BR112014014531A2 - benzotienil-pirrolotriazinas dissubstituídas e suas utilizações - Google Patents

Abstract

benzotienil-pirrolotriazinas dissubstituídas e suas utilizações a presente invenção diz respeito a novos derivados de 5-(1- benzotiofeno-2-il)-pirrolo[2, 1-f][1 ,2,4]triazina-4-amina substituída que possuem uma atividade inibitória de tirosina-cinase proteica, a processos para a preparação de tais compostos, a composições farmacêuticas que contêm tais compostos e à utilização de tais compostos ou composições para o tratamento de distúrbios proliferativos, em particular, câncer e doenças tumorais.

Description

Relatório Descritivo da Patente de invenção para: BENZOTIENIL· PIRROLOTRIAZINAS DISSUBSTITüfoAS E SUAS UTILIZAÇÕES.

[001} A presente invenção diz respeito a novos derivados de 5-(1benzotiofeno-2-il)-pirrolo[2,1-f}[1,2₅4]tnazina-4-amina substituída que possuem 5 uma atividade inlbltória de tlrosma-cinase proteica, a processos para a preparação de tais compostos, a composições farmacêuticas que contêm tais compostos e à utilização de tais compostos ou composições para o tratamento de distúrbios proiiferativos e, em particular, de câncer e de doenças tumorais.

[002] O câncer constitui uma causa principal de morte em todo o mundo e 10 foi responsável por 7,6 milhões de mortes (cerca, de 13% de todas as mortes) em 2008. É projetado que as mortes provenientes de câncer continuem a aumentar em todo o mundo até um valor superior a 11 milhões em 2030 (fonte WHO, Fact Sheet No. 207, Fevereiro de 2011)..

[003] Existem diversas maneiras sob a forma como os cancers podem 15 surgir, o que constitui uma das razões para a sua terapia ser dificil. Uma das formas pela qual pode ocorrer a transformação das células é após uma alteração genética. O término do projeto do genoma humano mostrou a instabilidade e heterogenecídade genômica de genes cancerígenos humanos. As estratégias recentes para identificar estas alterações genéticas apressam o 20 processo de descoberta do gene de câncer. Por exemplo, uma anormalidade genética pode dar origem à scbre-expressão de proteínas e, assim, a uma ativação não fisiológica dessas proteínas. Uma família de proteínas a partir da qual são obtidas diversas uncoproteínas são as tirosina-cinases e, em particular, timsina-cinases receptoras (RTK). Nas últimas duas décadas, 25 diversas pesquisas demonstraram a importância da sinalização mediada por

RTK no crescimento adverso de células dando origem a câncer. Em anos recentes, foram alcançados resultados promissores em ensaios clínicos com Inibidores de moléculas pequenas seletivos de trasina-cinases, coma uma nova classe de agentes anti-tumorígêniccs [Swinney e Anthony, Λ/afare Rev. 30 Dmp Disc. '10 (7), 507-519 (2011)].

2/265 [004] Os fatores de crescimento de fibroblastos (FGF) e seus receptores (FGFR) fazem parte de um sistema de sinalização único e diverso que desempenha um papel critico em vários processos biológicos que compreendem diversos aspectos de desenvolvimento embriônico e da 5 patofisiologia de adultos [Itoh e Ornitz, J. 8/ochem, 149 (2), 121-130 (2011)].

De um modo espaço-temporal, os FGF estimulam, através de ligação a FGFR, diversas funções celulares, incluindo a migração, a proliferação, a diferenciação e a sobrevivência, [006] A família de FGF compreende 18 fatores de crescimento 10 polipeptídícos segregados que se ligam a quadro tirosina-cinases receptores bastante conservadas (FGFR-1 a FGRF-4), expressas na superfície celular, Além disso, o FGFR5 pode ligar-se a FGF mas não possui um domínio cinase, pele que não possui sinalização intracelular. A especificidade da interação ligando/receptor é aumentada por vários processos de transcrição e tradução 15 que dão origem a múltiplas isoformas por iniciação alternativa de transcrição, sp/íC/ng alternativo e truncamentos no terminai C, Hã diversos proteoglicanos de sulfato de heparano (v.g„ sindecanos) que podem fazer parte do complexo FGF/FGFR e que influenciam fortemente a aptidão dos FGF para induzir respostas de sinalização [Polanska et at, Deve/opmenfa/ Dynamics 238 (2), 2Q 277-293 (2009)], Gs FGFR são receptores da superfície celular constituídos por três domínios extra-celulares do tipo imunoglobulina, um domínio transmembrane de passagem única e um domínio intracelular de tirosinacinase dlmerizada. A ligação de FGF aproxima as cinases intracelulares, permitindo que estas sejam submetidas a transfosforiiação entre si, Foram 25 identificados sete locais de fosforílação (v.g,, em FGFR1: Tyr463, Tyr583, Tyr585, Tyr653, Tyr654, Tyr730 e Tyr766), [006] Alguns destes grupos fosfotirosina atuam como locais de ancoragem para moléculas de sinalização a jusante, os quais podem também, eles próprios, ser fosforilados directamente por FGFR, dando origem á ativação de 30 múltiplas vias de transdução de sinal. Assim, a cascata de sinalização de

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MARK está envolvida ne crescimento e diferenciação celular, a cascata de sinalização de PISK/Akt está envolvida na sobrevivência celular e determinação do destino de células, ao passo que as cascatas de sinalização de PI3K e de PKC têm uma função nu controlo da polaridade das células. Foram agora 5 identificados diversos inibidores de retorno de sinalização de FGF, os quais incluem membros das famílias Spry (Sprouty) e Set (expressão semelhante a FGF). Além disso, sob determinadas condições, o FQFR é libertado a partir de membranas pré-Gelgi para o citosol O receptor e o seu ligando, FGF-2, são co-transportados para o núcleo por meio de um mecanismo que envolve 10 importina, e são envolvidos no complexo CRBB-proteína de ligação (CBP), um co~ativador de transcrição, comum e essencial, que atua como um tator de controlo da ativação de genes. Foram já observadas múltiplas correlações entre a expressão ímuno-histoquímica de FGF-2., FGFR-1 e FGFR-2 e as suas localizações cituplásmica e nuclear em células de tumor. Por exemplo, em 15 adenocarcinomas do pulmão tai associação também é encontrada ae nível nuclear, enfatizando um papel ativo do complexo no núcleo [Korc e Fríesel, Cum Cancer Drugs Targets 5, 639-651 (2009)].

[087] Os FGF são amplamente expressos em tecidos em desenvolvimento e adultos e desempenham papéis importantes em vários processes normais e 20 patológicos, incluindo o desenvolvimento de tecido, a regeneração de tecido, a angiogênese, a transformação neoplásica, a migração celular, a diferenciação celular e a sobrevivência celular.. Além disso, os FGF, enquanto fatores próangiogênicos, também têm vindo a ser implicados no fenômeno emergente de resistência à inibição do receptor-2 do fator de crescimento endetellal vascular 25 (VEGFR-2) [Bergers e Hanahan, W. Rev. Cancer 8, 592-603 (2008)].

[60S] Perfis oncogenômicos recentes de redes de sinalização demonstraram um papel importante para a sinalização aberrante de FGF na emergência de alguns cancers humanos comuns [Wesche et a/., .Bíocham. J. 437 (2), 199-213 (2011)]. A sinalização constitutiva de FGFR independente de 30 ligando foi descrita em muitos cânoers humanos, tais como câncer do cérebro,

4/265 câncer da cabeça e pescoço, câncer gástrico e câncer do ovário. Formas mutadas de FGFR, bem como transiocações intragênicas de FGFR₍ foram Identificadas em malignídades, tais como em doenças míeíoproliferativas. De um modo Interessante, as mesmas mutações descobertas como sendo a causa 5 de muitos distúrbios de desenvolvimento também são encontradas em células de tumorais (v.g., as mutações encontradas em aoondroplasia e dispiasia tanatofórica, que causam dimerlzaçãc e, deste modo, ativação constitutiva de FGFR-3, também são frequentemente encontradas em câncer da bexiga). Uma mutação que promove a dimerlzação é apenas um mecanismo que pode 10 aumentar a sinalização Independente do ligando a partir dos FGFR. Há outras mutações localizadas no Interior ou no exterior do domínio cinase de FGFR que pode alterar a conformação do domínio, dando origem a cinases permanentemente ativas, [009] A amplificação da região cromossómica 8p1f-12, a localização 15 genômlca de FGFR-1, constitui uma amplificação focal comum em câncer da mama e ocorre em aproximadamente 10% das cancers da mama, predominantemente em câncers positives ao receptor de estrogenic. As amplificações de FGFR-1 também foram descritas em carcinoma escamoso do pulmão de não pequenas células e foram encontradas, com um incidência 20 reduzida, em câncer do ovário, câncer da bexiga e rabdomiossarcoma. De igual modo, aproximadamente 10% dos câncers gástricos apresentam amplificação de FGFR-2, que está associada a câncers do tipo difuso de fraco diagnóstico. Além do mais, concluiu-se que múltiplos polimorfismos de nucleútidos individuais (SNP) localizados nos FGFR-1 a FGFR-4 estão 25 correlacionados com um risco aumentado de desenvolver câncers seletivos ou furam descritos como estando associados a um prognóstico fraco (v.g., ateio G338R de FGFR-4 em câncer da mama, câncer du cólon e adenocarcinoma do pulmão). O papel direto destes SNP para promover o câncer é ainda controverso.

[010] Resumidamente, foram efetuados diversos estudos á? v/trn e ?n vívo

5/265 que validam os FGFR1 a FGFR-4 como alvos importantes para câncer e descrições exaustivas resumiram estas conclusões [ver, por exemplo, Heinzle et a/., Expert Opte. Trter Targets 15 (7), 829-846 (2011); Wesche et a/,, S/bcto. J, 437 (2), 199-213 (2011); Greulich e Pollock, Trends te Mo/ecu/ar 5 Medfctee 17 (5), 283-292 (2011); Haugsten et a/., Mo/. Cancer Res. 8 (11), 1439-1452 (2010)]. Diversas estratégias foram seguidas para atenuar a sinalização aberrant© de FGFR-1 a FGFR-4 em temores humanos, incluindo anticorpos de bloqueio e inibidores de moléculas pequenas, entre outros. Há diversos inibidores de FGFR seletivos de moléculas pequenas que estão, no 10 presente, em desenvolvimento clínico, taís como AZD-4547 (AstraZeneca) e BJG-398 (Novartis).

[011] Não obstante os avanços significativos que têm geralmente vindo a ser alcançados em terapia contra o câncer nos anos recentes, existe uma necessidade constante para identificar novos compostos anti-câncer com 15 propriedades melhoradas, tais como uma potência superior, uma maior seletividade, uma toxicidade reduzida e/ou uma melhor tolerabilidade. Assim sendo, o problema técnico que se pretende resolver de acordo com a presente invenção pode ser visto como uma forma de proporcionar compostos alternativos que possuem uma atividade ínibitória das cinases de FGFR, 20 oferecendo assim novas opções terapêuticas para o tratamento de doenças mediadas por FGFR, em particular, de câncer e de outros distúrbios proliferativos, [012} Nos documentos WO 2007/061737-A2 e WO 2005/097800-A1 encontram-se descritos inibidores de cinase hetero~5,6~bicíclicos fendidos que 25 possuem um substituinte heteroarilo bicícíico com 9 ou 10 membros, respeotivamente. Foi referido que estes compostas são úteis para o tratamento de câncer e de outras doenças devido à sua ação ínibitória sobre as cinases mTOR (alvo mamífero de rapamicina) e/ou IGF-1R (receptor do fator da crescimento tal como insulina de tipo 1), Outras estruturas de matriz hetero-5,630 bicíclicas associadas á inibição de cinases encontram-se descritas, teter a/te,

6/265 nos documentos WO01/19828-A2, WO 2007/079164-A2 e WO 2010/051043Al, [013] Os derivados de 4-aminopirrolo(2_?1-f][1,2,4]triazina com pedis de inibição distintos contra diversas cinases proteicas encontram-se descritos.

infer a//a, nos documentos WO 00/71129-A1, WO 2007/056170-A2, WO 2007/081882-A2, WO 2007/064932-A2, WO 2009/136966-A1 e WO 2010/126960-Al.

[014] Nos documentos WO 2005,/121147-A1_; WO 2007/064883-A2 e WO 2007/064931 -A2< encontram-se descritas derivados de 4-aminopirrolo[2_t110 f][1,2,4]tnazína que contêm um grupo diarilureia substituído na posição 5_S coma tendo uma atividade inibitôria de FGFR1. No entanto, outras tircsina cinases receptoras, nomeadamente, as cinases VEGFR, PDGFR e Tie-2, também foram sígnlficatlvamente inibidas por esta classe particular de compostos. Uma vez que foi colocada a hipótese de tai atividade multi-cinase poder proporcionar 15 um aumento de efeitos secundários durante o tratamento, constitui o objetivo da presente invenção identificar novos agentes que apresentem uma seletividade melhorada para as cinases de FGFR, proporcionando assim novas opções para uma terapia contra o câncer mais tolerável.

[015] De um modo surpreendente, conclui-se agora que determinados 20 derivados de 4-aminopírrola[2,1-f][1,2,4]tríazina que possuem um resíduo benzotíofeno-2-ilo na posição 5 específicamente substituído exibem uma inibição potente e selective de cinases de FGFR, nomeadamente das cinases de FGFR-1 e FGFR-3, que torna estes compostos particularmente úteis para ο tratamento de distúrbios proíiferativos, tais como câncer e doenças tumorais.

[016] Assim, de acordo com um aspecto, a presente invenção diz respeito a derivados de 5-(1-benz0tiofeno-2-íl)-pirrolo[2,l-fH1Ã4]tnazina-4-amina 6,7dissubstituídos de fórmula estrutural (!)

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em que o símbolo FP representa hidrogênio, cloro, metito ou metcxi, o símbolo R² representa hidrogênio ou metoxl, desde que pelo menos urn dos símbolos R¹ e R^:; representa um grupo diferente de hidrogênio, o símbolo G¹ representa cloro, alquílo(C_rC₄), alcoxi(Cí~C₄)carbonilo, aza-heteroarilo corn 5 membros ou o grupo -C-H^-OR³, -CHs-NR^R^ ou OH>NR^;W·, em que o símbolo R³ representa hidrogênio, alquiloíC-rCÇ: cicloalquilofCsCg) ou fenilo, em que o referido alquilcfCrC,?) é facultativamente substituído com hidroxí, aícoxifCrC^), hidroxicarbonilo, alcoxiíCrC^-carbonlIo, amino, amínocarbonilo, mono-alguilfCvC^-aminocarboníic, di-aíquiífCi-C^-aminocarboniio, cicloalquilo(C₃-O_e) ou ate três átomos de flúor e

(lí) o referido cicloalqulío(CrCg) e facultativamente substituído com um ou dois substitutes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por aíquüoiOi -C₄), hídroxi e amino

2G e (iíi) o referido fenilo é facultativamente substituído corn um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por

8/265 flúor, cloro, bromo, ciano, trifíuorometiío, trifluorometoxí, alquilo(CrC<) e alcoxiCCrC^s o símbolo R⁴ representa hidrogênio ou alquiio(CrC₄), o símbolo R^& representa hidrogênio, alquíie(CvC4), aiquil(CrC4~ carbonílo, cidoaiquilo(CyC$) ou heterocicioaiquilo com 4 a 6 membros, em que o referido aíquilo(CrC4 é facultatívamente substituído com hidroxi, alcoxiCCvQ), hidroxicarbonilo, aicoxi(Ch-C^-carbonilo, aminocarbonilo, monoalquíl(C_; -C_á)-aminocarbonilo, di-alquil(C_; -Q^-aminocarbonlío ou cicloaíquilo(C₃C») e

(li) o referido cicloalquílo^Ce) é facultatívamente substituído com um ou dois substituintes selecionados índependentemente entre o conjunto constituído por alquíloCCrCá), hidroxi e amíno e

(iii) o referido heterocícloalquilo com 4 a 6 membros ê facuítativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados índependentemente entre o conjunto constituído por alquílo(C<~C₄), hidroxi, oxo e amino, o símbolo R^s representa hidrogênio, alquiloíCrC-ò, cicloalquílofCg20 C₆) ou heterocícloalquiio com 4 a 6 membros, em que o referido a1quiío(CrC4 é facultatívamente substituído com hidroxi, alcoxi(Ci~C₄), hídroxícarbonílo, alco.xi(C_rC₄)“Carboniío, amino, aminocarbonílo, monO“alquil(Ct~C₄)-amínocarbonilo, di-alquil(CrC4”amínocartx)nilo ou oícloalquiío(Cs~Cy) e

(li) o referido cicloalquiloíCs-Cí?) é facultatívamente substituído com um ou dois substituintes selecionados índependentemente entre o conjunto constituído por aíquiloCCi-C^), hidroxi e amino e

(iii) o referido heterocicloalquílo com 4 a 6 membros é

9/265 facultativamente substituído com um ou dois substítuintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por aiquilo(C-rC«), hidroxi, oxo e amine, ou os símbolos R⁴ e R^s ou R⁴ e R^?i respectivamente, são unidos e, consideradas em conjunto com o átomo de azote aa qual se encontram iígados, formam um anel heterocicíoaiquílo monocícíico, saturado, com 4 a 7 membros que pude conter um segundo heteroátomo no anel selecionada entre N(R^Z) e O, e que pode ser substituído nos átomos de carbono do anel com um 10 ou dois substítuintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(C^C4> oxo, hidroxi, amino e aminocarbonilo, e, em que o símbolo R'^? representa hidrogênio, alquiíoíCrC-ò, formiio ou alquil(CrC4~carbonilo e

o símbolo G representa cloro, ciano, alquilo(CrC4 ou o grupo CR^8AR^8B-OH, CHé-NRW⁰. C(-O)NR· 'R⁵² ou -CI-VOR·⁶·, em que os símbolos R^4A e R^$B representam urn grupo selecionado independentemente entre o conjunto constituído por hidrogênio, alquilo(Ct-C₄), ciciopropilo e cicicbutílo, o símbolo R⁴ representa hidrogênio ou alquilo(Cr€U)_s o símbolo R^K1 representa hidrogênio. alquiloCCrC^h aiquíl(CvC^) carbcnilo, cícloalquiioCCs-C^.ou heterucicloalquílu com 4 a 6 membros, em que o referido aiquílo(C_rC4 é facuttativamente substituído com hidroxi, amino, aminocarbonilo, mono-aíquiiCCrC^Faminocarbonilo ou dí-alquilCCh-C^25 aminocarbonilo e

(ií) o referido cicloaíquilo(CrC&) é facultativamente substituído com um ou dois substítuintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilofC-rCUh hidroxi e amino e

10/265 (Hi) o referido heterocícloalquilo com 4 a 6 membros é facultativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquíloCCrC*), hidroxi, oxo e amino, o símbolo R^r representa hidrogênio eu alquíloCCr^), o símbolo R'^s representa hidrogênio, alquíloCCrC^, ciclealquílofCr C_s) ou heterocícioalquilo com 4 a 6 membros, em que o referido alquíloCCrC*) é facultativamente substituído com hidroxi, amino, aminocarbonilo, mono-aíquilCCrC^-aminccarboniío ou di-alquil(CrC«) 10 aminocarbonilo e

(ii) o referido cicloalquilo(Cs-Cg) é facuttativamente substituído com um ou dois substitutes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por aiquiloCCrC*), hidroxi e amíno e

(Hí) o referido heterocícloalquilo com 4 a 6 membros é facultativamente substituído com um ou dois substitutes selecionados índependentemente entre o conjunto constituído por alquílo(CrC4. hidroxi, oxo e amíno.

ou os símbolos R^& e R'^c ou R^s; e R'^;\ respectivamente, são unidos, e considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontra ligados, formam um anel heterocíoloalquiío monocíclico. saturado, com 4 a 7 membros que pode conter um segundo heteroátomo no anel selecionado entre N(R;'R, 25 O, S e S(O)s, e que pode ser substituído nos átomos de carbono do anel com até três substitutes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por flúor, aiquilo(C_rC4< oxo, hídroxi, amino e aminocarbonilo, e, em que c símbolo R^1:s representa hidrogênio, aiquíio(C?-C4), cicioalquiloíQr 30 C₈)> formilo ou alquil(CrC4)~carbonilo

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o símbolo R^v> representa alquíloCGrC^, desde que o símbolo G' não represente cloro quando o símbolo G~ representa cloro ou ciano, [017] Os compostos de acordo com a presente Invenção também podem estar presentes sob a forma dos seus sals, solvates e/ou solvatos dos sais.

[Ô18] Os compostos de acorda com a Invenção são os compostos de fórmula estrutural (I) e seus saís_s solvates e solvatos dos saís, os compostos incluídos na fórmula estrutural (I) de fórmulas estruturais (IA), (I-B), (l-C), (l-D) e t0 (ΙΈ) referidos a seguir e seus sais, solvatos e solvatos dos sais, e os compostos Incluídos na fórmula estrutural (í) e referidos a seguir cerno produtos do processo e/ou exemplos de variantes e seus sais, solvatos e solvatos dos saís, no caso dos compostos incluídos na fórmula estrutural (I) e referidos a seguir não serem já sais, solvatos e solvatos dos sais.

[01S] Para os propósitos da presente Invenção, come sais refere-se, de preferência, os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de acordo com a invenção (por exemplo, ver S. M. Berge of a/., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Set 1977, 66, 1-19), Também são Incluídos saís que não sejam eles próprios adequados para utilização farmacêutica mas que possam ser 20 utilizados, por exemplo, para o isolamento ou purificação dos compostos de acordo com a invenção, [920] Os sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem sais de adição de ácido de ácidos minerais, ácidos carboxílicos e ácidos suifônícos, por exemplo, sais de ácido clorídrico, ácido bromidrico, ácido suifúrico, ácido 25 fosfórico, ácido metano-sulfónico, ácido etano-sulfóníco, ácido benzenosulfónico, ácido tolueno-sulfónico, ácido naftalenodíssuifónico, ácido térmico, ácido acético, ácida trlfluoroacético, ácido propíónico, ácido láctico, ácído tartárico, ácído málico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico e ácido benzoico, [021] Os sais farmaceuticamente aceitáveis também compreendem sais

12/265 d© bases convencionais, tais como, a título de exemplo e preferencial sais de metais alcalinos (por exemplo, saís de sódio e de potássio), sais de metais alcalino-terrcsos (por exemplo, sais de cálcio e de magnésio) e sais de amônio provenientes de amônía eu de aminas orgânicas, tais como, a título ilustrativo e preferencial, etilamioa, dietílamína, trietilamina, N,Ndiísopropíletilamina, monoeianolamína, dietanalamina, tnetanoiamína, dímetíiaminoetanal dietilaminoetanol, procaína, dicíoio-hexílamina, dibenzilamina, N-metilmorfolina, N-metílpiperidina, arginina, lisina e 1,2-etílenodíamina.

[022] No contexto da invenção, os solvates são designados como aquelas W formas dos compostas de acordo com a invenção que formam um complexo, no estado sólido eu líquido, por coordenação estequiométríca com moléculas de solvente. Os hidrates constituem uma forma específica de solvatos, em que a coordenação tem lugar com água. Os hidrates são os solvatos preferidos no contexto da presente invenção, [023] Os compostos da presente invenção podem, quer por natureza de centras de assimetria quer por rotação restringida, estar presentes sob a forma de isúmeros (enantiómeros, diastereómeros), Qualquer ísómero pode estar presente em que o centre assimétrico esteja na configuração (R), (S) ou (R,S). [024] Também é evidente que quando estão presentes dois ou mais 20 centros assimétricas nas compostas da invenção, são frequentemente possíveis diversos diastereómeros e enantiómeros das estruturas exemplificadas e que os diastereómeros puros e os enantiómeros puros representam variantes preferidas. Pretende-se que os estereaisómeros puras, diastereómeros puros, enantiómeros puras o suas misturas, estejam 25 abrangidos pelo âmbito da invenção.

[025] Os isúmeros geométricas par natureza de substituintes à volta do uma ligação dupla ou de um anel podem estar presentes sob a forma ais (» Z) ou trans (~ E), e ambas as faunas isoméricas estão abrangidas pela âmbito da presente invenção.

[026] Todos os isúmeros, quer sejam separados, puros, parcialmente

13/265 puros ou sob uma mistura racémíca, das compostos da presente invenção estão abrangidas pelo âmbito da presente invenção, A purificação dos referidos isómeros e a separação das referidas misturas isoméricas podem ser efectuadas por técnicas convencionais conhecidas na especialidade, Por 5 exemplo, as misturas díastereoméricas podem ser separadas nos isómeros individuais por meto de processos cromatográficos ou por cristalização e os racemates podem ser separados nos respectivos enantiómeros por processos cromatográficos em fases quirais ou por resolução.

[027] Além disso, de acorda com a presente invenção, todas as formas o tautoméricas possíveis dos compostos descritos antes estão incluídas.

[028] A presente invenção também compreende todas as variantes isotôpícas adequadas dos compostos de acordo com a invenção. Uma variante isotôpica de um composto de acordo com a invenção pretende designar um composto em que pelo menos um átomo no composto de acordo com a 15 invenção fui trocado por um outro átomo com o mesmo número atômico, mas com uma massa atômica diferente da massa atômica que ocorre usual ou predominantemente na natureza. Como exemplos de ísótopos que é possível incorporar num composto de acordo com a invenção refere-se aqueles de hidrogênio, carbono, azoto, oxigênio, flúor, cloro, bromo e todo, tais como Ή 20 (deutério), ³H (trítio), '³C, ^!''C, ^Í5N, ^VO, ^WO, *^ÔF, ^3SCI, ³²Br, ^;*Ί, ·³Ί, ‘^1 e ^ηΊ.

Variantes isotópicas particulares de um composto de acordo com a invenção, em particular aquelas em que um ou mais isotopes radioativos foram incorporados, podem ser benéficas, por exemplo, para a avaliação do mecanismo de ação ou da distribuição do composto ativo no corpo. Devida a 25 uma capacidade de preparação e detecção comparativamente mais fácil, os compostos marcados com isotopes ³H ou '”C são partlcularmente adequados para este propósito. Além disso, a incorporação de isótopos, por exemplo, de deutério, pode proporcionar benefícios terapêuticos particulares como consequência de uma estabilidade metabólica superior do composto, por 30 exemplo, uma extensão do período de semi-vida no corpo ou uma redução da

14? 265 dosa activa necessária. Tais modificações dos compostos de acordo com a invenção podem assim, em alguns cases, também constituir uma variante preferida da presente invenção. As variantes isotôpioas dos compostos de acordo com a invenção podem ser preparadas por processos conhecidos pelos 5 especialistas na matéria, por exemplo, pelos métodos descritos a seguir e os métodos descritos nos exemples de trabalho, através da utilização de modificações isotópicas correspondentes dos reagentes e/ou compostos de partida particulares.

[Ô2S] No contexto da presente invenção, os substituintes e resíduos 10 possuem os significados seguintes, salvo quando especificado de outro modo, [030] No contexto da invenção, alquiloíCyC») representa um radical alquila de cadeia linear ou ramificada que possui 1 a 4 átomos de carbono. A titulo de exemplo e preferencial, é possível referir: metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butile, iso-butilo, sec-butilo e terc-butiio.

[031] No contexto da invenção, aícoxi(C_rC4 representa um radical alcoxi de cadeia linear ou ramificada que possui 1 a 4 átomos de carbono. A título de exemplo e preferencial, é possível referir: metoxi, etoxi, n-propoxi, isoprapoxi, n-butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi e terc-butoxi.

[032] No contexto da invenção, meno-alquílíCvC^-amíno representa um 20 grupo amino com um substitute alquila de cadeia linear ou ramificada que contém 1 a 4 átomos de carbono. A titula de exemplo e preferencial, é possível referir: metllamino, etllamlno, n-propliamino, isopropilamino, mbutilamino e tercbutllamino.

[033] No contexto da invenção, dí~alguil(C_rCA-amina representa um 25 grupo amino cam dois substituintes alquila de cadeia linear ou ramificada, iguais ou diferentes, em que cada um deles contém t a 4 átomos de carbono. A título de exemplo e preferencial, é possível referir: Ν,Ν-dimetilamino, N,Ndletilamino, N-etil-N-metiiamino, N-metíl-N-n-propílamino, Nasoprapil-Nmetilamlno, N-isopropil-Nm-propilamíno, Ν,Ν-díisopropilamino, N-n-butíl-N30 metilamino e N-terc-butil-N-metilamino.

15/265 [034] No contexto da invenção, alquil(C_r 0«)-carbonilo representa um radical alquílc de oadeía linear ou ramificada que possui 1 a 4 atemos de carbono que está ligado à parte restante da molécula através de um grupo carbonilo [-0(-0)-]. A título de exemplo e preferencial, é possível referir: acetilo, 5 propionilo, n-butirílo, isobutirílo, n~pentanoílo e pivaloílo.

[Ô35] No contexto da invenção, alcoxifCrCd-carbonilo represente um radical alcoxi de cadeia linear ou ramificada que possui 1 a 4 átomos de carbono que está ligado à parte restante da molécula através de um grupo carbonilo que está ligado à parte restante da molécula através de um grupo 10 carbonilo (-C(^O)-]. A título de exemplo e preferencial é possível referir: metoxicarbonílo, etoxicarbonilo, n-propoxicarbonilo, íscpropoxicarbonilo, nbutoxicarbonilo e terc-butoxicarbonilo, [036] No contexto da invenção, monc-alouiKCrC^-aminocarbcnílo representa um grupo amino que está ligado à parte restante da molécula 15 através de um grupo carbonilo [-C(-O)-] e que possuí um substítuinte eiquilo de cadeia linear ou ramificada que possui 1 a 4 átomos de carbono.. A titulo de exemplo e preferencial é possível referir: metílamínocarbonílo, etílamínocarbonílo, n-propilamínocarbonilo, isopropiiaminocarbonílo, nbutiíaminocarbonilo e terc-butil-aminocarbonilo.

[Ô37] No contexto da invenção, di-alquihO_rCa-aminocarbonilo representa um grupo amino que está ligado à parte restante da molécula através de um grupo carbonilo e que possui dois substitutes alquilo de cadeia linear ou ramificada, iguais ou diferentes, em que cada um deles possui 1 a 4 átomos de carbono, A título de exemplo e preferencial é possível referir: N,N25 dimetííamino-carbonilo, Ν,Ν-díetílaminocarbonllo, N-etíl-N-metilaminocarbonilo, N-metil-N-n-propilaminocarboniío, N-isopropil-N-metílaminocarbonilo, N,Ndíisopropiiamino-carbonílo, N-n-butli-N-metílamínocarbonílo e N-terc-butií-Nmetilaminocarbonilo.

[038] No contexto da invenção, cíçloalquiloíCyCjs) representa um 30 carbocicio monooíclioo saturado que possui 3 a 6 átomos de carbono no anel

16/265

A título de exemplo, é possível referir cioloproplto, ciclobutllo, ciclopentílo e cíclo-hexílo. Como preferidos refere-se ciclopropílo e ciclobutílo.

[036] No contexto da invenção, heterocícioalquilo com 4 a 7 membros e heterooiclaalquílp corn 4 a 8 membros representam um heterociclo monociclico 5 saturado com 4 a 7 ou, respectivamente, 4 a 6 átomos no anel no total que contém um ou dois heteroátomos no anel, iguais ou diferentes, do conjunto constituído por N, O, S e S(OU e que pede estar ligado através de um átomo de carbono do anel ou através de um átomo de azoto do anel (se presente). É preferido um heterocicloaiquílo com 4 a 6 membros que contém um átomo de 10 azoto no anel e, facultatívamente, mais um heteroátomo no anel do conjunto constituído por N, O ou S(O)_a. É particularmente preferido um heterccicloalguilo com 5 ou 6 membros que contem um átomo de azoto no anel o, facultativamente, mais um heteroátomo no anel do conjunto constituído por N ou O, A título de exemplo, é possível referir: azetidinilo, oxetanüo, tietanilo, 15 pirrolldlnílo, pirazolidinilo, imidazolidiniio, tetra-hidrofuranilo, tiolanilo, 1,1dioxldotiolanilo, 1,2-oxazoiidinilo, 1,3-oxazolidinilo, 1,3-tiszolídíníio, piperidinilo, piperazinilo, tetra-hidropiraniio, tetra-hídrotiopiranilo, 1,3-dioxanilo, 1,4díoxanilo, 1,2-oxazinanilo, morfoliniio, tiomorfolinilo, 1,1-dioxidotiomorfolinilo, azepanilo, 1,4-diazepanilo e 1,4 oxazepanilc. Como preferidos refere-se 20 azetidinilo, pirrolidinilo, pirazolidinilo, imidazolidiniio, 1,2-oxazolidinilo, 1,3oxazolidinilo, piperidinilc, piperazinilo, 1,2-oxazinanilo, morfoíinilo e tiomorfolinilo. Como particularmente preferidos refere-se pirrolidinílo, piperidinilo, piperazinilo e morfoíinilo.

[040] No contexto da invenção, aza-heteroarii com 5 membros representa 25 um radical heterocíciico aromático (heteroaromático) que possível 5 átomos no anel no total, que contém pelo menos um átomo de azoto e, facultativamente, mais um ou dois heteroátomos no anei do conjunto constituído por N, O e/ou S, e que está ligado através de um átomo de carbono do anei ou, facultativamente, através de m átomo de azoto no anel (quando tal for 30 permitido pela Valencia). É preferido um aza-heteroariio com 5 membros que

17/265 contém um átomo de azote e mais um ou dois heteroátomos ao anel do conjunto constituído por N e/ou O. A título de exemplo, é possível referir: pirrolílo, pirazoliio, imidazoliío, oxazclilo, tíazolilo, isoxazolílo, isotlazolilo, tríazoiílo, oxadíazolilo e tíadiazolilo. Como preferidos refere-se pirazoliio, 5 imidazoliío, oxazolilo, Isoxazolílo e oxadíazolilo, [041] No contexto da Invenção, um substituinta cxo representa um átomo de oxigênio que está ligado a um átomo de carbono através de uma ligação dupla.

[Ô42] No contexto da presente invenção, para todos os radicais que 10 ocorrem diversas vezes, o seu significado é independente entre si. Caso os radicais nos compostos de acordo com a invenção sejam substituídos, então os radicais podem ser mono- ou poli-substituídos, salvo quando especificado de outro modo, É preferida uma substituição com um ou com dois ou três substitutes iguais ou diferentes. É particularmente preferida uma substituição 15 com um ou com dois substitutes iguais ou diferentes.

[043] De acordo com uma variante preferida, a presente Invenção diz respeito a compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo R^! representa cloro, metilo ou metoxi, o símbolo R^a representa hidrogênio ou metoxi, o símbolo G' representa cloro, alquiloCCi-Q). alcoxí(Ci-C4-carboníio ou aza-heteroarílo com 5 membros selecionado entre o conjunto constituído por pirazoliio, imidazoliío, oxazclilo, isoxazolilo e oxadiazoliío, ou representa o grupo -CH₃~OR³ ou -CH₂-NR⁴R⁵, em que o símbolo R^;í representa hidrogênio, alquilofC-rC^ ou cicloalquilofCa25 Cs), em que o referido alquilo(CrC4 é facultatívamente substituído com hidroxi, alcoxiíCrCó), hidroxícarbonilo, aicoxiCCrC^-carbonilo, amíno, amínocarbonilo, cicloalquilo(C₃-C_s) ou até três átomos de flúor, o símbolo R⁴ representa hidrogênio ou alquilo(CvC4<

o símbolo R* representa hidrogênio, alquilo(Ci-C^), aíquil(CrC.â~

18/265 carbonilo, cidoalquilo(C₃-C₈) ou heterocicloalquile com 5 ou 6 membros, em que o referido alquiío(CrC4 é faoultativamente substituído com hidroxi, hidroxicarbenilo ou cícloaíquiloíCs-Cg) a

(it) o referido heterociclealqullo com 5 ou 6 membros é facultativamente substituído cem oxo ou os símbolos R⁴ e R^?J são unidos e_; considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocicioaiquilo monocícbco, saturado, com 4 a 6 membros que pode contar um segunda heteroátomo no anel selecionado entre N(R^Z) e Q, e que pode ser substituído num átomo de carbono do anel com oxo ou hidroxi, e em que o símbolo R’ representa hidrogênio ou alquilofCrCx) a

o símbolo G^:? representa cloro, ciano, alquilo(CrC4 ou o grupo CR*^aR^&~-QH, CHs-NFW⁰, C(~O)NR^R^!S ou -CH_a-OR^\ em que os símbolos R⁸* e R^3S representa um grupo selecionado Independeníemente entre o conjunto constituído por hidrogênio, alquilo(CrC4 20 e cíclopropila, o símbolo R⁴ representa hidrogênio ou motile, o símbolo R'³ representa hidrogênio, alquílo(CrC4> alquil(CvC4“ carbonilo, cícioalquilo(C₃G&) ou heterocicioaiquilo com 5 ou 6 membros, em que o referido alquilo(CrC4 è facultativamente substituído com hidroxi ou aminocarbonllo e

(ii) o referido heterocicioaiquilo com 5 ou 6 membros é facultativamente substituído com oxo, o símbolo Rⁿ representa hidrogênio ou metiio,

19/265 o símbolo R’² representa hidrogênio, alquilu(C_rC4, cicíoalquiloCCsC<0 ou heterocicloalquilo com 5 ou 6 membros, em que o referido alquílo(CrC<ú é facultatívamente substituído com hidroxí e (ií) o referido heterocíclealquilo com 5 ou 6 membros é facuitatívamente substituído com oxo, ou os símboios R^& s R?^c ou R'^; e R’^s, respectivamente, são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azote ao quai se encontram 10 ligados, formam um anel heterocíclealquilo monocíclico, saturado, com 4 a 6 membros que pode conter um segundo hateroátomu no anel selecionado entre N(R'³), O, S e S(O)₂< e que pode ser substituídos nos átomos de carbono do anel com até três substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por flúor, alquiloCCi-G^, oxo, hidroxí, amino e 15 amínocarbonilo, e em que o símbolo R’³ representa hidrogênio, aiquilofCrC*), uiclopropilo, cicíobutilo, formilo ou alquil(CrC4-carbonilo e

o símbolo R’⁵ representa metiío ou etiío, desde que quando o símbolo G' não represente cloro então o símbolo G^;? representa cloro ou ciano.

[044] De acordo com uma variante particularmente preferida, a presente invenção diz respeito a compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo R¹ representa metiío, o símbolo R² representa metoxi, o símbolo G' representa metílo, oxaz.ol-5-ílo ou o grupo -CH₂-OR³ ou ~CH₂-NR⁴Rú em que o símbolo R⁵ representa hidrogênio, aiquilo(C'-C₄), cicíepropilo ou ciclobutilo, em que o referido alquiIo(C_rC4 é facultativamente substituído com

20/265 hidroxi, metoxi, etoxi, hídroxicarbonilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, amino, aminocarboníio, ciciopropiio, ciclobutílo ou até três átomos be floor, o símbolo R⁴ representa hidrogênio, metilo ou etílo, o símbolo R² representa hidrogênio, alquílofCi-C®, acetilo, oiclopropilo, cicíobutilo ou 2-oxopirrolidina-3-ílo, em que o referido alquilo(CvC4 é facultativamente substituído com hidroxi, hídroxicarboniíc, clclopropílo ou ciclobutílo, ou os símbolos R⁴ e R² são unidos e, considerados em conjunto com o W átomo de azote ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocícioaíquilo monocíclico, saturado, com 5 ou 6 membros, que pode conter um segundo heteroátomo no anel selecionado entre NH e O, e que pode ser substituído num átomo de carbono do anel com oxo ou hidroxi e

o símbolo G² representa metilo ou o grupo -CR^R^OH, CH₂NR°R^W ou C{-O)-NRⁿR*³, em que os símbolos R^2A e R²⁸ representam, de um modo independente, hidrogênio ou metilo, o símbolo R² representa hidrogênio, o símbolo R¹⁰ representa hidrogênio, aiquiio(CrC4), acetíio, clclopropílo, ciciobutílo ou 2-oxopirroiidina-3-ilo.

em gue o referido alquilofCi-C^) é tacultatívamente substituído com hidroxi ou aminocárbonilo, o símbolo R'' representa hidrogênio ou metilo, o símbolo R’³ representa hidrogênio, alquíio(C<~C4. clclopropílo, ciclobutilo ou 2~uxopírrclidina-3~ilo, em que o referido alquilo(CrC4 é facuitatívamente substituído com hidroxi, ou os símbolos R² e R^w ou R’“' e R¹², respectivamente, são unidos 30 e, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram

21/265 ligados, formam um anel heterocicloalquilo monocícíico, saturado, com 4 a 6 membros que pode conter um segunde hetercátomo no anel selecionado entre N(R'³), O e S(OU e que podem ser substituído nos átomos de carbono do anel com até três substituintes selecionados independentemente entre o conjunta 5 constituído por flúor, metilo, oxo, hídroxi, amino e aminocarbonito, e em que o símbolo R⁵³ representa hidrogênio, formilo ou acetilo.

[045] De acordo com uma variante distinta, a presente invenção diz respeito a compostos de fórmula estrutural (l)< em que o símbolo R’ representa metilo s

o símbolo R^:í representa metoxi.

[045] De acordo com uma outra variante distinta, a presente invenção diz respeito a compostos de fórmula estruturai (I), em que o símbolo G¹ representa o grupe ~CH_;rOR³, em que i5 o símbolo R³ representa hidrogênio ou alquilo(CrC<0 facultativamente substituída com hídroxi. metoxi, amina, amínocarbonilo ou ate três átomos de flúor, [047] De acordo com outra variante distinta, a presente Invenção diz respeito a compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo G¹ representa o grupo -CH^NR^R³, em que o símbolo R' representa hidrogênio ou metilo, o símbolo R³ representa alquílo(CrC<4, acetilo, cicloprupiío, ciclobutílo ou â-oxopirrolidina-S-ilo, em que o referido alquilo(CvC₄) é facultativamente substituído com 25 hídroxi, ou os símbolos R⁴ e R⁵ são unidos e, considerados em conjunta cam a átama de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocícloalquilo monocícíico, saturado, com 5 ou 6 membros que pode conter 30 um segundo heteroátcmo na anel selecionado entre NR e O, e que pede ser

22/265 substituído num átomo de carbono do anel cem oxo ou hidroxl [048] De acordo com outra variante distinta, a presente invenção diz respeito a compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo G^s representa o grupo -CHrNR^ííR^K\ em que o símbolo FÉ representa hidrogênio, o símbolo Α’^δ representa acetiio ou 2-oxapirroiidina-3~ifo, ou os símbolos FÉ e R'^c são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azote ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocicloalquilo monocíclíce, saturado, com 5 ou 6 membros que pode conter um segunda heteroátomo no anel selecionado entre N(Rⁿ) e O, e que pode ser substituído nos átomos de carbono do anel com até dois substítuíntes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por metilo, oxo, hidroxi e amino, e em que o símbolo R’³ representa hidrogênio, formílo ou acetiio.

[049] Ainda de acordo com outra variante distinta, a presente invenção diz respeito a compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo G² representa o grupo -C(~O)~NR‘ 'R'², em que o símbolo FÉ' representa hidrogênio, o símbolo Fɲ representa alquilo(CrC4 ou 2-oxcpirrolidina-3-ilo, em que o referido alquílofCrQ) é facultativamente substituído com hidroxi, ou os símbolos R^r e R'² são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azote ao qual se encontram ligadas, formam um anal heterocicloalquilo monoaíclico, saturado, com 4 a 6 membros que pode conter um segundo hetercátomo no anel selecionado entre NH e O, e que pode ser substituído num átomo de carbono do anel com oxo ou hidroxi.

[0501 De acordo com uma variante particularmente preferida, a presente invenção diz respeito a compostos de formula estrutural (I), em que

23/265 o símbolo R⁵ representa metilo, o símbolo R² representa metcxi, o símbolo G^! representa o grupo -OHrORí em que o símbolo R³ representa alquílo(CrC4 faoultatívamente substituído cem hidroxi, amíno ou aminocarbonilo e

o símbolo G² representa o grupo CHs-NR^R^ ou C(~O)~NR^<!R^!Í·, em que o símbolo R” representa hidrogênio, o símbolo Rrepresenta 2'Oxopírrolídína-3-ilo_> ou os símbolos R⁸ e R'° são unidos e, considerados em conjunto aim o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel piperazína-1 -ilo,

3-oxapíperazina-1~ílo ou 4-acetiípíperazina~l--iío, o símbolo Rⁿ representa hidrogênio, o símbolo R^ÍS representa 2*oxopirrolidina-3>ílo, ou os símbolos R'⁵ e R'~ são unidas e, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligad.es, formam um anel 320 hídroxíazetidina-1 -Ho, 4~hidroxípiperídina-l -íIo ou 3-oxopiperazina-1 -Ho.

[GS1] As definições dos resíduos indicadas especificamente nas respectivas combinações ou combinações preferidas de resíduos também são substituídas consoante desejado por definições de resíduos de outras combinações, índepsndentemente das combinações particulares indicadas 25 para es resíduos, São partícularmente preferidas combinações de dois ou mais dos intervalos pretendas supramencíonados, [052] Qs compostos de fórmula estrutural (I) podem ser preparados através de diversas vias de síntese, as quais são principalmente governadas pela natureza dos grupos G' e G² particulares selecionados (ver definições em 30 cima).

24/265 [053] Assim, de acordo com outra variante, a presente invenção diz respeito a um processo para a preparação dos compostos de fórmula estruturai (I), caracterizado por [A] se fazer reagir, em primeiro lugar, uma 4-amlnopirrolo[2,15 tJH ,2,4)~triazlaa 6-substituída de fórmula estrutural (II)

em que o símbolo R³ possui o significado descrito antes, com formaldeído e com uma amina de fórmula estruturai (III)

em que os símbolos R⁹ e R'⁹ possuem os significados descritos antes, na presença de um ácido para se obter um composto de fórmula estrutural (IV)

em que os símbolos R³, R⁹ e R’⁹ possuem cs significados descritos antes, e depois se submeter a reação de bromação para se obter um composto de fórmula estrutural (V)

25/265

em que es símbolos RR R'· e R^!V possuem os significados descritos antes, e_s subsequentemente, se acoplar com um boronato de benzotiofeao2-ilo de fórmula estrutural (Vi)

em que os símbolos R' e R² possuem os significados descritos antes e

os símbolos R'⁴ representam hidrogênio eu alquilo/CvC^ ou ambos os resíduos R’⁴ estão ligados em conjunto para formar uma ponte (CH_g)₂, C(CH₃)₂*C(CH₃)g-, -(CHsXr, -CH_â'C(CH₃)₂~CHg- ou -C(~O)-CH₂-N(CH₃)-CHgC-UOh na presença de um catalisador de paládio e uma base para se obter o composto desejado de fórmula estrutural (IA)

26/265

em que os símbolos R\ R², R³, R⁹ e R^w possuem os significados descritos antes, ou [B] se submeter, em primeiro lugar, a uma reação de formilação uma

4-amínopírmlo[2,1,2,4]tnazina 6-substituída de fórmula estrutural (II)

em que o símbolo R³ possui o significado definido antes, com Ν,Ν-dímetílformamida na presença de cloreto de fosforilo oara se obter um aldeído de fórmula estruturai (VII)

em que o símbolo R³ possui o significado definido antes, e depois se submeter a uma reação de bromação para se obter um composto de fórmula estruturai (VIII)

27/265

em que e símbolo R³ possui o significado definido antes,

e. subsequentemente, se acoplar com um boronato de benzotlofeno2-ílo de fórmula estrutural (VI)

em que os símbolos R\ R² e R^Vt possuem os significados descritos antes, na presença de um catalisador de paládio e de uma base para se obter um composto de fórmula estrutural (IX)

(IX), em que os símbolos R\ R² e R² possuem os significados descritos antes, o qual é então [8-1] submetido a uma reação com uma amína de fórmula estrutural

28/265 (IH) ^R³

HN' ^R” (Hl)_s em que os símbolos R⁸ e R'° possuem os significados descritos antes, na presença de um ácido e de um agente redutor para se obter o composto desejado de fórmula estruturai (ΙΑ)

em que os símbolos R\ FV; R³, R⁸ a R'° possuem os significados descritos antes, ou [B~2] submetido a oxidação para se obter um ácido carboxilico de fórmula estrutural (X)

29/265

(X).

em que os símbolos R\ R² e R³ possuem os significados descritos antes, e, per ultima, acoplado a uma amina de fórmula estrutural (XI) em que os símbolos Rⁿ e R'² possuem os significados descritos antes a presença de um agente de condensação para se obter o composto desejado de fórmula estrutural (IB)

em que os símbolos R\ R^s, R³, R'' e R^í2 possuem os significados descritos antes,

30/265 ou [C] se submeter, em primeiro lugar, a acoplamento uma 4amino-5brbmopirrolQ[2,1-f][l,2,4]triazina 6-substltuída de fórmula estrutural (XII)

com um boron ato de benzoticfeno-2-ilo de formula estrutural (VI)

em que os símbolos R\ R³ e R^u possuem os significados descritos antes, na presença de um catalisador de paládio e de uma base para se obter um composto de fórmula estrutural (XIII)

am que os símbolos R' e R^s possuem os significados descritos antes, e depois se fazer reagir com formaldeido e cam uma amioa de formula estrutural (III) .R^s

31/265 em que os símbolos R⁹ e R'³ possuem es significados descritos antes, na presença de um ácido para se obter o composto de fórmula estrutural (l-C)

em que os símbolos R⁵, R², R² e R’³ possuem os significados descritos antes, o qual é subsequentemente [C-1] submetido a oxidação para se obter um aldeido de fórmula estrutural (XIV)

em que os símbolos R\ RR R^s e R'° possuem os significados

32/265 descritos antes, e tratado com uma amina de fórmula estrutural (XV)

R⁴ hnF (XV), em que os símbolos Ft⁵ e R^fí possuem os significados descritos antes, na presença de uni ácido e de um agente redutor para se obter o composto desejado de formula estrutural (ID)

em que os símbolos R\ RÈ R⁴, R'\ R⁹ e R^ta possuem os significados descritos antes ou [C-2] submetido a conversão no correspondente derivado 6(halometilo) de fórmula estrutural (XVI)

33/265

em que os símbolos R’, R^?, FV* e R^n> possuem os significados descritos antes o símbolo X representa cloro, bromo ou iodo.

e tratado com um álcool de fórmula estruturai (XVII) (xvH), em que os símbolo R^3A possui o significado do símbolo R³ taí como descrito antes excepto para hidrogênio, na presença da uma base para se obter o composto desejado de fórmula estrutural (l-E)

34/265 em que os símbolos R’, R\ R^3A, R'^s e R'° possuem os significados descritos antes, sendo facultativamente seguido, se adequado, por (i) separação dos compostos de fórmula estrutural (I) assim obtidos nos seus respectivos 5 enantiómeros e/ou diastereómeros, de preferência, utilizando métodos oromatográficos, e/ou (li) conversão dos compostos de fórmula estruturai (I) nos seus respectivos hidratos, solvatos. saís e/ou hidratos ou solvates dos sais por tratamento com os correspondentes solventes e/ou ácidos ou bases.

Cada um dos compostos de fórmulas estruturais (l~A), (l-B), (l-C), (í10 D) e (l-E), que podem ser preparados peios processos descritos antes, representa um subconjunto particular de compostos de fórmula estrutural (I). [054] Os passos de processo [A] (li) (IV) e [C] (Xllí) (l-C), que representam reações de aminometilaçâo de tipo Manních, são efectuadas da forma habitual por tratamento do respectivo composto de partida com uma 15 mistura de formaldeido aquoso e componente amina (ill), na presença de um catalisador ácido, tal como ácido fórmico ou ácido acético. De preferência, o ácido acético é utilizado como catalisador e solvente. De um modo geral, a reação é efectuada a uma temperatura compreendida entre +20°C to *8{FC. [ÔS5] Como agente de bromação para os passos de processo [A] (IV) (V) e (8] (VII) (VIII), utiliza-se, de preferência, N-bromo succínímida (NBS), 1,3-dibromo-5_;5-dímetíi~hidantoina (DBDMH) ou bromo elementar. De um modo geral, as reações são efectuadas num solvente inerte, tal como diciorometano, clorofórmio, tetra-hídroturano, acetonitrile ou N,N~dimetilformamida (DMF), a uma temperatura compreendida entre -78^<;C e +20*0.

[056] As reações de acoplamento [A] (V) ·*· (VI) --> (l-A), [8] (VIII) * (VI) >

(IX) e [C] (XII) I- (VI) · > (XIII) (“acoplamento da Suzuki-Míyaura] são normaimente efectuadas num solvente inerte com o auxílio de um catalisador de paládio e uma base aquosa. Como catalisadores de paládio adequados para este propósito refere-se, por exemplo, acetato de paládio(ll), cloreto de 30 paiádio(ll), cloreto de bis-(tritenilfosfina)-paládio(li), cloreto de bis-(acetonitrifo)

35/265 paládío(H), cloreto e [l,1'-bis-(dífenilfosfino)-ferroceno]-paiádio(H), tetraquis(tnfenilfosfina)--paíádio(O), bís~(dibenziíidenoaoetona)-paíádio(0) e tris(díbenzIídenoacetonal-dipaládioCOj, facuitativamente em combinação com outros lígandos de fosfina, tais conto, por exemplo, 2-dieiclo-hexilfosfino-2^!,4^!,6^!· triisopropiibifenilo (X-Phos), 2-dicicio~hexii-fosfino-2'_f6’dimetoxibifeniio (SPhos), 4,5-bis-(difenilfosfino)~9,9~dimetilxanteno (Xantphos) ou 4-(ditercbutilfosfino)-N,N-dimetilanílína, Também é possível utilizar pré-catalisadores de paládio, a partir dos quais a espécie cataiitíoamente activa é gerada sob as condições de reação, tais oomo (2+amínobifenil-2-íl)-(cluro)-paládio-didclc·· 10 hexii-CaiéÇe^triisopropiibifenil-S-il)-fosfina [ver, por exemplo, S. Kotha eí a/„

Tetrahedron 58, 9633-9695 (2002): T. E. Barder et a/., V Am, Cbem.. Soo. 127 (13), 4685-4696 (2005): S. L Buchwald et a/., J. Am. Chem. Soe. 132 (40), 14073-14075 (2010), e outras referências aí citadas].

[657] Como bases adequadas para tais reações de acoplamento refere15 se, em particular, carbonates de metais alcalinos, tais como carbonato de sódio, de potássio ou de césio, fosfates de metais alcalinos, tais como fosfato de sódio ou de potássio, ou flucretos de metais alcalinos, tais como fluoreto de potássio ou de césio. Normalmente, tais bases são utilizadas como soluções aquosas. As recações são efectuadas em solventes orgânicos que são inertes 20 sob as condições de reação. De preferência, são utilizados solventes orgânicos miscíveis em agua, tais oomo 1,2-dimetoxietano, tetra-hidrofurano, 1,4dioxano, acetonitrile, N,N'dimetilformamida (DMF) ou sulfóxido de dimetiio (DMSO), embora também possam ser utilizados outros solventes Inertes, tais como diclorometano ou tolueno.

- 25 [058] O passo de processo [B] (H) ···> (VII) [“formiiaçâo de VilsmeierHaack”] é efectuado da forma habitual por tratamento da pirrolotriazina (H) em solvente Ν,Ν-dimetilformamlda (DMF) com cloreto de fosforiío. De um modo gerai, a reação é efectuada a uma temperatura compreendida entre 0°C e +86°C.

3G [059] Como agentes redatores adequados para as reações de aminação

36/255 redutoras [8-1] (IX) + (Hi) ···> (PA) a [Cl] (XIV) 4- (XV) -> (l-D) refere-se os borohidratas de metais alcalinos habituais, tais come boro-hidreto de litio, borohidrato de sódio, boro-hidreto de potássio, cianoboro-hldreto de sódio ou triacetoxiboro-hidreto de sódio. De um modo gerai, as traostormaçóas sâo efectuadas na presença de urn ácido, de preferência, ácido acétiou, num solvente álcool ou éter, tal como metanol, etanol, isopropanol, tetra-hidrofurano ou 1.4-dioxano, a uma temperatura compreendida entre 0°C e +80°C, em função da reatividade dos componentes amina (III) e (XV), respectivamente, e/ou do boro-hidreto particular utilizado, [0603 Para a reação de oxidação no passo de processo [B-2] (IX) (X), a oxidação com clorito de sódio na presença de um depurador de hipotíorito, tal como 2metil-2-buteoo, constitui o método de eleição [ver, H. W. Pinniok et a/„ Tetrahedron 37, 2091-2396 (1981); A. Raach e O. Reiser, J, Prakt. Chem. 342 (6), 605-608 (2000), e referências aí citadas]. De um modo geral, a reação é efectuada numa mistura de tetra-hidrofurano/água, a uma temperatura compreendida entre 0°C e a temperatura ambiente.

[0811 Como agentes de condensação adequados para o passo de processo [B-2] (X) 4- (XI) > (i-B) [formação de amide] refere-se, por exemplo, carbodiimidas, tais como N_?N^:-díetil-, Ν,Ν-dípropik Ν,Ν'-díisopropil, N,N’dicíclo-hexil-carbodiimida (DCC) ou N~(3-dímetílaminopropil)-N^!-stilcarbodiimids (EDO), derivados de fosgénio, tais como N,N^!--carbanildiimidazoie (GDI) ou cioroformato de isobutilo, a-cloroenaminas, tais como l-cloro-2-meti!-1dímetilamíno-1 -propeno, compostos de fósforo, tais como anldrido propancfosfónico, oianofosfonato de dietilo, cloreto de bís-(2-cxo-3oxazcíidinil)-fosforilo, hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris(dimetiiamino)-fosfónio (BOP) ou hexafluorofosfato de benzotriazol-1-ilcxitris-(pírruíidino)-fosfónio (PyBOP), e compostos de urónio, tais como tetrafluoroborato de O-Cbenzotriazol-l-iQ-N^^iN’-tetrametH-uronic (TBTU), hexafluorofosfato de Ο-φοηζοΙηίΐζοΙΊ-^-Ν,Ν,Ν',Ν’-ΐούβίηοΙίΙ-υΐΌηΙο (HBTU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo~1-(2H)~piridil)~1,1_í3,3-tetrametÍI-urónio (TPTU),

37/265 hexafluorofosfato de O-(7~azabenzotriazol-1 -il)-N,N,NjNMetrametíl-urónio (HATU) ou tetrafiuoroborato de 0-(1 H-6-ciorobenzotriazol-1 -11)-1.1,3,3tetrametlí-urónio (TCTU), es adequado ern combinação com outros auxiliares, tais como t-hidroxibenzotriazole (HOBt) ou N-hidroxi-succinímida (HOSu), e/ou 5 bases, tais como carbonates de matais alcalinos, por exemplo, carbonato de sódio ou de potássio, ou amines orgânicas, tais como triatílamina, N~ metilpiperidina, N-metilmorfolina (NMM), N,N~diisopropiletilamina (DiPEA), pirídina ou 4~N,N~dimetilaminopíridina (DMAP), É preferida a utilização de hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazoM -ii) N,N_!N^Í,Nⁱ~tetrametil-urónio 10 (HATU) ou de tetrafiuoroborato de O-(benzotriazol~1-il)-N_;N,N^!,Nⁱ~tetrametilurónio (TBTU), em combinação com N,N~diisopropiIetiíamina (DIPEA) e, facuitativamente, 1-hidroxibenzotriazole (HOBt), [062] Como solventes inertes para o passo de processo [B-2] (X) -τ (XI) (i-B) refere-se, por exemplo, éteres, tais como éter díetílico, éter terc-butil15 metílico, tetra-hidrofurano, 1,4-dloxano ou 1,2-dimetoxietano, hidrocarbonetos, tais como benzene, toluene, xileno, hexano ou ciclo-hexano, hídrocarbonetos haiogenados, tais como dicíorometano, tricíorometano, tetracloreto de carbono, 1,2-dicloroetano, triclometileno ou olorobenzeno, ou outros solventes, tais como acetone, acetonitrilo, acetato de etilo, píridina, sulfóxldo de dimetilo (DMSO), 20 Ν,Ν-dimetilformamída (DMF),. N_sNMimetiíprupilenmureÍa (DMPU) ou Nmetilpirrolidinona (NMP). Também é possível utiiizar misturas destes solventes. É preferida a utilização de dicloromatano, tetra-hídrofurano, N,N~ dimetiíformamida ou suas misturas. De um modo geral, as reações são efectuadas a uma temperatura compreendida entre 0°C e *60°C e, de 25 preferência, entre *10°C e 4-40°C.

[063] Como agentes de oxidaçâo que são capazes de converter o álcool primário (PC) no aldeído (XIV) (processo [Cl]) sob condições suaves refere-se 1,1,Mriacetoxi-1,1-di“hidro~1,2-benziodaxol-3(1H)’Ona (periodinano de DessMartin”), 2,2,6,6tetrametilpiperidina~1Oxilo (TEMPO) em combinação com 30 oxidardes secundários, tais como lodosobenzeno-l,l-diacetato ou hipoclorito de

38/265 sódio, e sistemas de oxidaçâo com base em suifóxide de dímetíio (DIVISO), tais cerne DMSO/anidrído trifluoroacétíco ou DMSO/N,N’-diciclo-hexilcarboclHmida (DCC). É preferida a 1,1,1-ΐπΗ0β1οχί-1₍1-άί-ΗΙάω-1,2^βηζίοάοχοΙ-3(1Η)-οπΗ, De um modo geral, a reação è efectuada num solvente inerte, de preferência, 5 utilizando diclorometano, [064] Para a transformação de hidmxi em halogêneo no passo de processo [C-2] (l-C) (XVI), ê possível utilizar diversos métodos convencionais, os quais são bem conhecidos na especialidade. Os reagentes escolhidos são cloreto de tionilo [para X ~ Cl], tetrabmmometanoãrifenilfosfína 10 [para X ~ Br] e iodo/trifenilfosfina [para X - I], A preparação de derivados de 6~ (clerometilo) (XVI) [X ·= Cl] é preferida por razões de conveniência de processamento e de estabilidade do composto.

[065] Como bases adequadas para o passo de processo [02] (XVI) + (XVII) (I-E) (formação de éter] refere-se, em particular, carbonates de metais alcalinos, tais como carbonato de lítlo, de sódio, de potássio ou de césio, acetates de metais alcalinos, tais como acetato de sódio ou de potássio, ou bases de amínas terciárias convencionais, tais como trietilamina, Nmetilmodolína, N-metilpiperidina, Ν,Ν-díisopropiletilamína ou piridina. E preferida a Ν,Ν-díisopropíletilamina (DIPEA). A reação (XVI) + (XVH) (l-E) é 20 efectuada em um solvente inerte, tal como tetra-hidrofurano, ou na ausência da solvente, utilizando um excesso do álcool (XVH), a uma temperatura compreendida entre 4-2g»c e r200°C e, de preferência, entre «·50°0 e -M50^GC< De um modo vantajoso, a conversão é efectuada num reactor de micro-ondas, [666] A sequência de reação (IC) ···> (XVI) ····> (l-E) pode ser efectuada em 25 dois passos em separado, isto é, com isolamento e purificação do composto intermediário (XVI), ou então pode sor efectuada utilizando um procedimento de passa único, isto é, utilizando o intermediário Impuro (XVI), tal como obtido na reação de preparação, [867] Nos casos em que um resíduo amina primária ou secundário faz 30 parte do grupo G' ou G² nos compostos desejados de fórmula estrutural (I),

39/265 então, algumas vezes, poderá ser adequado nas reações de preparação descritas antes utilizar um derivado protegido dessa amina como componente de reação em vez da amina livre. Para tal propósito, é possível utilizar grupos protectores de amino temporários convencionais, tais como grupos aciío (v.g., 5 aoetilo ou trífluoroacetllo) ou grupos protectores de tipo carbamate (v.g., um grupo Boc, Cbz ou Fmoc). De preferência, utiliza-se um grupo Boc (tercbutexicarbonilo). De igual modo, uma funçáo hidroxi que faz. parte do grupo Q¹ ou G² pode ser temporariamente bloqueada em compostos precursores e intermediários de processo, por exemplo, como um éter de tetra-hídroplranllo 10 (THP) ou como um derivado de éter silílico, tal como um éter trimetilsílíiico ou éter terc-butildimetllsilílico, [068] Tais grupos protectores podem então ser clivados concomitantemente durante os procedimentos de processamento aquoso e de purificação, ou então podem ser removidos num passo de reação em separado 15 subsequente, utilizando métodos convencionais bem conhecidas na especialidade. De igual modo, a preparação de tais intermediários protegidos a partir de aminas ou álcooís livres correspondentes é facilmente alcançada utilizando os procedimentos gerais descritos na literatura [ver, por exemplo, T, W. Greene e P. Wuts, Protective Groups tn Organic Synthesis, Wiley, New 26 York, 1999L (069] Há determinados tipos de derivados de amina protegidos (isto é, aciiados) que exercem uma atividade de inibição de FGFR significativa por si sós. Assim sendo, tais compostos também estão abrangidos pela fórmula estruturai (I), tal como definida antes.

' 25 [070] A preparação dos compostos da invenção pode ser ilustrada através dos seguintes esquemas de reação. Esquema 1

40/265

41/265

42/265

Esguema,3

GaW»dcr da Fd / base

43/265

AcOH

X

R ^υ

H₂C“O

44/265 [071] As 4-amínopírroía[2,1~f][1,2₅4]triazinas 6-substltuídas de fórmula estrutural (II) podem, por exemplo, ser preparadas por duas vias diferentes, as quais são apresentadas no esquema 5 infra, Na primeira via, converte-se a 4amino-6-cianopirroio[2,1~f]í1,2,4]tnazina (XVIII) no éster (XIX) por alooólíse 5 mediada por ácido e depois reduz-se para se obter o composto 6(hidroximetilo) (Ila) [R³ em (II) ~ H], utilizando trietilboro-hidreto de lítío. Uma transformação convencional na correspondente 6-(halometil)-plrrolotriazina, tal como o composto cloro (XX), seguida por tratamento com um álcool de fórmula estrutural (XVII) na presença de uma base proporciona facilmente os derivados 10 éter de fórmula estrutural (lib) [R³ em (II) * Η], A preparação do composto de partida (XVIII) foi descrita anteriormente [ver, pedido de patente de invenção internacional WO 2007/064883 (intermediário AX / passo 3)].

[072] A segunda via tem início a partir do 1 -amino~4~bromo-2-cianopirroie protegido (XXI) [preparação apresentada no pedido de patente de invenção 15 internacional WO 2007/064883 (intermediário AAE, passo 3)]. A desprotonaçào do azoto de uretano, subsequente metalação na posição 4 e reação com formaldeido proporciona o derivado 4-(hidroximetllo) (ΧΧΠ). O tratamento com cloreto de hidrogênio, seguido por adição do álcool (XVII) e condensação com formamidine, utilizando um procedimento de um único passo, proporciona 26 então o composto desejado de fórmula estrutural (llb). Esta via é particularmente adequada para a preparação de derivados de éter alquílico [R^3A em (llb) ~ alquiloCCrCXO] Ρθίθ tacto de reagente álcool (XVII) também poder atuar como solvente de reação nestes casos.

s, 25

45/265

Esouema 5

Z sMBsU

3..

........

[673] O derivado de ê-amino-S-bromopirrolo^, 1 -f][ 1,2.4]triazina de fórmula estrutural (XII) é facilmente disponibilizado a partir de 4»aminO”6~(hidroximetíi)5 pirrolo[2_J1-f][1_i2_!4]tríazína (lia) (conforme o esquema 5) por 5,7-dibromaçãe inicial utilização 1,3~dibromo-5₍5-dimetil-hidantoi'na e subsequente 7desbromação selective através de uma permuta halogéneo-metal com n-butillítio. seguindo-se extinção com metanol (ver esquema 6 refra).

46/265

Esquema 6

(XXHÍ)

1, mBuLi, '78^:'C ----------------------—<»»»

2. MeQH

(XH) [074] Os boronatos de benzotiofeno-2-ilo de fórmula estrutural (Ví) podem ser convenientemente preparados a partir dos derivados de tíofenol 5 substituídos de fórmula estrutural (XXIV) (ver esquema 7 mfra). A alquilação oom bromo-acetal (XXV) e subsequente cíclízação mediada com ácido fosfórico proporciona os intermediários de benzotiofeno de fórmula estrutural (XXVII), os quais são então submetidas a metalação na posição 2 e submetidas a reação com um borato de tríalquílo. O processamento alcalino proporciona os ácidos 10 (benzotiofeno’2-ii)-borónicos livres de fórmula estrutural (Via), os quais pedem ser transformados, se desejado, em boronatos cíclicos, v.g,, os designados boronatos MIDA de fórmula estrutural (Vlb), por procedimentos convencionais conhecidos na especialidade (ver, por exemplo, D. M. Knapp et a/., V Am. Chem. Soo. 131 (20), 6961-6963 (2009)].

47/265

Esquema 7

[canforme P. A. Pie e L J. Marnett, J. Heferocyc/íc Chem. 25 (4), 1271-1272 (1988); A. Venturelli et a/._s J. Med. Ortem. 50 (23), 5644-5654 (2007)], [075] Os compostos de fórmulas estruturais (HI), (XI), (XV), (XVII), (XXIV) e (XXV) encontram-se comercialmente disponíveis,, são conhecidos a partir da literatura ou podem ser preparados a partir de materiais de partida facilmente disponíveis por adaptação de métodos convencionais descritos na literatura. Os procedimentos detalhados e referências de literatura para a preparação das 10 materiais de partida também podem ser encontrados na parte experimental na secçãa da preparação de materiais de partida e de intermediários.

[076] A preparação de outras subgrupos de compostos de fórmula estrutural (I) é ilustrada nos seguintes esquemas de reação 8 a 14, Os precursores de pirralotrlazina necessárias pedem ser facilmente sintetizadas

48/265 por meio de métodos convencioneis bem conhecidos na especialidade, e outras transformações sintéticas, na maioria dos casos, seguem as vias de preparação sublinhadas na secção de processo anterior, utilizando tipos semelhantes de reações, tais como, per exemplo, bromação, acoplamento da 8 boronato, amínometilação, aminação redutiva, oxidação e/ou reações de formação de éter ou arnida. Mais pormenores são proporcionadas na parte experimental na preparação de variantes exempíificativos e dos seus compostos precursores respectivos.

Esquema 6

49/265 [R^8A ₍ R⁸⁸ ~ alquitoCCrCs), ciclopropilo ou ciclobutHo].

Esquema 9

(R - alquHo(CrCJh

50/265

Esquema 11

[R ~ cloro ou alquMoíCrCá); para a preparação do material de partida (XXVIH), 5 ver pedidos de patente de invenção internacionais WO 2007/064883 e WO 2007/056170, respeotivamente].

51/265

52/265 [para a preparação de composto de partida (XXLXL ver esquema 14 infra].

Esquema 13

53/265

[0T7] Os compostos da presente invenção possuem propriedades farmacoiôgicas valiosas e podem ser utilizados para a prevenção e para o 5 tratamento de distúrbios em seres humanos e em outros mamíferos.

[07B] Os compostos da presente invenção são potentes inibidores da atividade ou expressão de tirosina-oinases receptoras, em particular, de cinases FGFR, e. mais particularmente, de cinases FGFR-1 a FGFR3, Assim sendo, de acordo com outra variante, a presente invenção proporciona um

54/265 método para o tratamento de distúrbios associados ou mediados pela atividade de cinases FGFR num paciente que necessite de tal tratamento, o qual compreende a administração ao paciente de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula estrutural, tal como definido antes. De acordo com S determinadas variantes, os distúrbios associados à atividade de cinases FGFR são distúrbios proliferativos e, em particular, câncer e doenças tumorais.

[079] No contexto da presente invenção, o termo tratamento” ou tratar inclui inibir, retardar, aliviar, mitigar, interromper, reduzir ou provocar a regressão de urna doença, distúrbio, patologia ou estado, o seu 10 desenvolvimento e/ou progressão e/ou os seus sintomas, Q termo prevenção” ou “prevenir inclui a redução do risco de ter, contrair ou experimentar a doença, distúrbio, patologia ou estado, o seu desenvolvimento e/ou progressão e/ou os seus sintomas, O termo prevenção inclui profíiaxia, O tratamento ou a prevenção de um distúrbio, doença, patologia ou estado, pode ser parcial ou 15 completo.

[080] O termo distúrbio proliferative” inclui distúrbios que envolvem a proliferação indesejada ou não controlada de urna célula. Os compostos da presente invenção podem ser utilizados para prevenir. Inibir, bloquear, reduzir, diminuir, controlar, etc., a proliferação de células e/ou a divisão celular e/ou 20 produzir a apoptose, Tal método compreende a administração, a um sujeito que de tal necessite, incluindo um mamífero, incluindo um ser humano, de uma quantidade de um composto da presente invenção, ou de um seu sal, isómero, polimorfo, metabolite, hidrato ou solvato farmaceutícamente aceitável, que seja eficaz para o tratamento ou para a prevenção do distúrbio.

[081] Ao longo do presente documento, para fins de simplicidade, a utilização de linguagem no singuiar é preferida em relação à linguagem no plural mas pretende normalmente incluir a linguagem no plural caso não seja indicado de outro modo. ..Por exemplo, a expressão “um método para o tratamento de uma doença num paciente, o qual compreende a administração 30 a um paciente de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula estrutural

55/265 (1)” pretenda incluir o tratamento simultâneo de mais de que uma doença, bem como a administração de mais do que um composto de fórmula estrutural (I), [Ô82] Como distúrbios prollferativos que é possível tratar e/ou prevenir com os compostos da presente invenção refere-se, em particular, mas sem que 5 ísso constitua qualquer limitação, o conjunto de doenças de câncer e de tumores. Estas pretendem designar, em particular, as doenças seguintes, mas sem que isso constitua qualquer limitação a estas: carcinomas mamários e tumores mamários (formas ductais e lobulares, também in situ), tumores do tracto respiratório (carcinoma do pulmão de pequenas células e de não 10 pequenas células, carcinoma parvocelular e não parvocelular, carcinoma brenquial, adenoma bronquial, blastoma pleuropulmonar), tumores cerebrais (v.g\, do tronco cerebral e do hipotálamo, astrocitoma, glioblastoma, meduloblastoma, ependimoma s tumores neu ro-ectodermais e pineais), tumores dos órgãos do sistema digestivo (esôfago, estômago, vesícula blliar, 15 intestino delgado, intestino grosso, recto, ânus), tumores do fígado (tefer a/te, carcinoma hepatoceiular, carcinoma colangiocelular e carcinoma misto hepatocelular e colangiocelular), tumores da região da cabeça e do pescoço (laringe, hípofaringe, nasofaringe, orotaringe, lábios e cavidade oral), tumores de pote (carcinoma epitelial escamoso, sarcoma de Kaposi, melanoma maligno, 20 câncer de pele de células Market e câncer de pele não melanomatoso), tumores dos tecidos moles (teter a/ía, sarcomas de tecidos moles, osteossarcomas, histocitomas fibroso malignos, llnfassarcomas e rabdomiossarcomas), tumores dos olhos (teter a/fa, melanoma intraocular, melanoma uveal e retinoblastoma), tumores das glândulas endócrina e * 25 exócrina (v.g., glândulas tirôide e paratiróide, pâncreas e glândula salivar), tumores do tracts urinário (tumores da bexiga, pênis, rim, pélvis renal e urétsr), tumores dos órgãos reprodutores (carcinomas do endométrio, colo do útero, ovário, vagina, vulva e útero em mulheres, e carcinomas da próstata e dos testículos em homens), bem como suas metastases distantes. Estes distúrbios 30 também incluem doenças de sangue proliferativas em fórmula sólida ou como

56/265 células sanguíneas em circulação, tais como linfomas, leucemias e doenças mieloproliferativas, v.g., leucemia mielólde aguda, linfoblástica aguda, línfocítica crônica, mielogénica crônica e de células pelosas, e linfomas associados a SIDA, linfomas de Hodgkin, linfomas não Hodgkin, linfomas de células T 5 cutâneos, linfomas de Burkitt e linfomas no sistema nervoso central [083] Devido à sua atividade e ao seu perfil de seletividade, acredita-se que os compostos da presente invenção sejam particularmente adequados para o tratamento de câncer da mama (mamário), do pulmão, do estômago (gástrico), da bexiga e do ovário e de doenças tumorals. Além disso, os 10 compostos da presente invenção podem ser particularmente adequados, de um modo geral, para a prevenção ou para a supressão de metastases tumoraís.

[084] Como outros distúrbios proliferativos que é possível tratar e/ou prevenir com os compostos e métodos da presente invenção refere-se a psoríase, quelóldes e outras hiperplasias que afectam a pela, distúrbios 15 bolhosos associados à formação de bolhas subepídérmicas, incluindo penfigoide boihoso, eritema multiforme e dermatite herpetlforme, distúrbios fibróticos, tais como fibrose do pulmão, aterosclerose, restenose e cirrose hepática, doenças renais, incluindo distúrbios proliferativos de células mesangiais, glomerulopatias, glomerulonefrite, nefropatia diabética, 20 nefrosclerose maligna e doença do rim policístlco, hlperplasía da próstata benigna (BPH), distúrbios proliferativos angiogénicos e dos vasos sanguíneos e síndromes de microanglopatia trombótica.

[085] Os compostos òa presente invenção também são úteis para o tratamento e/ou pare a prevenção de doenças oftalmológicas, tais como, por * 25 exemplo, degeneraçâo macular associada à idade (AMD), degeneração macular seca, oclusâo da veia retinal isguémioa, edema macular diabético, retlnopatia diabética, retlnopatia de prematuridade e outras retinopatias.

[086] Como outras patologias que é possível tratar e/ou prevenir por meio da administração de um composto da presente invenção refere-se doenças 30 ginecológicas, tais como endometriose, mioma e quistos dos ovários, distúrbios

57/265 metabólicos associadas a adipogénese, metabolismo biliar, metabolismo de fosfato, metabolismo de cálcio e/ou mineralização óssea, distúrbios do esqueleto, tais como, par exemplo, nanismo, acondrodispiasia e síndrome de Pfeiffer, doenças de cartilagens, tais como osteoartrite e poli artrite, artrites 5 reumatóides, calvície e rejeição a transplantes.

[087] As doenças mencionadas antes estão bem caracterizadas em seres humanos, mas também existem com uma etiologia comparável em outros mamíferos, e podem ser tratadas nesses com os compostos e métodos da presente Invenção, [088] Assim, a presente Invenção diz ainda respeito à utilização dos compostos de acordo com a invenção para o tratamento e/ou para a prevenção de distúrbios, em particular, dos distúrbios supramenclonados.

[089] A presente invenção diz ainda respeito á utilização dos compostos de acordo com a invenção para a preparação de uma composição farmacêutica 15 para o tratamento e/ou para a prevenção de distúrbios, em particular, das distúrbios supramencionados.

[090] A presente invenção diz ainda respeito à utilização das compostos de acordo cem a invenção num método para o tratamento e/ou para a prevenção de distúrbios, em particular, dos distúrbios supramenclonados.

[09í] A presente invenção díz ainda respeite a um método para o tratamento e/ou para a prevenção de distúrbios, em particular, dos distúrbios supramenclonados, através da utilização de uma quantidade eficaz de pelo menos um dos compostos de acordo oom a invenção.

[092] Qs compostos da presente invenção podem ser administrados como 25 agente farmacêutico único ou em combinação com um ou mais agentes terapêuticos suplementares, desde que tal combinação não origine efeitos secundários indesejáveis e/ou inaceitáveis. Tal terapia de combinação compreende a administração de uma formulação de dosagem farmacêutica única que contém um composto de fórmula estrutural (I), tal como definido 30 antes, e um ou mais agentes terapêuticos suplementares, bem como a

58/265 administração de um composto de fórmula estrutural (I) e cada, um dos agentes terapêuticos suplementares na sua formulação de dosagem farmacêutica em separado. Por exemplo, um composto de formula estruturai (I) e um agente terapêutico pedem ser administrados ao paciente sob a forma de uma 5 composição de dosagem oral única (fixa), tal como um comprimido ou uma cápsula, ou então cada agente pode ser administrados em formulações de dosagem em separado.

[093] No caso em que se utilizam formulações de dosagem em separado, o composto de formula estrutural (I) e um ou mais agentes terapêuticos 10 suplementares podem ser administrados essencialmente ao mesmo tempo (isto é, ooncorrentemente) ou em intervalos de tempo espaçados (isto é, sequenciaimente).

[094] Em particular, os compostos da presente invenção podem ser utilizadas numa combinação fixa ou separada com outros agentes anti-câncer, 15 tais como agentes de alquiíação, anti-metabolites, agentes anti-tumor provenientes de plantas, agentes de terapia hormonal, inibidores de topoisomerase, inibidores de tubulina, inibidores de cinase, fármacos dirigirías, anticorpos, conjugados antioorpo-fármaco (ADC), imunológicos, modificadores da resposta biológica, compostos anti-angiogénicos e outras substâncias anti20 proliferativas, citostáticas e/ou citotôxicas. A este propósito, a seguir é apresentada uma lista não iimitativa de exemplos de agentes secundários que è possível utilizar em combinação com os compostos da presente invenção:

abarelix, abiraterona, aclarubloina, afatiaib, aflibercept, aldesleucina, alemtuzumab, alitretinoína, aifaradina, altretamina, aminoglutetimida, * 25 amonafida, amrubicina, amsacrína, anastrozole, andromustina, arglabina, asparaginase, axitinib, 5-azacitidina, basiíiximab, belotecano, bendamustlna, bevacizumab, bexarotene, bicaíutamida, bisantreno, bleomicina, bortezomib, bosutínib, alaninato de brivanib, buseralina, bussulfano, oabazitaxel, CAL-101, folinato de cálcio, levofolínato de cálcio, camptotecina, capecitabina, 30 carboplatina, carmofur, carmustína. catumaxomab, cediraníb, ceimoleucina,

59/265 cetuximab, clorambucilo, clormadínona, clormetina, cidofovk, cisplatins, cladribina, ácido clodrónico, clofarabina, cumbretastatina. crisantaspase, crizotinib, cíclofosfamida, ciprotarona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, darbepoetina alfa, darinaparslna, dasatinib, daunorubieina, decitabina, 5 degarelíx, denileucina diftitox, denosumab, deslorelina, cloreto de dibrospídio, docetaxel, dovitinib, doxiflurídína, doxorubicina, dutasterida, eculizumab, edrecolomab, eflcrnitína, acetato de ellptíno, eltrombopag, endostatina, enocifabina, epimbioina, epirubicina, epitiostanol, epoetina alfa, epeetina beta, epotílona, eptaplatina, eribulina, erlotinib, estradiol, estramustína, etoposide, 10 euerolimus, exateoano, exemestano, exísulind, fadrszole, fenretinida, filgrastim, finasteride, flavopíridol, fludarabina, 5-fluorouraciío, fluoxímesterona, flutamlda, feretínib, formestano, fotemustina, fulvestrant, ganireüx, gefitinib, gemcítabina, gemtuzumab, gimatecano, gimeracilo, glufosfamída, glutoxím, geserelina, histrelina, hldroxíureoa, ácido íbandrónioe, ibritumomab tiuxetano, idarubicina, 15 ifosfamida, imatinib, imiqsimod, impro-sulfano, intedanib, interferâo alfa, interferas alfa-2a, interferâo alfa-2b, interferâo beta, interferâo gama, lnterleuclna-2, ipilimumab, irinotecans, íxabepilona, lanrectido, lapatinib, lasofoxifeno, íenaíidomida, ienograstim, lentinano, lenvatlníb, lestaurtinib, letrozole, ieuprorelina, levamisole, iinífanib, linsitinib, lisurído, lobaplatina, 20 lomustina, lonidamina, lurtotecano, mafosfamída, mapatumumab, masitinib, masoprocol, medroxiprogesterona, megestrol, melarsopml, melfalano, mepitiostano, mercaptopuma, metotrexato, aminolevulinato de metilo, metiltestosterona, mifamurtido, mifepristone, míltefosina, míripiatina, mítobronitol, mitoguazona, mítolactoí, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, 25 molgramostim, motesanib, nandrolona, nedaplatina, nelarabina, neratinib, nilotinib, nilutamida, nímotuzumab, nimustina, nítracrina, nolatrexed, ofatumumab, oprelvecina, oxalípíatina, paclitaxel, palifermina, ácido pamidróníco, panitumumab, pazopanib, pegaspargase, peg-epoetina beta, pegfílgastrim, peg-interferão alfa-Sb, pelítrexol, pemetrexed, pemtumomab, 30 pentostatína, peplomicina, perfosfamida, perifoslna, pertuzumab, picíbanilo,

60/265 pirambícina, pírarubícina, plerlxafor, plícamicina, poligiusam, fosfato de políestradiol, ponatinib, porflmer de sódio, pralatrexato, prednimustina. procarbazína, proccdazole, PX-866, quinagolldo, raloxifene, raltltrexed, ranibizumab, ranimustína, razoxano, regorafenib, ácido risedrónico, rituximab, 5 romídepsina, romipiostim, rubitecano, saracatinib, sargramostim, satraplatina, selumetinib, sipuleucel-T, sirclimus, sízofirano, sobuzoxano, sorafenib, streptozocina, sunitinib, taíaporfina, tamibaroteno, tamoxifeno, tandutínib, tasonermina, teceleucina, tegafur, teiatlníb, temoporfina, fomozoiomida, temsirolimus, teniposido, tesfolactona, testosterone, tetrofosmína, taiidomida, 10 tíotepa. timalfasina, tioguanina, tipifarnib, tivozanlb, foceranib, tocilizumab, topotecano, toremifeno, tosltumomab, trabectedina, trastuzumab, treosulfano, tretinoína. triapina, trilostano, frimetrexato, triptorelina, trofosfamída, ubenimex, valrubícina, vandetanib, vapreotido, variltlnlb, vatalanib, vemurafenib, vídarabina, vinblastine, vincristine, vindesina, vinflunina, vinorelbina, volocíximab, vorinostat, zinostatina, ácido zoledrónico e zorubicina.

[895] De um modo geral, é possível perseguir os objetivos seguintes com a combinação de compostos da presente invenção com outros agentes anticâncer:

* atividade melhorada para retardar o crescimento de um tumor, 20 para reduzir o seu tamanho ou mesmo para a sua eliminação completa, em comparação com o tratamento com um composta ativo individual;

* possibilidade de utilização dos quimioterapêuticos numa dosagem inferior em comparação com a monoterapia:

* possibilidade de uma terapia mais tolerável com menos efeitos 25 secundários, em comparação com a administração individual;

* possibilidade de tratamento de um espectro mais alargado de doenças de câncer e tumorais;

* alcançar uma taxa superior de resposta à terapia;

* tempo de sobrevivência superior do paciente, em comparação 30 com a terapia convencional.

61/265 [096] Assim, de acordo com outra variante, a presente invenção diz respeito a composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um dos compostos de acordo com a Invenção e um ou mais agentes terapêuticos suplementares para o tratamento e/ou para a prevenção de distúrbios, em 5 particular, dos distúrbios supramencionados, [097] No tratamento de câncer, os compostos da presente invenção também podem ser utilizados em conjunto com terapia por radiação e/ou intervenção cirúrgica.

[098] Além disso, os compostos de fórmula estrutural (I) podem ser 10 utilizados, tal qual ou em combinações, em pesquisa e diagnóstico, ou como padrões de referência analítica, e semelhantes, que sâo bem conhecidos na especialidade.

[099] Quando os compostos da presente invenção são administrados como farmacêuticos a seres humanos e a outros mamíferos, estes podem ser 15 administrados per se ou como composição farmacêutica que contém, por exemplo, entre 0,1 % e 69.5% (mais preferencialmente, entre 0,5% e 90%) de ingrediente ativo em combinação com um ou mais excípientes farmaceuticamente aceitáveis.

[100] Assim, de acordo com outros aspecto, a presente invenção diz 26 respeito a composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um dos compostos de acordo com a Invenção, convencionaimente em conjunto com um uu mais excípientes Inertes, não tóxicos e farmaoeuticamente adequados e à sua utilização para o tratamento e/ou para a prevenção de distúrbios, em particular, dos distúrbios supramencionados.

[191 ] Os compostos de acordo com a invenção podem atuar sistêmica e/ou localmente. Para tal propósito, podem ser administrados de um modo adequado, tal como, por exemplo, por via oral, parentérica, pulmonar, nasal, lingual, sublingual, bucal, rectal, dérmíca, transdérmica, conjunctival, óptica ou tópica, ou sub a forma de implante ou de enduprótese.

[192] Para estas vias de aplicação, os compostos da invenção podem ser

62/265 administrados sob formas de aplicação adequadas.

[103] Como adequadas para administração por via oral refere-se as formas de aplicação que atuam de acordo com a técnica anterior e administram os compostos de acordo com a invenção de um modo rápido e/ou modificado, e que contém os compostos de acordo com a invenção numa forma cristalina, amorfa e/ou dissolvida, tais como, por exemple, comprimidos (comprimidos não revestidos ou revestidos, por exemplo, com revestimentos esféricos ou com revestimentos que são Insolúveis ou que se dissolvem com uma libertação retardada e controlada do composto de acordo com a invenção), comprimidos que se desintegram rapidamente na boca, ou peliculas/bolachas, películas/liofilizados, cápsulas cápsulas de gelatina dura ou mole), rebuçados, grânulos, aglomerados, pós, emulsões, suspensões, aerossóis ou soluções, [104] A aplicação por via parentérica pode ser efectuada evitando um passo de absorção (via intravenosa, intra-arterial, intracardíaca, intraespinal ou intralombar) ou com a inclusão de um passo de absorção (via intramuscular, subeutânea, intracutânea, percutânea ou intraperitoenal). As formas de aplicação por via parentérica úteis incluem preparações para injecçâo e infusão sob a forma de soluções, suspensões, emulsões, liofilizados e pós estéreis, [105] Como formas adequadas para outras vias de aplicação refere-se, por exemplo, formas farmacêuticas para inalação (v.g., inaladores de pó, nebulízadores), gotas, soluções ou pulverizações nasais, comprimidos ou cápsulas para administração por via lingual, sublingual ou bucal (v.g., trociscos, pastilhas), supositórios, preparações para os ouvidos e olhos (v.g., gotas, unguentes), cápsulas vaglnaís, suspensões aquosas (loções, misturas para agitação), suspensões lipofílicas, unguentos, cremes, leites, pastas, espumas, põs para polvilhamento, sistemas terapêuticos transdérmicos (v.g., adesivos), implantes e endopróteses.

[106] De acordo com uma variante preferida, a composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula estrutural, tal como definido antes, é

63/265 proporcionada numa forma adequada para administração por via oral. De acordo com outra variante preferida, a composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula estrutural (I), tal como definido antes, é proporcionada numa forma adequada para administração por via intravenosa.

[107] Os compostos da acorda com a invenção podem ser convertidos nas formas de aplicação referidas de um modo conhecidos per se por mistura cem excipíentes inertes, não tóxicas e farmaceuticamente adequados. Tais excipientes compreendem, /nter a//a, veículos (v,g., celulose microcristalína, lactose, manitol), solventes (v.g., polietlleno-glicóis líquidos), emulslonantes (v.g., dodecil-sulfato de sódio), tensíoativos (V.g., oleato de polioxisorbitano), dispersastes (v.g., polivinilpirralidona),polímeros sintéticos e naturais (v.g., albumina), estabilizadores (v.g., antioxidantes, tais como, por exemplo, ácido aecorbíco), corantes (v.g., pigmentos inorgânicos, tais como, por exemplo, oxidas de ferros) e agentes para disfarçar o sabor e/ou o odor.

[106] Uma dose preferida do composto da presente invenção ê a dose máxima que o paciente pode tolerar e não desenvolver efeitos secundários graves. De um modo ilustrativo, o composto da presente Invenção pode ser administrado por via parenterica numa dose compreendida entre cerca de 0,001 mg/kg e cerca de 1 mg/kg e, de preferência, entre cerca de 0,01 mg/kg e cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal. Para a administração por via oral, um intervalo de dose exemplificative está compreendido entre cerca de 0,01 e 100 mg/kg, da preferência, entre cerca de 0,01 e 20 mg/kg e, mais preferencíalmente, entre cerca de 0,1 e 10 mg/kg de peso corporal. Os intervalos intermédios dos valores supramencíonados também fazem parte da 25 invenção.

[109] No entanto, os níveis de dosagem reais e o tempo de administração dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas da invenção podem variar de modo a obter uma quantidade de ingrediente ativo que safa eficaz para se obter a resposta terapêutica desejada para um paciente, composição e 30 modo de administração particulares, sem serem tóxicos para o paciente, Assim

64/265 sendo, pode ser necessário, quando adequado, desviar das quantidades referidas, em particular como função da idade, do gênero, do peso corporal, da dieta e do estado gerai de saúde da paciente, da biodisponibilidade e características farmacodinâmlcas do composto particular e do seu modo e via 5 de administração, do tempo e intervalo durante o qual a administração tem lugar, o regime de dosagem selecionado , a resposta do paciente individual ao ingrediente ativo, à doença específica envolvida, ao grau ou ao envolvimento ou à gravidade da doença, ao tipo de tratamento concorrente (isto é, a interação do composto da invenção com outros terapêuticos oo-admínístrados), 10 e outras circunstâncias relevantes.

[110] Assim, em alguns casos, poderá ser satisfatório utilizar uma quantidade Inferior à quantidade mínima supramencionada. ao passo que, em outros casos, o limite superior deverá ser excedido. O tratamento pode ser iniciado com dosagens pequenas, que sejam inferiores à quantidade ótima do composto. Depois, a dosagem pode ser aumentada em incrementes pequenos ate se alcançar o efeito optima nessas circunstâncias. Para fins de conveniência, a dosagem diária total pode ser dividida e administrada em porções individuais espalhadas ao longo do dia.

[111] As seguintes variantes exempiífícatívas ilustram a invenção. A 20 invenção não é restrita aos exemplos.

[112] As percentagens nos testes e exemplos seguintes, salvo quando indicado de outro modo, são em peso: as partes são em peso. As proporções de solvente, taxas de diluição e concentrações apresentadas para soluções líguido/líquido são, em cada ease, com base em volume.

Exemplos

Abreviaturas e acrônimos

Ac acetilo

Ac_sO anidrido acético

AcOH ácido acético aq. aquosa (solução)

	65/265
Boo	terc-butoxicarbcnilo
ir.	largo (sinal do 'H-NMR)
Bu	butllc
cat	catalítico
cone	concentrado
d	deplete (sinal de ’H-NMR)
DBDMH	1,3~dibromo-5s5~dimetil-hidantcina
DQI	íenizaçao química directa (MS)
DCM	diclorometano

Penodínano de

Dess-Martin	1,1,1 -lriacetoxl-1,1 -dl-hldro-1,2-benzlodoxol~3(1 H) ona
DIPEA	N,N~diisopropiletilamina
DMF	Ν,Ν-dimetilformamída
DMSO El	sulfoxide de dimetilo ionizaçâo por impacto de electress (MS)
eq, ESI	equivaiente(s) ionização por eleotropulverizaçâo (MS)
Et	etiio
EtOAc	acetate de etiio
GC-MS	espeotroscopla de massa acoplada a crematografia gasosa
h	hara(s)
Hal 1H~NMR	halogéneo espectroscopia de ressonância magnética nuclear do protão
HPLC	crcmatografla líquida de elevado rendimento
IPr	isopropíle
LC-MS Me	espectroscopia de massa acoplada a cromatografia líquida metilo

66/265

MeOH	metanol
min	minuto(s)
MS m/z	espectroscopia de massa proporção massa/carga (MS)
NBS	N-bromo-succinimida
n-Bu	n-butlic
NCS teórico	N-cloro-succinimida teórico (rendimento químico)
Pd/C PdCL(dppf) Pd(dba)8 Ph	paládio sobre carvão [1,1 ’bis-Cdífenilfosflnol-ferroceno] -dicioro-paládio(l I) bís-(díbenziiideno-acetona)paládio fenilo
PPA	ácido pohfosfúrico
q	quarteto (sinal de Ή-NMR)
quant.	quantitativo (rendimento)
rac	racémíco
R RP	fator de retenção em TLC fase inversa (HPLC)
fa tf	temperatura ambiente tempo de retenção (HPLC)
8	singuleto (sinal de ''H-NMR)
sat	saturada (solução)
t	triplets (sinal de 'H-NMR)
TBAP	fluoreto de tetra-n-butii-amónio
TBDMS	terc-butildimetiisililo
TBTU	tetrafluoroborato de N-[(1 H-benzotriazol· 1 -iloxi) (dimetilamino)-metileno]’N~metilmetanarnínío
tBu	terc-butilo
tore	terciário
TFA	ácido trifluoroacétioo

67/265

THF tetra-hidrofurano

TLC cromatografia em camada fina

Métodos de LC-MS e GC-MS

Método 1 (LC-MS) [113] instrumento: Micromass Quattro Premier oom Waters UPLC Acquity; coluna: Thermo Hypersll GOLD 1,9 p, 50 mm x 1 mm; eiuente A: 1 L de água 4 0,5 mL de ácido formica aquoso a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo 4· 0,5 mt du ácido formica aquoso a 50%, gradiente: 0.0 minuto, 90% de A ····> 0,1 minute, 90% de A ---> 1,5 minutos, 10% de A ···> 2,2 minutes, 10% de A; temperatura: 50^<!C; caudal: 0,33 ml/minuto: detecção UV: 210 nm.

Método 2 (LC-MS) [114] Instrumento: Waters Acquiiy SQD UPLC System; coiuna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.,8 μ, 50 mm x 1 mm; eiuente A: 1 L de água 4 0,25 mL de ácido férmico a 99%, eluente B: 1 L de acetonitrile 0,25 mL de ácido formica a 99%: gradiente: 0,0 minuto, 90% de A 1,2 minutos, 5% de A -> 2,0 minutos, 5% de A; fomo: 50°C: caudal: 0,40 mUminuto: detecção UV: 210-400 nm.

Método 3 (LC-MS) [115] instrumento: Micromass Quattro Micro com HPLC Agilent 1100 Series; coluna: VMC-Triart Cl 8 3 p, 50 mm x 3 mm; eluente A: 1 L de água 4 0,01 mol de carbonato de amonie, eiuente B: 1 L de acetonitrilo; gradiente: 0,0 minute, 100% de A ····> 2,75 minutos. 5% de A 4,5 minutos, 5% de A; forno: 40°C; caudal: 1,25 mL/minuto: detecção UV: 210 nm.

Método 4- (LC-MS) [116] instrumento: Waters Acquity SQD UPLC System; coluna: Waters Aoquity UPLC HSS T3 1,8 μ, 30 mm x 2 mm; eiuente A: 1 L de água 4 0,25 mL de ácido fórmico a 99%, eluente 8: 1 L de acetonitrilo + 0.25 mL de ácido térmico a 99%; gradiente: 0,0 minuto, 90% de A 1,2 minutos, 5% de A > 2,0 minutos, 5% de A; fomo: 50°C; caudal: 0,60 mL/minuto; detecção UV: 208-400 nm

68/265

Método 5 (LC-MS) [117] Instrumento: Micromass Quattro Premier com Waters UPLC Acquíty; coluna: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ, 50 mm x 1 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmíco aquoso a 50%, eluente 8: 1 L de acetonitrile + 0,5 mL de ácido fórmíco aquoso a 50%; gradiente: 0,0 minuto, 97% de A ····> 0.5 minuto,

97% de A -> 3,2 minutos, 5% de A 4,0 minutos. 5% de A; temperatura: 50°G; oaudal: 0,3 mL/minuto; detecção UV: 210 nm.

Método 6 (GC-MS) [118] Instrumento: Micromass GCT, GC6890: coluna; Restek RTX-35, 15 10 m x 200 pm x 0.33 pm; fluxo constante com hélio: 0,88 mL/minuto; forno: 70°C;

entrada: 250^cC: gradiente: 70°C, 30°C/mínuto ····> 310°C (manter durante 3 minutos).

Método 7 (LC-MS) [118] Instrumento de MS: Waters Micromass QM; instrumento de HPLC: 15 Agilent 1100 series; coluna: Agilent ZORBAX Extend-C18 3,0 mm x 50 mm, 3,5 p; eluente A: 1 L de água + 0,01 mol de carbonato de amônio, eluente B: 1 L de acetonitrile: gradiente: 0.0 minuto, 98% de A -> 0,2 minuto, 98% de A 3.0 minutos, 5% de A 4,5 minutos, 5% de A; temperatura: 40°C: caudal: 1,75 mUminuto; detecção UV; 210 nm.

Método 8 (LC-MS) [120] Instrumento de MS: Waters Micromass ZQ; instrumento de HPLC: Agilent 1100 series: coluna: Agilent ZORBAX Extend-018 3,9 mm x 50 mm, 3,5 p: eluente A: 1 L de água * 0.01 mol de carbonato de amônio, eluente B: 1 L de acetonitrilo; gradiente: 0,0 minuto, 98% de A -» 0,2 minuto, 98% de Á ····> 3,0 minuto, 5% de A ··> 4,5 minutos, 5% de A; temperatura: 40^<!C; caudal: 1.75 .mUminuto; detecção UV: 210 nm,

Métodos gerais de purificação (yer quadros I e II seguintes)

Método P1 [121] RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente acetonitriio/0,2% de 30 ácido trífluoroacético aquoso).

69/265

Método P2 [122] RP-HPLC preparativa (XBridge C18, gradiente aceionitrilo/água * 0.1% de amónia aquosa).

Método P3 [123] RP-HPLC preparativa (Sunfire C18. gradiente acetonitrilo/água).

Método P4 [124] RP-HPLC preparativa (XBridge C18, gradiente acetonitrilo/água -r 0.05% de amónia aquosa),

Método PS [125] O produto obtido a partir da purificação por RP-HPLC antecedente é dissolvido em metanol e é filtrado através de um cartucho de permota aniónica (Stratospheres SPE. PL-HCOg MP-resina). O cartucho é submetido a eluição com metanol e o filtrado é evaporado.

Método P6 [126] Uma solução do produto em acetato de etíio é lavada com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e depois com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, é seca sob sulfato de magnésio, é filtrada e é evaporada.

Materials de partida e intermediários intermediário 1A [127] 2~Metoxi~4-metilanílina

H_SCX /Cs.

[128] Preparou-se uma mistura de 5-metií-2-nitroanisol (265 g, 1,58 mol) e Pd a 10%/C (39,75 g) em THF (1,32 L) e agitou-se de um dia para o outro à 25 temperatura ambiente e sob 1 atm de hidrogênio. Filtrou-se através de terra de díatomáceas e evaporou-se para se obter 216,1 g de produto Impuro, que se utilizou no passo subsequente sem mais purificação.

70/265 [129] LC-MS (método 3): t_r 2,39 minutos; MS (ESIpos): m/z - 138 (Mv-Hf;

[130] 'H-NMR (400 MHz, DMSO~d_e): δ « 6,45-6,63 (m, 3H), 4,46 (S, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,16 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 2A [131] 2-Metoxi-4~metilbenzenutiol

SH

..-0 H₃G

Método 1 [132] Adicíonou-se, gota a gota, uma solução de nitrite de sódio (7 g, 10 101,4 mmol) em água (25 mL) a uma solução arrefecida (ΟΌ-δ'Ό) de intermediário 1A (13,7 g, 100 mmol) em ácido clorídrico concentrado (30 mb) e água (85 ml). Depois de se agitar a 0°C durante 10 minutos, adicionou-se acetato de sódio (15 g, 182,8 mmol). Adicionou-se, gota a gota, a mistura resultante a uma solução quente (7Q°C-80°C) de O-etll-ditiocarbonato de 15 potássio (30 g, 187,1 mmol) em água (140 mL), agitou-se a uma temperatura entre 70°C e 80°C durante 1 hora a depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Extraiu~se a mistura duas vezes com acetato de atilo, secou-se os extractos orgânicos combinados sob sulfata de sódio e evsporou-se. Retomouse o resíduo nume solução 1,3 M de hidróxido de potássio em stand (300 ml). 20 Adicionou-se glicose (8 g) e manteve-se a mistura resultante ao reflexo durante horas. Depois, evaporou-se o solvente etanoL diluiu~se o resíduo com água e acidíficou-se com ácido suifàrico aguoso 6 N. Adicionou-sa cuidadosamente zinco em pó (15 g) e aqueceu-se a mistura resultante até 50°C durante 30 minutos. Arrefeceu-se então a mistura até à temperatura ambiente, diluiu-se 25 com diciorometano e filtrou-se. Extraiu-se o filtrado duas vezes com diclorometano, secou-se os extractos orgânicos combinados sub sulfato de sódio e evaporou-se para se obter 14,3 g do produto impuro, que se utilizou no

71/265 passo subsequente sem mais purificação.

Método 2 [133] A 2,9 L de THF adicionou-se uma solução quente de 355 mL (6,67 moi) de ácido suifúrico concentrada em 1,1 L de água, A 5Q°C, adicionou-se, sob agitação, 293 g (1,33 moi) de cloreto de 2-metoxi-4-metílbenzeno-sutfonlio.

Depois, adicionou-se, cuidadosamente e em porções, 521 g (7,97 moi) de zinco em pó (formação de espuma) e arrefeceu-se a reação ligeiramente exotérmíca num banho de água, mantendo a temperatura a 50^GC-55°C. Subsequentemente, agitou-se a mistura a 55°C durante 3 horas, Monitorizou10 se o progresso da reação por TLC (gel de silica, éter de petróleo/acetato de etilo a 95.5). Verteu-se a mistura de reação em 13,6 L de água, adicionou-se

6,8 L de diclorometano e agitou-se a mistura durante 5 minutas. Após decantação a partir do zinco restante e separação de fases, extraiu-se a fase aquosa uma vez mais com 6,8 L de diclorometano. Lavou-se as fases 15 orgânicas combinadas com salmoura a 10%, secou-se e evaporou-se a 40°C sob pressão reduzida para se obter 237 g de produto impuro. Utilizou-se este material no passo subsequente sem mais purificação, Qbteve-se uma. amostra analítica por cromatografia através de gel de silica, cem éter de petróleo/acetato de etilo (a 97:3) como eiuente.

LC-MS (método 1): t, ~ 1,21 minutos; MS (ESlneg): m/z ~ 153 (M-H)';

H-NMR (408 MHz. DMSO-d₈): δ ~ 7,17 (d, 1H). 6,81 (s, 1H), 6,66 (d, 1H), 4,63 (s Ir,, 1H), 3.80 (s, 3H), 2,26 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 3A [134] 1~[(2,2-Dietoxietil)-sulfanii]-2-metaxl-4-metilbenzeno

[135] Colocou-se em suspensão 237 g de material impuro do intermediário 2A, 287 g (1,46 moi) de bromoacetaldeído-dietilacetal e 862 g (2,65 moi) de

72/265 carbonato de cesto em 2 L de DMR Inicialmente, a temperatura de reação aumentou até 40°C, depois manteve-se sob agitação de um dia para o outro à temperatura ambiento. Repartiu-se a mistura de reação entre 10 L de água e 2,7 L de acetato de atilo. Extraiu-se a fase aquosa com outra porção de 2,7 L 5 de acetato de etilo. Lavou-se as fases orgânicas combinadas com salmoura a 10%, secou-se o evaporou-se. Purificou-se o resíduo oleoso resultante por cromatografia através de gel de silica, com éter de petróleo/acetato de etilo (a 95:5) como eluente.

Rendimento: 236 g de um óleo (66% teórico):

GC-MS (método 6): t_f ~ 6,03 minutos; MS (Elpos): m/z ~ 270 (M) ;

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d_e): δ « 7,16 (d. 1H), 6,82 (s. 1H), 6,73 (d, 1H)< 4,55 (t, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,52-3,64 (m, 2H), 3,30-3,51 (m, 2H), 2,96 (d, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,09 (t, 6H)p.p.m..

Intermediário 4A

7-Metoxl-5-metil-1 -benzotiofeno [136] A uma mistura ao refluxo de 13 g de ácido polifosfórico e 150 mL de clorobenzeno adicionou-se, gota a gata, uma solução de 5,2 g (19,2 mmoi) de intermediário 3A e manteve-se ao refluxo de um dia para o outro. Depois de se 20 arrefecer, docantou-se a camada orgânica e enxaguou-se o resíduo e o frasco com DCM. Evaporou-se as fases orgânicas combinadas sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo (3,76 g) a cromatografia através de gel de silica, com iso-hexano/0%-10% da acetato de etilo come eluente.

Rendimento: 1,69 g de um óleo (4936 teórico);

GC-MS (método 6): t_r ~ 5,20 minutos; MS (Elpos): m/z ~ 178 (M)R ^H-NMR (400 MHz, DMSO-d«): δ - 7,68 (d, 1H), 7,34 (d, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,78 (S, 1H), 3,93 (S, 3H), 2,43 (S, 3H) p.p.m..

73/265

Intermediário 5A

Ácido (7-metoxi-5-metil-1-benzotíoteno-2-ii)-borónico

[137] Sob uma atmosfera de árgon, díssoíveu~se 26.7 g (150 mmoi) de 5 intermediário 4A em 270 mL de THF e arrefeceu-se até -70°C, A uma temperatura entre ~70°C e -65°C_S adicionou-se, gota a gota, 66 mL (165 mmoi) de uma solução 2,5 N de n-butii-lítio em hexano, durante 20 minutos, proporcionando a formação de um precipitado branco. Depois de se agitar durante 1 hora a -70°C, adicionou-se 41,5 mL (180 mmoi) de borato de W tnisopropilo a esta temperatura ao longo de 10 minutos (obtendo-se uma suspensão espessa). Mantéve-se sob agitação durante 1 hora a ~70°C e depois deixou-se aquecer a mistura de reação até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A seguir, adicionou-se 400 mL de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio, separou-se as camadas e extraiu-se a camada aquosa 15 uma vez mais com THF, Evaporou-se as fases orgânicas combinadas sub pressão reduzida. Ao resídua assim obtido adicionou-se 200 mL de água e 86 mL de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 2 N. Lavou-se a solução duas vezes com DCM, depois acídíficou~se oom 35 mL de ácido sulfúrlco 3 M e agitou-se vígorosamente a suspensão resultante durante 1 hora. Removeu-se 20 por filtração com sucção o precipitado e secou-se de um dia para o outro a 45°C sob uma pressão hipcbãrica.

Rendimento: 28,25 g de um sólido incolor (94% puro por LC-MS, 80% teórico). LC-MS (método 2): t_r ~ 0,87 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 223 (M-r-Hf.

Ή-NMR (400 MHz, DMSQ-d₆): δ * 7,17 (d, 1H), 6,81 (s, 1H), 6,66 (d. 1H), 4,63 25 (S lr.< 1H), 3,80 (s, 3H), 2,26 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 6A [138] 2-(7-Metoxí-5-metil-1 -benzotiofeno-2-il)-6-metíl· 1,3,6,2-

74'26t>

dloxazaborocano-4,8-diona

[139] Dissolveu-se 6,3 g (28,4 mmol) de intermediário 5A e 4,2 g (28,4 mmoi) de ácido 2,2^!-(metilimlno)~diac-étlco numa mistura de 45 ml de DMSO e 5 400 mL de toluene e levou-se ao reflexo durante 16 horas utilizando um sifão.

Depois de se evaporar, retomou-se o resíduo em acetato de atilo e lavou-se três vezes com água e uma vez com salmoura. Secou-se a fase orgânica sob sulfato de magnésio e evaporou-se até um volume de cerca de 200 mL Deu-se a precipitação de um sólido branco que se filtrou, lavou-se com acetato de atilo 10 e secou-se sob uma pressão hipobãrica para se obter uma primeira colheita (5,52 g) do composto em epígrafe. Obteve-se uma segunda colheita (3,32 g) após evaporação das águas-mães e cromatografia rápida através de uma camada de gel de silica, utilizando ciclo-hexano/0%-100% de acetato de etilo como eluente.

Rendimento: 8,84 g (pureza global 92,5% por LC-MS, 87% teórico).

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,93 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 334 (MrH)⁺.

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d_È;)'. δ « 7,42 (s, 1H), 7,26 (s. 1H), 6,76 (s, 1H), 4,40 (d, 2H), 4,17 (d, 2H), 3,92 (s_f 3H), 2,63 (S, 3H), 2,42 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 7A

4-Aminopirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazína-6-carboxilato de etilo

[140] Agitou~se uma solução de 4-aminopirrQlQ[2,1-f](1,2,4]triazina-6··

75/265 carbonitrilo (3,9 g, 24,5 mmol; preparação descrita no pedido de patente de invenção internacional PCT WO 2007/064883) em etanol (124,8 ml) com ácido suifúrico concentrado (62,4 mL), a 80°C de um dia para o outre. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente, verteu-se a mistura de reação em 800 g 5 de gelo e levou-se a pH 6-7 com uma solução aquosa concentrada de hidróxido de sódio. Adicionou-se acetato de etilo (500 mL) e diclorometano (500 mL) á suspensão e filtrou-se a mistura resultante através de terra de diatomáceas. Separou-se a camada orgânica da camada aquosa, Díssolveu-se o sólido em água quente (1 L) e extraiu-se a camada aquosa duas vezes com 10 acetato de etilo. Secou-se as camadas orgânicas combinadas sob sulfato de sódio e evaporou-se. Triturou-se o resíduo com uma mistura da isopropanol/éter dietílico e removeu-se o sólido por filtração para se obter 2,5 g (49% teórica) da composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f - 0,59 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 206 (M*H)⁺.

-H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s): ó = 8,11-7,97 (m, 3H), 7,88 (s, 1H). 7,34 (s In, 1H), 4,27 (q, 2H), 1,30 (t, 3H) p.p.m..

Intermediário 8A (4~Aminopirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina-6-il)-metanol

I . I —\

OH [141] Tratou-se uma solução arrefecida com gelo de intermediário 7A (3,0 g, 14,5 mmol) em THF (30 mL) com uma solução 1 M da trietilboro-hidreto de lítio em THF (58 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 45 minutos. Arrefeceu-se então a mistura de reação até 0°C, extínguíu-se cem metanol, aqueceu-se lentamente até à temperatura ambiente e adsorveu-se sobre terra 25 de diatomáceas. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (díolorometano/metanol, gradiente de 20:1 4:1) para se obter 2,21 g (92,5% teórico) do composto em epígrafe.

76/265

LC-MS (método 3): t,· - 1,46 minutos: MS (ESIpos): m/z ~ 164 (Mi H)\ ⁵H-NMR (400 MHz, DMSO~d4: δ ™ 7,75 (s, 1H), 7,64 (s lr., 2H), 7,50 (d In, 1H), 6,79 (d lr., 1H)_S 5,01 (t 1H), 4,50 (d, 2H) p.p..m..

Intermediário §A [142] [2~Clano-4-(hidroximetil)-1 H-pirrol -1 -il]-carbamato de terc-butlle

P W

HN' Ο V,, | CH_S jd/

HQ----/ [143] Sob uma atmosfera de árgon, adícionou-se uma solução 1 M de brometo de metil-magnésio em THF (13,3 mL), ao longo de 16 minutos, a uma solução de (4brcmo-2-ciano-l H-phrol-1 -il)-carbamato de terc-butilo (3,7 g, 10 12,09 mmol; preparação descrita no pedido de patente de invenção internacional PCT WO 2007/064883, intermediário AAE, passo 3) em THF (37 mL), arrefecida até 6Q°C. Decorridos 30 minutes, adicionou-se uma solução 1,6 M de n-butil-lítío em hexano (15,1 ml, 24,2 mmol), ao longo de 10 minutos, à reação e agitou-se a mistura resultante a uma temperatura entre 60°C e 40°C 15 durante 1 hora. Depois, adicionou-se paraformaldeído (1,09 g, 36.3 mmol) á reação, aqueceu-se lentamente a mistura de reação até à temperatura ambiente e agitou-se de um dia para o outro. Depois de se extínguir com uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio, extraiu~se a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo. Lavou-se as fases orgânicas combinadas com 20 uma solução aquosa saturada de derate de sódio, secou-se sob sulfato de sódio e evaporou-se. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (ciclo-hexanc/acetato de etllo, 2:1 1:1) para se obter 2,04 g (69% teórico) do composto em epígrafe.

LG-MS (método 4): t - 0,70 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 238 (M-i-H) L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ « 10,79 (s lr._t 1H), 7,09 (d, 1H), 6,86 (d, 1H), 4,97 (t 1H), 4,28 (d, 2H), 1,45 (s, 9H) p.p.m..

77/265

Iptarmediarip 10A

6-(Metoximetíi)-pirrolo[2_s1-f](1,2_f4]tnazína-4-amina

NH_S

O~~CH₃

Método 1 [144] Tratou-se uma solução de intermediária 8A (1,3 g, 7,9 mmol) em THF (25 mL) com cloreto de tíonilo (1,15 ml, 15,8 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois de se evaporar. díssolveu~se o resídua em metanol (25 mL) e tratou-se com acetato de sódio (1,3 g, 15,8 10 mmol). Agitou-se a mistura durante 3 horas a 65^<;'C e depois evapora-se novamente. Purificou-se por cromatografía em coluna através de gel de silica (díclorometano/metanol a 100:2) para se obter ,787 mg (55% teórico) do composto em epígrafe.

Método 2 [14S] Agitou-se uma solução de intermediário 9A (6,14 g, 25,88 mmol) numa solução 4 M de cloreto de hidrogênio em 1,4-dioxano (15 ml), à temperatura ambiente durante 5 horas, Após diluição com metanol (73 mL), manteve-se sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Depois, adicionou-se fosfato de potássio (54,9 g, 258.65 mmol) e acetato de 20 formamidínio (13,46 g, 129,32 mmol) e agitou-se a mistura resultante a 65^<:€ durante 17 horas. Evaporou-se a mistura de reação, adicionou-se uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraiu-se a mistura com dicloromatano e depois com acetato de atilo. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato da sódio e evaporou-se. Purificou-se por cromatografía em coluna 25 através de gal de silica íd<ciorometano/metanol, 40:1 -> 20:1) para se obter 2,36 g (49% teórico) de composto em epígrafe,

LC-MS (método 3): t_r ~ 1,72 minutos; MS (ESipos): m/z » 179 (M+H)*.

78/265

Ή-NMR (400 MHz, DMSCW δ « 7,77 (s, 1Η), 7,69 (s Ir., 2H), 7,57 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,42 (s, 2H), 3,25 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 11A (146] 4~Amino-6-(metoxímetil) -pirroto[2,1 -<1,2,4]tríazina-7~carbaldeído

[147] Adicionou-se cloreto de fosforílo (13,7 mL 147,18 mmol) a uma solução de Intermediário 10A (5,24 g, 29,43 mmol) em DMF (80 mL) a 0°C, Agitou-se a mistura resultante a 60^<sC durante 8 horas, depois extlnguiu-se cuidadosamente com água e neutralizou-se com uma solução aquosa de hidróxido de sódio 4 M, Extraiu-se a camada aquosa com acetato de etiio, Lavou-se as fases orgânicas combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou~se. Tratouse uma solução do resíduo em metanol (50 mL) com acetato de sódio (2,41 g, 29,43 mmol) e levou-se ao refluxo de um dia para o outro. Díluiu~se a mistura 15 de reação com água a extraiu-se com acetato de etiio. Lavou-se as fases orgânicas combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou~se sub sulfato de magnésio e evaporou-se para se obter 2,66 g da produto impuro, que se utilizou no passo subsequente sem mais purificação.

LC-MS (método 4): t ~ 0,50 minuto; MS (ESlpos): m/z - 207 (M*H)L

HNMR (400 MHz, DMSO-dú: δ « 10,35 (s, 1H), 8,20 (a to, 2H), 8,07 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 3.39 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 12A [148] 4-Amino-5~bromo~6-(metoximetíl)-pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina-7carbaldeído

79/265 [149] Tratou-se uma solução de intermediário 11Á (impuro, 2.66 g) em DMF (30 ml), arrefecida até ~30°C, com uma solução de N-bromo-succinimida (NBS; 2,52 g, 14,19 mmol) em DMF (14 ml). Aqueceu-se lentamente a mistura 5 resultante até 0°C. Decorrida 1 hora, aqueceu-se a mistura até à temperatura ambiente, agitou-se durante mais 15 minutos e depois extinguiu-se com uma solução aquosa de tiossulfato de sódio 1 M. Removeu-se por fiitração o precipitado e lavou-se com acetato de etilo para se obter 1,1 g (100% de pureza, 30% teórico), como primeira colheita do composto em epígrafe, 10 Extraiu-se o filtrado restante com acetato de etilo. Lavou-se as fases orgânicas combinadas oem uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de sódio e evaporou-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna através de gel de silica (ciclo-hexano./acetato de etilo, 1:1 1:3) para se obter mais 1,39 g (70% de pureza, 26% teórico) do composto em 15 epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,67 minuto; MB (ESlpos): m/z ~ 283/285 (M+H)\ ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s): δ 10,36 (s, 1H)_; 8,63 (s lr.₍ 1H), 8,13 (s, 1H), 7,23 (S Ir, 1H), 4,64 (s, 2H), 3,26 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 13A [150] 4-Amino~6-(metoximetil)~5-(7-metoxi-5-metii-1 -benzotiofeno-2-ii)pirrolo[2,i -f][i ,2,4]triazina-7-carbaldeido

80/265

[151] Sob uma atmosfera de árgon, adicionou-se uma solução de fosfato de sódio 0,5 M desgaseificada (9,9 ml) a uma solução de 12A (710 mg, 2,49 mmol), intermediária 5A (921 mg, 3,73 mmol) e (2'-aminobifenii-2--il)-(olorQ}~ paládio-dícicío-hexil-^léie^triísopropilbifenil^-iQ-fósfina (1:1; 196 mg, 249 pmoi; ver S. L Buchwald et a/._f J. Am. Chem. Soo. 132 (40), 14073-14075 (2010)) em THF desgaseificado (28,4 mL)< Agitou-se a mistura resultante a 60°C durante 2 horas e depois evaporou-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coiuna através da gel de silica (clclo-hexano/acetato da etilo, 5:1 1:1) para se obter 550 mg (51% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): ç ~ 1,06 minutos; MS (ESlpoS): m/z - 383 'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ 10,50 (s_t 1H), 8,43 (s h'„ 1H), 8,21 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,09 (s ir., 1H), 4,58 (s, 2H), 3,96 (s, 3H). 3,19 (S, 3H), 2,46 (s, 3H) p.p.m.. Intermediário 14A [152] 6-(Etoxímetil)-pirroio[2,1 -f][1,2,4]triazina-4-amina

Método 1

81/285 [153] A uma suspensão de 2 g (12,2 mmol) de intermediário 8A em 40 ml de THF adicionou-se 1,78 mL (24,4 mmol) de cloreto de tíoniío à temperatura ambiente durante 20 segundos. Agitou-se a mistura durante 1,5 horas, depois evaporou-se até à secura e dissolveu-se o resíduo em 40 mL de etanol.

Adícionou-se 2 g (24,4 mmol) de acetato de sódio e agítou-se a mistura a 70^<;C durante 1 hora e 45 minutos. Evaporou-se novamente a mistura de reação e adicionou-se uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio. Extraiu-se a mistura cinco vezes cem acetato de etilo. Lavou-se as fases orgânicas combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, íO secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se até à secura para se obter 2,02 g de produto impuro, o qual se purificou por cromatografia em coluna através de gel de silica, com diclorometano/metanol (0%-2%) como eluents.

(154] Rendimento: 1,37 g (58% teórico).

Método 2:

[155] Passo 1: tratou-se uma solução de intermediário 9A (2,3 g, 9,69 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) com uma solução 4 M de cloreto de hidrogênio em 1,4-dloxano (24 mL, 96,9 mmol) e agítou-se à temperatura ambiente durante 130 minutos. Depois, filtrou-se a suspensão, lavou-se o precipitado com 1,4-dioxane (5 mL) e secou-se sob uma pressão hípobánca para se obter 20 1,01 g (54% teórico) do composto intermediário cloridrato de 1-amíno-4~ (clorametíl)-1H-pirrale-2~carbonitrilo.

[156] Passo 2: díssolveu-se cloridrato de 1 -amino-4-(clorometil)-1 H-pirroie2-carbonitrik> de passo 1 (0.3 g, 1,82 mmol), preparado no momento, em etanol (10 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 5 minutos. Tratou-se a * 25 solução límpida com acetato de formamidina (813 mg, 7,81 mmol) e fosfato de potássio (1,66 g, 7,81 mmol) e agítou-se, em primeiro lugar, à temperatura ambiente durante 3 dias e depois a 80°C durante 10,5 horas. Adicionou-se mais acetato de formamidina (488 mg, 4,69 mmol) e agitou-se a mistura durante mais 18 horas a 80°C. Arrefeceu-se então a mistura até à temperatura 30 ambiente e adicionou-se água e acetato de etílo. Separou-se a fase orgânica e

82/265 extraiu-se a fase aquosa duas vezes cem acetato de etílo. Lavou-se as fases orgânicas combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa mistura de metanol e diclorometano, adsorveu~se através de terra de 5 diatomáceas, secou-se sob uma pressão hipobârica e, finaimente, purificou-se por cromatografia através de gel de silica (gradiente 0%~W% da metanol/diclorometano) para se obter 260 mg (78% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 3): L ~ 2,02 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 193 (M*H)*.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d«): δ - 7,77 (s, 1H), 7,59-7,74 (s ir., 2H), 7,56 (s. 1H), 6,82 (s, 1H), 5,76 (s, 1H), 4,46 (s, 2H), 3,46 (q, 2H), 1,13 (t, 3H) p.p.m..

Intermediário 1SA [157] 4-Amino-6-(etoximetil)-pirraiu[2,1 -f][l ,2,4]triazina-7-carbaldeído

[158] A uma solução de 2,1 g (10,9 mmoi) de intermediário 14A em 40 mL de DMF anidra adicionou-se, gota a gota, 5,1 mL (54,6 mmoi) de cloreto de fosforilo, a 0°C e sob uma atmosfera de argon, Agitou-se a mistura a 60°C durante 10 horas. Depois, adicionou-se cuidadosamente água e agitou-se a mistura à temperatura ambiente até todos os intermediários reativos terem sido destruídos (coníroio por HPLC), Neutralizou-se a solução acídica com uma soiuçáo aquosa de hidróxido de sódio 1 M e extraiu-se três vazes com acetato de atilo. Lavou-se as fases orgânicas combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfata de magnésio e evaporou-se sob pressão reduzida.

Rendimento: 1,94 g (pureza de 90%, 81% teórico).

LC-MS (método 5): t_r ~ 1,49 minutos; MS (ESlpos): m/z - 221

83/265 'H-NMR (400 MHz, DMS0-d₆); δ - 10,36 (s, 1H), 8,14-8,26 (m, 2H), 8,07 (S, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,76 (s, 2H), 3,58 (q, 2H), 1,20 (t, 3H) p.p.m..

Intermediário 16A [159] 4-Amino-5-bromo-6-(etoximetil)“pirrolo[2₅1 -f][1,2,4]triazina-75 earbaldeido pH.

/ (186] A uma solução de 73 g (0,33 mol) de intermediário 15A em 1,9 L de DMF adicionou-se, gota a gota, uma solução de 65 g (0,37 moi) de NBS em 200 mb de DMF, a -15^;>C. Deixou-se aquecer a mistura até 0°G e agitou-se 10 durante 3 horas a esta temperatura. Verteu-se a mistura de reação numa solução aquosa de tlossulfato de sódio a 2% sob agitação, removeu-se per filtraçâo o precipitado, lavuu-se com água e secou-se sobre pentoxide de fdsfore sob uma pressão hipobarica.

Rendimento: 85,6 g (86% teórico).

LC-MS (método 2): t ~ 0J6 minuto; MS (ESIpos): m/z ~ 299/301 (M+H)\ [161] ’H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ =* 10,36 (s, 1H). 8,62 (s In, 1H), 8,13 (a, 1H), 7,22 (s lr., 1H), 4,68 (S, 2H), 3,49 (q, 2H), 1,10 (t, 3H) p.p.m..

Intermediário 17A [152] 4-Amino~6-(etuximetil)-5-(7-metcxi~5-metil1 -benzotiofeno-2-il)20 plrrule[2,1 -f][1,2..4]triazina-7-carbaldeido

84/265

[163] Sob uma atmosfera de árgon, colocou-se em suspensão 714 mg (pureza de 85%, 2,03 mmo!) de intermediário 16A, 946 mg (2,84 mmel) de intermediário 6A e 160 mg (0,2 mmol) de (2^! aminobifenií-2-il)-(cloro)~paíádio- dicíclo-hexíl-ía^ie^triisopropilbifenií-a-iO-fosfina (1:1; ver S< L· Buchwald et a/, J. Am. Chem. Soo. 132 (40), 14073-14075 (2010)) em 15,5mldeTHF. Depois, adicionou-se 15,5 mL de uma solução aquosa de fosfato de potássio 0,5 M desgaseifícada e agitou-se a mistura a 50°C durante 16 h. Depois de se adicionar água,, extraiu-se a mistura com acetato de atilo, secou-se as fases 16 orgânicas combinadas sob sulfato de magnésio e evaporou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna através de gel de silica (100 g), com 10%-50% de acetato de etílo/ciclo-hexano como eluente. Rendimento: 452 mg (75% puro por HPLC, 42% teórico).

LC-MS (método 5): t_r ~ 2,38 minutos; MS (ESlpos): m/z « 397 (Μ-ι-Η)Λ ¹H-NMR (400 MHz. DMSO-d₈): ó - 10,50 (s, 1H), 8,42 (s Ir., 1H), 8,21 (s, 1H), 7,43 (S, 1H), 7,33 (S, 1H), 6,87 (S, 1H), 6,07 (s Ir, 1H), 4,63 (s, 2H), 3,96 (S, 3H), 3,40 (q, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,02 (t, 3H) p.p.m..

Infermediánc 18Â [164] (4-Amino-57-dibromopirrolo[2,1 <1,2,4]triazina-6-ii)-metanol

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[165] Tratou-se urna solução de intermediário 8A (5 g, 36,4 mmol) em THF (100 mL) com TS-dibromo-S.S-dimetil-hidantoína (9,58 g, 33,5 mmol) e agítouse à temperatura ambiente durante 2 horas. Removeu-se par filtração o 5 precipitado e secou-se sob uma pressão hipobárica para se obter 6,60 g (64% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,56 minuto; MS (ESlpos): m/z 321/323/325 (M+Hf.

’H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ ~ 8,23 (s Ir., 1H), 7,96 (s, 1H). 6,94 (s Ir., 1H),

5,09 (s Ir.., 1H), 4,43 (s, 2H) p.p.m..

I ntermediárto 19A [166] (4-Amlno-5-bromopirrolo[2_í1-f](1 _f2,4]triazína~6-il)-metanol

[167] Aqueceu-se uma suspensão de intermediário 18A (3,7 g, 11,5 mmol) em THF (800 mL), sob agitação, até se obter uma dissolução completa..

Arrefeceu-se então a mistura até ~78^í:>C e adicionou-se, gota a gota, uma solução 1,6 M de n-butíl-litlo em hexanes (20 mL, 32,1 mmol). Decorridos 5 minutos, adíoionuu-se mais uma porção da solução 1,6 M de n-butil-lítio (1,5 mL, 2,29 mmol). Agitou-se a mistura resultante a -78°C durante 5 minutos, depois exiinguiu-se com metanol (5 mL) e aqueceu-se até á temperatura ambiente. Diluiu-se a mistura de reação com uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio, uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonate de sódio, uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e acetato de etilo. Após a separação de fases, lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, Extraiu-se novamente as fases aquesas

86/265 combinadas com acetato ds atilo. Lavou-se as fases orgânicas combinadas novamente com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se para se obter 2,87 g de produto impuro, que se utilizou nos passos subsequentes sem mais purificação.

LC-MS (método 3): t_;- ~ 1,73 minutos; MS (ESlpos): m/z 243/245 0VkH)⁺.

(400 MHz. DMSO-de): δ - 8,41-7,89 (s In. 1H), 7,82 (s. 1H), 7,66 (S, 1H), 7,13-6.48 (s Ir., 1H), 5,11 (t, 1H), 4,45 (d, 2H) p.p.m..

Intermediário 2ÕA [168] [4-Amino-5~(7-metoxi-5~metii-1 -benzotiofeno-2-íl)-pirroio[2,1 -f][1,2,4]10 triazina-8-iO-metanoi

[168] Sob uma atmosfera de árgon, desgaselfioou-se uma suspensão de intermediário 19A (70% de pureza, 2,52 g, 7,26 mmol), intermediário 6A (3,63 g, 10,9 mmol) e fluoreto de césio (5,51 g, 36.3 mmol) numa mistura de 15 THF/água (a 10:1; 80 mL). Adicionou-se 4-(dí-terc-butilfusfino)-N.Ndimetilanilina-dicloro-paládio (2:1; 176 mg, 0,248 mmol). desgaseíficou-se novamente a mistura resultante e agitou-se a 50°C durante 16 horas. Lavou-se então a mistura de reação oom uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, separou-se a camada orgânica, secou-se sob sulfato de magnésio, 20 filtrou-se e evaporou-se. Colocou-se em suspensão o resíduo em metanol, removeu-se por filtração o sólido resultante e secou-se sob uma pressão hipobárlca para se obter 1,97 g (30% de pureza, 72% teórico) do composta em epígrafe.

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LC-MS (método 2): t_f - 0,85 minuto; MS (ESIpos): m/z ~ 340 (M+Hf.

’H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ 7,91 (s, 1H), 7.5-8,1 (S lr„ 1H), 7,72 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,84 (s_; 1H), 5,5-6,0 (S ir„ 1H), 5.06 (t< 1H), 4,49 (d, 2H). 3,95 (s, 3H), 2,45 ($, 3H) p.p.m.,

Intermediário 21A

6-(Metoximetil)~5-(7-metoxi-5~matii-1 -benzotiofeno-2-il)-pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina-4~amina

(178] Tratou-se uma solução de intermediário 20A (400 mg, 1,17 mmol) 10 em diclorometano (12 mL) com cloreto de tionilo (128 μΐ, 1,76 mmol) e agitouse à temperatura ambiente durante 15 minutos. Após evaporação, retomou-se o resíduo em metanol (12 mL) e tratou-se com DIPEA (409 pL, 2,35 mmol). Manteve-se a mistura ac refluxo de um dia para o outro e depois evaporou-se novamente. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica 15 (díclorcmetano/metanol, 98:2 ···> 95:5) para se obter 388 mg (93% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): Ç ~ 1,00 minuto; MS (ESlpos): m/z - 355 (M i H)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ - 7,93 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,31 (S, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,38 (S, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,22 (s, 3H), 2,45 (s, 3H) p.p.m..

Intermediáno 22A [171] 6-(Etoximetíl)-5-(7-metoxi-5~.metil-1~benzotiofeno-2-il)-pirroio[2,1-f]~ [1,2,4]tnazína-4-amina

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[172] Tratou-se o intermediário 20A (200 mg, 587 p.mol) em diclorometano (5 ml) com cloreto de tíonilo (64 pL, 881 p.mcl) e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 minutos. Após evaporação, manteve-se o resíduo ao 5 refíuxo em etanol (5 mL) durante 1 hora, depois tratou-se com DIPEA (204 pL, 1,17 mmoi) e manteve-se novamente ae refluxo de um dia para o outro. Evaporou-se a mistura de reação e purificou-se o produto impuro por oromatografia em coluna através de gel de silica (diclorometano/metanol, 98:2 --> 95:5) para se obter 202 mg (90% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 5): t_r - 2,32 minutos; MS (ESípos): m/z - 369 (M-rHf, ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ * 8.31-7,59 (s Ir., 1H), 7,93 (S, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,20-5,50 (s Ir., 1H), 4,41 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,41 (q, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,08 (t, 3H) p.p.m..

Intermediário 23A

4-{[4-Amino-6-(hidroximetil)-5-(7-metoxi-5-metil“1 -benzotiofeno~2-il)-pirrolo-[2,1 Q[i ,2,4]triazina-7“íl]-nietií}-pípera.zina-l-carboxilato de terc-butilo

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[173] Tratou-se uma solução de Intermediário 20A (9,5 g, 27,9 mmol) em ácido acético (136,8 mL) com piperazina-1-carboxilato de terc-buíilo (6,24 g, 33,49 mmol) e oom uma solução aquosa de formaldeído a 37% (2,5 mL, 33,49 mmol). Agitou-se a mistura a 60°C durante 2,5 horas. Após evaporação, retomou-se o resíduo em acetato de etilo, lavou-se a mistura duas vezes com uma solução aquosa saturada de hldrogeno-carbonato de sódio, seoou-se sob sulfato de sódio e evaporou-se. Triturou-se o resíduo em etanol em ebulição (100 mL). Removeu-se por (iltração o sólido e lavou-se com éter dietílico para 10 se obter 9,70 g (58% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2)i t- ~ 0,88 minuto; MS (ESipos): m/z - 539 (MrH)⁺.

Ή-NMR (400 MHz, CDCI₃)’. δ 7,94 (s, 1H), 7,13-7,35 (m, 2H, sobreposição com 0 pico de CHCh), 6,67 (s, 1H), 5,86 (S Ir,, 1H), 5,54 ($ Ir., 2H), 4,68 (s, 2H), 4,08 (S, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,45 (S Ir., 4H), 2,59-2,48 (m, 7H), 1,45 (S, 9H) p.p.m..

Intermediário 24A [174] 4-({4-Amino-5-(7-metoxí'5-metil-1-benzôtiofeno-2-il)-6-[(2-metoxi~2axoetoxi)-metíl]~pirrulo[2,1-f](1,2,4]triazina-7-ií]-metíl)-piperazína-1-carboxílato de terc-butilo

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[175] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (300 mg, 556 pmoi) em díciorometano (12 mL) com cloreto de tionlio (81 ut, 1,11 mmoi) e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 minutos. Após evaporação, dissolveu-se o resíduo em metilglícoiato destilado no momento (2,5 mL) e tratou-se com DIP EA (485 μΐ., 2,78 mmoi). Agitou-se a mistura a 7Õ°C durante 2 horas, depois evaporou-se novamente e removeu-se o excesso de metilglícoiato por destilação. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna através de gel de silica (ciclo-hexano/acetato de etilo a 1:5) para se obter 136 mg (33% 10 teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t ~ 0,88 minuto; MS (ESipos); m/z ~ 611 (M+H)T •H-NMR (400 MHz. DMSO«d$): δ ~ 7,99 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,85 (S, 1H), 4,58 (S, 2H), 4,11 (s, 2H), 3,96 (S. 3H), 3,93 (S, 2H), 3,57 (s, 3H), 3,303,24 (m. 4H), 2,45-2,38 (m, 7H), 1,39 (s, 9H) p.p.m.,

Intermediário 25A [176] 4-{(4-Amino-6-foFmil-5~(7-metoxí-5-metií-1-benzutiofeno-2~ii)pírroio(2,1 -f]-[1,2,4]triazina-7-il]-metíl}-piperazina-1 -carboxilato de terc-butiío

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[177] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (300 mg, 556 μπιοΙ) em dícloremetano (4.2 mL) com períodinano de Dess-Martin (l,1,l-triacetoxi-1<l-díhídro-1,2~benziodoxoí-3(1H)-ona; 307 mg, 724 μίποΙ) e agitou-se à temperatura ambiento durante 2 horas. Extinguíu-se a mistura de reação com uma solução aquosa saturada de hídrogeno-carbonato de sódio e uma solução aquosa saturada de tíossulfato de sódio (1:1) e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Extraiu-se a camada aquosa três vezes com diclorometano. secou-se as camadas orgânicas combinadas sob sulfato de 10 magnésio e evaparou-se. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (cicio-hexano/acetato de etiio, 1:1 ····> 100% de acetato de etiio) para se obter 273 mg (87% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): 8 ~ 0.87 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 537 (M+Hf.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d§): d « 10,02 (s. 1H), 8.44-8,18 (s Ir., 1H). 8,08 (s. 15 1H). 7.51 (S, 1H), 7,32 (s, 1H). 6,88 (S, 1H). 6,01-5.74 (s Ir., 1H), 4,16 (s. 2H),

3,96 (S, 3H), 3,30-3,22 (m, 4H). 2.48-2,40 (m, 7H). 1.38 (s, 9H) p.p.m..

intermediário 28A [178] Bis-(formiatc) de 4amino-8-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotiofeno~2-il)-7(piperazína-1 -ilmetil)-pirruluÍ2,1 -f][1.2,4]tríazína-6-carbaldei'do

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[179] Tratou-se uma solução da intermediário 23A (80 mg_f 148 umol) em THE (3,9 ml.) com periodínano de Dess-Martin (1,1,1-tnacetoxí-1_:1-di~hldro-i,2benziodcxol~3(l H)-ona; 94 mg, 222 umol) e agitou-se à temperatura ambiente 5 durante 30 minutos. Extinguiu-se a mistura de reação com uma solução aquosa saturada de hídrogeno-carbonato de sódio e uma solução aquosa saturada de tlossulfato de sódio (1:1). Extraiu-se a camada aquosa três vezes com acetato de atilo, seceu-se as camadas orgânicas combinadas sob sulfato de magnésio e evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 10 4 M em 1,4-dioxano (4 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora.

Após evaporação, purificou-se c resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil G18, gradiente 1034-9534 de acetonltrllo/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 34 mg (52% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t< ~ 0,78 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 437 (M+H) \ (400 MHz. DMSO-d_g): δ 10,02 (s, 1H), 8,29 (s Ir., 2H), 8,09 (s, 1H),

7,50 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,88 (S.JH), 4,17 (s, 2H), 3,96 (s_. 3H), 2,90-2,81 (m, 4H), 2,63-2,56 (m, 4H), 2,46 (s, 3H) p.p.m.. Intermediário 27 A [188] 4-({4-Amino-5-(7-metexi~5-metil-1-benzotiofeno~2-il)-6-[(320 oxopiperazlna-1 -iQ-metilJ-pirrelo^, 1 -f][l ,2,4]triazina-7-il}-metil)-piperazina-1 carboxílato de terc-butilo

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[181] Tratou-se uma solução de intermediário 25A (185 mg, 344 p.mol) em THF (4,6 mL) com 2toxopiperazina (344 mg, 3,4 mmol), triacetoxlbore-hidreto de sódio (365 mg, 1,7 mmol) e ácido acético (39 μΡ, 689 pmol). Agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 2 horas, depois adsorveu-se sobre terra de díatomáceas e purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (dlcíorometano diclorometano/metanol a 100:8) para se obter 221 mg (quant,) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_r ~ 0/77 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 621 (M+H)\

Intermediário 28A [182] 4-Amina-7~{[4-(terc-butoxicarbonil)“Piperazina-1 -íl]-carbonil}-5-(7metoxi-S-metiLl -benzotiofeno-2-il)-pirrolo[2₅1 -f][1,2,4]triazina-6-carhQxílato de N-atií-etanaminio

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[1S3] Tratou-se uma solução de intermediário 25A (70 mg, 130 pmoi) em THF/água (a 10:1,4,85 mt) com uma solução 2 M de 2-metil-2-buteno em THF (521 μΐ, 1,04 mmol) e di-hidrogeno-fosfato de sódio (107 mg, 783 p.mol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 5 minutos. Adicionou-se clorito de sódio (70 mg, 783 μτηοΙ) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após diluição com água, extraíu-se a tase aquosa três vezes com acetato de etilo. Secou-se as camadas orgânicas combinadas sob sulfato de sódio, evaporou-se e purificou-se o resíduo por RP10 HPLC preparativa (XBridge C18, gradiente de 5%-50% de acetonitrilo/água + 0,05% de dietilamina) para se obter 18 mg (21% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 1); 6 ~ 1,14 minutos: MS (ESlpcs): m/z ~ 567 (M+Hp, ^!H-NMR (400 MHz, DMSO-df·): infera/., δ = 8,26-7,89 (s Ir., 1H), 7,94 (s, 1H), 15 7,33 (S_s 1H), 7,28 (S, 1H), 6,83 (S, 1H), 5,64-5,33 (S ir., 1H), 3,95 (S, 3H), 2,80 (q, 4H), 2,45 (S, 3H), 1,40 (s, 9H), 1,09 (t, 6H) p.p.m..

Intermediário 29A [184] 4-{[4-Amino-6-(azidcmetil)-5-(7-metoxi-5-metil-1-benzotiofeno-2-il)pirrolo-[2,1 -f][1,2,4]tnazina-7-íl]~mstil}'piperazina-1 -carboxiiato de terc-butiio

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ΟΠΗ 85] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (150 mg. 0,278 mmol) em diclcrometano (7,5 mL) com cloreto de tionlle (40 ^L, 0,56 mmol) e agitouse à temperatura ambiente durante 15 minutos. Após evaporação, dissolveu-se 5 o resídua em DMF (6 ml) e tratou-se com azida de sódio (362 mg, 5,57 mmol) e iodate de sódio (208 mg, 1,39 mmol). Aqueceu-se a mistura até 8Ô°C durante 1 hora, depois diluiu-se com água e extraiu-se três vezes cem acetato de etilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas com égua e com uma solução aquesa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e 10 evaporou-se. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (cíoio-hexano/acetato de etilo, 98:2 100% de acetato de etilo) para se obter

95,8 mg (57% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (rnétede 4): t ~ 0,99 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 564 (M-t-H)'.

*H-NMR (400 MHz, DMSO-íU): δ = 8,26-7,80 (s Ir., 1H), 8,01 (S, 1H), 7,39 (s, 15 1H), 7,33 (S, 1H), 6,86 (S, 1H), 6,65-5,55 (S Ir., 1H), 4,50 (S, 2H), 3,96 (S, 3H),

3,94 (s, 2H), 3,32-3,25 (m, 4H), 2,45 (s, 3H), 2,43-2,36 (m, 4H), 1,39 (s< 9H) p.p.m..

Intermediário 30A [186] 4-{[6-(Auetamidcmetil)-4~amino-5-(7-metoxi-5-metil-1-benzutiofene20 2-il)-pirrolo[2,1 -f|(1,2₍4]tnazina~7-iO-metil}~p^P^zina-1 -carboxilato de terc-butílo

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[187] Agítou-se uma mistura de intermediário 29A (320 mg, 567 umol), Pd a 10%/C (320 mg) e anidrido acético (106 p.L, 1,13 mmoi) em metanol (32 ml), durante 90 minutos a 1 atm em ambiente de hidrogênio e à temperatura ambiente, Fíltrou-se então a mistura através de terra de diatomáceas e evaporou-se o filtrado. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (ciclo-hexano/acetato de etilo 1:1 ···> 100% de acetato do etíio) para se obter 440 mg (quant,) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f » 0,91 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 580 (IVh-H) \ 'H-NMR (400 MHz, DMSO~d_$): δ * 8,02-7,97 (m, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,27 (d In, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,89 (s, 2H), 3,31-3,24 (m_f 4H), 2,45 (S, 3H), 2,43-2,36 (m, 4H), 1,74 (S, 3H), 1,39 (S, 9H) p.p.m..

Intermediário 31A [188] 7»[(4-Acetilpiperazina-1 •il)“metil]4-amino-5-(7metoxi~5-metil-1 - benzotiofeno”2-il)-pírrolo(2,1 -f][1,2,4]triazina-8~carbaldeído

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[189] Tratou-se uma solução do exemplo 55 (678 mg, pureza de 89%, 1,26 mmol) em diclorometano (4 mL), que contém crívos moleculares (4Â), com periodinano de Dess-Martin (1,1,1 -triacetoxi-1,1 ~di~hidro-1,2-benzíodoxol-3(1 H)- ona; 623 mg, 1,47 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 5 minutos. Adsorveu-se então a mistura de reação através de terra de diatomáceas e purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de siliea (gradiente de 30%~100% de acetato de etilo/ciclo-hexano e depois 0%~ 10% de metanoí/diclorometano) para se obter 449 mg (49% teórico) do 10 composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_r 0,70 minuto; MS (ESlpos): m/z - 479 (W.

Intermediário 32A [190] 4-{[4-Amino-6-(azidometii)~5-(7-metoxi-5-metil-1~benzotiofeno-2-il)pirrolo~[2,1 ~f][1 _y2,4]tnazina-7-iipmetil}-piperaz.ina-2-ona

98/265

[191] Tratou-se uma solução do exemplo 13 (59 mg, 130 pmo!) em díclorometano (3,5 mL) com cloreto de tionilo (19 ^L, 261 .umol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 minutos, Após evaporação, dissolveu-se o resíduo em DMF (2,8 mL) e tratou-se com iodeto de sódio (97 mg, 652 pmol) e azída de sódio (169 mg, 2,6 mmol). Agitou-se a mistura a 80°C durante 1 hora. Após diluição com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, extraiuse a fase aquosa quatro vezes com acetato de etilo, secou-se as camadas orgânicas combinadas sob sulfato de magnésio e evaporou-se. Purificou-se por 10 cromatografia em coluna através de gel de silica (diclorometano/metanol, 98:2 ···> 90:10) para se obter 35 mg (56% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 5): Ç - 2,94 minutos: MS (ESlpos): m/z. 473 (M rH)L

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-dg): b - 8,02 (s, 1H), 7,75 (s lr„ 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 4,51 (S, 2H), 4,01 (S, 2H), 3,96 (S, 3H), 3,16-3,08 (m, 15 2H), 3,04-2,93 (m, 2H), 2,65-2,58 (m, 2H), 2,45 (s, 3H) p.p.m.,

Intermediário 33A [192] 4-Amina-5~(7-metoxí-5-metíl~t-benzotiofeno-2~il)~7-(morfaíina-4ilmetií)-pirrolo[2,1 -f]( 1,2.4]triazina-6-carbaldeido

99/265

[193] Tratou-se uma solução do exemplo 50 (710 mg, pureza de 70%, 1,13 mmol) em dlclorometano (5 mL), que contém crivos moleculares (4Â), com periodinano de Dess-Martin (1,1,1 -triacetoxi-1,1 -di-hidro-1 ,2-bensíodaxoí-3(1 H)- ona; 623 mg, 1,47 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 5 minutos. Adsurveu-se então a mistura de reação através de terra de diatomáceas e purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (gradiente de 30%-100% de acetato de etilo/ciclo-hexano) para se obter 386 mg (72% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t = 0,76 minuta; MS (ESlpos): m/z - 438 (M-s-H)·.

Intermediário 34A [194] (4-Amino-7-bromopirrolo[2, t -f](1, 2,4]triazina-6-il) -metanol

[195] Adicionou-se, gota a gota, uma solução de 1,3-díbromo~5,6~dimetii15 hidantoína (87 mg, 0,306 mmol) em THE (1 mL) a uma solução de intermediário 8A (100 mg, 0,609 mmol) em THF (4 mL) e metanol (2 mL), a 78°C. Agitou-se a mistura a -78°C durante 16 horas, depois dlíuíu-se com água e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas

100/265 com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sub sulfato de magnésio e evaporou-se. Purificou-se per cromatografia em coluna através de gei de silica (diciorometano/metanol, 20:1 .....> 10:1) para se obter 55 mg (32% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 3): t - 1,71 minutas; MS (ESlpos): m/z - 243/245 (M*H)\ 'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): ó « 7,74-7,94 (m, 3H), 7,04 (s, 1H), 5,12 (t, 1H),

4,48 (d, 2H) p.p.m..

Intermediário 3SA [1S6] 7~Bromo-6-({[terc-butil-(dimetíl)-sílíl]-oxi}-metil)-plrroio[2,110 f][1,2,4]tnazlna-4-amina

NH? fjfH_s ÇH.

^--x O—Si—r—CH.,

CCH Λ·

Br [197] Tratou-se uma solução de intermediário 34A (685 mg, 3,64 mmoi) em DMF (11 mL) com cloreto de tem-butildimetílsilllo (823 mg, 5,48 mmoi) e imidazole (748 mg, 10,92 mmoi) e agítou-se à temperatura ambiente durante 2 horas, Combinou-se a mistura de reação com a mistura de reação de um ciclo de teste de 100 mg. diluiu-se com água e extraiu-se duas vezes com acetato de etilo. Lavou-se as fases orgânicas combinadas com água e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio a evaporou-se. Purificou-se por cromatografia em coluna através de 20 gei de silica (clclo-hexanc/acetato de etilo 2; 1 ····> 100% de acetato de etilo) para se obter 1,38 g (93% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t -1,13 minutos; MS (ESlpos): m/z - 357/359 (M*H)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): ó ~ 7,98-7,68 (m, 3H), 7,04 (s. 1H), 4,68 (s, 2H), 0,89 (S, 9H), 0,09 (s. 6H) p.p.m..

Intermediário 36A [198] 4-Amíno-6-({[terc-butil~(dimetil)-sili0'Oxi}~metil)-pírrale[2,l··

f][1,2,4]tnazina-7-oarbunitrílo

101/265

Γ^9] Sob uma atmosfera de árgon, preparou-se uma mistura de intermediário 35A (880 mg, 2,46 mmoi), complexa [I.V-bisfdifenilfosfino)ferrocencj-diuIora-palâdíoÚP-dicíarometana [PdCMdppf) x DCM] (120 mg, 5 0,148 mmoi), bis-(dibenzilideno~acetona)~paládio (Pd(dba)J (135 mg, 0,148 mmoi), cianeto de zlnoo (578 mg, 4,92 mmoi), zinco em pó (64 mg, 0,985 mmoi) e acetato de zinco (180 mg, 0,985 mmoi) em DMF desgaseificada/água (a 100:1, 9,2 mL) e agitou-se a 160°C de um dia para o outro. Combinou-se então a mistura de reação com a mistura de reação de um cicio de teste de 100 10 mg, adsorveu-se as misturas combinadas em terra de diatomáceas, filtrou-se através de uma outra camada de terra de diatomáceas e eluiu-se éter terc-butilmetílico. Lavou-se o filtrado com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbooato de sódio e extraiu-se novamente a camada aquosa três vezes éter terc-butil-metílico. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de 15 sódio e evaporou-se. Purificou-se por crumatografía em coluna através de gel de sílíc-a (ciclo-haxano/acetato de etilo a 1:1) para se obter 453 mg (44% teórico) do composta em epígrafe.

LC-MS (método 2): t,- ~ 1,09 minutos; MS (ESipos): m/z » 384 (M+H)\ ^H-NMR (400 MHz, DMSO--de): δ = 8.22-8,35 (m, 2H), 8,06 (S, 1H), 6,95 (s, 1H), 20 4,83 (s, 2H), 0,91 (S, 9H), 0,11 (s, 6H) p.p.m..

Intermediário 37 A [200] 4Amino-5-bromo-6-({[terc-buti!~(dimetil)-silii]-oxi}-metil)~pirrolo[2,1-

f][l ^Aj-tnazina-T-carbunitrilo

102/265

CN [201] Adicionou-se, gota a gota, uma solução de 1 ,3-dibromo-5,5-dímetilhidantoína (621 mg, 2,17 mmol) em THF (20 mL) a uma solução de Intermediário 36A (1,1 g, 3,62 mmol) em THF (80 mL), a ·50^δ0. Aqueceu-se lentamente a mistura resultante até à temperatura ambiente, agitou-se durante 2 horas e depois extínguíu-se com uma solução aquosa de tíossulfato de sódio a 10% e uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio. Extraiu-se a fase aquosa três vezes oom acetato de etilo. Removeu-se por filtração o sólido precipitado a partir da solução de acetato de etilo e lavou-se 10 com acetato de etilo para se obter 508 mg (100% de pureza, 36% teórico), como primeira colheita do composto em epígrafe. Secou-se o filtrado restante sob sulfato de sódio e evaporou-se. Fez~se precipitar o resíduo a partir de DMSO e lavou-se oom DMSO e com acetato de etilo para se obter mais 498 mg (85% de pureza, 26% teórico) do composto em epígrafe.

LC MS (método 5): L - 2,70 minutos: MS (ESlpos): m/z - 382/384 (M+Hf.

Ή-ΝΜΗ (400 MHz, DMSO-d_s): δ - 8,10 (s, 1H), 4,76 (s, 2H), 0,90 (s, 9H), 0,12 (s, 6H) p.p.m..

Intermediário 3^A [202] 4-Amlno-6-({[terc-butil-(dímetH)-siliO -cxi}-metil)-5-(7-metoxi~5-metil-1 20 banzo-t.íofeno-2-ii)-pirrolo[2,l -f|n ,2,4]trlazina-7~carbonitnlo

103/265

QN (203] Sob uma atmosfera de árgon, adicionou-se uma solução de intermediário 37A (459 mg, 1,29 mmol) em THF desgaseificado (14,8 mL) a (2^!~ aminobifenil-S-íQ-iólurol-paládio-diciclQ-hex^O^Lô^triisupropilbifenil-a-il)- fusfina (1:1; 152 mg, 0,19 mmol; ver S. L Buchwald aí a/., d. Am. Chem. Soo. 132 (40), 14073-14075 (2010)) e intermediário 6A (647 mg, 1,94 mmol). Adicionou-se, gota a gota, uma solução aquosa de fosfato de potássio 0,5 M desgaseíficada (5,1 ml) e agitou-se a mistura resultante a 60°C durante 2 horas. Combinou-se então a mistura de reação com as misturas de reação dos 10 cioles de teste anteriores de 70 mg, 90 mg e 500 mg e evaporou-se. Puríficouse o resíduo por cromatografia em coluna através de gel de silica (oiclohexano/acetato de atilo 3:1 -> 100% de acetato de etilo) para se obter 1,0 g (58% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f - 1,49 minutes; MS (ESlpos): m/z ~ 480 (M+Hf.

^H-NMR (400 MHz, DMSO-íU δ ~ 8,57-8,35 (s Ir., 1H), 8,18 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,30 (S, 1H), 6,86 (S. 1H), 6,28-6,03 (s Ir., 1H), 4,74 ($, 2H), 3,95 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,00 (S, 6H) p.p.m..

Intermediário 39A [204] 4-Amino-6-formil-5-(7~metoxi-5-metil-1 -benzotiofenc-2-íl)-pirrolo[2,1 -

f]-(1,2.4]triazina-7~carbonitnio

104/265

HX

n ,CH.,

[205] Tratou-se uma solução do exemplo 68 (250 mg, 0,684 mmol) em diclorometano (5 mL) com periodlnano de Dess-Martin (1,1,1'tdacetoxi-1,1-dihidfu-l,2~benziodoxol-3(1H)-ona: 377 mg, 0,889 mmol) e agitou~se a temperatura ambiente durante 1 hora. Combinou-se a mistura de reação com a mistura de reação de urn ciclo de teste de 56 mg, extinguiu-se com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e uma solução aquosa saturada de tíossulfato de sódio (1:1) e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Extraiu-se a fase aquosa três vezes cem acetato 10 de etilo, secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de sódio e evaporou-se. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (clclo-hexano/25% de acetato de etilo ·> 106% de acetato de etilo) para se obter 102 mg (24% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 1,02 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 364 (M+H)*.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ ~ 9,86 (s, 1H), 8,78 (s Ir., 1H), 8,30 (s, 1H), 7,62 (S, 1H), 7,36 (S, 1H), 6,91 (S, 1H), 6,51 (s Ir., 1H), 3,97 (s, 3H), 2,46 (S, 3H) p.p.m..

Intermediário 40A [206] 4~Amíno-6-(axidometíl)-5~(7-metQxi-5-metil-1 -benzotiofeno-2-íl)20 pirroio[2,1 ~f][ 1,2.4]triazina-7-carbonitrilo

105/265

[207] Tratou-se uma solução do exemplo 68 (100 mg, 273 pmol) em diclorometano (5 mL) com cloreto de tionilo (39 pL, 547 pmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 minutos. Após evaporação, dissolveu-se o resíduo em DMF (6 mL) e tratou-se com lodeto de sódio (205 mg, 1,36 mmol) e com azida de sódio (355 mg, 5,47 mmol). Agitou-se a mistura a 80°C de um dia para o outro, depois diluiu-se com água e extraiu se três vezes com acetato de etilo, Lavou-se as camadas orgânicas combinadas com água e depois com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de 10 sódio e evaporou-se para se obter 91 mg de produto impuro, que se utilizou no passo subsequente sem mais purificação,

LC-MS (método 2): t_f ~ 1.13 minutos: MS (ESlpos): m/z ~ 391 'H-NMR (400 MHz. DMSO-d«): d - 8,65-8,45 (s Ir,. 1H), 8.23 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7,34 (s. 1H), 6,88 (s, 1H), 6,41-6,10 (s Ir., 1H). 4,57 (s, 2H), 3,96 (s, 3H).

2.46 (s, 3H) p.p,m„

Intermediário 41A [208] 5,7-Dlbromo-6({(terc-butib(dimetil)-silil]-oxi}-metil)-pirrolo[2,1 ~ f|[1,2.4]-triazina-4-amína

106/265 (209] Tratou-se uma solução de intermediário 18A (2 g, 6,21 mmol) em DMF (20 ml) com imidazole (846 mg, 12,4 mmol) e cloreto de tercbutildimetilsililo (1,12 g, 7,45 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 20 horas. Diluiu-se então a mistura de reação com água (200 ml) e agitou-se à temperatura ambiente durante mais 2 horas. Filtrou-se ο sólido para se obter

2,46 g (88% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 1,37 minutos: MS (ESlpos): m/z ~ 437 (M*H)',

Ή-ΝΜΑ (400 MHz, DMSO-dg): δ ~ 8,49-8,05 (s lr„ 1H), 7,96 (s, 1H), 7,15-6,76 (s Ir., 1H), 4,64 (s, 2H). 0.87 (s, 9H), 0,09 (s, 6H) p.p.m..

Intermediário 42A [210] 2-[4 -Amino-5-bromo-6-({[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxl}-metil)-pirroio[2,1-

f]-[l,2,4]triazina~7-il]-propano-2~cl

[211] Sob uma atmosfera de árgon, arrefeceu-se até ~78°C uma solução 15 de intermediário 41A (1 g, 2,29 mmol) em THF (40 mL) e tratou-se com uma solução 1,6 M de metil-lítio em éter dietíiíco (1,5 mL, 2,40 mmol). Depois de se agitar durante 10 minutos a ~78^aC, adicionou-se uma solução 1,6 M de n-butiílítio em hexanes (1,58 mL, 2,52 mmol) e manteve-se sob agitação durante 10 minutos. Adicionou-se acelona (1,68 mL, 22,92 mmol), aqueceu-se íentamente 20 a mistura resultante até à temperatura ambiente e agitas se à temperatura ambiente durante 18 horas. Extinguiu-se então a mistura de reação com água e » extraiu-se a fase aquosa duas vezes oom acetato de etile. Lavou-se as fases orgânicas combinadas cem uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-sa sob sulfato de magnésio e evaporou-se. Purificou-se por 25 oromatografia rápida através de gel de silica (ciclo-hexano/acetato de etilo a 2:1) para se obter 306 mg (30% teórico) do composto em epígrafe.

107/265

LC-MS (método 4): t> - 1,39 minutos; MS (ESIpos): m/z ~ 415/417 (M+H)\ MNMR (400 MHz, DMSO-d_e): δ « 8,23-7,85 (s lr„ 1H), 7,89 (S, 1H), 7,05-6,82 (S ir., 1H), 5,49 (s, 1H), 4,88 (s, 2H), 1,66 (s, 6H), 0,87 (s, 9H), 0,08 (s, 6H)

p.p.m.,

Intermediano 43A [212] 2-[4-Amino-5-bromo-6~(hidroximetil)-pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina-7-il] - propano-2-ol

[214] Tratou-se uma solução do intermediário 42A (304 mg, 0,732 mmol) 10 em THE (15 mL) oom uma solução 1 M de fluorato de tetra-n-butil-amonio em

THE (768 μΐ, 788 pmol) e agltou-se à temperatura ambiente durante 2 minutos. Diluiu-se a mistura de reação oom acetonitrile (20 mL), depois evaporou-se e purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosll C18, gradiente de 10%-30% de acetonítrilo/IFA aquoso a 0,2%), Dissolveu-se o produto assim 15 obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permeia aniónlca (Stratospheres SPE, PL-HCOs MP-resina). Efectuou-se a eleição do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 180 mg (67% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,55 minuto; MS (ESlpos): m/z - 301/303 (M-rH)L ’H-NMR (400 MHz. DMSO~d_$): δ - 8,21-7,90 (m, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,09-6,60 (s Ir., 1H), 5,90 (s Ir., 1H), 5,03 (s Ir., 1H). 4,63 (s, 2H), 1,66 (s, 6H) p.p.m..

Intermediário 44A [215] 4-Amíno-7-(2~hidrôxipropano-2-il)-5-(7-metoxi-5-metíl-1 benzotíofeno-2-íl)-pirrolo[2,1 -<1₅2,4]tnazina-6-carba!deído

108/265

[218] Tratou-se uma solução do exemplo 73 (135 mg, pureza de 89%, 302 pmol) em diclorometano (7 mL) com perlodinano de Dess-Martín (1,1,1tríacetoxi-1,1 -di-hldro-1,2-benziodoxol-3(1 H)-ona; 166 mg, 392 pmol) e agitou5 se à temperatura ambiente durante 70 minutos. Combinou-se a mistura de reação com a mistura de reação de um cicio de teste de 18 mg (45 pmol) e extinguiu-se ccm uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonata de sódio e uma solução aquosa. saturada de tiossulfato de sódio (1:1). Extraiu-se a fase aquosa três vezes com diclorometano. Lavou-se as fases orgânicas 10 combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou se sob sulfato de magnésio e evaporou-se para se obter 143 mg (pureza de 77%, 92% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2); t_r ~ 1,08 minutas; MS (ESlpos): m/z ~ 397 (M-tH)L Intermediário 45A

6-({[terc-Butil-(dimeíil)-silil) -oxi}-metil) -pirrclo(2,1 -f][l ,2,4|tnazina-4-amína

CFL CH_S

[217] Tratou-se uma solução de 1,5 g (9,14 mmol) de intermediário 8A em 15 mL de DMF anidra com 1.65 g (10,96 mmol) de cloreto de tercbutildimetilsíliio e 1,24 g (18,27 mmol) de imidazole e agitou-se à temperatura

109/265 ambiente de um dia para o outra. Verteu-se a mistura de reação em 250 ml de água a agitou-se durante 5 minutos. Removeu-se por fíltração o precipitado resultante e secou-se sob uma pressão hípobárica a 45°C. Rendimento: 2,28 g (90% teórico).

LC-MS (método 5): t- ~ 2,12 minutos; MS (ESipos): m/z 279 (M+H'f.

Intermediário 48A [218] 6-({[terc-8utíi-(dimetil) sllii]-oxí}-metíi)-7-ctoropírrolo[2_s1 -

[219] Tratou-se uma solução de 2 g (7,18 mmoi) de intermediário 45A em 20 mL de THF com 893 mg (6,47 mmoi) de N-cloro-succínímída em 6 porções, ao longo de 60 minutos a -10^<;<0. Manteve-se sob agitação durante 15 minutos a -10°C e depois deixou-se aquecer a mistura até à temperatura ambiente. Adícionou-se mais 192 mg (1,44 mmol) de N-oloro-succinimida à temperatura ambiente e manteve-se sob agitação de um dia para o outro. Evaporou-se cerca de um décimo da mistura de reação até à secura e purificou-se o residue por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente de 10%~95% de acetonitnlo/0,1% de ácido fórmico aguoso), para se obter 94 mg (4% teórico) do composto em epigrafe. Adsorveu-se a maior parte da mistura de reação 20 através de gel de silica e submeteu-se a erornatografia através de gel de silica, com isso-haxano/acetato de atilo 5%-66% como eluente, para se obter 899 mg (40% teórico) do composto em epígrafe. Rendimento total: 993 mg (44% teórico)..

LC-MS (mêtocto 5): t_f ~ 2,45 minutos; MS (ESipos): m/z « 313 (M-s-H)L ’H-NMR (400 MHz, DMSO-ds): δ = 7,69-8,04 (m, 3H), 7,0 (s, 1H), 4,70 (s, 2H), 0,88 (s, 9H), 0,08 (s, 6H) p.p.m..

110/265

Intermediário 47 A [220] 5~Bromo-6-({[terc-butil-(dimetil)~siliO-oxiFmetil)-7-chlor0pirrolo[2,l-f|[1,2,4]triazína-4-amina

[221] Tratou-se uma solução de 890 mg (2,85 mmol) de intermediário 46A em 20 mL de DMF com 506 mg (2,85 mmol) de N-bromo-succinimida, em porções, ao longo de 1 hora a -W°C. Manteve-se sob agitação durante 3 horas a -1Q°C e depois de um dia para o outro à temperatura ambiente. Adicionou-se água (200 mL) e agitou-se a mistura durante 2 horas. Removeu-se por filtração 10 o sólido precipitado, iavou~se oom água e secou-se sob uma pressão hipobárica a 45°C, Rendimento: 997 mg (89% teórico).

LC-MS (método 5): t_f ~ 2,82 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 301/393/395 (M-rH)L Ή-NMR (400 MHz, DMSO-df;): õ « 8,32 (s ir., 1H), 7,97 (s, 1H), 6,97 (s lr„ 1H), 4,66 (S, 2H), 0,87 (s, 9H), 0,09 (s, 6H) p.p.m,.

5 Intermediário 48A [222] 6-({[terc-8util-(dímetil)“Silil]-oxi}-metil)-7~cloro~5-(7-metoxi-5~metil-lbenzo-ilofeno-2 il)-pírrolo[2,1 -f)[1 ^ájtnazina-ã-amina

[223] Sob uma atmosfera de árgon, carregou-se um frasco com 800 mg

111/265 (2,04 mmol) de intermediário 47A,680 mg (2,04 mmol) de intermediário 6A, 80 mg (0,1 mmol) de (â^aminobifenn-S-ilj-iclaroj-paládío-dicícjo-hexilRSM/e¹triisopropilbifenil~2-il)-fosfina (1:1; ver S. L Buchwald et aí, V Am, Chem. Soo. 132 (40), 14073-14075 (2010)) e 1,3 g (6,13 mmol) de fosfato de potássio.

Depois, adicionou-se 30 ml de uma mistura desgaseificada de 1,4dioxano/água (a 6:1) e agitou-se a solução a 70°C durante 1 hora. Adicionou-se mais 680 mg (2,04 mmol) de intermediário 6A e 32 mg (0,04 mmol) de (2^ί3αίοοΡίίοπίΙ-2~ίΙ)-(οΙθΓθ)’Ρ3ΐηΟΙϋ'-άίαοΙο-ΚΘχΙί··(2\4^,>6^,4πίδορΓθρίΙ54θηϋ-2ηΙ)fosfina (1:1) e manteve-se sob agitação a 70°C durante mais 1 hora. Repetiu10 se este procedimento três vezes até se ter consumido o material de partida (controle por LC-MS). Com a última porção de reagentes. adícionou-se também 1:6 mL de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 5 M para se obter um valor de pH de 8-9. No final do período de reação, adicionou-se 30 mL de água e ácido fórmíco aquoso 5 M (pH 3-4), ocorrendo a separação de um óleo.

Puríficou-se uma parte deste óleo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente 1Ο%··95% de acetonitrílo/0,1% de ácido fórmíco aquoso). Obteve-se duas fracções do composto em epígrafe: 103 mg de um sólido (89% de pureza por LC-MS, 9% teórico) e 23 mg de um sólido (100% de pureza per LC-MS, 2% teórico). Diluiu-se a parte restante do óleo e o sobrenadante com água, ajustou-se até pH 8-9 com uma solução aquosa saturada de hidrogenuoarbonato de sódio e extraiu-se três vezes com diclorometano. Lavou-se as fases orgânicas combinadas com água, secou-se e evaporou-se sob pressão reduzida para se obter 2,1 g de um óleo. Purificou-se este material por cromatografia em coluna através de gel de silica, com diclorometa.no/0%-5% de 25 metanol como eluente. para se obter mais 709 mg (43% de pureza por LC-MS, 31% teórico) do composto em epígrafe. Rendimento total: 42% teórico.

LC-MS (método 2): t, ~ 1,57 minutos; MS (ESipos): m/z ~ 489 (M-r-Hf.

'H-NMR (409 MHz, DMSO~d₈): õ = 8,08 (s, 1H), 7,43 (s. 1H), 7,32 (s, 1H), 6,83 (S, 1H), 4,66 (s, 2H), 3,98 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 0,84 (s, 9H), -0,03 (s, 6H) 30 p.p.m..

112/265

Intermediário 49A «<¢¢¢w«w*o>¢>¢<***«***e***«¢*e¢*>******************^,*· [224] 4’Amino»7-cloro-'5(7’metaxp5“metíl 1 -benzotiofeno-2»il)-pirr0Ío[2,1 -

f]~[1,2,4]triazina-6-carbaldeid0

[225] A uma suspensão de 166 mg (0,44 mmoi) do exemplo 79 e crivos moleculares (3Â) em 3 mL de díclorometano adicionou-se 207 mg (0,49 mmol) de períodinano de Dess-Martin (1,1,1-triacstoxi-lJ-di-hidro-l^-benzIodoxol3(1H)-0na), a 0°C-5°C. Agítou-se a mistura durante 10 minutos a esta temperatura, depois adicionou-se mais 56 mg (0,13 mmol) de períodinano de 10 Dess-Martin e manteve-se sob agitação durante 15 minutos a Sⁱ⁵C e 10 minutos à temperatura ambiente, A seguir, adsorveu-se a mistura em terra de diatomáceas e purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica, com diclorometano/0%-10% de metanol como eluente. Rendimento: 100 mg de um sólido (92,7% puro por LC-MS, 56% teórico),

LC-MS (método 2): t_r ~ 1,08 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 373 (M*Hf.

'H-NMR (400 MHz, DMSG-d®: δ 9.90 (s, 1H), 8,46 (s Ir.., 1H), 8,15 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,89 (s, 1H)_S 6,07 (S lr._t 1H)_S 3,96 (s, 3H), 2,46 (S, 3H) p,p,m>.

Intermodiâno 50A

7-Cloro-6-(oioromstil)-5-(7-metoxi-5-mstil' 1 -benzotiofeno-2-il)-pirrulo(2,1 -f|[1,2,4]triazina-4~amina

113/265

[226] Isolou-se o composto em epígrafe como produto secundário na preparação do exemple 79 (ver fefra). Rendimento: 9,2 mg (10% teórico).

LC-MS (método 3): t_f * 2,98 minutos: MS (ESlpos): m/z 393/395 (!VkH)\

Intennediário 51A [227] 6-({(terc-Butil~(dimetil)-sil HJ-oxíl-metlij-T-metilpírroloíS, 1 -

f][1 ,2_t4]triazína-4-amina

ch₃ [228] Sob uma atmosfera de árgen, a uma solução de 3 g (8,4 mmol) de 10 intermediário 35A em 60 mL de 1,4-dioxano adicionou-se 171 mg (0,21 mmol) de PdClg(dppf) x DCM e depois, gota a gota e ao longo de 10 minutos, 16,8 mL de uma solução 2 M de dimetil-zinco em toluene (provocando um aumento na temperatura de 22°C até 31°C). Manteve-se sob agitação, em primeiro lugar, durante 10 minutos à temperatura ambiente e depois durante 13 horas a 90°C.

IS A seguir, adicionou-se água (10 mL) à mistura de reaçáo à temperatura ambiente e agitou-se a suspensão durante 1 hora. Evaporou-se a mistura sob pressão reduzida, retomou-se o resíduo em água e acetato de atile e agitou-se durante mais 1 hora, Removeu-se por flltração o precipitado e deitou-se fora, separou-se as fases e extraíu-se a camada aquosa duas vezes com acetato de

114/265 etilo. Secou-se as fases orgânicas combinadas e evaporou-se para se obter 2,45 g (92% de pureza par LC-MS, 92% teórico) do composto em epígrafe. LC-MS (método 5): L - 2,18 minutos; MS (ESipos); m/z ~ 293 (M-rHp.

HNMR (40Ô MHz, DMSO-dy): δ ~ 7,98-7,78 (m, 3H), 7.04 (s. 1H), 4,68 (s. 2H).

0,89 (s, 9H), 0,09 (s, 6H) p.p.m..

intermediário 52A [229] (4-Amino-7-metllpírrolo[2,1 -f](1 ₍2,4]triazina-6-il)-metanoí ^^Hs

OH /

k, JtZ N Λ

CH,,

Método 1 [230] Sob uma atmosfera de erguo, a uma solução de 100 mg (0,28 mmol) de intermediário 35A em 2 mL de 1,4-dioxano adícionou-se 6 mg (0,01 mmol) de PdCb(dppf) x DCM e depois, gata a gota e ao longo de 10 minutos, 0,56 mL de uma solução 2 M de dimetil-zinco em tclueno. Agitou-se a mistura a 90°C de um dia para c outro, depois evaporou-se e tratou-se o resíduo com acetonitrile e ácido térmico aquosa 5 M. Removeu-se por fíltração o precipitado, evaporouse a filtrado, retomou-se o resíduo em DMSO/acetonitrlío e puriticou-se por RPHPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente W%-95% de aceionitrilo/0,1% de ácido térmico aquoso). Rendimento: 33 mg (66% teórico).

’H-NMR (400 MHz, DMSO-dg); δ * 7.79 (s, 1H), 7,47 (s Ir.. 2H), 6,80 (s. 1H),

4.84 (t, 1H), 4.49 (d. 2H), 2,36 (s, 3H) p.p.m..

Método 2 [231] Sob uma atmosfera de argon, carregou-se um recipiente de reação de micro-ondas com 750 mg (3,1 mmol) de intermediário 34A, 515 pL (3,7 mmol) de trimetilboroxina, 786 mg (3,7 mmol) de fosfato de potássio a 73 mg 25 (0,09 mmol) de (2 -aminobifenil-2-il)-(clorp)-paládio-diciclo-he.xil-(2\4^!,6^:triisopropilbifenil-2-il)-fosfina (1:1; ver S. L, Buchwald et a/., J. .Am. Cbem. Soe.

115/265

132 (40), 14073-14075 (2010)). Depois. adicionou-se 13 mL de uma mistura desgassificada de 1,4-dioxano/água (a 5:1), fechou-se de forma estanque o recipiente e aqueceu-se a mistura até 140°G durante 20 minutos no microondas (4 bar, 50 watt). Adicionou-se mais 50 mg de (2^!-aminobifenií-2-il)-(ctoro)5 ρ8ί3όιο^ΙαοΙθ'·όοχϋ-(2^,,4^ί,6^ί4πΐ8ορ^ρϋ0ίί3ηϋ-2-ΙΙ)4ο$ίίη3 (1:1) e aqueceu-se novamente a mistura a 140°C durante 20 minutos no micro-ondas. Adicionouse mais uma porção de 515 μΐ. de trimetilboroxina e aqueceu-se novamente o recipiente a 140°C durante 20 minutos. Repetiu-se o último procedimento mais duas vezes com períodos de aquecimento de 30 minutos de cada vez até a 10 analise por LC-MS indicar que restavam apenas quantidades menores de material de partida. Filtrou-se a mistura através de terra de diatomáceas, lavouse com 1,4-dioxaoo e evaporou-se cs filtrados combinados até à secura. Combinou-se o resíduo com um ciclo de teste de 100 mg prévio e purificou-se por RP-HPLC preparativa (XBridge Cl 8, gradiente: 5%-42% de 15 acetonitrilo/0,05% de uma solução aquosa de hidróxido de amónio).

Rendimento: 238 mg (38% teórico).

LC-MS (método 5): Ç - 0,51 minuto; MS (ESlneg): m/z ~ 177 (M-H).

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₈): ó ~ 7.79 (s, 1H). 7,43 (s Ir., 2H), 6_;80 (s. 1H), 4,84 (t, 1H)_S 4,49 (d, 2H), 2,36 (S, 3H) p.p.m..

Intermediànp 53A [232] (4-Amino-5-bromo-7-metilpirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina-8~il)~mstanui

« [233] Tratou-se uma solução de 245 mg (1.33 mmol) de intermediário 52A em 8,8 mL de DMF cem 238 mg (1,82 mmol) de N-bromo-succinimida, em 25 porções e ao longo de 2 horas, a -10°C. Manteve-se sob agitação a -10°C durante 30 minutos e depois durante 2 horas à temperatura ambiente. Verteu

116/265 se a mistura era 50 mL da água e extraiu-se com acetate de etiío. Secou-se as fases orgânicas combinadas e evaporou-se. Submeteu-se o resíduo a cromatografia rápida através de gel da silica, com dicloromeiano/0%-15% de metanol como eluente. Rendimento: 148 mg (42% teórico).

LC-MS (método 4): t_f ~ 0,42 minuta; MS (ESlpos): m/z ~ 257/259

Ή-NMR (400 MHz, OMSO-de)·' δ = 7,85 (s, 1H), 6,14-8,22 (largo, 2H), 4,88 (í, 1H), 4,45 (d, 2H), 2,43 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 54A [234] 4-Amíno-5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotíofeno-2-íl)-7-metllpirroto(2,1 -fj- [1,2,4]triazina-6-carbaldeído

[235] A uma suspensão de 175 mg (0,49 mmol) do exemplo 75 e crives moleculares (3Â) em 3,5 mL de dlclorometano adicionou-se 230 mg (0,54 mmol) de periodinano de Dess-Martin (1,1,1-triacetoxi-1,1-di-hidro-1,215 benzíodoxol-3(1H)-ona), a 0°C-5^ôC, Agítou-se a mistura durante 5 minutos a essa temperatura e depois durante 30 minutos à temperatura ambiente, A seguir, adsorveu-se a mistura em terra de diatomáceas e purificou-se por * cromatografia rápida através de gel de silica, com ísso-hexano/10%-100% de « acetato de etilo como eluente. Rendimento: 139 mg de um sólido (79% teórico).

LC-MS (método 5): I ~ 2,34 minutos; MS (ESlpos): m/z χ 353 (M*H)\

H-NMR (400 MHz, DMSO-d_ft): δ ~ 9,03 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,33 (S, 1H), 6,88 (S, 1H), 3,96 (S, 3H), 2,71 (S, 3H), 2,46 (s, 3H) p.p.m..

Intermediário 55A

117/265 [236] 44(4-Amíno~6-metíipirrolo|2,l -f][1 ,2,4]triazina-7~íl)~metil]-piperazína-

-carboxílato de terc-butílo

N&

[237] Tratou-se uma solução de 6-metílpírrolo[2,1 -f](1,2,4]triazina-4-amína 5 (500 mg, 3,3 mmol; preparação descrita no pedido de patente de invenção internacional PCT WO 2007/056170) em ácido acétíco (8 ml) com uma solução aquosa de formaídeído a 37% (328 pL, 4,04 mmol) e com piperazina-1carboxílato de terc-butlío (754 mg, 4,04 mmol). Agitou-se a mistura a 60^!3G de um dia para o outro. Apôs evaporação, retomou-se o resíduo em acetato de 10 etilo e lavou -se com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio. Extraiu-se a camada aquosa duas vezes com acetato de etiío. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de magnésio e evaporou-se para se obter 1,2 g de produto impuro, que se utilizou no passo subsequente sem mais purificação.

LC-MS (método 2): t- ~ 0,56 minuto; MS (ESlpos): m/z - 347 (M-s-H)\ •H-NMR (400 MHz, DMSO-dg). δ = 7.79 (s, 1H)< 7,51 (s Ir.. 2H), 6,67 (s, 1H), 3,76 (s In, 2H), 3,29-3,17 (m, 4H), 2,36-2,29 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,37 (s, 9H) p.p.m.<

Intermediário 56A [236] 4-((4-Amina-5-bromo-6-metiipirrola[2,1~f][1,2.4]triazina-7-il)-metíl]piperazina-1-carboxílato de terc-butílo

118/265

^CH3 [239] Arrefeceu-se até -60°C uma solução de intermediário 55A (1,17 g, 3,37 mmol) em THF (20 mL) e tratou-se com 1,3-dibromo-6,5-dimetíi-hidantoína (5,78 mg, 2,02 mmol). Agítou-se a mistura durante 4 horas a uma temperatura 5 entre -60°C e -20°C. A seguir, extínguíu-se a mistura de reaçao com uma solução aquosa de tiossulfato de sódío a 10%. Evaporou-se a maior parte do solvente THF, ocorrendo a precipitação de um sólido. Filtrou-se e deixou-se recnstaíizar a partir de acetona para se obter 862 mg (59% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): L - 0,66 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 425/427 (Μ+Η)^ς.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-ds): δ - 8,29-7,62 (s Ir., 1H), 7,85 (s, 1H), 7,17-6,44 (S Ir., 1H), 3,80 (S, 2H), 3,29-3,22 (m, 4H), 2,37-2,27 (m, 4H), 2,16 (s, 3H), 1,37 (s, 9H) p.p.m..

Intermediário 57A [240] 4~{(4-Amíno-5“(7-metoxi~5-metil-1 - benzotíofeno-2-íi)-6~ metiípírrolo[2,1 -f]-[ 1,2,4]triazina-7 -íl]-metil}-píperazína~ 1 -carboxilato de tercbutílo

119/265

H...C

[241] Tratou-se uma solução da intermediário 56A (100 mg, 235 μΓηοΙ) em 1,4-dioxano desgaseificado (3 ml) com intermediário 6A (93 mg, 282 pmol), diciclo-hexii-(2^>,6^!-dimetoxibifenil-2-ii)-fosfina (SPhos; 9,6 mg, 23 μΓηαΙ} e 5 diacetato de paládio (2,6 mg, 11 μΐΌοΙ). Adícionou-se uma solução aquosa de fosfato de potássio 3 M desgaseificada (588 μί) e agitou-se a mistura resultante a 60°C durante 1 hora. Adicionou-se mais uma porção de intermediário 6A (78 mg, 235 p.mul) e manteve-se sob agitação a 60^<sC de um dia para o outro. Extinguiu-se a mistura de reação com uma solução aquosa de 10 hidróxido de sódio 2 M e extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo. Lavouse as fases orgânicas combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (cíclo-hexano/acetato de etilo a 3:2) para se obter 82 mg (62% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,97 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 523 (M*H)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-de): δ = 7,94 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,84 (s, 2H), 3,30-3,23 (m, 4H, sobreposição com o pico de água), 2,45 (s, 3H), 2,42-2,33 (m, 4H), 2,19 (s, 3H), 1,39 (s, 9H) p.p.m.. Intermediário 58A [242] 4-[(4-Amino-6-cioropirrçlo[2,1-f][1,2,4|triazina~7-il)-metil]’piperazina1 -carboxíiato de terc-butilc

120/265

[243] De acordo com o procedimento do intermediário 55A, fez-se reagir 4 g (23,7 mmol) de 6-cloropirrolo[2,1-f|[1,2₄4]tnazina-4-amina (preparação descrito no pedido de patente de invenção internacional PCT WO

2007/064883) para se obter 11,2 g do composto em epígrafe, como material impuro, que se utilizou no passo subsequente sem mais purificação.

LC-MS (método 6): t_f ~ 0,74 minuto: MS (ESipos); m/z ~ 367 (M-rH)L [244] Isolou-se uma amostra de 67 mg do correspondente sal formiato, formiato de 4-[(4-amino-6-cloropirrolo[2,1<1,2,4]triazina-7-il)-metíl]-píperazina-1 - carboxilato de tero-butilo, após RP-HPLC preparativa (Reprosíl C18, gradiente:

10%-95% de acetonítrilc/0,1% de ácido fórmíco aquoso) de 100 mg de material impuro obtido antes.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d«): inter a/., δ - 8,14 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,83 (s ir., 2H), 6,95 (s, 1H), 3,80 (S, 2H), 3,17 (s, 2H), 2,38 (s Ir., 4H), 1,37 (s, 9H) 15 p.p.m..

Intermediário 59A [245] 4-[(4-Amino-5-bromo-6-cloropirroio{2,1 -f] [1,2,4]triazina-7~ií)~metil]~ píperazina-1-carboxilato de terc-butiio

121/265 [246] □e acordo oom o procedimento do intermediário 58A, fez-se reagir 11 g (30 mmoi) de intermediário 58A para se obter 1,17 g (9% teórico) do composto em epígrafe, após cromatografia rápida através de gel de silica (dicíorometano/metanol a 10:1) e subsequente RP-HPLC preparativa (Daiso 5 C18, gradiente: 40%-65% de acetonitriío/água).

LC-MS (método 2): t_f - 0,74 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 445/447/449 (M-s-Hp.

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-dg): infer a/.. δ 7,96 (s, 1H), 3,84 (s, 2H), 2,37 (s Ir.. 4H), 1,37 (s, 9H) p.p.m..

Intermediário 69A [247] 4-{[4-Amino-6-cloro-5-(7-metoxl~5-metil-1 -benzotlofeno-2-il)pirrolo[2,1 ,2,4}triazina-7~il]-metil}-piperazína-1 -carboxiíato de terc-butilo

[248] Sub uma atmosfera de árgon, carregou-se um frasco com 140 mg (0,31 mmoí) de intermediário 59A, 102 mg (0,46 mmoi) de intermediário 5A, 16 15 mg (0,02 mmoi) de PdCh(dppt) x DCM e 122 mg (1,15 mmoí) de carbonato de sódio. Depois de se adicionar 3 mL de 1,2-dimetoxietano/água desgaseificada (a 3:1}, agitou-se a suspensão a 60°C durante 2,5 horas. Adicionou-se outras porções de intermediário 5A (50 mg, 0,23 mmol) e de PdCb(dppf) x DCM (8 mg, 0,61 mmoi) e manteve-se sob agitação a 40°C durante 2,5 horas. Repetiu20 se o último procedimento uma vez mais até se ter consumido o material da partida. Depois, evaporou-se parcialmente a mistura de reação sob pressão

122/265 reduzida, adicionou-se agua e extraiu-se a mistura com diclorometanu, Lavouse as fases orgânicas combinadas com água e com uma solução aquosa saturada de cioreto de sódio, secou-se e evaporou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo (322 mg) por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, 5 gradiente: 10%-95% de acetonítrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 49 mg de uma mistura do composto em epígrafe e do derivado Bocdesprotegido, 6-oloro-5~(7-metoxi-5-metil-1 -benzo-tiofeno-2-it)-7-(piperazina-1 ilmetiO-pirroluíOJ-fjp^Ajtriazina-á-amina. Utilizou-se esta mistura tal qual no passo de reação subsequente (ver exemplo 85).

LC-MS (método 2): t- 1,00 minuto; MS (ESlpos): m/z » 543 (M-rH)\ e ç ~ 0,81 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 443 (M * H)\ Intermediário 51A [249] 4-{[4-Amino-6-(metoximetil)-pirrolo(2_í1-f][1_>2₍4]triazina-7-íl]-metil}- piperazina-2-ona

[250] Tratou-se uma solução de intermediário 10A (5 g, 28,1 mmoi) e piperazina-2-ona (3,09 g< 30,9 mmoi) em ácido acétíco (85 mL) com uma solução aquosa de tormaldeído a 37% (3,15 mL, 42,1 mmoi) e agitou-se a 60°C durante 16 horas, Evaporou-se os materiais voláteis sob pressão reduzida, 20 dissolveu-se o resídua em metanol e adsorveu-se em terra de diatomáceas.

Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (5%-10% do metanol/diclerometano) para se obter 3,91 g (46% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 3); t_r ~ 1,88 minutes; MS (ESlpos): m/z ~ 291 (M*H)\

123/265

Intermediário 62A [251 ] 4-{[4-Amino-5-bramo-6· (metoximetil)-pírrolo[2, 1 ~f][1.,2,4]triazina-7-ilj~ metíl}-piperazina-2 -ona

[252] Arrefeceu-se ate 0°C uma solução de Intermediário 61A (3,9 g. 13,4 mmol) em DMF (50 mL) e tratou-se com uma solução de N-bromo-succínímida (2,63 g, 14,8 mmol) em DMF (6 mL). Agitou-se a mistura a 0°C durante 1 hora. Depois, evaporou-se o solvente, dissolveu-se o resíduo em metanol e adsurveu-se em terra de diatomáceas. Purificou-se per cromatografia em 10 coluna através de gel de silica (5%-10% de metanol/diclorometano) para se obter 1,99 g (39% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 3): L ~ 1,86 minutos; MS (ESlpos): m/z - 369/371 (M*H)L [253] 'H-NMR (400 MHz, DM'SO~d_s): δ ~ 7,96-8,23 (s Ir., 1H), 7,90 (S, 1H), 7,71 (S, 1H), 6,72-6,98 (S lr„ 1H), 4,45 (S. 2H), 3,91 (s, 2H), 3,27 (s, 3H), 3.07 (s ir„ 2H), 2,96 (s, 2H), 2,56 (S Ir., 2H) p.p.m..

Intermediário 63 A [254] Cloridrato de 7-(clorametíl)'€-(étoxjmetíl)-5-(7-metoxi~5-metil-ibenzotíofeno-2-íl)-pirrolo[2,l4][1,2.4]triazina~4-amína

124/265

[255] Tratou-se, gota a gota, uma suspensão do exemplo 86 (1 g, 2,51 mmol) em toluene (60 mL) oom cloreto detionilo (1,83 mL, 25,1 mmol) e agitouse a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Evaporou-se os materiais voláteis sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a coevaporaçãu com toluene sob pressão reduzida por três vezes para se obter 0,85 g (74% teórico) do composto em epígrafe, o qual se utilizou imediatamente no passo subsequente sem mais purificação.

Intermediário 64A [256] Ácido 4-amino-6~(etoximetii)-5-(7-metoxi-5-metil-1benzoticfeno-2~ií)pirrolo-[2,1 -T][1,2_;4]triazina-7-carboxílico

[257] Tratou-se uma suspensão de intermediário 17A (5 g, 12,6 mmol) em THF/água (a 10:1, 220 mL) com uma solução 2 M de 2-metil-2~buteno em THF 15 (31,5 mL, 63,1 mmol) e oom di-hidrogeno-fosfato de sódio (6,96 g, 50,4 mmol).

125/265

Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 5 minutos. Depois, adicionou-se cloríto de sódio (4,56 g, 50,44 mmol) e agitou-se a mistura resultante á temperatura ambiente durante 20 horas. Filtrou-se a suspensão e lavou-se o sólido resultante com água para se obter 4,24 g (74% teórico) do 5 composto em epígrafe, que se utilizou no passo subsequente sem mais purificação.

LC-MS (método 4): t_f ~ 1,06 minutos; MS (ESlpos): m/z ™ 413 (M-Hf.

¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ 13,22 (s Ir., 1H), 8,53-8,00 (S Ir., 1H), 8,14 (S, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,86 (S, 1H), 6,28-5,65 (S Ir., 1H), 4,61 (S, 10 2H), 3,06 (s, 3H), 3,36 (q, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,01 (t, 3H) p.p.m..

Intermediário 85A

5,7-Dimetoxí-l -benzotiofeno

Q_x

ΟΗλ [258] A uma solução de 1-benzotlofenc-5,7-diol (1,16 g, 6,98 mmol) em 15 acetona (20 mL), sob uma atmosfera de árgon, adicíonou~se carbonato de potássio (2,89 g, 20,9 mmol) e iodometano (912 pi, 14,6 mmol). Agitou-se a mistura resultante ao refluxo durante 18 horas. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente, tratou-se a mistura com uma solução de amónia 7 M em metanol (10 mL) durante 80 minutos e depois adsorveu-se sobre gel de silica.

Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (ciclohexano/acetato de etilo a 40:1) para se obter 0,52 g (32% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_f ~ 1,02 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 195 (M+H)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_$): 6 = 7,69 (d, 1H), 7,35 (d. 1H). 7,02 (d, 1H), 6,57 25 (d, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,81 (s, 3H) p.p.m...

Intermediário 66A

Ácido (5,7-dimetoxi-1 -benzotiofeno-2~il)~bôróníco

126/265

[259] Sob uma atmosfera de árgcn, adicionou-se, gota a gota, uma solução 1,6 M de n-butil-iüio em hexano (1,84 mL, 2,95 mmol) a uma solução de Intermediário 65A (520 mg, 2,68 mmol) em THF anidro (5 mL), a -70^oC< 5 Decorrida 1 hora a -70°C, adícionou-se borato de triisopropiio (742 pL, 3,21 mmol) e agitou-se a mistura durante 16 horas, deixando-a aquecer lentamente até à temperatura ambiente. Adicionou-se diclorometano e uma solução aquosa saturada de cloreto de arnónio e ajustou-se o valor de pH até 6 por adição de ácido clorídrico 1 M. Separou-se a fase orgânica e extraiu-se a fase 10 aquosa com diciorometano. Secou-se as fases orgânicas combinadas com sulfato de magnésio, filtrou-se e evaporou-se. Purificou-se o resíduo resultante par cromatografia em coluna através de gel de silica (eluiçâo em primeiro lugar com díclorometano/metanol a 40:1, depois metanol e por último metanol/clorato do hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano a 10:1) para se obter 631 mg (71% de *5 pureza, 71% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4); t- ~ 0,83 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 239 (M+H)\

Intermediário 67A

4-Amino-6-(clorometil)~pirRilo[2,1-f][1,2,4]triazina~7-carbaldeído

[260] Isolou-se o intermediário 67A como produto secundário da síntese do intermediário 11 A, após cromatografla em coluna através de gel de silica (diclorometano/acetona, 8:2 7:3).

127/265 [261] LC-MS (método 2): t? ~ 0,6 minuto: MS (ESIpos): m/z ~ 211/213 (M<.

Intermediário 68A [262] 4~Amino-6~[(3-oxoplperazina-l -ii)-metii]-pirrofo[2,1 -f|[1 ^/IJtriazina-?- carbaldei'do

[263] Tratou-se uma solução do intermediário 67A (11,03 g, 52,4 mmol) e 2-oxopiperazina (6,82 g, 68,1 mmol) em 331 mL de DMF, à temperatura ambiente, com DIPEA (13,7 ml, 78,6 mmol) e agitou-se de um dia para o 10 outro. Removeu se por fíltraçáo o precipitado, lavou-se oom DMF e com éter díetílíco e depois secou-se sob uma pressão hipobárica para se obter 11,64 g do composto em epígrafe (89% de pureza, 72% teórico).

LC-MS (método 7); t_r ~ 1,30 minutos; MS (ESIpos): m/z ~ 275 (Mf-H)'.

Intermediário 69A

44H-Amino-7-(hidroxlmetii) -pirrolo[2,1 f|[1,2,4]triazina-6-i0-metii}-piperazina“2“ ona

OH [264] A uma solução do intermediário 68A (10,17 g, 89% de pureza, 33,01 mmol) em ácido clorídrico 1 Μ (370 mL) e metanol (370 mL), à temperatura 20 ambiente, adícionou-se poeira de zinco (12,1 g, 185 mmoi) e agítou~se a

128/265 mistura à temperatura ambiente durante 18 heras. Adicíonou-se gel de silica (106 g) e evapurou~se os materiais voláteis sob pressão reduzida. Colocou-se em suspensão o residue em metanol, evaporou-se novamente os materiais voiáteis sub pressão reduzida e secou-se o resíduo sob uma pressão 5 hipobáríca, Submeteu-se o sólido a cromatografia em coluna através de gel de silica (gradiente: diclorcmeiano/amónia 7 M em metanol, 10:1 -> 3:1) para se obter 6,39 g do composto em epígrafe (60% teórica).

LC-MS (método 8); t_f ~ 1,12 minutos: MS (ESlpos): m/z 277 (M+Hp.

[265] 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s): δ ~ 7,83 (s, 1H), 7.76 (s Ir.. 1H), 7,64 10 (s ir., 2H), 6,83 (S, 1H), 5,01 (s Ir., 1H), 4,74 (s, 2H), 3,64 (s ir., 2H), 3,14 (s Ir.,

2H), 2,95 (s Ir., 2H), 2,58 (s lr„ 2H) p.p.m..

Intermediário 70A

Trifiuoroacetatc de 4-{{4~amino-5-bmmo-7-(hidrcximetil)-pírrulo[2,1 -f][1,2,4]triazina-6-il]~metíl}-píperazina-2-ona

[266] Tratou-se uma suspensão de intermediário 69A (1 g) em metanoí/água (a 10:1, 33 mL) com ácido trifluoroacético (0,56 mL, 7,24 mmol) para se obter uma solução límpida. Adicionou-se, gota a gota e a 0°C, uma solução de N-bromo-succinlmida (708 mg, 3,98 mmol) em metanol (30 mL) e 20 agitou-se a mistura a 0°C durante 1 hora. Removeu-se por filtração o precipitado formado e secou-se sob uma pressão hipobáríca para se obter 709 mg do composto em epígrafe (41% teórico).

LC-MS (método 7): t,· ~ 1,38 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 355/357 (M+H), ^H-NMR (490 MHz, D_SQ): δ = 7,90 (s. 1H), 5,00 (s, 2H). 4,44 (s, 2H), 3,85 (s, 25 2H), 3,58 (t Ir., 2H), 3,50 (t Ir,, 2H) p.p.m..

129/265

4-{[4-AminO6-(metoximeiH)“5-(7’metGXí~5-metil· 1 -benzetiofeno-2-íl)-pírrolo[2,1 fKCS^Jtríazina-T-iO-metíil-piperazína-S-ona

Método 1 [267] Tratou-se uma solução de intermediário 13A (3 g, 7,64 mmol) em metanol (87 mL) com ácido acétíco (0,898 mL, 18,68 mmol), 2-oxopíperazina (1,17 g, 11,76 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,98 g, 23,53 mmol).

Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4,5 horas. Adicionou-se mais porções de 2-oxopiperazina (392 mg, 3,9 mmol) e de triacetoxíborohidreto de sódio (3,3 g, 15,68 mmol) e agitou-se a mistura resultante 60°C de um dia para o outro. Após evaporação, retomou-se o resíduo numa solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e extraiu-se com acetato de 15 etilo. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de sódio, evaporouse e purificou-se o resíduo por cmmatografia em coluna através de gel de silica (diclorometano/ /metanol, 40:1 -·> 10:1), Triturou-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se para se obter 840 mg (14% teórico) do composto em epígrafe. Evaporou-se as águas-mães metanólicas e purificou-se o resíduo duas vezes por RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrílo/0,1% de ácido fórmico aqucso). Combinou-se as fraoções que

130/265 continham produto puro e neutralizou-se com uma solução aquosa saturada de hidrogenc-carbonato de sódio. Evaporou-se o solvente acetonitrile e extralu-se a fase aquosa com acetato de etilo. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de sódio e evaporou-se para se obter 395 mg (13% teórico) como 5 segundo lote do composto em epígrafe.

Método 2 [268] Tratou-se uma solução de intermediário 21A (291 mg, 0,82 mmol) em ácido acético (2,9 mL) cem uma solução aquosa de formaldeído a 37% (104 μΐ, 1,39 mmol) e 2-oxopíperazina (139 mg, 1,39 mmol). Agitou-se a 10 mistura a 60°C durante 3 horas e depois evaporou-se. Purificou-se por RP-

HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de aoetonitnto/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 184 mg (44% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t, ~ 0,77 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 467 (M*H)'.

-H-NMR (400 MHz, DMS0-d_s): δ « 8,00 (s. 1H), 7,73 (s Ir., 1H), 7/37 (s. 1H), 7,31 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,41 (s, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 3_?20 (s, 3H), 3,15-3,08 (s Ir., 2H), 3,01 (S, 2H), 2,64 (t Ir., 2H), 2,45 (S, 3H) p.p.m..

Diclondrato de 4-{[4-amino~6-(metuxímetíl)-5-(7-metoxi-5-metil~1 -benzo-tiofeno20 2-il)-pirralo[2,1 -f][1.2,4]tríazina~7-il]-metil>~piperazina-2~ona

131/265 [269] Tratou-se uma solução do exemplo 1 (100 mg, 214 pmol) em 1,4dloxaoo (2 mL) com uma solução de cloreto e hidrogênio 4 M em 1,4-díoxano (2 mL 8 mmol). Evaporou-se o solvente para se obter 130 mg (quant.) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_; - 0,79 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 467 (M+H)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ « 8,39 (s ir., 1H). 8.31-8,53 (s Ir.. 1H), 8,17 (s, 1H), 7,38 (S, 1H), 7.34 (s, 1H), 6,87 (S, 1H), 6,21-6,42 (s Ir., 1H), 4,81 (S Ir., 2H), 4.52 (s ir.. 2H), 3,96 (S, 3H), 3,57 (s, 2H)< 3,32-3,72 (m, 4H). 3,26 (S, 3H), 2,46 (s, 3H) p.p.m..

Diclorídrato de (3R)-3'({[4-amino-6-(metoxímetíl)-5-(7-metoxi-5-metil~í-benzotíofenu-2-il)-pírruic[2,1-f][1,2,4]tríazína~7-i0-metil}-amino)-pirrolidina-2-ona

[270] Tratou-se uma solução de intermediário 13A (520 mg, 1,36 mmol) 15 em metanol (15 mL) e ácido acético (156 pL. 2,7 mmol) oom (R)-3~ aminopirrolldina-2-ona (593 mg, 5,0 mmol) e trlacetoxiboro-hídreto (1,06 g, 5,0 mmol). Agítou-se a mistura á temperatura ambiente de um dia para o outro e depois evaporou-se. Purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosll 018, gradiente: 10%-95% de acetonítrilo/0,1% de ácido térmico aquoso) e 20 submeteu-se a líofilização o produto assim obtido a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-díoxano para se obter 272 mg (36% teórico)

132/265 do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0.70 minuto; MS (ESipos): m/z -- 467 (ΚΉΗΓ.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO~d₆): d = 9,62 (s lr.< 1H). 9,46 (s hr.. 1H), 3,56-8,22 (a !r., 1H), 8,44 (s, 1H), 8.19 (s. 1H). 7,38 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,87 (s. 1H), 6.545 6,12 (s in, 1H), 4,89-4.65 (m, 2H), 4,58-4,46 (m, 2H). 4,17-4,07 (s lr„ 1H, sobreposto com o pico de água), 3,96 (s, 3H), 3,36-3.16 (m, 2H). 3,25 (s, 3H), 2,48-2,39 (m, 1H), 2,46 (s. 3H), 2.23-2,06 (m, 1H) p.p,m„ Exemplo 4 **ΛΝνΛ***Λ*Λν#**ΛΛΛ*ΛνΛν (3R)~3-({[4-Amino-6-(metoximetil)-5-(7-metoxi-5-metil-1-benzotiofeno-2-il)- pirrolo(2,1 -f][1,2,4]tnazina-7-il]-metil}-amino)-pirroiidina-2-ona

[271] Tratou-se uma solução de intermediário 13A (2,0 g. 5,2 mmol) em metanol (58 ml) e ácido acêticc (0,6 mL) com (R)-3-aminopirrolidina~2-ona (785 mg, 7,8 mmol) e triacetoxiboro-hidreto (3,32 g, 15,6 mmol). Agitou-se a 15 mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. A seguir, diluiu-se a mistura de reação com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-oarbonato de sódio e extraiu-se três vezes com acetato de atilo. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de sódio e evaporou-se. Purificou-se o resídua duas vezes por cromatografia em coluna através de gel de silica 20 (dlcíorometano/ /metanol, de 40:1 a 10:1) para se obter 957 mg (37% teórico)

133/265 do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_f « 0,72 minuto: MS (ESlpos): m/z - 467 (M+Hf.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg)': δ 8,01 (s, 1H), 7.75 (s. 1H)₍ 7,35 (s, 1H)< 7,31 (S, 1H), 6,85 (S, 1H), 4,46-4,34 (m, 2H), 4,24-4,02 (m, 2H), 3,96 (s. 3H), 3,245 3,04 (m, 3H), 3,21 (s, 3H), 2,45 (S, 3H), 2,40-2,27 (m. 1H), 1,80-1,65 (m, 1H) p.p.m..

Exemplo 5

4-{[4-Amíno-6-(etoximetil) ^-(y-metoxi-S-metii-l -benzuticfeno-2-il)-pirrolo-(2,1 f|[l ,2₍4]triazina-7-il]-metíi)~piperazina-2-Qna

Método 1 [272] Tratou-se, a 0^<;C, uma solução de intermediário 17A (2 g, 5,05 mmol) em THF (100 ml) com 2-oxopiperazína (1,01 g, 10,1 mmol), triacetoxíborohídreto de sódio (1,07 g, 5,04 mmol) e ácido acélico (0,29 mL, 5,04 mmol).

Agitou-se a mistura resultante a 0°C durante 30 minutos. Adicionou-se quatro porções adicionais de tríacetoxiborc-hídreto de sódio (i,07 g, 5,04 mmol) e de ácido acético (0,29 mL, 5,04 mmol), a cada 30 minutos, e agitou-se a mistura resultante durante mais 30 minutos a 0°C, depois durante 25 minutos a 35°C e por ultimo à temperatura ambiente de um dia para o outro. Extinguiu~se a mistura de reação com uma solução aquosa de cloreto de sódio a 10% e extraiu~se duas vezes com acetato de etilo. Evaporou-se as camadas

134/265 orgânicas combinadas. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna através de gel de silica (dictorometano/ /metanol, 95:5 ···> 90:13) para se obter 360 mg (17% teórico) do composto descrito no exemplo 86 (ver /Wa) e 1,82 g do composto em epígrafe, em fraoções em separado. Colocou-se em 5 suspensão o produto em epígrafe assim obtido em etanol (20 mL), levou-se ao refluxo durante 2 horas e depois arrefeceu-se até 15°C. Removeu-se por fíltração o sólido e lavou-se com etanol para se obter 1,63 g (67% teórico) do composto em epígrafe puro.

Método 2 [273] Tratou-se uma solução do exemplo 13 (930 mg, 1,9 mmol) em diclorometano (18 mL) com cloreto de tíonilo (210 uL, 2,8 mmoi) e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 minutos. Após evaporação, dissolveu-se o resíduo em etanol (18 mL) e tratou-se com DIPEA (670 μΕ, 3,8 mmol). Agitouse a mistura a 70°C durante 2 horas e depois evaporou-se. Purificou-se o 15 resíduo por cromatografia em coluna através de get de silica (díclorometano/metanol, 98:2 90:10). Triturou-se o produto assim obtido numa mistura de acetonítrilo/éter dietilico e filtrou-se, Evaporou-se o filtrado e purificou-se novamente o resíduo por cromatografia em coluna através de gel de silica (díclorometano/metanol 98:2 -> 90:10). Novamente, triturou-se o 20 produto assim obtido em acetonítrilo/éter dietilico e filtrou-se. Repetiu-se este procedimento mais uma vez. Combinou-se os três lotes de sólidas obtidos deste modo, triturou-se uma vez mais em acetonitrile/ /éter dietilico e, por último, filtrou-se para se obter 600 mg (62% teórico) do composto em epígrafe. Método 3 [274] Agitou-se uma solução de intermediário 22A (720 mg, pureza de

89%, 1,74 mmol) em ácido acéticc (10 mL) com piperazína-2-ona (261 mg, 2,61 mmol) a 60°C. A esta solução, adicíonou-se uma solução aquosa de formaldeído a 37% (260 pL, 3,48 mmol), em três porções, decorridas 0, 3 e 12 horas, respectivamente, e agitou-se a mistura a 60°C durante um total de 24 30 horas. Depois, removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida e

135/265 repartiu-se c resíduo entre acetato de etilo a uma solução aquosa saturada de hldrogeno-carbonate de sódio. Lavou-se a fase orgânica com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa mistura de metanol e 5 díclorometano, adsorveu-se em terra de diatomáceas, secou~se sob uma pressão hipobârica e purificou-se por cromatografia rápida através de gel de silica (gradiente: 0%-6% de metanol/dlclorometano). Combinou-se as fracçôes de produto, evaporou-se e purificou-se novamente por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 30%-50% de acetonitrilo/0,2% de TFA aquoso), W Combinou-se as fracçôes de produto novamente, díluiu-se com uma solução aquosa saturada de hídrogeno-carbonato de sódio e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se para se obter 281 mg (31% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): L ~ 0,86 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 481 (M+HF.

’H-NMR (400 MHz, DMSO-ds): δ « 8,01 (s, 1H), 7,8-6,05 (s lr„ 1H), 7,74 (s lr„ 1H). 7,38 (S, 1H), 7,31 (S, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,6-5,9 (s ir„ 1H), 4,45 (S, 2H), 3,97 (S, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,41 (q, 2H), 3,09-3,13 (m, 2H), 3,02 (s, 2H), 2,63-2,69 (S Ir., 2H), 2,45 (s, 3H), 1,07 (t, 3H) p.p.m.,

Dicloridrato de 4-$4-amíno-6-(etoximetil)-5~(7-metoxi~5-metíM -benzotiofeno-2-il)pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina-7-il]-metíí}-piperazina-2-ona

136/265

[278] Tratou-se uma solução de intermediário 17A (60 mg. pureza de 69%, 104 pmol) em metanol (6 mL) com 2-oxopíperazina (22 mg, 209 pmoi). cianoboro-hidreto de sódio (33 mg, 522 mmel) e ácido acético (12 μΙ, 209 5 pmol). Agitou-se a mistura a 60°C durante 16 hares e depois filtrou-se.

Purificou-se a filtrado e o resíduo em separada par RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl8. gradiente: 40%-60% de acetonitrilo/0,2% de TFA aquoso). Combinou-se as fracçôes de produto, diluiu-se com ácido clorídrico 1 M (3 mL) e evaporou-se até à secura para se obter 46 mg (79% teórico) do composto em 10 epígrafe,

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,87 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 481 (MrH)L ’H-NMR (400 MHz, DMSO-d§): ó 8.37 (s lr.< 1H), 8.31 (s Ir., 1H), 8.14 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 8,87 (s. 1H). 6,13 (s Ir., 1H), 4,80 (s Ir., 2H), 4,52 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,86 (s Ir,, 2H), 3,36-3,51 (m, 5H), 2,46 (s, 3H). 1,11 (t. 3H) 15 p.p.m..

Exempla 7 [276] Dicloridrato de (3R)-3-({[4-amino-6~(etoximetíl)-5-(7-metoxí~5-metil-1benza-tiafeno-2-il)-pirrolu[2,1-f][1_;2,4]triazina-7-iO-mstil}-amino)-pirrolidina-2-ona

137/265

[277] Tratou-se uma solução de intermediário 17 A (60 mg, pureza de 69%, 104 pmol) em metanol (3 mL) cem (R)-3-aminopírroíidina-2~ona (22 mg, 209 pmol), cianoboro-hídreto de sódio (33 mg, 522 pmol) e ácido scético (12 u.L, 5 209 pmol). Agltou-sa a mistura a 60°C durante 4 horas e depois filtrou-se.

Purificou-se o filtrado por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 40%· 60% de acetonitrile/ 0,2% de TFA aquoso). Combinou-se as fracções de produto, diluiu-se com ácidc clorídrico 1 M e evaporou-se até à secura para se obter 46 mg (79% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_f ~ 0,74.minuto; MS (ESlpcs): m/z ~ 481 (M-r-H)*.

•H-NMR (400 MHz, DMSO~d₆): δ = 9,58-9,75 (m, 1H), 9,33-9,54 (m, 1H), 8,44 (S, 1H), 8,27-8,71 (s ίο, 1H), 8,19 (S, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,87 (S, 1H), 6,18-6,48 (s Ir., 1H), 4,68-4,87 (m, 2H), 4,49-4,62 (q, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,45 (q, 2H), 3,18-3,35 (m_; 2H). 2.46 (s, 4H), 2,08-2,22 (m, 1H), 1,10 (t, 3H) 15 p.p.m..

Exemplo 8 (3R)-3~({[4-AminO'6-(etoximetii)-5-(7-metaxi-5-metíl1-benzatiofena-2-il)pirrolo[2,1 -f][l _y2,4]triazina-7-íl]-metll}-amino)-pírrolidina-2-ona

138/285

[278] Tratou-se uma solução de intermediário 17A (226 mg, pureza de 75%, 428 pmol) em metanol (4 mL) com (R)-3-aminopirroíidina-2-ona (85 mg, 855 pmol), cianoboro-hidreto de sódio (134 mg, 2,14 mmol) e ácido acético (49 5 μΐ, 855 pmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1,5 horas,

A seguir, separou-se dlrectamente a mistura por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 40%-60% de acetonitrílo/0,2% de TFA aquoso). Combinou-se as fracções de produto, diluiu-se com uma solução aquosa saturada de hídrogeno-carbonato de sódio e extraiu-se com acetato de etilo. 10 Lavou-se as fases orgânicas combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se até à secura para se obter 180 mg (88% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): L ~ 0,74 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 481 (M+H)'.

'H4MMR (400 MHz, DMSO-d₈): δ - 8,00 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,8-8,1 (s Ir., 1H), 15 7,35 (S, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 5,6-5,9 (s Ir., 1H), 4,39-4,49 (m, 2H),

4,04-4,23 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,41 (q, 2H), 3,05-3,23 (m, 3H), 2,45 (s, 3H), 2,31-2,40 (m, 1H), 1,68-1,79 (m, 1H), 1,08 (t, 3H) p.p.m..

Exemplo 9 □icloridrato de N^s4[4-amino-6-{etoximetil)-5~(7-metoxí-5-metll-1 -benzo-tiofeno20 2-il)-pirrolo[2,1 -f](1,2,4]triaz0 ia-7-il]-metil)-glicinamida

139/265

[279] Tratou-se uma solução de intermediário 17 A (60 mg, pureza de 69%< 104 pmol) em metanol (3 mL) com cloridrato de glicinamida (23 mg, 209 pmoi), cianoboro-hidreto de sódio (32 mg, 522 mmoi) e ácido acético (12 μΙ, 209 5 pmol). Agitou-se a mistura a S0°C durante 16 horas. Após filtraçáo, separou-se o filtrado por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 2034-40% de acetonitnlo/0,2% de TFÁ aquosa). Combinou-se as fraoções de produto, diluiuse com ácido clorídrico 1 M. evaporou-se até à secura e comblnou-se com c resíduo do passo de fiitração, Purificou-se novamente este material duas vezes 10 por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 20%-40% de acetonitrlio/0,2% de TFA aquoso). Combinou-se novamente as fracçôes de produto, diluiu-se com ácido clorídrico 1 M e evaporou-se até à secura para se obter 7,4 mg (13% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): Ç » 0,80 minuto; MS (ESlpos); m/z ~ 455 (M-r-ΗΓ.

'H-NMR (500 MHz, DMSO-dg): ó ~ 9,33 (s Ir., 2H), 9,05 (s Ir., 1H), 8,31 (s, 1H), 7,93 (s Ir., 1H), 7,58 (s Ir., 1H), 7,40 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,05 (s Ir., 1H), 6,88 (s, 1H). 4.65 (m lr„ 2H), 4,56 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,74 (m Ir., 2H), 3,46 (q, 2H), 2,46 (S, 3H), 1,10 (t, 3H) p.p.m..

Exemplo 10

6-(Etoxímetil)-5-(7-metoxí-5-metíí~1-benzotiofenU'2-il)-7-(morfolina-4-ilmetil)140/265 pirrolo(2,1-f](1,2,4]triazina-4-amina

[280] Tratou-se uma solução de intermediário 17A (55 mg, pureza de 73%, 101 pmol) em metanol (3 mL) com morfolina (18 mg, 202 pmol), cianoboro5 hidreto de sódio (19 mg. 303 mmol) e ácido acético (18 μΕ, 304 pmol). Agitouse a mistura a 60°C durante 18 horas. Adicionou-se mais quantidades de morfolina (18 mg, 202 pmol). cianoboro-hidreto de sódio (19 mg. 303 mmol) e ácido acético (18 pL, 304 pmol) e manteve-se sob agitação a 60°C durante mais 3 horas. Diluiu-se a mistura resultante com THE para se dissolver os 10 precipitados e separou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosii C18, gradiente: 20%-40% de acetonitrilo/0.2% de TEA aquoso). Combinou-se as fracções de produto e evaporou-se até à secura. Dissolveu-se o resíduo em metanol e fiitmu-se através de um cartucho de permuta aniónica (Stratospheres SPE, PLHCO₃ MP-resína). Efectuou~se a eluiçâo do cartucho com metanol e evaporou15 se 0 filtrado para se obter 32 mg (68% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,78 minuto: MS (ESipos): m/z ~ 468 (M-rH)'*.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₈): δ - 7,98 (s, 1H), 7,9 (s Ir., 1H), 7,37 (s, 1H), 7,31 (S, 1H), 6,84 (s, 1H), 8,75 (s Ir., 1H), 4,45 (S, 2H)< 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 2H), 3.51-3.56 (m, 4H), 3,40 (q, 2H), 2,4-2,5 (m, 4H). 2,45 (s, 3H), 1,06 (t, 3H) 20 p.p.m..

Exemplo 11

Dicloridrato de 1 -(4-{[4-amlno-6-(etQximetiO-5-(7~metoxi~5-metil-1-benzo

141/265 ti0fena-2-íl)-pirrola[2,1 -f](i ,2,4]tnazina-7-li]-metH}-piperazina-1 -ll)-etanona

[281] Tratou-se uma solução de intermediário 17A (130 mg, 9,328 mmol) em metanol (8 mL) cem N~acetilpiperazína (63 mg. 0,492 mmol), cíanoboro- bidreto de sódio (103 mg, 1,63 mmol) e ácido acético (37 p.L, 0,655 mmol). Agitou-se a mistura a 60°C durante 3 heras. Combinou-se então com a mistura de reação de um ciclo de teste de 30 mg, evaporou-se e purificou-se por RPHPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 1034-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso). Submeteu-se o produto assim obtido a liofilizaçâo a 10 partir de 1,4-dioxano, depois dissolveu-se em acetato de atilo e lavou-se com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sob sulfato de magnésio, evaporou-se e liofiiizou-se novamente a partir de 1,4-dioxano. Puríficou-se novamente por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 1O%~95% de acetonitrilo/0,1% de ácido 15 fórmico aquoso) e depois, duas vezes, por cromatografia em coluna através de gel de silica (dictorometano/metanol, 98:2 ···> 4:1) e submeteu-se a liofilização a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se obter 49 mg (18% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r = 0,82 minuto; MS (ESlpos): m/z 509 (M t-H)*.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_f·): mter a/., δ - 8,05-8,26 (s Ir., 1H), 8,17 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 8,53-6,05 (s lr„ 1H), 4,75 (s Ir., 2H), 4,56

142/265 (s Ir., 2H), 3,96 (s, 3H), 3_S45 (q, 2H, sobreposto oom o pico de água), 2,46 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,09 (t, 3H) p.p.m,.

Exemplo 12

Bls~(formiato) de [4-amina-5~(7-metoxi-5-metil-l -benzotiofeno~2-il)~75 (piperazine-1 -iimet II)-pirrolo(2,14][ 1,2,4]triazina~6-ii]-metanoi

[282] Agitou-se uma solução de intermediário 23A (95 mg, 152 umol) numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (3,7 mL), à temperatura ambiente durante 2 horas. Após evaporação, purificou-se o 10 resídua por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%~95% de acetonitrilo/0,1% de ácido térmico aquoso) para se obter 44 mg (62% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): L ~ 0,63 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 439 (M*H)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s): δ = 8,28 (s Ir.. 2H), 7,98 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 16 7,31 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,50 (s, 2H, sobreposto com o pico de água), 3,98 (s,

2H, sobreposta aom o pico de água), 3,95 (s, 3H, sobreposto com o pico de água), 2,95-2,84 (m, 4H), 2,61-2,55 (m, 4H, sobreposto aom o pico de DMSO), 2,45 (s, 3H) p.p.m..

4-{[4~Amino-8~(hidraximetil)-5-(7-metoxi-5-metil-1-benzatíafeno~2-il)~pirrolo-[2,1f][1_s2₍4]triaz.ina-7-il]-metil}-piperazína~2-ana

143/265

[283] Tratou-se uma solução de Intermediário 20A (1,34 g_s 3,96 mmol) em ácido acético (13,9 mL) com uma solução aquosa de formaldeído a 37% (501 u.L, 6,6 mmol) e 2-oxopíperazina (670 mg, 6,6 mmol). Agitou-se a mistura a 5 50°C durante 2 horas e depois evaporou-se. Purificou-se por cromatografia em coluna através de gel de silica (diclorometano/metanol, 98:2 90:10) para se obter 942 mg (49% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): Ç ~ 0,67 minuto; MS (ESlpos): m/z » 453 (M+H) .

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_ô): Õ ~ 7,99 (s, 1H), 7,76 (s Ir., 1H), 7,39 (s, 1H), 10 7,31 (S, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,51 (S,. 2H), 4,03 (s Ir., 2H), 3,95 (s, 3H), 3,18-3,13 (m, 2H), 3,07-2,98 (m, 2H), 2,72-2,60 (m, 2H), 2,45 (s, 3H) ρ.ρ.πκ ixBmplo. 14

Triolorldrato de 7-{[{3S)-3-amino-3~metílpirrolidina-1 -ilpmetil}-6~(metoximetil)-5-(7~ metoxi-5-metíM -benzotlefeno-2~il)~pirrolo[2,1 -f][1 _t2,4]triazina-4-amína

144/265

[284] Tratou-se uma solução de intermediário 21A (100 mg, 0,28 mmoi) em ácido acético (1 mL) com uma solução aquosa de formaldeído a 37% (25 p.L, 0,33 mmoi) e [(3S)-3-metilpirrolidina-3-ilTcarbamato de terc-butilo (Yoshida 5 et a/., Chem. Pharm. Ba//. 1996, 44 (7), 1376-1386; 67 mg, 0,33 mmoi). Agitouse a mistura à temperatura ambiente durante 3 horas e depois evaporou-se. Diluiu-se o resíduo com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e adlcionou-se carbonato de potássio até não ocorrer mais geração de gâs. Extraiu-se a fase aquosa três vezes com acetato de etiio. Secou-se as 10 fases orgânicas combinadas sob sulfate de sódio e evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (2 mL) o agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Após evaporação, purificouse o resíduo duas vezes por RP-HPLC preparativa (primeiro em Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonítrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso; depois em 15 Shield RP18, gradiente: 5%~50% de metanol -i- 0,1% de TEA aquoso/0,1% de

TFA aquoso).. Submeteu-se o produto assim obtido a licfilízação a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dloxano para e obter 14 mg (8% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t— 0,67 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 467 (M*H)*.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s); infer a/., δ * 8,50-8,22 (s In, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,36-6,01 (S Ir., 1H), 4,88 (S In, 2H), 4,56 (s h\, 2H), 3,96 (s, 3H, sobreposto com o pico de ãgua), 3,26 (s, 3H), 2,46 (s,

145/265

3H), 1,52 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 15

7~{((3S)-3~Amino-3-metilpirroíidina-1-il]-metil}-6-(etoximetil)-5-(7-metaxi~5-metii1 -benzotiofeno-2-lí)-pirtolo[2,1 -fj[1 _;2<4]tnazina-4-amina

[285] Tratou-se uma solução de intermediário 17A (100 mg, 271 μπιοΙ) em ácido acético (1 mL) com uma solução aquosa de formaldeído a 37% (24 pL, 326 pmol) e [(3S)-3-metílpirroiidÍna-3iH-carbamato de iero-butiio (Yoshida et a/., Chem. Pharm. Bu/l 1996, 44 (7), 1376-1386: 65 mg, 326 pmol). Agitou-se a 10 mistura a 60°C durante 4 horas. Depois, adicionou-se mais quantidades de solução aquosa de formaldeído a 37% (10 uL, 136 pmol) e de [(3S)-3metilpirrolidína-3-ii]-carbamatõ de terc-butllo (27 mg, 136 pmol) e manteve-se sob agitação a 60^<JC de um dia para o outro. Após evaporação, repartiu-se o resíduo entre acetato de etilo e uma solução aquosa saturada de hidrogeno15 carbonato de sódio. Adicionou-se carbonato de potássio sólido até não ocorrer mais geração de gás. Extraiu-se a fase aquosa três vezes com acetato de etilo. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de sódio, evaporou-se e purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%~95% de acetonltrilo/0,1% de ácido fórmico aquosa). Dissolveu-se o produto assim 20 obtido numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Após evaporação, purificouse o residue por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de

146/265 acetonitrito/0,1% de ácido formica aquosa) para se obter 24 mg (18% teórico) do composto em epígrafe.

LOMS (método 4): t_r ~ 0,70 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 461 (M-rHf.

'H-NMR (400 MHz, DMSOxfe): infer af., δ ~ 8,19 (s, 1H). 7,38 (s, 1H), 7,34 (s,

1H), 6,87 (s, 1H), 4,90 (s te. 2H), 3,96 ($, 3H), 3,46 (q, 8H), 2,46 (s, 3H), 1,54 (s, 3H), 1,14-1,05 (m, 3H) p.p.m..

Exemplo 16

Dicloridrato de 1 -(4-{(4-amlno-6· (metoximeti^-S-CT-metoxi-S-metil-l -benzotiofeno-2-il)-pirrolo[2,1 -f](1,2,4]triazina-7~il]-rnetil>-piperazina-1 -il)-etanona

[286] Tratou-se uma solução de intermediário 21A (50 mg, 141 umol) em ácido acético (1 ml.) com uma solução aquosa de formaldeido a 37% (4,6 pL, 169 umol) e N-acetilpiperazina (21,6 mg, 169 p.mcl). Agitou-se a mistura a 75°O durante 3 horas. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC 15 preparativa (Reprasil C18, gradiente: 10%~95% de acetoniirllo/0,1% de ácido fórmico aquoso). Submeteu-se a líofilização a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dicxane para se obter 34 mg (39% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 5): t_$ ~ 1,78 minutos: MS (ESlpos): m/z ~ 495 (M*H)·.

'H-NMR (400 MHz. DMSO-dg): totera/.. $ * 8.70-8,35 (s Ir., 1H), 8,18 (s, 1H), 7,37 ($, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,86 (S, 1H), 6,61-6,19 (s Ir., 1H), 4,74 (s Ir.. 2H). 4.54

147/265 (s Ir., 2H), 3,96 (s, 3H). 3.25 (s_s 3H), 2,46 (s, 3H). 2,03 (s. 3H) p.p.m..

Exemplo 17

Formiato de 6-(metoximetil)-5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotiofeno-2~il)~7(piperazine- 1 -ilmetii)-pirrola[2,1 <1,2,4]triazina-4-amina

H,C

V K -^CH<

NH_? ? r> /

L, xHCOOH

N \ \ /H [287] Tratou-se uma solução da intermediário 23A (110 mg, 204 pmol) em diclcrometane (2,2 mt) cam Hereto de tionila (29 ,uL, 4Q8 pmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 minutes. Após evaporação, dissolveu-se ο resíduo em metanol (2,2 mL) e tratou-se oom DIPEA (39 pL, 224 pmol). Agitou10 se a mistura a ZOO durante 1 hera e depois evaporou-se. Retomou-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-díoxano (2,2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporou-se e purifícau-se por AP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% da aoetonítriIo/0,1% de ácido fórmíoo aquoso) para se obter 44,9 mg (40% teórico) 15 do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r 0,73 minute; MS (ESIpos): m/z 453 (M+Hf.

Ή-ΝΜΑ (400 MHz, DMSO-dg): δ ~ 8,28 (s ir„ 1H), 8,00 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,31 (s. 1H), 6,85 (s, 1H), 4,41 (s. 2H), 4,00-3,90 (m. 5H), 3,00-2,90 (m, 4H), 2,65-2,56 (m, 4H), 2,45 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 18

6-(Etoximetil)-5-(7-metoxi-5-metíl-1~benzotiofeno-2-il)-7-(piperazína-1-Hmetil)pirrolc[2,1 -Q[1,2,4]triazina-4-amÍna

148/265

[288] Tratou-se uma solução de intermediária 23A (80 mg, 317 ,umoi) em diciorometano (2 mL) com cloreto de tíonilo (22 uL, 297 umol) e agitou-se à temperatura ambiente durante i5 minutos. Após evaporação, dissolveu-se o 5 resídua em etanol (2 mL) e tratou-se oom DIPEA (28 uL, 163 p.mol). Agitou-se a mistura a 7Q°C durante 1 hora e depois evaporou-se. Retomou-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 h. Evaporou-se o purificau-se por RP-HPLC preparativa (Reprosíl C18, gradiente: 16%~95% de acetonitrilo/0,1% de áoido 10 fórmico aquoso) para se obter 35 mg (50% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t - 0,82 minuto; MS (ESlpos): m/z - 467 (M-í-H)L ⁵H-NMR (400 MHz, DMSO-de): inter a/„ 5 - 8,09 (s Ir., 1H), 7,36 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 4.50 (s Ir., 2H), 3,96 (s, 3H), 3,42 (q, 2H, sobreposto com o pico de água), 2,45 (s, 3H), t ,05 (t, 3H) p.p.m..

Exemplo 19

Diofoádrato de 6-(etoximetil)-5-(7-metoxi-5-metii-1 -benzotiofeno~2-iI)-7(plperazina-1 -iimetil)-pirrolo[2,1 -f|[1,2,4]triazina-4~amina

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[289] Agitou-se uma solução do exemplo 18 (50 mg, 107 urnol) nume solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (1 mL) à temperatura ambiente durante 15 minutos. Após evaporação, obteve-se 55 mg (93% 5 teórico) do composto em epigrafe.

LC-MS (método 4): Ç ~ 0,74 minuto; MS (ESlpos): m/z - 467 (Mt-H)C

H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): infera/. δ - 8,18 (s, 1H), 7,37 (s, 1H). 7,34 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 4,76 (s Ir., 2H), 4,60 (s Ir., 2H)_S 3,96 (s, 3H), 3,45 (q, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,09 (t, 3H) p.p.m..

Exemplo 20 ~(44[4-Aminu-6-(etoximetil)-5-(7~metoxi-5metil-1 -benzutiofenc-2-il)-pírroto[2,1 f][l ,2,4]triazina-7-il]-metil}-piperazlna-1 -il)~etanona

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[290] Tratou-se uma solução do exemplo 18 (70 mg, 150 qmol) em diclorometano (2 mL) e THE (0,8 mL) com cloreto de acetilo (21 pL_y 300 umol) e carbonato de sódio (127 mg, 1,2 mmol). Agitou-se a mistura à temperatura 5 ambiente de um dia para o outro. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 27 mg (31% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t- - 0,77 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 509 (M-rHp.

^H-NMR (400 MHz, DMSO-cU): ó * 7,98 (s, 1H). 7,37 (s, 1H), 7,31 (s. 1H), 6,84 (s, 1H), 4,45 (s, 2H). 3,95 (s, 3H), 3,92 (s, 2H), 3,45-3,36 (m, 6H), 2,48-2,38 (m, 7H, sobreposto coot o pico de DMS0), 1,97 (s, 3H), 1,06 (t, 3H) p.p.m..

Exemplo 21

Fermiate de 4-({4-amíno-6-[(2~hidroxíetoxi)~rnetil]-5~(7-metoxl~5-metil-1 15 benzotiefeno-2~il)~pirrolo[2_í1 -f][1,2_>4]trlazína-7-il}-metií)~piperazina-2-Qna

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HX

[291] Tratou-se uma solução do exemplo 13 (60 mg, 132 pmoí) em diclorometano (2 mL) com cloreto de tionlio (14 pL, 198 pmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos s depois evaporou-se.

Dissolveu-se o resíduo em etileno-glicol (500 pL) e agitou-se a 100°C durante 90 minutos. Puríficou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosíl 018, gradiente: 10%~95% de acetonitrílo/0,1% de ácido fórmíco aquoso) para se obter 34 mg (47% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t,· ~ 0,69 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 497 (M-rH)/

HNMR (400 MHz, DMSO-ds); 6 * 8.14 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7.74 (s lr„ 1H), 7,42 ($, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,84 (s. 1H), 4,49 (s, 2H), 3,99 (S, 2H), 3,98 (S, 3H), 3,50-3,43 (m, 2H). 3,42-3,36 (m, 2H, sobreposto com o pico de água), 3,153,07 (m, 2H), 3,03 (S, 2H), 2,69-2,61 (m, 2H), 2,45 (S. 3H) p.p.m..

Exemoto 22

Dlcloridrato de 24[4-amino-5-(7-metoxi-5~metÜ’1-benzotíofeno~2-ii)-7(piperazina-1 -ílmetil)~pirrolo(2,1 -f][1,2,4]triazína-6-íl]~metoxí}~etanol

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[292] Tratou-se uma solução do intermediário 23A (100 mg, 185 pmol) em diclorometano (4 mL) com cloreto de tionílo (27 gL, 371 gmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 20 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o resíduo em etileno-glicol/THF (a 2:1, 1,5 mL) e agitou-se a 100°C durante 2 horas. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: 10%~95% de acetonítriio/0,1% de ácido térmico aquoso) e depois por cromatografia em coluna através de gel de silica (diclorometanoZmetanol r 0,1% de amónia aquosa, 98:2 > 90:10). Liofilizou-se 10 a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1.4-dioxano para se obter 67 mg (64% teórico) do composto em epígrafe, LC-MS (método 2): t_r ~ 0,66 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 483 (M+H)⁺.

H-NMR (400 MHz, DMSO-d«): ó - 8,16 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 6,98 (S, 1H), 4,86 (s, 2H), 4,69 (s, 2H), 4,03 (s, 3H), 3,81-3,49 (m, 12H), 2,50 (s. 3H) 55 p.p.m..

Exemalo 23

Formiato de 6-(butoximetii)-5-(7~metoxi-5-metil-l -benzotiofeno-2-il)~7(piperazína-1 -iimetíl) -pirroiopd -fj[1,2,4]táazina-4-amina

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[293] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (100 mg. 185 pmoí) em diclorometano (2 mL) com cloreto da tionílo (27 p.L, 371 umol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o resíduo em 1 -butanol (2 mL) e aqueceu-se até 7í)°C durante 1 hora. Após evaporação, retomou-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporou-se e purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico 10 aquoso) para se obter 22 mg (24% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): Ç ~ 0,82 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 495 (M*H)\

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d®: ó ~ 8,29 (s, 1H). 7,99 (s, 1H), 7.35 (s. 1H), 7,29 (s, 1H). 6,84 (s, 1H), 4,43 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,92 (s, 2H), 3,35 (t, 2H), 2,902,79 (m, 4H), 2,45 (s, 3H), 1,47-1,37 (m, 2H), 1,31-1,18 (m, 2H), 0,80 (t, 3H) 15 p.p.m..

Exemplo 24

8ís-(formiato) de S-iT-metoxi-S-metil-l-benzotiufeno-O-iQ-T-fpiperazina-l ilmetiQ-e-CpropoxímetiO-pirrolo^l-fHl^jtnazina-é-amina

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[294] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (100 mg, 185 gmoi) em diclorometano (2 mL) com cloreto de tionilo (27 gL, 371 pmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se, 5 Dissolveu-se o resíduo em 1 -propanol (2 mL), tratou-se com DIPEA (48 μΕ, 278 p.mel) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Após evaporação, retomou-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4díoxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporouse e purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% 10 de acetonitrilo/0,1% de ácido íórmiuo aqucso) para se obter 15 mg (16% teórica) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,78 minuto; MS (ESipos); m/z ~ 481 (M+H)·.

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d_e): δ 8,26 (s Ir., 2H), 7,98 (s, 1H). 7.36 (s. 1H),

7,30 (s, 1H), 6,84 (s. 1H). 4,44 (s, 2H), 3,95 (s, 3H). 3,92 (s. 2H), 3,32 (t, 2H).

2,87-2.79 (m, 4H), 1.52-1,39 (m, 2H). 0,81 (t, 3H) p.p.m..

Exemplo 25

Bis-(formiato) de 6-[(ciclupropílmetoxí)-metíl]~5-(7-metoxi-5~metil~l -benzotiofeno~2-il)-7-(piperazina~1 -ilmetil)~pirrulc[2.1 -f[[1 ₍2₍4]tnazina-4-amina

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[295] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (100 mg, 185 pmol) em diclorometano (2 mL) com cloreto de tionila (27 pL, 371 pmol). Agitou-ee a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o residue in ciclopropilmetanoi (2 mb), tratou-se com DIPEA (48 pL, 278 pmol) e agitou-se a 70°C durante 2 horas. Após evaporação, retomouse o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4~dioxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporeu-se e purificouse por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 1Õ%-95% de 10 acetonitríto/8,1% de ácido fórmlco aquosa) para se obter 29 mg (30% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t- ~ 0,78 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 493 (M-s-H).

'H-NMR (400 MHz₅ DMSO-d₆): ó - 8,28 (s Ir., 2H), 7,99 (s, 1H), 7,37 (s, 1H)_;

7,30 (S, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,45 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,93 (s, 2H), 3,21 (d, 2H), 15 2,95-2,83 (m, 4H), 2,61-2,56 (m, 4H), 2,45 (s, 3H), 1,01-0,91 (m, 1H). 0,46-0,37 (m, 2H), 0,15-0,08 (m, 2H) p.p.m,, [296] 6“((Ciclobutílaxi)-metíl]5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotiofeno-2-il)-7(piperazina-1 -ilmetií) -pirroio[2,1 -f][1 .EAJtriazina-A-amina.

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[297] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (85 mg, 157 _Mmol) em dlclorometano (1,7 mL) com cloreto de tionílc (23 uL, 315 gmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o resíduo em ciolobutanol (1,7 ml), tratou-se com DIPEA (41 μΕ, 236 p.mol) e agitou-se a 70°C durante 2 horas. Após evaporação, retomou-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-diaxano (1,7 mL) e agitou-se á temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporou-se e purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil C-18, gradiente: 10% -95% de 10 aoetonítriio/0,1% de ácido formica aquoso) para se obter 23 mg (28% teórica) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,82 minuto; MS (ESlpos); m/z ~ 493 (M-f-H)L ^-NMR (400 MHz, DMSO~d_s): δ - 8,01 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,37 (s, 2H), 4,06-3,86 (m, 6H), 3,14-2,97 (m. 4H), 2,80-2,62 (m, 4H), 15 2,45 (s, 3H), 2,10-1,96 (m, 2H), 1,83-1,69 (m, 2H), 1,65-1,52 (m. 1H), 1,49-1,33 (m, 1H) p.p.m..

Exemplo 27

Formlato de 6-(isopropoximetil)-5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotiofeno~2-il)~7(piperazina-1 -ilmetil)-pirrolo(2,1 -f][1 ,2,4]triazína-4-amína

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[298] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (65 mg, 120 pmoi) em dicfommetano (1,3 ml) com cloreto de tionilo (17 pl, 241 pmol). Agítou~se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o resíduo em 2-propanel (1,3 mL), tratou-se com DIPEA (23 pL, 132 pmol) e agitou-se a 70^cC durante 1 hora. Adicionou-se mais DIPEA (23 pL, 132 pmol) e agitou-se a mistura novamente a 70°C durante 1 hora. Depois, adicionou-se uma nova porção de DIPEA (63 pL, 362 pmol) e manteve-se sob agitação a 9CPC durante 3 horas. Após evaporação, retomou-se o resíduo 10 numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxane (1,3 mL) e agitouse à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporou-se e purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetGnitrilo/0,1% de ácido térmico aquoso) para se obter 23 mg (34% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 4): tr ~ 0,74 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 481 (M*Hf>

^H -NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8,30 (s. 1H), 7,98 (s, 1H), 7,37 (s. 1H), 7,30 (S, 1H), 6,84 (s, 1H), 4.43 {S, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,90 (S, 2H), 3,57 (m, 1H, sobreposto com o pico de água), 2,88-2,78 (m, 4H), 2,45 (s. 3H), 1,04 (d, 6H) p.p.m,,

Exemplo 28

Formiato de 6-[(2-metcxietoxi)~metil]-5~(7-metoxi-5-metil-1 -benzoíiofeno-2~il)-7~ (piperazina-1 -ilmetil)-pirrolo[2,1 -f](1,2,4]tríazína-4-amína

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[299] Tratou-se uma solução da intermediário 23A (100 mg, 185 μΓΠΟί) em diclorometano (2 mL) com cloreto de tionilo (27 yL, 371 pmo!). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o resíduo em 2-metoxietanol (2 mL), tratou-se com DIPEA (35 pL, 204 μηιοΙ) e agitou-se a 70°C durante 1 hora. Após evaporação, retomou-se o resídua numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-díoxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporou-se e purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil CW, gradiente: 1O%~95% de 10 aeetonitrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 50 mg (50% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t,- ~ 0,75 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 497 (M+Hf.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_e): δ » 8,26 (s ir., 1H)< 7,99 (s, 1H), 7,39 (s, 1H),

7,30 (S, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,48 (s. 2H), 3,95 (S, 3H), 3,94 (s, 2H), 3,52-3,46 (m, 15 2H, sobreposto com o pico de água), 3,44-3,37 (m, 2H, sobreposto com o pico de água), 3,20 (s, 3H)_t 2,94-2,84 (m, 4H), 2,61-2,54 (m, 4H, sobreposto com o pice de DMSO), 2,45 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 29 * Formíato de 5-(7~metoxí-5-metií-1-benzQtíofeno-2-íl)-7~(piperazína-1~ilmeti0-620 [(2,2,2-trifluoroetoxí)-metíl]-pírrolo[2,1 -f][1,2,4]tríazína-4-amina

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[300] Tratou-se uma solução da intermediário 23A (100 mg, 185 pmol) em diclorometano (2 mL) com cloreto de tionilo (27 μθ, 371 μΓποΙ). Agitou-se a mistura á temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o residue em 2,2,2-trifiuoroetanoi (2 ml), tratou-se oom DIPEA (35 pL 204 ,u.mol) e agitou-se a 70°C durante 1 hora. Adicionou-se mais DIPEA (35 pL, 204 pmol) e manteve-se sob agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. Após evaporação, retomou-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (2 mL) e agitou-se ã temperatura ambiente 10 durante 2 horas. Evaporou-se e purificou-se per RP-HPLC preparativa (Reprosif C18, gradiente: 10%~95% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 23 mg (23% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,79 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 521 (M-rH)·.

’H-NMR (400 MHz, DMSO-ds): δ 8,28 (s Ir., 1H). 8.00 (s, 1H)_; 7,37 (s, 1H), 15 7,30 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,66 (s. 2H), 4,08 (q, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,92 (s, 2H).

2,65-2,75 (m, 4H), 2,45 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 30

Tricloridrato de 6-[(2-aminoetoxi)-metil]-5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotiofeno-2-il)* 7-(piperazina-1 -ilmetil)-pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina-4-amina

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[301] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (150 mg, 278 pmol) em díciorometano (5 mL) com cloreto de tlonilo (40 pL_s 556 pmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o resíduo em THF (0,5 mL) e tratou-se com (2-hidroxietil)carbamato de terc-butilo (1 mL) e DÍPEA (242 pL, 1,39 mmoi). Agitou-se a mistura a 10O°C de um dia para o outro. Após evaporação, retornou-se o resíduo em 1,4-dioxano (10 mL), tratou-se com uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (10 mL) e agitou-se à temperatura ambiente 10 durante 1 hora. Removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida e purificou-se o residue por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%95% de acetonitrílo/0,1% de ácido fórmioo aquoso). Purifícou-se ainda por RPHPLC- preparativa (Shield RP18, 25% de aoetonitnlo/75% de TFA aquoso a 0,01%) e depois liofilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 15 M 1,4-dioxano para se obter 10 mg (6% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t ~ 0,58 minuto; MS (ESlpos): m/z - 482 (M-s-H)L ¹H-NMR (409 MHz, D_SO): δ - 8,12 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,44 (s. 1H), 6,99 (s, 1H), 4,61 (s, 2H). 4,04 (s, 3H), 3,88-3,80 (m, 1H), 3,70-3,60 (m, 3H), 3,52-3,46 (m, 4H), 3,40-3,34 (m, 4H), 3,07 (t, 2H), 2,51 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 31 {[4-Amíno~5-(7-metoxi-5-metil-1-benzotiofeno-2-ii)~7-(píparazlna-1-ilmetíl)pirrolo[2,1 --1)(1,2,4)triaxína-6-íl]~metoxi}~aoetato de metilo

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[302] Tratou-se uma solução de Intermediário 23A (50 mg, 92 μηιο!) em diclorometano (2 ml) com cloreto de tionile (13 p.L, 186 μπιοΙ). Agítou-se a. mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se, 5 Dissolveu-se o resíduo in gliooiato de metilo (1 mL), tratou-se com DIPEA (80 p.L, 464 pmol) e agitou-se a 70°C durante 2 horas, Após evaporação, retomouse o resíduo em diclorometano (1,6 mL), tratou-se com ácido trífluoroacêtíoc (400 uL, 5,19 mmoi) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Depois, evaporou-se a mistura e purificou-se o resíduo por RP-HPLC 10 preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: l0%-95% de acetonitrílo/0,1% de TFA aquosa). Neutralizou-se as fracções que continham o composto em epígrafe com uma solução aquosa saturada de hídrogeno-carbonato de sódio e evaporou-se. Retomou-se o resíduo em água e extraiu-se a mistura três vezes com diclorometano. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de 15 sódio e evaporou-se para se obter 21 mg (43% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r 0,72 minuto; MS (ESlpos): m/z - 511 (M-rH)L

H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): Õ - 7,99 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,85 (S, 1H), 4,59 (S, 2H), 4,11 [p, 2H), 3,95 (S, 3H), 3,90 (s, 2H), 3,57 (s, 3H), 2,8120 2,69 (m, 4H), 2,48-2,39 (m, 7H) p.p.m..

Exemplo 32

Ácido {(4~amino-5-(7-metQxi-5-metil-1 -benzotíofeno-2-il)~7-(piperazina-l-iímetil)162/265 pirrolo[2, i -1)(1 ,2,4]triazina-64l]-metoxí}-acético

[303] Tratou-se uma solução de intermediário 24A (200 mg_; 327 μηιοΙ) era THF (14 mL) oom uma solução aquosa de hidróxido de litio 2.5 M (16 mL) e agitou-se a 80°C durante 2 horas. Combinou-se então a mistura com uma mistura de reação de um ciclo de teste de 27 mg. Extraiu-se a taso aquosa duas vezes com THF e evaporcu-se as fases orgânicas combinadas. Dissolveu-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4dioxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 3 heras. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%~95% de acetonítrílo/0,1% de TFA aquoso). Üofilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano e purificou-se novamente por RP-HPLC preparativa (XBridge C18, gradiente: 5%-95% de acetonitriio/0,1% de uma solução aquosa de hidróxido de amônio) para se obter 13 mg (7% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t ~ 0,69 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 497 (M+Hf.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_e): δ - 8,00 (s, 1H)_; 7,38 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,54 (s. 2H), 4,08 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,79 (s, 2H), 2,99-2,89 (m, 4H), 2.73-2,63 (m, 4H), 2,44 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 33 ' WVWWWVWW*AA*Jv*AAAAAAAAAAAAAAAA' ' '

2-{[4~Amin0-5~(7-metoxi-5~metil-1-benzotiofenc-2-il)-7-(píperazina-1-ilmetil)~ plrre!c[2,1 -f][1,2,4]triazina-6-ii]-metoxi}-acetamida

163/265

[304] Tratou-se o intermediário 24A (.200 mg, 327 pmol) com uma solução do amónia 7 M em metanol (10 mL) e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Combinou-se então a mistura com a mistura de reação de um 5 ciclo de teste de 20 mg e evaporou-se os solventes, Tratou-se o resíduo com uma solução de cleretc de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxana (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporou-se e submeteu-se a purificações subsequentes por RP-HPLC preparativa (primeiro em Reprosil Cl 8, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de TFA aquoso; depois XBridge 10 CIS, gradiente; 5%-95% de acetonitnío/0,1% de uma solução aquosa de hidróxido de amónia) para se obter 5,5 mg (3% teórico) da composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,69 minuto; MS (ESlpas): m/z ~ 496 (M-fH)⁺<

'H-NMR (400 MHz, DMSO ds): δ « 8,14-7,59 (s In, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,39 (s, 15 1H), 7,35-7,22 (m, 3H), 6,35 (S, 1H), 4,54 (S, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,90 (S, 2H),

379 (S, 2H), 2,73-2,66 (m, 4H), 2,45 (s, 3H), 2,43-2,35 (m, 4H) p.p.m..

Exempla 34 2-({7-[{4-Acetilpipsrazina-1-il)-matil}-4-amino-5-(7-metaxi~5-metil-1~benzctiofena-2-il)-pírraía[2,.1-t][l,2,4ltriazina~6-ií}-metoxi)-acetamida

164/265

[305] Tratou-se uma solução do exemplo 33 (105 mg, 68% de pureza, 144 pmol) em THF/diclorometano (a 1:2,5, 3,9 mL) com carbonato de sódto (179 mg, 1,6 mmol) e agitou-se á temperatura ambiente durante 30 minutes.

Adicionou-se cloreto de acetiío (30 pl, 424 pmol), agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 30 minutos, depois extinguiu~se com metanol (2 mL) e evaporou-se. Purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprcsil C18, gradiente: 10%-95% de acetonítrilo/0.1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 30 mg (85% de pureza, 34% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 5): t_f ~ 1,67 minutos: MS (ESlpos): m/z ~ 538 (M*H)T ^SH-NMR (400 MHz, DMSO-dí·): Õ 7,99 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,33-7,19 (m, 3H), 6,85 (S, 1H), 4,55 (S, 2H), 3,96 (S, 5H), 3,80 (S, 2H), 3,43-3,36 (m, 4H), 2,472,36 (m. 7H), 1,97 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 35

Bis-(formiato) de 5-(7~metoxi-5-metil-1-benzotíofeno-2-ii)-6-(fenoximetii)~7(piperazina-1 -ilmetii)-pirrolo[2,1 -f][1,2,4]tnazina-4~amina

165/265

[306] Tratou-se uma solução de intermediário 23A (100 mg, 185 pmoi) em diciorometano (2 mL) com cloreto de tionilo (27 «L, 371 qmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se, 5 Dissolveu-se o resíduo em THE (2 ml), tratou-se com fenol (174 mg, 1,85 mmol) e DIPEA (48 pL, 278 «mel) e agitou-se a 70°C durante 2 horas. Adicionou-se novas quantidades de tend (174 mg, 1,85 mmol) e de DIPEA (64 .ui, 371 p.mol) e manteve-se sob agitação a 70^&C de um dia para o outro. Após evaporação, retomou-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 10 4 M em 1,4-díoxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporou-se e purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: 10%-95% de acetcnitríio/0,1% de ácido térmico aquoso) para se obter 8 mg (8% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): Ç ~ 0,84 minuto; MS (ESlpos): m/z 515 (M-s-H)’.

'H-NMR (400 MHs, DMSO-d_s): δ ~ 8,26 (s, 2H), 8,02 (s. 1H). 7.36 (s, 1H), 7,307,22 (m, 3H), 6,99-6,89 (m, 3H), 6,81 (m, 1H), 5,04 (s, 2H), 3,93 ($, 5H), 2,782,71 (m, 4H), 2,42 (S, 3H) p.p.m,.

Exemplo 36

Tricicridrato de 5-(7-metoxi-5-metíi-1-benzotiofeno-2-ií)-6~[(metilamino)-metil]-720 (piperazína-1 -ilmetil) -pirroio[2,1 -Í][1,2,4]triazina-4~amina

166/265

[307] Tratou-se intermediário 25A (150 mg, 279 pmol) em THF (3 mL) com ácido acético (32 pL, 559 pmoi), uma solução 2 M de metííamina em THF (698 pL, 1,39 mmol) e tnacetoxiboro-hidreto de sódio (296 mg, 1,39 mmol). Agitou5 se a mistura a 60°C durante 2 horas e depois evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (1,87 mL) e agítou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Após evaporação, purificouse o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: 10%-95% de acetonitriio/0,1% de TFA aquoso). Liofilizou-se a partir de uma solução de 10 cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se obter 79 mg (49% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r - 0,56 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 452 (M+H)*.

\H-NMR (400 MHz, D_SO): δ - 8,17 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,46 (s. 1H), 7,01 (s, 1H), 4,52 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 0,48-3,39 (m, 4H), 3,25-3,15 (m, 15 4H), 2,59 (S, 3H), 2,51 (S, 3H) p.p.m..

Tríoloridrato de 6-[(dimetilamiao)-metil]-5~(7-metcxi-5~metil-1 -benzotlofeno-2-il)7-(piperazina~1 -ilmetil)~pirrolo[2,l -f][1,2,4]trlazina-4-amlna

167/265

[308] Tratou-se uma solução de intermediário 25A (150 mg, 279 μπιοΙ) em THF (3 mL) com ácido acético (32 uL, 559 umol). uma solução 2 M de dimetilamina em THF (698 μΐ. 1,39 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio 6 (296 mg, 1,39 mmol). Agitou-se a mistura a 80°C durante 2 horas e depois evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa solução da cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (1,88 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonürito/0,1% de TFA aquoso), 10 Liofilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4dioxano para se obter 83 mg (50% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_r ~ 0,50 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 466 (M*Hf.

Ή-NMR (400 MHz, D_SQ): δ - 8,17 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,45 (s, 1H)< 7,01 (s_;

H), 4,57 (s, 2H), 4,50 (S, 2H), 4,04 (s, 3H)„ 3,47-3,36 (m, 4H), 3,21-3,12 (rn, 15 4H), 2,80 (S, 6H), 2,51 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 38

Tnoloridrato de 6-[(etilamino)-metíl]-5-(7-metoxi-5-metil-1 ~benzotiofeno-2-il)-7(piperazina-1 -ilmetil)-pirrolo[2,1 ~f|(1,2,4]triazlna-4-amína

168/265

[309] Tratou-se uma solução de intermediário 25A (60 mg, 111,8 pmoí) em THF (1 ml) cem uma solução 2 M de etilamina em THF (83 pL, 167 pmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (118 mg, 559 prnoí) e ácido acétlco (83 p.L, 187 5 pmol). Agitou-se a mistura a 60°C durante 90 minutos. Adicionou-se novas quantidades de solução 2 M de etiiamina (83 p.L, 167 pmol) e de triacetoxiborohídreto de sódio (71 mg. 335 pmoi) e manteve-se sob agitação a 60°C durante mais 2 horas. Após evaporação, dissolveu-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (3 mL) e agitou-se à temperatura 10 ambiente de um dia para o outro. Evaporou-se a mistura, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso) e liotíllzou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano, Purificou-se novamente por RP-HPLC preparativa (Sunfire Cl8, 20% de acetonitrílo/80% de TFA 15 aquoso a 0,02%) e liofilizou-se novamente a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se obter 19 mg (29% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,56 minuto: MS (ESipos): m/z - 466 (M rH)L

Ή-NMR (400 MHz. D_SO): δ * 8,14 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7,45 (s. 1H), 7.01 (s, 20 1H), 4,45 (s, 4H), 4,04 (s, 3H), 3.45-3,32 (m. 4H), 3.18-3,05 (m, 4H), 2,99 (q,

2H). 2,51 (s, 3H), 1,10 (t, 3H) p.p.m..

169/265

T rioloridrato de 2-({[4-amino-5-(7-metoxi-5-metii-1 -benzotiofeno-2-il)-7(piperazina-1 -iimetil)-pirroío[2,1 ~f][1 ^^Jtriazína-eiO-metill-amjnol-etanoi

[316] Tratou-se uma solução de intermediário 25A (150 mg, 279 pmoí) em 5 THF (3 mL) com 2-aminoetanol (84 pL, 1,39 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (296 mg, 1,39 mmol) e ácido acético (32 pL, 569 pmoi). Agitou-se a mistura a 60°C durante 2 horas e depois evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4 dioxane (1,87 mL) e agitouse à temperatura ambiente durante 2 horas. Após evaporação, purificou-se o 10 resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de aoetenitrilo/0,1% de TFA aquoso). Llofliizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se obter 140 mg (80% teórico) do com posto em ep í g rafe.

LC-MS (método 2): t - 0.54 minuto; MS (ESlpos): m/z 482 (h/h-H)·,

-H-NMR (400 MHz, D_gO).· δ = 8,15 (s. 1H)_; 7,56 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,47 (s, 2H), 4,37 (s, 2H), 4,04 (S, 3H), 3,79-3,71 (m, 2H), 3,42-3,34 (m, 4H), 3,19-3,12 (m, 2H), 3,06-2,97 (m, 4H), 2,51 (s, 3H) p.p.m..

Procedimento geral para reações de aminaçãc rsdutíva com intermediário 25A [311] Tratou-se uma solução 0,1 M de Intermediário 25A em THF com 5 eq. do componente amina respectivo, 5 eq. de triacetoxiboro-hidreto de sódio e 2 eq. de ácido acético. Agítou-se a mistura resultante a 60^í:>C durante 2 horas e

170/265 depois evaporou-se. Agitou-se uma solução 0,15 M do resíduo assim obtido numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano à temperatura ambiente durante 1 a 2 horas. Após evaporação, purificou-se o resíduo conforme a seguir descrito,

Exempla 40 [312] Tricioridrato de rac-1 <4-amino-5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotiofeno-2il)'7-(piperazina-1ílmetil)-pírrato[2,1-í][1_s2,4]triazina-6-ín~metil}-piperidÍna-3-ol

[313] De acordo com o GP1, fez-se reagir o intermediário 25A (150 mg, 10 279 p.mol) com 3-hidroxipiperidína (141 mg, 1,39 mmol). Purificou-se por RP-

HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de TEA aquoso) e liofilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dtoxano para se obter 178 mg (quant.) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f = 0,54 minuto; MS (ESlpos): m/z =· 522 (M-i-H)i ’H-NMR (400 MHz, D₂O): Ô - 8,10 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 4,60-4,16 (m, 5H), 4,04 (s, 3H). 3.55-2,71 (m, 11H>, 2.51 (S. 3H), 1,90-1,42 (m, 4H), 1,64-1,50 (m, 1H) p.p.m..

Exem.pl0.41 [314] Tricioridrato de 1-{[4-amínc-5-(7-metoxi-5-metíl~1-benzctiofeno-2-il)-

7-(piperazina-l -ílmetil)-pirroío[2,1 -f)[1,2,4]triazina-6-il]-metil}-piperidina-4-ol

171/265

[315] De acordo com o GP1, fez-se reagir o intermediário 25A (150 mg, 279 omoi) ccm 4-hidroxípípendina (141 mg, 1,39 mmol). Purificou-se por RPHPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de

TFA aquoso) e liofilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4

M em 1,4-dioxano para se obter 162 mg (91% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_r ~ 0,48 minuto; MS (ESipos): m/z ~ 522 (Mi-H)7 'H-NMR (400 MHz, D_;?O): δ - 8,16 (s, 1H), 7,58 (s Ir., 1H), 7,46 (s, 1H), 7,01 (s, 10 1H), 4,67-4,48 (m, 4H), 4,04 (S, 4H), 3,59-2,78 (m, 12H), 2,51 (S, 3H), 2,14-1,38 (m, 4H) p.p.m..

Exemplo 42 [316] Tricloridrato de rac-1 -{[4-amino-5-(7-metoxi-5-metll-1 -benzotiofeno-2il)-7~(piperazína-1 -ílmetil)~pirrolo[2,1 -f][1,2,4]tdazina-6-ií]-metíl}-pirrolidina-3~oi

172/265

[317] De acorda cam o GP1, fez-se reagir o intermediária 25A (150 mg, 279 .umoi) com 3-hidroxipmolidina (113 p.L, 1,39 mmol). Purificou-se por RPHPLC preparativa (Reprosil 018, gradiente: 10%-95% de acetonitrílo/0,1% de

TFA aquoso) e liofílizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4

M em 1.4-dioxano para se obter 148 mg (85% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 4): ç ~ 0.46 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 508 (M+H);

Ή-NMR (460 MHz, D_SO): δ 8,18 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,46 (s. 1H), 7,01 (s< 10 1H), 4,71-4,30 (m, 5H), 4,04 (s, 3H), 3,70-2,95 (m. 12H), 2,51 (S, 3H), 2,32-2.14 (m, 1H), 2,03-1,87 (m, 1H) p.p.m,, [318] Tricioridrato de 6-[(dietilamino)-metíl]~5-(7-metoxi-5~metil-1’ benzotiofeno-2-il)-7-(piperazina-1-ilmetiQ-pirroia^J-f][1,2,4]triazina-4-amina

173/265

[319] De aeordo com o GP1, fez-se reagir o intermediário 25A (150 mg, 279 pmpl) com dietilamina (144 gL, 1,39 mmol). Purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetnnitrilo/0,1% de TFA aquoso) e liotilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se obter 127 mg (69% teórico) do composto em epígrafe. LC-MS (método 2): t_f ~ 0,55 minute; MS (ESlpos): m/z ~ 494 (M+Hf.

'H-NMR (400 MHz. D_;íO): δ « 8,19 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 4,59 (S, 2H), 4,51 (S, 2H), 4,04 (S, 3H), 3,47-3,35 (m, 4H), 3,29-3,00 (m, 10 8H), 2,51 (s, 3H), 1,07 (t, 6H) p.p.m..

Exemplo 44 [320] Tricloridrato de 6-[(cick)butilamino)~metil]~5-(7-metoxi~5-metil-ibenzotiofeno-2-il)-7-(piperazina-1 -ilmetil)-pírrolo[2,1 -f][1.2,4]tnazína-4-amlna

174/265 [321] De acorda com o GP1, fez-se reagir o intermediário 25A (150 mg, 279 p.mol) com cictcbutilamina (119 pL, 1,39 mmol). Purificou-se por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 1034-95% de acetonitrilo/0,1% de TFA aquoso) e liofilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em

1,4-diaxano para se obter 127 mg (72% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r 0,58 minuto; MS (ESlpos); m/z ~ 492 (M+Hf,

Ή-NMR (400 MHz, D₂O): δ - 8,16 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,40 (s, 2H), 4,37 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,69-3,68 (m, 1H). 3,44-3,33 (m, 4H), 3,21-3,12 (m, 4H), 2,51 (s. 3H), 2,02-1,87 (m, 4H), 1,81-1,62 (m, 2H) 10 p.p.m..

Exemplo 45 [322] Tricloridrato de 5-(7-metox!-5-metil-1-benzotiofeno-2-íl)-7- (piperazina-1 -ilmetil)-6-(pirrolidlna-1 -ílmetil)-pirroio[2,1 -F|(1,2,4]triazina-4-amina

[323] De acordo com o GP1, fez-se reagir o intermediário 25A (150 mg,

279 pmol) com plrrolídina (118 pL, 1,39 mmol). Purificou-se par RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrile/ 0,13c de TFA aquoso) e liofilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se abter 112 mg (64% feérico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): V - 0,54 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 492 (M*H)\

Ή-NMR (400 MHz, D₂O); δ ~ 8,19 (s, 1H), 7,60 (s, ΊΗ), 7,46 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 4,70-4,61 (m, 4H), 4,04 (s. 3<), 3.55-3,40 (m, 6H), 3,35-3,26 (m, 4H), 3,02175/265

2,87 (m, 2H), 2,51 (S. 3H), 1,97-1,83 (m, 4H) p.p.m..

Exemple 46 [324] Tricloridrato de 6-((ciclopropiiamino)-rnetil]-5-(7-metoxi-5~metii-1- benzo-tloteno-2-il)-7-(piperazlna-1 -ilmetil)-pirroia[2,l -f](1,2,4]triazina-4-amina

[325] Da acordo oom o GP1, fez-se reagir o intermediário 25A (200 mg, 372 pmol) com ciclopropilamlna (129 pL, 1,86 mmoi). Purificou-se por RPHPLC preparative (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonltrllo/0,1% de TEA aquosa) e liofilizou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4

M em 1,4-dioxano para se obter 140 mg (62% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 5): t_r ~ 1,42 minutos; MS (ESIpos): m/z - 478 (M+Hf.

^!H-NMR (400 MHz, D₂Q): δ - 8,16 (s. 1H), 7,56 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 4,57 (s, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,.04 (s, 3H), 3,46-3,34 (m, 4H), 3,19-3,07 (m, 15 4H), 2,61-2,54 (m, 1H), 2,51 (s, 3H), 0,75-0,64 (m, 4H) p.p.m..

[326] Tricloridrato de 6-{((cialopropllmetii)-amino]-metil}-5-(7-metoxi~5metil -1 -benzotiofeno-2-il) -7- (piperazina-1 -ilmetil)-pirrolo[2,1 ~f][1,2,4]triazina-4~ amine

176/265

[327] De acurde com o GP1, fez-se reagir o intermediário 25A (260 mg, 372 p.mol) com ciclopropilmetiíamina (161 μΐ, 1,66 mmol). Purificou-se por RPHPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonítrilo/0,1% de

TFA aquoso) e licfilízou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4

M em 1,4-díoxano para se obter 163 mg (69% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,80 minuto; MS (ESlpos): m/z - 492 (M·♦ H)'L 'H-NMR (400 MHz, D₂O): δ « 8,14 (s, 1H). 7_;57 (s, 1H). 7,45 (s< 1H), 7,00 (s, 10 1H), 4,56 (S, 2H)< 4,44 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,42-3,34 (m, 4H), 3,16-3,07 (m,

4H), 2,36 (d, 2H), 2,50 (s, 3H), 0,89-0,76 (m, 1H), 0,55-0,45 (m, 2H), 0,23-0,14 (m, 2H) p.p.m..

Exemplo 48 [328] Triclorídrato de N~([4-amino-5~(7-metoxi~5-metíl-t~benzotíofeno~2-il)15 7-(piperazina-l -ilmetil) -pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina-6-il] - metilj-glicina

[329] Tratou-se uma solução de intermediário 25A (161 mg. 300 pmol) em THE (3,2 mL) com ácido 2-aminoacético (112 mg, 1.5 mmol), tnacetoxiborohidreto de sódio (317 mg, 1,5 mmol) e ácido acético (34 pL, 600 pmol). Agitou- se a mistura resultante a 60°C durante 2 horas e depois evaporou-se. Purificouse o residue por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de TEA aquosa). Dissolveu-se o produto assim obtido numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Após evaporação, purificou-se o resíduo 10 por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 1O%~95% de acetonitrilo/0,1% de TFA aquoso). A subsequente iiofilização a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano proporcionou 18 mg (9% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,63 minuto; MS (ESlpos): m/z - 496 (M+Hf.

Ή-NMR (400 MHz, D_SO): ã 8,14 (s. 1H), 7,54 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 4,42 (s, 2H), 4,36 (s, 2H), 4,03 (s. 3H), 3,64 (s, 2H), 3,42-3,33 (m, 4H). 3,07-2,96 (m, 4H), 2,50 (S. 3H) p.p.m..

Exemplo 49 [330] Tricioridrato de 44H-^^fo«i-5-(7-metcxi-5-metil~l-benz.Gtiofeno-2-ii)-

7-(piperazina-1 -iimetii)-pírrolG[2,1 -f][1,2,4]tríazina-6-íi]~metii}-piperazina-2-Qna

178/265

[331] Agitou-se uma solução de intermediário 27A (220 mg, 354 μmoi) numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (2 ml) à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois evaporou-se a mistura obtendose 235 mg de produto impuro, que se utilizou no passo subsequente sem mais purificação.

LC-MS (método 4): t ~ 0,60 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 521 (Mr-H)L

Exemplo 50 [4-Amino-5-(7~metoxi~5-metíl~1-benzotiofeno-2-ií)~7-(morfoiina-4-ilmetll)'· pirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazina-6-íl]-metanol

[332] Agitou-se uma solução de intermediário 20A (500 mg, pureza de 87%, 1,28 mmol) e cloreto de 4-metilenimorfolín-4-io (347 mg, 2,55 mmol) em

179/265

DMF (28 ml) a 70°C durante 1,5 boras. Diluiu-se a mistura cam acetate de etilo e lavou-se com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a oamada orgânica sob sulfate de magnésio e evaporou-se sob pressão reduzida para se 5 obter 710 mg (pureza de 78%, 99% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 2): t_r - 0,65 minuto; MS (ESipos): m/z ~ 440 (M rHf.

Exemplo 51 MWMWMVWWWWWMWWUWWVMWWVWMM.

(3S)-3-({[4-Amirro-5-(7-metoxi-5-metil”1-benzotiofeno-2-il)-7-(morfolina-4ilmetil)~pirrolo(2,1 ~f][1 ,2,4]triazina-6-il]-metil}-amina)-pirroiidina-2~ona

[333] Tratou-se uma solução de intermediário 33A (65 mg, 149 pmol) cm metanol (2 ml) com (3S)-3-aminoplrrolidlna~2-ona (45 mg, 446 pmol), cianoboro-hidreto de sódio (47 mg, 743 pmol) e ácido acético (26 uL, 446 pmol). Depois de se agitar a 60°C durante 16 horas, separou-se a mistura 15 resultante por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 20%-40% de acetonitrilo/0,2% de TFA aquosa). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta anióníca (Stratospheres SPE, PL-HCOg MP-resína). Efectuou-se a eluiçâo do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 49 mg (63% teórico) do composto em 20 epígrafe.

LC-MS (método 2): t,- - 0,71 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 522 (M*H) ·.

M-NMR (400 MHz, DMSO-d_s); δ * 7.96 (s. 1H), 7.66 (s. 1H), 7,5-8,1 (s Ir., 1H), 7,44 (s, 1H), 7,31 (S,.1H), 6,84 (S, 1H), 5,4-6,0 (S Ir., 1H), 3,95 (S, 3H), 3,91 (s,

180/265

2H), 3,75 (d, 2H), 3,50-3.66 (m, 4H). 3,06-3,19 (m, 3H), 2,94-3,05 (m, 1H), 2,61 (t, 1H). 2,45 ft, 3H), 2,38-2,44 (m, 4H), 1,89-1,99 (m, 1H), 1,49-1,60 (m, 1H)

p.p.m,.

4-([4-ΑΓπίηο-5-(7-πΐδΐοχΐ-5-πιβίΐΜ-0δηζο1ίθίβπθ“24Ι)>·7-(ΓηοΓίοΗπ3-4·ϋπΐβ1Η)pirrolo[2,1 -f|(1,2,4]tnazína~6-il]-metíl}-piperazína-2-ona

[334] Tratou-se uma solução de intermediário 33A (65 mg, 149 pmol) em metanol (2 mL) com 2~oxopiperazina (45 mg, 448 pmol), cianoboro-hidreto de 10 sódio (47 mg, 743 pmol) e ácido aoétioo (26 pL, 446 pmol). Depois de se agitar a 60°C durante 16 horas, separou-se a mistura resultante por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18. gradiente: 20%~40% de acetonítnlo/0,2% de TFA aquoso). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta aniónica (Stratospheres SPE, PL-HCO» MP15 resina), Efectuou-se a eluiçâo do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 41 mg (53% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t ~ 0,70 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 522 (M*H)⁺.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_e): δ - 7,97 (s, 1H), 7,67 (s In, 1H), 7,55-8,05 (s Ir., 1H), 7,38 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 5.29-5,88 (s Ir., 1H), 3,95 (s, 3H), 26 3,92 (s, 2H), 3,58 (s, 2H), 3,51-3,56 (m, 4H), 3,00-3,06 (m, 2H), 2,85 (s, 2H),

2,45 (s, 3H), 2,43-2,48 (m, 5H) p.p.m..

Exemple 53

181/265

ΓΗδ“1-({[4-ΑΓη!ησ-5-(7-Γη©1οχΐ-5’ΓηβίίΜ-όοηζο1ίαΐ6πθ’2ίΙ)7~(ΓηοΓίοΗηα-4-ίΐΓη©1Μ)’ pirrolo[2, 1 -fi[i ,2,4]triazina-8-ii]-metil}-amíno)~propano~2-ol

[335] Tratou-se uma solução de intermediário 33A (64 mg, 146 pmoí) em 5 metanol (2 mL) com rac-1 -aminoprupano-2-ol (33 mg, 439 pmol), cianoborohidreto de sódio (46 mg, 731 pmoí) e ácido acético (25 μΐ, 439 pmol). Depois de se agitar a 60°C durante 16 horas, separou-se a mistura resultante por RPHPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 20%-40% de acetonitnlo/0.2% de TFA aquoso). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e fíltrou-se 10 através de um cartucho de permuta aniônica (Stratospheres SPE, PL-HCO₃ MP-resina). Efectuou-se a eluiçâo do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 42 mg (57% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 6): t_f ~ 1,63 minutos: MS (ESlpos): m/z ~ 497 (M+H)L ^H-NMR (400 MHz, DMSO-d_fí): δ 7.96 (s, 1H), 7,47-7,92 (s Ir., 1H), 7,39 (s, 15 1H), 7,30 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 5,36-5,92 (s k\, 1H), 4,36 (d, 1H), 3,95 (S, 3H),

3,90 (S, 2H). 3,64-3,75 (m, 2H), 3,49-3,61 (m, 5H), 2,45 (s, 3H), 2,39-2,47 (m, 4H), 2,31 -2,38 (m, 2H), 0,97 (d, 3H) p.p.m..

1-({[4-Amino-5-(7~metoxi-5-metil-1-benzatiofenO2-il)-7-(morfolina-4-ilmetil)20 pirrolo[2,1 -f|[1,2,4]triazina-6-il]-metil}-amíno)-2-metilpropano~2-ol

182/265

[336] Tratou-se uma solução de intermediário 33A (80 mg, 183 pmol) em metanol (2 mL) com 1 amino-2-rnetilprGpano-2-ol (34 rng, 274 pmoi), cianoboro-hidreio de sódio (57 mg, 914 pmol) e ácido acético (21 pL, 366 5 pmol). Depois de se agitar a 60°C durante 16 horas, separou-se a mistura resultante por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradienter 2034-4034 de acetonitriio/0,2% de TFA aquoso). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta aniónica (Stratospheres SPE, PL-HCOs MP~resina). Efectueu-se a eluíção de cartucho cem metanol e 10 evaporou-se o filtrado para se obter 29 mg (31% teórica) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): 4 ~ 0,65 minute; MS (ESlpos): m/z ~ 511 (M-rH)L ^!H-NMR (400 MHz, DMSO-ds): δ 7,96 (s, 1H), 7,50-8,02 (s Ir., 1H), 7,42 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 5,4-6,0 (s ir., 1H), 4,11 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3,90 15 (s. 2H), 3.70 (d, 2H), 3,51 -3,58 (m, 4H), 2,45 (s, 3H), 2,39-2,46 (m. 4H), 2,33 (d,

2H), 1,83-1,92 (m, 1H), 1,03 (S, 6H) p.p.m..

Example 65 l-(4-{[4-AminO“6~(hidroximetíl)-5~(7-metoxi-5~metil-l-benzctiofeno~2-il)phTolo[2₍ 1 ~Q[1,2,4]tríazína-7-il]-metil)-píperazina~l -il)-etanona

183/265

[337] Tratou-se uma solução de intermediário 20A (345 mg, 1,01 mmol) em ácido acétíco (5 mL) com uma solução aquosa de formaldeidc a 3784 (91 uL, 1.22 mmol) e 1-acetilpiperazina (160 mg, 1,22 mmol). Agitou-se a mistura a 5 60°C durante 6 horas a depois evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa mistura de THF/solução aquosa de hidróxido de litío 1 M (a 1:1, 10 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Combinou-se então a mistura com a mistura de reação de um ciclo de teste ds 100 mg e adicionouse uma solução aquosa saturada de cloreto de amónia. Extraiu-se a mistura 10 com acetato de etilo, lavou-se a fase orgânica com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se sob pressão reduzida para se obter 678 mg (pureza de 87%, 94% teórico) de composto em epigrate,

LC-MS (método 2): t,· ~ 0,71 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 481 (M+H)7

Exemplo 58 (3R)-3~[({7-[(4-Acetílpipsraziaa-1-il)-metil]-4~amino-5~(7-metoxi-5~metii-1benzotíofeno-2-li)-pirrolo[2,1 ~f][1,2,4]tnazína-6-í1}-metil)amino]pírrolidina-2-ona

184/265

CH_S [338] Tratou-se uma solução de intermediário 31A (80 mg, 167 pmol) em metanol (1,4 mL) com (3R)-3-amínopírrolidina-2-ona (21 mg, 251 pmol), cianoboro-hidreto de sódio (52 mg, 836 pmol) e ácido acético (19 pL, 334 5 pmol). Depois de se agitar a 60°C durante 16 horas, separou-se a mistura resultante por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente; 20%-40% de acetonitrilo/0,2% de TFA aquoso). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta aníónica (Stratospheres SPE, PL-HCOs MP-resloa). Efectuou-se a eiuiçâo do cartucho com metanol e 10 evaporou~se o filtrado para se obter 46 mg (49% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): L ~ 0,70 minuto; MS (ESlpos): m/z « 563 (M+H)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ « 8,42 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,93-8,24 (s h'„ 1H), 7,51 (S, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,88 (S, 1H), 5,75-6,07 (s In, 1H), 4,21-4,37 (m, 15 2H), 4,19 (s, 2H), 4,10 (t, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,56-3,66 (m, 2H), 3,44-3,54 (m,

4H), 3,11-3,27 (m, 4H), 2,47 (s, 4H), 2,16-2,25 (m, 1H), 2,00 (s, 3H), 1,86-1,95 (m, 1H) p.p.m..

Exemplo 67

1-(4-{(4-Amina-6'{[(2-hídroxi-2'metiipropíl)-amino]-metil}-5-(7-metuxi-5~metil-120 benzotiofeno-2-il)-pirroio[2,1 -f][1,2,4]triazina-7-íl]-metíl}-piperazína-1 -íl) -etanona

185/265

[339] Tratou-se uma solução de intermediário 31A (80 mg, 183 pmol) em metanol (2 mL) com 1-amíno-2-metíípropano-2-ol (31 mg, 251 pmol), cianoboro-hidrato de sódio (53 mg, 838 pmol) e ácido acètico (19 μΐ, 334 5 pmol). Depois de se agitar a 60°C durante 16 horas, separou-se a mistura resultante por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 20%-40% de acetonítrilo/0,2% de TEA aquoso). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta aniónica (Stratospheres SPE, PL-HCOs MP~resina). Efectuou-se a eleição do cartucho com metanol e 10 evaporou-se o filtrada para se obter 29 mg (31% teórico) da composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,71 minuta; MS (ESlpos): m/z - 552 (M-rH)h

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d_e): δ - 7,96 (s, 1H), 7,59-8,02 (s In, 1H), 7,42 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5,45-5,93 (s In, 1H), 4,13 (s In, 1H), 3,95 (S, 3H), 15 3,93 (S, 2H), 3.71 (s, 2H), 3,37-3,44 (m, 4H), 2,45 (S, 3H), 2,32-2.43 (m. 6H),

1,97 (s, 3H), 1,03 (s, 6H) p.p.m..

Exemplo 58

Formlato de 4-((4 amino-5-(7-metcxi-5-metii-1 -benzotiofeno-2-il)-6-[(3-oxopiperazína-1 -il)~metil]-pirrula(2,1 -f][1,2,4]triazina-7~il}-metil)~píperazina-l 20 carbaldeídc

186/265

Ο χHCOOH [340] Agítou-se anidrido de ácido acético (498 μΐ, 5.17 mmol) e áoido fórmico (237 μΙ, 6,28 mmol) em primeiro lugar durante 2 horas a 5Q°C e depois de um dia para o outro à temperatura ambiente. Subsequentemente, diluiu-se a mistura com diclurometano (5,1 mL) e adicionou-se 1,16 mL desta solução a uma solução do exemplo 49 (233 mg, 370 pmol) em pirídína (89 pL). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 2 horas, diluiu-se a mistura com metanol e depois evaporou-se. Purificou-se o resídua par RP-HPLC preparativo (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido térmico aquoso) para se obter 77 mg (35% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_f - 0,62 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 549 (M-rH) L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): fntera/. δ - 8,14 (s, 1H), 7,97 (s, 2H). 7,67 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 3,96 (s. 2H), 3,95 (s, 3H), 3,58 (s, 2H), 3,04 (t ir,, 2H), 2,86 (s, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,42 (t Ir., 2H) p.p.m.,

Exemplo 59

4-({7-[(4-Acetilpiperazina-1-il)-metil]’4-aminO5-(7-metoxi-5-metil-1-benzotiofeno-2-il)-plrrolo[2,1 -fj[ 1,2,4]triazina-6-il}-metil)~píperazina-2~ona

187/265

[341] Tratou-se uma suspensão do exemplo 49 (310 mg, 522 pmoí) em dicíorometano/THF (a 2,5:1, 9,64 mL) com carbonato de sódio (442 mg, 4,17 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Adlcioncu-se cloreto de acetiio (74 p.L, 1.04 mmol) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois de se extinguir com metanol, evaporou-se a mistura e purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosií C18, gradiente: l0%-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 133 mg (45% teórica) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,69 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 563 (M*H)L ¹ H-NMR (400 MHz. methanol-d*): ó ~ 7,89 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,28 (s. 1H), 8,79 (s, 1H), 4,13 (S, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,74 (s, 2H), 3,59 (t, 2H), 3,54 (t, 2H), 3,18 (t, 2H), 3,02 (s, 2H), 2,68-2,55 (m, 6H), 2,48 (s, 3H), 2,08 (s, 3H) p.p.m.. Exemplo 60

Bis-(term iato) de 4-amino-5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzottofeno-2-il)-7(piperazina-1 -i!carbQnil)-pirrolo[2,1 -f][1,2,4]tríazína-6-carboxílato de metilo

188/265

[342] A uma solução de intermediário 28A (15 mg, 26 pmol) numa mistura de THP/metanol (a 5:1 < 180 pL), arrefecida a 0°C, adicionou-se (trímetilsilil)diazometano (solução 2 M em hexano, 15 uL 32 umol). Aqueceu-se lentamente a mistura resultante até â temperatura ambiente ao longo de 20 minutos e depois evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano (0.5 ml) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil 018, gradiente: 10%-95% de acetonítrilo/0,1% de ácido 10 térmico aquoso) para se obter 4,8 mg (35% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): V - 0.66 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 481 'H-NMR (400 MHz, DMSG~d₈): inter a/. δ « 8,17 (s, 2H). 8,38-8,23 (s Ir.. 1H), 8,04 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 5,71-5,58 (s Ir., 1H), 3.96 (s, 3H), 3.60 (s. 3H, sobreposto com o pico de água), 2,46 (s, 3H) p.p.m.<

Exemplo 61 [343] Tricloridrato de 5-(7-metoxi-5-metií-1-benxotiofeno-2~il)-6~(l,3oxazoí~5-ii)-7-(píperazina-1-ilmetíl)-pirrolo[2,1-f][1,2<4]triazina-4-amina

189/265

[344] Tratou-se uma solução de intermediário 25A (100 mg, 0,19 mmol) em metanol (3,33 mL) com isocianeto de (4-tolueno-suifonil)~metilo (36 mg, 0,19 mmol) e carbonato de potássio (25 mg, 186 μηηοί). Manteve-se a mistura ao refluxo durante 6 horas. Combinou-se então com as misturas de reação provenientes de três ciclos de teste de 30 mg e evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dloxano (10 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 horas. Após evaporação, purificouse o resíduo duas vezes pur RP-HPLC preparativa (Reprosii Cl 8, gradiente:

l0%-95% de acetonítrilo/0,1% de TFA aquoso). Purificou-se novamente por cromatografia em coluna através de gel de silica (diciorometano/metanol a 5:1 corn 0,5% de amónia aquosa) e licfílízou-se a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se obter 75 mg (34% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_f ~ 0,69 minuto: MS (ESipos): m/z » 476 (M+H)L

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d_e): totera/. δ = 8,40 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,46 (s, 3H) p.p.m.. Exemplo 62

Tríoioridrato de 6-(amlnometíl)-5-(7'metoxi-5-metiM -benzotiofeno-2-íi)-720 (piperazina-1 -ilmetil) -pirrolo[2,1 f] [1,2,4]triazina-4-amina

190/265

[345] Preparou-se uma suspensão de intermediário 29A (76 mg, 134 μηιοΙ) e Pd a 10%/C (60 mg) numa solução de cloreto de hidrogênio 0_;5 M em metanol (20 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora, sob 1 atm 5 de hidrogênio. Filtrou-se então a mistura através de terra de diatomáceas, evaporou-se o filtrado e puríflcou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonítrilo/0,1% de TFA aquoso). Llofllizou-se o produto assim obtido a partir de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se obter 34 mg (46% teórico) do composto 1 o em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f = 0,55 minuto; MS (ESlpos): m/z 438 (M-rH)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO~d_$): infera/. δ = 8,24 (s Ir., 3H), 8,12 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 3,96 (S, 3H). 3,76-3,63 (m, 1H), 3,52-3,42 (m, 1H), 2,47 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 63

Bis-(trlfluoroacetato) de N-{[4-amino-5-(7-metoxi-5-metlí-1 -benzotlcfeno-2~il)~7(píperazina-1 -ílmetil)-plrrolo[2,1 -f|[1,2,4]tnazína-6-li]-metil}~acetamida

191/265

[346] Tratou-se uma solução de intermediário 30A (210 mg, 362 p.moí) em diclorometano (26 mL) com ácido trífluoroacético (5,2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Após evaporação á temperatura ambiente, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: 10%-95% de acetonítnio/0,1% de TFA aquoso) para se obter 163 mg (63% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 3): t_f ~ 2,42 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 480 (M-rH)*.

•H-NMR (400 MHz, DMSQ-ds): infer af. δ - 9,00-8,75 (s lr„ 1H), 8,30-8,16 (s lr„ 1H), 8,08 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 4,32 (d Ir., 2H), 3,96 (s, 3H), 3,40-2,98 (m, 8H). 2,46 (s. 3H), 1,77 (s, 3H) p.p.m..

Exemoío 84

Dicloridrato de N-{(4~aminc-5-(7-metoxi5-metil'l -benzotiofeno-2-íl)-7(piperazina-1 -ilmetil)-pirroio[2,1 -f][1,2,4]triazina-6-il]-metil}-acetamída

192/265

[347] Agitou-se uma solução de intermediário 30A (80 mg, 0,14 mmol) em diciorometano (10 mL) e ácido trifiuoroaoético (2 mL) à temperatura ambiente durante 1 hera e depois evaporou-se. Purificou-se por RP-HPLC preparativa 5 (Reprosil Cl 8, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso) e liofilizou-se a partir de uma mistura de metanol s ds uma solução de cloreto ds hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano para se obter 39 mg (50% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 5): t ~ 1,56 minutos; MS (ESipos); m/z ~ 480 (M-r-Hf.

'H-NMR (400 MHz, DMSO dg): ròfera/. ó - 8,12 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 4,37 (d Ir., 2H), 3,96 (s, 3H), 3,85-3,20 (m, 8H, sobreposto com o pico de água), 2,46 (s, 3H), 1,76 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 85

Formiato de N-({4-amina-7-[(4~formilpiperaz.ina-l -ii)-meti!}-5-(7-metoxi-5-metil-1 15 benzotiofeno-2-ií)-pirrolo[2,1 ~Q[ 1 _y2,4]triazina-6-il}-metil)~acetamida

193'265

[346] Agitou-se anidrido de ácido acético (304 pL, 3,16 mmol) e ácido formica (145 pL, 3,16 mmol), em primeiro lugar durante 2 horas a 50°C e depois de um dia para o outro à temperatura ambiente. Subsequentemente, 5 diluiu-se a mistura com diciorometano (3,1 mL) e adicionou-se 663 pL desta solução a uma solução do exemplo 63 (160 mg, 226 pmoi) em píridina (54 pL). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas, depois diluiu-se com metanol (1 mL) e manteve-se sob agitação a 4Ü°C durante mais 2 heras. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil 10 C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrlio/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 74 mg (61% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 4): t_r ~ 0,65 minuto; MS (ESipos): m/z - 508 (M rH)L

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ ~ 8,13 (s, 1H), 8.06-7,69 (m, 3H), 7,38 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H), 4,01-3,88 (m, 5H)., 2,47-2,34 (m, 7H), 15 1,75 (s, 3H) p.p.m...

Exemplo 66

N~({7~[(4-Acatílpiperazina-1-il)-metil]-4-amino-5-(7-metoxi-5-metil-1benzotiofeno-2-ll)-pirrolo(2,1 -f] [1,2,4]triazina-6-il}-metil)-acetamida

194/265

H...C

CH₃ [349] Tratou-se uma solução do exemplo 63 (110 mg, 229 pmol) e cloreto de aoetllo (32 _uL, 458 gmcl) em THF/diclorometano (a 1:2, 3 mL) com carbonato de sódio (194 mg. 1,83 mmoi) e agitou-se à temperatura ambiente 5 de um dia para o outro. Depois, diluíu-se a mistura com metanol (2 mL) e água (1 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hera. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: 10%95% de acetonltrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso). Submeteu-se a lioflllzaçãu a partir de 1,4-diexano e purificou-se novamente por cromatografía em coluna 10 através de gel de silica (diclorometano/metanol a 50:1 ·> 106% de metanol) para se obter 35 mg (28% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): L ~ 0,70 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 522 (M*H)T 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s): δ = 8,04-7,98 (m, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,31 (S, 1H), 6,85 (S, 1H), 4,27 (d, 2H), 3,95 ($, 3H), 3,91 (S, 2H), 3,44-3,36 (m, 4H), 2.4815 2,35 (m, 7H), 1,98 (s, 3H), 1,75 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 67

N-({4-Amino-5~(7~metoxi-5-metil-1-benzutiofeno-2-il)-7'{(3axopiperazina-1~il)metil]-pirrolo[2,i-f][i ,2<4]trlazina-6'il)-metil)-acetamida

195/265

[3503 Tratou-se uma suspensão de intermediário 32A (35 mg, 73 pmol) em metanol (4,1 mL) com anidrido acético (13 pL, 146 pmol) e Pd a 10%/C (41 mg) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora, sob 1 atm de hidrogênio.

Filtrou-se através de terra de diatomáceas e evaporou-se o filtrado para se obter 30 mg (79% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 5): L - 1,65 minutos; MS (ESípos): m/z ™ 494

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-de): õ « 7,99 (s, 2H). 7,75 (s Ir., 1H), 7,39 (s, 1H), 7,31 (S, 1H), 6,85 (S. 1H), 4.27 (s, 1H), 4,26 ($, 1H), 3,95 (s, 5H), 3,19-3,08 (m, 10 2H), 3,05-2,98 (m, 2H), 2,66-2,57 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,72 (S, 3H) p.p.m..

Exemplq 88

4-Amino~6-(hidroximetii)-5-(7-metoxi-5metiM-benzotiofeno-2~ii)~pirroio[2,1f](1,2.4]triazina-7-carbonitnlo

H..Ç

196/265 [351] Tratou-se uma solução de Intermediário 38A (1 g, 2.08 mmol) em THF (10 mL) oom uma solução 1 M de fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF (12 mL, 12 mmol), Agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro e depois evaporou-se. Retomou-se o resíduo em água e extraiu-se três vezes oom acetato de etilo. Secou-se as fases orgânicas combinadas sob sulfato de magnésio e evaporou-se. Triturou-se o residue em éter terc-butilmetíllco e filtrou-se o solido para se obter 680 mg (78% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0.95 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 366 (M~H)\ 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₈): δ ~ 8,61-8.29 (s lr._y 1H), 8,18 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,32-6,03 (s lr„ 1H), 5,46 (t, 1H). 4,55 (d, 2H). 3,96 (S. 3H), 2,45 (S, 3H) p.p.m..

Exemplo 69

4-Amino~6-(metoxímetil)-5~(7-metoxi-5-metii-1 -benzotiofeno-2-ií)-pirrolo[2_; 1 15 f][1,2.4]tríazina-7~carbonitriio

H.C _ZCFL O

NH_a . θ—CH„

Ν' /

Ν' \ CN [352] Tratou-se uma solução do exemplo 68 (60 mg. 164 pmol) em díclorometano (5 mL) oom cloreto de tionilo (18 pL, 246 pmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se.

Dissolveu-se o resíduo errí metanol (2 mL) e tratou-se com DiPEA (57 pL, 328 pmol). Agítou-se a mistura em primeiro lugar durante 2 horas a 60°C> depois ao refluxo de um dia para o outro e fínalmente aqueceu-se até 150°C durante 30 minutos num dispositivo de micro-ondas. A seguir, evaporou-se a mistura e

197/285 purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18. gradiente: 10%95% da acetonítrilo/0,1% de TFA aquoso). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta anlónica (Stratospheres SPE, PL-HCO3 MP-resina). Efectuou-se a eluição do cartucho 5 com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 18 mg (28% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_? ~ 1,12 minutos; MS (ESípos): m/z ~ 379 (MfH)L

Ή-NMR (400 MHz,. DMSO-d₆): Ó 8,61-8.40 (s lr._: 1H). 8,21 (s, 1H), 7,42 (s.

1H). 7,33 (S, 1H). 6.87 (s. 1H), 6,34-6,09 (s In. 1H), 4,47 (s, 2H), 3,96 (S, 3H), 10 3,26 (s, 3H), 2,45 (S, 3H) p.p.m..

Exemplo 70

4~Amino-6-(etoximetil)~5-(7-metoxL5-metíl~1-benzotiofeno-2-ií)-pirroto[2,1·' f|[l ,2,4]triaziaa-7-carbonitnlo

[383] Tratou-se uma solução do exemplo 68 (60 mg, 164 pmol) em diclorometano (5 mL) com cloreto de tiunilo (18 pL, 246 pmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois evaporou-se. Dissolveu-se 0 resíduo em etanol (2 mL) e tratou-se com DIPEA (57 uL, 328 p.mol)< Agitou-se a mistura a 60°C de um dia para o outro e depois aqueceu-se até 150°C durante 30 minutos num dispositivo de micro-ondas. A seguir, evaporou-se a mistura e purlficou-se 0 resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8. gradiente: l0%-95% de acetonitrile/0,1% de TFA aquoso). Dissolveu-se 0 produto assim obtido em etanol (2 mL) e aqueceu-se

198/265 novamente a 150°C durante 30 minutes no forno de rnicro-ondas. Adicionou-se Di PEA (57 p.L, 328 ptnol) e manteve-se sob aquecimento a 150°C no forno de micro-ondas durante mais 30 minutos. Após evaporação, purificou-se o residue por cromatografia em coíuna através de gel de silica (dicíorometano/metanol a

95:5) para se obter 16 mg (2334 teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 1,18 minutos; MS (ESlpos): m/z - 393 (MtH)L ’H-NMR (400 MHz, DMSO-d&): δ ~ 8,61-8,38 (s ir., 1H), 8,20 (s, 1H)₍ 7,42 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,33-6.08 (s lr„ 1H), 4,51 (s, 2H), 3.96 (s, 3H)_t

3,45 (q, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,10 (t. 3H) p.p.m..

4-AmiπO'·5·(7-metoxl-5-metll·1-benzGtfofeno-2-íl)-6-[(3-oxupiperazina-1-i!)-mstíφ pirrolo[2,1 -f|[1,2,4]triazina-7-oarbonitrilo

[354] Tratou-se uma solução de intermediário 39A (20 mg, 55 pmol) em 15 THE (0,73 mL) com ácido acético (6pL, 110 prnol), 2-oxopiperazina (27 mg,

275 gmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (58 mg, 275 pmol). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 3 horas, adicionou-se novas quantidades de THE (1 mL), ácido acético (6 p.L, 110 pmai), 2-oxopíperazina (27 mg, 275 prnoi) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (58 mg, 275 p.mol) e 20 manteve-se sob agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após evaporação, purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, * 199/265 gradiente: 10%-95% da acetonitriío/0,1% de TFA aquoso). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta aniónica (Stratospheres SPE, PL-HCO3 MP-resina). Efectuou-se a eluição do cartucho com metanol e evaporou-se 0 filtrado para se obter 13 mg 5 (52% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t,· ~ 0.86 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 447 (M+Hp.

Ή-NMR (400 MHz, DMSOd_s): δ = 8,60-8,31 (s Ir., 1H), 8.19 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,23-5,98 (S Ir., 1H), 3,96 (S, 3H), 3,62 (s, 2H), 3,13-3,07 (m, 2H), 2,91 (s, 2H), 2,45 (s, 3H) p.p.m,.

Exemplo 72

N,N-{[4-Amino-5-(7~metexi-5-metil-1 -benzoticfeno--2-il)-plrrulo[2,1 -f][1,2,4]triazina-6.7-diil]-bis-(metilena)}-díacetemida

[355] Agitou-se uma suspensão de intermediário 40A (impuro, 85 mg), Pd 15 a 10%/C (115 mg) e anidrido acético (40 uL. 435 pmol) em metanol (12 mL), à temperatura ambiente e sob 1 atm de hidrogênio. Decorridas 4 horas, adicionou-se novas quantidades de Pd a 10%/C (115 mg) e de anidrido acético (40 p.L, 435 pmol) e manteve-se sob agitação à temperatura ambiente e sob 1 atm de hidrogênio durante 2 horas. Filtrou-se a mistura resultante através de 20 terra de diatomáceas, evaporou-se o filtrado e purificou-se o resíduo por RP-

HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonítrilo/0,1% de

200/265

TEA aquoso). Dissolveu-se o produto assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta anióníca (Stratospheres SPE, PL-HCOs MP-resina). Efectuou-se a eluição do cartucho cem metanol e evaporou-se 0 filtrado para $e obter 15 mg (18% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,73 minuto; MS (ESIpos): m/z - 452 (hUHf.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d§): δ - 8.29 (t lr„ 1H), 8,04 (í In, 1H), 8,00 (s, 1H). 7,34 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,58 (d, 2H), 4,26 (d. 2H), 3,95 (s, 3H).

2,45 (s. 3H). 1,81 (s, 3H). 1.74 (s. 3H) p.p.m..

2-(4-Amino-6-(hidroximetil)-5-(7~metoxi~5-metíl-1 -benzotiofeno-2-H)-pirrolo|2,1 fj[1,2,4Jtriazina-7-ll]-propano-2-ol

[356] Sob pressão reduzida, desgaseificou-se um frasca que continha uma suspensão de intermediário 43A (180 mg, 598 pmol), intermediário 6A (299 mg, 15 897 pmoi) e fluoreto de césio (454 mg, 2,99 mmoi) em THF/água (a 10:1, 11 mL) e depois carregou-se novamente com árgon. Adicionou-se 4-(dí-tercbutiffosfíno)-N.N-dimetilanilina-diclaropaládio (a 2:1; 13 mg, 18 pmcl), Desgaseifícou-se novamente a mistura resultante e agitou-se a 50^<!C durante 16 horas, aob uma atmosfera de árgon. A seguir, separou-se a mistura de 20 reação por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 3Ô%-50% de acetonítrilo/0,2% de TPA aquoso). Eluiu-se as fracçôes de produto com uma solução 7 M de amónia em metanol e depois concentrou-se sob pressão fc

201/265 reduzida. Removeu-se por filtração o precipitada, lavou-se cem água e secouse sob uma pressão hipobárica pára se obter 99 mg (42% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t ~ 0,99 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 399 (M-rH)É 'H-NMR (460 MHz, DMSO-dg): δ ~ 7,98 (s, 1H), 7,51-3,02 (s Ir., 1H), 7,37 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,23-5,82 (s lr„ 1H). 5,04 (t, 1H), 4,53 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 2,45 (s. 3H), 1,73 (s, 6H) p.p.m..

Exemplo 74

4-{[4-Amino-7-(2~hidraxíprapano~2-il)-5-(7~metoxí-5-metil-i-benz.attofeno-2-ih10 p irrol oí2,1 -f][l _í2.4]triazlna-6-il]-metil}-plperazina-2-ona

[367] Tratou-se uma solução de intermediário 44A (50 mg, 73% de pureza, 92 pmol) em metanol (4 mL) com 2-oxopiperazlna (28 mg, 276 pmol), cianoboro-hídreto de sódio (23 mg, 368 pmol) e ácido acético (21 uL, 368 15 pmol). Agitou-se a mistura em primeiro lugar durante 18 heras a 60°C e depois durante 3 dias à temperatura ambiente. A seguir, separou-se a mistura por RPHPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 20%-4ü% de acetonitriio/0,2% de TFA aquosa). Diluiu-se as fracções de produto com urna solução 7 M de amónia em metanol e evaporou-se sob pressão reduzida. Dissolveu-se o 20 resíduo em acetato de etilo e lavou-se cem água. Secou-se a fase orgânica sob sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em 1,4-díoxano e líofilizou-se para se obter 24 mg (52% teórico) do composto

202/265 em epígrafe.

LC-MS (método 5): t_r ~ 1.85 minutes: MS (ESlpos): m/z ~ 481 (hUHp.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): 8 * 7,99 (s, 1H), 773-8,01 ($ lr„ 1H), 7,41 (s, 1H)_S 7,33 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,2-5,7 (s lr., 1H), 3,95 (s, 3H). 3,57 (s, 2H), 3,14 5 (s Ir., 2H), 2,60 (s k, 4H), 2,46 (s, 3H), 1,70 (s lr.< 6H) p.p.m..

Exemplo 75 [4-Amino-5-(7-metoxi-5-metiI-l -benzotiofeno-2-il)-7-metiipirrolo[2,1 -f][1,2,4]tnazina-6~íl]-metanoí

[358] Sob uma atmosfera de àrgon, carregou-se um frasco com 165 mg (0,64 mmol) de intermediário 53A, 143 mg (0,64 mmol) de intermediário 5A, 25 mg (0,03 mmol) de (2-8ηιΙποΡίίοηΙΙ~2-ϋ)-(οίθΓθ)~ροΙό6ία^ΙοίοΙο-ΚοχΙΙ-(2\4^:,6^!triisopropil-bifenii^-ilj-fosfina (1:1; ver S. L. Buchwaid ef a,L J. Am. Cheat Sou. 132 (40), 14073-14075 (2010)) e 409 mg (1,93 mmol) de fosfato de potássio.

Depois, adicíonou-se 7 mL de uma mistura desgaseificada de 1,4-dioxano e água (a 5:1) e agitou-se a solução a 70°C durante 1 bora. Adioionou -se reais uma porção de intermediário 5A (142 mg, 0,64 mmol) e de (2^s-amincbifenii-2-il)(cloro)-paládio-díclclo-hexH-(2^í,4¹,6’-tnisopropilbifenil-2-H)-fosfina (10 mg, 0,012 mmol) e manteve-se sob agitação durante 1 hora. A seguir, evaporou-se 20 parcialmente a mistura de reação sob pressão reduzida, adicionou-se agua e extraiu-se a mistura com acetato de etilo. Evaporou-se as fases orgânicas combinadas sob pressão reduzida e triturou-se o resíduo com acetonitrile. Removeu-se por filtraçâo o precipitado e secou-se sob uma pressão hipobárica

203/265 para se obter 180 mg (92% de pureza por LC-MS, 73% teórico) da composto em epígrafe. A partir do filtrado, obteve-se um segundo lute (41 mg_; 18% teórico) por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrílo/0.,1% de ácido térmico aquoso). Rendimento total: 91% teórico.

LC-MS (método 5): t ·- 1,92 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 355 (M*H)\ 'H-NMR (400 MHz, DMSO-df:): ó - 7,95 (s, 1H)_: 7,35 (s, 1H)_: 7,30 (s. 1H), 6,83 (S, 1H), 4,82 (t, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,95 (S, 3H), 2,45 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 76

4-](4~Amino-5~(7-metuxi-5~metil-1-benzotiafenQ-2-íl)-7~metilpírrolo(2,1-t]~ [1,2,4]triazina-6-il]-metil}-piperazina-2-ona

[359] Tratou-se uma suspensão de 55 mg (0,16 mmol) de Intermediário 54A em THE (1,5 mL) com 78 mg (0,78 mmol) de piperazina-2-ona, 18 pL (0,31 mmol) de ácido acético e 166 mg (0,78 mmol) de triacetoxiboro-hidreto. Agitou15 se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Depois.

adicionou-se 1,5 mL de água e evaporou-se a maior parte do solvente THF sob pressão reduzida. Diluiu-se a mistura restante com mais água, removeu-se por filtraçâo o sólido precipitado e secou-se (35 mg). Purificou-se ainda este material por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%~95% de 20 acetonitrilo/0,1% de ácido fórmíco aquoso). Ajustou-se o valor de pH das fracções de produto até 9 com carbonato de potássio sólido e concentrou-se parcíalmente sob pressão reduzida. Removeu-se por filtração o sólido

204/265 precipitado e secou-se sob uma pressão hipobárica a 45°C para se obter 16 mg (24% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 5): t_r ~ 1,74 minutos; MS (ESlpos); m/z = 437 (M^H)'·.

•H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s): δ = 7,95 (s, 1H)_t 7,66 (s Ir., 1H), 7,35 (s, 1H), 5 7,30 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 3,96 (s, 3H)_S 3,50 (s, 2H), 3,05 (m, 2H), 2,84 (s, 2H),

2,45 (m, 5H) p.p.m..

Exemplo 77

Formiato de 1 -({[4-amino-5-(7-metoxL5-metiL1-benzotiofen0-2-íi)”7-metil·· pírrolo[2,1-fI[1,2,4]tnazina-6~lí]-metil}-amíno)~2-metilpropano-2-ol

[360] Tratou-se uma suspensão de 55 mg (0,16 mmol) de intermediário 54A em THF (1,5 mL) com 98 mg (0,78 mmol) de cloridrato de i-ammo-2metilpropano-2~ol, 39 mg (0,47 mmol) de acetato de sódio e 166 mg (0,78 mmol) de triacetoxíboro-hidreto de sódio. Agitou-se a mistura à temperatura 15 ambiente de um dia para o outro. Depois, adioionou-se 1,5 mL de água e evaporou-se a mistura sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por RPHPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmíco aquoso) para se obter 38 mg (52% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 5): 1· ~ 1,68 minutos; MS (ESlpos); m/z « 426 (M+H)\ ⁵H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ « 8,19 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,45 (S, 3H), 2,34 (s, 2H), 1,02 (S, 6H) p.p.m..

205/265

-({[4-Amino-5-(7-metoxí-5”metíl-1 -benzotiQfeno-2-il)-7-mstilpirrQlo[2,1 -f]- (1,2,4]tnazinae-íl]-metii}-amíno)-2-metílpropano-2-ol

[361] Fez-se passar uma solução de 29 mg (0,06 mmol) do exempla 77 em 3 mL de metanol através de um cartucho Stratospheres SPE PL-HCOa MPresina, pré-condicíonado com 2 mL de metanol Lavou-se o cartucho com 4 mL de metanol e evaporou-se o aluado para se obter 21,5 mg (82% teórico) do composto em epígrafe,

LC-MS (método 4): t_f = 0,68 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 426 (M t H)L 'H-NMR (400 MHz. DMSO-dg): 6 - 7.94 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 728 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 4,07 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,63-3,75 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,32 (m, 3H), 1,42-1,56 (m, 1H), 1,02 (s. 6H) p.p.m..

Exemplo 79 \*λ^*λ*λλΧ*λ*λ*λ*Χ*Χ*λ*λ*λ*ααα^αααλ ^-Amina-T-cíoro-S-^-metoxi-S-metil-l -benzotiofenO2-il)-pirrolo[2,1 -f|15 [1.2,4]tnazina-6~íl]-rnetanol

206/265

Cl [362] Tratou-se uma solução de intermediário 48A (117 mg, Q,24 mmol) em 5 mL de THF cem 5 mL de ácido clorídrico concentrado e agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. Depois, adicionou-se 12 mL de 5 uma solução aquosa de hidróxido de sódio 5 M e também acetato de etilo, separou-se as camadas e extraiu-se a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo. Lavou~se as fases orgânicas combinadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se e evaporou-se. Purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de 10 acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 30 mg (34% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): L ~ 0,90 minuto; MS (ESipos): m/z ~ 375 (M*H)T 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_f:): δ « 8,04 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,85 (S, 1H). 5,02 (t, 1H), 4.43 (d, 2H), 3.96 (s, 3H), 2,45 (S, 3H) p.p.m..

Isolou-se 9,2 mg (10% teórico) de 7~cloro-6-(olurometil)~5-(7-metoxí~5-metíl-1benzotiofeno-2-il)-pirruiu[2,1-t][1_>2_í4]triazina4-amina como produto secundário (conforme intermediário 50A).

44(4-AminG~7-clorc-5-(7-metoxí-5-metíl-1~benzotiofeno-2-íl)-pirrolo(2,1-f|20 (1,2,4]triazina-6~il]-metil}-piperazína-2-nna

207/265

[363] Preparou-se o composto em epígrafe de acordo com o procedimento do exemplo 76_s partindo de 40 mg (0,11 mmol) de intermediário 49A. Rendimento: 27 mg (55% teórico),

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,86 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 457 (M+H)\ *H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): ó ~ 8,05 (s, 1H), 7,68 (s Ir., 1H), 7,44 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 3,96 (s, 3Hj, 3,52 (s, 2H), 3,05 (S In, 2H), 2,86 (S, 2H), 2,45 (5, 3H) p.p.m..

Exemplo 81

Formlato de 1-({[4-amino-7-clorQ-5-(7-metoxi-5-met.il-1-'beazctiofeno~2-il)pirroío[2,1 -f](1,2,4]tríazína-6-ll]-metií}~amlno)-2-metilpropano-2-ol

[364] Preparou-se o composto em epígrafe de acordo com o procedimento

208/265 do exemplo 77, partindo de 40 mg (0,11 mmol) de intermediário 49A. Rendimento: 24 mg (45% teórico).

LC-MS (método 2): t« 0,73 minuto; MS (ESipos): m/z ~ 446 (MiH)^:.

^!H-NMR (400 MHz, DMSO-d₈): δ ~ 8,15 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 3,96 (S, 3H), 3,73 (S, 2H). 2,45 (s, 3H), 2,32 ($, 2H), 1,00 (s, 6H) p.p.m..

Exemplo 82

-({[4-Amlno-7-ctoro-5-(7-metoxí-5-metíl~l -benzotiofeno-2~il)-pirroio[2,1 -f]·' [l,2,4]triazina'6-il]-metií}~amino)-2-metilpropano~2-oí

[365] Preparou-se o composta em epígrafe a partir do exemplo 81, de acorda com a procedimento do exemplo 78.

LC-MS (método 2): t, - 0,72 minuto; MS (ESipos): m/z ~ 446 (M*H)*.

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-cU): δ « 8,04 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6.85 (S, 1H), 4,09 (s Ir., 1H), 3,95 (s, 3H), 3,71 (s, 2H), 2,45 (s,. 3H), 2,31 (s, 2H), 1,44-1,64 (m, 1H), 1,00 (8, 6H) p.p.m..

Exemplo 83

7-C1ar0-6-(etoximetil)-5'(7-metoxi-5-metil-1-benzotiofeno~2-il)-pirrolo[2,1-t]- [1,2,4]triazína~4-amina

209/265

[366] Colocou-se em suspensão 8,2 mg (0,02 mmol) de intermediário 50A em 1 mL de etanol, tratou-se com 41 μΐ (0,11 mmol) de uma solução 2,68 M de etanolato de sódio em etanol e manteve-se ao refluxo durante 1 hora, 5 Evaporou-se então a solução límpida e purificou-se o produto impuro por RPHPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrílo/0,1% de ácido fórmico aquoso) para se obter 5 mg (56% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_f ~ 1,25 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 402 (M-r-H)L

-H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): Ó ~ 8,06 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 4,40 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,40 (q, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,06 (t, 3H) p.p.m.. Exemplo 84

Formiato de 5-(7'metuxi-5-metil~l -benzotiofeno~2-ii)-6-metil~7-(píperazina-1 ilmetíl)-pirrolo[2,1 -f|[1,2,4]triazina-4-amina

210/265

[367] Agitou-se uma solução de intermediário 57A (100 mg, 191 pmol) numa solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-díoxano (2 mL) à temperatura ambiente durante 3 horas e depois evaporou-se. Purificou-se duas 5 vezes por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente; 10%-95% de acetonitrilo/0,134 de ácido térmico aquoso) para se obter 71 mg (6734 teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,81 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 423 (M-rH)\ 'H-NMR (400 MHz, CDCI_S): δ « 8,46 (s Ir., 1H), 7,89 (s, 1H), 7,27 (s, 1H, 10 sobreposto com o pico de CHCI_S), 7,18 (s, 1H), 6,67 (s, 1H),. 4,01 (s, 3H), 3,97 (s, 2H), 3,18-3,09 (m, 4H), 2,82-2,73 (m, 4H), 2,50 (s, 3H), 2,24 (s, 3H) p.p.m..

Example 85

Tricloridrato de 8-olcro-5-(7-metoxí-5-metil-1~benzotiofeno-2-ii)-7~(piperazina-1 ilmetil)-pirralo[2,1 -f][1,2,4]tríazína-4-amina

211/265

[368] Agitou-se o intermediário 6ÔA (65 mg, 0,12 mmol) em 1 mL de uma solução de cloreto de hidrogênio 4 M em 1,4-dioxano durante 2 horas à temperatura ambiente. Evaporou-se a suspensão até à secura e purificou-se o 5 produto impuro por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 10%-95% de acetonitrilo/0,1% de ácido clorídrico aquoso) para se obter 49 mg (74% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t, - 0,61 minuto; MS (ESlpos); m/z ~ 443 (M*H)L 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₈): toteraf. δ ~ 9,56 (s Ir., 1H), 8,45 (s Ir., 1H), 6,19 10 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 6,89 (S, 1H), 6,30 (s Ir., 1H), 4,63 (s In, 1H),

3,40 (s ir., 6H), 2,46 (s, 3H) p.p.m..

Exemplo 86 [4-Amlno-6“(etoxlmetil)~5-(7~metoxi-5~metil-1-benzotiofenO“2-il)~pirrolo(2,l-i]·· [1,2,4]triazina-7-ií]-metanol «

212/265

[369] Obteve-se o composto om epígrafe (360 mg) como produto secundário, na preparação do exemplo 5 pelo método 1 de preparação.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,99 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 399 (M+H)*.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): 5 - 8,09-7,72 (s ir., 1H), 7,99 (s. 1H), 7,35 (s. 1H). 7,31 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,05-5,48 (s k, 1H), 5,04 (s lr„ 1H), 4,81 (d, 2H). 4,47 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,39 (q, 3H), 2,45 (S. 3H), 1.05 (t, 3H) p.p.m..

Exemplo 87

14[4'Amino-6-(etoximetit)~5-(7-metcxi~5-metíl-1 -benzotiofeno-2-ií) -plrrolo-[2,1 16 fj[1,2.4|tríazina-7-il]~metil}-ímidazoíidina-2-ona

[370] Tratou-se uma suspensão de Intermediário 63A (100 mg, 0,221 mmol) em THF (5 mL) com imídazoíidina-2~ona (57 mg. 0.662 mmol) e N,N

213/265 dlisoprppiletil-amina (153 μΕ, 0,926 mmol) e aqueceu-se a mistura até 150°C durante 90 minutos num forno de micro-ondas. A seguir, purifícou-se a mistura de reação por RP-HPLC preparativa (Reprosii C18, gradiente: 40%-60% de acetonitrilo/0,2% de ácido trifluoroacético aquosc). Dissolveu-se o produto 5 assim obtido em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta anióníca (Stratospheres SPE, PL-HCO3 MP-resina). Efectuou-se a eluição do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado. Purificou-se uma vez mais 0 produto por cromatografia em camada fina preparativa através de gel de silica (cicío-hexano/acetato de etilo a 3:1) para se obter 24 mg (22% teórico) do 10 composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0.99 minuto: MS (ESlpos): m/z ~ 467 (M-rH)È 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₈): δ 8,21-7,65 (s Ir., 1H), 7,99 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 6,04-5,56 (S Ir., 1H), 4,65 (S, 2H). 4,46 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,38 (q, 2H), 3,31-3,10 (m, 4H), 2,45 (s, 3H), 1,06 (t, 15 3H) p.p.m..

Exemplo 88

4-{[4-Amino-5-(7-metoxi -1 -benzctiofeno-2~il)~6-(metoximetíl)-pirrolo[2,1 -fl- [1,2,4]triazína-7-il]-metil}~piperazina-2~ona

[371] A uma solução de intermediário 62A (72,6 mg, 197 μΓποΙ), ácido (7metoxi-1-benzotiofeno-2-ii)-borónico (45 mg, 216 pmol) e fluoreto de césio (149

214/265 mg, 983 pmol) numa mistura desgaseificada de THF/água (a 10:1, 2,2 mL) adicionou-se, sob uma atmosfera de árgon, (2ⁱ-aminobifenil-2-ií)~(cloro)-paládíodicíclo-hexil-(2^>,4ⁱ,6^í-tnisopropilbifeníl-2~il)-fostina (1:1: 7,7 mg, 9,8 pmol; ver S. L, Buchwald et a/., J. Am. Chem. Soo. 132 (40), 14073-14075 (2010)).

Desgaseificou-se novameate a mistura resultante e agitou-se sob uma atmosfera de árgon a 60°C durante 3 boras. A seguir, separou-se a mistura por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 20%-40% de acetonitrílo/0.1% de TFA aquoso). Combinou-se as fracçôes de produto e evaporou-se atè à secura. Dissolveu-se o resíduo em metanol e filtrou-se através de um cartucho 10 de permuta aniónica (Stratospheres SPE, PL-HCOs MP-resina). Efectuou-se a eluição do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 31 mg (35% teórico) do composta em epígrafe.

LC-MS (método 2): t » 0,71 minuto; MS (ESlpos): m/z - 453 (M-t-H)L

Ή-NMR (400 MHz. DMSO-dg): δ ~ 8,00 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,61-8,23 (s Ir., 15 1H), 7,51 (d, 1H), 7,46 (S, 1H), 7,40 (t, 1H), 6,99 (d, 1H), 5,57-6,11 (S Ir., 1H),

4,42 (s, 2H), 3,98 (S. 5H). 3,20 (s, 3H), 3,11 (m Ir., 2H), 3.01 (s, 2H), 2,62-2,67 (m, 2H) p.p.m..

Exemplo 89

4-{[4~Amino-6-(metoximetii)-5-(5-metil-1 -benzotiofeno-2-ií)~pirrolo[2,1 -f]26 [1,2,4]triazina-7-íl]-metil}-píparazlna~2-ona

,NH

215/265 [372] A uma solução de intermediário 62A (50 mg, 135 pmol), ácido (5metil-1-benzotiofeno-2~ií)-bcrónicu (28,6 mg, 149 pmol) e fluoreto de césio (103 mg, 677 pmol) numa mistura desgaseificada de THF/água (a 10:1, 4,4 mL), sob uma atmosfera de árgon, adicionou-se (^-aminobifenil-S-ilj-ícioroj-paládio5 dicicío ·Κ©χΗ'(2\4\β^ι-ϊπί8ορ^ρίΙ^ίοηίΙ~2-Η)-ίοο8ηο (1:1; 5,3 mg, 6,8 pmol; ver S. L Buchwald et a/,, J. Am. Chem. Soa. 132 (40), 14073-14075 (2010)). Desgaseificou-se novamente a mistura resultante e agitou-se sob uma atmosfera de árgon a 60^<!C durante 16 horas. A seguir, separou-se a mistura por RP-HPLC preparativa (Reprosii Cl 8, gradiente: 30%-50% de 10 acetonitrilo/0,1% de TFA aquoso). Combinou-se as fracçóes de produto e evaporou-se até à secura. Dissolveu-se o resíduo em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permute aniõnica (StratoSpheres SPE, PL-HCO3 MP-resina). Efectuou-se a eluiçâo do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 27 mg (45% teóríc-o) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_? - 0,79 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 437 (M+Hf.

¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-dg); ó ~ 8,00 (s, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,71 (S, 1H), 7,58-8,18 (S Ir., 1H), 7,40 (s, 1H), 7,24 (dd, 1H), 5,58-6,03 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 3,97 (s, 2H). 3,21 (s, 3H), 3,11 (t lr„ 2H), 3,01 (s, 2H), 2,64 (t, 2H), 2,44 (s, 3H) p.p.m..

Bxempio $0

-[4~Amino-6-(etoximetil)-5-(7-metoxi-5-metíi~1 -benzotiofeno-2-il)-pirrolo-[2,1 f][l ,2,4]tnazina-7-il]-etanoi

216/265

[373] Sob uma atmosfera de árgon. adicionou-se, gota a gota, uma solução 1 M de brometo de metlí-magnésio em THF (630 pL, 630 pmol), à temperatura ambiente, a uma solução de intermediário 17A (100 mg, 252 pmol) 5 em THF (10 mL). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 3 horas e depois tratou-se com outra porção de brometo de metil-magnésio em THF (177 pL, 177 pmol). Agitou-se a mistura de reação durante mais 16 horas, depois extinguiu-se com uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio e extraiu-se com acetato de atilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas 10 com salmoura, secou-se sob sulfato de magnésio, filtrou-se e evaporou-se.

Purificou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: 40% 60% de acetonltrílo/0,1% de TFA aquoso). Dilulu-se as fracções de produto com urna solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e extraiuse com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com uma solução aquosa 15 saturada de cloreto de sódio, seçou-se sob sulfato de magnésio, filtrou-se e evaporou-se para se obter 39 mg (36% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t_f - 1,07 minutos: MS (ESlpos): m/z - 413 (M*H)\ 'H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ ~ 7,95 (s. 1H), 7,56-8,67 (s Ir., 1H), 7,35(s,

1H), 7.31 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 5,46-5,54 (m, 1H), 5,37-5,95 (s Ir., 1H), 5,26(d,

1H), 4,67 (d, 1H), 4,38 (d, 1H), 3.95 (S. 3H), 3,33 (q, 2H), 2,45 (S, 3H), 1,52(d,

3H)< 1,05(1, 3H) p.p.m..

217/265

Exemplo 91 [4-Amino-6~(etoximetil)-5-(7-metoxi-5-metil- 1 -benzotíofeno-2-il)-pírrolo(2, 1 -fill ,2,4]triazína-7-il]-(ciclopropil)-metanol

[374] Sob uma atmosfera de árgon, adicionou-se, gota a gota, uma solução 0,5 M da brometo de ciclopropil-magnésio em THF (1,26 mL, 630 pmol), à temperatura ambiente, a uma solução de intermediário 17A (100 mg, 252 pmol) em THF (5 mL). Agítou-se a mistura á temperatura ambiente durante 1 hora, depois extinguiu-se com uma solução aquosa saturada de cloreto de 10 amónio e extraiu-se com acetato de atilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas com salmoura, secou-se sub sulfata de magnésio, filtrou-se e evaporou-se. Purificou-se o . resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 50%-70% de acetonitrilo/0,1% de TFA aquoso). Diluiu-se as fracções de produto com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonate de 15 sódio e extraiu-se com acetato de etílo. Lavou-se a fase orgânica com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sob sulfato de magnésio, filtrou-se e evaporou-se para se obter 10 mg (10% teórico) do composto em epigrafe.

* LC-MS (método 2): t_r -1,13 minutos; MS (ESlpos): m/z ~ 439 (M+Hf.

’H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s):. δ - 7,94 (s, 1H), 7,68-8,04 (s In, 1H), 7,36 (S, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 5,47-5,89 (S Ir., 1H), 5,30 (d, 1H)_? 4,64 (d, 1H),

218/265

4,59-4,67 (m, 1H), 4,39 (d, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,38 (q, 2H), 2,45 (S, 3H), 1,541,64 (m, 1H), 1,04 (t. 3H), 0,51-0,59 (m, 1H), 0,40-0,47 (m, 1H), 0,28-0,38 (m, 2H) p.p.m.,

Exemplo 92 (3S)-3-({[4~Amina-6-(metaximetil)-5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotíofeno-2 - Η) pirrola[2,1 -f](1 ^^jtriazina-T-ill-metlll-aminol-pirrolidina-^-ona

[375] Tratou-se uma suspensão de intermediário 13A (100 mg, 0,233 mmol) em THF (2 ml) com (S)-3-aminopirrolidina-2~ona (35 mg, 0,349 mmol), 10 triacetoxiboro-hidreto de sódio (148 mg, 0,698 mmol) e ácido acético (26,6 pL, 0,465 mmol), Agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 3 heras e depois purificou-se directamente por RP-HPLC preparativa (Reprosil Cl 8, gradiente: 40%-60% de acetonitrílo/0,2% de ácido triflueroacétlco aquoso). Combinou-se as fracções de produto e evaporou-se até à secura.

Dissolveu-se o resíduo em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta anióníca (Stratospheres SPE, PL-HCOs MP-resina), Efectuou-se a eluição do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 56 mg * (51 % teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 4): t ~ 0.72 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 467 (M+H).

'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg): δ “8,01 (s, 1H), 7,76 (S, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,31

219/265 (s, 1H), 6,85 (S, 1H), 4,48 (d, 2H), 4,43 (d, 2H), 4,24-4,02 (m, 2H), 3,96 (S, 3H), 3,26-2,99 (m, 6H), 2,45 (S, 3H), 2,40-2,27 (m, 1H), 1,82-1,64 (m, 1H) p.p.m..

Exemplo S3 (3S)-3-({(4-Amino-6-(etoxlmstil)-5-(7-metoxi-5-metil-1-benzotiofeno-2-il)-

[376] Tratou-se uma suspensão de intermediária 17A (100 mg, 0,252 mmol) em THE (2 mL) cam (S)-3-aminapírrolidina~2-ona (38 mg, 378 pmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (160 mg, 757 pmol) e ácida acético (30 pL, 504 10 pmol). Agitau-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 3 heras e depois purifícou-se directamente por RP-HPLG preparativa (Reprosil C18, gradiente: 30%-50% de acetonitrílo/0,2% de ácido trifluoroacético aquosa). Combinou-se as fracções de produto e evaporou-se até à secura. Dissolveu-se o residue em metanol e filtrou-se através da um cartucho de permuta aníónica 15 (Stratospheres SPE, PL-HCO₃ MP-resína). Efectuou-se a eluíção do cartucho com metanol e evaporou-se 0 filtrado para se obter 84 mg (69% teórico) do ' composto em epígrafe.

* LC-MS (método 4)r t * 0,75 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 481 (M+H)L ’H-NMR (400 MHz, DMSO-d₈): ó « 8,90 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,67-8.11 (s lr„ 20 1H), 7,35 (S, 1H), 7,31 (S, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,5-6,0 (S Ir., 1H), 4,44 (q, 2H),

220/265

4,14-4,21 (m, 1H), 4,02-4,11 3,38-3,45 (q. 2H), 3,16-3,24 (m, 1H),

3,05-3,16 (m, 2H), 2,45 (S, 3H), 2,31-2,40 (m, 1H), 1,67-1,79 (m, 1H), 1,08 (t, 3H) p.p.m,.

Procedimento geral para a preparação dos exemplas 94 a 105 no quadro I [377] Tratou-se uma suspensão 0,13 M de Intermediário 17A em THF com 1,5 eq. do componente amina respective, 3 eq. de triacetoxlboro-hidreto de sódio e 1,5 eq, de ácido acético. Agitou-se a mistura resultante a 60^cC durante 3 a 20 horas, a seguir, efectuou-se a purificação de acordo oom es métodos indicados.

Quadro 1

I Método(s) i purificação Tpi7'P5.......................	de i Dados LC-MS | Método 4; |τ, = 1,22 min.; I MS (ESlpos): l m/z ~ 468 (M+H)
I P6, P3	i Método 2:
í	i Tf - 0,92 min.;
	MS (ESlpos):
	i m/z ~ 509 (M-í-H)
77/ <

221/265

Exemplo i Estrutura |

j Método(s) de ΐ Dedos LC-MS [ purificação |

I Método 4:

I T,· ~ 0,83 min.;

I MS (ESlpos):

| m/z *= 452 (Mr Hf

i Método 5:

j T_f ~ 1,84 min.;

j MS (ESlpos):

j m/z - 454 (M+H)

T9.....................................ΓρΪ?Ρ5.........................................[Método 5:.........

I T_r 1,82 min.;

| MS (ESlpos):

ί m/z - 482 (Mr-ΗΓ

| Método 5:

j Tf - 2_S21 mto.;

I MS (ESlpos):

| m/z -516 (MW

222/265

Método(s) de	Dados LC-MS
purificação
P1, P5	Método 2: Tr« 0,86 mim: MS (ESipos): m/Z - 507 (M-Hp
P1s P5	Método 2: Tf - 0,81 min,; MS (ESipos): m/z ~ 468 (M+H) ·
Pt, P5, P4	Método 2: % - 1,03 mio,; MS (ESipos): | m/z 474 (MrH)'

223/265 i Exemplo j Estrutura I Método(s) i n° j i purificação

de i Dados LC4VISi

...........[MétQdo2:]

I Tr = 1,05 rnín.;|

I MS (ESipos):| j m/z - 460 (Mf H) 'j

Ss í!

II ΐI

Il

I Método 2:| | T_f - 0.91 min.;| | MS (ESipos):| | m/z » 467 (M*H)*l

Método 2:

T_f ™ 0,89 min.:

MS (ESipos):

Ϊ m/z ~ 495 (M*H)⁺

4-Am!nO6-(8toximδtil)-5'(7-mst0xi”5~metil·1“benzotiofeπo-2-ii)-N-[(3R)-2oxopinolidína-S-ilJ-pirroio^J-fjíl^^jtnazina-Z-oarboxamida

224/265

[378] Tratou-se uma solução agitada de intermediário 64A (50 mg, 121 pmol) em DMF (2 mL), à temperatura ambiente, com tetraflooroborato de N((1 H-benzotriazoí-1-iloxi)-(dímetílamino)-metileno]-N-metilmetanamínio (TBTU) 5 (43 mg, 133 pmol) e DiPEA (53 pL, 303 pmol). Decorridos 15 minutos, adicionou-se (3R)-3-amínopirrolidina-2-ona (24 mg, 242 pmol) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante mais 2 horas, A seguir, separou-se a mistura por RP-HPLC preparativa (Repress! C18, gradiente: 30%~ 50% de acetonítrilo/0,2% de ácido trlfluoroacétíco aquoso). Combinou-se as 10 fracçôea de produto e evaporou-se até à secura. Dissolveu-se o resíduo em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permute anióníca (Stratospheres SPE, PL-HCO_S MP-resína). Efectuou-se a eluíção do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 36 mg (60% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,91 minuto; MS (ESIpos): m/z - 495 (M-s-H)T 'H-NMR (400 MHz. OMSO-dg): ó - 9,50 (d, 1H), 8,21-8,45 (S Ir.. 1H), 8,17 (S, 1H), 7,97 (S, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (S. 1H), 6,36 (S, 1H), 5,84-6,09 (S lr.₍ 1H), 4,74 (dd, 2H), 4,47-4,56 (m, 1H), 3,98 (S, 3H), 3,37 (q, 2H), 3,22-3,29 (m, 2H), 2,54-2,61 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 1,90-2,03 (m, 1H), 1,00 (t, 3H) p.p.m..

Exempla 107

225/265

4-{(4-Aminu-e-(etoximetil)-5~(7-metoxi-5-metil-l-benzotiofeno-2“il)“pirrolo-[2,1fj[1_f2,4]triazina~7-il]-carbonil}-piperazina*2-ona

[379] Tratou-se uma solução agitada de intermediário 64A (50 mg, 121 pmol) em DMF (2 mL), à temperatura ambiente, com TBTU (43 mg, 133 pmol) e DIPEA (53 pL, 303 pmol). Decorridos 15 minutos, adicloncu-se piperazina-2ona (24 mg, 242 pmol) e agitou-se a mistura resultante á temperatura ambiento durante mais 16 heras. A seguir, separou-se a mistura por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 40%-60% de acetonitrilo/0,2% de ácido 10 tníluoroacétíco aqueso). Combinou-se as fraoções de produto ο evaporou-se até à secura. Dissolveu-se o resíduo em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta aniónica (Stratospheres SPE, PL-HCO₃ MP-resine). Efectuou-se a eluiçâo do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 45 mg (68% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): t_f ~ 0,92 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 495 (M+Hf.

'H-NMR (400 MHz, DMSO-d_s): δ ^8,14 (s Ir., 1H). 7,90,01 (m, 1H). 7,0.3 (s lr„ 1H), 7,41 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,78-6,05 (s Ir., 1H), 4,30-4,49 (m, 2H), 4,13-4,23 (m, 1H), 4,03-4,10 (m, 1H), 3,96 (S, 3H), 3,76-3,67 (m, 1H), 3,57-3,74 (m, 1H), 3,35-3,43 (m, 2H), 3,14-3,25 (m,. 1H), 2,45 (s, 3H), 0,96-1,05 20 (m, 3H) p.p.m..

Procedimento geral para a preparação dos exemplos 108 a 123 no quadro II

226/285 [380] Tratou-se uma solução 0,13 M de intermediário 64A em DMF com 1,1 eq. de TBTU e 2,5 eq< de DIPEA e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 minutos. Adicionou-se 2 eq. da amina respectiva e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante mais 18 horas. A seguir, efectuou-se a purificação de acorda com as métodos indicadas.

Quadro I!

| Exemplo	Estruture	Ϊ Método(s) de | Dados LC-MS
		I purificação |

J Método 2:

ΐ T_r & 1,02 min.;

i MS (ESipas):

Í m/z ~ 456 (M+H)’’ 'Kç Γρϊ

ΓΪ09

Métoda 4:

T_r ~ 0,97 mín.;

MS (ESípos):

| m/z -412 (Μ-ι-ΗΓ ] Método 2:

I T_r - 1,01 min.;

| MS (ESipos):

i m/z ~ 426 (M4-Hp

227/265

Exemplo rP ϊϊϊ.................

Estrutura

NH,

114

Ν'

NH_S

N

N

O

	Método(s) de purificação	Dados LC-MS |
.0^	P1, P5	Método 4: ΐ Tr “ 1,11 min,; j MS (ESlpos): | m/z ~ 440 (Μ * Η)* i
„cws PHa	PI	Método 4: | T:. - 1,07 min.;. | MS (ESlpos): | m/z =x 482 (M+Hy ,
> ...CM, QH,	P1, P6	Método 2: Tr - 0,84 min.; MS (ESlpos): m/z ~ 523 (Mr-H) :
Ό X nh, •X		7
/M,	P1, PS	Método 2: Tr ~ 0,96 min,; MS (ESlpos): m/z ~ 440 (M+Hy

,CH_S

CM

228/265

de	Dados LC-MS
	Método 2: Tf ~ 1,09 minç MS (ESlpos):
	m/z ~ 452 (MrH)'

Ϊ Método 4

Método(s) purificação

ΡΪ7Ρ5 j T._? -· 0,95 min.;

| MS (ESlpos):

| m/z ~ 495 (Μί·Η)^;· i Método 4:

ί T_f - 0,93 mínç | MS (ESlpos):

| m/z ~ 481 (M-i-HT

229/265

Exemplo

Estrutura

Método(s)

delgados LC-MS ] Método 2:

i T_r « 0,93 mim;

I MS (ESlpos):

I m/z ~ 482 (M<

; Método 2;

I T, - 1,04 min.;

MS (ESlpos);

| m/z~ 516 (M+Hf

Ϊ Método 4;

; T_f ~ 0,88 mio.;

I MS (ESlpos);

| m/z ~ 468 (M-rHf í Método 4:

I T₍ - 0,91 min,;

| MS (ESlpos):

í m/z ™ 496 (M t H) '

230/265 de I Dados LC-MS

Exemplo I Estrutura | Método(s) n° i purificação

Exemplo 124 | Método 4:

í T_r - 1,09 min.;

í MS (ESlpos):

i m/z - 488 (M-r-HF

I Método 4:

i T_r 0,98 min.;

j MS (ESlpos):

| m/z ~ 530 (M+HF

4<4-ΑπΊίηο-5-(5,7-0ΙΠΊθίοχί-1~ΡβηζοΙΙοίοηο~2-ίΙ)'·6-^ο1οχΐΓηοίίΙ)·'ρ1ΓΓθΙο(2,1-ί]~ [I.SAJtriazina-Z-íO-motilFpiporazina^-ona _yCH

O

231/265 [381] A uma solução de intermediário 62A (100 mg, 271 gmol), intermediário 66A (77 mg. 325 pmol) e fluoreto de césio (206 mg, 1,35 mmol) numa mistura desgaseificada de THF/água (a 10:1: 5 ml), sob uma atmosfera de árgen, adicionou-se (2^!-aminabifenll-2-il)-(cloro)-paládiu-dícicio-hexíl-(2^!,4^!,6ⁱ~ 5 trlisopropil-bifenil-S-iil-fosfina (1:1; 42,6 mg, 54 pmol; ver S. L. Buchwald et al,

J. Am. Cdem. Soo. 132 (40), 14073-14075 (2010)). Submeteu-se a mistura resultante novamente a desgaseificaçãe e agitou-se sub uma atmosfera de árgon a 60°C durante 6 horas. Depois, adicionou-se outra perção de intermediário 68A (39 mg, 162 pmcl) e manteve-se sob agitação a 60°C 10 durante 10 horas. A seguir, separou-se a mistura de reação por RP-HPLC preparativa (Represil C18, gradiente: 30%-50% de acetonítrilo/0,1% de TFA aquoso). Combinou-se as fracções de produto e evaporou-se até à secura. Dissolveu-se c resíduo em metanol e filtrou-se através de um cartucho de permuta aniónica (Stratospheres SPE, PL-HC0$ MP-reslna), Efectuou-se a 15 eleição do cartucho com metanol e evaporou-se o filtrado para se obter 40 mg (28% teórico) do composto em epígrafe.

LC-MS (método 2): 0 ~ 0,78 minuto; MS (ESipos): m/z ~ 483 (M+H)\ 'H-NMR (500 MHz, DMS0-d₆): δ ~ 7,99 (s, 1H), 7,68 (s Ir., 1H)_: 7,49-8,17 (s Ir., 1H), 7,37 (s, 1H), 7,05 (d, 1H), 6,63 (d, 1H), 5,5-6,0 (s !r„ 1H), 4,42 (S, 2H), 3,97 20 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,20 (S, 3H), 3,09-3,14 (m, 2H), 3,01 (s, 2H),

2,62-2,67 (m, 2H) p.p.m..

Exemolo 125

4-{[4~Amino-7~(hidroxímetíi)-5~(7-metoxi-5~metil-1 -benzotíofeno~2-il)~pirruto-[2,1 t][1,2,4]tríazins-6-i0-metíl}-piperazina-2~ona

232/265

[382] A uma suspensão de intermediária 70A (700 mg, 1,49 mmol), intermediário 5A (497 mg, 2,24 mmol) e fluoretc de césio (1,36 g, 8,95 mmol) numa mistura desgaseificada de THF/água (a 2:1,90 mL). sob uma atmosfera 5 de argon, adicionou-se (2^!-aminobifenil-2-ii)-(cloro)-paládio-diciclo-hexil~(2^!,4\6^!triisopropíl-bifenil-2-il)-fosfina (a 1:1; 117 mg, 0,149 mmol; ver S. L Buchwaid et a/., J. Am. Cbem. Soe. 132 (40), 14073-14075 (2010)).. Submeteu-se novamente a mistura resultante a desgaseificaçâo e agitou-se sob uma atmosfera de argon a 60°C de um dia para o outro. Adicionou-se outra porção 10 de intermediário 5A (231 mg, 1,04 mmol) e de (2'-amínobifenií-2-iI)-(cloro)paládío-diciclo-hexil-(2'‘,4^>,6ⁱ-triisopropil-bifeníl-2-il)-fosflna (1:1; 117 mg, 0,149 mmol) e manteve-se sob agitação a 80°C durante 3 horas. Removeu-se por fiítraçâo o precipitado, lavou-se com THF e secou-se sob uma pressão hipobárica. Colocou-se em suspensão o sólido numa mistura de DMF e ácido 15 trifluoroacético aquoso 1 M e fíltrou-se. Separou-se o filtrado por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 20%-40% de acetonitrilo/0,2% de ácido trifluoroacético aquoso). Combinou-se as fracções de produto e depois alcaíinlzou-se per adição de uma solução aquosa saturada de bicarbonate de sódio. Extraiu-se a solução com acetato de etlío, lavou-se a camada orgânica 20 com salmoura, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se para se obter 88 mg do composto em epígrafe (13% teórico).

LC-MS (método 2); t_r ~ 0,70 minuto; MS (ESipos): m/z = 453 (M-rH)\

233/265

Ή-NMR (400 MHz, DMSQ-d_e): refer al. δ - 7,6-8,0 (s Ir., 1H), 7,98 (S, 1H), 7,71 (S, 1H), 7,37 (a, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 5,4-5,8 (s lr„ 1H), 5,19 (t, 1H), 4,85 (d, 2H). 3,95 (s, 3H), 3,58 (s, 2H), 3,04 (m Ir., 2H), 2,88 (s, 2H), 2,45 (s₅

3H) p.p.m..

Exemplo 126

4-{[4-Amino-7-(metoximetil)-5-(7-metoxi-5-metil-1 -benzotiofeno-2-il)-pirrolo[2,1 fKl.S.AJtnazina-e-íO-metílhpIperazina-S-ona

[383] Tratou-se uma suspensão do exemplo 125 (88 mg, 194 pmol) em 10 diclorometano (5 mL) com cloreto de tionilo (29 pL, 389 pmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 65 minutos. Adicionou-se outra porção de cloreto de tionilo (29 pL, 389 pmol) e manteve-se sob agitação durante 1,5 horas. Adicionou-se então um excesso da metanol e, a seguir, acrescentou-se, gota a gota, uma solução 5,4 M de mediate de sódio em metanol (84 mg, 1,56 15 mmoi), até se atingir um pH de 8, Depois de se agitar durante 3 dias,, evaporouse os voláteis sob pressão reduzida e separou-se o resíduo por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 20%-40% de acetonitrilo/0,2% de ácido trifluoroacético aquoso). Evaporou-se as fracçôes de produto para se obter 19 mg do composto em epígrafe (21% teórico).

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,77 minuto: MS (ESlpos): m/z - 466 (M-í-H)L

WNMR (400 MHz, DMSO-dg): b = 7,99 (s, 1H), 7,75-8,11 (S Ir., 1H), 7,68 (s,

234/265

1H), 7,38 (s, 1Η), 7,31 (s, 1 Η), 6,84 (s, 1H), 5,51-5,32 (m, 1H), 4,77 ($, 2H), 3,95 (s. 3H), 3,55 (s, 2H), 3,31 (s, 3H), 3,64 (s lr„ 2H), 2,85 (S, 2H), 2,42-2,48 (m, 5H) p.p.m..

4~{pPArnino-7-(etoximetil)-5~(7-metoxi-5-metil-1-benzotiofenu-2-il)-pirrolo-[2,1f][i,2,4]tríazína-6-il]-metíl}-piperazina-2-ona

[384] Tratou-se uma suspensão do exemplo 125 (100 mg, 221 pmol) em díciorometario (10 mL) com cloreto de tíonilo (161 pL, 2,21 mmoi) e agitou-se a 10 mistura â temperatura ambiente durante 30 minutos. Adicíonou-se etanol e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em etanol (10 mL), adicionou-se etilato de sódio (30 mg, 442 pmol) e agítou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Separou-se então dírectamente a mistura por RP-HPLC preparativa (Reprosil C18, gradiente: 15 20%-40% de acetonitnlo/0,2% de ácido trifluoroacético aquoso). Combinou-se as fracções de produto e alcalínízou-se por adição de uma solução aquosa saturada de bicarbonate de sódio. Extraiu-se a solução com acetato de etilo, lavou-se a camada orgânica com salmoura, secou-se sob sulfato de magnésio e evaporou-se para se obter 57 mg de composto em epígrafe (54% teórico).

LC-MS (método 2): t_r ~ 0,85 minuto; MS (ESlpos): m/z ~ 480 (M+H)~.

235/265 (400 MHz, DMSO-ds): δ = 7,99 (s, 1H), 7,73-8,09 (s Ir.. 1H), 7,64-7,71 (m, 1H), 7,38 ($, 1H), 7,31 (s, 1H), 6,84 (s. 1H), 5,38-5,91 (S In, 1H), 4,81 (s_; 2H), 3,95 (s, 3H), 3,49-3,59 (m. 4H), 2,99-3,08 (m, 2H), 2,86 (s. 2H), 1,12 (L 3H) p.p.m..

B. Avaliação da atividade biológica

Abreviaturas e acrônimos:

Ahx	ácida 6-amino-hexanóico
ATP	trifosfato de adenosine
BSA	albumina do soro de bovino
CREB	proteína de ligação ao elemento de resposta cAMP
DMSO	suifóxido de dimetilo
EDTA	ácido etilenedianiinatetreacêtico
EGTA	ácido eti len igl icol-bi s- (2 -aminoetiléter) - N, N, N *, Ν' - tetraacético
FBS	soro fetal de bovino
FGF	fator de crescimento de fibroblasto
FGFR	receptor do fator de crescimento de fibroblasto
GPP	proteína verde fluorescente
GST	glutafiona S-transferase
HEPES	ácido 4-(2-hidroxistií)-piperazina-l -eianu-sulfónlco
HRTF	fluorescência homogênea resolvida no tempo
MOPS	ácido 3~(N-mortolino)~propano-sulfónico
mTOR	alvo mamífero do rapamicina
PBS	soluto salino tamponade com fosfato
PI3K	fosfatidiiinasitol 3-cinase
RTK	tirosina cinase repectora
SNP	polimorfisma de nucleôtído individual
TR-FRET VEGF	transferência de energia de ressonância de fluorescência resolvida no tempo fator de crescimento endoteíial vascular

236/265

VEGFR receptor do fator de crescimento endotelial vascular [385] A demonstração da atividade dos compostos da presente invenção pode ser alcançada através de ensaios to vitro, ex vivo e to v/vo qoe são bem conhecidos na especialidade. Por exemplo, para demonstrar a atividade dos compostas da presente Invenção, é possível utilizar os seguintes ensaios,

EM> Ensaio de cinasa a ATP elevada de FGFR-1 [386] Quantificou-se a atividade íníbítória de FQFR-1 a uma concentração elevada de ATP dos compostos da presente invenção após a sua préíncubação com FQFR-1 utilizando o ensaio de ATP elevada de FQFR1 com base em TR-FRET conforme descrito nos parágrafos seguintes.

[387] Uma proteína de fusão FQFR-1 marcada recombinante [fusão de glutationa-S-transferase (GST) (N-terminalmente), marcador His6, local de divagem de trombina e parte intracelular de FGFR-1 humano a partir dos aminoácidos G400 a R800, tal como na entrada no GenBank NMJ) 15850], expressa em células de insecto SF9 utilizando um sistema de expressão 15 baculovirus e purificada através de crematografia por afinidade de glutationaagarose, foi adquirida a Proqinase (produto n°. 0101-0000-1) e foi utilizada corno enzima. Como substrato para a reação de cinase, utilizou-se o péptido bíotiniíado biotína-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK (terminal C sob a forma de amlda), que pode ser adquirido, v.g., a Biosyntan (Berlín-Buch, Alemanha).

[388] Habítualmente, testou-se os compostos de teste na mesma placa de microtitulação a 11 concentrações diferentes no intervalo de 20 pM a 0,1 nM (v.g.., 20 pM, 5,9 pM, 1,7 pM, 0,51 pM, 0,15 pM, 44 nM, 13 nM, 3,8 nM, 1,1 nM, 0,33 nM e 0,1 nM) em duplicado, para cada concentração. O conjunto de diluições foi preparado em separado antes do ensaio como soluções de 25 reserva concentradas 100 vezes em DMSO; as concentrações exactas podiam variar dependendo do pipetador utilizado. Para o ensaio, pipetou-se 50 nL de cada solução de reserva de composto de teste em DMSO para uma placa de microtitulação preta, de volume reduzido com 384 cavidades (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Alemanha). Adicionou-se 2 pl de uma solução da proteína de

237/285 fusão FGFR1 anterior em tampão de ensaio aquoso [MOPS 8 mM, pH 7,0, acetato de magnésio 10 mM, dltioíreítol 1,0 mM, 0.05% (p/v) de albumina do soro de bovino (BSA), 0.07% (v/v) de Tween-20. EDTA 0,2 mM] e manteve-se a mistura a incubar durante 1 5 minutos a 22°C para permitir a pré-lígação do 5 composto de teste à enzima. Depois, deu-se início à reação de cinase por meio da adição de 3 pL de uma solução de trifosfato de adenosína (ATP, 3,3 mM; concentração final nc volume de ensaio da 5 pL ~ 2 mM) e de substrato (0,18 pM: concentração final no volume de ensaio de 5 pL ~ 0,1 μΜ) em tampão de ensaio e manteve-se a mistura resultante a incubar durante um 10 tempo de reação de 15 minutos a 22°C. Ajustou-se a concentração da proteína de fusão FGFR1 em função da atividade do late de enzima e selecionou-se de um modo adequado para se ter um ensaio no intervalo linear (as concentrações típicas estavam no intervalo de 0,05 pg/mL). Interrompeu-se a reação por meio da adição de 5 pL de uma solução de reagentes de detecção 15 de HTRF [estreptavidina-XL665 25 nM (Cis Siointernationai) e PT65-Eu-quelato nM, um anticorpo anti-fosfotirosina marcado com quelato de európio (PerkinEímer; em vez deste pode ser utilizado PT66-Tb-criptato da Cis Biointernational), numa solução aquosa de EDTA (EDTA 50 mM, 0,1% (p/v) de BSA em HEPES/NaOH 50 mM, pH 7,5)].

[389] Manteve-se a mistura resultante a incubar durante 1 hora a 22°C para permitir a formação do complexo entre o péptldo biotinllado fosforilado e os reagentes de detecção. Subsequentemente, avaliou-se a quantidade de substrato fosforilado por medição da transferência de energia de ressonância a partir do quelato de Eu para a estreptavídina-XL665, Para tal, mediu-se as 25 emissões de fluorescência a 620 nm e 665 nm após excitação a 350 nm num leitor de TR-FRET (v.g., Rubystar (BMG Labtechnologies. Offenburg, Alemanha) ou Vlewiux (Perkin-Elmer)]. Tomou-se a proporção das emissões a 665 nm e a 620 nm como medida da quantidade de substrato fosforilado. Normalizou-se os dados (reação de enzima sem inibidor ~ 0% de inibição, 30 todos os outros componentes de ensaie mas sem enzima ~ 100% de inibição),

238/265 e calculou-se os valores Cí^ através de um ajuste com 4 parâmetros utilizando uma aplicação informática interna.

Os valores de CI_SÍ} para cs compostos individuais da presente invenção deste ensaio são apresentados no quadro 1A seguinte.

Quadro 1A | Exemplo n° ] FGFR-Ϊ (ÀTP elevado) | | ÍCWIRWl |

1	12,2
2	| 7,2
3	i 6,6
4	i 13,7
5	i 4,6
6	| 9,0
7	l 4,2
8.............	j 9,4
9	I 31,0
10	I 12,7 .....ί
Ti ......	I 6,5
12	j 3,3
13	| 2,5
14	i 1,4
18	j 1,0
16	: 12,5
17	| 0,9
18	í 0,7
19	| 0,5
20	| 25,0
21	j 4,2
22	j 0,9

239/265

( Exemplo n°	Í FGFR-1 (ÀTP elevado) i
	| cu (nM]
| 23	| 17,9 (
| 24	j 1.3 j
| 25	| 0,7 1
1 26	1 0.9 1
I 27	1 1’3 [
1'28	ΪΣΤ ..............................................1
1 29	[ 1,8 1
1 30	ί 2,8 1
i 31	i 1,5 1
i 32	] 5,2 1
	'[To” 1
i34.............................	To....... 1
| 35	i 61,3 j
í 36	13,0 j
( 37	1 22, ϊ 1
(38	16.9 1
	1 1
( 40	12.1 I
I 41	(2,8........................................ |
I 42	|5,1 1
i 43	18,6 (
i 44	..
i 45	13.4 1
i 46	1 3,2 J
| 47	1 1,7 j
| 48	1 12,8 i
i 51	(4,4 |

240/265

ί Exemplo rP	[ FGFR-ϊ (ATP elevado);
	I Ciso [hM] I
52	| 9,7 |
i 53	j 3,9 |
i 54	j 11,2 |
1 56	| 2,4 I
i 57	| 3,2 I
[sã	To 'j
1 59	i 3,8 |
1 60	i 16,2 i
1 61	10,5 |
feF ™	| 3,1 |
1 64	H,0 |
i 65	15,6 I
i 66	| 1,6 1
1 67	| 5,0 |
| 68	Ϊ 27,0
| 69	156,3 I
70	139,ΐ I
| 71	| 2,7 I
72	fli........ |
73	J :
; 74	[ 4,0 I
| 75	i 4/Ϊ I
| 76	j 2,8 |
I 77	H,4 5
I 78	1 1,7 j
| 79	12,6 |
Í........ ............
I 80	M,3 |

241/265 [Exemplo π®[ FGFR-Ϊ (ÃTPetevado)]

	1 Clse [nM] j
81	H ,9 1
82	[3,4 1
83	1 14.5 |
84	|3,7 j
85	j 26,4 |
86	| 3,9 i
87.....................	I 14,1 1
88	1 79,6 [
89	i 82,9 ]

I 90.............................pj pl —-™p2............................[sj2......

p3 T ......

[94.............................pip

I 95	i 17,0 I
96	J 54,5 |
i 97	j Ϊ 6,4
98	[17,0 1
j 99	i 24,8 1
poo	j 54,5 j
Γιοι.............	..........................j
| 162	1 39,2 1
| 103	1 50,3 i
	j 5,6 j
j 105	J V 1
1 106	i 6,4 1
; 107	[9,4 j

242/265

Exemplo n®	FGFR-1 (ATP elevado) Gl$ô [nfiS]
108	3,9
109	8,4
110	17,5
111	27,0
112	42,1
113	52,7
114	11,2
115	24,9
116	3,7
117	8,8
118	6,8
119	9,0
120	6,8
121	8,2
122	18,9
123	25,1
124	27,3
125	5,0
126	3,9
127	8,0

[390] Os derivados de 8-amino~1 (ben2otiofeno-2iijimidazo[1,5-alpirazina seleccionadas e compostos associados, os quais são considerados como representativos mais próximos da técnica anterior (ver, pedido de patente de invenção internacional WO 2007/061737-A2 a compostos de exemplo aí 5 descritos) foram sintetizados de acordo com os procedimentos publicadas e também foram testados no ensaio de ATP elevada de FGFR-1 para fins de comparação. Os valores de Cl*® obtidos para esses compostos são apresentados no quadro 1B seguinte.

243/265

Quadro 1B

Estrutura dos compostos	Exemplo n® no documento	FGFR-1 (ATP
de comparação	WO 2007/061737	elevado) Cigs [nM]
J Λ' ?::: \ssaV Τ' Y Js %-n. V	4	12000
A Ο NS. ΙΛ4, I	5	500

244/265 [ Estrutura dos compostos i Exemplo n° no documento I FGFR-Ϊ (ÂTP

I de comparação | WO 2007/061737 | elevado) | I ! Cl_s8 [nM]

(391] Os valores de CI50 especificados nos quadros 1A e 1B demonstram que os compostos da presente invenção são cerca de cinco a milhares de vezes mais patentes na inibição da atividade de cinase de FGFR-1 de que es compostos da técnica anterior selecionados.

Ensaio de cinase de FGFR-3 [392] Quantificou-se a atividade iníbítória de FGFR-3 dos compostos da presente invenção após a sua pré-incubaçâe com FGFR-3 utilizando o ensaio de FGFR3 com base em TR-FRET conforme descrito nos parágrafos seguintes.

[383] Uma proteína de fusão FGFR-3 marcada recombinante [fusão de glutationa-S-transferase (GST) (N-terminalmente). marcador Hls6< local de

245/265 divagem de trombina e a parta intracelular de FGFR-3 humane a partir dos aminoácidos R397 a T806, tal como na entrada NCBI/prcteína IMF 000133.1], expressa em células de insecto SF9 utilizando um sistema de expressão baculovírus a purificada através de cromatografia por afinidade de glutationa-S5 transferase, foi adquirida a Proqinase (produto n°. 1068-0000-1) e foi utilizada como enzima. Como substrato para a reação de cinase, utilizou-se o péptido biotinilado biotína-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK (terminal C sob a forma de amida), que pode ser adquirido, zg?., a Biosyntan (Berlin-Buch, Alemanha).

[394] Habitualmente, festou-se os compostos da toste na mesma plaoa de 10 microtitulação a 11 concentrações diferentes no intervalo de 20 μΜ a 0.1 nM (v.g„ 20 μΜ, 5,9 μΜ, 1,7 μΜ, 0,51 μΜ. 0,15 μΜ. 44 πΜ, 13 nM, 3,8 nM, 1,1 nM, 0,33 nM e 0,1 nM) em duplicado, para cada concentração. O conjunto de diluições foi preparado em separado antes do ensaio como soluções de reserva concentradas 100 vezes em DMSO; as concentrações exactas podiam 15 variar dependendo do pipetador utilizado. Para o ensaio, pípetou-se 50 nl de cada solução de reserva de composto de teste em DMSO para uma placa de microtitulação preta, de volume reduzido com 384 cavidades (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Alemanha). Adicionou-se 2 μΙ de uma solução da proteína de fusão FGFR3 anterior em tampão de ensaio aquoso [MOPS 8 mM, pH 7,0, 20 acetato de magnésio 10 mM, dítiotreltoi 1,0mM, 0,05% (p/v) de albumins do soro de bovino (BSA), 0,07% (v/v) de Tween-20, EDTA 0,2 mM] e manteve-se a mistura a incubar durante 1 5 minutos a 22°C para permitir a pré-ligaçâo do composto de teste à enzima. Depois, deu-se Início à reação de cinase por meio da adição da 3 pL de uma solução de trltosfato de adenosine (ATP, 16,7 mM; 25 concentração final no volume de ensaio de 5 pL ~ 10 mM) e de substrato (0.8 μΜ; concentração final no volume de ensaio de 5 pL ~ 0,5 μΜ) em tampão de ensaia e manteve-se a mistura resultante a incubar durante um tempo de reação de 60 minutos a 22°C. Ajustou-se a concentração da proteína da fusáo FGFR3 em função da atividade do lote de enzima e selecionou-se de um modo 30 adequado para se ter um ensaio no intervalo linear (as concentrações típicas

246/265 estavam no intervale de 0,03 pg/mL). Interrompeu-se a reação por meie da adição de 5 pL de uma solução de raagentes de detecção de HTRF [estreptavidina-XL665 100 nM (Cis Biointernational) e PT66-Tb~criptato 1 nM, um anticorpo anti-fosfotirosína marcado com criptato de térbio (Cis 5 Biointernational; em vez deste é possível utilizar PT66-Eu-quelato da PerkinElmer), numa solução aquosa de EDTA (EDTA 50 mM, 0,1% (p/v) de BSA em HEPES/NaOH 50 mM, pH 7,5)].

[395] Manteve-se a mistura resultante a incubar durante 1 hora a 22°C para permitir a formação do complexo entre o péptído biotiniiado fostorilado e os reagentes de detecção. Subsequentemente, avaliou-se a quantidade de substrato fosforiiado por medição da transferência de energia de ressonância a partir do quelato de Tb para a estreptavidina-XL665. Para tal, mediu-se as emissões de fluorescência a 620 nm e 665 nm após excitação a 350 nm num leitor de TR-FRET [v.g,< Rubystar (BMG Labtechnologies. Offenburg, 15 Alemanha) ou Viewtux (Perkin-Elmer)]. Tornou-se a proporção das emissões a 665 nm e a 620 nm como medida da quantidade de substrato fosforliado. Normalizou-se cs dados (reação de enzima sem inibidor ™ 0% de Inibição, todos os outros componentes de ensaia mas sem enzima ~ 106% de inibição), e calculou-se os valores CUo através de um ajuste com 4 parâmetros utilizando 20 uma aplicação informática interna.

[396] Os valores de.CIsG para os compostos individuais da presente invenção deste ensaio são apresentados no quadro 2A seguinte.

Quadra 2.A [ Exemplo n*.....í FGFR-3................

I I [«aoI p·····························-.....I 24Ϊ8”j |2....................................1 29.4J [3....................................[ 46[61 [4....................................Γ243i (5 Γ'ι'ΣΊ.........................................

247/265

i Exemplo η®	[ FGFR-3	CM
	1 W
1 6	i 28,5
1 7	1 10,4

|g^— f eâj

Γ'ΪΟ

Γ ΪΊ.................................ΓΪ3~0

Í 12	j 14.0 )
I 13	i 1(),0 i
ΓΪ4	2,5 ................................
I 15	μ,ό (
1 16	i 9,4 i
I 17	| 3,3 |
j 18	I 2,8 J
| 19	I 2,7 |
I 20	| 26,1 |
[ 21	i 13,0 i
i 22	14.7 I
| 23	i 41,9 1
L 24	| 5.7 I
I 25	i 5,2 I
I 26	14,9 I
i 27	| 12,6 |
|~28	Τθ7...........................................1
| 29	12,5 |
| 30	16,4 |
Γ'3'ϊ...........................	-|
i 32	j 52,3 i

248/265

Exemplo η9	[ FGFR-3 Cisa | ItaB I-
33	(λ2 ί
34	Τΐο,5 ΐ
35	1 65,4 ϊ
36	19,8 ΐ
37	i 34,6 |
38	: 18,8 |
39	4,9
40	Τα9...........................................j
41	j 7,2 |
42	| 18.4 1
43	132,4 1
44	16,1 1

46	I 8,1 I
47	13,4 I
48	I 45,4 ΐ
51	13.9 |
52	j 7,0 |
53	f 2,5 i
54	| 6,8 |
56	! 2,0 ;
57..............................	Tts ...............ι
58	i 9,8 :
59	16,8 1
69	j 77,9 |
61	i 0,9 j
62	111,0 i

249/265

1 Exemplo π°	•.....................$ t : rÇirK*3 $ [nM] |
64	ί 2.9 |
ί 65	| 3.1 i
I 66	i 3,7 |
| 67	| 9,4
| 68	I 42,7
| 69	| 58,1 i
ρΐ	i 5,4 i
1 72	[oj '1
i 73	1 12,2 |
i 74	i 1,4 j
1 75	i 19,8 i
j 76	......................|
	AS..K.S‘''v1vSSSSSSSSSSSSSSSSSM>S.SS....SSSSSS.'...,.'S
i 77	i 3S8 j
| 78	12,0 |
79	[17,9.................................[
í 80	| 0.2 i
j 81	j 0,5 í
1 82	| 16,0 í
1 83	j 2,1 |
[ 84............................	'T'wJ )
1 85	I 26,0 |
| 86	] 6,8 |
87	I 28.1 |
1 90	| n,o |
i 91	j 31,1 i
| 93	i 8.7 |

28,7

250/265

Exemplo n°	| FGFR-3	C l §s I
	[nM]
98	| 26,5
99	| 36,9
102	i 39,8
106	j 7,1	............
107	j 17,4
' TÕ8	| 7,7	: : : : : : : : > ;
114...........................	fas
117	| 5,3

ΪΪ9..............................f'<5

ΓΪ2Ϊ...............................['24^6........................................| [397] Os derivados de 8-amino-1’(benzotiofeno-2Hlj-imidazo(1,5~a]plrazina seleccianadas e compostos associados, os quais são consideradas eximo representativos mais próximos da técnica anterior (ver, pedido de patente de invenção internacional WO 2007/061737-A2 e compostos de exemplo aí descritos) foram sintetizados de acordo com os procedimentos publicados e também foram testados no ensaio de FGFR-3 para fins de comparação. Os valores de Cl«o obtidas para esses compostos são apresentados no quadra 2B seguinte.

Estrutura dos compostos ds | Exemplo rf no documento j FGFR-3 comparação | WO 2O07/G61737 | ICsô [nM]

251/265

Estrutura dos compostos de

Exemplo n° no documento i FGFR-3

252/265 [ Estrutura dos compostas de i Exemplo n® no documento j FGFR-3

I comparação | WO 2007/061737 | IC_g<3 [nl$]

|...................../S' p233...................................................................................Ποοοδ.............

í II | ||

N- Τ'Λ·'·' Xv $ ί * ·<Ν t* | || [398] ~~Os' valores de CU especificados nos quadros 2Ã s 2B demonstram que os compostos da presente invenção são cerca de três a milhares de vezes mais potentes na inibição da atividade de cinase de FGFR-3 do que os compostos da técnica anterior selecionados.

B-3. Ensaio de cinase de ATP elevada de FGFR-4 [399] Quantifícou-se a atividade ínibitória de FGFR-4 dos compostos da presente invenção após a sua pré-incubaçâo com FGFR-4 utilizando o ensaio de ATP elevada de FGFR4 com base em TR-FRET conforme descrito nus parágrafos seguintes.

[400] Uma proteína de fusão FGFR-4 marcada recombinants [fusão de glutatíona-S~transferase (GST) (N-terminalmenie), marcador His6, local de divagem de trombína e a parte intracelular de FGFR-4 humano a partir dos aminoãoidos R391 a T802, tai como em na entrada no GenBanK NM 002011], expressa em células de insecto SF9 utilizando um sistema de expressão baculovírus e purificada através de cromatografia por afinidade de glutationaagarose, fd adquirida a Proqínase (produto n°. 0127-0000-3) e foi utilizada como enzima. Como substrato para a reação de cinase, utilizou-se o péptidu biotinilado biotina-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK (terminal C sob a forma de amida), que pode ser adquirido, v.g., a Biosyntan (Berlin-Buch, Alemanha).

[401] Habituaimente, testou-se os compostos de teste na mesma placa de mícrotítulaçâo a 11 concentrações diferentes no intervalo de 20 pM a 0.1 nM (v.g., 20 μΜ, 5,9 μΜ, 1,7 μΜ, 0,51 μΜ. 0,15 μΜ, 44 ηΜ, 13 ηΜ, 3,8 πΜ, 1,1 ηΜ, 0,33 ηΜ e 0,1 ηΜ) em duplicado, para cada concentração. O conjunta de

253/265 diluições foi preparado em separado antas do ensaio como soluções de reserva concentradas 100 vezes em DMSO; as concentrações exactas podiam variar dependendo do pípetador utilizado. Para o ensaio, pipetou-se 50 nL de cada solução de reserva de composto de teste em DMSO para uma placa de 5 microtituíaçâo preta, de volume reduzido com 384 cavidades (Greiner Bio-Qne, Frickenhausen, Alemanha). Adicionou-se 2 pl de uma solução da proteína de fusão FGFR4 anterior em tampão de ensaio aquoso [MOPS 8 mM, pH 7,0, acetato de magnésio 10 mM, ditiotreitol I.OmM, 0,05% (p/v) de albumina do soro de bovino (BSA), 0,37% (v/v) de Tween-20, EDTA 0,2 mM] e manteve-se 10 a mistura a incubar durante 1 5 minutos a 22^CC para permitir a pré-lígação do composto de teste à enzima. Depois, deu-se início à reação de cinase por meio da adição de 3 uL de uma solução de trifosfato de adenosine (ATP, 3,3 mM; concentração final no volume de ensaio de 5 pL 2 mM) e de substrato (0,8 μΜ; concentração final no volume de ensaio de 5 pL ~ 0,5 μΜ) em tampão 15 de ensaio e manteve-se a mistura resultante a incubar durante um tempo de reação de 60 minutos a 22°C. Ajustou-se a concentração da proteína de fusão FGFR4 em função da atividade do lote de enzima e seiecíonou~se de um modo adequado para se ter um ensaio no intervalo linear (as concentrações típicas estavam no intervalo de 0,03 pg/mL). Interrompeu-se a reação por meia da 20 adição de 5 pL de uma soiuçâo de reagentes de detecção de HTRF [estreptavídina-XL.665 100 nM (Cis Biointernational) e PT66-Tb-cnptato 1 nM, um anticorpo anti-fosfotirosina marcado com criptato de térbio (Cís Bieintemational; em vez deste é possível utilizar PTS6-Eu-quelato da PerkinElmer), numa solução aquosa de EDTA (EDTA 50 mM, 0,1% (p/vj de BSA em 25 HEPES/NaOH 50 mM, pH 7,5)].

[402] Manteve-se a mistura. resultante a incubar durante 1 hora a 22°C para permitir a formação do complexo entre o péptido bietinilado fosforilado e os reagentes de detecção. Subsequentemente, avaliou-se a quantidade de substrato fdsforilado por medição da transferência de energia de ressonância a 30 partir do quelaío de Tb para a estreptavídina~XL665. Para tal, mediu-se as

254/265 emissões de fluorescência a 620 nm e 665 nm após excitação a 350 nm num feitor de TR-FRET [zg.₍ Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Alemanha) ou Viewlux (Perkin-Elmer)], Tomou-se a proporção das emissões a 665 nm e a 620 nm como medida da quantidade de substrato fosfoâlado.

Normalizou-se os dados (reação de enzima sem inibidor ~ 0% de inibição, todos os outros componentes de ensaia mas sem enzima ~ 100% de inibição), e calculou-se os valores Cl^ através de um ajuste com 4 parâmetros utilizando uma aplicação informática interna.

[403] Os valeres de CI₅₀ para os compostos individuais da presente invenção deste ensaio sãe apresentados no quadre 2A seguinte.

8-4. Ensaio de cínase de mTOR. (para propósitos de comparação) [404] Quantificou-se a atividade inibitória de mTOR dos compostos da presente invenção utilizando o ensaio de mTOR com base em TR-FRET, conforme descrita nos parágrafos seguintes.

[405] Uma proteína mTOR, marcada, de fusão, recombínante (glutationaS~transferase (GST) fundida a aminoácidos mTOR a partir de 1360 até 2549], expressa em células de insecto e purificada através de cromatografía por afinidade de glutationa-sefarase, foi adquirida a Invitrogen (n° Cat. 4753) e foi utilizada como enzima. Camo substrata para a reação de cinase, utilizou-se uma proteína de fusão recombínante de GPP e 4E-BP1 (adquirida a Invitrogen. n^y Cat. PV4759).

[406] Dissolveu-se os compostos de teste em DMSO para gerar soluções de reserva 16 mM. Em primeira luar, diluiu-se estas soluções 10 vezes com 100% de DMSO para se obter soluções 1 mM em 100% de DMSO e depois diluiu-se 100 vezes oom 50% de DMSO para se obter soluções 10 μΜ em 50% de DMSO.

[407] Para o ensaio, pipetou-se 0,5 pL de uma solução 10 pM do composto de teste em 50% de DMSO para uma placa de microtitulação prata, de volume reduzido, com 384 cavidades (Greiner Bia-One, Frickenhausen,

Alemanha). Adicionou-se 2 pL de uma solução da proteína de fusão mTOR

255/265 anterior am tampão do ensaio aquoso (HEPES/NaOH 50 mM, pH 7,5, cloreto de magnésio 5 mM, ditiotreitol 1,0 mM, EGTA 1 mM, 0,01% (v/v) de TritonX100, 0,01% (p/v) de albumins do soro de bovino (BSA)] e manteve-se a mistura a incubar durante 15 minutos a 22°C para permitir a pré-ligação do 5 composto de teste à enzima. Depois, deu-se início à reação de cinase por meio da adição de 2,5 pL de uma solução de trifosfato de adenosina (ATP, 80 pM; concentração final no volume de ensaio de 5 pL - 40 pM) e de substrato (0,8 pM; concentração final no volume de ensaio de 5 pL - 0,3 pM) em tampão de ensaio e manteve-se a mistura resultante a incubar durante um tempo de 10 reação de 80 minutos a 22°C, Selecionou-se a concentração de proteína de fusão mTQR de um modo adequado de forma a ter o ensaio no intervalo linear (uma concentração final típica no volume de ensaie de 5 pL foi de 1,25 ng/p.L), Interrompeu-se a reação por meio da adição de 5 pL de EDTA 30 mM (concentração final no volume de ensaio de 10 pL ~ 15 mM) e de anticorpo 15 fosfoespecífíco anti-4E-BPl marcado com quelato de Tb (pT46J [Invitrogen n* Cat. PV4755] (concentração final no volume de ensaio de 10 pL ~ 1 nM) em tampão de FRET.

[408] Manteve-se a mistura resultante a incubar durante 1 hora a 22°C para permitir a formação do complexo entre o substrato fosforilado e o 20 anticorpo marcada com quelato de Tb. Subsequentemente, avaliou-se a quantidade de substrato fosforilado por medição da transferência de energia de ressonância a partir do quelato de Tb para GFP. Para tal, mediu-se as emissões de fluorescência a 495 nm e a 520 nm apôs excitação a 340 nm num leitor rnultimarcas Envision 2104 (Perkin-Elmer), Tornou-se a proporção de 25 emissões a 520 nm e a 495 nm como medida para a quantidade de substrato fosforilado. Normalizou-se cs dados (reação de enzima sem inibidor = 0*4 de inibição, todos os outros componentes de ensaio mas sem enzima ~ 100% de inibição) e calculou-se os valores médios (ease testados em réplicas numa concentração única) ou os valores de CU (por meio de um ajuste de 4 30 parâmetros utilizando uma aplicação informática interna).

256/265 [469] Os valores de inibição média a 1 μΜ para os compostos individuais da presente invenção são apresentados no quadra 3 seguinte. Quadro 3 i èxempío n^ô i mTOR| | % de inibição a 1 pM|

Γΐ.................................Γο'Ί

Pg.................................Ϊ7Ϊ2i

Í3.................................i 871

Γδ.................................ΓοI

Γϊ ......................joI :v..v.v......v.v...>ww>ws.>wws.^^^«ssss_V.ssss.sss,sssssssss^hssssssssssssssssssssssssssssssssssksss.s^k^ksk^^^^^^4 I 7 I3Ji (1.................................j'z'i j ' ................................... . .•.•.SS-.-.-.-.-.-.SSHSHHSSSSHS^SSSHHHHSHSSSHHHSSHHSSHNHHHHSNSSNSNNNNSSsÇ

I 9 I sem efeito de in/òição detectadoi |ϊθ.............................Γδ'0j

Γ'ϊ'ΐ..............................) 33' 2] |12..| [ΐϊI p——., ί Ϊ6.............................) 36,9j

ΓΪ7..............................Γβ'7]

H 8 i sem efeito de tn/dição detectadoi

ΓΪ9 p20 121 P22 [23 Γ24 i 25 i 26 I 6.8 ; 17,6 [3ΪΪ3ί

Γ57ί

ΓΪ7Ϊ6i i 11,6 fej

257/265

Exemplo nc	; mTOR [ % de inibição a 1 pM
27	| 5.9
28	[ sem efeito de /n/b/gão deteoteda
29	I 28,5
30	| 21,1
31	i 16,3
32	[ 1 >6
33	1 0,9
34	i 25,9
35	i 1,4
36	i 14,4
..--.	j 8,6
38	| 20.8
39	Í 11.5

μο J0,1I ί 41 Ϊ sem efe/to de ín/õ/ção detectado 1 i 42 I sem efe/to de ίη/5/ção detectado j [li p_ ....................-.......

I 44 ΠΟI |45............................')15j J

I 46.............................11TÕ§ [47..............................[14(7j [~48 ΓξϊI [51 ['Όj [ 52..............................['ΌI [ 53..............................|ΌI [ 54......................“'Tv '' j ['56..............................j Ϊ6.11

258/265

[ Exempla	; mTOR
	i % de inibição a 1 μΜ	J
|57.............................	[2,0.............	J
| 58	I 4,0	Í
1 59	I 0,8	1
| 60	μ 1,1
61	| 15,9
Γ62	fo'2.........	.••μ·:
[64............................	114...........
1 65	| 13,9
j 66	j 15,8
1 67	| 8,4
1 68	[ 8,0
( 69	[ 8,7	4
| 70	[ 5,8
71	I 0,1
[ 72	1 8,2
i 73	1 18,5
i 74	1 18,6
f'75	T'io'J.........................................................................
I 76	! 8,5
] 77	: 0,7
[ 78	15,8
I 79	i 14,7	3
| 80...................	| 3.9
i 81	j 4,1
82	1 7,1
i 83	I 6,3	§
Í 84	i 9,1

259/265

Exemplo rd í mTOR
	% de inibição a 1 pM
85	| 0,9
87	I 12,7
88	| 5.3
89	Ϊ sem efe/to de inibição detectado
93	| 12,5
98	I sem efe/to de inibição detectado
99	I 5,3
103	i sem efeito de inibição detectado
107	: sem efeito de inibição detectado
108	| 8,5
119	I sem efeito de inibição detectado
121	I sem efeito de inibição detectado

(sem efeito de inibição detectado ~ sem efeito inibítório detectável a 1 pM).

[410] Os dados no quadro 3 mostram que os compostos da presente invenção apenas possuem um efeito inibitôrio fraco, se algum, em cinase de mTOR, o qual não se considera contribuir para a atividade farmaoológica observadas com estes compostos.

B-5. Inibição da proliferação celular mediada por fator de crescimento [411] As células endoteliais da veia umbilical humanas (HUVEC) foram obtidas na Cellsystems (FC-00Q3) e foram desenvolvidas em meio completo VEGF Vasculife {Cellsystems, LL-1020). que contém 2% ρθ soro fetal de bovino (FBS), a S7°C e 5% de CO_S< Utilizou-se as células para os ensaios de proliferação até à passagem 7, [412] As céiuias HUVEC foram colhidas utilizando acutase (PAA, L11-007) e foram semeadas nas colunas 2 a 12 de placas com 96 cavidades (placas de cultura de tecidos Falcon MICROTEST com 98 cavidades de funde plano, BD

363075., ou pCLEAR-PLATE, pretas, com 96 cavidades, Greiner Bio-One,

655090) a uma densidade celular de 2500 células/cavidade em 100 pL de meio

260/265 completo de VEGF Vasculife com a coluna 1 permanecendo vazia como branca. Deixou-se as células Incubar a 37°C e 5% de CO>> durante pelo menos 6 horas. Depois, lavou-se as células uma vez com PBS e manteve-se em jejum de um dia para o outro em meio basal Vasculife (Cellsystems, LM-0002), que 5 contém heparína, ascorbate e L-glutamina componentes do estojo Vasoulife

Life Fators, Cellsystems, LL-1020), bem como 0,2% de FBS, [413] Decorridas 18 horas, deitou-se tora o meio de jejum e expôs-se as células, durante 72 horas, a 9 concentrações log ou semi-log consecutivas de composto de teste nu Intervale de 10 pM e 30 μΜ e a 5, 10 ou 20 ng/mL de hFGF~2 (FGF básico humano recombinante, R&D Systems, 233-FB) em 100 μΐ de meio de jejum. Dlluíu-se as soluções de reserva 10 mM de compostos de teste em DMSO até 200 x concentração final em DMSO, resultando numa concentração final em DMSO de 0,5% em todas as cavidades. Os controlos eram constituídos por células deixadas crescer em meio de jejum apenas e por 15 células deixadas crescer em hFGF-2 que contém meio de jejum com 0,5% de DMSO. Para se determinar a proliferação celular, adicionou-se 5 pL de uma solução de azul de Aiamar (Biusource, DAL1100) a cada cavidade (diluição 1 ;20) e deixou-se as células incubar durante mais 4 horas a 37°C e 5% de COg, antes de se medir a fluorescência (ex. 535 nm, em. 595 nm) com um leitor de 20 placas Spectrafiuor Plus Tecan (XFLUOR4 versão 4.20). Em algumas experiências, utilizou-se um estojo de determinação de ATP (BIAFFIN GmbH, LBR-T100), de acordo com as instruções do fabricante. Em cada experiência, avalfou-se as amostras em triplicado e determinou-se os desvios padrão. Utilizou-se a aplicação informática GraphPad Prism 5 para analisar os dados e 25 para se obter os valores de Cl_&í>. Avaliou-se todos as compostos de teste 2 a 10 vezes em experiências independentes e obteva-sa resultados semelhantes.

[414] Os dados apresentados no quadro 4 seguinte representam os valores de CUo para compostos representativos da invenção, os quais são obtidos a partir dos correspondentes valores médios de pGkx

Quadro 4

261,/265

Exemplo πδ	i Proliferação de HUVEC mediada por hFGF~2, Clgo [oM] J
I 1	[ 16,4 i § ..........................................................4
§ 4	17,5 |
j 5	; 5,3 j
| 8	| 97 |
I 10	I 16,0
1 11	| 150,0 |
; 13	[ 17,0 I
| 14	Γ 25,0 |
i 16 j 117,3 |
| 18	I 10,4 I
[ 21	| 37 I
j 26	| 56,7 |
i 34	| 37,3 |
| 33	j 213,3
[39 i 365,0
| 45	i 171,0
| 46	| 84,5
j 48	[360,0
I 51	| 1,2
52	| 4,0
Í53	To....................................
| 64	: λ n :
| 56	1 18,1
| 57	I 3,2
j 59	I 5Í ,1
j 60	j 250,0
1 64	I 4,5
| 67	[ 12,1

262/265

I Exemplo i Proliferação de HÜVEC mediada por hFGF~2, Cl§o [nM] ] | 68..............................f Ϊ ·Μ j [τΐ...............................ΓΌ........................................... | f'72' (M I

Γ'73.............................[5J5 I [74..............................j Õ,2 I [?5..............................[1*6 I

1'76 ΓΤδ I |'77..............................1 3,2 j [79.............................1 3,5 I [80 [' 1,6j f 81...............................[~K6 | | 84..............................[46,6 | [85..............................ΙΪ'25'Ô I

A maior parte dos compostos da presente invenção apresentou uma atividade inibitória de cerca de dez a cem vezes reduzida neste ensaio de proliferação quando se utilizou fator de crescimento endotelial vascular (isoforma VEGF-A_1SS) como fator de crescimento de mediação (em vez de 5 FGF-2), o que indica uma seletividade significativa destes compostos para cinases de FGFR face a classes de VEGFR.

B«6< Modelos de xenoenxerto humano a de tumor svngêní&o [416] Foram efetuados diferentes modelos de tumor para determinar o perfil dos compostos da presente invenção in v/vo. Gultivou-se células de tumor 10 de humanos, ratos ou murganhos in vitro e implantou-se em murganhos imunodeficíentes ou imunocompetentes ou em ratos imunodeficientes. Iniciouse o tratamento apôs o estabelecimento do tumor, e tratou-se os animais com tumor com substâncias através de vias diferentes (per os, intravenosa, intraperitoneal ou subcutânea). Testou-se as substâncias como mono-terapia 15 ou como terapia de combinação com outras substâncias farmacológicas.

Efectuou-se o tratamento de animais com tumor até cs tumores atingirem um

263/265 tamanho médio de 120 mm³. Mediu-se os tumores em duas dimensões utilizando um calibrador e calculou-se o volume de acordo com a fórmula (comprimento x largura^;í)/2. Avaliou-se a eficácia da substância no finai da experiência utilizando a proporção T/C (T ~ peso finai do tumor final no grupe 5 tratado; C ~ peso finai do tumor no grupo de controlo]. Determinou-se a significância estatística da eficácia entre os grupos de controlo o tratado utilizando o teste de varíância ANOVA. Todos os estudos em animais foram efetuados de acordo com as linhas de orientação regulators alemãs.

[417] Embora a invenção tenha side descrito com referência a variantes 10 específicas, é evidente que outras variantes e variações podem ser dispostas por outros especialistas na matéria sem fugir dc verdadeiro espírito e âmbito da invenção. As reivindicações pretendem ser construídas de forma a incluir todas essas variantes e variações equivalentes.

[418] C. Exemplos respeitantes a composições farmacêuticas [419] As composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção podem ser ilustradas do modo seguinte.

Solução i.v. estéril [420] Ê possível preparar uma solução a 5 mg/mL do composto da invenção desejado utilizando água para injecção estéril, ajustando o pH se necessário. Dilui-se a solução para administração até 12 mg/mL oom dextrose a 5% estéril e administra-se sob a forma da uma infusão i.v. ao longo de cerca de 60 minutos.

Pó liuf ilízado paraadptinistcagaobc [421] É passível preparar uma preparação estéril cam (I) 100 a 1000 mg 25 do composto desejada da mvenção sob a forma de um pó liofllizado, (li) 32 a

327 mg/mL de nitrato de sódio e (iií) 300 a 3000 mg de Dextran 40. Reconstituise a formulação com soluto salino ou dextrose a 534, para injecçâo e estéril, até uma concentração de 10 a 20 mg/mL, sendo novamente diluída com soluto salino ou dextrose a 5% até 0,2 a 0,4 mg/mL, e administrada sab a forma de 30 uma ampola para i.v. uu por infusão i.v. ao longo de 15 a 60 minutos.

264/265

Suspensão intramuscular [422] Ê possível preparar a seguinte solução ou suspensão para injecção intramuscular.

[423] 50 mg/mL do composto desejado e insolúvel em água da invenção: 5 5 mg/mL de carboximetíl-celulose de sódio; 4 mg/mL de Tween 86; 9 mg/mL de cloreto de sódio; 9 mg/mL de álcool benzíllco..

Cápsulas de revestimento duro [424] Prepara-se um grande número de unidades de cápsulas por enchimento de cápsulas de gelatina dura de duas peças convencionais, em que cada uma delas contém 100 mg do composto em pó desejado da invenção, 150 mg de lactose, 50 mg de celulose e 6 mg de estearato de magnésio.

Cápsulas de gelatina mole [425] Prepara-se uma mistura do composto desejado da invenção em óleo 15 digerível, tal como óleo de suja, óleo de sementes de algodão ou azeite, e injecta~se através de uma bumba de deslocamento positivo em gelatina fundida para forma cápsulas de gelatina mole que contêm 100 mg do ingrediente ativo. Lava-se as cápsulas e seca-se. O composto desejado da invenção pode ser dissolvido numa mistura de polietileno-glicol, glicerina e sorbitol para se 20 preparar a mistura medicinai miscível em água.

Comprimidos [426] Prepara-se um grande numero de comprimidos através de procedimentos convencionais de modo que a unidade de dosagem seja de 100 mg do composto desejado da invenção. 0,2 mg de dióxido de silício colcidal, 5 mg de estearato de magnésio, 275 mg de celulose mlcrocristalina, mg de amído e 98,8 mg de lactose. É possível aplicar revestimentos aquosos ou não aquoscs adequadas para aumentar o paladar, para melhorar a elegância e estabilidade ou para retardar a absorção.

Solução ou suspensão para aplicação por yía tópica ao olho (gotas para os 30 olhas)

265/265 [427] É possível preparara uma formulação estéril com 100 mg do composto desejado da Invenção sob a forma de um pé liofilizado, reconstituído em 5 mL de soluto salino estéril Enquanto conservante é possível utilizar cloreto de benzalcónio, timerosal, nitrato de fenil-mercurlo ou semelhantes, 5 num intervalo de cerca de 0.001 % a 1 % em peso.

Claims (20)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composto de fórmula estrutural (I)

   caracterizado por que o símbolo R¹ representa hidrogênio, cloro, metilo ou metoxi, o símbolo R² representa hidrogênio ou metoxi, desde que pelo menos um dos símbolos R¹ e R² represente um grupo diferente de hidrogênio, o símbolo G¹ representa cloro, alquilo(CrC4), alcoxi(Ci-C4)-carbonilo, aza-heteroarilo com 5 membros ou o grupo -CH2-OR³, -CH2-NR⁴R⁵ ou -C(=O)NR⁴R⁶, em que o símbolo R³ representa hidrogênio, alquilo(CrC₄), cicloalquilo(C₃-C₆) ou fenilo, (i) o referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi, alcoxi(Ci-C₄), hidroxicarbonilo, alcoxi(Ci-C₄)-carbonilo, amino, aminocarbonilo, mono-alquil(Ci-C₄)-aminocarbonilo, di-alquil(Ci-C₄)-aminocarbonilo, cicloalquilo(C₃-C₆) ou até três átomos de flúor, e

   (ii) o referido cicloalquilo(C₃-C₆) é facultativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(CrC₄), hidroxi e amino, (iii) o referido fenilo é facultativamente substituído com um ou dois
2. 2/20 substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por flúor, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo(Ci-C₄) e alcoxi(Ci-C₄), o símbolo R⁴ representa hidrogênio ou alquilo(Ci-C₄), o símbolo R⁵ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), alquil(Ci-C₄)carbonilo, cicloalquilo(C3-C₆) ou heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, em que (I) o referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxí, alcoxi(Ci-C₄), hidroxicarbonilo, alcoxi(Ci-C₄)-carbonilo, aminocarbonilo, monoalquil(Ci-C₄)-aminocarbonilo, di-alquil(Ci-C₄)-aminocarbonilo ou cicloalquilo(C₃C₆), e

   (ii) o referido cicloalquilo(C₃-C₆) é facultativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(Ci-C₄), hidroxí e amino, e

   (iii) o referido heterocicloalquilo com 4 a 6 membros é facultativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(Ci-C₄), hidroxí, oxo e amino, o símbolo R⁶ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), cicloalquilo(C₃-C₆) ou heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, em que (i) o referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxí, alcoxi(Ci-C₄), hidroxicarbonilo, alcoxi(Ci-C₄)-carbonilo, amino, aminocarbonilo, mono-alquil(Ci-C₄)-aminocarbonilo, di-alquil(Ci-C₄)-aminocarbonilo ou cicloalquilo(C₃-C₆), e

   (ii) o referido cicloalquilo(C₃-C₆) é facultativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(Ci-C₄), hidroxí e amino, e

   (iii) o referido heterocicloalquilo com 4 a 6 membros é facultativamente
3. 3/20 substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(CrC₄), hidroxi, oxo e amino, ou os símbolos R⁴ e R⁵ ou R⁴ e R⁶, respectivamente, são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocicloalquilo monocíclico, saturado, com 4 a 7 membros, que pode conter um segundo heteroátomo no anel selecionado entre N(R⁷) e O, e que pode ser substituído nos átomos de carbono do anel com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(CrC₄), oxo, hidroxi, amino e aminocarbonilo, e em que o símbolo R⁷ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), formilo ou alquil(C_r C₄)-carbonilo, e

   o símbolo G² representa cloro, ciano, alquilo(Ci-C4) ou o grupo CR^8AR^8B-OH, CH2NR⁹R¹⁰, C(=O)NR¹¹R¹² ou -CH2-OR¹⁵, em que os símbolos R^8A e R^8B representam um grupo independentemente selecionado entre o conjunto constituído por hidrogênio, alquilo(CrC₄), ciclopropilo e ciclobutilo, o símbolo R⁹ representa hidrogênio ou alquilo(Ci-C₄), o símbolo R¹⁰ representa hidrogênio, alquilo(CrC₄), alquil(Ci-C₄)carbonilo, cicloalquilo(C₃-C₆) ou heterocicloalquilo com 4 a 6 membros, em que (i) o referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi, amino, aminocarbonilo, mono-alquil(Ci-C₄)-aminocarbonilo ou di-alquil(C_rC₄)aminocarbonilo, e

   (ii) o referido cicloalquilo(C₃-C₆) é facultativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(CrC₄), hidroxi e amino, e

   (iii) o referido heterocicloalquilo com 4 a 6 membros é facultativamente
4. 4/20 substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(CrC₄), hidroxi, oxo e amino, o símbolo R¹¹ representa hidrogênio ou alquilo(Ci-C₄), o símbolo R¹² representa hidrogênio, alquilo(CrC₄), cicloalquilo(C₃-C₆) ou heterocícloalquilo com 4 a 6 membros, em que, (i) o referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi, amino, aminocarbonilo, mono-alquil(Ci-C₄)-aminocarbonilo ou di-alquil(C_rC₄)aminocarbonilo, e

   (ii) o referido cicloalquilo(C3-C₆) é facultativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(CrC₄), hidroxi e amino, e

   (iii) o referido heterocícloalquilo com 4 a 6 membros é facultativamente substituído com um ou dois substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por alquilo(Ci-C₄), hidroxi, oxo e amino, ou os símbolos R⁹ e R¹⁰ ou R¹¹ e R¹², respectivamente, são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocícloalquilo monocíclico, saturado, com 4 a 7 membros, que pode conter um segundo heteroátomo no anel selecionado entre N(R¹³), O, S e S(O)₂, e que pode ser substituído nos átomos de carbono do anel com até três substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por flúor, alquilo(Ci-C₄), oxo, hidroxi, amino e aminocarbonilo, e em que o símbolo R¹³ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), cicloalquilo(C3-C₆), formilo ou alquil(Ci-C₄)-carbonilo, e

   o símbolo R¹⁵ representa alquilo(Ci-C₄), desde que o símbolo G¹ não represente cloro quando o símbolo G²
5. 5/20 representa cloro ou ciano, ou um seu sal, hidrato e/ou solvato farmaceuticamente aceitável.

   2. Composto de fórmula estrutural (I) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por que o símbolo R¹ representa cloro, metilo ou metoxi, o símbolo R² representa hidrogênio ou metoxi, o símbolo G¹ representa cloro, alquilo(Ci-C4), alcoxi(Ci-C4)-carbonilo ou aza-heteroarilo com 5 membros selecionado entre o conjunto constituído por pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo e oxadiazolilo ou representar o grupo -CH2-OR³ ou -CH2-NR⁴R⁵, em que

   0 símbolo R³ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄) ou cicloalquilo(C3-C₆), em que 0 referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi, alcoxi(Ci-C₄), hidroxicarbonilo, alcoxi(Ci-C₄)-carbonilo, amino, aminocarbonilo, cicloalquilo(C₃-C₆) ou até três átomos de flúor,

   0 símbolo R⁴ representa hidrogênio ou alquilo(Ci-C₄),

   0 símbolo R⁵ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), alquil(Ci-C₄)carbonilo, cicloalquilo(C₃-C₆) ou heterocicloalquilo com 5 ou 6 membros, em que (i) 0 referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi, hidroxicarbonilo ou cicloalquilo(C₃-C₆), e

   (ii) 0 referido heterocicloalquilo com 5 ou 6 membros é facultativamente substituído com oxo, ou os símbolos R⁴ e R⁵ são unidos e, considerados em conjunto com 0 átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocicloalquilo monocíclico, saturado, com 4 a 6 membros, que pode conter um segundo heteroátomo no anel selecionado entre N(R⁷) e O, e que pode ser substituído num átomo de carbono do anel com oxo ou hidroxi, e em que

   0 símbolo R⁷ representa hidrogênio ou alquilo(Ci-C₄),
6. 6/20 e

   o símbolo G² representar cloro, ciano, alquilo(Ci-C4) ou o grupo CR^8AR^8B-OH, CH2NR⁹R¹⁰, C(=O)NR¹¹R¹² ou -CH2-OR¹⁵, em que os símbolos R^8A e R^8B representam um grupo selecionado independentemente entre 0 conjunto constituído por hidrogênio, alquilo(Ci-C₄) e ciclopropilo,

   0 símbolo R⁹ representa hidrogênio ou metilo,

   0 símbolo R¹⁰ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), alquil(Ci-C₄)carbonilo, cicloalquilo(C₃-C₆) ou heterocicloalquilo com 5 ou 6 membros, em que (i) 0 referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi ou aminocarbonilo, e

   (ii) 0 referido heterocicloalquilo com 5 ou 6 membros é facultativamente substituído com oxo,

   0 símbolo R¹¹ representa hidrogênio ou metilo,

   0 símbolo R¹² representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), cicloalquilo(C₃-C₆) ou heterocicloalquilo com 5 ou 6 membros, em que (i) 0 referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi, e

   (ii) 0 referido heterocicloalquilo com 5 ou 6 membros é facultativamente substituído com oxo, ou os símbolos R⁹ e R¹⁰ ou R¹¹ e R¹², respectivamente, são unidos e, considerados em conjunto com 0 átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocicloalquilo monocíclico, saturado, com 4 a 6 membros, que pode conter um segundo heteroátomo no anel selecionado entre N(R¹³), O, S e S(O)₂, e que pode ser substituído nos átomos de carbono do anel com até três substituintes selecionados independentemente entre 0 conjunto constituído por flúor, alquilo(Ci-C₄), oxo, hidroxi, amino e
7. 7/20 aminocarbonilo, e em que o símbolo R¹³ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), ciclopropilo, ciclobutilo, formilo ou alquil(Ci-C₄)-carbonilo, e

   o símbolo R¹⁵ representa metilo ou etilo, desde que o símbolo G¹ não represente cloro quando o símbolo G² representa cloro ou ciano, ou um seu sal, hidrato e/ou solvato farmaceuticamente aceitável.

   3. Composto de fórmula estrutural (I) de acordo com a reivindicação 1 ou

   2, caracterizado por que o símbolo R¹ representa metilo, o símbolo R² representa metoxi, o símbolo G¹ representa metilo, oxazol-5-ilo ou o grupo -CH2-OR³ ou CH2-NR⁴R⁵, em que o símbolo R³ representa hidrogênio, alquilo(CrC₄), ciclopropilo ou ciclobutilo, em que o referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi, metoxi, etoxi, hidroxicarbonilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, amino, aminocarbonilo, ciclopropilo, ciclobutilo ou até três átomos de flúor, o símbolo R⁴ representa hidrogênio, metilo ou etilo, o símbolo R⁵ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), acetilo, ciclopropilo, ciclobutilo ou 2-oxopirrolidina-3-ilo, em que o referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hidroxi, hidroxicarbonilo, ciclopropilo ou ciclobutilo, ou os símbolos R⁴ e R⁵ são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocicloalquilo monocíclico, saturado, com 5 ou 6 membros, que pode conter um segundo heteroátomo no anel selecionado entre NH e O, e que pode ser substituído num átomo de carbono do anel com oxo ou hidroxi,
8. 8/20 e

   o símbolo G² representar metilo ou o grupo -CR^8AR^8B-OH, CH₂-NR⁹R¹⁰ ou C(=O)-NR¹¹R¹², em que os símbolos R^8A e R^8B representa, de um modo independente, hidrogênio ou metilo, o símbolo R⁹ representa hidrogênio, o símbolo R¹⁰ representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), acetilo, ciclopropilo, ciclobutilo ou 2-oxopirrolidina-3-ilo, em que o referido alquilo(CrC₄) é facultativamente substituído com hídroxi ou aminocarbonilo, o símbolo R¹¹ representa hidrogênio ou metilo, o símbolo R¹² representa hidrogênio, alquilo(Ci-C₄), ciclopropilo, ciclobutilo ou 2-oxopirrolidina-3-ilo, em que o referido alquilo(Ci-C₄) é facultativamente substituído com hídroxi, ou os símbolos R⁹ e R¹⁰ ou R¹¹ e R¹², respectivamente, são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel heterocicloalquilo monocícíico, saturado, com 4 a 6 membros, que pode conter um segundo heteroátomo no anel selecionado entre N(R¹³), O e S(O)₂, e que pode ser substituído nos átomos de carbono do anel com até três substituintes selecionados independentemente entre o conjunto constituído por flúor, metilo, oxo, hídroxi, amino e aminocarbonilo, e em que o símbolo R¹³ representa hidrogênio, formilo ou acetilo, ou um seu sal, hidrato e/ou solvato farmaceuticamente aceitável.

   4. Composto de fórmula estrutural (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por que o símbolo R¹ representa metilo, o símbolo R² representa metoxi, o símbolo G¹ representa o grupo -CH₂-OR³, em que
9. 9/20 o símbolo R³ representa alquilo(Ci-C₄) facultativamente substituído com hidroxi, amino ou aminocarbonilo, e

   o símbolo G² representar o grupo CH₂-NR⁹R¹⁰ ou C(=O)-NR¹¹R¹², em que o símbolo R⁹ representa hidrogênio, o símbolo R¹⁰ representa 2-oxopirrolidina-3-ilo, ou os símbolos R⁹ e R¹⁰ são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel piperazina-1-ilo,

   3-oxopiperazina-1-ilo ou 4-acetilpiperazina-1 ilo, o símbolo R¹¹ representa hidrogênio, o símbolo R¹² representa 2-oxopirrolidina-3-ilo, ou os símbolos R¹¹ e R¹² são unidos e, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel 3hidroxiazetidina-1-ilo, 4-hidroxipiperidina-1 -ilo ou 3-oxopiperazina-1-ilo, ou um seu sal, hidrato e/ou solvato farmaceuticamente aceitável.

   5. Composto caracterizado por ser o 4-{[4-amino-6-(metoximetil)-5-(7metoxi-5-metil-1 -ben zotiof eno-2-i I)-pi rro I o [2,1 f] [ 1,2,4]tri azi n a-7-i I] - m eti I}piperazina-2-ona, tal como descrito em qualquer uma das reivindicações 1 a 4,
10. 10/20 ou um sal, hidrato ou solvato do mesmo, farmaceuticamente aceitável.

    6. Composto caracterizado por ser o 4-{[4-amino-6-(metoximetil)-5-(7metoxi-5-metil-1 -ben zotiof eno-2-i I)-pi rro I ο [2,1 f][1,2,4]tri azi n a-7-i I] - m eti I}piperazina-2-ona, tal como descrito em qualquer uma das reivindicações 1 a 4,

    7. Processo para a preparação de um composto de fórmula estrutural (I), tal como definido nas reivindicações 1 a 6, caracterizado por [A] se fazer reagir, em primeiro lugar, uma 4-aminopirrolo[2,1f][1,2,4]triazina 6-substituída de fórmula estrutural (II) nh₂ ^n<S^W^{0-r3 N} (II), em que o símbolo R³ possui o significado indicado nas reivindicações 1 a 4, com formaldeído e com uma amina de fórmula estrutural (III) ,R^{9 HN}^_rw ^R (III), em que os símbolo R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, na presença de um ácido para se obter um composto de fórmula estrutural (IV)
11. 11/20

    (IV), em que os símbolos R³, R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, depois se submeter a bromação para se obter um composto de fórmula estrutural (V)

    (V), em que os símbolos R³, R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, e subsequentemente, se acoplar com um boronato de benzotiofeno-2-ilo de fórmula estrutural (VI)

    O-R¹⁴

    TOO-k

    O—R¹⁴

    JL.2 ^R (VI), em que os símbolos R¹ e R² possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, e

    os símbolos R¹⁴ representam hidrogênio ou alquilo(Ci-C4), ou ambos os resíduos R¹⁴ estão ligados entre si para formar uma ponte (CH2)₂, -C(CH₃)₂C(CH₃)₂-, -(CH₂)₃-, -CH₂-C(CH₃)₂-CH₂- ou C(=O)CH₂N(CH₃)-CH₂-C(=O)- , na presença de um catalisador de paládio e de uma base para se obter o composto desejado de fórmula estrutural (IA)
12. 12/20

    em que os símbolos R¹, R², R³, R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, ou [B] se submeter, em primeiro lugar, a formilação uma 4-aminopirrolo[2,1f]-[1,2,4]triazina 6-substituída de fórmula estrutural (II)

    em que o símbolo R³ possui o significado indicado nas reivindicações 1 a 4, com Ν,Ν-dimetilformamida na presença de cloreto de fosforilo para se obter um aldeído de fórmula estrutural (VII)

    em que o símbolo R³ possui o significado indicado nas reivindicações 1 a 4, depois se submeter a bromação para se obter um composto de fórmula estrutural (VIII)
13. 13/20

    (VIII), em que o símbolo R³ possui o significado indicado nas reivindicações 1 a 4, e, subsequentemente, se acoplar com um boronato de benzotiofeno-2-ilo de fórmula estrutural (VI)

    R

    R

    O—R¹⁴ / B ^XO—R¹⁴ em que os símbolos R¹, R² e R¹⁴ possuem os significados indicados antes, na presença de um catalisador de paládio e de uma base para se obter um composto de fórmula estrutural (IX)

    (IX), em que os símbolos R¹, R² e R³ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, o qual é então [B-1] submetido a reacção com uma amina de fórmula estrutural (III)
14. 14/20 η^{9 h}<_r·· em que os símbolos R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, na presença de um ácido e de um agente redutor para se obter o composto desejado de fórmula estrutural (IA)

    R¹ nh_{2 Ν}ΑγΧ,Ο-^π3 '--N

    V ^R (l-A), em que os símbolos R¹, R², R³, R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, ou [B-2] submetido a oxidação para se obter um ácido carboxílico de fórmula estrutural (X)

    R¹

    N^H2

    N ξ ⁰ (X), em que os símbolos R¹, R² e R³ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, e, por último, acoplado a uma amina de fórmula estrutural (XI)
15. 15/20

    W_r12 ^R (XI), em que os símbolos R¹¹ e R¹² possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, na presença de um agente de condensação para se obter o composto desejado de fórmula estrutural (IB)

    em que os símbolos R¹, R²,

    R³, R¹¹ e R¹² possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, ou [C] se submeter, em primeiro lugar, a acoplamento uma 4-amino-5bromo-pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina 6-substituída de fórmula estrutural (XII) nh_{2 Br} ^N (XII) com um boronato de benzotiofeno-2-ilo de fórmula estrutural (VI) o-R¹⁴ o—R¹⁴

    X 2 ^R (VI), em que os símbolos R¹, R² e R¹⁴ possuem os significados indicados antes,
16. 16/20 na presença de um catalisador de paládio e de uma base para se obter o composto de fórmula estrutural (XIII)

    (XIII), em que os símbolos R¹ e R² possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, e depois submeter a reacção com formaldeído e uma amina de fórmula estrutural (III) /^r9 em que os símbolos R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, na presença de um ácido para se obter o composto de fórmula estrutural (ΙΟ)

    (l-C), em que os símbolos R¹, R², R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4,
17. 17/20 o qual é subsequentemente [C-1] submetido a oxidação para se obter um aldeído de fórmula estrutural (XIV)

    (XIV),

    R¹⁰ possuem os significados indicados em que os símbolos R¹, R², R⁹ e nas reivindicações 1 a 4, e submetido a tratamento com uma amina de fórmula estrutural (XV) .R^{4 HN}C .

    ^R (XV), em que os símbolos R⁴ e R⁵ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4, na presença de um ácido e de um agente redutor para se obter o composto desejado de fórmula estrutural (l-D)

    (l-D), em que os símbolos R¹, R², R⁴, R⁵, R⁹ e R¹⁰ possuem os significados
18. 18/20 indicados nas reivindicações 1 a 4, ou [C-2] convertido no correspondente derivado 6-(halometilo) de fórmula estrutural (XVI)

    em que os símbolos R¹, R², R⁹ e R¹⁰ possuem os significados indicados nas reivindicações 1 a 4 e

    o símbolo X representa cloro, bromo ou iodo, e submetido a tratamento com um álcool de fórmula estrutural (XVII)

    R^3A-OH (XVII), em que o símbolo R^3A possui o significado do símbolo R³, tal como indicado nas reivindicações 1 a 4, com a excepção de hidrogênio, na presença de uma base para se obter o composto desejado de fórmula estrutural (l-E)
19. 19/20 em que os símbolos R¹, R², R^3A, R⁹ e R¹⁰ possuem os significados definidos antes, facultativamente seguido, se adequado, por (i) separação dos compostos de fórmula estrutural (I) assim obtidos nos seus respectivos enantiómeros e/ou diastereómeros e/ou (ii) conversão dos compostos de fórmula estrutural (I) nos seus respectivos hidratos, solvatos, sais e/ou hidratos ou solvatos dos sais por tratamento com os correspondentes solventes e/ou ácidos ou bases.

    8. Composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado por ser para o tratamento e/ou para a prevenção de doenças.

    9. Composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado por ser para a utilização em um método para o tratamento e/ou para a prevenção de cancro e de doenças tumorais.

    10. Utilização de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada por ser para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou para a prevenção de cancro e de doenças tumorais.

    11. Composição farmacêutica caracterizada por compreender um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

    12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11, caracterizada por compreender ainda um ou mais agentes terapêuticos suplementares.

    13. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 ou 12, caracterizada por ser para o tratamento e/ou para a prevenção de cancro e de doenças tumorais.

    14. Método para o tratamento e/ou para a prevenção de cancro e de doenças tumorais em um mamífero, caracterizado por compreender a administração, a um mamífero que de tal necessite, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos como definido em qualquer
20. 20/20 uma das reivindicações 1 a 6 ou de uma composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 11 a 13.