TWI503396B - 合成膽汁酸組合物，方法及製備 - Google Patents

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Description

合成膽汁酸組合物，方法及製備
概括而言，本發明係關於膽汁酸及相關組合物及方法。在一態樣中，本發明係關於去氧膽酸及相關組合物、可用中間體、及合成其之方法。在另一態樣中，本發明係關於本發明組合物之用途及用作醫藥組合物之方法以及製造其之方法。重要的係，本發明膽汁酸並非係自天然產生該等酸之哺乳動物及微生物分離獲得且因此不含任何與該等有機體相關之毒素及污染物。在另一態樣中，本發明係關於去氧膽酸及其醫藥上可接受之鹽及中間體之合成。
本申請案主張優先於在2007年6月19日申請之美國臨時專利申請案第60/945,035號及在2007年8月20日申請之美國專利第60/956,875號；優先於在2008年2月21日申請之美國實用新型專利申請案第12/035,339號及在2008年5月16日申請之美國專利第12/153,446號；且優先於在2008年4月25日申請之英國專利申請案第0807615.0號，每個該等專利皆係全文以引用方式併入本文中。
人們對研究膽汁酸及(尤其)膽汁酸化學之膽酸學之關注已延續大半個世紀。儘管對膽汁酸化學已瞭解很多，但其涉及衆多種化學實體，其中許多具有驚人特性。綜述可參見(例如)Mukhopadhyay,S.及U.Maitra.,Current Science 87：1666-1683(2004)("Chemistry and biology of bile acids")，其係以引用方式併入本文中。
膽汁酸之特徵在於兩個連接單元，即剛性類固醇核及脂肪族短側鏈(見本申請案之圖1)。參見Hofmann,A.F.等人。膽汁酸之建議名稱參見J.Lipid Res. 33：599-604(1992)。核及側鏈二者具有大量可能的立體排列方式。可藉由個別環之擴展或收縮來改變核，且可使側鏈縮短或延長。此外，膽汁酸分子之兩部分皆具有大量可能的極性取代基。電離基團可存於核或側鏈上。最後，共軛基團可存於核上(例如硫酸根、葡萄糖醛酸酯、磷酸根)或存於側鏈上(甘胺酸或牛磺酸或其他胺基酸，或甚至糖類)。側鏈結構決定化合物種類(膽汁酸或膽汁酸鹽)。
膽汁酸係兩親性化合物，其具有兼性及兩親性"面"：
Hofman,A.F.,News Physiol.Sci. 14 ：24-29(1999)("Bile Acids：The good,the Bad,and the Ugly"，第25頁，圖1)。
通常，將疏水表面稱作"β面"且將親水表面稱作"α面"。一般而言，α面係脂溶性且α面相對而言為極性。存在多種膽汁酸，諸如彼等在疏水面具有極性基團(在天然存在之膽汁酸中為羥基)且在親水面上具有極性基團(例如熊去氧膽酸)者。分子之兩親性使得其形成具有兩親性之混合膠粒而非水不溶性脂質，例如磷脂醯膽鹼。膽汁酸不能溶解呈混合膠粒形式之膳食脂質，除非膽汁酸超過臨界濃度(稱為臨 界膠粒化濃度)。
在人類中所發現之最主要膽汁酸係鵝去氧膽酸及去氧膽酸。去氧膽酸亦稱為去氧膽酸酯、膽烷酸、及3α,12α-二羥基-5β-膽烷酸酯。在人體中，去氧膽酸係用於乳化脂肪以供在腸中吸收。在研究中，去氧膽酸係用作分離膜相關蛋白之溫和淨化劑。當去氧膽酸實質上純淨時，其係呈白色至灰白色晶體粉末形式。去氧膽酸係肝臟所產生四種主要酸之一。其可溶於醇及乙酸中。去氧膽酸之CAS號係[83-44-3]。
快速去除脂肪係古老的理想，且人們已宣稱很多物質可達成該等結果，但很少顯示其真正可達成該等結果。由於安全性及效能方面的因素，"美塑療法(Mesotherapy)"或使用注射物來去除脂肪並未被從業醫師廣泛接受，但自20世紀50年代以來已主張採用順勢療法及整形療法。在歐洲首先提出了美塑療法，該方法採用皮膚注射含有多種用於治療局部醫學及整形狀況的化合物之混合物。儘管在傳統上美塑療法係用於緩解疼痛，但近來在美國人們開始關注其整形應用，尤其脂肪及蜂窩組織之去除。一種經如此報導的用於局部脂肪減少之治療(其在巴西很受歡迎且採用磷脂醯膽鹼之注射)被誤認為與美塑療法含義相同。儘管其因被傳言為"脂肪溶解"注射而具有吸引力，但大多數患者及醫師仍不明確該等整形治療之安全性及效能。參見Rotunda,A.M.及M.Kolodney,Dermatologic Surgery 32：465-480(2006)("Mesotherapy and Phosphatidylcholine Injections：Historical Clarification and Review")。
WO 2006/133160(其包括圖在內之全部內容係以引用方式併入本文中)闡述脂肪雕塑方法，例如藉由將神經肽Y受體拮抗劑投與脂肪庫位點來減小脂肪庫。Kolonin M.G.等人，Nat.Med. June10 (6)：625-32(2004)闡述具有有效脂肪細胞殺滅效應之脂肪選擇性促凋亡肽。所述促凋亡肽需要到達脈管系統以實施殺滅。
近期公開之文獻報導，當在體內將去氧膽酸注射至脂肪沈積中時，去氧膽酸具有脂肪去除特性。參見WO 2005/117900及WO 2005/112942，以及美國專利第US2005/0261258號；美國專利第US2005/0267080號；美國專利第US2006/127468號；及美國專利第US20060154906號，所有該等專利的包括圖在內之全部內容皆係以引用方式併入本文中。注射至脂肪組織中之去氧膽酸酯具有兩種效應：1)其經由溶胞機制殺滅脂肪細胞；及2)其使皮膚繃緊。達成期望美容整形(即體形塑造)同時需要該兩種效應。由於注射至脂肪中之去氧膽酸酯因曝露於蛋白質而迅速失活且隨後迅速返回腸內含物中，因此其效應在空間上受到限制。由於此衰減效應可賦予臨床安全性，脂肪去除治療通常需要4-6個療程。此無需手術之局部脂肪去除不僅有利於病理性局部脂肪沈積(例如在治療HIV中醫療干預所伴隨之血脂異常)之治療性治療，亦有利於整形性脂肪去除，且不存在手術(例如抽脂法)中固有之伴隨風險。參見Rotunda等人，Dermatol.Surgery 30：1001-1008(2004)("Detergent effects of sodium deoxycholate are a major feature of an injectable phosphatidylcholine formulation used for localized fat dissolution")及Rotunda等人，J.Am.Acad.Dermatol. 2005：973-978("Lipomas treated with subcutaneous deoxycholate injections")，二文獻皆係以引用方式併入本文中。
醫藥級膽汁酸製劑可以相對低之成本在市場上購得。此低成本係歸因於以下事實：膽汁酸係自動物軀體獲得，尤其諸如牛及綿羊等大型動物。重要的係，如同所有來自動物來源之藥劑，人們擔心動物源膽汁酸產物可能含有動物病原體及其他有害因子，例如動物或微生物代謝產物及毒素，包括諸如致熱原等細菌性毒素。
該等動物病原體可包括朊病毒，其被視為可引發朊病毒疾病之傳染性病原蛋白類型。朊病毒疾病係神經系統之變性病症。人們認為 一種此等疾病，即"瘋牛"病(認為其係克羅伊茨費爾特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakob disease)(CJD)之變種)，係由存於來自病牛之食用牛肉中之朊病毒所引發。大多數病例係具有未知傳播模式之散發型；某些病例係遺傳型；且少量病例係藉由醫療程序傳播。人類朊病毒疾病經由消耗受感染材料之蔓延在歷史上與庫魯病(kuru)有關且近年來與變種CJD有關。其他動物朊病毒疾病(綿羊瘙癢症、傳染性水貂腦病、鹿類之慢性消耗性疾病、及牛海綿樣腦病)似乎皆係藉由接觸受感染動物或藉由消耗受感染食物而橫向傳播。由於不同傳播模式、不可預測之種間屏障、組織中感染性之可變分佈、及在某些疾病中所發現之種系變異，風險評價及對屬於朊病毒疾病之未來事件之預測係難於確定的。
一般而言，動物產物可能會曝露於產生致熱原(致發燒物質)之微生物中。食物及/或醫藥產品之細菌性污染物亦係一個嚴重問題，如由腸出血性大腸桿菌(E.coli )對食物之污染所顯示。在該污染中涉及諸如牛肉等產物以及諸如蘋果、菠菜、及類似物等作物。在該等案例中，由細菌所產生之毒素(而非細菌自身)在人體中產生有害效應。該等有害效應包括嚴重腹瀉、腎衰竭且在極端情況下包括死亡。所有醫藥組合物皆必須在實質上除去細菌性內毒素(一類致熱原)。
一般地，動物產物係藉由消除法來純化，即終產物係除去雜質後之剩餘物質，而非自混合物選擇終產物。且除了諸如病原體等可能的動物部分外，自動物來源純化之另一人為因素係終產物係一或多種膽汁酸之混合物。舉例而言，去氧膽酸之市售製劑含有某些鵝去氧膽酸以及膽酸，膽酸在哺乳動物膽汁酸合成中係去氧膽酸及鵝去氧膽酸二者之前體。由於未預先選定去氧膽酸/鵝去氧膽酸/膽酸之確切比例，在意欲大量製造膽汁酸時此可導致批次間差異。該批次間差異可能會造成問題且在獲得監管部門批准或品質控制中、尤其在製造醫藥 組合物之努力中可能會需要額外步驟。顯然，製造者在製造膽汁酸醫藥組合物時需要批次間之可預測性。
目前，關於含有動物病原體及其他有害因子之動物源產物的問題已藉由自經隔離且經檢查動物獲得產物來解決。舉例而言，來自新西蘭動物之去氧膽酸係在美國管理制度下用於人體之膽汁酸來源，只要動物繼續保持隔離或不含有可觀察到之病原體即可。
亦即，需要此類政府控制的管理制度，以便在注射動物源藥物時識別動物病原體傳播之固有風險。倘若可獲得非動物藥物替代品，則不再需要政府管理制度。具有相關優點之該替代品(替代動物源藥物之非動物性藥物)實例係人用胰島素。美國已於1998年停止製造牛胰島素，且在2006年1月停止製造人用豬胰島素。儘管可自已知尚未接觸過會引發BSE之致病因子或其他致病因子之牲畜獲得動物胰島素，但製造設施或製程可能會使動物成份曝露於已接觸過病原體之動物中。藉由使用以重組方式或合成方式製造之胰島素可消除致病因子傳播至人類之風險。對於消費者而言，胰島素之情形具有指導性：倘若可自由地獲得合成物質，則在理論上可消除動物病原體傳播之風險。對於製造者而言，若能夠製造實質上不含動物病原體物質之純淨化學實體則有利於達成安全、優質、及調節目的。此外，與自生物來源獲得之產物相比，合成製程所提供之產物通常具有更高可重現性。
目前，由於動物軀體來源之膽汁酸相當豐富，工業尚未進步至完全以化學方式來合成膽汁酸，或使用植物甾醇或微生物起始材料來製備膽汁酸。且儘管已合成出膽汁酸衍生物，但由於動物材料成本低且易於獲得，因此該工作仍主要涉及作為類固醇化學之起始材料之動物源膽汁酸。儘管在歷史上人們在植物甾醇研究中付出大量努力，但仍未開發出便於市售之植物甾醇源膽汁酸之醫藥級組合物。參見(例如)Mukhopadhyay,S.及U.Maitra.，Current Science 87：1666-1683, 1670(2004)(應注意，根據1981年參考文獻(Kametani等人，J.Am.Chem.Soc. 103：2890(1981)("First Total Synthesis of(+)-Chenodeoxycholic Acid")，此時尚未曾實施任何膽汁酸之總合成))。已將諸如細菌等微生物所產生膽汁酸作為細菌產物，於原位用於(例如)海洋溢油清除中。參見Maneerat等人，Appl.Microbiol.Biotechnol. 76：679-683(2004)("Bile acids are new products of a mariene bacterium,Myroides sp.Strain SM1")。
為實現去氧膽酸去除脂肪之全部潛力，必須進一步解決使用動物源產物之相關問題。顯然，業內需要適宜量之已知原本就不含動物源部分(或能作用於動物(尤其哺乳動物)且在用於人類時可對人類具有有害效應之病原部分)及諸如動物或微生物代謝產物、毒素(包括諸如致熱原等細菌性毒素)等其他有害因子的有效膽汁酸及相關組合物(例如去氧膽酸)以供在人類中用作藥物。本發明藉由提供以合成方式製備且不具有動物病原體及其他有害因子之潛在風險之膽汁酸組合物來解決此問題。所揭示膽汁酸組合物可用於脂肪分解治療且可用於局部脂肪去除領域之進一步研究及研發性工作中。
本文提供足量適宜膽汁酸作為所定義醫藥組合物，且提供合成其之方法。由此提供之膽汁酸組合物及方法並非係自天然產生膽汁酸之哺乳動物或微生物分離獲得。在一態樣中，提供不含任何動物源部分及哺乳動物部分及/或細菌性致熱原之特定去氧膽酸醫藥組合物以及相關製造方法及用途。在另一態樣中，提供足量適宜去氧膽酸作為所定義醫藥組合物，其可用作局部去除脂肪之可注射醫藥組合物，且提供相關組合物、製造方法及使用方法。本發明所定義去氧膽酸酯注射液可與藉由正交機制消除脂肪之分子(例如NPY拮抗劑及/或脂肪選擇性促凋亡肽)組合來提供可用於在較少治療療程中以更有效方式達 成體形塑造之藥劑。在另一態樣中，本發明提供與合成去氧膽酸及其醫藥上可接受之鹽相關之方法及中間體。以合成方式製備之去氧膽酸可用於去除脂肪之脂肪分解治療。
圖1係表現膽汁酸結構之圖，其包括用於膽汁酸骨架之碳的編號系統。
圖2顯示用本發明合成去氧膽酸鈉處理與用牛源去氧膽酸鈉(Sigma)處理相比，處理後原代人脂細胞之細胞存活率之劑量依賴性降低之相似性。
 以引用方式併入
本說明書中所提及所有出版物及專利申請案皆係以引用方式併入本文中，其併入程度如同明確地且單獨地表明將每一個別出版物或專利申請案以引用方式併入。
定義
在整個本發明中，各種出版物、專利及所公開專利說明書皆係以等同引用方式來參照。此處，該等出版物、專利及所公開專利說明書之揭示內容皆係以引用方式併入本發明中以更充分地闡述本發明所屬技術領域之狀態。
本文所用某些術語具有以下所定義含義。除非上下文明確表示其他含義，否則說明書及申請專利範圍中所用單數形式"一(a、an)"及"該(the)"包括單數及複數含義。
除非另外說明，否則說明書及申請專利範圍中所用表示成份數量、反應條件等的所有數值在所有情況下均應理解為受術語"約"修飾。因此，除非表明相反含義，否則以下說明書及隨附申請專利範圍中所述數值參數皆係近似值。至少應根據所報告有效數字位數且藉由 採用一般舍入技術來解釋每一數值參數。
術語"乙醯化試劑"係指可將乙醯基CH3 C(O)-添加至分子之試劑。
術語"酸"係指質子供體且包括有機酸及無機酸二者。
術語"烷基"係指具有1至10個碳原子且較佳具有1至6個碳原子之單價飽和脂肪族烴基。此術語包括(舉例而言)線性及具支鏈烴基，例如甲基(CH3 -)、乙基(CH3 CH2 -)、正丙基(CH3 CH2 CH2 -)、異丙基((CH3 )2 CH-)、正丁基(CH3 CH2 CH2 CH2 -)、異丁基((CH3 )2 CHCH2 -)、第二丁基((CH3 )(CH3 CH2 )CH-)、第三丁基((CH3 )3 C-)、正戊基(CH3 CH2 CH2 CH2 CH2 -)、及新戊基((CH3 )3 CCH2 -)。
術語"芳基"係指具有6至12個碳原子之單價芳香族碳環基團，其具有單環(例如苯基)或多個稠環(例如萘基)。
術語"動物源"係指源自包括多細胞生物及單細胞生物之生物王國(動物界)中任一種生物。
術語"脫水劑"係指可與水反應之試劑。在一態樣中，脫水劑可與自分子移除之水反應。
術語"脫硫劑"係指可與硫化物反應之試劑。在一態樣中，脫硫劑可與含硫化物分子反應以自分子移除硫化物基團。
術語"乙二硫醇或二噻烷前體"係指藉由與羰基反應可形成乙二硫醇或二噻烷之試劑。
術語"親電乙醯基"係指作為親電體之乙醯基，親電體係受電子吸引且易於接受電子之基團。
術語"氫化劑"係指可向分子提供氫之試劑。
術語"路易斯酸(Lewis acid)"係指電子對受體。路易斯酸包括有機金屬試劑，例如烷基鹵化鋁(例如Et2 AlCl及MeAlCl2 )。
術語"哺乳動物源"係指源自任何哺乳動物。術語"哺乳動物"係指以乳腺分泌之乳汁養育其幼仔之溫血高等脊椎動物(例如胎生動物、 有袋類動物、或單孔類動物)之綱(哺乳綱)，其皮膚通常或多或少經毛髮覆蓋，且包括人類。
術語"微生物源"係指源自任何微生物。術語"微生物"係指圓形、螺旋形、或桿形單細胞原核微生物領域(細菌)，其可能缺少細胞壁或若其具有細胞壁則為革蘭氏(gram)陽性或革蘭氏陰性，其經常聚集成菌落或可藉由鞭毛方式移動，其通常生存於土壤、水、有機物質、或植物及動物體內，其營養方式通常係自養、腐生或寄生，且其特徵在於其生化特性及致病性。
術語"烯化劑"係指與酮反應以形成對應烯烴之試劑。術語"烯烴形成條件"係指實施該等轉化之適宜條件。該等試劑之實例包括魏悌希(Wittig)試劑及魏悌希烯化條件。
術語"氧化劑"係指可在氧化還原反應中接受電子之試劑。以此方式，可將鹵素或氧添加至分子中或可自分子移除氫。
術語"病原體"係指疾病之具體致病因子。
"醫藥上可接受之鹽"係指自業內熟知之各種有機及無機異荷離子衍生之醫藥上可接受之鹽，且包括(僅舉例而言)鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、及四烷基銨鹽。適宜鹽包括P.Heinrich Stahl、Camille G.Wermuth(編輯)，Handbook of Pharmaceutical Salts Properties,Selection,and Use；2002中所述之彼等。該等醫藥上可接受之鹽可藉由使DCA與適宜鹼反應來製備。出於例示性目的，該等鹼之實例包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、或氫氧化鋰。或者，該等鹽可藉由用鹼水解DCA之酯及省略任何可產生DCA之酸處理來製備。
術語"還原劑"係指在氧化還原反應中可提供電子之試劑。以此方式，可自分子移除鹵素或氧，或可將氫添加至分子中。
組合物及使用方法
在本文所述各態樣中，本發明提供用於醫藥用途之組合物(及可 用中間體)、其合成方法、及本發明醫藥組合物之使用方法。
重要的係，本發明膽汁酸組合物不具有自動物起始材料獲得之材料中之固有風險，且因此不需要動物源材料之詳細檢查及調節。因此在一態樣中，本發明係關於不含諸如哺乳動物病原體等動物源材料且實質上不含諸如致熱原等細菌源毒素之膽汁酸醫藥組合物。
去氧膽酸鈉係天然產生之膽汁酸鹽，其可在消化道內溶解膳食脂質。其係經由複合生物合成途徑採用膽固醇作為起始材料在體內產生且該途徑同時涉及人類及細菌酶二者。去氧膽酸酯之主要功能係藉由溶解膳食脂質以促進吸收來輔助消化過程。在體內，去氧膽酸酯之生物合成始於肝臟中膽固醇之酶促氧化、異構化、及還原以形成膽酸，其係在結構上與其膽固醇母體類似之膽汁酸(Stryer L，第27章：Biosynthesis of Membrane Lipids and Steroids,inBiochemistry, 1995,W.H.Freeman and Company：New York.第691-707頁)。然後在肝臟中，使膽酸以化學方式連接兩種胺基酸(牛磺酸或甘胺酸)之一以形成'共軛'膽酸(即L-甘膽酸鹽及牛磺膽酸鹽)。然後使該等共軛膽酸儲存於膽囊中直至消耗食物。食物消耗後，膽汁溶液自膽囊中釋放至腸中，其中對共軛膽酸分子實施兩次由腸道菌群所產生酶介導之額外化學修飾(Ridlon J.M.、Kang D.J.及Hylemon P.B.，Bile salt biotransformations by human intestinal bacteria,J.Lipid Res., 47 (2)：第241-59頁(2006))。首先，使共軛膽酸去羥基以形成共軛去氧膽酸酯。然後使共軛去氧膽酸酯去共軛以形成游離去氧膽酸酯，其與其他膽汁酸一起參與膳食脂質之溶解。由於去氧膽酸酯係位於膽酸合成之下游，因此膽酸可能係存於去氧膽酸酯天然來源中之雜質。
去氧膽酸酯在水中以333mg/mL溶解，在醇中少量溶解，且在丙酮及冰乙酸中溶解度甚至更低。可以約2.4mg/mL之臨界膠粒濃度以上之去氧膽酸鈉濃度及中性pH來達成膠粒之可逆形成(Matsuoka K, M.Y.,Micelle formation of sodium deoxycholate and sodium ursodeoxycholate(part 1),Biochim.Biophys.Acta., 1580 (2-3)：第189-99頁(2002))。在2.4mg/mL之臨界膠粒濃度以上之濃度下，去氧膽酸酯可形成膠粒且能溶解細胞、脂質、及蛋白質。在諸如0.4mg/mL等較低濃度下(可與禁食狀態相比)及在26mg/mL白蛋白(其接近35-50mg/mL之血清生理濃度)存在下，98%去氧膽酸酯與白蛋白結合(Roda A.等人，Quantitative aspects of the interaction of bile acids with human Serum albumin,J.Lipid Res., 23 (3)：第490-5頁(1982))。
較佳實施例係關於去氧膽酸(DCA)或其前藥、或化合物或前藥之醫藥上可接受之鹽、及相關組合物及方法，其中去氧膽酸(DCA)係：
其中該化合物並非係自天然產生DCA之哺乳動物或微生物分離。
其他較佳實施例亦係關於DCA之立體異構體及其醫藥上可接受之鹽，且係關於DCA合成中之中間體及其立體異構體及鹽及相關組合物及方法。
視需要，本發明膽汁酸醫藥組合物係呈鹽形式，且視需要另外含有醫藥上可接受之稀釋劑、賦形劑或載劑。在一態樣中，本發明係關於化合物及醫藥上可接受之賦形劑，該化合物係去氧膽酸(DCA)或其前藥、或化合物或前藥之醫藥上可接受之鹽： 其中該化合物並非係自天然產生DCA之哺乳動物或微生物分離。
鹽製備之較佳陽離子係選自由以下組成之群：鈉(Na+ )、鉀(K+ )、鋰(Li+ )、鎂(Mg2+ )、鈣(Ca2+ )、鋇(Ba2+ )、鍶(Sr2+ )、及銨(NH4 + )。亦可自鹼金屬或鹼土金屬來製備鹽。鹼金屬可係選自鈉(Na+ )、鉀(K+ )、及鋰(Li+ )。鹼土金屬可係選自由鎂(Mg2+ )、鈣(Ca2+ )、鋇(Ba2+ )、及鍶(Sr2+ )組成之群。用作局部去除脂肪之醫藥組合物之膽汁酸鹽較佳係去氧膽酸鈉。
亦涵蓋實施例中化合物之前藥。前藥係活性或非活性化合物，在將前藥投與患者後其在化學上經由體內生理作用(例如水解、代謝及諸如此類)修飾為實施例中之化合物。舉例而言，可製備本發明去氧膽酸或其衍生物之C1 -C10 酯或醯胺以藉由細胞膜之破裂及酯酶之釋放來觸發去氧膽酸或其衍生物之釋放。伴隨著酯酶之釋放，酯保護基團斷裂使得去氧膽酸活性形式或其衍生物原位存於期望位置。該等C1 -C10 酯視需要可包括1-4個選自氧、硫或氮之雜原子；視需要具有1-4個選自氧、硫或氮之雜原子之烷基，例如甲基、乙基、異丙基、丁基、己基等；總共具有最多10個碳原子之烷基苯基，例如在任何可接受之取代點視需要具有1-4個雜原子之苄基或乙基苯基；及諸如苯基等芳基。醯胺之實例包括(但不限於)異羥肟酸鹽。涉及酯之前藥之概述可參見Svensson and Tunek Drug Metabolism Reviews 165(1988)及Bundgaard Design of Prodrugs,Elsevier(1985)，其皆係全文以引用方 式併入本文中。去氧膽酸之C1 -C10 酯或醯胺之合成係為業內所熟知。舉例而言，可在無機酸存在下於酯化反應中藉由去氧膽酸與醇之反應來合成酯。
去氧膽酸及鵝去氧膽酸之天然結構顯示如下。顯示四個環(A、B、C、D)以及自D環延伸之羧酸側鏈。
去氧膽酸及鵝去氧膽酸(CDCA)或其衍生物之酯、異羥肟酸鹽、及羥基醯胺之某些實例非限制性地闡述於下文中。藉由D環側鏈上羧基之酯化反應，不同官能團可與去氧膽酸或鵝去氧膽酸連接來生成前藥。該等D環側鏈酯之某些實例非限制性地展示於表1中。
去氧膽酸或鵝去氧膽酸及其衍生物之釋放可藉由細胞膜之破裂及酯酶之釋放來觸發。伴隨著酯酶之釋放，酯保護基團斷裂使得去氧膽酸或鵝去氧膽酸之活性形式或其衍生物原位存於期望位置。
去氧膽酸、鵝去氧膽酸及其衍生物之前藥亦包括可能具有與天然分子相反之立體化學之差向異構體。該等差向異構體分子之實例展示於表2中。
注射本發明實施例之膽汁酸組合物後可能出現局部興奮，且因此需要同時或依次投與局部麻醉劑。舉例而言，利多卡因(lidocaine)通常用於人體中，且可作為共調配物(存於相同容器中且同時注射)或 共注射物(自不同容器注射)來投與。諸如利多卡因等麻醉劑可經由諸如貼劑或軟膏劑等局部製劑來投與。
對於較深組織而言，可將麻醉劑更深地注射至目標組織中或全身性投與(例如全身麻醉、硬膜外麻醉或其他已知方法)。
存於本發明溶液中之膽汁酸或膽汁酸鹽之濃度可為約0.001-10、0.01-5、或0.1-2% w/w、w/v、或v/v。較佳地，存於上述溶液中之膽汁酸或膽汁酸鹽之濃度可為約0.1-5% w/w或更佳為約1% w/w。在某些實施例中，脂肪溶解溶液最多包含100、50、20、10、5、2、1、0.5、0.2、0.05、0.02、或0.01克一或多種淨化劑、膽汁酸及/或膽汁酸鹽(例如去氧膽酸或其鹽或去氧膽酸鈉)。
在較佳實施例中，本發明溶液不包括任何脂質、磷脂或磷脂醯膽鹼。在某些實施例中，本發明溶液最多包括5% w/w、w/v、或v/v脂質、磷脂或磷脂醯膽鹼。
在某些實施例中，上述溶液可另外包含選自由以下組成之群之第二治療藥劑：抗微生物劑、血管收縮藥、抗血栓藥、抗凝結藥、猝死綜合徵抑制劑、消炎劑、鎮痛藥、分散劑、抗分散劑、滲透促進劑、類固醇、鎮靜劑、肌肉鬆弛劑、及抗腹瀉藥。在某些實施例中，溶液係存於最多含有500mL溶液之容器中。該容器可為注射器或注射器可裝載容器。
在某些實施例中，組合物及方法另外包含已知可藉由正交機制消除脂肪之分子。該等分子包括神經肽Y(NPY)受體拮抗劑，其包括(但不限於)NPY受體拮抗劑，例如BIBP-3226(Amgen)、BIBO-3304(Boehringer Ingleheim)、BMS-192548及AR-H040922(Bristol-Myers Squibb)、LY-357897(Eli Lilly)、1229U91及GW438014S(GlaxoSmithKline)、JNJ-5207787(Johnson & Johnson)、Lu-AA-44608(Lundbeck)、MK-0557(Merck NPY)、NGD-95-1(Neurgogen)、NLX- E201(Neurologix)、CGP-71683(Novartis)、PD-160170(Pfizer)、SR-120819A、BIIE0246、及S.A.0204(Sanofi Aventis)、S-2367(Shiongli)、作為NPY受體拮抗劑之二氫吡啶及二氫吡啶衍生物、作為NPY受體拮抗劑之二環化合物、咔唑NPY受體拮抗劑、即作為NPY受體拮抗劑之三環化合物。參見(例如)WO 2006/133160及美國專利第6,313,128號(其包括圖在內之全部內容皆係以引用方式併入本文中)。亦涵蓋脂肪選擇性促凋亡肽，例如尋靶至白色脂肪脈管系統之CKGGRAKDC肽。參見Kolonin M.G.等人，Nat.Med. June10 (6)：625-32(2004)。
在一態樣中，本發明係關於在個體中減少皮下脂肪沈積之方法。該等方法包含向個體中之皮下脂肪沈積局部投與組合物之步驟，該組合物包含：(i)脂肪溶解有效量之一或多種醫藥活性淨化劑或膽汁酸及/或膽汁酸鹽、或去氧膽酸或其鹽、或去氧膽酸鈉；(ii)醫藥、獸醫、或整形賦形劑；及(iii)(視需要)脂質，其中脂質與膽汁酸或膽汁酸鹽之比最多為1% w/w且其中組合物不包括脂肪酶或輔脂肪酶。在某些實施例中，脂肪沈積係與選自由以下組成之群之病況相關：肥胖症、脂肪再分佈症候群、眼瞼脂肪疝出、脂肪瘤、德爾肯氏病(Dercum's disease)、脂肪代謝障礙、水牛背部脂肪代謝障礙、頸背面脂肪、內臟脂肪過多、乳房脹大、肥胖過度、身體脂肪在軀幹及臂周圍擴散、及與蜂窩組織相關之脂肪沈積。在較佳實施例中，上述方法不包括在該個體上實施手術。
在一態樣中，本發明係關於自哺乳動物中之所選位置去除脂肪沈積之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與治療有效量之DCA或其前藥或DCA或前藥之醫藥上可接受之鹽： 其中該化合物並非係自天然產生DCA之哺乳動物或微生物分離。
在一實施例中，本發明方法可另外包含向哺乳動物投與至少一種選自由神經肽Y(NPY)受體拮抗劑及脂肪選擇性促凋亡肽組成之群之額外活性成份。在一實施例中，神經肽Y(NPY)受體拮抗劑係選自由以下組成之群：BIBP-3226、神經肽Y5拮抗劑(Amgen NPY受體拮抗劑)、BIBO-3304(Boehringer Ingleheim NPY受體拮抗劑)、BMS-192548(Bristol-Myers Squibb NPY受體拮抗劑)、AR-HO40922(Bristol-Myers Squibb NPY受體拮抗劑)、LY-357897(Eli Lilly NPY受體拮抗劑)、Esteve NPY-Y5受體拮抗劑、1229U91(GlaxoSmithKline NPY受體拮抗劑)、GW438014S(GlaxoSmithKline NPY受體拮抗劑)、JNJ-5207787(Johnson & Johnson NPY受體拮抗劑)、Lu-AA-44608(Lundbeck NPY受體拮抗劑)、MK-0557(Merck NPY受體拮抗劑)、NGD-95-1(Neurgogen NPY受體拮抗劑)、NLX-E201(Neurologix NPY受體拮抗劑)、CGP-71683(Novartis NPY受體拮抗劑)、PD-160170(Pfizer NPY受體拮抗劑)、SR-120819A(Sanofi Aventis NPY受體拮抗劑)、BIIE0246(Sanofi Aventis NPY受體拮抗劑)、S.A.0204(Sanofi Aventis NPY受體拮抗劑)、S-2367(Shiongli NPY受體拮抗劑)、作為NPY受體拮抗劑之二氫吡啶、作為NPY受體拮抗劑之二氫吡啶衍生物、作為NPY受體拮抗劑之二環化合物、咔唑NPY受體 拮抗劑、及作為NPY受體拮抗劑之三環化合物。參見(例如)WO 2006/133160及美國專利第6,313,128號(其包括圖在內之全部內容皆係以引用方式併入本文中)。在一實施例中，脂肪選擇性促凋亡肽係尋靶至白色脂肪脈管系統之CKGGRAKDC肽。參見Kolonin M.G.等人，Nat.Med. June 10(6)：625-32(2004)。
在一態樣中，本發明係關於在個體皮膚區域中減輕皮膚病況外觀之方法。該等方法包含以下步驟：向該皮膚區域局部投與包含以下之組合物：(i)緊膚有效量之一或多種醫藥活性淨化劑、或膽汁酸及/或膽汁酸鹽、或去氧膽酸或其鹽、或去氧膽酸鈉、(ii)醫藥、獸醫、或整形賦形劑、及(iii)(視需要)脂質。在某些實施例中，投與步驟涉及經由皮下或經皮注射遞送本發明組合物。在某些實施例中，所治療或改善皮膚病況係選自由以下組成之群：皮膚鬆垂、皮膚衰老、皮膚不規則、及皺紋。在某些實施例中，所治療皮膚區域係在眼下、類下、臂下、臀部、頰、眉毛、小腿、背部、大腿、踝部、或腹部。
在某些實施例中，將用於在皮膚區域減輕皮膚病況外觀之組合物調配至緊膚溶液中。該緊膚溶液可另外包含選自由以下組成之群之第二治療藥劑：抗微生物劑、血管收縮劑、抗血栓藥、抗凝結藥、猝死綜合徵抑制劑、消炎藥、鎮痛藥、分散劑、抗分散劑、滲透促進劑、類固醇、鎮靜劑、肌肉鬆弛劑、及抗腹瀉藥。
在較佳實施例中，淨化劑包含選自由以下組成之群之膽汁酸：去氧膽酸、膽酸、鵝去氧膽酸、7-α-去羥基鵝去氧膽酸、石膽酸、熊去氧膽酸、二羥基牛磺酸、三羥基牛磺酸、及任一上述化合物之甘胺酸共軛物。在某些實施例中，淨化劑包含具有選自由以下組成之群之陽離子之膽汁酸鹽：鈉(Na+ )、鉀(K+ )、鋰(Li+ )、鎂(Mg2+ )、鈣(Ca2+ )、鋇(Ba2+ )、鍶(Sr2+ )、及銨(NH4 + )。在某些實施例中，淨化劑包含具有陽離子之膽汁酸鹽，該陽離子係鹼金屬或鹼土金屬。較佳 地，鹼金屬為鈉(Na+ )、鉀(K+ )、或鋰(Li+ )且鹼土金屬為鎂(Mg2+ )、鈣(Ca2+ )、鋇(Ba2+ )、或鍶(Sr2+ )。更佳地，膽汁酸鹽係去氧膽酸鈉。
另一實施例提供在哺乳動物中乳化脂肪之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與治療有效量之化合物，該化合物係DCA或其前藥或DCA或前藥之醫藥上可接受之鹽： 其中該化合物並非係自天然產生DCA之哺乳動物或微生物分離。
另一實施例提供溶解磷脂醯膽鹼之方法，其包含混合磷脂醯膽鹼與有效量之化合物，該化合物係DCA或其前藥或DCA或前藥之醫藥上可接受之鹽， 其中該化合物並非係自天然產生DCA之哺乳動物或微生物分離。
本發明另一態樣係關於混合諸如去氧膽酸(DCA)等脂肪-燒蝕性膽汁酸與殺滅脂肪細胞之試劑。在一態樣中，本發明涵蓋增強去氧膽 酸酯注射之美容效果之方式，其係藉由將經正交機制消除脂肪之分子混合至去氧膽酸酯注射液中來達成。該等候選分子之實例包括(但不限於)本文所述神經肽Y(NPY)拮抗劑及脂肪選擇性促凋亡肽。由於達成期望效應需要脂肪細胞殺滅及緊膚，因此具有脂肪消除能力及有效緊膚效應之試劑(例如去氧膽酸酯)之效應可經由添加具有有效脂肪細胞殺滅效應之分子來增強。此外，由於去氧膽酸酯可導致脈管滲漏，因此需要到達脈管系統以實施殺滅之分子(例如與在毛細血管腔面上表現之蛋白質結合之某些促凋亡肽)可到達該等蛋白。因此，該等試劑可與去氧膽酸酯具有協同性，從而可能在更少治療療程中以更有效方式達成體形塑造。
合成方法
在其他實施例中，本發明提供合成DCA之化合物、鹽、及前藥及其相關中間體之方法。
本文所用類固醇支架之編號遵循圖1中所示之一般慣例。
因此，提供製備去氧膽酸(DCA)或其酯或其醫藥上可接受之鹽之方法：
該方法包含：(a)在氫化條件下使9α-羥基雄甾-4-烯-3,17-二酮1 與H2 反應以形成化合物2 (b)使化合物2 與酸反應以形成化合物3 (c)使化合物3 與還原劑反應以形成呈4 與5 之混合物形式之化合物4 (d)使在烯烴形成條件下化合物4 與二碳烯化劑反應以形成化合物6 (e)將化合物6 轉化為式7 化合物，其中P係保護基團 (f)在路易斯酸存在下使式7 化合物與丙炔酸烷基酯CH2 CH2 C(O)OR或丙烯酸烷基酯CH2 =CHC(O)OR反應(其中R係烷基)以形成式8 化合物，其中P係保護基團，R係烷基，且虛線---- 係單鍵或雙鍵；
(g)在氫化條件下使式8 化合物宇H2 反應以形成式9 化合物，其中P 係保護基團且R係烷基 (h)使式9 化合物與氧化劑反應以形成式10 化合物，其中P係保護基團且R係烷基 (i)在氫化條件下使式10 化合物與H2 反應以形成式11 化合物，其中P係保護基團且R係烷基 (j)使式11 化合物與還原劑反應以形成式12 化合物，其中P係保護基團且R係烷基
(k)將式12 化合物曝露於去保護條件下以形成其酯且視需要曝露於適宜水解條件下以形成去氧膽酸或其醫藥上可接受之鹽。
本發明亦提供下文方案1中所示之以下中間體，其中P及R係如上文中所定義。
在一實施例中，(a)項之氫化條件包含Pd/C觸媒。
在一實施例中，(b)項之酸係無機酸。在某些態樣中，無機酸係H2 SO4 。
在一實施例中，(c)項之還原劑係LiAl(OtBu)3 H。
在一實施例中，(d)項之二碳烯化劑係諸如Ph3 PCH2 CH3 + Br- 等魏悌希試劑。
在一實施例中，化合物7-12之保護基團P係-C(O)CH3 。在某些態樣中，將化合物6曝露於醯化條件下以形成7a，例如藉由用乙酸酐或諸如Et3 N、吡啶及/或二甲胺基吡啶等有機鹼處理6來達成。
在一實施例中，(f)項之路易斯酸係ErAlCl2 。
在一實施例中，(f)項之丙炔酸烷基酯係丙炔酸甲酯。
在一實施例中，(f)項之丙烯酸烷基酯係丙烯酸甲酯。
在一實施例中，(g)項之氫化條件包含PtO2 或Pd/C觸媒。
在一實施例中，(h)項之氧化劑係CrO3 。
在一實施例中，(i)項之氫化條件包含Pd/C觸媒。
在一實施例中，(j)項之還原劑係LiAl(OtBu)3 H。
在一實施例中，當P為-C(O)CH3 時，(k)項之去保護及水解條件包含使化合物12與鹼土金屬氫氧化物、鹼土金屬醇鹽、或二者之混合物反應。在某些態樣中，水解條件包括酸處理以獲得去氧膽酸。在其他態樣中，省略酸處理以獲得對應鹽。
在一實施例中，鹼土金屬醇鹽係LiOH。
在一實施例中，去氧膽酸之鹽可藉由與鹼土金屬醇鹽或氫氧化物反應來製備。去氧膽酸之鹽包括鈉(Na+ )、鉀(K+ )、及鋰(Li+ )鹽。
在一實施例中，提供選自由以下組成之群之中間體化合物：9α-羥基-5β-雄甾烷-3,17-二酮(2 )；5β-雄-9(11)-烯-3,17-二酮(3 )；(Z)-3α-羥基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(6 )；(Z)-3α-乙醯氧基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(7a )；(E)-3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11)、16、22-三烯-24-酸甲酯(8a )；3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11)、16-二烯-24-酸甲酯(8b )；3α-羥基-5β-膽-9(11)-烯-12-酮-24-酸甲酯(10a )；及及3α-乙醯氧基-5β-膽烷-12-酮-24-酸甲酯(11a )。
醫藥組合物及投與模式
組合物可由所揭示化合物及至少一種醫藥上可接受之賦形劑組成。可接受之賦形劑係無毒性、有助於投與、且對所揭示化合物之治療益處無不良影響。此賦形劑可為任一固體、液體、半固體或(在氣 溶膠組合物情況下)氣體賦形劑，其通常可由熟習此項技術者獲得。
固體醫藥賦形劑包括澱粉、纖維素、滑石粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、水稻、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、氯化鈉、乾燥脫脂乳及諸如此類。液體及半固體劑賦形劑可係選自甘油、丙二醇、水、乙醇及各種油，包括源於石油、植物或合成油之彼等，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。較佳液體載劑(尤其用於可注射溶液者)包括水、鹽水、水性右旋糖、及二醇。
一般而言，較佳實施例之化合物可藉由投與具有類似效用之藥劑之任一被接受模式以治療有效量來投與。較佳實施例之化合物(即活性成份)之實際量可取決於諸如以下等多種因素：欲治療疾病之嚴重程度、個體之年齡及相對健康狀況、所用化合物之效能、投與途徑及形式、及其他因素。藥物可每日投與一次以上，較佳每日投與一次或兩次。所有該等因素皆為會診醫師所熟知。
調配物中化合物之量可在熟習此項技術者所用整個範圍內變化。可製備本文所述各態樣中之本發明組合物，其中以每份水相體積中之重量份數計或以假定水密度(即重量與體積之間之比為1：1)之w/w計，去氧膽酸部分之範圍為約0.5%-10%。在另一態樣中，本發明實施例係關於濃度最高為稀釋劑之飽和點之當前所述醫藥組合物。可根據諸如濃度及pH等條件來選擇觸變黏度。參見(例如)Mukhopadhyay,S.及U.Maitra,Current Science 87：1666-1683(2004)，第1680頁。
在某些實施例中，投與步驟涉及經由經皮貼劑、幫浦、或皮下儲存來遞送本發明組合物。在某些實施例中，投與步驟涉及以局部或皮下方式遞送本發明組合物。在具體實施例中，投與步驟涉及局部(例如皮下或真皮下)投與至該個體之眼下、頦下、臂下、臀部、小腿、背部、大腿、或腹部區域。可藉由皮下或經皮注射來達成投與。
合成方案
下文提供完成膽汁酸醫藥組合物之化學合成之方法及可用中間體之其他實例。
該等以下闡述及實例提供自天然產生DCA之哺乳動物或微生物提取此化合物之替代方案。合成途徑1-6意欲用於本發明中以合成去氧膽酸(DCA)。合成途徑1B及實例1-11展示自氫化可的松合成DCA。
1.始於腎上腺雄酮經由9(11)-烯或11,12-烯之合成途徑#1A
方案1A(下文)之可的松(化合物1.1)可廣泛用作完全合成材料。可使用氯鉻酸吡啶(PCC)使其有效斷裂以形成C17 酮化合物。此生成腎上腺雄酮(化合物1.2)之斷裂亦可使用HIO4 或鉍酸鈉(NaBiO3 )來達成。將化合物1.2轉化為化合物1.3之反應係已知化學過程。化合物1.3向化合物1.4之轉化涉及單縮酮化。之後之步驟係3-酮-4-烯再生，使4,5-烯選擇性還原(H2 /Pt/DMF)以產生C5 β-構型，且使C3 羰基選擇性再生為期望3α-構型以產生化合物1.5。在化合物1.5向化合物1.6轉化中添加保護基團且隨後將產物還原，此產生C11 β-醇(同軸構型)，即化合物1.7，其適合發生區域選擇性消除反應以生成關鍵的9(11)-烯(即化合物1.7轉化為化合物1.8)。
合成方案在此處分支，其中化合物1.7可用作向化合物1.8或化合物1.9轉化之起始材料。由於C11 羥基與C9 氫原子之間之反式雙軸關係，用於將化合物1.7轉化為化合物1.8之消除反應具有區域選擇性。產生化合物1.9之異構C11 -C12 烯烴之替代消除模式亦具有區域選擇性，其涉及順式熱消除(即化合物1.7向化合物1.9轉化)。
化合物1.8之烯丙位氧化(經由用CrO3 及3,5二甲基吡唑處理)產生含烯酮化合物1.10。化合物1.9自類固醇之α-位向發生過酸氧化以產生C11-12 環氧化物化合物1.11(參見上述方案1A)。該等化學轉化產生具有C12 羥基官能度之兩個關鍵前體，即化合物1.10及化合物2.1(方案1A及 2)。
熟習此項技術者應理解，上述可的松途徑可經改變改為以氫化可的松起始，氫化可的松具有相同碳骨架及相同的氧原子相對佈局，且氫化可的松與可的松之差別僅在於具有碳原子之C-11氧之氧化狀態不同。氫化可的松係在市場上購得且此化合物之各種合成係已知的(Szczebara等人，Nature Biotechnology 21：143-149(Feb.2003))，其包括總化學合成(Woodward R.B.等人，J.Am.Chem.Soc. 74：4223(1952))。酮1.13係經由α,β-不飽和雙鍵之氫解自氫化可的松1.12開始合成(方案1B)，之後使用硼氫化鈉實施整體酮還原以使得可使用NaIO4 使1,2-二醇斷裂，由此在類固醇環系統之D環上形成C17 酮。之後用氯鉻酸吡啶(PCC)氧化來產生1.13。用K-selectride® 處理1.13，之後用乙酸酐/吡啶實施乙醯化以獲得受保護醇1.15。之後用魏悌希試劑烯化1.15來提供烯烴1.16，然後用丙炔酸甲酯及乙基二氯化鋁處理1.16以形成二烯1.17。在對兩個雙鍵實施氫化後，還原酮1.18，且在用存於吡啶中之SOCl2 處理後消除所得醇中間體以獲得烯烴1.19。用CrO3 對烯烴1.19實施烯丙位氧化且在氫化條件下還原雙鍵以獲得酮1.21。去除乙酸酯保護基團且氧化所得醇以獲得二酮1.22。用LiAlH(O- t Bu)3 還原1.22且水解甲酯以獲得DCA。
化合物1.10及2.1之進一步轉化展示於方案2中。首先，修飾化合物1.10以使其含有與DCA中相同之經適當官能化之C環系統(方案2)。立體選擇性還原C12 羰基以產生化合物2.1且對存於化合物2.1中之9(11)雙鍵實施催化氫化而獲得化合物2.2。
方案3展示將含環氧化物之化合物1.11轉化為方案2之類似C12 α-羥基類固醇化合物2.2。
如上所述在該兩種途徑中形成共同中間體化合物2.2。
合成DCA之下一步驟係修飾存於化合物2.2中之D環以使該化合物含有DCA之羧基側鏈經取代之D環(方案4及方案5)。
首先水解化合物2.2之C17 縮酮及C3 甲矽烷醚。然後實施魏悌希反應以產生化合物4.2。經由烯反應實施化合物4.2向化合物5.1之轉化。之後實施化合物5.1之催化還原及酯之水解來產生DCA(方案5)。
2.始於可的松經由腎上腺雄酮之第2合成途徑(異類固醇(3,5-環甾醇)途徑)
腎上腺雄酮(化合物1.2，方案6)在C17 之選擇性縮酮化、硼氫化物還原、甲磺醯化、及緩衝水解產生含有化合物6.1之異類固醇(3,5-環甾醇)。化合物6.1經歷9(11)-烯形成(化合物6.1轉化為化合物6.2，方案6)及烯丙位氧化(化合物6.2轉化為化合物6.3，方案6)，之後實施羰基還原以產生化合物6.4。異甾醇之水解及氫化產生化合物6.5，可藉由 上文第1合成途徑中所示合成方法將其轉化為DCA。
3.始於番麻皂素之第3合成途徑
番麻皂素(化合物7.1，方案7)係在墨西哥山藥(Mexican yam)及龍舌蘭屬(Agave)物種中大量發現之植物甾醇。番麻皂素作為DCA合成起始材料之主要優勢在於，其具有存於DCA中之C12 氧官能團。
始於番麻皂素之合成途徑中之第一步驟係使番麻皂素(化合物7.1) 中之C12 羰基立體選擇性還原為所需C12 -α構型(化合物7.1轉化為化合物7.2)。然後使3-β-醇、5α-AB環系統轉化為3α-醇、5β-AB環系統(化合物7.1轉化為化合物7.2，轉化為化合物7.3)(方案7)。在化合物7.2轉化為化合物7.3後實施熟知Marker降解反應(Marker,R.E.、Rohrmann,E.，Sterols.LXIX.Oxidation Products of Sarsasapogenin.Sarsasapogenoic Acid and Related Substances,J.Am.Chem.Soc., 61(8)：第2072-2077頁(1939))以產生化合物7.4。經由方案4及5中所示方法將D環側鏈安裝至化合物8.2中(方案8)。化合物8.2中之所需C17 酮係藉由臭氧分解化合物8.1之乙酸烯醇酯來形成(方案8)。然後以與方案5中類似之方式使用烯化及烯順序反應自8.2製備DCA。始於番麻皂素之替代途徑展示於方案9及10中。
4.始於皂苷配基之第4合成途徑
皂苷配基係自與皂苷之C3 羥基連接之糖及二糖之水解獲得(即類固醇糖苷)。該等皂苷配基係廣泛存在之植物產物。在自然界中皂苷係以下文所示之螺酮縮醇結構存在。化合物10.3亦可自劍麻皂素、薯蕷皂苷配基、克洛皂苷元、異菝葜皂苷元及番麻皂素(化合物7.1)形成。吾等確信DCA可自每種該等化合物來合成，即劍麻皂素、薯蕷皂苷配基、克洛皂苷元、異菝葜皂苷元及番麻皂素(化合物7.1)。(Y.Mazur、N.Danieli及Franz Sondheimer，J.Am.Chem.Soc.； 82,5809(1960))。
既然可自番麻皂素合成DCA，則可確定任一上述皂苷配基皆同樣可用作DCA合成之起始材料。
5.始於豆甾醇之第5合成途徑
豆甾醇(化合物11.1)係可自多種途徑獲得之植物甾醇。作為DCA合成之起始材料，其優勢在於其含有官能化AB環系統及易於斷裂之側鏈部分。其缺點在於其C環中缺乏DCA合成所需關鍵官能度。
在此合成途徑中，藉由異類固醇形成來保護豆甾醇(化合物11.1)之AB環，之後實施臭氧分解以形成安裝於C17 之側鏈且將其還原為呈羧基掩蔽形式之C24 -醇(方案11)。隨後之步驟在C12 生成烯丙型位置(方案12)。B環二烯形成及乙酸汞氧化係已知過程且對B環系統實施催化還原以產生與上述先前途徑共有之中間體。然而，與其他途徑相反，側鏈已經存在。實施烯丙位氧化(化合物12.4轉化為化合物1.20)及立體選擇性還原(化合物1.20轉化為化合物1.21)之後實施先前所述之步驟以產生可轉化為DCA之產物。
豆甾醇途徑之變化形式使用B環二烯之Diels-Alder保護。此係有利的，因為其可分離9(11)雙鍵以在烯丙位氧化步驟期間防止可能的干擾(方案13)。
6.始於麥角固醇之第6合成途徑
麥角固醇(化合物14.1)係易於獲得之起始材料且可用於藉由本申請案中所述程序之調整形式來製備DCA。烯丙位氧化提供產生C12 氧官能度之便捷途徑(方案14)。此途徑之優勢在於始於環B二烯。其與豆甾醇途徑彙聚於一點。
較佳實施例之化合物可使用下列一般方法及程序自易於購得之起始材料來製備。應瞭解，其中給出典型或較佳製程條件(即反應溫度、時間、反應物之莫耳比、溶劑、壓力等)，但除非另有說明，否則亦可使用其他製程條件。最佳反應條件可隨所用特定反應物或溶劑而變化，但該等條件可由熟習此項技術者藉由常規優化程序來確定。
此外，如熟習此項技術者所瞭解，可能需要習用保護基團來防止某些官能團發生不期望反應。各種官能團之適宜保護基團以及保護及去保護特定官能團之適宜條件為業內所熟知。舉例而言，許多保護基團闡述於T.W.Greene及G.M.Wuts,Protecting Groups in Organic Synthesis ，第3版，Wiley,New York,1999及其中所引用參考文獻中。
用於本文所述反應之起始材料及試劑通常係已知化合物或可藉由已知程序或其經明顯修改之形式來製備。舉例而言，許多起始材料及試劑係自諸如Aldrich Chemical公司(Milwaukee,Wisconsin,USA)、Bachem(Torrance,California,USA)、Emka-Chemce或Sigma(St.Louis,Missouri,USA)等供應商購得。其他可藉由闡述於諸如下列等 標準參考文本中之程序或其經明顯修改之形式來製備：Fieser及Fieser'sReagents for Organic Synthesis ，第1-15卷(John Wiley and Sons,1991)、Rodd'sChemistry of Carbon Compound ，第1-5卷及增刊(Elsevier Science Publishers,1989)、Organic Reactions ，第1-40卷(John Wiley and Sons,1991)、March'sAdvanced Organic Chemistry ,(John Wiley and Sons，第4版)，及Larock'sComprehensive Organic Transformations (VCH Publishers公司，1989)。
實例
若適宜，可使用諸如以下等習用技術分離及純化較佳實施例之各種起始材料、中間體及化合物：沈澱、過濾、結晶、蒸發、蒸餾、及層析。可使用諸如以下等習用方法對該等化合物實施表徵：藉助熔點、質譜、核磁共振、及各種其他光譜分析。
在第1合成途徑之方案1B中實施產物合成之步驟之實例性實施例更詳細地闡述於下文中。表3闡述在以下實例及整個說明書中用於在實例性反應方案及合成途徑中表現各種化合物/部分/裝置/程序/特性之縮寫。
一般方法： 氧敏感及濕度敏感材料之處理係在氬氣氛下用經火焰乾燥之雙頸燒瓶來實施。使用SE-Make矽膠(60-120篩目)、Spectrochem矽膠(230-400篩目)或90中性氧化鋁來實施柱層析。(SD-Fine Chem.公司，India)。在Merck Kieselgel 60 F254 (0.25mm)板(Merck & Co.,Whitehouse Station,NJ)上實施分析性薄層層析(TLC)。 藉由UV光(254nm)燈或藉由用存於乙醇中之硫酸(5%)及對茴香醛(3%)之溶液碳化來檢測點之影像。
裝置： 本文所述反應方案及合成途徑之化合物及產物之分析可在下文所述裝置及設備上實施。
核磁共振(NMR)
在Varian Mercury-Gemini 200(1 H NMR,200MHz；13 C NMR,50MHz)或Varian Mercury-Inova 500(1 H NMR,500MHz；13 C NMR,125MHz)(Varian公司，Palo Alto,CA)光譜儀上以溶劑共振作為內部標準(1 H NMR，在7.26ppm處之CHCl3 或在2.5ppm處之DMSO及在3.33ppm處之DMSO-H2 O；13 C NMR，在77.0ppm處之CDCl3 或在39.5ppm處之DMSO)記錄質子及碳核磁共振光譜(1 H NMR及13 C NMR)。1 H NMR數據報告如下：化學位移(δ,ppm)，多重態(s=單峰，d=雙峰，t=三峰，q=四重峰，br=寬峰，m=多重峰)，偶聯常數(Hz)，及積分。
紅外光譜
紅外光譜(FT-IR)係在JASCO-460+ 模型(Jasco公司，Easton,MD)上運行。質譜係以Perkin Elmer,API-2000光譜儀(Perkin Elmer公司，Waltham,MA)使用ES+ 模式來獲得。
熔點
熔點係使用LAB-INDIA熔點量測裝置(Labindia Instruments Pvt.公司，India)來測定且未經校正。
高壓液相層析
HPLC層析譜係使用SHIMADZU-2010模型以PDA檢測器(Shimadza公司，Japan)來記錄。
光學活性
比旋光度([α]D )係使用JASCO-1020(Jasco公司，Easton,MD)在589nm處來測定且未經校正。
化學物質： 除非另外說明，否則使用未經純化之市售試劑。自二苯甲酮羰基鈉蒸餾二乙醚及THF。無水DMF、DCM、戊烷及己烷係藉由蒸餾自CaH2 獲得。
實例1 製備雄甾烷-3,11,17-三酮(1.13)
將10% Pd/C(2.5g,5wt%)添加至存於DMF(250mL)中之氫化可的松(化合物1.12)(50.0g,138.12mmol)溶液中。在帕爾(Parr)裝置(50psi)中將所得漿液氫化12h。如TLC所顯示，在起始材料完全消失後，經由小型矽藻土濾塞過濾粗反應混合物且在真空下去除溶劑。獲得呈無色固體形式之粗產物(48.0g)。
將NaBH4 (2.1g,55.3mmol)添加至存於EtOH(500mL)及CH2 Cl2 (500mL)中之上述粗產物(48.0g,131.86mmol)之溶液中。1小時後，添加丙酮(50mL)及水(150mL)，之後添加NaIO4 (70.5g,329.6mmol)。在室溫下將混合物攪拌過夜。
添加蒸餾水(500mL)且用乙酸乙酯(3×250mL)萃取混合物。經由矽膠濾塞清洗乙酸乙酯層且蒸發溶劑以獲得38g呈無色固體形式之粗產物。不經純化即將粗產物進一步純化。
在30分鐘內以3等份將PCC(40.4g,187.5mmol)添加至存於CH2 Cl2 (400mL)中之上述粗產物之溶液中。在室溫下將所得反應混合物攪拌約3-4h。如TLC所監測，在反應完成後，依次經由矽藻土及矽膠墊過濾粗反應混合物且藉由柱層析[59(W)×700(L)mm,60-120篩目二氧化矽，150g]來純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(3：10)洗脫[每個溶離份50mL，10mL/min洗脫，藉由TLC用對茴香醛碳化來監測；在EtOAc/己烷(1：1)中化合物1.13之Rf =0.37且化合物1.12之Rf =0.05]以提供呈無色固體形式之非對映異構化合物1.13(33.0g，產率79%)。
藉由製備型HPLC純化所獲得粗材料，其中使用Phenomenex Lunov C18管柱(250×30.0mm,10μ)且用CH3 CN：H2 O(12：13)以25mL/min之流速及每個溶離份15mL進行等濃度洗脫。製備型HPLC僅用於純化，並不用於分析。表4闡述產物所測得特性。
實例2 3β-羥基-雄甾烷-11,17-二酮(1.14)
在15分鐘內於惰性氣氛及-78℃下將K-selectride®(98.39mL，98.01mmol，存於THF中之1M溶液)添加至存於THF(330mL)中之化合物1.13(33.0g,109.27mmol)之溶液中且在-78℃下將其攪拌約3-4h。用NaOH水溶液(2M,70mL)使反應混合物驟冷。用乙酸乙酯(500mL)稀釋粗反應混合物且用水(3×75mL)、飽和鹽水溶液(100mL)洗滌有機層並用MgSO4 (75g)乾燥。在真空下去除溶劑以獲得33g粗材料。不經純化即對粗產物實施乙醯化。
粗材料之純化
藉由柱層析[29(W)×600(L)mm,230-400篩目二氧化矽，200g]純 化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1：4)洗脫[每個溶離份25mL，5mL/min洗脫，藉由對茴香醛之碳化反應監測TLC；在EtOAc/己烷(1：1)中化合物1.14之Rf =0.3且化合物1.13之Rf =0.37]以獲得化合物1.14。表5闡述產物所測得特性。
實例3 3β-羥基雄甾烷-11,17-二酮乙酸酯(1.15)
在0℃及惰性氣氛下將乙酸酐(16.6g,162.8mmol)添加至存於吡啶(150mL)中之化合物1.14(33.0g,108.55mmol)之溶液中。在環境溫度下將所得反應混合物攪拌過夜。如TLC所顯示，在反應完成後，在真空下去除吡啶及殘餘乙酸酐。用乙酸乙酯(500mL)稀釋粗殘餘物且用水(3×150mL)、飽和鹽水溶液(100mL)洗滌並用MgSO4 (75g)乾燥。在真空下蒸發溶劑且藉由柱層析[59(W)×800(L)mm，60-120篩目二氧化矽，150g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1：10)洗脫[每個溶離份25mL，10mL/min洗脫，藉由對茴香醛之碳化反應監測TLC；在EtOAc/己烷(3：7)中化合物1.15之Rf =0.38且化合物1.14之Rf =0.1]以獲得呈無色固體形式之化合物1.15(19.0g，產率66.4%)。表6闡述產物所測得特性。
實例4 (Z)-3β-羥基-5β-孕-17(20)-烯-11-酮乙酸酯(1.16)
在1h內於惰性氣氛及-5℃下將第三丁醇鉀(159.28mL，159.2mmol，存於THF中之1M溶液)逐滴添加至存於THF(150mL)中之乙基三苯基溴化膦(61.16g,164.8mmol)之溶液中。使所得暗粉色反應混合物升溫至10-15℃且在相同溫度下將其另外攪拌1h。在-5℃下將存於THF(50mL)中之化合物55(19.0g,54.9mmol)之溶液緩慢引入上述魏悌希內鎓鹽懸浮液中。將溶液另外攪拌10-20分鐘且使反應混合物緩慢升溫至環境溫度。繼續攪拌約3-4h。如TLC所顯示，在起始材料完全消失後，用飽和NH4 Cl水溶液(75mL)使反應混合物驟冷。用EtOAc(2×150mL)萃取水層且用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌經合併有機萃取物並用MgSO4 (75g)乾燥。在真空下去除溶劑且藉由柱層析[49(W)×600(L)mm,60-120篩目二氧化矽，300g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1：20)洗脫[每個溶離份25mL，10mL/min洗脫，藉由對茴香醛之碳化反應監測TLC；在EtOAc/己烷(1：6)中化合物1.16之 Rf =0.54且化合物1.15之Rf =0.06]以獲得呈無色黏稠液體形式之化合物1.16(15.5g，產率78.8%)，在1-2天後於0℃下其緩慢凝固。表7闡述產物所測得特性。
實例5 (E )-3β-羥基-5β-膽-16(17),22(23)-二烯-24-酸酯乙酸甲酯(1.17)
在0℃下將丙炔酸甲酯(9.68g,114.95mmol)添加至存於CH2 Cl2 (220mL)中之化合物1.16(16.5g,46mmol)之溶液中。在惰性氣氛下使反應混合物升溫至環境溫度且將其攪拌1h。在0℃下將乙基二氯化鋁(17.5g,137.8mmol)逐滴引入上述混合物中且使所得反應物質再次升溫至環境溫度並將其攪拌過夜。如TLC所顯示，在反應完成後，用冰水混合物(100mL)使粗反應混合物驟冷且用EtOAc(3×150mL)萃取水層。用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌經合併有機層且用MgSO4 (50g)乾燥。在真空下去除溶劑且藉由柱層析[49(W)×600(L)mm,60-120篩目二氧化矽，300g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1：7)洗脫[每個溶離份15mL，10mL/min洗脫，藉由TLC來監測且藉由UV光(254nm)燈或對茴香醛碳化來檢測；在EtOAc/己烷(1：6)中化合物1.17之 Rf =0.36且化合物1.16之Rf =0.54]以獲得呈無色半固體形式之化合物1.17(16g，產率79%)。表8闡述產物所測得特性。
實例6 3β-羥基-5β-膽烷-11-酮-24-酸酯乙酸甲酯(1.18)
將10% Pd/C(2.9g,20wt%)添加至存於EtOAc(150mL)中之化合物1.17(14.5g,32.8mmol)之溶液中。在帕爾裝置(50psi)中將所得漿液氫化12h。如TLC[在EtOAc/己烷(1：3)中化合物1.18之Rf =0.43且化合物1.17之Rf =0.43；然而僅化合物1.17具有來自共軛酯發色團之UV活性]，在起始材料完全消失後，經由小型矽藻土濾塞過濾粗反應混合物且在真空下去除溶劑以獲得呈無色固體形式之化合物1.18(14g，產率95.7%)。表9闡述產物所測得特性。
實例7 3β-羥基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸酯乙酸甲酯(1.19)
在催化量之AcOH(2.0mL)存在下將PtO2 (5.0g,100wt%)添加至存於EtOAc(75mL)中之1.18(5.0g,11.2mmol)之溶液中。在帕爾裝置(70psi)中將所得漿液氫化約14-16h。在反應完成後，經由小型矽藻土濾塞過濾粗混合物且在真空下去除溶劑。不經進一步純化即將粗產物用於消除反應中。
在0℃下將SOCl2 (1.98g,16.78mmol)逐滴引入存於吡啶(100mL)中之上述粗材料之溶液中。使所得反應混合物升溫至環境溫度且攪拌約1h。如TLC所顯示，在反應完成後，在真空下去除吡啶。用乙酸乙酯(100mL)稀釋粗殘餘物且用水(2×50mL)、飽和鹽水溶液(100mL)洗滌並用MgSO4 (40g)乾燥。在真空下蒸發溶劑且藉由柱層析[49(W)×600(L)mm,60-120篩目二氧化矽，120g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1：10)洗脫[每個溶離份10mL，5mL/min洗脫，藉由對茴香醛之碳化反應監測TLC；在EtOAc/己烷(1：6)中化合物1.19之Rf =0.51且化合物1.18之Rf =0.22]以獲得呈無色固體形式之化合物 1.19(4.1g，產率85.4%)。表10闡述產物所測得特性。
實例8 3β-羥基-5β-膽-9(11)-烯-12-酮-24-酸酯乙酸甲酯(1.20)
將CrO3 (8.0g,100wt%,80.0mmol)添加至存於AcOH(150mL)中之化合物1.19(8.0g,18.6mmol)之溶液中。在60℃下將所得反應混合物加熱約24-36h。前體完全消失後，在真空下蒸發乙酸，且使粗材料溶解於二乙醚(400mL)中。用水(2×100mL)、飽和鹽水溶液(100mL)洗滌有機層且用MgSO4 (40g)乾燥。在真空下去除溶劑且藉由柱層析[49(W)×600(L)mm,60-120篩目二氧化矽，120g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1：5)洗脫[每個溶離份10mL，3mL/min洗脫，藉由TLC監測且用UV光(254nm)燈來檢測；在EtOAc/己烷(1：4)中化合物1.20之Rf =0.28且化合物1.19之Rf =0.61]以獲得呈無色固體形式之化合物1.20(5g，產率60.5%)。表11闡述產物所測得特性。
實例9 3β-羥基-5β-膽烷-12-酮-24-酸酯乙酸甲酯(1.21)
將10% Pd/C(30mg,10wt%)添加至存於EtOAc(30mL)中之化合物1.20(300mg,0.675mmol)之溶液中。在帕爾裝置(50psi)中將所得漿液氫化約16h。藉由TLC[在EtOAc/己烷(3：7)中化合物1.21之Rf =0.44且化合物1.20之Rf =0.44；然而僅化合物1.20具有來自其烯酮發色團之UV活性；此外化合物1.20之碳化微弱但化合物1.21之碳化鮮明]顯示，在起始材料完全消失後，經由小型矽藻土濾塞過濾粗反應混合物且在真空下去除溶劑以獲得呈無色固體形式之化合物1.21(270mg，產率90%)。表12闡述產物所測得特性。
實例10 5β-膽-3,12-二酮-24-酸甲酯(1.22)
添加NaOH(73mg,1.8mmol)至存於MeOH(10mL)中之化合物2.1(270mg,0.6mmol)之溶液中。在環境溫度下將所得反應混合物攪拌約2h。如TLC所顯示，在反應完成後，在真空下去除MeOH且用乙酸乙酯(20mL)稀釋粗產物。用飽和鹽水溶液(10mL)洗滌有機層且用MgSO4 (5.0g)乾燥。在真空下去除溶劑，粗材料不經純化即用於酯化反應中。
在0℃下將SOCl2 (0.1mL,1.35mmol)逐滴添加至存於MeOH(10mL)中之上述粗材料之溶液中。在環境溫度下將所得反應混合物攪拌約1h。反應完成後，在真空下去除MeOH。用EtOAc(30mL)稀釋粗反應混合物，且用水(3×10mL)、飽和鹽水溶液(15mL)洗滌有機層且用MgSO4 (5g)乾燥。在真空下蒸發溶劑且不經純化即將粗產物用於氧化反應中。
在約5分鐘內以3等份將PCC(1.0g,4.6mmol)引入存於CH2 Cl2 (25mL)中之所獲得酯之溶液中。在環境溫度下將所獲得反應混合物攪拌 約3-4h。如TLC所顯示，在反應完成後，經由矽藻土墊過濾粗反應混合物。在真空下去除溶劑且藉由柱層析[19(W)×400(L)mm,60-120篩目二氧化矽，45g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1：6)洗脫[每個溶離10mL，5mL/min洗脫，藉由對茴香醛之碳化反應監測TLC；在EtOAc/己烷(2：3)中化合物1.22之Rf =0.57且化合物1.21之Rf =0.71]，以獲得呈無色固體形式之化合物1.22(170mg，產率70.8%)。表13闡述產物所測得之特性。
實例11 去氧膽酸甲酯(1.22-酯)
在惰性氣氛及環境溫度下將LiAlH(O-t Bu)(332mg,1.3mmol,)逐滴引入存於THF(10mL)中之化合物1.22(150mg,0.37mmol)之溶液中。攪拌約4-5小時後，用HCL(2mL,1N)水溶液使反應混合物驟冷且用EtOAc(30mL)稀釋粗混合物，將其用水(15mL)、飽和鹽水溶液(10mL)洗滌並用MgSO4 (3g)乾燥。在真空下去除溶劑，且藉由柱層析[29(W)×500(L)mm,230-400篩目二氧化矽，50g]純化粗物質，其中用MeOH/CH2 Cl2 (1：20)洗脫[每個溶離份5mL，3mL/min洗脫，藉由對茴香醛之碳化反應監測TLC；在MeOH/CH2 Cl2 (1：9)中化合物1.22- 酯之Rf =0.42且化合物1.22之Rf =0.85]以獲得呈無色固體形式之去氧膽酸甲酯(化合物1.22-酯)(110mg，產率72.8%)。表14闡述產物所測得特性。
實例11 去氧膽酸
將存於H2 O(2.0mL)中之LiOH(23mg,0.55mmol)溶液添加至存於THF(4mL)中之1.22-酯(110mg,0.27mmol)之溶液中。在環境溫度下將所得反應混合物攪拌約2-3h。藉由TLC[在MeOH/CH2 Cl2 (1：9)中化合物DCA之Rf =0.35且化合物1.22-酯之Rf =0.42]顯示，在酯消失後，用乙酸乙酯稀釋粗反應混合物(10mL)且將其與飽和鹽水溶液一起研磨以獲得有機層之澄清分離。用飽和NH4 Cl溶液(10mL)洗滌有機層且用MgSO4 (3.0g)乾燥。在真空下去除溶劑且藉由與甲苯(3×5mL)共沸來去除任何微量之水以獲得呈無色固體形式之去氧膽酸(DCA)(100mg，產率94.3%)。表15闡述產物所測得特性。
實例1至11中所述實例性製程之產物之產率闡述於表16中。
實例12 9α-羥基-5β-雄甾烷-3,17-二酮(2)
向存於DMF(150mL)中之9a-羥基雄甾-4-烯-3,17-二酮1(30.0g,99.3mol)之溶液中添加10% Pd/C(2.1g)且在帕爾裝置(60psi)中將所得漿液氫化12h。如TLC所顯示，在起始材料完全消失後，經由小型矽藻土®墊過濾粗反應混合物且在真空下去除溶劑以提供無色固體(30.0g)。在0℃下使此固體與丙酮(90mL.)合併且將所得漿液攪拌1h。然後將其過濾，用冷(0℃)丙酮(30mL)洗滌，且在相同過濾漏斗中於真空及室溫下乾燥以獲得化合物2(26.0g,86%)。表17闡述產物所測得特性。
實例13 5β-雄-9(11)-烯-3,17-二酮(3)
在15分鐘內於惰性氣氛及10℃下向存於DCM(520mL)中之化合物2(26.0g,85.4mmol)之溶液中添加濃硫酸(7.53g,76.8mmol)。使溫度升高至25℃且將所得溶液攪拌2h。在此時如TLC所顯示，無任何起始材料殘餘。藉由添加10% NaHCO3 水溶液(200mL)終止反應。分離各層且用DCM(2×100毫升)將水層萃取兩次。合併有機層且依次用水(100mL)及飽和鹽水溶液(100mL)洗滌。然後用Na2 SO4 (75g)乾燥有機相並過濾。在真空下蒸發濾液以提供呈灰白色固體形式之化合物3(23.0g,94%)。不經進一步純化即將此產物直接用於下一步驟中。表18闡述產物所測得特性。
實例14 3α-羥基-5β-雄-9(11)-烯-17-酮(4)
在惰性氣氛下將三第三丁氧基氫化鋁鋰(1.0M,84.4mL,84.4mmol)之THF溶液添加至存於THF(230mL)中之化合物3(23.0g,80.4mmol)之冷(-40℃)溶液中。將所得反應混合物攪拌2h。如TLC所顯示，在此時確定反應完成，且藉由添加1N HCL(200mL)及乙酸乙酯(230mL)使反應混合物驟冷。分離所得二相混合物且用乙酸乙酯(2×100mL)將水層萃取兩次。合併有機相且依次用水(150mL)及飽和鹽水溶液(100mL)洗滌。然後用Na2 SO4 (75g)乾燥有機相並過濾。在真空下蒸發濾液以提供呈灰白色固體形式之化合物4(23.0g)。不經進一步純化即將上述粗產物直接用於下一步驟中。表19闡述產物所測得特性。
實例15 (Z)-3α-羥基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(6)
在1h內於25℃下將存於THF中之第三丁醇鉀溶液(1M,230mL,231mmol)逐滴添加至存於THF(150mL)中之乙基三苯基溴化膦(88.7g,239mmol)之懸浮液中。在25℃下將所得暗紅色混合物另外攪拌1h。在25℃下將存於THF(230mL)中之化合物4(23.0g,79.7mmol)之溶液緩慢添加至紅色混合物中。將所得混合物攪拌3-4h，在此時藉由TLC確定反應已完成。藉由添加飽和NH4 Cl水溶液(75mL)來終止反應。分離各相且用EtOAc(3×150mL)將水層萃取三次。合併有機部分，用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌，用Na2 SO4 (75g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液且藉由柱層析[49mm(W)×600mm(L),60-120篩目二氧化矽，300g]純化粗固體，其中用乙酸乙酯/己烷(1：9)洗脫。合併含產物部分且將其濃縮，此提供化合物呈白色固體形式之6(19.1g,80.0%)。表20闡述產物所測得特性。
實例16 (Z)-3α-乙醯氧基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(7a)
使化合物6(19.0g,63mmol)溶於CH2 Cl2 (380mL)中。在25℃及氮氣氛下依次添加三乙胺(17.6mL,126.6mmol)、DMAP(0.772g,6mmol)及乙酸酐(8.98mL,94mmol)。在25℃下將所得溶液攪拌2h，在此時藉由TLC確定反應已完成。藉由添加冰水(100mL)來終止反應且分離各相。用DCM(3×150mL)將水層萃取三次。合併有機部分且用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌，用無水Na2 SO4 (50g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液以獲得呈灰白色固體形式之化合物7a(22.0g，產率95%)。表21闡述產物所測得特性。
實例17 (E)-3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11),16,22-三烯-24-酸甲酯(8a)
在0℃及惰性氣氛下將乙基二氯化鋁(104.5mL，192mmol，1.8M存於甲苯中)添加至存於DCM(100mL)中之丙炔酸甲酯(13.58mL,153mmol)溶液中。將所得溶液攪拌15min然後添加化合物7a(22g,64.3mmol)。在0℃下另外攪拌20min後，使溫度升高至25℃且在該溫度下另外保持18h。在此時藉由TLC確定反應已完成，且將混合物傾倒入冷(0℃)水(200mL)中。分離各相並用DCM(150mL)萃取水層。合併有機層且依次用水(200mL)及飽和鹽水溶液(100mL)洗滌。然後用無水Na2 SO4 (40g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液且藉由在甲醇(280mL)中漿化來純化所得固體以獲得呈白色固體形式之化合物8a(17.5g 68%)。表22闡述產物所測得特性。
實例18 3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯(9a)
向存於EtOAc(350mL)中之化合物8a(17.5g,41mmol)之溶液中添加PtO2 (4.37g)，其在帕爾裝置(70psi)中將所得漿液氫化14-16h。在此時藉由TLC確定反應已完成。經由小型矽藻土濾塞®過濾混合物且在真空下去除溶劑，此可獲得呈白色固體形式之化合物9a(17.0g,96.0%)。不經進一步純化即將上述產物用於下一步驟中。表23闡述產物所測得特性。
實例19 3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11),16-二烯-24-酸甲酯(8b)
在0℃及惰性氣氛下將乙基二氯化鋁(14.2mL，25mmol，1.8M存於甲苯中)添加至存於DCM(60mL)中之丙烯酸甲酯(1.89mL,20mmol)溶液中。將所得溶液攪拌15min然後添加化合物7a(3g,8.7mmol)。在0℃下另外攪拌20min後，使溫度升高至25℃且在該溫度下另外保持18h。在此時藉由TLC確定反應已完成，然後將混合物傾倒入冷(0℃)水(60mL)中。分離各相並用DCM(60mL)萃取水層。合併有機層且依次用水(50mL)及飽和鹽水溶液(100mL)洗滌。然後用無水Na2 SO4 (5g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液，此提供化合物8b (2.6g,70%)。表24闡述產物所測得特性。
實例20 3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯(9a)
向存於EtOAc(60mL)中之化合物8a(3g,7mmol)之溶液中添加10% Pd/C(300mg,10% wt/wt)，且在帕爾裝置(70psi)中將所得漿液氫化14-16h。在此時藉由TLC(存於己烷中之10%乙酸乙酯)來確定反應已完成。經由小型矽藻土濾塞®過濾混合物且在真空下去除溶劑，此可獲得呈白色固體形式之化合物9a(2.6g,86%)。表25闡述產物所測得特性。
實例21 3α-羥基-5β-膽-9(11)-烯-12-酮-24-酸甲酯(10a)
將CrO3 (17.0g,170mmol)添加至存於AcOH(270mL)中之化合物9a(17g,39.5mmol)之溶液中。在50℃下將所得混合物加熱24-36h。藉由TLC所顯示，在起始材料完全消失後，在真空下蒸發溶劑且將粗材料溶於乙酸乙酯(400mL)及水(200mL)中。分離兩相且用水(2×100mL)將有機層洗滌兩次，然後用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌一次。然後將有機相用無水Na2 SO4 (40g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液且藉由柱層析[49mm(W)×600mm(L),60-120篩目二氧化矽，120g]純化所得固體，其中用乙酸乙酯/己烷(1：5)洗脫[每個溶離份10mL，3mL/min洗脫，藉由TLC監測且用UV光(254nm)燈來檢測]。合併含產物部分且在真空下將其濃縮以獲得呈白色固體形式之化合物10a (8.8g，產率50%)。表26闡述產物所測得特性。
實例22 3α-乙醯氧基-5β-膽烷-12-酮-24-酸甲酯(11a)
將10% Pd/C(900mg)添加至存於EtOAc(150mL)中之化合物10a(2.0g,4.5mmol)之溶液中且於50℃下在帕爾裝置(50psi)內將所得漿液氫化16h。在此時藉由TLC確定反應已完成。經由小型矽藻土濾塞®過濾混合物且在真空下去除溶劑，此可提供呈白色固體形式之化合物11a(1.6g，產率80%)。表27闡述產物所測得特性。
實例23 3α-乙醯氧基-12α-羥基-5β-膽烷-24-酸甲酯(12a)
在環境溫度下將三第三丁氧基氫化鋁鋰(1M,22.4mL,22.4mmol)之THF溶液逐滴添加至存於THF(25mL)中之化合物11a(2.5g,5.6mmol)之溶液中。另外攪拌4-5h後，藉由TLC來確定反應已完成。藉由添加HCL(1M,10mL)水溶液來終止反應且用EtOAc(30mL)稀釋混合物。分離各相且依次用水(15mL)及飽和鹽水溶液(10mL)洗滌有機相。然後將有機相用無水Na2 SO4 (3g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液且藉由柱層析[29mm(W)×500mm(L)，60-120篩目二氧化矽，50g]純化所得固體，其中用EtOAc/己烷(2：8)洗脫[每個溶離份5mL，藉由對茴香醛之碳化反應監測TLC]。合併含產物部分且將其在真空下濃縮以獲得呈白色固體形式之化合物12a(2.3g,91%)。表28闡述產物所測得特性。
實例24 去氧膽酸(DCA)
將存於H2 O(2.0mL)中之LiOH(187mg,4.4mmol)之溶液添加至存於THF(8mL)及MeOH(8mL)中之化合物12a(500mg,1.11mmol)之溶液中。在50℃下將所得混合物攪拌3-4h。藉由TLC所顯示，在起始材料完全消失後，在真空下濃縮反應混合物。合併水(10mL)與3N HCL(1mL)之混合物且將其冷卻至0℃，然後將其添加至粗產物中。在0℃下攪拌1h後，過濾所沈澱固體然後用水(10mL)及己烷(20mL)洗滌。在真空及室溫下乾燥獲得呈白色固體形式之去氧膽酸(DCA，400mg，產率91%)。表29闡述產物所測得特性。
實例25
將原代人脂細胞與不同濃度之使用9-HAD作為起始材料來合成之合成去氧膽酸鈉或如下所述自Sigma獲得之牛源去氧膽酸鈉一起培養。
材料
脂細胞(Zen-Bio cat號SA-1096)
96孔板(US Scientific cat號cellstar第655180號)
無血清RPMI培養基(Mediatech cat號17-105-CV)
去氧膽酸鈉(DC)(Sigma cat號D6750)
合成去氧甘膽酸鈉(Kythera)
PBS(1 x)
MTS分析套組(Promega cat號G3580)
脂細胞到達分化階段且以13,000細胞/孔之密度存於96孔板中。獲得兩個板且用相同樣品處理每個板。在37℃下將細胞與5% CO2 一起培養24小時。藉由將20mg膽汁酸溶於2mL培養基(無血清)中來製備每種膽汁酸(合成及非合成DCA)之1%儲備溶液。使用1%儲備溶液藉由稀釋來製備11種溶液：0.005%、0.01%、0.015%、0.02%、0.025%、0.03%、0.035%、0.04%、0.05%、0.06%、及0.1%、以及0%(僅培養基)。在室溫下用150μL 1 x PBS(磷酸緩衝鹽溶液)將細胞洗滌2 x。藉由將板上側翻轉且將液體倒入容器中而自96孔板之孔中去除培養基然後去除PBS。在最後一次PBS洗滌後，每孔添加80μL樣品。將每種濃度之特定膽汁酸添加至8個孔中且在37℃下與5% CO2 一起培養1小時。然後將板自培養器中移出且倒出溶液。將100μL MTS試劑(3-(4,5-二乙基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑，內鹽)之經稀釋溶液(存於1mL RPMI中之40μL)直接添加至各孔中。在37℃下將板與5% CO2 一起培養直至對照(無膽汁酸)孔變色 為橙-棕色，然後將其裝載至分析96孔板之分光光度計上。樣品係在490nm波長設定下運行。
使用來自Promega之比色分析(MTS)套組來評價細胞生存力。結果展示經合成NaDC或Sigma-NaDC處理後細胞存活率之劑量依賴性降低(參見圖2 )。在此實驗中兩種分子皆表現類似的溶胞行為，此表明合成NaDC及牛源Sigma-NaDC在其殺滅脂肪細胞之能力上具有相同功能。
上述實驗及實例並非意欲限制本發明。應理解根據本發明原則可作出許多修改及變化。

Claims (16)

  1. 一種製備去氧膽酸(DCA)或其醫藥上可接受之鹽之方法， 該方法包含(a)在氫化條件下使9a-羥基雄甾-4-烯-3,17-二酮1 與H2 反應以形成化合物2 (b)使化合物2 與酸反應以形成化合物3 (c)使化合物3 與還原劑反應以形成呈4 與5 之混合物形式之化合物4 (d)在烯烴形成條件下使化合物4 與二碳烯化劑反應以形成化 合物6 (e)將化合物6 轉化為式7 化合物，其中P係保護基團 (f)在路易斯酸(Lewis acid)存在下使式7 化合物與其中R係烷基之丙炔酸烷基酯CH2 CH2 C(O)OR或丙烯酸烷基酯CH2 =CHC(O)OR反應以形成式8 化合物，其中P係保護基團，R係烷基，且虛線係單鍵或雙鍵； (g)在氫化條件下使式8 化合物與H2 反應以形成式9 化合物，其中P係保護基團且R係烷基 (h)使式9 化合物與氧化劑反應以形成式10 化合物，其中P係保護基團且R係烷基 (i)在氫化條件下使式10 化合物與H2 反應以形成式11 化合物，其中P係保護基團且R係烷基 (j)使式11 化合物與還原劑反應以形成式12 化合物，其中P係保護基團且R係烷基 (k)使式12 化合物曝露於去保護條件以形成其酯，且視需要曝露於適宜水解條件下以形成去氧膽酸或其醫藥上可接受之鹽，其中該合成DCA係非源自哺乳動物或微生物之合成DCA。
  2. 如請求項1之方法，其中該(a)項之氫化條件包含Pd/C觸媒。
  3. 如請求項1之方法，其中該(b)項之酸係無機酸。
  4. 如請求項3之方法，其中該無機酸係H2 SO4 。
  5. 如請求項1之方法，其中該(c)項之還原劑係LiAl(OtBu)3 H。
  6. 如請求項1之方法，其中該(d)項之二碳烯化劑係Ph3 PCH2 CH3 + Br- 。
  7. 如請求項1之方法，其中該化合物7-12之保護基團P係 C(O)CH3 。
  8. 如請求項1之方法，其中該(f)項之路易斯酸係EtAlCl2 。
  9. 如請求項1之方法，其中該丙炔酸烷基酯或丙烯酸烷基酯係丙炔酸甲酯或丙烯酸甲酯。
  10. 如請求項1之方法，其中該(g)項之氫化條件包含PtO2 觸媒。
  11. 如請求項1之方法，其中該(h)項之氧化劑係CrO3 。
  12. 如請求項1之方法，其中該(i)項之氫化條件包含Pd/C觸媒。
  13. 如請求項1之方法，其中該(j)項之還原劑係LiAl(OtBu)3 H。
  14. 如請求項1之方法，其中當P為-C(O)CH3 時，該(k)項之去保護及水解條件包含使化合物12與鹼土金屬氫氧化物、鹼土金屬醇鹽、或二者之混合物反應。
  15. 如請求項14之方法，其中該鹼土金屬醇鹽係LiOH。
  16. 一種中間體化合物，其係選自由以下組成之群：9α-羥基-5β-雄甾烷-3,17-二酮(2 )；5β-雄-9(11)-烯-3,17-二酮(3 )；(Z)-3α-羥基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(6 )；(Z)-3α-乙醯氧基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(7a )；(E)-3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11),16,22-三烯-24-酸甲酯(8a )；及3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11),16-二烯-24-酸甲酯(8b )。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080318870A1 (en) 2007-06-19 2008-12-25 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Synthetic bile acid compositions and methods
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EP2069383A2 (en) * 2007-06-19 2009-06-17 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Synthetic bile acid composition, method, and preparation
US8242294B2 (en) 2007-06-19 2012-08-14 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Synthetic bile acid compositions and methods
GB2480632A (en) * 2010-05-25 2011-11-30 Kythera Biopharmaceuticals Inc Preparation of 12-keto and 12-alpha-hydroxy steroids
US9127036B2 (en) 2010-08-12 2015-09-08 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Synthetic bile acid compositions and methods
ES2746311T3 (es) * 2011-06-16 2020-03-05 Allergan Sales Llc Composiciones que contienen ácido desoxicólico y agua desionizada al 10 % en etanol, dirigidas a la purificación del ácido desoxicólico
US20130102580A1 (en) * 2011-09-22 2013-04-25 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods related to deoxycholic acid and its polymorphs
US10081592B2 (en) 2012-03-23 2018-09-25 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Complex and structurally diverse compounds
CN103059087B (zh) * 2012-12-30 2015-10-14 中山百灵生物技术有限公司 一种脱氧胆酸的合成方法
KR101447901B1 (ko) * 2013-04-16 2014-10-16 한양대학교 산학협력단 지방세포 표적 비바이러스성 유전자 전달체
BR112018001869A2 (pt) 2015-07-30 2018-09-18 Intercept Pharmaceuticals Inc método para preparação de ácidos biliares e derivados dos mesmos
US20170119794A1 (en) * 2015-11-04 2017-05-04 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Treatments of accumulated fat with deoxycholic acid and salts thereof
EP3464315B1 (en) 2016-06-06 2021-09-29 Crystal Pharma S.A.U. Methods for the preparation of deoxycholic acid, and intermediates useful in the preparation of deoxycholic acid
EP3645548B1 (en) * 2017-08-03 2023-11-29 Medytox Inc. Methods for preparing bile acids
CN111511755A (zh) * 2017-10-24 2020-08-07 比奥尼斯有限责任公司 脱氧胆酸的制备
RU2705314C1 (ru) * 2019-03-18 2019-11-06 Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ) Способ производства сухих очищенных солей желчных кислот для бактериологии
KR102456989B1 (ko) * 2020-06-12 2022-10-21 (주)케어젠 항비만 활성을 가지는 디옥시콜산-펩타이드 결합체 및 이의 용도
KR20230043128A (ko) * 2020-09-18 2023-03-30 서울대학교산학협력단 소디움 타우로디옥시콜레이트의 대량 생산 방법
KR20230013005A (ko) 2021-07-16 2023-01-26 주식회사 스카이테라퓨틱스 담즙산 또는 담즙산 염의 분자 회합체를 포함하는 화장료 조성물
WO2023287260A1 (ko) 2021-07-16 2023-01-19 주식회사 스카이테라퓨틱스 담즙산 또는 담즙산 염의 분자 회합체 및 이를 포함하는 국소지방제거용 의약 조성물
CN114478676A (zh) * 2022-02-18 2022-05-13 国药集团化学试剂有限公司 一种高纯脱氧胆酸钠的制备方法
CN115974949B (zh) * 2022-10-26 2023-12-22 湖南科瑞生物制药股份有限公司 一种植物源脱氧胆酸中间体的制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2321598A (en) * 1940-10-07 1943-06-15 George A Breon & Company Inc Preparation of desoxycholic acid

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2615902A (en) * 1950-10-24 1952-10-28 Merck & Co Inc Chemical compounds and processes for preparing the same
US4113882A (en) * 1974-10-21 1978-09-12 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Stabilized oral prostaglandin formulation and the process for the preparation thereof
US4866044A (en) * 1985-07-09 1989-09-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Solubilized composition of poorly-soluble pharmaceutical product
IL89880A (en) * 1988-04-08 1994-06-24 Roussel Uclaf A9-Hydroxy-71-Methylene steroids, their preparation and use in the synthesis of Corsican steroids
FR2754709B1 (fr) 1996-10-23 1999-03-05 Sanofi Sa Composition cosmetique contenant un antagoniste des recepteurs du neuropeptide gamma et alpha 2 antagonistes susceptibles d'etre incorpores dans une telle composition
GB9910934D0 (en) * 1999-05-11 1999-07-14 Res Inst Medicine Chem Chemical compounds
US20060127468A1 (en) 2004-05-19 2006-06-15 Kolodney Michael S Methods and related compositions for reduction of fat and skin tightening
US7754230B2 (en) 2004-05-19 2010-07-13 The Regents Of The University Of California Methods and related compositions for reduction of fat
PL2422789T3 (pl) * 2004-05-19 2018-09-28 Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center Wstrzykiwalna kompozycja zawierająca deoksycholan sodu
ATE550031T1 (de) * 2005-06-06 2012-04-15 Univ Georgetown Zusammensetzungen und verfahren für die lipomodellierung
EP2069383A2 (en) * 2007-06-19 2009-06-17 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Synthetic bile acid composition, method, and preparation

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2321598A (en) * 1940-10-07 1943-06-15 George A Breon & Company Inc Preparation of desoxycholic acid

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Publication number Publication date
ES2826429T3 (es) 2021-05-18
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CY1116700T1 (el) 2017-03-15
CN106146594A (zh) 2016-11-23
PL2407475T3 (pl) 2015-12-31
CA2690841A1 (en) 2008-12-24
MX2009013664A (es) 2010-04-07
BRPI0813140A2 (pt) 2014-12-23
HK1223372A1 (zh) 2017-07-28
CN106083969B (zh) 2018-02-27
HK1165807A1 (zh) 2012-10-12

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