾燥。再經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-.95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)後，經兩次矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇98：2→4：1)，及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生49 mg(理論值之18%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.82 min；MS(ESIpos)：m/z=509(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.65-8.26(br.s,1H),8.17(s,1H),7.38(s,1H),7.34(s,1H),6.87(s,1H),6.53-6.05(br.s,1H),4.75(br. s,2H),4.56(br.s,2H),3.96(s,3H),3.45(q,2H，與水波峰重疊)，2.46(s,3H),2.03(s,3H),1.09(t,3H)ppm。
實例12
[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲醇雙(甲酸鹽)
取含中間物23A(95 mg,152 μmol)之4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(3.7 ml)於室溫下攪拌2 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生44 mg(理論值之62%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.63 min；MS(ESIpos)：m/z=439(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.28(br.s,2H),7.98(s,1H),7.37(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.50(s,2H，與水波峰重疊)，3.98(s,2H，與水波峰重疊)，3.95(s,3H，與水波峰重疊)，2.95-2.84(m,4H),2.61-2.55(m,4H，與DMSO波峰重疊)，2.45(s,3H)ppm。
實例13
4-{[4-胺基-6-(羥基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯 并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮
取含中間物20A(1.34 g,3.96 mmol)之乙酸(13.9 ml)溶液使用37%甲醛水溶液(501 μl,6.6 mmol)與2-側氧基哌(670 mg,6.6 mmol)處理。混合物於50℃下攪拌2 h後，蒸發。經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇98：2→90：10)，產生942 mg(理論值之49%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.67 min；MS(ESIpos)：m/z=453(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,1H),7.76(br.s,1H),7.39(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),4.51(s,2H),4.03(br.s,2H),3.95(s,3H),3.18-3.13(m,2H),3.07-2.98(m,2H),2.72-2.60(m,2H),2.45(s,3H)ppm。
實例14
7-{[(3S)-3-胺基-3-甲基吡咯啶-1-基]甲基}-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
取含中間物21A(100 mg,0.28 mmol)之乙酸(1 ml)溶液使用37%甲醛水溶液(25 μl,0.33 mmol)與[(3S)-3-甲基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(Yoshida等人之Chem.Pharm.Bull.1996,44(7),1376-1386；67 mg,0.33 mmol)處理。混合物於室溫下攪拌3 h後，蒸發。殘質使用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋，添加碳酸鉀固體直到不再有氣體釋出為止。水相使用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機相經硫酸鈉脫水，與蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發後，殘質經兩次製備性RP-HPLC純化(第一次使用Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液；然後使用Shield RP18，梯度：5-50%甲醇+0.1%TFA水溶液/0.1%TFA水溶液)。所得產物自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生14 mg(理論值之8%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.67 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.50-8.22(br.s,1H),8.14(s,1H),7.36(s,1H),7.34(s,1H),6.87(s,1H),6.36-6.01(br.s,1H),4.88(br.s,2H),4.56(br.s,2H),3.96(s,3H，與水波峰重疊)，3.26(s,3H),2.46(s,3H),1.52(s,3H)ppm。
實例15
7-{[(3S)-3-胺基-3-甲基吡咯啶-1-基]甲基}-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含中間物17A(100 mg,271 μmol)之乙酸(1 ml)溶液使用37%甲醛水溶液(24 μl,326 μmol)與[(3S)-3-甲基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(Yoshida等人之Chem.Pharm.Bull.1996,44(7),1376-1386；65 mg,326 μmol)處理。混合物於60℃下攪拌4 h。然後再添加37%甲醛水溶液(10 μl,136 μmol)與[(3S)-3-甲基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(27 mg,136 μmol)，繼續於60℃下攪拌一夜。蒸發後，殘質分溶在乙酸乙酯與飽和碳酸氫鈉水溶液之間。添加碳酸鉀固體直到不再有氣體釋出為止。水相使用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機相經硫酸鈉脫水，蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)。所得產物溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌1 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生24 mg(理論值之18%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.70 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.19(s,1H),7.38(s,1H), 7.34(s,1H),6.87(s,1H),4.90(br.s,2H),3.96(s,3H),3.46(q,3H),2.46(s,3H),1.54(s,3H),1.14-1.05(m,3H)ppm。
實例16
1-(4-{[4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-基)乙酮二鹽酸鹽
取含中間物21A(50 mg,141 μmol)之乙酸(1 ml)溶液使用37%甲醛水溶液(4.6 μl,169 μmol)與N-乙醯基哌(21.6 mg,169 μmol)處理。混合物於75℃下攪拌3 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)。自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生34 mg(理論值之39%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.78 min；MS(ESIpos)：m/z=495(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.70-8.35(br.s,1H),8.18(s,1H),7.37(s,1H),7.34(s,1H),6.86(s,1H),6.61-6.19(br.s,1H),4.74(br.s,2H),4.54(br.s,2H),3.96(s,3H),3.25(s,3H),2.46(s,3H),2.03(s,3H)ppm。
實例17
6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺甲酸鹽
取含中間物23A(110 mg,204 μmol)之二氯甲烷(2.2 ml)溶液使用亞硫醯氯(29 μl,408 μmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質溶於甲醇(2.2 ml)，使用DIPEA(39 μl,224 μmol)處理。混合物於70℃下攪拌1 h後，蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2.2 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生44.9 mg(理論值之46%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.73 min；MS(ESIpos)：m/z=453(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.28(br.s,1H),8.00(s,1H),7.35(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.41(s,2H),4.00-3.90(m,5H),3.00-2.90(m,4H),2.65-2.56(m,4H),2.45(s,3H)ppm。
實例18
6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基 甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含中間物23A(80 mg,317 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(22 μl,297 μmol)處理，於室溫下攪拌15 min。蒸發後，殘質溶於乙醇(2 ml)，使用DIPEA(28 μl,163 μmol)處理。混合物於70℃下攪拌1 h後，蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌1 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生35 mg(理論值之50%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.82 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.09(br.s,1H),7.36(s,1H),7.32(s,1H),6.86(s,1H),4.50(br.s,2H),3.96(s,3H),3.42(q,2H，與水波峰重疊)，2.45(s,3H),1.05(t,3H)ppm。
實例19
6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺二鹽酸鹽
取含實例18(50 mg,107 μmol)之4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(1 ml)於室溫下攪拌15 min。蒸發後，得到55 mg(理論值之93%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.74 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.18(s,1H),7.37(s,1H),7.34(s,1H),6.87(s,1H),4.76(br.s,2H),4.60(br.s,2H),3.96(s,3H),3.45(q,2H),2.46(s,3H),1.09(t,3H)ppm。
實例20
1-(4-{[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-基)乙酮
取含實例18(70 mg,150 μmol)之二氯甲烷(2 ml)與THF(0.8 ml)溶液使用乙醯基氯化物(21 μl,300 μmol)與碳酸鈉(127 mg,1.2 mmol)處理。混合物於室溫下攪拌一夜。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生27 mg(理論值之31%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.77 min；MS(ESIpos)：m/z=509(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.98(s,1H),7.37(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),4.45(s,2H),3.95(s,3H),3.92(s,2H),3.45-3.36(m,6H),2.48-2.38(m,7H，與DMSO波峰重疊)，1.97(s,3H),1.06(t,3H)ppm。
實例21
4-({4-胺基-6-[(2-羥基乙氧基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基}甲基)哌-2-酮甲酸鹽
取含實例13(60 mg,132 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(14 μl,198 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於乙二醇(500 μl)，於100℃下攪拌90 min。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)， 產生34 mg(理論值之47%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.69 min；MS(ESIpos)：m/z=497(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.14(s,1H),8.00(s,1H),7.74(br.s,1H),7.42(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),4.49(s,2H),3.99(s,2H),3.96(s,3H),3.50-3.43(m,2H),3.42-3.36(m,2H，與水波峰重疊)，3.15-3.07(m,2H),3.03(s,2H),2.69-2.61(m,2H),2.45(s,3H)ppm。
實例22
2-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲氧基}乙醇二鹽酸鹽
取含中間物23A(100 mg,185 μmol)之二氯甲烷(4 ml)溶液使用亞硫醯氯(27 μl,371 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌20 min後，蒸發。殘質溶於乙二醇/THF(2：1,1.5 ml)，於100℃下攪拌2 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)後，經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇+0.1%氨水溶液98：2→90：10)。自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生67 mg(理論值之64%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.66 min；MS(ESIpos)：m/z=483(M+H)+ 1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.16(s,1H),7.49(s,1H),7.43(s,1H),6.98(s,1H),4.86(s,2H),4.69(s,2H),4.03(s,3H),3.81-3.49(m,12H),2.50(s,3H)ppm。
實例23
6-(丁氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺甲酸鹽
取含中間物23A(100 mg,185 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(27 μl,371 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於1-丁醇(2 ml)，加熱至70℃下1 h。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生22 mg(理論值之24%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.82 min；MS(ESIpos)：m/z=495(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.29(s,1H),7.99(s,1H),7.35(s,1H),7.29(s,1H),6.84(s,1H),4.43(s,2H),3.95(s,3H),3.92(s,2H),3.35(t,2H),2.90-2.79(m,4H),2.45(s,3H),1.47-1.37(m,2H),1.31-1.18(m,2H),0.80(t,3H)ppm。
實例24
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)-6-(丙氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺雙(甲酸鹽)
取含中間物23A(100 mg,185 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(27 μl,371 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於1-丙醇(2 ml)，使用DIPEA(48 μl,278 μmol)處理，於室溫下攪拌1 h。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生15 mg(理論值之16%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.78 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.26(br.s,2H),7.98(s,1H),7.36(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),4.44(s,2H),3.95(s,3H),3.92(s,2H),3.32(t,2H),2.87-2.79(m,4H),1.52-1.39(m,2H),0.81(t,3H)ppm。
實例25
6-[(環丙基甲氧基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2- 基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺雙(甲酸鹽)
取含中間物23A(100 mg,185 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(27 μl,371 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於環丙基甲醇(2 ml)，使用DIPEA(48 μl,278 μmol)處理，於70℃下攪拌2 h。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生29 mg(理論值之30%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.78 min；MS(ESIpos)：m/z=493(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.28(br.s,2H),7.99(s,1H),7.37(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),4.45(s,2H),3.95(s,3H),3.93(s,2H),3.21(d,2H),2.95-2.83(m,4H),2.61-2.56(m,4H),2.45(s,3H),1.01-0.91(m,1H),0.46-0.37(m,2H),0.15-0.08(m,2H)ppm。
實例26
6-[(環丁基氧)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取含中間物23A(85 mg,157 μmol)之二氯甲烷(1.7 ml)溶液使用亞硫醯氯(23 μl,315 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於環丁醇(1.7 ml)，使用DIPEA(41 μl,236 μmol)處理，於70℃下攪拌2 h。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(1.7 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生23 mg(理論值之28%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.82 min；MS(ESIpos)：m/z=493(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.01(s,1H),7.37(s,1H),7.32(s,1H),6.85(s,1H),4.37(s,2H),4.06-3.86(m,6H),3.14-2.97(m,4H),2.80-2.62(m,4H),2.45(s,3H),2.10-1.96(m,2H),1.83-1.69(m,2H),1.65-1.52(m,1H),1.49-1.33(m,1H)ppm。
實例27
6-(異丙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺甲酸鹽
取含中間物23A(65 mg,120 μmol)之二氯甲烷(1.3 ml)溶液使用亞硫醯氯(17 μl,241 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於2-丙醇(1.3 ml)，使用DIPEA(23 μl,132 μmol)處理，於70℃下攪拌1 h。再加DIPEA(23 μl,132 μmol)，混合物再次於70℃下攪拌1 h。然後，再加一份DIPEA(63 μl,362 μmol)，繼續於90℃下攪拌3 h。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(1.3 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生23 mg(理論值之34%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.74 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.30(s,1H),7.98(s,1H),7.37(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),4.43(s,2H),3.95(s,3H),3.90(s,2H),3.57(m,1H，與水波峰重疊)，2.88-2.78(m,4H),2.45(s,3H),1.04(d,6H)ppm。
實例28
6-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺甲酸鹽
取含中間物23A(100 mg,185 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(27 μl,371 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於2-甲氧基乙醇(2 ml)，使用DIPEA(35 μl,204 μmol)處理，於70℃下攪拌1 h。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生50 mg(理論值之50%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.75 min；MS(ESIpos)：m/z=497(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.26(br.s,1H),7.99(s,1H),7.39(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),4.48(s,2H),3.95(s,3H),3.94(s,2H),3.52-3.46(m,2H，與水波峰重疊)，3.44-3.37(m,2H，與水波峰重疊)，3.20(s,3H),2.94-2.84(m,4H),2.61-2.54(m,4H，與DMSO波峰重疊)，2.45(s,3H)ppm。
實例29
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)-6-[(2,2,2-三氟乙氧基)甲基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺甲酸鹽
取含中間物23A(100 mg,185 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(27 μl,371 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於2,2,2-三氟乙醇(2 ml)，使用DIPEA(35 μl,204 μmol)處理，於70℃下攪拌1 h。再加一份DIPEA(35 μl,204 μmol)，繼續於室溫下攪拌1 h。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生23 mg(理論值之23%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.79 min；MS(ESIpos)：m/z=521(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.28(br.s,1H),8.00(s,1H),7.37(s,1H),7.30(s,1H),6.85(s,1H),4.66(s,2H),4.08(q,2H),3.95(s,3H),3.92(s,2H),2.85-2.75(m,4H),2.45(s,3H)ppm。
實例30
6-[(2-胺基乙氧基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
取含中間物23A(150 mg,278 μmol)之二氯甲烷(5 ml)溶液使用亞硫醯氯(40 μl,556 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於THF(0.5 ml)，使用(2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁基酯(1 ml)與DIPEA(242 μl,1.39 mmol)處理。混合物於100℃下攪拌一夜。蒸發後，殘質溶於1,4-二烷(10 ml)，使用4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(10 ml)處理，於室溫下攪拌1 h。減壓排除揮發物，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)。再經製備性RP-HPLC純化(Shield RP18,25%乙腈/75%0.01%TFA水溶液)，然後自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生10 mg(理論值之6%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.58 min；MS(ESIpos)：m/z=482(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.12(s,1H),7.50(s,1H),7.44(s,1H),6.99(s,1H),4.61(s,2H),4.04(s,3H),3.88-3.80(m,1H),3.70-3.60(m,3H),3.52-3.46(m,4H),3.40-3.34(m,4H),3.07(t,2H),2.51(s,3H)ppm。
實例31
{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基) 吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲氧基}乙酸甲酯
取含中間物23A(50 mg,92 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(13 μl,186 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於乙醇酸甲酯(1 ml)，使用DIPEA(80 μl,464 μmol)處理，於70℃下攪拌2 h。蒸發後，殘質溶於二氯甲烷(1.6 ml)，使用三氟乙酸(400 μl,5.19 mmol)處理，於室溫下攪拌1 h。然後蒸發混合物，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。取含標題化合物之溶離份使用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，與蒸發。殘質溶於水中，混合物使用二氯甲烷萃取3次。合併之有機相經硫酸鈉脫水，與蒸發，產生21 mg(理論值之43%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.72 min；MS(ESIpos)：m/z=511(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,1H),7.39(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.59(s,2H),4.11(s,2H),3.95(s,3H),3.90(s,2H),3.57(s,3H),2.81-2.69(m,4H),2.48-2.39(m,7H)ppm。
實例32
{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基) 吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲氧基}乙酸
取含中間物24A(200 mg,327 μmol)之THF(14 ml)溶液使用2.5 M氫氧化鋰水溶液(16 ml)處理，於80℃下攪拌2 h。混合物與使用27 mg試樣進行測試之反應混合物合併。水相使用THF萃取2次，取合併之有機相蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌3 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，再經製備性RP-HPLC純化(XBridge C18，梯度：5-95%乙腈/0.1%氫氧化銨水溶液)，產生13 mg(理論值之7%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.69 min；MS(ESIpos)：m/z=497(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.00(s,1H),7.38(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),4.54(s,2H),4.08(s,2H),3.95(s,3H),3.79(s,2H),2.99-2.89(m,4H),2.73-2.63(m,4H),2.44(s,3H)ppm。
實例33
2-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲氧基}乙醯胺
中間物24A(200 mg,327 μmol)溶液使用7 M氨之甲醇溶液(10 ml)處理，於室溫下攪拌一夜。混合物再與以20 mg試樣進行測試之反應混合物合併，蒸發溶劑。殘質使用4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)處理，於室溫下攪拌2 h。蒸發，隨後經製備性RP-HPLC純化(第一次使用Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液；然後使用XBridge C18，梯度：5-95%乙腈/0.1%氫氧化銨水溶液)，產生5.5 mg(理論值之3%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.69 min；MS(ESIpos)：m/z=496(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.14-7.59(br.s,1H),7.99(s,1H),7.39(s,1H),7.35-7.22(m,3H),6.85(s,1H),4.54(s,2H),3.95(s,3H),3.90(s,2H),3.79(s,2H),2.73-2.66(m,4H),2.45(s,3H),2.43-2.35(m,4H)ppm。
實例34
2-({7-[(4-乙醯基哌-1-基)甲基]-4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基}甲氧基)乙醯胺
取含實例33(105 mg,68%純度，144 μmol)之THF/二氯甲烷(1：2.5,3.9 ml)溶液使用碳酸鈉(179 mg,1.6 mmol)處理，於室溫下攪拌30 min。添加乙醯基氯化物(30 μl,424 μmol)，所得混合物於室溫下攪拌30 min後，使用甲醇(2 ml)中止反應與蒸發。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生30 mg(85%純度，理論值之34%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.67 min；MS(ESIpos)：m/z=538(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,1H),7.40(s,1H),7.33-7.19(m,3H),6.85(s,1H),4.55(s,2H),3.96(s,5H),3.80(s,2H),3.43-3.36(m,4H),2.47-2.38(m,7H),1.97(s,3H)ppm。
實例35
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-(苯氧甲基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺雙(甲酸鹽)
取含中間物23A(100 mg,185 μmol)之二氯甲烷(2 ml)溶液使用亞硫醯氯(27 μl,371 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於THF(2 ml)，使用苯酚(174 mg,1.85 mmol)與DIPEA(48 μl,278 μmol)處理，於70℃下攪拌2 h。再加一份苯酚(174 mg,1.85 mmol)與DIPEA(64 μl,371 μmol)，繼續於70℃下攪拌一夜。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發，經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生8 mg(理論值之8%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.84 min；MS(ESIpos)：m/z=515(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.26(s,2H),8.02(s,1H),7.36(s,1H),7.30-7.22(m,3H),6.99-6.89(m,3H),6.81(m,1H),5.04(s,2H),3.93(s,5H),2.78-2.71(m,4H),2.42(s,3H)ppm。
實例36
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-[(甲基胺基)甲基]-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
取含中間物25A(150 mg,279 μmol)之THF(3 ml)溶液使用乙酸(32 μl,559 μmol)、2 M甲基胺之THF溶液(698 μl,1.39 mmol)與三乙醯氧基氫硼化鈉(296 mg,1.39 mmol)處理。混合物於60℃下攪拌2 h後，蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(1.87 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生79 mg(理論值之49%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.56 min；MS(ESIpos)：m/z=452(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.17(s,1H),7.57(s,1H),7.46(s,1H),7.01(s,1H),4.52(s,2H),4.46(s,2H),4.04(s,3H),3.48-3.39(m,4H),3.25-3.15(m,4H),2.59(s,3H),2.51(s,3H)ppm。
實例37
6-[(二甲基胺基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
取含中間物25A(150 mg,279 μmol)之THF(3 ml)溶液使用乙酸(32 μl,559 μmol)、2 M二甲基胺之THF溶液(698 μl,1.39 mmol)與三乙醯氧基氫硼化鈉(296 mg,1.39 mmol)處理。混合物於60℃下攪拌2 h後，蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(1.88 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生83 mg(理論值之50%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.50 min；MS(ESIpos)：m/z=466(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.17(s,1H),7.57(s,1H),7.45(s,1H),7.01(s,1H),4.57(s,2H),4.50(s,2H),4.04(s,3H),3.47-3.36(m,4H),3.21-3.12(m,4H),2.80(s,6H),2.51(s,3H)ppm。
實例38
6-[(乙基胺基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
取含中間物25A(60 mg,111.8 μmol)之THF(1 ml)溶液使用2 M乙基胺之THF溶液(83 μl,167 μmol)、三乙醯氧基氫硼化鈉(118 mg,559 μmol)與乙酸(83 μl,167 μmol)處理。混合物於60℃下攪拌90 min。再加一份2 M乙基胺溶液(83 μl,167 μmol)與三乙醯氧基氫硼化鈉(71 mg,335 μmol)，續於60℃下再攪拌2 h。蒸發後，殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(3 ml)處理，於室溫下攪拌一夜。混合物蒸發，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥。再經製備性RP-HPLC純化(Sunfire C18,20%乙腈/80%0.02%TFA水溶液)，再自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生19 mg(理論值之29%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.56 min；MS(ESIpos)：m/z=466(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.14(s,1H)，7.56(s,1H),7.45(s,1H),7.01(s,1H),4.45(s,4H),4.04(s,3H),3.45-3.32(m,4H),3.18-3.05(m,4H),2.99(q,2H),2.51(s,3H),1.10(t,3H)ppm。
實例39
2-({[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}胺基)乙醇三鹽酸鹽
取含中間物25A(150 mg,279 μmol)之THF(3 ml)溶液使用2-胺基乙醇(84 μl,1.39 mmol)、三乙醯氧基氫硼化鈉(296 mg,1.39 mmol)與乙酸(32 μl,559 μmol)處理。混合物於60℃下攪拌2 h後，蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(1.87 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生140 mg(理論值之80%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.54 min；MS(ESIpos)：m/z=482(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.15(s,1H),7.56(s,1H),7.45(s,1H),7.00(s,1H),4.47(s,2H),4.37(s,2H),4.04(s,3H),3.79-3.71(m,2H),3.42-3.34(m,4H),3.19-3.12(m,2H),3.06-2.97(m,4H),2.51(s,3H)ppm。
與中間物25A進行還原性胺化反應之一般製程(GP1)：
取0.1 M中間物25A之THF溶液溶液使用5 eq.各種胺組份、5 eq.三乙醯氧基氫硼化鈉與2 eq.乙酸處理。所得混合物於60℃下攪拌2 h後，蒸發。取0.15 M含所得殘質之4 M鹽酸之1,4-二烷溶液於室溫下攪拌1-2 h。蒸發後，如下文說明之方式純化殘質。
實例40
消旋性-1-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌啶-3-醇三鹽酸鹽
依據GP1，由中間物25A(150 mg,279 μmol)與3-羥基哌啶(141 mg,1.39 mmol)反應。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生178 mg(全收量)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.54 min；MS(ESIpos)：m/z=522(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.16(S,1H),7.55(s,1H),7.45(s,1H),7.01(s,1H),4.66-4.16(m,5H),4.04(s,3H),3.55-2.71(m,11H),2.51(s,3H),1.96-1.42(m,4H),1.64-1.50(m,1H)ppm。
實例41
1-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌啶-4-醇三鹽酸鹽
依據GP1，由中間物25A(150 mg,279 μmol)與4-羥基哌啶(141 mg,1.39 mmol)反應。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生162 mg(理論值之91%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.48 min；MS(ESIpos)：m/z=522(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.16(s,1H),7.58(br.s,1H),7.46(s,1H),7.01(s,1H),4.67-4.48(m,4H),4.04(s,4H),3.59-2.78(m,12H),2.51(s,3H),2.14-1.38(m,4H)ppm。
實例42
消旋性-1-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}吡咯啶-3-醇三鹽酸鹽
依據GP1，由中間物25A(150 mg,279 μmol)與3-羥基吡咯啶(113 μl,1.39 mmol)反應。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生148 mg(理論值之85%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.46 min；MS(ESIpos)：m/z=508(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.18(s,1H),7.58(s,1H),7.46(s,1H),7.01(s,1H),4.71-4.30(m,5H),4.04(s,3H),3.70-2.95(m,12H),2.51(s,3H),2.32-2.14(m,1H),2.03-1.87(m,1H)ppm。
實例43
6-[(二乙基胺基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
依據GP1，由中間物25A(150 mg,279 μmol)與二乙基胺(144 μl,1.39 mmol)反應。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生127 mg(理論值之69%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.55 min；MS(ESIpos)：m/z=494(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.19(s,1H),7.61(s,1H),7.47(s,1H),7.01(s,1H),4.59(s,2H),4.51(s,2H),4.04(s,3H),3.47-3.35(m,4H),3.29-3.00(m,8H),2.51(s,3H),1.07(t,6H)ppm。
實例44
6-[(環丁基胺基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
依據GP1，由中間物25A(150 mg,279 μmol)與環丁基胺(119 μl,1.39 mmol)反應。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生127 mg(理論值之72%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.58 min；MS(ESIpos)：m/z=492(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.16(s,1H),7.59(s,1H),7.47(s,1H),7.00(s,1H),4.40(s,2H),4.37(s,2H),4.04(s,3H),3.69-3.58(m,1H),3.44-3.33(m,4H),3.21-3.12(m,4H),2.51(s,3H),2.02-1.87(m,4H),1.81-1.62(m,2H)ppm。
實例45
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)-6-(吡咯啶-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
依據GP1，由中間物25A(150 mg,279 μmol)與吡咯啶(116 μl,1.39 mmol)反應。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生112 mg(理論值之64%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.54 min；MS(ESIpos)：m/z=492(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.19(s,1H),7.60(s,1H),7.46(s,1H),7.01(s,1H),4.70-4.61(m,4H),4.04(s,3H),3.55-3.40(m,6H),3.35-3.26(m,4H),3.02-2.87(m,2H),2.51(s,3H),1.97-1.83(m,4H)ppm。
實例46
6-[(環丙基胺基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
依據GP1，由中間物25A(200 mg,372 μmol)與環丙基胺(129 μl,1.86 mmol)反應。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生140 mg(理論值之62%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.42 min；MS(ESIpos)：m/z=478(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.16(s,1H),7.56(s,1H),7.46(s,1H),7.01(s,1H),4.57(s,2H),4.47(s,2H),4.04(s,3H),3.46-3.34(m,4H),3.19-3.07(m,4H),2.61-2.54(m,1H),2.51(s,3H),0.75-0.64(m,4H)ppm。
實例47
6-{[(環丙基甲基)胺基]甲基}-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
依據GP1，由中間物25A(200 mg,372 μmol)與環丙基甲基胺(161 μl,1.86 mmol)反應。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生163 mg(理論值之69%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.60 min；MS(ESIpos)：m/z=492(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.14(s,1H),7.57(s,1H),7.45(s,1H),7.00(s,1H),4.50(s,2H),4.44(s,2H),4.04(s,3H),3.42-3.34(m,4H),3.16-3.07(m,4H),2.86(d,2H),2.50(s,3H),0.89-0.76(m,1H),0.55-0.45(m,2H),0.23-0.14(m,2H)ppm。
實例48
N-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}甘胺酸三鹽酸鹽
取含中間物25A(161 mg,300 μmol)之THF(3.2 ml)溶液使用2-胺基乙酸(112 mg,1.5 mmol)、三乙醯氧基氫硼化鈉(317 mg,1.5 mmol)與乙酸(34 μl,600 μmol)處理。所得混合物於60℃下攪拌2 h後，蒸發。殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。所得產物溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)，於室溫下攪拌1 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。隨後自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生18 mg(理論值之9%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.63 min；MS(ESIpos)：m/z=496(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,D2O)：δ=8.14(s,1H),7.54(s,1H),7.45(s,1H),6.99(s,1H),4.42(s,2H),4.36(s,2H),4.03(s,3H),3.64(s,2H),3.42-3.33(m,4H),3.07-2.96(m,4H),2.50(s,3H)ppm。
實例49
4-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮三鹽酸鹽
取含中間物27A(220 mg,354 μmol)之4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)於室溫下攪拌2 h。然後蒸發混合物，留下235 mg粗產物，其未進一步純化即用於下一個步驟。
LC-MS(方法4)：Rt=0.60 min；MS(ESIpos)：m/z=521(M+H)+.
實例50
[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(嗎啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲醇
取含中間物20A(500 mg，純度87%,1.28 mmol)與4-亞甲基嗎啉-4-鎓氯化物(347 mg,2.56 mmol)之DMF(28 ml)溶液於70℃下攪拌1.5 h。混合物使用乙酸乙酯稀釋，經飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和氯 化鈉水溶液洗滌。有機層經硫酸鎂脫水與減壓蒸發，產生710 mg(純度78%，理論值之99%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.65 min；MS(ESIpos)：m/z=440(M+H)+.
實例51
(3S)-3-({[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(嗎啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}胺基)吡咯啶-2-酮
取含中間物33A(65 mg,149 μmol)之甲醇(2 ml)溶液使用(3S)-3-胺基吡咯啶-2-酮(45 mg,446 μmol)、氰基氫硼化鈉(47 mg,743 μmol)與乙酸(26 μl,446 μmol)處理。於60℃下攪拌16 h後，所得混合物利用製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生49 mg(理論值之63%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.71 min；MS(ESIpos)：m/z=522(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.96(s,1H),7.66(s,1H),7.5-8.1(br.s,1H),7.44(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),5.4-6.0(br.s,1H),3.95(s,3H),3.91(s,2H),3.75(d,2H),3.50-3.66(m,4H),3.06-3.19(m,3H), 2.94-3.05(m,1H),2.61(t,1H),2.45(t,3H),2.38-2.44(m,4H),1.89-1.99(m,1H),1.49-1.60(m,1H)ppm。
實例52
4-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(嗎啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮
取含中間物33A(65 mg,149 μmol)之甲醇(2 ml)溶液使用2-側氧基哌(45 mg,446 μmol)、氰基氫硼化鈉(47 mg,743 μmol)與乙酸(26 μl,446 μmol)處理。於60℃下攪拌16 h後，所得混合物利用製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生41 mg(理論值之53%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.70 min；MS(ESIpos)：m/z=522(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.97(s,1H),7.67(br.s,1H),7.55-8.05(br.s,1H),7.38(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),5.29-5.88(br.s,1H),3.95(s,3H),3.92(s,2H),3.58(s,2H),3.51-3.56(m,4H),3.00-3.06(m,2H),2.85(s,2H),2.45(s,3H),2.43-2.48(m,5H)ppm。
實例53
消旋性-1-({[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(嗎啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}胺基)丙烷-2-醇
取含中間物33A(64 mg,146 μmol)之甲醇(2 ml)溶液使用消旋性-1-胺基丙烷-2-醇(33 mg,439 μmol)、氰基氫硼化鈉(46 mg,731 μmol)與乙酸(25 μl,439 μmol)處理。於60℃下攪拌16 h後，所得混合物經製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生42 mg(理論值之57%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.63 min；MS(ESIpos)：m/z=497(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.96(s,1H),7.47-7.92(br.s,1H),7.39(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),5.36-5.92(br.s,1H),4.36(d,1H),3.95(s,3H),3.90(s,2H),3.64-3.75(m,2H),3.49-3.61(m,5H),2.45(s,3H),2.39-2.47(m,4H),2.31-2.38(m,2H),0.97(d,3H)ppm。
實例54
1-({[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(嗎啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}胺基)-2-甲基丙烷-2-醇
取含中間物33A(80 mg,183 μmol)之甲醇(2 ml)溶液使用1-胺基-2-甲基丙烷-2-醇(34 mg,274 μmol)、氰基氫硼化鈉(57 mg,914 μmol)與乙酸(21 μl,366 μmol)處理。於60℃下攪拌16 h後，所得混合物經製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生29 mg(理論值之31%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.65 min；MS(ESIpos)：m/z=511(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.96(s,1H),7.50-8.02(br.s,1H),7.42(s,1H),7.28(s,1H),6.84(s,1H),5.4-6.0(br.s,1H),4.11(s,1H),3.95(s,3H),3.90(s,2H),3.70(d,2H),3.51-3.58(m,4H),2.45(s,3H),2.39-2.46(m,4H),2.33(d,2H),1.83-1.92(m,1H),1.03(s,6H)ppm。
實例55
1-(4-{[4-胺基-6-(羥基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-基)乙酮
取含中間物20A(345 mg,1.01 mmol)之乙酸(5 ml)溶液使用37%甲醛水溶液(91 μl,1.22 mmol)與1-乙醯基哌(160 mg,1.22 mmol)處理。混合物於60℃下攪拌6 h後，蒸發。殘質溶於THF/1 M氫氧化鋰水溶液之混合物(1：1,10 ml)中，於室溫下攪拌2 h。混合物與使用100 mg試樣進行測試之反應混合物合併，添加飽和氯化銨水溶液。混合物使用乙酸乙酯萃取，有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，與減壓蒸發，產生678 mg(純度87%，理論值之94%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.71 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+.
實例56
(3R)-3-[({7-[(4-乙醯基哌-1-基)甲基]-4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基}甲基)胺基]吡咯啶-2-酮
取含中間物31A(80 mg,167 μmol)之甲醇(1.4 ml)溶液使用(3R)-3-胺基吡咯啶-2-酮(21 mg,251 μmol)、氰基氫硼化鈉(52 mg,836 μmol)與乙酸(19 μl,334 μmol)處理。於60℃下攪拌16 h後，所得混合物經製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生46 mg(理論值之49%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.70 min；MS(ESIpos)：m/z=563(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.42(s,1H),8.05(s,1H),7.93-8.24(br.s,1H),7.51(s,1H),7.34(s,1H),6.88(s,1H),5.75-6.07(br.s,1H),4.21-4.37(m,2H),4.19(s,2H),4.10(t,1H),3.96(s,3H),3.56-3.66(m,2H),3.44-3.54(m,4H),3.11-3.27(m,4H),2.47(s,4H),2.16-2.25(m,1H),2.00(s,3H),1.86-1.95(m,1H)ppm。
實例57
1-(4-{[4-胺基-6-{[(2-羥基-2-甲基丙基)胺基]甲基}-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-1-基)乙酮
取含中間物31A(80 mg,183 μmol)之甲醇(2 ml)溶液使用1-胺基-2-甲基丙烷-2-醇(31 mg,251 μmol)、氰基氫硼化鈉(53 mg,836 μmol)與乙酸(19 μl,334 μmol)處理。於60℃下攪拌16 h後，所得混合物經製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生29 mg(理論值之31%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.71 min；MS(ESIpos)：m/z=552(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.96(s,1H),7.59-8.02(br.s,1H),7.42(s,1H),7.28(s,1H),6.84(s,1H),5.45-5.93(br.s,1H),4.13(br.s,1H),3.95(s,3H),3.93(s,2H),3.71(s,2H),3.37-3.44(m,4H),2.45(s,3H),2.32-2.43(m,6H),1.97(s,3H),1.03(s,6H)ppm。
實例58
4-({4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-[(3-側氧基哌-1-基)甲基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基}甲基)哌-1-甲醛甲酸鹽
取乙酸酐(498 μl,5.17 mmol)與甲酸(237 μl,6.28 mmol)先於50℃下攪拌2 h後，於室溫下攪拌一夜。然後使用二氯甲烷(5.1 ml)稀釋混合物，添加1.16 ml此溶液至含實例49(233 mg,370 μmol)之吡啶(89 μl)溶液中。於室溫下攪拌2 h後，使用甲醇稀釋混合物，然後蒸發。殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生77 mg(理論值之35%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.62 min；MS(ESIpos)：m/z=549(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.14(s,1H),7.97(s,2H),7.67(s,1H),7.38(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),3.96(s,2H),3.95(s,3H),3.58(s,2H),3.04(br.t,2H),2.86(s,2H),2.45(s,3H),2.42(br.t,2H)ppm。
實例59
4-({7-[(4-乙醯基哌-1-基)甲基]-4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基}甲基)哌-2-酮
取含實例49(310 mg,522 μmol)之二氯甲烷/THF(2.5：1,9.64 ml)懸浮液使用碳酸鈉(442 mg,4.17 mmol)處理，於室溫下攪拌30 min。添加乙醯基氯化物(74 μl,1.04 mmmol)，所得混合物於室溫下攪拌2 h。使用甲醇中止反應後，蒸發混合物，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生133 mg(理論值之45%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.69 min；MS(ESIpos)：m/z=563(M+H)+
1H-NMR(400 MHz，甲醇-d4)：δ=7.89(s,1H),7.30(s,1H),7.28(s,1H),6.79(s,1H),4.13(s,2H),3.98(s,3H),3.74(s,2H),3.59(t,2H),3.54(t,2H),3.18(t,2H),3.02(s,2H),2.68-2.55(m,6H),2.48(s,3H),2.08(s,3H)ppm。
實例60
4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基羰基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-羧酸甲酯雙(甲酸鹽)
在含中間物28A(15 mg,26 μmol)之THF/甲醇混合物(5：1,180 μl)溶液(已冷卻至0℃)中添加(三甲基矽烷基)重氮甲烷(2 M己烷溶液，15 μl,32 μmol)。讓所得混合物以30分鐘時間慢慢回升至室溫後，蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(0.5 ml)，於室溫下攪拌1 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生4.8 mg(理論值之35%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.66 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.17(s,2H),8.38-8.23(br.s,1H),8.04(s,1H),7.43(s,1H),7.31(s,1H),6.86(s,1H),5.71-5.58(br.s,1H),3.96(s,3H),3.60(s,3H，與水波峰重疊)，2.46(s,3H)ppm。
實例61
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-(1,3-唑-5-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
取含中間物25A(100 mg,0.19 mmol)之甲醇(3.33 ml)溶液使用(4-甲苯磺醯基)甲基異氰化物(36 mg,0.19 mmol)與碳酸鉀(25 mg,186 μmol)處理。混合物回流6 h。然後與使用3份30 mg試樣進行測試之反應混合物合併，與蒸發。殘質溶於4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(10 ml)，於室溫下攪拌2 h。蒸發後，殘質經兩次製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。再經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇5：1(含0.5%氨水溶液))及自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生75 mg(理論值之34%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.69 min；MS(ESIpos)：m/z=476(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.40(s,1H),8.20(s,1H),7.46(s,1H),7.35(s,1H),6.96(s,1H),6.89(s,1H),3.95(s,3H),2.46(s,3H)ppm。
實例62
6-(胺基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
取含中間物29A(76 mg,134 μmol)與10%Pd/C(60 mg)之0.5 M鹽酸之甲醇溶液(20 ml)之溶液於室溫與1 atm氫氣下攪拌3 h。混合物通過矽藻土過濾，蒸發濾液，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。所得產物自4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中冷凍乾燥，產生34 mg(理論值之46%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.55 min；MS(ESIpos)：m/z=438(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.24(br.s,3H),8.12(s,1H),7.52(s,1H),7.34(s,1H),6.89(s,1H),3.96(s,3H),3.76-3.63(m,1H),3.52-3.42(m,1H),2.47(s,3H)ppm。
實例63
N-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}乙醯胺雙(三氟乙酸鹽)
取含中間物30A(210 mg,362 μmol)之二氯甲烷(26 ml)溶液使用三氟乙酸(5.2 ml)處理，於室溫下攪拌1 h。於室溫下蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)，產生163 mg(理論值之63%)標題化合物。
LC-MS(方法3)：Rt=2.42 min；MS(ESIpos)：m/z=480(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=9.00-8.75(br.s,1H),8.30-8.16(br.s,1H),8.08(s,1H),7.38(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),4.32(br.d,2H),3.96(s,3H),3.40-2.98(m,8H),2.46(s,3H),1.77(s,3H)ppm。
實例64
N-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}乙醯胺二鹽酸鹽
取含中間物30A(80 mg,0.14 mmol)之二氯甲烷(10 ml)與三氟乙酸(2 ml)溶液於室溫下攪拌1 h後，蒸發。經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，自甲醇與4 M鹽酸之1,4-二烷溶液之混合物中冷凍乾燥，產生39 mg(理論值之50%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.56 min；MS(ESIpos)：m/z=480(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=8.12(s,1H),7.38(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),4.37(br.d,2H),3.96(s,3H),3.85-3.20(m,8H，與水波峰重疊)，2.46(s,3H),1.76(s,3H)ppm。
實例65
N-({4-胺基-7-[(4-甲醯基哌-1-基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基}甲基)乙醯胺甲酸鹽
取乙酸酐(304 μl,3.16 mmol)與甲酸(145 μl,3.16 mmol)先於50℃下攪拌2 h後，於室溫下攪拌一夜。隨後使用二氯甲烷(3.1 ml)稀釋混合物，添加663 μl此溶液至含實例63(160 mg,226 μmol)之吡啶(54 μl)溶液中。混合物於室溫下攪拌2 h後，使用甲醇(1 ml)稀釋，續於40℃下再攪拌2 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生74 mg(理論值之61%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.65 min；MS(ESIpos)：m/z=508(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.13(s,1H),8.06-7.89(m,3H),7.38(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.28(d,2H),4.01-3.88(m,5H),2.47-2.34(m,7H),1.75(s,3H)ppm。
實例66
N-({7-[(4-乙醯基哌-1-基)甲基]-4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基}甲基)乙醯胺
取含實例63(110 mg,229 μmol)與乙醯基氯化物(32 μl,458 μmol)之THF/二氯甲烷(1：2,3 ml)溶液使用碳酸鈉(194 mg,1.83 mmol)處理，於室溫下攪拌一夜。然後使用甲醇(2 ml)與水(1 ml)稀釋混合物，於室溫下攪拌1 h。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)。自1,4-二烷中冷凍乾燥，再經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇50：1→100%甲醇)，產生35 mg(理論值之28%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.70 min；MS(ESIpos)：m/z=522(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.04-7.98(m,2H),7.38(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.27(d,2H),3.95(s,3H),3.91(s,2H),3.44-3.36(m,4H),2.48-2.35(m,7H),1.98(s,3H),1.75(s,3H)ppm。
實例67
N-({4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-[(3-側氧基哌-1-基)甲基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基}甲基)乙醯胺
取含中間物32A(35 mg,73 μmol)之甲醇(4.1 ml)懸浮液使用乙酸酐(13 μl,146 μmol)與10%Pd/C(41 mg)處理，於室溫與1 atm氫氣下攪拌1 h。經矽藻土過濾，與蒸發濾液，產生30 mg(理論值之79%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.65 min；MS(ESIpos)：m/z=494(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,2H),7.75(br.s,1H),7.39(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.27(s,1H),4.26(s,1H),3.95(s,5H),3.19-3.08(m,2H),3.05-2.96(m,2H),2.66-2.57(m,2H),2.45(s,3H),1.72(s,3H)ppm。
實例68
4-胺基-6-(羥基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
取含中間物38A(1 g,2.08 mmol)之THF(10 ml)溶液使用1 M四-正丁基銨化氟之THF溶液(12 ml,12 mmol)處理。混合物於室溫下攪拌一夜後，蒸發。殘質溶於水，使用乙酸乙酯萃取3次。合併之有機相經硫酸鎂脫水，與蒸發。殘質於第三丁基甲基醚中磨製，濾出固體，產生680 mg(理論值之78%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.95 min；MS(ESIpos)：m/z=366(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.61-8.29(br.s,1H),8.18(s,1H),7.43(s,1H),7.32(s,1H),6.87(s,1H),6.32-6.03(br.s,1H),5.46(t,1H),4.55(d,2H),3.96(s,3H),2.45(s,3H)ppm。
實例69
4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
取含實例68(60 mg,164 μmol)之二氯甲烷(5 ml)溶液使用亞硫醯氯(18 μl,246 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於甲醇(2 ml)，使用DIPEA(57 μl,328 μmol)處理。混合物先於60℃下攪拌2 h後，回流一夜，最後再於微波裝置中加熱至150℃30 min。然後蒸發混合物，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生18 mg(理論值之28%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=1.12 min；MS(ESIpos)：m/z=379(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.61-8.40(br.s,1H),8.21(s,1H),7.42(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),6.34-6.09(br.s,1H),4.47(s,2H),3.96(s,3H),3.26(s,3H),2.45(s,3H)ppm。
實例70
4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
取含實例68(60 mg,164 μmol)之二氯甲烷(5 ml)溶液使用亞硫醯氯(18 μl,246 μmol)處理。混合物於室溫下攪拌15 min後，蒸發。殘質溶於乙醇(2 ml)，使用DIPEA(57 μl,328 μmol)處理。混合物於 60℃下攪拌一夜後，於微波裝置中加熱至150℃ 30 min。然後蒸發混合物，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。所得產物溶於乙醇(2 ml)，再次於微波爐中加熱至150℃ 30 min。添加DIPEA(57 μl,328 μmol)，再於微波爐中加熱至150℃ 30 min。蒸發後，殘質經矽膠管柱層析法純化(二氯甲烷/甲醇95：5)，產生16 mg(理論值之23%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.18 min；MS(ESIpos)：m/z=393(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.61-8.38(br.s,1H),8.20(s,1H),7.42(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),6.33-6.08(br.s,1H),4.51(s,2H),3.96(s,3H),3.45(q,2H),2.45(s,3H),1.10(t,3H)ppm。
實例71
4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-[(3-側氧基哌-1-基)甲基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-甲腈
取含中間物39A(20 mg,55 μmol)之THF(0.73 ml)溶液使用乙酸(6 μl,110 μmol)、2-側氧基哌(27 mg,275 μmol)與三乙醯氧基氫硼化鈉(58 mg,275 μmol)處理。於室溫下攪拌3 h後，再加一份THF(1 ml)、乙酸(6 μl,110 μmol)、2-側氧基哌(27 mg,275 μmol)與三乙 醯氧基氫硼化鈉(58 mg,275 μmol)，續於室溫下攪拌一夜。蒸發後，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生13 mg(理論值之52%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.86 min；MS(ESIpos)：m/z=447(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.60-8.31(br.s,1H),8.19(s,1H),7.74(s,1H),7.44(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),6.25-5.98(br.s,1H),3.96(s,3H),3.62(s,2H),3.13-3.07(m,2H),2.91(s,2H),2.45(s,3H)ppm。
實例72
N,N'-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6,7-二基]雙(亞甲基)}二乙醯胺
取含中間物40A(粗產物，85 mg)、10%Pd/C(115 mg)與乙酸酐(40 μl,435 μmol)之甲醇(12 ml)懸浮液於室溫與1 atm氫氣下攪拌。4 h後，再加一份10%Pd/C(115 mg)與乙酸酐(40 μl,435 μmol)，續於室溫與1 atm氫氣下攪拌2 h。所得混合物通過矽藻土過濾，蒸發濾 液，殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%TFA水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生18 mg(理論值之18%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.73 min；MS(ESIpos)：m/z=452(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.29(br.t,1H),8.04(br.t,1H),8.00(s,1H),7.34(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.58(d,2H),4.26(d,2H),3.95(s,3H),2.45(s,3H),1.81(s,3H),1.74(s,3H)ppm。
實例73
2-[4-胺基-6-(羥基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]丙烷-2-醇
取含包含中間物43A(180 mg,598 μmol)、中間物6A(299 mg,897 μmol)與氟化銫(454 mg,2.99 mmol)之THF/水(10：1,11 ml)懸浮液之燒瓶在減壓下脫氣後，重新填充氬氣，添加4-(二-第三丁基膦基)-N,N-二甲基苯胺-二氯鈀(2：1；13 mg,18 μmol)。所得混合物再脫氣一次，於氬氣與50℃下攪拌16 h。然後經製備性RP-HPLC分離反應混合物(Reprosil C18，梯度：30-50%乙腈/0.2%TFA水溶液)。 產物溶離份使用7 M氨之甲醇溶液稀釋後，減壓濃縮。濾出沉澱，使用水洗滌，與真空乾燥，產生99 mg(理論值之42%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.89 min；MS(ESIpos)：m/z=399(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.96(s,1H),7.51-8.02(br.s,1H),7.37(s,1H),7.31(s,1H),6.86(s,1H),5.99(s,1H),5.23-5.82(br.s,1H),5.04(t,1H),4.53(d,2H),3.96(s,3H),2.45(s,3H),1.73(s,6H)ppm。
實例74
4-{[4-胺基-7-(2-羥基丙烷-2-基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮
取含中間物44A(50 mg,73%純度，92 μmol)之甲醇(4 ml)溶液使用2-側氧基哌(28 mg,276 μmol)、氰基氫硼化鈉(23 mg,368 μmol)與乙酸(21 μl,368 μmol)處理。混合物先於60℃下攪拌18 h後，於室溫下攪拌3天。然後經製備性RP-HPLC分離混合物(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%TFA水溶液)。取產物溶離份使用7 M氨之甲醇溶液稀釋，與減壓蒸發。殘質溶於乙酸乙酯，使用水洗滌。有機相經硫酸鈉脫水與減壓濃縮。殘質溶於1,4-二烷與冷凍乾燥，產生24 mg(理論值之52%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.85 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+ 1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,1H),7.73-8.01(br.s,1H),7.41(s,1H),7.33(s,1H),6.87(s,1H),5.2-5.7(br.s,1H),3.95(s,3H),3.57(s,2H),3.14(br.s,2H),2.60(br.s,4H),2.46(s,3H),1.70(br.s,6H)ppm。
實例75
[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲醇
於氬氣下，在燒瓶中添加165 mg(0.64 mmol)中間物53A、143 mg(0.64 mmol)中間物5A、25 mg(0.03 mmol)(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))與409 mg(1.93 mmol)磷酸鉀。然後添加7 ml脫氣之含1,4-二烷與水(5：1)之混合物，於70℃下攪拌溶液1 h。再加一份中間物5A(142 mg,0.64 mmol)與(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(10 mg,0.012 mmol)，繼續攪拌1 h。然後於減壓下部份蒸發反應混合物，添加水，混合物使用乙酸乙酯萃取。合併之有機相減壓蒸發，殘質使用乙腈磨製。濾出沉澱，與真空乾燥，產生180 mg(由LC-MS測定為92%純度，理論值之73%)標題化合物。由 濾液經過製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，得到第二批產物(41 mg,18%)。總產量：理論值之91%。
LC-MS(方法5)：Rt=1.92 min；MS(ESIpos)：m/z=355(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.95(s,1H),7.35(s,1H),7.30(s,1H),6.83(s,1H),4.82(t,1H),4.44(d,2H),3.95(s,3H),2.45(s,3H)ppm。
實例76
4-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮
取55 mg(0.16 mmol)中間物54A之THF溶液(1.5 ml)懸浮液使用78 mg(0.78 mmol)哌-2-酮、18 μl(0.31 mmol)乙酸與166 mg(0.78 mmol)三乙醯氧基氫硼化物處理。混合物於環境溫度下攪拌一夜。然後添加1.5 ml水，減壓蒸發大部份THF溶劑。其餘混合物再加更多水稀釋，濾出沉澱與乾燥(35 mg)。此產物再經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)。取產物溶離份使用碳酸鉀固體調至pH 9，並部份減壓濃縮。濾出沉澱固 體，於45℃下真空乾燥，產生16 mg(理論值之24%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.74 min；MS(ESIpos)：m/z=437(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.95(s,1H),7.66(br.s,1H),7.35(s,1H),7.30(s,1H),6.83(s,1H),3.95(s,3H),3.50(s,2H),3.05(m,2H),2.84(s,2H),2.45(m,5H)ppm。
實例77
1-({[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}胺基)-2-甲基丙烷-2-醇甲酸鹽
取含55 mg(0.16 mmol)中間物54A之THF溶液(1.5 ml)懸浮液使用98 mg(0.78 mmol)1-胺基-2-甲基丙烷-2-醇鹽酸鹽、39 mg(0.47 mmol)乙酸鈉與166 mg(0.78 mmol)三乙醯氧基氫硼化鈉處理。混合物於環境溫度下攪拌一夜。然後添加1.5 ml水，混合物減壓蒸發。殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生38 mg(理論值之52%)標題化合物。
LC-MS(方法5)：Rt=1.68 min；MS(ESIpos)：m/z=426(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.19(s,1H),7.94(s,1H),7.38(s,1H),7.29(s,1H),6.84(s,1H),3.95(s,3H),2.45(s,3H),2.34(s,2H),1.02(s,6H)ppm。
實例78
1-({[4-胺基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}胺基)-2-甲基丙烷-2-醇
取含29 mg(0.06 mmol)實例77之3 ml甲醇溶液通過Stratospheres SPE PL-HCO3 MP-樹脂卡管(先經過2 ml甲醇前處理)。使用4 ml甲醇洗滌卡管，取溶出液蒸發，產生21.5 mg(理論值之82%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.68 min；MS(ESIpos)：m/z=426(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.94(s,1H),7.37(s,1H),7.28(s,1H),6.83(s,1H),4.07(s,1H),3.95(s,3H),3.63-3.75(m,2H),2.45(s,3H),2.32(m,3H),1.42-1.56(m,1H),1.02(s,6H)ppm。
實例79
[4-胺基-7-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲醇
取含中間物48A(117 mg,0.24 mmol)之5 ml THF溶液使用5 ml濃鹽酸處理，於環境溫度下攪拌一夜。然後添加12 ml 5 M氫氧化鈉水溶液及乙酸乙酯，分層，水層使用乙酸乙酯萃取2次。合併之有機相經飽和氯化鈉水溶液洗滌，脫水與蒸發。殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生30 mg(理論值之34%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.90 min；MS(ESIpos)：m/z=375(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.04(s,1H),7.43(s,1H),7.32(s,1H),6.85(s,1H),5.02(t,1H),4.43(d,2H),3.96(s,3H),2.45(s,3H)ppm。
單離出9.2 mg(理論值之10%)7-氯-6-(氯甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺之副產物(參見中間物50A)。
實例80
4-{[4-胺基-7-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮
依據實例76之製程，以40 mg(0.11 mmol)中間物49A為起始物，製得標題化合物。產量：27 mg(理論值之55%)。
LC-MS(方法2)：Rt=0.86 min；MS(ESIpos)：m/z=457(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.05(s,1H),7.68(br.s,1H),7.44(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),3.96(s,3H),3.52(s,2H),3.05(br.s,2H),2.86(s,2H),2.45(s,3H)ppm。
實例81
1-({[4-胺基-7-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}胺基)-2-甲基丙烷-2-醇甲酸鹽
依據實例77之製程，以40 mg(0.11 mmol)中間物49A為起始物，製得標題化合物。產量24 mg(理論值之45%)。
LC-MS(方法2)：Rt=0.73 min；MS(ESIpos)：m/z=446(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.15(s,1H),8.04(s,1H),7.45(s,1H),7.30(s,1H),6.85(s,1H),3.96(s,3H),3.73(s,2H),2.45(s,3H),2.32(s,2H),1.00(s,6H)ppm。
實例82
1-({[4-胺基-7-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}胺基)-2-甲基丙烷-2-醇
依據實例78之製程，由實例81製得標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.72 min；MS(ESIpos)：m/z=446(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.04(s,1H),7.45(s,1H),7.30(s,1H),6.85(s,1H),4.09(br.s,1H),3.95(s,3H),3.71(s,2H),2.45(s,3H),2.31(s,2H),1.44-1.64(m,1H),1.00(s,6H)ppm。
實例83
7-氯-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺
取8.2 mg(0.02 mmol)中間物50A懸浮於1 ml乙醇中，以41 μl(0.11 mmol)2.68 M乙醇鈉之乙醇溶液處理，並回流1 min。隨後蒸發澄清溶液，粗產物經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生5 mg(理論值之56%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=1.25 min；MS(ESIpos)：m/z=402(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.06(s,1H),7.40(s,1H),7.32(s,1H),6.86(s,1H),4.40(s,2H),3.96(s,3H),3.40(q,2H),2.45(s,3H),1.06(t,3H)ppm。
實例84
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-甲基-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺甲酸鹽
取含中間物57A(100 mg,191 μmol)之4 M鹽酸之1,4-二烷溶液(2 ml)於室溫下攪拌3 h後，蒸發。經兩次製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%甲酸水溶液)，產生71 mg(理論值之67%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.81 min；MS(ESIpos)：m/z=423(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,CDCl3)：δ=8.46(br.s,1H),7.89(s,1H),7.27(s,1H，與CHCl3波峰重疊)，7.18(s,1H),6.67(s,1H),4.01(s,3H),3.97(s,2H),3.18-3.09(m,4H),2.82-2.73(m,4H),2.50(s,3H),2.24(s,3H)ppm。
實例85
6-氯-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-4-胺三鹽酸鹽
取中間物60A(65 mg,0.12 mmol)於1 ml 4 M鹽酸之1,4-二烷溶液中，於室溫下攪拌2 h。蒸發懸浮液至乾，粗產物經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：10-95%乙腈/0.1%鹽酸水溶液)，產生49 mg(理論值之74%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.81 min；MS(ESIpos)：m/z=443(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=9.56(br.s,1H),8.45(br.s,1H),8.19(s,1H),7.44(s,1H),7.36(s,1H),6.89(s,1H),6.30(br.s,1H),4.63(br.s,1H),3.40(br.s,8H),2.46(s,3H)ppm。
實例86
[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲醇
標題化合物(360 mg)係實例5之製程中，由製備方法1製得之副產物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.99 min；MS(ESIpos)：m/z=399(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.09-7.72(br.s,1H),7.99(s,1H),7.35(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),6.05-5.48(br.s,1H),5.04(br.s,1H),4.81(d,2H),4.47(s,2H),3.96(s,3H),3.39(q,3H),2.45(s,3H),1.05(t,3H)ppm。
實例87
1-{[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}咪唑啶-2-酮
取含中間物63A(100 mg,0.221 mmol)之THF(5 ml)懸浮液使用咪唑啶-2-酮(57 mg,0.662 mmol)與N,N-二異丙基乙基胺(153 μl,0.926 mmol)處理，混合物於微波爐中加熱至150℃ 90 min。然後經製備性RP-HPLC純化反應混合物(Reprosil C18，梯度：40-60%乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。所得產物溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液。產物再次經製備性矽膠薄層層析法純化(環己烷/乙酸乙酯3：1)，產生24 mg(理論值之22%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.99 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.21-7.65(br.s,1H),7.99(s,1H),7.36(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),6.38(s,1H),6.04-5.56(br.s,1H),4.65(s,2H),4.46(s,2H),3.95(s,3H),3.38(q,2H),3.31-3.10(m,4H),2.45(s,3H),1.06(t,3H)ppm。
實例88
4-{[4-胺基-5-(7-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-6-(甲氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮
於氬氣下，在含中間物62A(72.6 mg,197 μmol)、(7-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)二羥硼酸(45 mg,216 μmol)與氟化銫(149 mg,983 μmol)之脫氣THF/水(10：1,2.2 ml)溶液中添加(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；7.7 mg,9.8 μmol；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))。所得混合物再脫氣一次，於氬氣與60℃下攪拌3 h。然後經製備性RP-HPLC分離混合物(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.1%TFA水溶液)。合併產物溶離份並蒸發至乾。殘質溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生31 mg(理論值之35%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.71 min；MS(ESIpos)：m/z=453(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.00(s,1H),7.72(s,1H),7.61-8.23(br.s,1H),7.51(d,1H),7.46(s,1H),7.40(t,1H),6.99(d,1H), 5.57-6.11(br.s,1H),4.42(s,2H),3.98(s,5H),3.20(s,3H),3.11(br.m,2H),3.01(s,2H),2.62-2.67(m,2H)ppm。
實例89
4-{[4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮
於氬氣下，在含中間物62A(50 mg,135 μmol)、(5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)二羥硼酸(28.6 mg,149 μmol)與氟化銫(103 mg,677 μmol)之脫氣THF/水(10：1,4.4 ml)溶液中添加(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；5.3 mg,6.8 μmol；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))。所得混合物再脫氣一次，於氬氣與60℃下攪拌16 h。然後經製備性RP-HPLC分離混合物(Reprosil C18，梯度：30-50%乙腈/0.1%TFA水溶液)。合併產物溶離份並蒸發至乾。殘質溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(StratoSpheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生27 mg(理論值之45%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.79 min；MS(ESIpos)：m/z=437(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.00(s,1H),7.89(d,1H),7.73(s,1H),7.71(s,1H),7.58-8.18(br.s,1H),7.40(s,1H),7.24(dd,1H),5.58-6.03(m,1H),4.42(s,2H),3.97(s,2H),3.21(s,3H),3.11(br.t,2H),3.01(s,2H),2.64(t,2H),2.44(s,3H)ppm。
實例90
1-[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]乙醇
於氬氣下，滴加1 M甲基鎂化溴之THF溶液(630 μl,630 μmol)至室溫下之含中間物17A(100 mg,252 μmol)之THF(10 ml)溶液中。混合物於室溫下攪拌3 h後，再加一份甲基鎂化溴之THF溶液(177 μl,177 μmol)處理。再攪拌反應混合物16 h後，使用飽和氯化銨水溶液中止反應，以乙酸乙酯萃取。合併之有機層經鹽水洗滌，經硫酸鎂脫水，過濾與蒸發。殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：40-60%乙腈/0.1%TFA水溶液)。取產物溶離份使用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋，使用乙酸乙酯萃取。有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，過濾與蒸發，產生39 mg(理論值之36%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=1.07 min；MS(ESIpos)：m/z=413(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.95(s,1H),7.56-8.07(br.s,1H),7.35(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),5.46-5.54(m,1H),5.37-5.95(br.s,1H),5.26(d,1H),4.67(d,1H),4.38(d,1H),3.95(s,3H),3.38(q,2H),2.45(s,3H),1.52(d,3H),1.05(t,3H)ppm。
實例91
[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基](環丙基)甲醇
於氬氣下，滴加0.5 M環丙基鎂化溴之THF溶液(1.26 ml,630 μmol)至室溫下之含中間物17A(100 mg,252 μmol)之THF(5 ml)溶液中。混合物於室溫下攪拌1 後，使用飽和氯化銨水溶液中止反應，以乙酸乙酯萃取。合併之有機層經鹽水洗滌，經硫酸鎂脫水，過濾與蒸發。殘質經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：50-70%乙腈/0.1%TFA水溶液)。取產物溶離份使用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋，使用乙酸乙酯萃取。有機相使用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂脫水，過濾與蒸發，產生10 mg(理論值之10%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=1.13 min；MS(ESIpos)：m/z=439(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.94(s,1H),7.68-8.04(br.s,1H), 7.36(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),5.47-5.89(br.s,1H),5.30(d,1H),4.64(d,1H),4.59-4.67(m,1H),4.39(d,1H),3.96(s,3H),3.38(q,2H),2.45(s,3H),1.54-1.64(m,1H),1.04(t,3H),0.51-0.59(m,1H),0.40-0.47(m,1H),0.28-0.38(m,2H)ppm。
實例92
(3S)-3-({[4-胺基-6-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}胺基)吡咯啶-2-酮
取含中間物13A(100 mg,0.233 mmol)之THF(2 ml)懸浮液使用(S)-3-胺基吡咯啶-2-酮(35 mg,0.349 mmol)、三乙醯氧基氫硼化鈉(148 mg,0.698 mmol)與乙酸(26.6 μl,0.465 mmol)處理。所得混合物於室溫下攪拌3 h後，直接經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：40-60%乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。合併產物溶離份與蒸發至乾。殘質溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生56 mg(理論值之51%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.72 min；MS(ESIpos)：m/z=467(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.01(s,1H),7.76(s,1H),7.35(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),4.48(d,2H),4.43(d,2H),4.24-4.02(m,2H),3.96(s,3H),3.26-2.99(m,6H),2.45(s,3H),2.40-2.27(m,1H),1.82-1.64(m,1H)ppm。
實例93
(3S)-3-({[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}胺基)吡咯啶-2-酮
取含中間物17A(100 mg,0.252 mmol)之THF(2 ml)懸浮液使用(S)-3-胺基吡咯啶-2-酮(38 mg,378 μmol)、三乙醯氧基氫硼化鈉(160 mg,757 μmol)與乙酸(30 μl,504 μmol)處理。所得混合物於室溫下攪拌3 h後，直接經製備性RP-HPLC純化(Reprosil C18，梯度：30-50%乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。合併產物溶離份與蒸發至乾。殘質溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生84 mg(理論值之69%)標題化合物。
LC-MS(方法4)：Rt=0.75 min；MS(ESIpos)：m/z=481(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.00(s,1H),7.75(s,1H),7.67-8.11(br.s,1H),7.35(s,1H),7.31(s,1H),6.85(s,1H),5.5-6.0(br.s,1H),4.44(q,2H),4.14-4.21(m,1H),4.02-4.11(m,1H),3.38-3.45(q,2H),3.16-3.24(m,1H),3.05-3.16(m,2H),2.45(s,3H),2.31-2.40(m,1H),1.67-1.79(m,1H),1.08(t,3H)ppm。
製備表I中實例94-105之一般製程：
取0.13 M中間物17A之THF懸浮液使用1.5 eq.各種胺組份、3 eq.三乙醯氧基氫硼化鈉與1.5 eq.乙酸處理。所得混合物於60℃下攪拌3-20 h。然後，依據指示之方法純化。
實例106
4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-N-[(3R)-2-側氧基吡咯啶-3-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-羧醯胺
於室溫下，取含中間物64A(50 mg,121 μmol)之DMF(2 ml)攪拌溶液使用N-[(1H-苯并三唑-1-基氧)(二甲基胺基)亞甲基]-N-甲基甲胺鎓四氟硼酸鹽(TBTU)(43 mg,133 μmol)與DIPEA(53 μl,303 μmol)處理。15 min後，添加(3R)-3-胺基吡咯啶-2-酮(24 mg,242 μmol)，所得混合物於室溫下再攪拌2 h。然後經製備性RP-HPLC分離混合物(Reprosil C18，梯度：30-50%乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。合併產物溶離份，蒸發至乾。殘質溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生36 mg(理論值之60%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.91 min；MS(ESIpos)：m/z=495(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=9.50(d,1H),8.21-8.45(br.s,1H),8.17(s,1H),7.97(s,1H),7.41(s,1H),7.33(s,1H),6.86(s,1H),5.84-6.09(br.s,1H),4.74(dd,2H),4.47-4.56(m,1H),3.96(s,3H),3.37(q,2H),3.22-3.29(m,2H),2.54-2.61(m,1H),2.46(s,3H),1.90-2.03(m,1H),1.00(t,3H)ppm。
實例107
4-{[4-胺基-6-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]羰基}哌-2-酮
於室溫下，取含中間物64A(50 mg,121 μmol)之DMF(2 ml)攪拌溶液使用TBTU(43 mg,133 μmol)與DIPEA(53 μl,303 μmol)處理。15 min後，添加哌-2-酮(24 mg,242 μmol)，所得混合物於室溫下再攪拌16 h。然後經製備性RP-HPLC分離混合物(Reprosil C18，梯度：40-60%乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。合併產物溶離份與蒸發至乾。殘質溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生45 mg(理論值之68%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.92 min；MS(ESIpos)：m/z=495(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=8.14(br.s,1H),7.99-8.01(m,1H),7.9-8.3(br.s,1H),7.41(d,1H),7.32(s,1H),6.86(s,1H),5.78-6.05(br.s,1H),4.30-4.49(m,2H),4.13-4.23(m,1H),4.03-4.10(m,1H),3.96(s,3H),3.76-3.87(m,1H),3.57-3.74(m,1H),3.35-3.43(m,2H),3.14-3.25(m,1H),2.45(s,3H),0.96-1.05(m,3H)ppm。
製備表II中實例108-123之一般製程：
取0.13 M中間物64A之DMF溶液使用1.1 eq.TBTU與2.5 eq.DIPEA處理，於室溫下攪拌15 min。添加2 eq.各種胺，所得混合物於室溫下再攪拌18 h。然後依據指示之方法純化。
實例124
4-{[4-胺基-5-(5,7-二甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-6-(甲氧基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-7-基]甲基}哌-2-酮
於氬氣下，在含中間物62A(100 mg,271 μmol)、中間物66A(77 mg,325 μmol)與氟化銫(206 mg,1.35 mmol)之脫氣THF/水(10：1；5 ml)溶液中添加(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；42.6 mg,54 μmol；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))。所得混合物再次脫 氣，於氬氣與60℃下攪拌6 h。然後再加一份中間物66A(39 mg,162 μmol)，續於60℃下攪拌10 h。然後經製備性RP-HPLC分離反應混合物(Reprosil C18，梯度：30-50%乙腈/0.1%TFA水溶液)。合併產物溶離份，蒸發至乾。殘質溶於甲醇，通過陰離子交換卡管過濾(Stratospheres SPE,PL-HCO3 MP-樹脂)。使用甲醇溶離卡管，蒸發濾液，產生40 mg(理論值之28%)標題化合物。
LC-MS(方法2)：Rt=0.78 min；MS(ESIpos)：m/z=483(M+H)+
1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,1H),7.68(br.s,1H),7.49-8.17(br.s,1H),7.37(s,1H),7.05(d,1H),6.63(d,1H),5.5-6.0(br.s,1H),4.42(s,2H),3.97(s,2H),3.94(s,3H),3.84(s,3H),3.20(s,3H),3.09-3.14(m,2H),3.01(s,2H),2.62-2.67(m,2H)ppm。
實例125
4-{[4-胺基-7-(羥基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮
於氬氣下，在含中間物70A(700 mg,1.49 mmol)、中間物5A(497 mg,2.24 mmol)與氟化銫(1.36 g,8.95 mmol)之脫氣THF/水(2：1,90 ml)溶液中添加(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異 丙基聯苯-2-基)膦(1：1；117 mg,0.149 mmol；參見S. L. Buchwald等人之J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010))。所得混合物再次脫氣，於氬氣與60℃下攪拌一夜。再加一份中間物5A(231 mg,1.04 mmol)與(2'-胺基聯苯-2-基)(氯)鈀-二環己基(2',4',6'-三異丙基聯苯-2-基)膦(1：1；117 mg,0.149 mmol)，續於60℃下攪拌3 h。濾出沉澱，使用THF洗滌與真空乾燥。取固體懸浮於DMF與1 M三氟乙酸水溶液之混合物中，過濾。經製備性RP-HPLC分離濾液(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。合併產物溶離份後，添加飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化。溶液使用乙酸乙酯萃取，有機層經鹽水洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發，產生88 mg標題化合物(理論值之13%)。
LC-MS(方法2)：Rt=0.70 min；MS(ESIpos)：m/z=453(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：特別指δ=7.6-8.0(br.s,1H),7.98(s,1H),7.71(s,1H),7.37(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),5.4-5.8(br.s,1H),5.19(t,1H),4.85(d,2H),3.95(s,3H),3.58(s,2H),3.04(br.m,2H),2.88(s,2H),2.45(s,3H)ppm。
實例126
4-{[4-胺基-7-(甲氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮
取含實例125(88 mg,194 μmol)之二氯甲烷(5 ml)懸浮液經亞硫醯氯(29 μl,389 μmol)處理，混合物於室溫下攪拌65 min。再加一份亞硫醯氯(29 μl,389 μmol)，繼續攪拌1.5 h。添加過量甲醇後，滴加5.4 M甲醇鈉之甲醇溶液(84 mg,1.56 mmol)，直到達到pH 8。攪拌3天後，減壓蒸發揮發物，殘質經製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。蒸發產物溶離份，產生19 mg標題化合物(理論值之21%)。
LC-MS(方法2)：Rt=0.77 min；MS(ESIpos)：m/z=466(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,1H),7.75-8.11(br.s,1H),7.68(s,1H),7.38(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),5.51-5.82(m,1H),4.77(s,2H),3.95(s,3H),3.55(s,2H),3.31(s,3H),3.04(br.s,2H),2.85(s,2H),2.42-2.48(m,5H)ppm。
實例127
4-{[4-胺基-7-(乙氧基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三-6-基]甲基}哌-2-酮
取含實例125(100 mg,221 μmol)之二氯甲烷(10 ml)懸浮液使用亞硫醯氯(161 μl,2.21 mmol)處理，混合物於室溫下攪拌30 min。添加乙醇，減壓蒸發揮發物。殘質溶於乙醇(10 ml)，添加乙醇鈉(30 mg,442 μmol)，混合物於室溫下攪拌1 h。混合物直接經製備性RP-HPLC分離(Reprosil C18，梯度：20-40%乙腈/0.2%三氟乙酸水溶液)。合併產物溶離份，添加飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化。溶液經乙酸乙酯萃取，有機層經鹽水洗滌，經硫酸鎂脫水，與蒸發，產生57 mg標題化合物(理論值之54%)。
LC-MS(方法2)：Rt=0.85 min；MS(ESIpos)：m/z=480(M+H)+
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ=7.99(s,1H),7.75-8.09(br.s,1H),7.64-7.71(m,1H),7.38(s,1H),7.31(s,1H),6.84(s,1H),5.38-5.91(br.s,1H),4.81(s,2H),3.95(s,3H),3.49-3.59(m,4H),2.99-3.08(m,2H),2.86(s,2H),1.12(t,3H)ppm。
B.生物活性分析法
縮寫與縮語：
可利用相關技藝上習知之試管內、活體外與活體內分析法測定本發明化合物之活性。例如：可採用下列分析法證實本發明化合物之活性。
B-1. FGFR-1高ATP激酶分析法
採用下文說明之基於TR-FRET之FGFR-1高ATP分析法，測定本發明化合物與FGFR-1預先培養後，在高ATP濃度下對FGFR-1之抑制活性：
自Proqinase(產物編號0101-0000-1)購得重組體標記FGFR-1融合蛋白質[融合榖胱甘肽-S-轉化酶(GST)(N-末端)、His6-標記、凝血酶裂解位置、來自GenBank entry NM_015850之胺基酸G400至R800之人類FGFR-1之細胞內部份]，其係採用桿病毒表現系統，在SF9昆蟲細胞中表現，並經過榖胱甘肽-瓊脂親和性層析法純化，其係作為酵素使用。該激酶反應所採用之受質為生物素基化之肽：生物素-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK(C-末端呈醯胺型)，可購自例如：Biosyntan(德國Berlin-Buch)。
通常，於同一微滴定盤中，在11種不同濃度下(濃度範圍為20 μM至0.1 nM(例如：20 μM、5.9 μM、1.7 μM、0.51 μM、0.15 μM、44 nM、13 nM、3.8 nM、1.1 nM、0.33 nM與0.1 nM))測試化合物，每種濃度進行二重覆。分析之前，由100倍濃度之母液在DMSO中分別製成連續稀釋液；確實之濃度將隨所採用之滴定吸管而定。分析時，分別吸取各試驗化合物含於DMSO中之50 nl母液加至黑色小體積384孔微滴定盤中(德國Frickenhausen市，Greiner Bio-One)。添加2 μl含上述FGFR-1融合蛋白質之水性分析緩衝液[8 mM MOPS pH 7.0、10 mM乙酸鎂、1.0 mM二硫代蘇糖醇、0.05%(w/v)牛血清白蛋白(BSA)、0.07%(v/v)Tween-20、0.2 mM EDTA]，混合物於22℃下培養15 min，讓試驗化合物先與酵素結合。然後，添加3 μl含腺苷三磷酸(ATP，3.3 mM；於5 μl分析體積中之終濃度=2 mM) 與受質(0.16 μM；於5 μl分析體積中之終濃度=0.1 μM)之分析緩衝液之溶液開始激酶反應，所得混合物於22℃下培養之反應時間為15 min。依據該批次酵素之活性調整FGFR-1融合蛋白質之濃度，並適當選擇，以便在線性範圍內進行分析(典型濃度範圍為0.05 μg/ml)。添加5 μl含HTRF檢測試劑[25 nM鏈黴抗生物素蛋白-XL665(Cis Biointernational)與1 nM PT66-Eu-螯合物(係標記銪-螯合物之抗磷酸酪胺酸抗體(Perkin-Elmer；可改用來自Cis Biointernational之PT66-Tb-籠形物)之EDTA水溶液(50 mM EDTA、含0.1%(w/v)BSA之50 mM HEPES/NaOH pH 7.5)]之溶液中止反應。
所得混合物於22℃下培養1 h，讓磷酸化生物素基化肽與檢測試劑之間形成複合物。隨後測定從Eu-螯合物轉移至鏈黴抗生物素蛋白-XL665上之共振能量，分析磷酸化受質之含量。基於此目的，於TR-FRET讀數機[例如：Rubystar(德國Offenburg市BMG Labtechnologies)或Viewlux(Perkin-Elmer)]中，測定350 nm激發光之後之620 nm與665 nm之發射螢光。由665 nm與620 nm之發射光之比例作為磷酸化受質含量之測定值。數據經過校正(沒有抑制劑之酵素反應=0%抑制作用，含有所有其他分析組份但不含酵素=100%抑制作用)，並採用自行製作之軟體，擬合四參數計算IC50值。
由此分析法測定本發明各化合物之IC50值列於下表1A：
依據已公開之製法合成所選定之8-胺基-1-(苯并噻吩-2-基)咪唑并[1,5-a]吡衍生物與被先前技藝視為最相近之代表性化合物(參 見國際專利申請案WO 2007/061737-A2與其中說明之實例化合物)並於FGFR-1高ATP分析法中進行測試，以供比較。此等化合物所得之IC50值列於下表1B：
表1A與1B中所示之IC50值證實本發明化合物對FGFR-1激酶活性之抑制效力比所選定之先前技藝化合物高約5倍至1000倍。
B-2. FGFR-3激酶分析法
採用下文說明之基於TR-FRET之FGFR-3分析法，定量本發明化合物與FGFR-3預先培養後，對FGFR-3之抑制活性：
自Proqinase(產物編號1068-0000-1)購得重組體標記FGFR-3融合蛋白質[融合榖胱甘肽-S-轉化酶(GST)(N-末端)、His6-標記、凝血酶裂解位置、及來自NCBI/Protein entry NP_000133.1之胺基酸R397 至T806之人類FGFR-3之細胞內部份]，其係採用桿病毒表現系統，在SF9昆蟲細胞中表現，並經過榖胱甘肽-S-轉化酶親和性層析法純化，其係作為酵素使用。該激酶反應所採用之受質為生物素基化之肽：生物素-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK(C-末端呈醯胺型)，可購自例如：Biosyntan(德國Berlin-Buch)。
通常，於同一微滴定盤中，在11種不同濃度下(濃度範圍為20 μM至0.1 nM(例如：20 μM、5.9 μM、1.7 μM、0.51 μM、0.15 μM、44 nM、13 nM、3.8 nM、1.1 nM、0.33 nM與0.1 nM))測試化合物，每種濃度進行二重覆。分析之前，由100倍濃度之母液在DMSO中分別製成連續稀釋液；確實之濃度將隨所採用之滴定吸管而定。分析時，分別吸取各試驗化合物含於DMSO中之50 nl母液加至黑色小體積384孔微滴定盤中(德國Frickenhausen市，Greiner Bio-One)。添加2 μl含上述FGFR-3融合蛋白質之水性分析緩衝液[8 mM MOPS pH 7.0、10 mM乙酸鎂、1.0 mM二硫代蘇糖醇、0.05%(w/v)牛血清白蛋白(BSA)、0.07%(v/v)Tween-20、0.2 mM EDTA]，混合物於22℃下培養15 min，讓試驗化合物先與酵素結合。然後，添加3 μl含腺苷三磷酸(ATP，16.7μM；於5 μl分析體積中之終濃度=10μM)與受質(0.8 μM；於5 μl分析體積中之終濃度=0.5 μM)之分析緩衝液之溶液開始激酶反應，所得混合物於22℃下培養之反應時間為60 min。依據該批次酵素之活性調整FGFR-3融合蛋白質之濃度，並適當選擇，以便在線性範圍內進行分析(典型濃度範圍為0.03μg/ml)。添加5 μl含HTRF檢測試劑[100 nM鏈黴抗生物素蛋白-XL665(Cis Biointernational)與1 nM PT66-Tb-籠形物(係標記鋱-籠形物之抗磷酸酪胺酸抗體(Cis Biointernational；可改用來自Perkin-Elmer之PT66-Eu-螯合物)之EDTA水溶液(50 mM EDTA、含0.1%(w/v)BSA之50 mM HEPES/NaOH pH 7.5)]之溶液中止反應。
所得混合物於22℃下培養1 h，讓磷酸化生物素基化肽與檢測試劑之間形成複合物。隨後測定從Tb-螯合物轉移至鏈黴抗生物素蛋白-XL665上之共振能量，分析磷酸化受質之含量。基於此目的，於TR-FRET讀數機[例如：Rubystar(德國Offenburg市BMG Labtechnologies)或Viewlux(Perkin-Elmer)]中，測定350 nm激發光之後之620 nm與665 nm之發射螢光。由665 nm與620 nm之發射光之比例作為磷酸化受質含量之測定值。數據經過校正(沒有抑制劑之.酵素反應=0%抑制作用，含有所有其他分析組份但不含酵素=100%抑制作用)，並採用自行製作之軟體，擬合四參數計算IC50值。
由此分析法測定本發明各化合物之IC50值列於下表2A：
依據已公開之製法合成所選定之8-胺基-1-(苯并噻吩-2-基)咪唑并[1,5-a]吡衍生物與被先前技藝視為最相近之代表性化合物(參見國際專利申請案WO 2007/061737-A2與其中說明之實例化合物)並於FGFR-3分析法中進行測試，以供比較。此等化合物所得之IC50值列於下表2B：
表2A與2B中所示之IC50值證實本發明化合物對FGFR-3激酶活性之抑制效力比所選定之先前技藝化合物高約3倍至1000倍。
B-3. FGFR-4高ATP激酶分析法
採用下文說明之基於TR-FRET之FGFR-4高ATP分析法，測定本發明化合物與FGFR-4預先培養後，在高ATP濃度下對FGFR-4之抑制活性：
自Proqinase(產物編號0127-0000-3)購得重組體標記FGFR-4融合蛋白質[融合榖胱甘肽-S-轉化酶(GST)(N-末端)、His6-標記、凝血酶裂解位置、來自GenBank entry NM_002011之胺基酸R391至T802之人類FGFR-4之細胞內部份]，其係採用桿病毒表現系統，在SF9昆蟲細胞中表現，並經過榖胱甘肽-瓊脂親和性層析法純化，其係作為酵素使用。該激酶反應所採用之受質為生物素基化之肽：生物素- Ahx-AAEEEYFFLFAKKK(C-末端呈醯胺型)，可購自例如：Biosyntan(德國Berlin-Buch)。
通常，於同一微滴定盤中，在11種不同濃度下(濃度範圍為20 μM至0.1 nM(例如：20 μM、5.9 μM、1.7 μM、0.51 μM、0.15 μM、44 nM、13 nM、3.8 nM、1.1 nM、0.33 nM與0.1 nM))測試化合物，每種濃度進行二重覆。分析之前，由100倍濃度之母液在DMSO中分別製成連續稀釋液；確實之濃度將隨所採用之滴定吸管而定。分析時，分別吸取各試驗化合物含於DMSO中之50 nl母液加至黑色小體積384孔微滴定盤中(德國Frickenhausen市，Greiner Bio-One)。添加2 μl含上述FGFR-4融合蛋白質之水性分析緩衝液[8 mM MOPS pH 7.0、10 mM乙酸鎂、1.0 mM二硫代蘇糖醇、0.05%(w/v)牛血清白蛋白(BSA)、0.07%(v/v)Tween-20、0.2 mM EDTA]，混合物於22℃下培養15 min，讓試驗化合物先與酵素結合。然後，添加3 μl含腺苷三磷酸(ATP，3.3 mM；於5 μl分析體積中之終濃度=2 mM)與受質(0.8 μM；於5 μl分析體積中之終濃度=0.5 μM)之分析緩衝液之溶液開始激酶反應，所得混合物於22℃下培養之反應時間為60 min。依據該批次酵素之活性調整FGFR-4融合蛋白質之濃度，並適當選擇，以便在線性範圍內進行分析(典型濃度範圍為0.03 μg/ml)。添加5 μl含HTRF檢測試劑[100 nM鏈黴抗生物素蛋白-XL665(Cis Biointernational)與1 nM PT66-Tb-籠形物(係標記鋱-籠形物之抗磷酸酪胺酸抗體(Cis Biointernational；可改用來自Perkin-Elmer之PT66-Eu-螯合物)之EDTA水溶液(50 mM EDTA、含0.1%(w/v)BSA之50 mM HEPES/NaOH pH 7.5)]之溶液中止反應。
所得混合物於22℃下培養1 h，讓磷酸化生物素基化肽與檢測試劑之間形成複合物。隨後測定從Tb-螯合物轉移至鏈黴抗生物素蛋白-XL665上之共振能量，分析磷酸化受質之含量。基於此目的， 於TR-FRET讀數機[例如：Rubystar(德國Offenburg市BMG Labtechnologies)或Viewlux(Perkin-Elmer)]中，測定350 nm激發光之後之620 nm與665 nm之發射螢光。由665 nm與620 nm之發射光之比例作為磷酸化受質含量之測定值。數據經過校正(沒有抑制劑之酵素反應=0%抑制作用，含有所有其他分析組份但不含酵素=100%抑制作用)，並採用自行製作之軟體，擬合四參數計算IC50值。
B-4. mTOR激酶分析法(供比較目的用)
採用下文說明之基於TR-FRET之mTOR分析法，測定本發明化合物對mTOR之抑制活性：
自Invitrogen(目錄編號4753)購得重組體融合標記mTOR蛋白質[榖胱甘肽-S-轉化酶(GST)與mTOR胺基酸1360至2549融合]，其係在昆蟲細胞中表現，並經過榖胱甘肽-瓊脂親和性層析法純化，其係作為酵素使用。該激酶反應所採用之受質為GFP與4E-BP1之重組體融合蛋白質(購自Invitrogen,Cat.-No.PV4759)。
取試驗化合物溶於DMSO，製成10 mM母液。此等溶液先於100%DMSO中稀釋10倍，得到含於100%DMSO中之1 mM溶液後，使用50%DMSO稀釋100倍，得到含於50%DMSO中之10 μM溶液。
分析時，吸取0.5μl試驗化合物含於50% DMSO中之10μM溶液加至黑色小體積384孔微滴定盤中(德國Frickenhausen市，Greiner Bio-One)。添加2 μl含上述mTOR融合蛋白質之水性分析緩衝液[50 mM HEPES/NaOH pH 7.5、5 mM氯化鎂、1.0 mM二硫代蘇糖醇、1 mM EGTA、0.01%(v/v)Triton-X100、0.01%(w/v)牛血清白蛋白(BSA)]之溶液，混合物於22℃下培養15 min，讓試驗化合物先與酵素結合。然後，添加2.5 μl含腺苷三磷酸(ATP，80μM；於5 μl分析體積中之終濃度=40μM)與受質(0.6 μM；於5 μl分析體積中之終濃度 =0.3 μM)之分析緩衝液之溶液開始激酶反應，所得混合物於22℃下培養之反應時間為60 min。適當選擇mTOR融合蛋白質之濃度，以便在線性範圍內進行分析(於5 μl分析體積中之典型濃度範圍為1.25 ng/μl)。添加5 μl 30 mM含EDTA(於10 μl分析體積中之終濃度=15 mM)與2 nM標記Tb-螯合物之抗-4E-BP1[pT46]磷酸專一性抗體[Invitrogen目錄編號PV4755](於10 μl分析體積中之終濃度=1 nM)之FRET緩衝液中止反應。
所得混合物於22℃下培養1 h，讓磷酸化受質與標記Tb-螯合物之抗體之間形成複合物。隨後測定從Tb-螯合物轉移至GFP上之共振能量，分析磷酸化受質之含量。基於此目的，於Envision 2104多重標記讀數機(Perkin-Elmer)中，測定340 nm激發光之後之520 nm與495 nm之發射螢光。由520 nm與495 nm之發射光之比例作為磷酸化受質含量之測定值。數據經過校正(沒有抑制劑之酵素反應=0%抑制作用，含有所有其他分析組份但不含酵素=100%抑制作用)，並計算平均值(若單一濃度進行重覆測定時)或IC50值(採用自行製作之軟體，擬合四參數計算)。
在1 μM各本發明化合物下之平均抑制作用數值示於下表3： (未檢測到抑制作用=在1 μM下沒有檢測到抑制效果)。
表3之數據顯示本發明化合物對mTOR激酶即使有抑制作用亦僅為微弱之抑制作用，因此表示不會影響此等化合物所觀察到之醫藥活性。
B-5.對生長因子所介導細胞增生作用之抑制作用
從Cellsystems(FC-0003)取得人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)，並於Vasculife VEGF完全培養基(Cellsystems,LL-1020)(包含2%胎牛血清(FBS))中，於37℃與5%CO2下生長。此等細胞可用於增生分析法直到傳代7次。
採用細胞消化液(accutase)(PAA,L11-007)收集HUVEC細胞，並接種在96孔盤(Falcon MICROTEST組織培養盤96孔平底，BD 353075、或μCLEAR-PLATE，黑色96孔，Greiner Bio-One，No.655090)第2至12欄中，細胞密度為2500個細胞/孔，含於100 μl Vasculife VEGF完全培養基中，第1欄留作空白對照組。細胞於37℃與5%CO2下生長至少6 h。然後，使用PBS洗滌細胞一次，於Vasculife基礎 培養基(Cellsystems,LM-0002)(包含肝素、抗壞血酸與L-麩醯胺(Vasculife Life Factors套組之組份，Cellsystems，LL-1020)及0.2%FBS)中饑餓一夜。
約18 h後，棄置饑餓培養基，細胞曝露在含試驗化合物之9種連續對數或半對數濃度，其範圍為10 pM至30 μM及曝露在5、10或20 ng/ml hFGF-2(重組體人類FGF basic,R&D Systems,233-FB)之100 μl饑餓培養基中72 h。取含於DMSO之10 mM試驗化合物母液於DMSO中稀釋至200 x終濃度，使所有孔中之最終DMSO濃度為0.5%。對照組包括僅於饑餓培養基中生長之細胞及於包含hFGF-2之饑餓培養基(含0.5%DMSO)中生長之細胞。測定細胞增生作用時，添加5 μl Alamar Blue溶液(Biosource,DAL1100)至各孔中(稀釋1：20)，讓細胞再於37℃與5%CO2下培養4 h後，採用Spectrafluor Plus Tecan分析盤讀數機(XFLUOR4 4.20版)測定螢光度(激發光535 nm，發射光595 nm)。有些實驗中，依據製造商指示採用ATP測定套組(BIAFFIN GmbH,LBR-T100)。各實驗中，樣本進行三重覆分析，並測定標準偏差。採用GraphPad Prism 5軟體分析數據，得到IC50值。所有試驗化合物均於獨立實驗中分析2至10次，且得到類似結果。
下表4所列數據代表本發明代表性化合物由相應平均pIC50值得到之IC50值：
當採用血管內皮生長因子(VEGF-A165同功型)作為介導之生長因子(替代FGF-2)時，大多數本發明化合物在此增生分析法中展現降低約10至100倍之抑制活性，此表示此等化合物相對於VEGFR激酶而對FGFR具有顯著選擇性。
B-6.人類異種移植物與協同性腫瘤模式：
進行不同腫瘤模式來分析本發明化合物於活體內之活性型態。於活體外培養人類、大鼠或小鼠腫瘤細胞，並植入免疫缺陷或免疫正常小鼠或免疫缺陷大鼠。在確立腫瘤後開始處理，經由不同途徑(經口、靜脈內、腹膜內或皮下)使用物質處理帶有腫瘤之大鼠。以單方療法或與其他藥理活性物質組合之療法測試物質。直到腫瘤達到平均大小120 mm2時才處理帶有腫瘤之動物。使用量徑器量測腫瘤二維尺寸，腫瘤體積之計算公式為(長度x寬度2)/2。於試驗結束時，採用T/C比[T=處理組最終腫瘤重量；C=對照組最終腫瘤重量]分析該物質之效力。利用ANOVA變方分析試驗法測定對照組與處理組之間效力之統計顯著性。動物試驗均依據德國法規進行。
雖然本發明已參考特定具體實施例說明，但其他熟悉此相關技術者咸了解可在不偏離本發明本質與範圍下衍生其他具體實施例與變化。申請專利範圍即包括所有此等具體實施例與同等變化。
C.與醫藥組合物相關之實例
根據本發明醫藥組合物可說明如下：
經靜脈內投藥之無菌溶液：
使用無菌注射用水(若需要時可調整pH)製備所需本發明化合物之5 mg/mL溶液。使用無菌5%右旋糖稀釋溶液，供投與1-2 mg/mL，並成為供投藥約60分鐘之經靜脈內輸液。
供靜脈內投藥之冷凍乾燥粉劑：
使用(i)100-1000 mg所需本發明化合物之冷凍乾燥粉末，(ii)32-327 mg/mL檸檬酸鈉，與(iii)300-3000 mg葡聚糖40製成無菌製劑。該調配物可使用無菌注射用生理食鹽水或5%右旋糖再組成至濃度10至20 mg/mL，其再使用生理食鹽水或5%右旋糖稀釋至0.2至0.4 mg/mL，且供經靜脈內快速注射或經靜脈內輸液15-60分鐘投藥。
經肌內投藥之懸浮液：
製備下列溶液或懸浮液供肌內注射：
50 mg/mL之所需水不可溶性本發明化合物；5 mg/mL羧甲基纖維素鈉；4 mg/mL Tween 80；9 mg/mL氯化鈉；9 mg/mL苯甲醇。
硬殼膠囊：
大量單位膠囊製法為在標準兩節式硬明膠囊中分別填裝100 mg所需之本發明化合物粉末、150 mg乳糖、50 mg纖維素與6 mg硬脂酸鎂。
軟明膠囊：
取所需本發明化合物於食用油(如：大豆油、棉籽油或橄欖油)中製成混合物，利用正排量型泵浦注入熔融明膠中，形成包含100 mg活性成份之軟明膠囊。膠囊稱重與乾燥。所需本發明化合物可溶於 聚乙二醇、甘油與山梨糖醇之混合物中，製成水相容性醫藥混合物。
錠劑：
採用傳統製程製備大量錠劑，使其單位劑量為100 mg所需之本發明化合物、0.2 mg膠態二氧化矽、5 mg硬脂酸鎂、275 mg微晶纖維素、11 mg澱粉與98.8 mg乳糖。可包覆適當水性與非水性包衣，以提高適口性，改善美觀與安定性、或延緩吸收性。
供局部投藥至眼睛之溶液或懸浮液(滴眼劑)：
無菌調配物係使用100 mg所需之本發明化合物之冷凍乾燥粉末於5 mL無菌生理食鹽水中再組成後製成。可使用氯化苯二甲烴銨、硫柳汞、苯基硝酸汞，等等作為防腐劑，其使用範圍為約0.001%至1%重量比。

Claims (12)

  1. 一種式(I)化合物， 其中R1 為氫、氯、甲基或甲氧基，R2 為氫或甲氧基，但其限制條件為R1與R2中至少一者不為氫，G1 代表氯、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基羰基、5-員氮雜-雜芳基或基團-CH2-OR3、-CH2-NR4R5或-C(=O)-NR4R6，其中R3 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基或苯基，(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、(C1-C4)-烷氧基、羥基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、胺基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基、二-(C1-C4)-烷基胺基羰基、(C3-C6)-環烷基或至多三個氟原子取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立 地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及(iii)該苯基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：氟、氯、溴、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷基與(C1-C4)-烷氧基，R4 為氫或(C1-C4)-烷基，R5 為氫、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-環烷基或4-至6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、(C1-C4)-烷氧基、羥基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基、二-(C1-C4)-烷基胺基羰基或(C3-C6)-環烷基取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及(iii)該4-至6-員雜環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基、側氧基與胺基，R6 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基或4-至6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、(C1-C4)-烷氧基、羥基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、胺基、胺 基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基、二-(C1-C4)-烷基胺基羰基或(C3-C6)-環烷基取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及(iii)該4-至6-員雜環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基、側氧基與胺基，或R4與R5、或R4與R6，其分別結合且與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至7-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R7)與O，且其環碳原子上可經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、側氧基、羥基、胺基與胺基羰基，且其中R7 為氫、(C1-C4)-烷基、甲醯基或(C1-C4)-烷基羰基，及G2 代表氯、氰基、(C1-C4)-烷基，或基團-CR8AR8B-OH、-CH2-NR9R10、-C(=O)-NR11R12或-CH2-OR15，其中R8A與R8B 係分別獨立地選自下列所組成群中：氫、(C1-C4)-烷基、環丙基與環丁基，R9 為氫或(C1-C4)-烷基，R10 為氫、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-環 烷基或4-至6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、胺基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基或二-(C1-C4)-烷基胺基羰基取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及(iii)該4-至6-員雜環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基、側氧基與胺基，R11 為氫或(C1-C4)-烷基，R12 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基或4-至6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、胺基、胺基羰基、單-(C1-C4)-烷基胺基羰基或二-(C1-C4)-烷基胺基羰基取代，及(ii)該(C3-C6)-環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基與胺基，及(iii)該4-至6-員雜環烷基可視需要經一或兩個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：(C1-C4)-烷基、羥基、側氧基與胺基， 或R9與R10、或R11與R12，其分別結合且與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至7-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R13)、O、S與S(O)2，且其環碳原子上可經至多三個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：氟、(C1-C4)-烷基、側氧基、羥基、胺基與胺基羰基，且其中R13 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基、甲醯基或(C1-C4)-烷基羰基，及R15 為(C1-C4)-烷基，但其限制條件為當G2為氯或氰基時，G1不為氯，或其醫藥上可接受之鹽類。
  2. 根據申請專利範圍第1項之式(I)化合物，其中R1 為氯、甲基或甲氧基，R2 為氫或甲氧基，G1 代表氯、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基羰基或選自下列所組成群中之5-員氮雜-雜芳基：吡唑基、咪唑基、唑基、異唑基與二唑基，或代表基團-CH2-OR3或-CH2-NR4R5，其中R3 為氫、(C1-C4)-烷基或(C3-C6)-環烷基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、(C1-C4)-烷氧基、羥基羰基、(C1-C4)-烷氧基羰基、胺基、胺基羰基、(C3-C6)-環烷基或至多三個氟原子取代，R4 為氫或(C1-C4)-烷基，R5 為氫、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-環烷基或 5-或6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、羥基羰基或(C3-C6)-環烷基取代，及(ii)該5-或6-員雜環烷基可視需要經側氧基取代，或R4與R5共同結合並與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R7)與O，且其環碳原子上可經側氧基或羥基取代，且其中R7 為氫或(C1-C4)-烷基，及G2 代表氯、氰基、(C1-C4)-烷基，或基團-CR8AR8B-OH、-CH2-NR9R10、-C(=O)-NR11R12或-CH2-OR15，其中R8A與R8B 係分別獨立地選自下列所組成群中：氫、(C1-C4)-烷基與環丙基，R9 為氫或甲基，R10 為氫、(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-環烷基或5-或6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基或胺基羰基取代，及(ii)該5-或6-員雜環烷基可視需要經側氧基取代，R11 為氫或甲基，R12 為氫、(C1-C4)-烷基、(C3-C6)-環烷基或5-或6-員雜環烷基，其中(i)該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基取代， 及(ii)該5-或6-員雜環烷基可視需要經側氧基取代，或R9與R10、或R11與R12，其分別結合且與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R13)、O、S與S(O)2，且其環碳原子上可經至多三個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：氟、(C1-C4)-烷基、側氧基、羥基、胺基與胺基羰基，且其中R13 為氫、(C1-C4)-烷基、環丙基、環丁基、甲醯基或(C1-C4)-烷基羰基，及R15 為甲基或乙基，但其限制條件為當G2為氯或氰基時，G1不為氯，或其醫藥上可接受之鹽類。
  3. 根據申請專利範圍第1或2項之式(I)化合物，其中R1 為甲基，R2 為甲氧基，G1 代表甲基、唑-5-基或基團-CH2-OR3或-CH2-NR4R5，其中R3 為氫、(C1-C4)-烷基、環丙基或環丁基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、甲氧基、乙氧基、羥基羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、胺基、胺基羰基、環丙基、環丁基或至多三個氟原子取代，R4 為氫、甲基或乙基，R5 為氫、(C1-C4)-烷基、乙醯基、環丙基、環丁基或2-側氧 基吡咯啶-3-基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、羥基羰基、環丙基或環丁基取代，或R4與R5共同結合並與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和5-或6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：NH與O，且其環碳原子上可經側氧基或羥基取代，及G2 代表甲基或基團-CR8AR8B-OH、-CH2-NR9R10或-C(=O)-NR11R12，其中R8A與R8B分別獨立地為氫或甲基，R9 為氫，R10 為氫、(C1-C4)-烷基、乙醯基、環丙基、環丁基或2-側氧基吡咯啶-3-基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基或胺基羰基取代，R11 為氫或甲基，R12 為氫、(C1-C4)-烷基、環丙基、環丁基或2-側氧基吡咯啶-3-基，其中該(C1-C4)-烷基可視需要經羥基取代，或R9與R10、或R11與R12，其分別結合且與其所附接之氮原子共同形成單環狀飽和4-至6-員雜環烷基環，其可包含選自下列之第二個環雜原子：N(R13)、O與S(O)2，且其環碳原子上可經至多三個分別獨立地選自下列所組成群中之取代基取代：氟、甲基、側氧基、羥基、胺基與胺基羰基，且其中 R13 為氫、甲醯基或乙醯基，或其醫藥上可接受之鹽類。
  4. 根據申請專利範圍第1或2項之式(I)化合物，其中R1 為甲基，R2 為甲氧基，G1 代表基團-CH2-OR3，其中R3 為(C1-C4)-烷基可視需要經羥基、胺基或胺基羰基取代，及G2 代表基團-CH2-NR9R10或-C(=O)-NR11R12，其中R9 為氫，R10 為2-側氧基吡咯啶-3-基，或R9與R10共同結合並與其所附接之氮原子共同形成哌-1-基、3-側氧基哌-1-基或4-乙醯基哌-1-基環，R11 為氫，R12 為2-側氧基吡咯啶-3-基，或R11與R12共同結合並與其所附接之氮原子共同形成3-羥基氮雜環丁烷-1-基、4-羥基哌啶-1-基或3-側氧基哌-1-基環，或其醫藥上可接受之鹽類。
  5. 一種製備根據申請專利範圍第1至4項所定義之式(I)化合物之方法，其特徵在於：[A]由式(II)6-經取代之4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三 其中R3具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，先與甲醛及式(III)胺 其中R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，於酸之存在下反應，產生式(IV)化合物 其中R3、R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，然後由式(V)化合物進行溴化反應 其中R3、R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，且隨後與式(VI)二羥硼酸苯并噻吩-2-基酯 其中R1與R2具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，及R14 代表氫或(C1-C4)-烷基，或兩個R14殘基共同連接形成 (CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-、-CH2-C(CH3)2-CH2-或-C(=O)-CH2-N(CH3)-CH2-C(=O)-橋連，於鈀觸媒與鹼之存在下偶合，產生式(I-A)目標化合物 其中R1、R2、R3、R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，或[B]由式(II)6-經取代之4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三 其中R3具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，先與N,N-二甲基甲醯胺於磷醯氯之存在下甲醯化，產生式(VII)醛 其中R3具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，然後進行溴化反應，產生式(VIII)化合物 其中R3具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，且隨後與式(VI)二羥硼酸苯并噻吩-2-基酯 其中R1、R2與R14具有如上述定義，於鈀觸媒與鹼之存在下偶合，產生式(IX)化合物 其中R1、R2與R3具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，其隨後抑或[B-1]與式(III)胺 其中R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，於酸與還原劑之存在下反應，產生式(I-A)目標化合物 其中R1、R2、R3、R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，或[B-2]氧化成式(X)羧酸 其中R1、R2與R3具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，及最後與式(XI)胺 其中R11與R12具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，於縮合劑之存在下偶合，產生式(I-B)目標化合物 其中R1、R2、R3、R11與R12具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，或[C]由式(XII)6-經取代之4-胺基-5-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三 先與式(VI)二羥硼酸苯并噻吩-2-基酯 其中R1、R2與R14具有如上述定義，於鈀觸媒與鹼之存在下偶合，產生式(XIII)化合物 其中R1與R2具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，然後與甲醛及式(III)胺 其中R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，於酸之存在下反應，產生式(I-C)化合物 其中R1、R2、R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，其隨後抑或[C-1]氧化成式(XIV)醛 其中R1、R2、R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義， 及使用式(XV)胺 其中R4與R5具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，於酸與還原劑之存在下處理，產生式(I-D)目標化合物 其中R1、R2、R4、R5、R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，或[C-2]轉化成相應之式(XVI)6-(鹵代甲基)衍生物 其中R1、R2、R9與R10具有根據申請專利範圍第1至4項所示之定義，及X 為氯、溴或碘， 及使用式(XVII)醇 其中R3A係根據申請專利範圍第1至4項中R3之定義，但不為氫，於鹼之存在下處理，產生式(I-E)目標化合物 其中R1、R2、R3A、R9與R10具有如上述定義，若適當時，可視需要隨後(i)分離所得之式(I)化合物形成其各對映異構物與/或非對映異構物，及/或(ii)使用相應之溶劑與/或酸類或鹼類處理，轉化式(I)化合物形成其鹽類。
  6. 根據申請專利範圍第1或2項所定義之化合物，其係用於治療與/或預防疾病。
  7. 根據申請專利範圍第1或2項所定義之化合物，其係用於治療與/或預防癌症與腫瘤疾病之方法。
  8. 一種以根據申請專利範圍第1至4項中任一項所定義之化合物於製造醫藥組合物上之用途，供治療與/或預防癌症與腫瘤疾病。
  9. 一種醫藥組合物，其包根據申請專利範圍第1至4項中任一項所定義之化合物與一或多種醫藥上可接受之賦形劑。
  10. 根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其進一步包含一或多種其他醫療劑。
  11. 根據申請專利範圍第9或10項所定義之醫藥組合物，其係用於治療及/或預防癌症與腫瘤疾病。
  12. 一種根據申請專利範圍第9至11項中任一項所定義之醫藥組合物之用途，其係用於製備治療及/或預防哺乳動物之癌症和腫瘤疾病的藥物。
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