EA020806B1 - Способ получения дезоксихолевой кислоты (варианты), дезоксихолевая кислота, полученная указанным способом, фармацевтическая композиция, ее содержащая, способ удаления жировых отложений - Google Patents

Abstract

В изобретении описаны желчные кислоты и родственные композиции, а также способы синтеза и применение. В частности, предложены дезоксихолевая кислота и родственные композиции, причем указанные композиции свободны от всех примесей животной природы и свободны от пирогенных примесей.

Description

Настоящее изобретение относится в широком смысле к желчным кислотам и родственным композициям и способам. В одном аспекте настоящее изобретение относится к дезоксихолевой кислоте и родственным композициям, полезным промежуточным продуктам и способам их синтеза. В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению заявленных композиций и способов в качестве фармацевтических композиций, а также способов их получения. Важно, что желчные кислоты по настоящему изобретению не выделены у млекопитающих или из микробных организмов, продуцирующих данные кислоты в естественных условиях, и, таким образом, они свободны от любых токсинов и примесей, связанных с данными организмами. В другом аспекте настоящее изобретение относится к синтезу дезоксихолевой кислоты и ее фармацевтически приемлемых солей и промежуточных продуктов.

Сведения о предшествующем уровне техники

Холанология, изучение желчных кислот и особенно химии желчных кислот, представляла интерес в течение большей части столетия. Хотя многое известно, химия желчных кислот включает широкий круг химических структур, многие из которых обладают неожиданными свойствами. В плане обзора см., например, статью Микйоракйуау, 8. и и. МаИга, Сиггеп! 8сюпсс 87:1666-1683 (2004) (Сйет1з1гу апк Ыо1оду оГ Ы1е ашкз (Химия и биология желчных кислот), включенную в данном контексте в виде ссылки.

Желчные кислоты характеризуются двумя связанными структурами, жестким стероидным ядром и короткой алифатической боковой цепью (см. фиг. 1 настоящей заявки); см. статью НоГтапп, А.Р., е! а1. В плане предлагаемой номенклатуры желчных кислот см. 1. Ыр1к Вез. 33:599-604 (1992). Как ядро, так и боковая цепь имеют большое число возможных стерических положений. Ядро может быть изменено путем увеличения или сокращения отдельных циклов, и боковая цепь может быть укорочена или удлинена. Кроме того, обе части молекулы желчной кислоты имеют большое количество возможных полярных заместителей. На ядре или боковой цепи могут присутствовать ионизирующие группы. Наконец, конъюгирующие группы могут находиться на ядре (например, сульфат, глюкуронат, фосфат) или на боковой цепи (глицин либо таурин или другие аминокислоты либо даже сахара). Структура боковой цепи определяет класс соединения (желчные кислоты или желчные соли).

Желчные кислоты являются амфифильными веществами, имеющими как амфифильную, так и амфипатическую поверхность: НоГтап, Л.Р., №\уз РкузюГ 8с1. 14: 24-29 (1999) Вке ЛсИз: Тке доок, !ке Вак, апк !ке Ид1у (Желчные кислоты: положительные, отрицательные и опасные свойства, с. 25, фиг. 1).

По договоренности гидрофобную поверхность называют β-сторона и гидрофильную поверхность называют α-сторона. В общем, β-сторона растворима в липидах и α-сторона относительно полярна. Существуют желчные кислоты, например, имеющие полярные группы (гидроксильные группы в природных желчных кислотах) на гидрофобной стороне, а также на гидрофильной стороне, например урсодезоксихолевая кислота. Амфипатическая природа молекулы отвечает за формирование ею смешанных мицелл с амфипатическими, но нерастворимыми в воде липидами, такими как фосфатидилхолин. Желчные кислоты не будут солюбилизировать входящие в состав пищи липиды в форме смешанных мицелл до тех пор, пока содержание желчных кислот превышает критическую концентрацию, называемую критической концентрацией мицеллизации.

Желчные кислоты, обнаруженные в максимальном соотношении у человека, представляют собой хенодезоксихолевую кислоту и дезоксихолевую кислоту. Дезоксихолевая кислота известна также как дезоксихолат, холаноевая кислота и 3а,12а-дигидрокси-5в-холанат. В организме человека дезоксихолевая кислота используется в эмульгировании жиров для всасывания в кишечнике. В исследования дезоксихолевую кислоту используют в качестве мягкого детергента для выделения мембранаассоциированных белков. Будучи в существенной степени очищенной, дезоксихолевая кислота находится в форме кристаллического порошка от белого до не совсем белого цвета. Дезоксихолевая кислота представляет собой одну из четырех основных кислот, образуемых печенью. Она растворима в спирте и уксусной кислоте. Номер СА8 (Реферативной службы по химии) дезоксихолевой кислоты [83-44-3].

Быстрое удаление жиров организма издавна является мечтой, и заявлено множество субстанций, предназначенных для достижения данных результатов, хотя немногие дали результаты. Мезотерапия или использование инъекционных препаратов для удаления жира не является широко распространенной среди практикующих врачей из соображений безопасности и эффективности, хотя гомеопатические и косметические заявки делают с 1950 г. Мезотерапия изначально возникла в Европе как способ использования кожных инъекций, содержащих смесь соединений, предназначенную для лечения местных медицинских и косметических состояний. Хотя мезотерапию традиционно использовали для облегчения боли,

- 1 020806 ее косметическое применение, в частности, при удалении жира и целлюлита недавно привлекло внимание в Соединенных Штатах Америки. Один из данных описанных вариантов лечения с целью местного уменьшения жира, который был распространен в Бразилии и в котором используют инъекции фосфатидилхолина, ошибочно считали синонимом мезотерапии. Несмотря на его привлекательность как предполагаемой жирорастворяющей инъекции, безопасность и эффективность данных косметических видов лечения остаются неясными для большинства пациентов и врачей; см. статью ΡοΙιιηάα. А.М. апб М. Ко1обпеу, ЭеппаЮ&дю Зигдегу 32:465-480 (2006) (МекоШегару апб РЬокрЬаббу1сЬо1ше 1п)есОопк: ШкЮпса1 С1аг1Йсайоп апб РеОе\у (Мезотерапия и инъекции фосфатидилхолина, исторический аспект и обзор).

Заявка \УО 2006/133160 (включенная в данном контексте в своей полноте, включая чертежи) описывает способы липомоделирования, например уменьшения отложения жира, путем введения антагониста рецептора нейропептида Υ в область отложения жира. В статье Ко1ошп М.О. е! а1., Ν;·ιΙ. Меб. .Типе 10(6):625-32 (2004) описывают избирательные в отношении жира проапоптотические пептиды, обладающие сильными эффектами уничтожения жировых клеток. Для проявления эффекта уничтожения описанным проапоптотическим пептидам необходима избыточная сосудистая сеть.

В недавно опубликованной литературе показано, что дезоксихолевая кислота обладает свойствами удаления жира при инъекции в жировые отложения ш У1уо; см. \УО 2005/117900 и \УО 2005/112942, а также И82005/0261258; И82005/0267080; И82006/127468 и И82006/154906, все из которых включены в данном контексте в виде ссылки в своей полноте, включая чертежи. Дезоксихолат, введенный в жировую ткань, обладает двумя эффектами: 1) он уничтожает жировые клетки посредством цитолитического механизма и 2) он вызывает сжатие кожи. Оба данных эффекта необходимы для опосредования требуемых эстетических исправлений (т.е. формирования контура тела). Поскольку дезоксихолат, инъецированный в жир, быстро инактивируется под воздействием белка и затем быстро возвращается в содержимое кишечника, его эффекты пространственно ограничены. В результате данного эффекта ослабления, который обусловливает клиническую безопасность, лечение, направленное на удаление жира, как правило, требует проведения 4-6 курсов. Данное местное удаление жира без необходимости хирургического вмешательства благоприятно не только в плане терапии, относящейся к патологически локализованным жировым отложениям (например, случаям дислипидемии, характерным для медицинских вмешательств при лечении ВИЧ), но также в плане косметического удаления жира без сопутствующего риска, присущего хирургическому вмешательству (например, липосакции); см. статью Ро1ипба е! а1., Пегта1о1. Зигдегу 30: 1001-1008 (2004) (Пе1егдеп1 е!Гес!к о! кобшт бео\усНо1а!е аге а та.)ог Геа1иге о! ап щ)ес1аЫе рНокрйаббу1сНоПпе Гогти1а!юп икеб Гог 1осаП/еб Га! бюкоШбоп (Эффекты детергента у дезоксихолата натрия являются основным свойством инъекционного препарата фосфатидилхолина, используемого для местного растворения жира) и статью Ро!ипба е! а1., 1. Ат. Асаб. Эегта1о1. 2005: 973-978 (Ыротак 1геа!еб \νί11ι киЬси!апеоик бео\усНо1а!е т)есОопк (Липомы, леченные подкожными инъекциями дезоксихолата)), обе из которых включены в данном контексте в виде ссылки.

Препараты желчных кислот фармацевтического качества коммерчески доступны при относительно низкой стоимости. Данная низкая стоимость обусловлена тем фактом, что желчные кислоты получают из туш животных, особенно крупных животных, таких как коровы и овцы. Важно, что как в случае всех лекарственных средств из животных источников существует проблема того, что выделенные у животных продукты желчных кислот могут содержать патогены животных и другие вредные агенты, такие как метаболиты и токсины животных или микробов, в том числе бактериальные токсины, такие как пирогены.

Данные патогены животных могут включать прионы, которые, как считают, представляют собой тип инфекционного патогенного белка, который может вызывать прионовые заболевания. Прионовые заболевания представляют собой дегенеративные нарушения нервной системы. Одно из данных заболеваний, болезнь коровье бешенство (считают, что оно является вариантом болезни Крейтцфельда-Якоба (СГО)), как полагают, вызывается прионом, находящимся в съедобном мясе больных коров. Большинство случаев являются спорадическими с неизвестным способом передачи; некоторые случаи являются наследственными и небольшое число передается при медицинских процедурах. Распространение человеческих прионовых заболеваний посредством употребления инфицированного материала ранее подразумевали при куру и с недавнего времени при варианте СГО. Все другие прионовые болезни животных (скрепи овец, трансмиссивная энцефалопатия норок, вызывающая истощение болезнь оленей и губчатая энцефалопатия крупного рогатого скота), по-видимому, горизонтально передаются при контакте с инфицированными животными или путем потребления инфицированной пищи. Оценку риска и предсказания будущих событий, относящихся к прионовым болезням, трудно провести вследствие различных путей передачи, непредсказуемых видовых барьеров, различного распределения инфекционного начала в тканях и штаммовых вариациях, обнаруживаемых при ряде заболеваний.

Как правило, продукты животной природы могут подвергаться воздействию микробных организмов, которые продуцируют пирогены (субстанции, вызывающие лихорадочное состояние). Бактериальные заражения пищевых и/или фармацевтических продуктов также представляют собой серьезную проблему, как подтверждается заражением продуктов питания энтерогеморагической Е. сой. Продукты, такие как различные сорта говядины, а также такие продукты, как яблоки, шпинат и т.п., подвержены данному заражению. В данных случаях токсин, продуцируемый бактериями (а не сами бактерии), является

- 2 020806 тем, что дает вредные эффекты для человека. Данные вредные эффекты включают тяжелую диарею, почечную недостаточность и в чрезвычайных случаях смерть. Бактериальные эндотоксины, тип пирогена, должны быть исключены из всех фармацевтических композиций.

Продукты животной природы, как правило, очищают способом исключения, т.е., а не выделения конечного продукта из смеси, причем конечный продукт представляет собой материал, остающийся после исключения примесей. И в дополнение к потенциальным молекулам животной природы, таким как патогены, другим артефактом очистки из источников животной природы является то, что конечный продукт представляет собой смесь одной или более желчных кислот. Например, коммерческие препараты дезоксихолевой кислоты включают некоторое количество хенодоксихолевой кислоты, а также холевой кислоты, которая является предшественником обеих, дезоксихолевой и хедодезоксихолевой кислоты при синтезе желчных кислот у млекопитающих. Поскольку точное соотношение дезокси/хено/холевой кислот предварительно не выбирают, это может привести в результате к варьированию от партии к партии, когда предполагают изготовление больших количеств желчных кислот. Данное варьирование от партии к партии может быть проблематичным и может приводить к дополнительным стадиям в сборе регулирующих утверждений или контроле качества, особенно в попытках получить фармацевтическую композицию. Ясно, что изготовители хотели бы предсказуемости результатов от партии к партии при изготовлении фармацевтических композиций желчных кислот.

В настоящее время проблемы, касающиеся продуктов животной природы, содержащих патогены животных и другие вредные агенты, решают путем получения из изолированных и обследованных животных. Например, дезоксихолевая кислота из животных в Новой Зеландии является источником желчных кислот для использования у человека согласно регуляторным схемам США до тех пор, пока животные продолжают оставаться изолированными и иным образом свободными от исследуемых патогенов.

Неявным образом необходимость данной контролируемой правительством регуляторной схемы является признанием действительного риска передачи патогенов животных при инъекции лекарственных средств животной природы. Когда альтернативные лекарственные средства неживотной природы становятся доступными, правительственная регуляторная схема больше не требуется. Примером данной альтернативы (лекарственного средства неживотной природы, заменяющей лекарственное средство животной природы) и связанных с ним преимуществ является инсулин, предназначенный для применения у человека. Производство коровьего инсулина в Соединенных Штатах Америки прекращено в 1998 г. и свиного инсулина, предназначенного для применения у человека, прекращено в январе 2006 г. Хотя инсулин животной природы можно получить в стадах, о которых неизвестно, чтобы они подвергались воздействию вызывающих В8Е или других патогенных агентов, производственное оборудование или процессы могут подвергнуть ингредиенты животной природы воздействию животных, на которых воздействовали патогены. Риск передачи патогенных агентов человеку можно исключить путем использования инсулина, который получают рекомбинантно или синтетически. Для потребителей ситуация с инсулином наглядна: когда синтетический материал имеется в свободном доступе, риск передачи патогенов животных теоретически исключен. Для изготовителей возможность производить чистое химическое вещество, которое в существенной степени свободно от материала патогенов животной природы, дает преимущество в плане безопасности, качества и регуляторных целей. Кроме того, способ синтеза, как правило, дает в большей степени воспроизводимый продукт, чем выделяемый из биологических источников.

В настоящее время вследствие относительного преобладания желчных кислот, полученных из туш животных, промышленность не предпринимает шаги ни для полного химического синтеза желчных кислот, ни для получения желчных кислот с использованием фитостерина или микробных исходных материалов. И хотя синтезированы производные желчных кислот, данная работа снова в основном включает желчные кислоты животной природы в качестве исходных материалов для химии стероидов вследствие низкой стоимости и легкой доступности материалов животной природы. Несмотря на предшествующие активные попытки, предпринимаемые в исследованиях фитостеринов, отсутствуют легкодоступные коммерческие композиции, полученные из фитостеринов желчных кислот фармацевтического качества; см., например, статью МикЬорайЬуау, 8. апй и. Майта., Сиггеп!: Заеиее 87: 1666-1683, 1670 (2004) (отмечая, что полный синтез любой желчной кислоты не проводили с учетом ссылки на статью 1981 г. Кате!аи1 е! а1.1. Ат. СЬет. 8ос. 103: 2890 (1981) (Рйз! То!а1 8уи!Ье818 о£ (+)-СНеиойео\уеНо1|с ашй (Первый полный синтез (+)-хенодезоксихолевой кислоты). Микробные, такие как бактериально продуцируемые желчные кислоты, использовали ίη зйи как бактериальные продукты, например, для очистки разливов нефти в море; см. статью Маиеега! е! а1., Арр1. МютоЪю1. Вю!есЬио1. 76: 679-683 (2004) (Вйе ас1Й8 аге пе\у ртойис!8 о£ а тапеие Ъас!етшт, МутоШез зр. 8!таш 8М1 (Желчные кислоты являются новыми продуктами морской бактерии МутоШез зр. штамм 8М1).

Для того чтобы полностью реализовать потенциал дезоксихолевой кислоты в плане удаления жира, обязательно, чтобы беспокойство относительно использования продуктов животной природы было более направленным. Ясно, что существует необходимость в соответствующих количествах эффективных жирных кислот и родственных композиций, таких как дезоксихолевые кислоты, которые, как известно изначально, свободны от веществ животной природы (или патогенных веществ, способных воздействовать на животных, особенно млекопитающих, и при применении у человека обладающих вредным эф- 3 020806 фектом на человека) и других вредных агентов, таких как метаболиты животной или микробной природы, токсины, включая бактериальные токсины, такие как пирогены, для использования в качестве лекарственных препаратов для человека. Настоящее изобретение направлено на данную проблему, предусматривая синтетически полученные композиции желчных кислот, свободных от потенциального риска присутствия патогенов животной природы и других вредных агентов. Раскрытые композиции желчных кислот могут быть использованы в адиполитической терапии и будут служить для последующего перспективного исследования и экспериментальных попыток в области местного удаления жира.

Сущность изобретения

В данном контексте предусматривают адекватные количества подходящей желчной кислоты в виде определенной фармацевтической композиции, а также способы ее синтеза. Композиции желчных кислот и предусматриваемые таким образом способы не основаны на млекопитающих или микробных организмах, которые в естественных условиях продуцируют желчные кислоты. В одном аспекте предусматривают определенные композиции дезоксихолевой кислоты, которые свободны от всех веществ животной природы и пирогенов млекопитающих и/или бактериальных пирогенов, и соответствующие способы получения и применения. В другом аспекте предусматривают адекватные количества подходящих дезоксихолевых кислот в виде определенных фармацевтических композиций, которые можно использовать как инъекционную фармацевтическую композицию для местного удаления жира, наряду с родственными композициями, способами получения и способами применения. Определенные инъекционные препараты дезоксихолата, соответствующие настоящему изобретению, можно комбинировать с молекулой, которая вызывает уничтожение жира посредством ортогонального механизма, например, с антагонистами ΝΡΥ и/или избирательными в отношении жира проапоптотическими пептидами, с получением агентов, предназначенных для использования при создании более сильных средств для опосредования формирования контуров тела в течение уменьшенного количества терапевтических сеансов. В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает способы и промежуточные продукты, относящиеся к синтезу дезоксихолевой кислоты и ее фармацевтически приемлемых солей. Полученную синтетическим путем дезоксихолевую кислоту можно использовать в адиполитической терапии для удаления жира.

Все публикации и патентные заявки, упомянутые в данном описании, включены в данном контексте в виде ссылки в той же самой степени, как если бы для каждой отдельной публикации или патентной заявки было специально и отдельно указано, что она включена посредством ссылки.

На протяжении данного описания на различные публикации, патенты и опубликованные патентные описания ссылаются посредством идентифицирующей ссылки. Описания данных публикаций, патентов и опубликованных патентных описаний в данном контексте включены в виде ссылки в настоящее описание, чтобы более полно описать состояние области техники, к которой относится изобретение.

Как используют в данном контексте, некоторые термины имеют следующие определенные значения. Как используют в описании и формуле изобретения формы единственного числа включают ссылки на единственное и множественное число, пока из контекста ясно не следует иное.

До тех пор пока не указано иначе, все числа, выражающие количества ингредиентов, условия реакции и т.п., используемые в описании и формуле изобретения, следует понимать как корректируемые во всех случаях термином приблизительно. Соответственно, пока не указано противоположное, численные параметры, приведенные в следующем описании и прилагаемой формуле изобретения, являются приближенными значениями. Каждый численный параметр должен быть, по меньшей мере, ограничен в свете числа представленных значащих цифр и путем использования обычных методов округления.

Термин ацетилирующий реагент относится к реагенту, в котором можно ввести ацетильную группу СН₃С(О)- в молекулу.

Термин кислота относится к донору протона и включает как органические, так и неорганические кислоты.

Термин алкил относится к одновалентным насыщенным алифатическим углеводородным группам, имеющим от 1 до 10 атомов углерода и предпочтительно 1-6 атомов углерода. Данный термин включает, например, неразветвленные и разветвленные углеводородные группы, такие как метил (СН₃-), этил (СН₃СН₂-), н-пропил (СН₃СН₂СН₂-), изопропил ((СН₃)₂СН-), н-бутил (СН₃СН₂СН₂СН₂-), изобутил ((СН₃)₂СНСН₂-), втор-бутил ((СН₃)(СН₃СН₂)СН-), трет-бутил ((СН₃)₃С-), н-пентил (СН₃СН₂СН₂СН₂СН₂-) и неопентил ((СН3)3ССН2-).

Термин арил относится к одновалентной ароматической карбоциклической группе из 6-12 атомов углерода, имеющей один цикл (например, фенил) или множество конденсированных циклов (например, нафтил).

Термин животной природы относится к происходящему от любого представителя царства (Άηίшайа) живых организмов, включая многоклеточные организмы и одноклеточные организмы.

Термин дегидрирующий реагент относится к реагенту, который может реагировать с водой. В одном аспекте дегидрирующий реагент может реагировать с водой, которую удаляют из молекулы.

Термин десульфуризирующий реагент относится к реагенту, который может реагировать с сульфидом. В одном аспекте десульфуризирующий реагент может реагировать с сульфидсодержащей молекулой с целью удаления из молекулы сульфидной группы.

- 4 020806

Термин этандитиол или предшественник дитиана относится к реагенту, который при реакции с карбонильной группой будет образовывать этандитиоловую или дитиановую группу.

Термин электрофильная ацетильная группа относится к ацетильной группе как к электрофилу, группе, которая притягивается к электронам и имеет тенденцию акцептировать электроны.

Термин гидрирующий реагент относится к реагенту, который отдает молекуле атом водорода.

Термин кислота Льюиса относится к акцептору электронной пары. Кислоты Льюиса включают металлоорганические реагенты, такие как галиды алкилалюминия (например, ЕЕА1С1 и МеА1С1₂).

Термин происходящий от млекопитающих относится к происходящему из любого млекопитающего животного. Термин млекопитающее животное относится к классу (Маттайа) теплокровных высших позвоночных (например, плацентарных, сумчатых или однопроходных яйцекладущих), которые выкармливают своих детенышей молоком, секретируемым молочными железами, имеют кожу, как правило, больше или меньше покрытую шерстью, и включают человека.

Термин микробной природы относится к происходящему из любого микробного организма. Термин микробный организм относится к домену (Вас1ег1а) прокариотических круглых, спиральных или палочковидных одноклеточных микроорганизмов, у которых могут отсутствовать клеточные стенки или которые являются грамположительными или грамотрицательными, если они имеют клеточные стенки, которые часто объединяются в колонии или передвигаются с помощью жгутиков, которые, как правило, обитают в почве, воде, органическом материале или организмах растений и животных, которые обычно являются автотрофными, сапрофитными или паразитическими по типу питания и которых замечают по их биохимическим эффектам и патогенности.

Термин олефинирующий реагент относится к реагентам, которые реагируют с кетонами с образованием соответствующих олефинов. Термин условия образования олефинов относится к подходящим условиям для проведения данных трансформаций. Примеры данных реагентов включают реагенты Виттига и условия олефинирования Виттига.

Термин окислитель относится к реагенту, который может акцептировать электроны с окислительно-восстановительной реакции. В данном случае галоген или кислород могут быть введены в молекулу либо водород может быть удален из молекулы.

Термин патоген относится к специфическому возбудителю заболевания.

Фармацевтически приемлемая соль относится к фармацевтически приемлемым солям, полученным из ряда органических и неорганических противоионов, хорошо известных в области техники, и включают только в качестве примера натрий, калий, литий, кальций, магний, аммоний и тетраалкиламмоний. Подходящие соли включают описанные в справочнике под ред. Р. НешпсН §1аЬ1, СатШе С. \УегтШН НапбЬоок оГ РНаттасеийса1 8а118 РгорегНез, 8е1ес1юи, апб Изе (Справочник по свойствам, выбору и применению фармацевтических солей), 2002. Данные фармацевтически приемлемые соли можно получить путем реакции ОСА (дезоксихолевой кислоты) с подходящим основанием. Для иллюстративных целей примеры данных оснований включают гидроксид натрия, гидроксид калия или гидроксид лития. Альтернативно, соли можно получить путем гидролиза сложных эфиров ОСА с помощью основания и исключения любой обработки кислой, которая могла бы привести к образованию ОСА.

Термин восстановитель относится к реагенту, который может быть донором электронов в окислительно-восстановительной реакции. В данном случае галоген или кислород можно удалить из молекулы или можно ввести в молекулу водород.

Композиции и способы применения

В различных аспектах, описанных в данном контексте, настоящее изобретение предусматривает композиции (и эффективные промежуточные продукты), предназначенные для фармацевтического применения, способы их синтеза и способы использования настоящих фармацевтических композиций.

Важно, что настоящие композиции желчных кислот свободны от риска, присущего материалу, полученному из исходных материалов животной природы, и вследствие этого не требуют детальных проверок и регуляций, необходимых для материалов, полученных от животных. В одном аспекте данное изобретение направлено, таким образом, на фармацевтические композиции желчных кислот, свободные от материала животной природы, такого как патогены млекопитающих, а также в существенной степени свободно от токсинов бактериальной природы, таких как пирогены.

Дезоксихолат натрия представляет собой образующуюся в естественных условиях желчную соль, которая солюбилизирует пищевые липиды в пищеварительном тракте. Он образуется ίη νίνο сложным биосинтетическим путем с использованием холестерина в качестве исходного материала и с участием как человеческих, так и бактериальных ферментов. Основной функцией дезоксихолата является способствовать процессу переваривания путем солюбилизирования пищевых липидов для облегчения всасывания. В организме биосинтез дезоксихолата начинается в ферментативного окисления, изомеризации и восстановления холестерина в печени с образованием холевой кислоты, желчной кислоты, структурно близкой к исходному холестерину (см. раздел 8йует Ь., глава 27: Вю8уп1Не818 οί МетЬгапе Πρί6δ апб 81ето1Й8 (Биосинтез мембранных липидов и стероидов) в монографии ВюсНет18йу (Биохимия), 1995, \У.Н. Ргеетап апб Сотрапу: Ыете Уогк. с. 691-707). Затем в печени холевая кислота химически связывается с одной или двумя аминокислотами (таурином или глицином) с образованием конъюгированных

- 5 020806 холевых кислот (т.е. Ь-гликохолата и таурохолата). Затем данные конъюгированные холевые кислоты находятся в желчном пузыре до приема пищи. После приема пищи раствор желчи высвобождается из желчного пузыря в кишку, причем молекулы конъюгированных желчных кислот являются объектом двух дополнительных химических модификаций, опосредованных ферментами, образуемыми кишечной микрофлорой (см. статью Κίάΐοη 1.М., Каид ЭЗ. и Ну1етоп Р.В., ВПе каЬ Ыо1гап5&гтайои8 Ьу Ьитаи ίη1ек1та1 Ьае1епа (Биотрансформации желчных кислот кишечными бактериями человека), 1. Ηρίά Рек., 47(2): с. 241-59 (2006)). Сначала конъюгированная холевая кислота дегидроксилируется с образованием конъюгированного дезоксихолата. Затем конъюгированный дезоксихолат деконъюгируют с образованием свободного дезоксихолата, который наряду с другими желчными кислотами принимает участие в солюбилизации пищевых жиров. Поскольку дезоксихолат находится ниже холевой кислоты по ходу синтеза, холевая кислота может являться примесью, присутствующей в природных источниках дезоксихолата.

Дезоксихолат растворим до концентрации 333 мг/мл в воде, малорастворим в спирте и даже меньше растворим в ацетоне и ледяной уксусной кислоте. Обратимое образование мицелл может происходить при концентрациях дезоксихолата натрия выше критической концентрации мицелл приблизительно 2,4 мг/мл и нейтральном рН (см. статью МаАиока К., Μ.Υ., М1се11е ЮгтаЬои о! коПшт Пео\усЬо1а1е аиП коПшт игкоПео\усЬо1а1е (Образование мицелл дезоксихолата натрия и урсодезоксихолата натрия) (ч. 1), ВюсЫт. ВюрЬук. Ас1а., 1580(2-3): с. 189-99 (2002)). В концентрациях, превышающих критическую концентрацию мицелл 2,4 мг/мл, дезоксихолат будет образовывать мицеллы и обладает способностью солюбилизировать клетки, липиды и белки. При более низких концентрациях, таких как 0,4 мг/мл (сравнимых с состоянием голодания), дезоксихолат на 98% связан с альбумином (см. статью РоПа А. е1 а1., СиаШПаЬее акресЫ о! Не 1и1егасйои о! Ы1е аСПк \νί11ι Ьитаи кегит а1Ьитт (Количественные аспекты взаимодействия желчных кислот с человеческим сывороточным альбумином), 1. Ηρίά Рек., 23(3): с. 490-5 (1982)) в присутствии 26 мг/мл альбумина (что близко к сывороточной физиологической концентрации 35-50 мг/мл).

Предпочтительные варианты осуществления направлены на дезоксихолевую кислоту (ОСА) или ее пролекарственную форму либо фармацевтически приемлемую соль соединения или пролекарственной формы и родственные композиции и способы, где дезоксихолевая кислота (ОСА) представляет собой

Причем указанное соединение не является выделенным из организма млекопитающего или микробного организма, образующего ЭСА в естественных условиях.

Другие предпочтительные варианты осуществления также направлены на стереоизомеры ИСА и их фармацевтически приемлемые соли и на промежуточные продукты в синтезе ЭСА и ее стереоизомеров и солей, а также на родственные композиции и способы.

Настоящие фармацевтические композиции желчных кислот, необязательно, находятся в солевой форме и, кроме того, необязательно содержат фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или носитель. В одном аспекте данное изобретение направлено на соединение, которое представляет собой дезоксихолевую кислоту (ОСА) или ее пролекарственную форму либо фармацевтически приемлемую соль соединения или пролекарственной формы

Причем указанное соединение не является выделенным из организма млекопитающего или микробного организма, образующего ОСА в естественных условиях, и фармацевтически приемлемый наполнитель.

Предпочтительные катионы для получения солей можно выбрать из группы, состоящей из натрия

- 6 020806 (Να'), калия (Κ'), лития (Όί⁺), магния (Мд²'), кальция (Са²+), бария (Ва²+), стронция (8т²') и аммония (ΝΗ₄+). Соли можно также получить из щелочного металла или щелочно-земельного металла.

Щелочной металл можно выбрать из натрия (№+), калия (Κ+) и лития (БЕ). Щелочно-земельный металл можно выбрать из группы, состоящей из магния (Мд²'), кальция (Са²+), бария (Ва²+) и стронция (8т²'). Для применения в качестве фармацевтической композиции для местного удаления жира предпочтительно, когда желчная соль представляет собой дезоксихолат натрия.

Предусматривают также пролекарственные формы, соответствующие вариантам осуществления. Пролекарственная форма является активным или неактивным соединением, которое химически модифицируется путем физиологического воздействия ίη νίνο, таким как гидролиз, метаболизм и т.п., с образованием соединения, соответствующего вариантам осуществления, после введения пролекарственной формы пациенту. Например, можно получить С1-Сю-сложный эфир или амид настоящей дезоксихолевой кислоты или ее производных, так что высвобождение дезоксихолевой кислоты или ее производных запускается посредством разрушения клеточной мембраны и выхода эстеразы. При выходе эстеразы сложноэфирная защитная группа расщепляется, при этом активная форма дезоксихолевой кислоты или ее производных присутствует в требуемой области ίη κίΐιι. Данные С₁-С₁₀-сложные эфиры могут, необязательно, включать 1-4 гетероатома, выбранных из кислорода, серы или азота; алкильные группы, такие как метил, этил, изопропил, бутил, гексил и т.п., необязательно имеющие 1-4 гетероатома, выбранных из кислорода, серы или азота; алкилфенильные группы, имеющие в целом до 10 атомов углерода, такие как бензильная или этилфенильная группы, необязательно имеющие 1-4 гетероатома в любой приемлемой точке замещения; и арильную группу, такую как фенильная группа. Пример амида включает, но без ограничения перечисленным, гидроксамат, в плане общего обсуждения пролекарственных форм, включающих сложные эфиры, см. монографии 8успк5оп апб Типек Эгид МсШЬоПкт КсуЮук (Обзоры по метаболизму лекарственных препаратов), 165 (1988) и Випбдаагб Эстди οί Ртобтидк (Создание пролекарственных форм), Е15СУ1СГ (1985), полностью включенные в данном контексте в виде ссылки. Синтез Οι-Οι₀сложного эфира или амида дезоксихолевой кислоты хорошо известен в области техники. Например, сложный эфир можно синтезировать путем реакции дезоксихолевой кислоты со спиртом в присутствии минеральной кислоты в реакции эстерификации.

Нативные структуры дезоксихолевой кислоты и хенодезоксихолевой кислоты показаны ниже. Показаны четыре цикла (А, В, С, Ό), а также боковая цепь карбоновой кислоты, которая идет от Ό-цикла.

Без ограничения перечисленного некоторые примеры сложных эфиров, гидроксаматов и гидроксиамидов дезоксихолевой кислоты, а также хенодезоксихолевая кислота (ΟΌΟΑ) или ее производные описаны ниже. Различные функциональные группы можно присоединить к дезоксихолевой кислоте или хенодезоксихолевой кислоте посредством эстерификации карбоксильной группы боковой цепи Ό-цикла с целью генерации пролекарственных форм. Без ограничения перечисленного некоторые примеры данных сложных эфиров боковой цепи Ό-цикла показаны в табл. 1.

- 7 020806

Таблица 1

Функциональные группы, конъюгированные с боковой цепью Ό-цикла дезоксихолевой кислоты и хенодезоксихолевой кислоты

Высвобождение дезоксихолевой кислоты или хенодезоксихолевой кислоты и их производных можно запустить посредством разрушения клеточной мембраны и выхода эстеразы. При выходе эстеразы сложноэфирная защитная группа может расщепляться, при этом активная форма дезоксихолевой кислоты или хенодезоксихолевой кислоты или их производных присутствует в требуемой области ίη δίΐιι.

Пролекарственные формы дезоксихолевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты и их производных также включают эпимеры, которые могут обладать стереохимическими свойствами, противоположными данным свойствам нативной молекулы. Примеры данных эпимерных молекул показаны в табл. 2.

- 8 020806

Таблица 2

Эпимеры дезоксихолевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты и их производных

При инъекции композиции желчных кислот, соответствующей настоящим вариантам осуществления, может появиться местное раздражение и, таким образом, может потребоваться введение, одновременное или последовательное, местного анестезирующего средства. Например, лидокаин часто используют у человека, и его можно ввести либо в виде сопрепарата (в одном и том же контейнере и инъецируемый в одно и то же время), либо в виде соинъекции (инъецируют из другого контейнера). Анестезирующие препараты, такие как лидокаин, можно вводить с помощью препарата для местного применения, такого как пластырь или мазь.

Для более глубоких тканей анестезирующие препараты можно более глубоко инъецировать в ткань субъекта или вводить системно (например, посредством общей анестезии, эпидурально или другими способами).

Желчная кислота(ы) или желчная соль(и) в растворе, соответствующем изобретению, может находиться в концентрации приблизительно 0,001-10, 0,01-5 или 0,1-2% мас./мас., мас./об. или об./об. Предпочтительно, когда желчная кислота(ы) или желчная соль(и) в вышеуказанном растворе может находиться в концентрации приблизительно 0,1-5% мас./мас. или более предпочтительно приблизительно 1% мас./мас. В некоторых вариантах осуществления растворяющий жир раствор включает до 100, 50, 20, 10, 5, 2, 1, 0,5, 0,2, 0,05, 0,02 или 0,01 г одного или более детергентов, желчных кислот и/или желчных солей, например дезоксихолевой кислоты или ее солей либо дезоксихолата натрия.

В предпочтительных вариантах осуществления растворы в данном контексте не включают липиды, фосфолипиды или фосфатидилхолин. В некоторых вариантах осуществления растворы в данном контексте включают до 5% мас./мас., мас./об. или об./об. липидов, фосфолипидов или фосфатидилхолина.

В ряде вариантов осуществления вышеуказанный раствор может, кроме того, включать второй терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из антимикробных агентов, сосудосуживающих

- 9 020806 компонентов, антитромботических агентов, противосвертывающих агентов, пеногасителей, противовоспалительных агентов, анальгетиков, диспергаторов, антидиспергаторов, усилителей проникновения, стероидов, транквилизаторов, мышечных релаксантов и антидиарейных агентов. В ряде вариантов осуществления раствор находится в контейнере, который содержит до 500 мл раствора. Данный контейнер может представлять собой шприц или контейнер, загружаемый шприцем.

В ряде вариантов осуществления композиции и способы, кроме того, включают молекулу, которая, как известно, вызывает уничтожение жира ортогональным механизмом. Данные молекулы включают антагонисты рецептора нейропептида Υ (ΝΡΥ), в том числе, но без ограничения перечисленного, антагонисты рецептора ΝΡΥ, такие как ΒΙΒΡ-3226 (Атдсп). ΒΙΒΟ-3304 (Воскппдсг 1пд1скс1т). ΒΜδ-192548 и АК-Н040922 (Βπδΐο1-\№ΐ'δ 8цшЪЪ), ΕΥ-357897 (Ей ЬШу), 1229И91 и С№4380148 (С1ахо8тййКйпе), ЮТ5207787 (.ΙοΠηδοη & .Ιοίιιίδοιιί Ьи-АА-44608 (ЬипаЪеек), ΜΚ-0557 (Мегск ΝΡΥ), ΝΟΌ-95-1 (Nеи^дοΰеη). ΝΌΧ-Ε201 (№υτο1οφχ), ССР-71683 (Νονατίίδ), ΡΌ-160170 (ΡΓζβτ), 8К-120819А, ΒΙΙΕ0246 и 8.А.0204 (δαηοΓί А\'еп05), 8-2367 (8Ηίοη§1ί), дигидропиридин и производные дигидропиридина, которые являются антагонистами рецептора ΝΡΥ, бициклические соединения, которые являются антагонистами рецептора ΝΡΥ, карбазольные антагонисты рецептора ΝΡΥ и трициклические соединения, которые представляют собой антагонисты рецептора ΝΡΥ; см., например, №О 2006/133160 и и.8. 6313128 (включенные в данном контексте путем ссылки в своей полноте, включая чертежи). Кроме того, предусматривают избирательные в отношении жира проапоптотические пептиды, такие как пептид СКССКАКОС, который направлен на сосудистую сеть белого жира; см., статью Κοίοηίη М.С. е1 а1., Ναι. Меб. йте 10(6):625-32 (2004).

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам уменьшения подкожного отложения жира у пациента. Данные способы включают стадию местного введения в отложение подкожного жира пациента композиции, включающей (ί) растворяющее жир эффективное количество одного или более фармакологически активных детергентов или желчной кислоты (кислот) и/или желчной соли(ей), либо дезоксихолевой кислоты или ее соли или дезоксихолата натрия; (ίί) фармацевтический, ветеринарный или косметический наполнитель и (ίίί), необязательно липид, причем соотношение липида или желчной соли составляет до 1% мас./мас., и причем композиция не включает липазу или колипазу. В ряде вариантов осуществления отложение жира ассоциировано с состоянием, выбранным из группы, состоящей из ожирения, синдрома перераспределения жира, образования жировой грыжи века, липом, болезни Деркама, липодистрофии, липодистрофии горба буйвола, дорсоцервикального жира, висцерального ожирения, увеличения молочных желез, гиперожирения, диффузных жировых тел вокруг туловища и рук и жировых отложений, связанных с целлюлитом. В предпочтительных вариантах осуществления вышеуказанный способ не включает осуществление хирургического вмешательства у пациента.

В одном аспекте данное изобретение направлено на способ удаления жировых отложений из выбранных областей тела млекопитающего, включающий введение нуждающемуся в этом млекопитающему терапевтически эффективного количества ОСА или ее пролекарственной формы либо фармацевтически приемлемой соли ОСА или пролекарственной формы

причем указанное соединение не является выделенным из организма млекопитающего или микробного организма, образующего ОСА в естественных условиях.

В одном варианте осуществления способы, соответствующие данному изобретению, могут далее включать введение млекопитающему по меньшей мере одного дополнительного активного ингредиента, выбранного из группы, состоящей из антагониста рецептора нейропептида Υ(ΝΡΥ) и избирательного в отношении жира проапототического пептида. В одном варианте осуществления антагонист рецептора нейропептида Υ (ΝΡΥ) выбран из группы, состоящей из ΒΙΒΡ-3226, антагониста нейропептида Υ5 (антагонисты рецептора ΝΡΥ Атдеп), ΒΙΒΟ-3304 (антагонист рецептора ΝΡΥ Βοей^^η§е^ Шдкйеш), ΒΜδ192548 (антагонист рецептора ΝΡΥ Β^^δΐο1-Μуе^δ БсцйЪЪ), АК-Н040922 (антагонист рецептора ΝΡΥ ΒτίδШКМуетв БсцйЪЪ), ΕΥ-357897 (антагонист рецептора ΝΡΥ Ей ЬШу), антагониста рецептора ΝΡΥ-Υ5 Εδΐеνе, 1229И91 (антагонисты рецептора ΝΡΥ С1аxοδт^ΐйΚ1^ηе), С№4380148 (антагонисты рецептора ΝΡΥ С1аxοδт^ΐйΚ1^ηе), ίΝί-5207787 (антагонист рецептора ΝΡΥ ίοΐιηδοη & ίοΐιηδοη), Ьи-ЛА-44608 (антагонист рецептора ΝΡΥ ^иηάЪеск), МК-0557 (антагонистрецептора ΝΡΥ Мегск), ЫСО-95-1 (антагонист рецептора ΝΡΥ№ι.ΐΓ§ο^η), ΝΌΧ-Ε201 (антагонист рецептора ΝΡΥ№ιΐΓο1ο§ίχ), ί'.ΌΡ-71683 (антагонист рецептора ΝΡΥ Νοναηίδ), ΡΌ-160170 (антагонисты рецептора ΝΡΥ ΡΓί/ег), 8К-120819А (антагонисты рецептора ΝΡΥ δαηοΠ Лνеηΐ^δ), ΒΙΙΕ0246 (антагонисты рецептора ΝΡΥ δαηοΠ Лνеηΐ^δ), 8.А.0204 (антагонисты ре- 10 020806 цептора ΝΡΥ Запой ΛνοηΙίκ). 3-2367 (антагонист рецептора ΝΡΥ ЗПопдй), дигидропиридиновых антагонистов рецептора ΝΡΥ, производных дигидропиридиновых антагонистов рецептора ΝΡΥ, бициклических соединений, которые представляют собой антагонисты рецептора ΝΡΥ, карбазольного антагониста рецептора ΝΡΥ и трициклических соединений, которые представляют собой антагонисты рецептора ΝΡΥ; см., например, νΟ 2006/133160 и и.З. 6313128 (включенные в данном контексте в виде ссылки в своей полноте, включая чертежи). В одном варианте осуществления избирательный в отношении жира проапоптотический пептид представляет собой пептид СКООКАКОС, который направлен на сосудистую сеть белой жировой ткани; см. статью Κοίοηίη М.О. е1 а1., Ναι. Меб. 1ипе 10(6):625-32 (2004).

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам уменьшения внешних проявлений кожного состояния на участке кожи пациента. Данные способы включают стадию местного введения в указанный участок кожи композиции, включающей (ί) подтягивающее кожу эффективное количество одного или более фармакологически активных детергентов или желчной кислоты (кислот) и/или желчной соли(ей) либо дезоксихолевой кислоты или ее соли или дезоксихолата натрия; (ίί) фармацевтический, ветеринарный или косметический наполнитель и (ίίί) необязательно липид. В ряде вариантов осуществления стадия введения включает доставку композиций, описанных в данном контексте, посредством подкожной или чрескожной инъекции. В ряде вариантов осуществления кожное состояние, которое лечат или облегчают, выбрано из группы, состоящей из дряблой кожи, старения кожи, неровностей кожи и морщин. В ряде вариантов осуществления участок кожи, который лечат, находится под глазом, под подбородком, подмышкой, на ягодице, щеке, брови, икре, спине, бедре, лодыжке или в области желудка.

В ряде вариантов осуществления композиции, используемые для восстановления внешнего вида кожного состояния на участке кожи, представляют собой состав для введения в раствор, подтягивающий кожу. Данный подтягивающий кожу раствор может далее включать второй терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из антимикробных агентов, сосудосуживающих компонентов, антитромботических агентов, противосвертывающих агентов, пеногасителей, противовоспалительных агентов, анальгетиков, диспергаторов, антидиспергаторов, усилителей проникновения, стероидов, транквилизаторов, мышечных релаксантов и антидиарейных агентов.

В предпочтительных вариантах осуществления детергент включает желчную кислоту, выбранную из группы, состоящей из дезоксихолевой кислоты, холевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, 7-αдегидроксилатхенодезоксихолевой кислоты, литохолевой кислоты, урсодезоксихолевой кислоты, дигидрокситауриновой кислоты, тригидрокситауриновой кислоты и конъюгатов с глицином любого из вышеуказанных соединений. В ряде вариантов осуществления детергент содержит желчную соль, которая включает катион, выбранный из группы, состоящей из натрия (Ыа⁺), калия (К¹), лития (Ы⁺), магния (Мд²+), кальция (Са²+), бария (Ва²+), стронция (Зг²+) и аммония (ΝΗ₄+). В ряде вариантов осуществления детергент включает желчную соль с катионом, который представляет собой щелочной металл или щелочно-земельный металл. Предпочтительно, когда щелочной металл представляет собой натрий (№+), калий (К') или литий (Ы⁺) и щелочно-земельный металл представляет собой магний (Мд²'), кальций (Са²+), барий (Ва²') или стронций (Зг²'). Более предпочтительно, когда желчная соль является дезоксихолатом натрия.

Другой вариант осуществления предусматривает способ эмульгирования жира в организме млекопитающего, включающий введение нуждающегося в этом млекопитающего терапевтически эффективного количества соединения, которое представляет собой ОСА или его пролекарственную форму либо фармацевтически приемлемую соль ОСА или пролекарственную форму

причем указанное соединение не является выделенным из организма млекопитающего или микробного организма, образующего ОСА в естественных условиях.

Другой вариант осуществления предусматривает способ солюбилизации фосфатидилхолина, включающий смешивание фосфатидилхолина и эффективного количества соединения, которое представляет собой ОСА или ее пролекарственную форму либо фармацевтически приемлемую соль ОСА или пролекарственную форму

- 11 020806

Причем указанное соединение не является выделенным из организма млекопитающего или микробного организма, образующего ЭСЛ в естественных условиях.

Другой аспект изобретения относится к смешиванию адипо-абляционных (разрушающих) желчных кислот, таких как дезоксихолевая кислота (ОСА) агентами, которые уничтожают жировые клетки. В одном аспекте данное изобретение предусматривает средства для усиления эстетических эффектов инъекций дезоксихолата путем введения в инъекционный препарат дезоксихолата молекулы, которая вызывает уничтожение жира ортогональным механизмом. Примеры данных потенциальных молекул включают, но без ограничения перечисленного, антагонисты нейропептида Υ (ΝΡΥ) и избирательные в отношении жира проапоптотические пептиды, как описано в данном контексте. Поскольку как уничтожение жировых клеток, так и подтягивание кожи могут потребоваться для опосредования необходимых эффектов, данные эффекты агента, обладающего способностью уничтожать жир и сильными эффектами подтягивания кожи (такого как дезоксихолат) можно усилить путем добавления молекулы с сильными эффектами уничтожения жировых клеток. Кроме того, молекулы, избыток которых необходим в сосудистой сети для проявления эффекта уничтожения (такие как некоторые проапоптотические пептиды, которые связываются с белками, экспрессирующимися в капиллярах со стороны просвета), могут увеличить избыток относительно данных белков, поскольку дезоксихолат может вызывать подтекание сосудов. Таким образом, данные агенты могут быть синергическими с дезоксихолатом, потенциально создавая более сильные средства для опосредования формирования контура тела в течение меньшего количества терапевтических сеансов.

Способ синтеза

В других вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способы синтеза соединений, солей и пролекарственных форм ОСА и родственных им промежуточных продуктов.

Нумерация стероидной основы, как используют в данном контексте, соответствует общему соглашению, как показано на фиг. 1.

Соответственно предусматривают способ получения дезоксихолевой кислоты (ОСА) или ее сложного эфира либо ее фармацевтически приемлемой соли

причем способ предусматривает:

(а) проведение реакции 9а-гидроксиандрост-4-ен-3,17-диона 1 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения 2

(Ь) проведение реакции соединения 2 с кислотой с образованием соединения 3

- 12 020806 (с) проведение реакции соединения 3 с восстановителем с образованием соединения 4 в виде смеси и 5

(ά) проведение реакции соединения 4 с реагентом для олефинирования двух атомов углерода в условиях образования олефина с формированием соединения 6

(е) превращение соединения 6 в соединение формулы 7, где Р представляет собой защитную группу

(ί) проведение реакции соединения формулы 7 с алкилпропиолатом СНСС(О)ОР или алкилакрилатом СН₂=СНС(О)ОР, где Р представляет собой алкил, в присутствии кислоты Льюиса с образованием соединения формулы 8, где Р представляет собой защитную группу, Р представляет собой алкил и пунктирная линия означает одинарную или двойную связь;

(д) проведение реакции соединения формулы 8 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения формулы 9, где Р представляет собой защитную группу и Р представляет собой алкил

(Ь) проведение реакции соединения формулы 9 с окислителем с образованием соединения формулы 10, где Р представляет собой защитную группу и Р представляет собой алкил

(ί) проведение реакции соединения формулы 10 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения формулы 11, где Р представляет собой защитную группу и Р представляет собой алкил

- 13 020806 (ί) проведение реакции соединения формулы 11 с восстановителем с образованием соединения формулы 12, где Р представляет собой защитную группу и К представляет собой алкил

(к) воздействие на соединение формулы 12 условиями снятия защиты с образованием его сложного эфира и, необязательно, подходящими условиями гидролиза с образованием дезоксихолевой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение также предусматривает следующие промежуточные соединения, показанные на схеме 1 ниже, где Р и К такие, как определено выше.

Схема 1. Синтез дезоксихолевой кислоты (ОСА)

В одном варианте осуществления условия гидрирования, соответствующие части (а), включают катализатор Ρά/С.

В одном варианте осуществления кислота, соответствующая части (Ь), представляет собой минеральную кислоту. В ряде аспектов минеральная кислота представляет собой Н₂§0₄.

В одном варианте осуществления восстановитель, соответствующий части (с), представляет собой ЫА1(О1Ви)₃Н.

В одном варианте осуществления реагент для олефинирования двух атомов углерода, соответствующий части (ά), представляет собой агент Виттига, такой как РЬ₃РСН₂СН₃+Вг^-.

В одном варианте осуществления защитная группа Р соединения 7-12 представляет собой -С(О)СН₃. В ряде аспектов соединение 6 подвергают воздействию ацилирующих условий с образованием соединения 7а, например, путем обработки соединения 6 уксусным ангидридом и органическим основанием, таким как Εΐ₃Ν, пиридин и/или диметиламинопиридин.

В одном варианте осуществления кислота Льюиса, соответствующая части (ί), представляет собой Е1А1С1₂.

В одном варианте осуществления алкилпропиолат, соответствующий части (ί), представляет собой метилпропиолат.

В одном варианте осуществления алкилакрилат, соответствующий части (ί), представляет собой метилакрилат.

В одном варианте осуществления условия гидрирования, соответствующие части (д) включают катализатор РЮ₂ или Ρά/С.

В одном варианте осуществления окислитель, соответствующий части (к), представляет собой

СгОз.

В одном варианте осуществления условия гидрирования, соответствующие части (ί), включают катализатор Ρά/С.

В одном варианте осуществления восстановитель, соответствующий части (]), представляет собой ЫА1(О1Ви)₃Н.

- 14 020806

В одном варианте осуществления условия снятия защиты и гидролиза, соответствующие части (к), где Р представляет собой -С(О)СН3, включают проведение реакции соединения 12 с гидроксидом щелочно-земельного металла, алкоксидом щелочно-земельного металла или смесью обоих. В ряде аспектов условия гидролиза включают кислотную обработку для получения дезоксихолевой кислоты. В других аспектах кислотную обработку исключают с получением соответствующей соли.

В одном варианте осуществления алкоксид щелочно-земельного металла представляет собой ЫОН.

В одном варианте осуществления соли дезоксихолевой кислоты получают путем реакции с алкоксидом или гидроксидом щелочно-земельного металла. Соли дезоксихолоевой кислоты включают соли натрия (№+), калия (К+) и лития (Ы⁺).

В одном варианте осуществления предусматривают промежуточное соединение, выбранное из группы, состоящей из

9а-гидрокси-5 β -андростан-3,17-диона (2), β -антрост-9(11)-ен-3,17-диона (3), (2)-3а-гидрокси-5в-прегна-9(11),17(20)-диена (6), (2)-3а-ацетокси-5в-прегна-9(11),17(20)-диена (7а), (Е)-метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16,22-триен-24-оата (8а), метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16-диен-24-оат (8Ь), метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11)-ен-12-он-24-оата (10а), метил 3а-ацетокси-5в-холан-12-он-24-оата (11а).

Фармацевтические композиции и способы введения

Композиции могут состоять из описанного соединения в комбинации по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым наполнителем. Приемлемые наполнители нетоксичны, способствуют введению и не оказывают вредного воздействия на терапевтический положительный эффект описанного соединения. Данный наполнитель может представлять собой любой твердый, жидкий, полутвердый или в случае аэрозольной композиции газообразной наполнитель, который, как правило, доступен специалисту в области техники.

Твердые фармацевтические наполнители включают крахмал, целлюлозу, тальк, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат магния, стеарат натрия, глицеролмоностеарат, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко и т.п. Жидкие и полутвердые наполнители могут быть выбраны из глицерина, пропиленгликоля, воды, этанола и различных масел, включая масла из нефти, растительной или синтетической природы, например арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Предпочтительные жидкие носители, в частности, предназначенные для инъекционных растворов, включают воду, солевой раствор, водную декстрозу и гликоли.

В общем, соединения, соответствующие предпочтительным вариантам осуществления, будут вводить в терапевтически эффективном количестве любым из принятых способов введения, используемых для агентов, которые служат для аналогичного применения. Действительное количество соединения, соответствующего предпочтительным вариантам осуществления, т.е. активного ингредиента, будет зависеть от множества факторов, таких как тяжесть заболевания, которое лечат, возраст и относительное состояние здоровья пациента, активности используемого соединения, пути и формы введения и других факторов. Лекарственный препарат можно вводить больше чем один раз в день, предпочтительно один или два раза в день. Все из данных факторов входят в компетенцию лечащего врача.

Количество соединения в препарате может варьировать в полном диапазоне, используемом компетентными специалистами в области техники. Могут быть получены настоящие композиции в различных аспектах, как описано в данном контексте, в которых часть дезоксихолевой кислоты лежит в диапазоне приблизительно 0,5-10% в пересчете на массу/основу водного объема или на мас./мас. основу, принимая плотность воды (т.е. соответствие 1:1 между массой и объемом). В другом аспекте настоящие варианты осуществления относятся к описываемым в настоящее время фармацевтическим композициям в концентрациях до точки насыщения разбавителя. Специалист может выбрать степень тиксотропной вязкости на основе условий, таких как концентрация и рН; см., например, статью Миккорайкуау, 8. апй и. МаЬта, СнггеШ 8с1епсе 87: 1666-1683 (2004), с. 1680.

В ряде вариантов осуществления стадия введения включает доставку композиций в данном контексте посредством кожного пластыря, насоса или подкожной депо-формы. В ряде вариантов осуществления стадия введения включает доставку композиций в данном контексте местно или подкожно. В специфических вариантах осуществления стадия введения включает введение местно (например, подкожно или субдермально) в область под глазом, под подбородком, подмышкой, на ягодице, икре, спине, бедре или в области желудка указанного пациента. Введение можно осуществить путем подкожной или чрескожной инъекции.

- 15 020806

Схемы синтеза

Другие примеры полного химического синтеза фармацевтических композиций желчной кислоты и полезных промежуточных соединений представлены ниже.

Данные следующие описания и примеры предусматривают альтернативу экстракции ОСА из организмов млекопитающих или микробных организмов, которые образуют данное соединение в естественных условиях. Способы синтеза 1-6 предназначены для использования в настоящем изобретении для синтеза дезоксихолевой кислоты (ОСА). Способ синтеза 1В и примеры 1-11 показывают синтез ОСА из гидрокортизона.

1. Способ синтеза № 1А из адреностерона через 9(11)-ен или 11,12-ен.

Кортизон (соединение 1.1) на схеме 1А (см. ниже) широко доступен как полностью синтетический материал. Его можно эффективно расщепить с образованием Сп-кетонового соединения при использовании хлорхромата пиридиния (РСС). Данное расщепление до адреностерона (соединение 1.2) может быть также достигнуто при использовании Н1О₄ или висмутата натрия (ΝηΒίΟ₃). Реакция, которая превращает соединение 1.2 в соединение 1.3, представляет собой известный химический процесс. Превращение соединения 1.3 в соединение 1.4 включает монокетализацию. Последующие стадии представляют собой регенерацию 3-кето-4-ена, избирательное восстановление 4,5-ена (Н₂/Р!/ДМФ (диметилформамид)) с получением С₅-в-конфигурации и избирательное восстановление С₃-карбонильной группы до требуемой 3 α-конфигурации с получением соединения 1.5. Введение защитной группы в превращение соединения 1.5 в соединение 1.6 и последующее восстановление продукта дает Сц-в-ол (аксиальная конфигурация), т.е. соединение 1.7, которое подходит для региоселективной элиминации до ключевого 9(11)-ена (т.е. превращения соединения 1.7 в соединение 1.8).

Схема синтеза на данной стадии разветвляется, поскольку соединение 1.7 можно использовать в качестве исходного материала для превращения либо в соединение 1.8, либо в соединение 1.9. Реакция элиминации, используемая для превращения соединения 1.7 в соединение 1.8, является региоселективной вследствие транс-диаксиальной связи Сц-гидроксильной группы с С₉-атомом водорода. Альтернативный способ элиминации для получения изомерного Сц-С1₂-олефина соединения 1.9 является аналогично региоселективным, включая цис-термическую элиминацию (т.е. превращение соединения 1.7 в соединение 1.9).

Схема 1А. Синтез двух С-циклических предшественников С1₂-гидроксильной группы ОСА

Аллильное окисление соединения 1.8 (путем обработки СгО₃ и 3,5-диметилпиразолом) дает енонсодержащее соединение 1.10. Перкислотное окисление соединения 1.9 происходит стереоселективно на α-поверхности стероида с образованием С₁₁.₁₂ эпоксидного соединения 1.11 (см. схему 1А выше). Дан- 16 020806 ные химические превращения дают два ключевых предшественника функциональности С12гидроксильной группы, а именно соединение 1.10 и соединение 2.1 (см. схемы 1А и 2).

Компетентный специалист в области техники будет иметь в виду, что вышеописанный способ с использованием кортизона можно модифицировать, чтобы альтернативно начинать с гидрокортизона, который имеет такой же углеродный скелет и такое же относительное положение атомов кислорода, причем гидрокортизон отличается от кортизона только статусом окисления С-11 несущего кислород атома углерода. Гидрокортизон коммерчески доступен и известны различные способы синтеза данного соединения (см. статью 82С2еЬага с! а1. ЫаШгс Вю1ссЪпо1оду 21:143-149 (февраль 2003)), включая полный химический синтез (см. статью А'ооб\\агб К.В. с! а1. I. Ат. СНст. 8ос. 74: 4223 (1952)). Кетон 1.13 синтезируют, исходя из гидрокортизона 1.12 (схема 1В), посредством гидрогенолиза α,β-ненасыщенной двойной связи с последующим общим восстановлением кетона с использованием борогидрида натрия, чтобы обеспечить возможность расщепления 1,2-диола при использовании ΝαΙΟ.ι с образованием, таким образом, С17-кетона на Ώ-цикле стероидной циклической системы. Последующее окисления хлорхроматом пиридиния (РСС) дает соединение 1.13. Обработка соединения 1.13 Κ-селектридом® с последующим ацетилированием уксусным ангидридом/пиридином дает защищенный спирт 1.15. Последующее олефинирование соединения 1.15 реагентом Виттига дает алкен 1.16, который затем обрабатывают метилпропиолатом и дихлоридом этилалюминия с образованием диена 1.17. После гидрирования обеих двойных связей кетон 1.18 восстанавливают и полученный спиртовой промежуточный продукт элиминируют при обработке 80¾ в пиридине с образованием алкена 1.19. Аллильное окисление алкена 1.19 с помощью СгОэ и восстановление двойной связи в условиях гидрирования дает кетон 1.21. Удаление защитной группы ацетата и окисление полученного в результате спирта дает дикетон 1.22. Восстановление соединения 1.22 с помощью Г1А1Н(О1Ви)э и гидролиз сложного метилового эфира дает ЭСА.

Схема 1В. Синтез ЭСА из гидрокортизона

Дальнейшие превращения соединений 1.10 и 2.1 показаны на схеме 2. Сначала соединение 1.10 модифицируют так, чтобы оно включало надлежащим образом функционализированную С-циклическую систему, идентичную системе ЭСА (схема 2). Стереоселективное восстановление С_п-карбонильной группы дает соединение 2.1 и каталитическое гидрирование 9(11)-двойной связи, присутствующей в соединении 2.1, дает соединение 2.2.

- 17 020806

Схема 2. Введение С1₂-гидроксильной группы с использованием способа аллильного окисления

На схеме 3 представлено превращение эпоксид-содержащего соединения 1.11 в аналогично С₁₂ αгидроксистероидного соединения 2.2, представленного на схеме 2.

Схема 3. Стереоселективное восстановление Сц-С1₂-эпоксида

Как отмечено выше, в обоих из данных способов образуется одинаковое промежуточное соединение 2.2.

Следующей стадией синтеза ИСЛ является модификация Ό-цикла, присутствующего в соединении 2.2, так чтобы он включал Ό-цикл ИСЛ с замещенной боковой цепью (см. схемы 4 и 5).

Схема 4. Снятие защиты и реакция Виттига

Сначала группы С_п-кеталя и С₃-силилового эфира соединения 2.2 гидролизуют. Затем проводят реакцию Виттига для получения соединения 4.2. Превращение соединения 4.2 в соединение 5.1 осуществляют посредством реакции ена. Последующее каталитическое восстановление соединения 5.1 и гидролиз сложного эфира дает ИСЛ (см. схему 5).

Схема 5. Реакция ена и каталитическое восстановление для введения боковой цепи ИСЛ

2. Способ синтеза № 2 из кортизона через адреностерон (способ с использованием ί-стероида, 3,5циклостерина).

Избирательная кетализация адреностерона (соединение 1.2, схема 6) по С₁₇, восстановление борогидридом, мезилирование и гидролиз в буфере дают ί-стероид (3,5-цилостерин), содержащий соединение 6.1. Соединение 6.1 претерпевает образование 9(11)-ена (превращение соединения 6.1 в соединение 6.2, см. схему 6) и аллильное окисление (превращение соединения 6.2 в соединение 6.3, см. схему 6) с последующим восстановлением карбонильной группы с образованием соединения 6.4. Гидролиз ί-стерина и гидрирование дают соединение 6.5, которое можно превратить в ИСЛ способами синтеза, представленными выше в способе синтеза № 1.

- 18 020806

Схема 6. Защита А-В-циклической системы путем образования ι-стероида (т.е. 3,5-циклостерина)

3. Способ синтеза № 3 из гекогенина.

Гекогенин (соединение 7.1, см. схему 7) представляет собой растительный стерин, обнаруживаемый в большом количестве в мексиканском ямсе и других растениях Адауе зрес1ез. Главное преимущество гекогенина в качестве исходного материала для синтеза БСА состоит в том, что он обладает такой функциональностью С12-кислорода, которая присутствует в БСА.

Первая стадия способа синтеза, начинающегося с гекогенина, представляет собой стереоселективное восстановление С^-карбонильной группы в гекогенине (соединение 7.1) до необходимой С^-αконфигурации (превращение соединения 7.1 в соединение 7.2). Затем 3-а-ол, 5(-АВ циклическую систему превращают в 3(-ол, 5р-АВ (превращение соединения 7.1 в соединение 7.2, в соединение 7.3) циклическую систему (см. схему 7). После хорошо известного разложения по Маркеру (см. статью Магкег, Р.Е., РоЬгтаии, Е., 81его1з. ΕΧΙΧ. ОхЫаЬои РгоПис1з о! Загзазародеит. Загзазародеиою АсЫ аиП РеЫеП δиЬзΐаηсез (Стерины. ΕΧΙΧ. Продукты окисления сарсасапогенина. Сарсасапогеновая кислота и родственные субстанции), I. Ат. СЬет. 8ос, 61(8): с. 2072-2077 (1939)) следует превращение соединения 7.2 в соединение 7.3 с получением соединения 7.4. Введение боковой цепи ϋ-цикла (см. схему 8) в соединение 8.2 осуществляют способами, показанными на схемах 4 и 5. Необходимый С_п-кетон в соединении 8.2 формируют путем озонолиза енолацетата соединения 8.1 (см. схему 8). Затем получают БСА из соединения 8.2 аналогично тому, как показано на схеме 5, используя олефинирование и последовательность реакций с еном. Альтернативные способы, начинающиеся с гекогенина, показаны на схемах 9 и 10.

Схема 7. Введение С^-гидроксильной группы, модификация АВ-цикла и расщепление боковой цепи

- 19 020806

Схема 8. Введение боковой цепи

Схема 9. Дитиоэтановый способ получения 3-кето-4-ена

Схема 10А. Образование ОСА через 3-кето-4-ен

4. Способ синтеза № 4 из сапогенинов.

Сапогенины получают при гидролизе сахаридов и дисахаридов, присоединенных к С₃гидроксильной группе сапонинов (т.е. гликозидов стероидов). Они являются широко распространенными продуктами растительной природы. Сапонин существует в естественных условиях в виде спироскелетной структуры, как показано ниже. Кроме того, соединение 10.3 может быть образовано из тигогенина, диосгенина, хлорогенина, смилагенина и гекогенина (соединение 7.1). Авторы считают, что ОСА можно было бы синтезировать из каждого из указанных веществ, а именно из тигогенина, диосгенина, хлорогенина, смилагенина и гекогенина (соединение 7.1). (см. статью Υ. Ма/ш\ Ν. Пашей апс1 Ιτίΐηζ Зопййетет, I. Ат. Сйеш. Зое; 82, 5809 (1960)).

Хотя авторы смогли синтезировать ОСА из гекогенина, они признают, что любой из вышеуказанных сапогенинов мог бы аналогичным образом служить исходным материалом для синтеза ОСА.

- 20 020806

Схема 10В. Способ синтеза из сапонина

5. Способ синтеза № 5 из стигмастерина.

Стигмастерин (соединение 11.1) представляет собой широкодоступный растительный стерин. В качестве исходного материала для синтеза ЭСА он имеет преимущество в том, что он содержит функционализированную систему АВ-цикла и легко отщепляемую группу боковой цепи. Его недостатком является отсутствие необходимой функциональности в С-цикле, важном для синтеза ОСА.

В данном способе синтеза стигмастерин (соединение 11.1) АВ-цикл защищают образованием ίстероида с последующим озонолизом с целью получения боковой цепи на С₁₇-введенном и восстановленном до С₂₄-оле в качестве замаскированной формы карбоксильной группы (см. схему 11). На последующих стадиях генерируют аллильное положение на С₁₂ (см. схему 12). Образование диена В-цикла и окисление ацетатом ртути являются известными способами, и каталитическое восстановление системы В-цикла дает промежуточное соединение, общее с предшествующими способами, описанными выше. Однако в противоположность другим способам боковая цепь уже имеется. Аллильное окисление (превращение соединения 12.4 в соединение 1.20) и стереоселективное восстановление (превращение соединения 1.20 в соединение 1.21) с последующими ранее обсужденными стадиями дает продукт, который превращают в ОСА.

Схема 11. Озонолиз ί-стероида и восстановление боковой цепи

Схема 12. Образование триена и аллильное окисление.

В варианте способа с использованием стигмастерина применяют защиту Дайелса-Алдера диена Вцикла. Это эффективно, поскольку изолирует 9(11)-двойную связь, что предупреждает возможное препятствие на стадиях аллильного окисления (см. схему 13).

- 21 020806

Схема 13. Образование триена и защита Дайелса-Алдера диена В-цикла. Способ синтеза № 6 из эргостерина.

Эргостерин (соединение 14.1) представляет собой широкодоступный исходный материал и может быть использован для получения ЭСА путем адаптации способов, приведенных в данной заявке. Аллильное окисление представляет легкий способ, ведущий к получению функциональности С_п-кислорода (см. схему 14). Преимущество данного способа состоит в том, что его начинают с диена В-цикла. Он сходится со способом с использованием стигмастерина.

Схема 14. Образование триена из эргостерина

Соединения, соответствующие предпочтительным вариантам осуществления, можно получить из легкодоступных исходных материалов при использовании общих способов и процедур. Следует иметь в виду, что когда приводят типичные или предпочтительные условиях осуществления способов (т.е. температуры реакции, время, молярные соотношения реагентов, растворители, давления и т.п.), можно также использовать другие условия осуществления способа, пока не указано иначе. Оптимальные условия реакции могут варьировать в зависимости от конкретных используемых реагентов или растворителя, но данные условия могут быть определены компетентным специалистом в области техники путем рутинных способов оптимизации.

Кроме того, для компетентных специалистов в области техники будет очевидно, что принятые защитные группы могут быть необходимы для того, чтобы препятствовать ряду функциональных групп вступать в нежелательные реакции. Подходящие защитные группы для различных функциональных групп, а также подходящие условия для защиты и снятия защиты с определенных функциональных групп хорошо известны в области техники. Например, множество защитных групп описано в монографии Т.^. Сгеепе апб С.М. ^и!з, Рго1ес1тд Сгоирз ΐπ Огдашс 8уп1Нез13 (Защитные группы в органическом синтезе), 3-е изд., ^Пеу, Νζν Уогк, 1999 и приведенных в ней ссылках.

Исходные материалы и реагенты для реакций, описанных в данном контексте, представляют собой,

- 22 020806 как правило, известные соединения или могут быть получены известными способами или их очевидными модификациями. Например, многие из исходных материалов и реагентов доступны у коммерческих производителей, таких как А1бпсН СЬетюа1 Со. (МПтаикее, ХУ^сопмп, И8А), ВасНет (Тоггапсе, СаПГогта, И8А), Етка-СНет или 81дта (δΐ. Ьошз, Мбззошт, ^А). Другие можно получить с помощью способов или их очевидных модификаций, описанных в стандартной справочной литературе, такой как монографии Иезет апб Иезет'з Кеадейз Гог Огдашс δуйЬе8^8 (Реагенты для органического синтеза), т. 1-15 НоНп ^йеу апб δοη8, 1991), Кобб'з СНеиизЦу оГ СагЬоп сотроипбз (Химия углеродных соединений Родда), т. 1-5 и доп. (ЕШехлег δ№ι^ РиЬПзНегз, 1989), Огдатс КеасНопз (Органические реакции), т. 1-40 НоНп \УПеу апб 8опз, 1991), МагсН'з Абνаηсеб Огдайс СЬет18йу (Перспективы органической химии), НоНп \УПеу апб 8опз, 4 изд.) и Ьагоск'з С’отргеНепзАе Огдайс ТгапзГогтаНопз (Полные превращения органических соединений) (УСН РиЬПзНегз 1пс., 1989).

Перечень фигур, чертежей и иных материалов

На фиг. 1 приведен чертеж, представляющий структуру желчных кислот, включающий систему нумерации атомов углерода скелета желчных кислот;

на фиг. 2 показывают близость дозозависимого снижения выживаемости клеток первичных человеческих адипоцитов при обработке синтетической натрий дезоксихолевой кислотой, соответствующей настоящему изобретению, по сравнению с дезоксихолатом натрия, полученного из крупного рогатого скота (81дта).

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Различные исходные материалы, промежуточные соединения и соединения, соответствующие предпочтительным вариантам осуществления, можно выделить и очистить при необходимости, используя принятые способы, такие как осаждение, фильтрование, кристаллизация, упаривание, отгонка и хроматография. Характеризацию данных соединений можно провести, используя принятые способы, такие как по температуре плавления, масс-спектру, данным ядерного магнитного резонанса и различных других спектроскопических анализов.

Примеры вариантов осуществления стадий для проведения синтеза продуктов способом синтеза № 1, см. схему 1В, описаны более подробно ниже. В табл. 3 описывают сокращения, используемые для представления различных соединений/групп/устройства/способа/свойства в иллюстративных схемах реакций и способах синтеза, описанных в следующих примерах и на протяжении описания.

Таблица 3

АсОН	Уксусная кислота
ΟΑΝ или ΟΗ3ΟΝ	Ацетонитрил
Ас2О	Уксусный ангидрид
АсС1	Ацетилхлорид
ΝΗ40Ι	Хлорид аммония

- 23 020806

Ьс1	Широкий дублет
СНС13	Хлороформ
СгО3	Триоксид хрома
Конц.	концентрированный
ОСА	Дезоксихолевая кислота
ЭСМ (СН2С12)	Дихлорметан
ЭМАР	4-Диметиламинопиридин
ДМФ	Ν, N -ди мети лформам ид
ДМСО	Диметилсульфоксид
ΰ	Дублет
ΰό	Двойной дублет
сП	Двойной триплет
ЕЮН	Этанол
ЕЮАс	Этилацетат
Е1А1С1г	Этилалюминий дихлорид
Г	грамм
Гц	Герц

- 24 020806

ВЭЖХ	Высокоэффективная жидкостная хроматография
НС1	Хлористоводородная кислота
ЬАН	Гидрид лития алюминия
иА1(01Ви)3Н	Гидрид лития три-трет-бутоксиалюминия
ион	Гидроксид лития
Мд8О4	Сульфат магния
МГц	Мегагерц
МеОН	Метанол
мкл	Микролитр
ммоль	Миллимоль
мл	Миллилитр
мм	Миллиметр
мин.	минута
моль	Моль
т	мультиплет
Набл.	Наблюдают
Рб/С	Палладий на угле

- 25 020806

нсю4	Перхлорная кислота
РЮ2	Оксид платины
КВг	Бромид калия
Κ-ΟίΒιι	Трет-бутокоид калия
РСС	Хлорхромат пиридиния
9	Квартет
Вер	Представлено
5	Синглет
№НСО3	Бикарбонат натрия
ΝθΒΗ4	Борогидрид натрия
ИаОН	Гидроксид натрия
Ыа2ЗО4	Сульфат натрия
№Ю4	Перйодат натрия
Н25О4	Серная кислота
ТГФ	Т етрагидрофуран
5ОС12	Тионилхлорид
ТЭА	Триэтиламин
ТФА	Трифаторуксусная кислота

ТСХ	Тонкослойная хроматография
Масс.	Масса

Общие положения.

Манипуляции с чувствительными к кислороду и влаге материалами проводят с использованием двугорлых высушенных на огне колбах в атмосфере аргона. Колоночную хроматографию проводят, используя силикагель §Е-Маке (60-120 меш), силикагель §рес1госЬет (230-400 меш) или оксид алюминия 90-пеи!га1 (δΌ-Рше СЬет. Ь-Ιά.. Ιηάία). Аналитическую тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводят на пластинках Мегск К1е8е1де1 60 Р₂₅₄ (0,25 мм) (Мегск & Со., ^ЬЪеЬоике δίαΐίοη, N1). Визуализацию пятен детектируют либо с помощью лампы УФ-света (254 нм), либо путем обработки раствором серной кислоты (5%) и п-анисового альдегида (3%) в этаноле.

Прибор.

Анализ соединений и продуктов реакции, полученных согласно схемам реакции и способам синтеза, описанных в данном контексте, можно осуществить на приборе и оборудовании, описанных ниже.

Ядерный магнитный резонанс (ЯМР).

Спектры протонного и углеродного ядерного магнитного резонанса (данные ¹Н ЯМРспектроскопии и данные ¹³С ЯМР-спектроскопии) регистрируют на спектрометре Уапап Мегсшу-Оет1т 200 (данные ¹Н ЯМР-спектроскопии, 200 МГц; данные ¹³С ЯМР-спектроскопии, 50 МГц) или Уапап Мегсигу-1поуа 500 (данные ¹Н ЯМР-спектроскопии, 500 МГц; данные ¹³С ЯМР-спектроскопии, 125 МГц) (Уапап, 1пс., Ра1о А11о, СА) с использованием резонансов растворителей в качестве внутренних стандартов (данные ¹Н ЯМР-спектроскопии, СНС1₃ при 7,26 промиль или ДМСО при 2,5 промиль и ДМСО-Н₂О при 3,33 промиль; данные ¹³С ЯМР-спектроскопии, СЭСЕ при 77,0 промиль или ДМСО при 39,5 промиль). Данные ¹Н ЯМР-спектроскопии представляют следующим образом: химический сдвиг (δ, промиль), мультиплетность (8=синглет, й=дублет, 1=триплет, ц=квартет, Ьг=широкий, т=мультиплет), константы связывания (Гц) и интеграция.

- 26 020806

Инфракрасная спектроскопия.

Инфракрасные спектры (ПФ-ИК-спектр (преобразование Фурье-инфракрасный спектр)) получают на приборе модели 1АЗСО-460' Цаксо, 1пс., Еак!оп, МИ). Масс-спектры получают с помощью спектрометра Регкш Е1тег, АР1-2000 крес1готе1ег (Регкш Е1тег, 1пс., Vа1ιкат. МА), используя вариант ЕЗ+ (электроспрей).

Температура плавления.

Температуры плавления определяют, используя прибор для измерения температуры плавления ЬАВ-1ИИ1А (ЬаЪшФа 1пк1гитеп15 Ρνΐ. Ь!б., 1пб1а) и не корректируют.

Высокоэффективная жидкостная хроматография.

ВЭЖХ-хроматограммы регистрируют, используя прибор модели ЗН1МАИ2И-2010 с детектором РИА (ЗНтаб/а Согр., Иран).

Оптическая активность.

Специфические оптические вращения ([а]_с) определяют, используя прибор 1АЗСО-1020 при длине волны 589 нм (1аксо, 1пс., ЕаЧои МИ) и не корректируют.

Химические реактивы.

Пока не указано иначе, коммерчески доступные реагенты используют без очистки. Диэтиловый эфир и ТГФ перегоняют из натрий/бензофенонкетила. Безводные ДМФ, ИСМ, пентан и гексан получают перегонкой из СаН₂.

Пример 1. Получение андростан-3,11,17-триона (1.13).

10% Рб/С (2,5 г, 5 мас.%) добавляют к раствору гидрокортизона (соединение 1.12) (50,0 г, 138,12 ммоль) в ДМФ (250 мл). Полученную в результате суспензию гидрируют в аппарате Парра (50 ρκί (3600 г/см²)) в течение 12 ч. После полного исчезновения исходного материала, как удостоверяются с помощью ТСХ, неочищенную реакционную смесь фильтруют через маленький слой целита и удаляют растворитель под вакуумом. Неочищенный продукт (48,0 г) получают в виде бесцветного твердого вещества.

№·ιΒΗ₄ (2,1 г, 55,3 ммоль) добавляют к раствору вышеописанного неочищенного продукта (48,0 г, 131,86 ммоль) в ЕЮН (500 мл) и СН₂С1₂ (500 мл). Через 1 ч добавляют ацетон (50 мл) и воду (150 мл), затем ИаЮ₄ (70,5 г, 329,6 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи.

Добавляют дистиллированную воду (500 мл) и экстрагируют смесь этилацетатом (3x250 мл). Слой этилацетата пропускают через слой силикагеля и упаривают раствор с получением 38 г продукта в виде бесцветного твердого соединения. Неочищенный продукт подвергают дальнейшему окислению без очистки.

РСС (40,4 г, 187,5 ммоль) добавляют к раствору вышеописанного неочищенного продукта в СН₂С1₂ (400 мл) в 3 равных порциях в течение 30 мин. Полученную в результате реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение приблизительно 3-4 ч. После завершения реакции, которую мониторируют с помощью ТСХ, неочищенную реакционную смесь последовательно фильтруют через слои целита и силикагеля и неочищенный материал очищают колоночной хроматографией [59(Д)х700(Дл) мм, силикагель 60-120 меш, 150 г], элюируя системой этилацетат/гексан (3:10) [фракции по 50 мл, элюция 10 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ с обработкой п-анисовым альдегидом; Вг для соединения 1.13=0,37 и К_г для соединения 1.12=0,05 в ЕЮАс/гексан (1:1)] с получением диастереомерного соединения 1.13 (33,0 г, выход 79%) в виде бесцветного твердого соединения.

Полученный неочищенный материал очищают препаративной ВЭЖХ, используя колонку Ркепотепех Бипот С18 (250x30,0 мм, 10 мк) и изократную элюцию СН₃СИ:Н₂О (12:13) при скорости потока 25 мл/мин во фракциях по 15 мл. Препаративную ВЭЖХ используют только для очистки, но не для анализа. В табл. 4 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 4

Данные ’Н	ά = 2,76 (сИ, ύ = 4,0, 15,0 Гц, 1 Н>, 2,62-2,35 (т, 5Н),
ЯМР-спектроскопи	2,33-2,24 (т, 1Н), 2,23-2,05 (т, 4Н), 2,02-1,88 (т,
и (50МГц, сосу	ЗН), 1,81 (Μ, ϋ = 14,0 Гц, 2Н), 1,72-1,61 (т, 1Н), 1,57-1,48 (т, 1Н), 1,47-1,32 (т, 2Н), 1,26 (5, ЗН), 0,86 (5, ЗН)

- 27 020806

Данные 13С	6 = 216,9, 211,8, 208,4, 52,3, 50,3, 50,2, 50,0, 44,5,
ЯМР-спектроскопи	41,9, 37,1, 36,0, 35,9, 35,8, 34,3, 25,6, 25,0, 22,2,
и (125 МГц, СОСУ	21,3, 14,5
Масса (т/ζ)	303,2 [М+ + 1], 320,1 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3443, 2916, 1729, 1705, 1466, 1379, 1044 см’'
тп	128,9-131°С (из СН2С12/Гексан) (показано); 128-131 °С (см. статью Е.Сазр! Л Огд. СИет., 24, 669 (1959))
(σ]„	+ 139 (с = 1 в СНСу.
Чистота по ВЭЖХ	98,6%, время удерживания = 16,61, (НурегзН ЕЮ5 С18; 250 х 4,6 мм, 5мк), ΑΟΝ: 5 мМ ТЭА рН-2,5 с НСЮ4 (Градиент), поглощение при 205 нм

Пример 2. 3в-Гидроксиандростан-11,17-дион (1.14).

К-селектрид® (98,39 мл, 98,01 ммоль, 1 М раствор в ТГФ) добавляют к раствору соединения 1.13 (33,0 г, 109,27 ммоль) в ТГФ (330 мл) в течение 15 мин в инертной атмосфере при -78°С и перемешивают в течение приблизительно 3-4 ч при -78°С. Реакционную смесь гасят водным раствором Ν;·ιΟΗ (2 М, 70 мл). Неочищенную реакционную смесь разводят этилацетатом (500 мл) и органический слой промывают водой (3x75 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушат над МдЗО₄ (75 г).

Растворитель удаляют под вакуумом с получением 33 г неочищенного материала. Неочищенный продукт подвергают ацетилированию без очистки.

Очистка неочищенного материала.

Неочищенный материал очищают колоночной хроматографией [29(Д(диаметр))х600(Дл(длина)) мм, силикагель 230-400 меш, 200 г], элюируя системой этилацетат/гексан (1:4) [фракции по 25 мл, элюция 5 мл/мин, мониторируют по ТСХ с обработкой п-анисовым альдегидом; Р_Г для соединения 1.14=0,3 и Р_Г для соединения 1.13=0,37 в Е!ОАс/гексане (1:1)] с получением соединения 1.14. В табл. 5 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 5

Данные ’Н ЯМР-спектроскопии (500 МГц , СОС13)	δ = 4,08 ($, 1Н ), 2,53 (ц, ϋ = 9,0 Гц, 1Н), 2,42 (ό, ΰ = 13,0 Гц, 1Н), 2, 34-2,21 (т, ЗН), 2,11-2,04 (т, 1Н), 1,98-1,91 (т, ЗН), 1,88-1,59 (т, 6Н), 1,57-1,26 (т, 6Н), 1,21 (з, ЗН), 0,82 (5, ЗН)
Данные 13С ЯМР-спектроскопии (125 МГц, СОС13)	4= 217,4, 209,1, 66,3, 51,6, 50,6, 50,5, 37,1, 36,2, 35,9, 34,8, 33,5, 28,8, 28,5, 25,7, 25,6, 23,6, 21,5, 14,5
Масса (т/ζ)	305,0 [М+ + 1], 322,0 [М+ + 18)
ИК-спектр (КВг)	3519, 2928, 1735, 1697, 1454, 1379 см’'
тп	176,6-180,5°С
	+ 125 (с = 1 в СНСу

Пример 3. 3в-гидроксиандростан-11,17-дион ацетат (1.15).

Уксусный ангидрид (16,6 г, 162,8 ммоль) добавляют к раствору соединения 1.14 (33,0 г, 108,55 ммоль) в пиридине (150 мл) при 0°С в инертной атмосфере. Полученную в результате реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды. После завершения реакции, как подтверждают с помощью ТСХ, пиридин и оставшийся уксусный ангидрид удаляют под вакуумом.

- 28 020806

Неочищенный остаток разводят этилацетатом (500 мл) и промывают водой (3x150 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушат над Мд8О4 (75 г). Растворитель упаривают под вакуумом и неочищенный материал очищают колоночной хроматографией [59(Д)х800(Дл) мм, силикагель 60-120 меш, 150 г], элюируя системой этилацетат/гексан (1:10) [фракции по 25 мл, элюция 10 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ с обработкой п-анисовым альдегидом; Кр для соединения 1.15=0,38 и Кр для соединения 1.14=0,1 в системе Е!ОАс/гексан (3:7)] с получением соединения 1.15 (19,0 г, выход 66,4%) в виде бесцветного твердого соединения. В табл. 6 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 6

Данные 1Н	δ = 5,03 (з, 1 Η), 2,53 (ύύ, ΰ = 9,5, 19,0 Гц,
ЯМР-спектроскопии (500	1 Η), 2,42 (ά, ϋ = 10,0 Гц, 1 Η), 2,36-2,31 (т,
МГц, СОС13):	ЗН), 2,25 (άά, ϋ = 9,5, 19,0 Гц, ΙΗ), 2,10-2,06 (т, 1Н), 2,04 (δ, ЗН), 1,96-1,91 (т, ЗН), 1,81-1,69 (т, 2Н), 1,63-1,57 (т, ЗН), 1,50 (СЮ, ϋ = 3,0, 14,5 Гц, 1Н), 1,36 (ά, ϋ = 9,5 Гц, ЗН), 1,27-1,22 (т, 1Н), 1,20 (δ, ЗН), 0,82 (5, ЗН)
Данные 13С	δ = 217,2, 208,9, 170,4, 69,7, 51,5, 50,5,
ЯМР-спектроскопии (125	50,4, 37,9, 36,1, 35,9, 34,5, 30,6, 29,6, 29,5,
МГц, СОС13)	25,5, 25,4, 25,3, 23,4, 21,4, 21,3, 14,5
Масса (т/ζ)	347,1 [М+ + 1], 364,1 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3455, 2927, 1737,6, 1720,2, 1707,7, 1259, 1244 см’1
тп	156-158°С
Мо	116 (с = 1 в СНС!3)

Пример 4. (7)-3р-Гидрокси-5р-прег-17(20)-ен-11-он ацетат (1.16).

трет-Бутоксид калия (159,28 мл, 159,2 ммоль, 1 М раствор в ТГФ) по каплям добавляют к раствору бромида этилтрифенилфосфония (61,16 г, 164,8 ммоль) в ТГФ (150 мл) в течение 1 ч в инертной атмосфере при -5°С. Полученную в результате окрашенную в темно-розовый цвет реакционную смесь нагревают до 10-15°С и перемешивают в течение дополнительного 1 ч при той же температуре. Раствор соединения 55 (19,0 г, 54,9 ммоль) в ТГФ (50 мл) медленно вводят в вышеуказанную суспензию Виттига при -5°С. Раствор перемешивают в течение дополнительных 10-20 мин и дают реакционной смеси медленно нагреться до температуры окружающей среды.

Перемешивание продолжают в течение приблизительно 3-4 ч. После полного исчезновения исходного материала, что подтверждают с помощью ТСХ, реакционную смесь гасят насыщенным водным раствором ΝΉ^1 (75 мл). Водный слой экстрагируют Е!ОАс (2x150 мл), объединенные органические экстракты промывают насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушат над Мд8О4 (75 г). Растворитель удаляют под вакуумом и неочищенный материал очищают колоночной хроматографией [49(Д)х600(Дл) мм, силикагель 60-120 меш, 300 г], элюируя системой этилацетат/гексан (1:20) [фракции по 25 мл, элюция 10 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ с обработкой п-анисовым альдегидом; Кр для соединения 1.16=0,54 и Кр для соединения 1.15=0,06 в Е!ОАс/гексане (1:6)] с получением соединения 1.16 (15,5 г, выход 78,8%) в виде густой бесцветной жидкости, которая медленно затвердевает через 1-2 дня при 0°С. В табл. 7 описывают измеряемые свойства продукта.

- 29 020806

Таблица 7

Данные 1Н	δ = 5,20-5,15 (т, 1Н), 5,03 (5, 1Н), 2,86 (0,
ЯМР-спектроскопии (500	ΰ = 10,0 Гц, 1Н), 2,60 (ΰ, ϋ = 10,0 Гц, 1Н),
МГц, сосу	2,46-2,28 (т, 5Н), 2,01 (8, ЗН), 1,94-1,62 (т, 5Н), 1,60-1,52 (т, 6Н), 1,48-1,45 (т, 1Н), 1,41-1,36 (т, 4Н), 1,20 (5, ЗН), 0,82 (8, ЗН)
Данные 13С	6 = 210,9, 170,5, 147,2, 114,7, 70,0, 56,1,
ЯМР-спектроскопии (125	55,6, 51,5, 47,4, 37,9, 35,9, 34,4, 31,6,
мгц, сосу	30,7, 29,8, 26,4, 25,9, 25,5, 24,0, 23,5, 21,3, 17,9, 12,8
Масса (т/ζ)	359,2 [М+ + 1], 376,2 [М+ + 18]
ИК-спектр (СНСу	3421, 2928, 1734, 1704, 1377, 1243 см’1
ТП	88,5-91,2°С
[<?]0	+30 (с=1 вснсу

Пример 5. Метил (Е)-3в-гидрокси-5в-хола-16(17),22(23)-диен-24-оат ацетат (1.17).

Метилпропиолат (9,68 г, 114,95 ммоль) добавляют к раствору соединения 1.16 (16,5 г, 46 ммоль) в

СН₂С1₂ (220 мл) при 0°С. Реакционную смесь нагревают до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 1 ч в инертной атмосфере. Этилалюминий дихлорид (17,5 г, 137,8 ммоль) по каплям вводят в вышеуказанную смесь при 0°С и полученную в результате реакционную массу снова нагревают до температуры окружающей среды и перемешивают в течение ночи. После завершения реакции, как удостоверяются с помощью ТСХ, неочищенную реакционную смесь гасят ледяной водой (100 мл) и водный слой экстрагируют ЕЮАс (3x150 мл). Объединенный органический слой промывают насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушат над М§§О₄ (50 г). Растворитель удаляют под вакуумом и неочищенный материал очищают колоночной хроматографией [49(Д)х600(Дл) мм, силикагель 60-120 меш, 300 г], элюируя системой этилацетат/гексан (1:7) [фракции по 15 мл, элюция 10 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ и проводят детекцию либо с помощью лампы УФ-света (254 нм), либо обработкой ранисовым альдегидом; Р_£ для соединения 1,17=0.36 и Р_£ для соединения 1.16=0,54 в ЕЮЛс/гексане (1:6)] с получением соединения 1.17 (16 г, выход 79%) в виде бесцветного полутвердого вещества. В табл. 8 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 8

Данные ’н ЯМ Р-спектроскопи и (500 МГц, СОСУ

й = 6,89 (сЮ, 3 = 8,0, 16 Гц, 1Н), 5,81 Щ, й = 15 Гц, 1Η), 5,48 (5, 1Н), 5,03 (8, 1Η), 3,73 (з, ЗН), 2,95 (1, й = 6,5 Гц, 1Η), 2,45-2,36 (т, 2Η), 2,30-2,17 (т, 2Η), 2,04 (з, ЗН), 2,00-1,79 (т, 5Н), 1,58 (8, ЗН), 1,49-1,18 (т, 9Н), 1,16 (з, ЗН), 0,70 (5, ЗН)

- 30 020806

Данные ,3С	δ = 209,7, 170,1, 166,6, 154,4, 152,3, 124,5, 119,1,
ЯМР-спектроскопи	69,7, 56,3, 53,8, 52,3, 51,1, 49,8, 37,9, 35,7, 35,0,
и (125 МГц, СЭСу	34,4, 30,5, 30,4, 29,6, 26,2, 25,6, 25,2, 23,3, 21,1, 19,2, 17,3
Масса (т/ζ)	443,0 [М+ + 1], 460,1 [М+ + 18]
ИК-спектр (СНСу	3438, 2930, 1729, 1706, 1653, 1448, 1435, 1243, 1022 см·'
[До	+59 (с = 1 в СНС13)
Чистота по ВЭЖХ	94,4%; время удерживания = 28,86, (гогЬах 5В, С18; 250 х 4,6 мм, 5 мк), ΑΌΝ: 5 мМ ТЭА рН-2,5 с помощью НСЮ4 (Градиент); поглощение при 205 нм

Пример 6. Метил 3в-гидрокси-5в-холан-11 -он-24-оат ацетат (1.18).

10% Рб/С (2,9 г, 20 мас.%) добавляют к раствору соединения 1.17 (14,5 г, 32,8 ммоль) в Е!ОАс (150 мл). Полученную в результате суспензию гидрируют в аппарате Парра (50 ρδί (3600 г/см²)) в течение 12 ч. После полного исчезновения исходного материала, как удостоверяются с помощью ТСХ |К₍- для соединения 1.18=0,43 и К.£ для соединения 1.17=0,43 в системе Е!ОАс/гексан (1:3); однако только соединение 1.17 является УФ-активным из-за присутствия конъюгированного сложноэфирного хромофора], неочищенную реакционную смесь фильтруют через маленький слой целита и растворитель удаляют под вакуумом с получением соединения 1.18 (14 г, выход 95,7%) в виде бесцветного твердого соединения. В табл. 9 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 9

Данные ’Н	δ = 5,03 (5, 1Н), 3,73 (5, ЗН), 2,56 (ύ, ϋ = 10 Гц,
ЯМР-спектроскопии	1Н), 2,38-2,19 (т, 5Н), 2,04 (в, ЗН), 1,86-1,13
(500 МГц, СЭСу	(т, 20Н), 1,12 (в, ЗН), 0,86 (з, ЗН), 0,62 (з, ЗН)
Данные ,3С	6= 211,3, 174,3, 170,5, 70,0, 58,3, 55,7, 55,0,
ЯМР-спектроскопии	51,4, 50,8, 46,8, 37,9, 36,7, 35,0, 34,3, 30,9,
(125 МГц, СЭСу	30,7, 30,7, 29,7, 28,3, 26,6, 25,9, 25,5, 23,6, 23,5, 21,4, 17,9, 12,7
Масса (т/ζ)	447,1 [М+ + 1], 464,1 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3449, 2927, 1734, 1704, 1381, 1262, 1243 см'’
ТП	174,2-175,7°С (из СН2С12/Гексана) (Наблюдают); 174,8-176,2°С (Показано)
[До	+39 (с = 1 в СНС13)

Пример 7. Метил 3в-гидрокси-5в-хол-9(11)-ен-24-оат ацетат (1.19).

Р!О₂ (5,0 г, 100 мас.%) добавляют к раствору соединения 1.18 (5,0 г, 11,2 ммоль) в Е!ОАс (75 мл) в присутствии каталитического количества АсОН (2,0 мл). Полученную в результате суспензию гидрируют в аппарате Парра (70 ρδί (50400 г/см²)) в течение приблизительно 14-16 ч. После завершения реакции неочищенную смесь фильтруют через маленький слой целита и растворитель удаляют под вакуумом. Неочищенный продукт используют для исключения реакции без дальнейшей очистки.

8ОС12 (1,98 г, 16,78 ммоль) по каплям вводят в раствор вышеуказанного неочищенного материала в пиридине (100 мл) при 0°С. Полученную в результате реакционную смесь нагревают до температуры окружающей среды и перемешивают в течение приблизительно 1 ч. После завершения реакции, как удостоверяются с помощью ТСХ, пиридин удаляют под вакуумом. Неочищенный остаток разводят этилаце- 31 020806 татом (100 мл) и промывают водой (2x50 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушат над Мд§0₄ (40 г). Растворитель упаривают под вакуумом и неочищенный материал очищают колоночной хроматографией [49(Д)х600(Дл) мм, силикагель 60-120 меш, 120 г], элюируя системой этилацетат/гексан (1:10) [фракции по 10 мл, элюция 5 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ с обработкой п-анисовым альдегидом; Кг для соединения 1.19=0,51 и Кг для соединения 1.18=0,22 в ЕЮАс/гексане (1:6)] с получением соединения 1.19 (4,1 г, выход 85,4%) в виде бесцветного твердого соединения. В табл. 10 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица10

Данные 1Н ЯМР-спектроскопии (500 МГц, СОС!3)

6 = 5,33 (8, 1Н). 5,03 (5, 1Н), 3,66 (3, ЗН), 2,37-2,32 (гл, 1Н), 2,46-2,21 (т, 1Н), 2,11-2,04 (т, 1Н), 2,03 (з, ЗН), 1,99-1,10 (т, 22Н), 1,07 (з, ЗН), 0,92 (б, ΰ = 7,0 Гц, ЗН), 0,58 (з, ЗН)

Данные 13С	ί= 174,6, 170,6, 140,1, 118,9, 71,2, 56,1, 53,3,
ЯМР-спектроскопии	51,3, 42,0, 40,9, 38,9, 37,3, 36,4, 35,2, 31,9,
(125 МГц, СОС[3)	31,4, 31,0, 30,9, 30,1,28,2, 26,9, 26,2, 26,1, 25,3, 21,4, 17,9, 11,6
Масса (т/ζ)	448,2 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3447, 2935, 1735, 1379, 1261, 1245 см’1
тп	188,6-191,2°С (из системы СН2С12/Гексан) (Наблюдают); 174-175°С (Представлено)
Мс	+ 37 (с = 1 в СНС!3)

Пример 8. Метил 3в-гидрокси-5в-хол-9(11)-ен-12-он-24-оат ацетат (1.20).

СгО₃ (8,0 г, 100 мас.%, 80,0 ммоль) добавляют к раствору соединения 1.19 (8,0 г, 18,6 ммоль) в АсОН (150 мл). Полученную в результате реакционную смесь нагревают при 60°С в течение приблизительно 24-36 ч. После полного исчезновения предшественника уксусную кислоту упаривают под вакуумом и неочищенный материал растворяют в диэтиловом эфире (400 мл). Органический слой промывают водой (2x100 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл) и сушат над Мд§0₄ (40 д). Растворитель удаляют под вакуумом и неочищенный материал очищают колоночной хроматографией [49(Д)х600(Дл) мм, силикагель 60-120 меш, 120 г], элюируя системой этилацетат/гексан (1:5) [фракции по 10 мл, элюция 3 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ и проводят детекцию с помощью лампы УФ-света (254 нм); К_г для соединения 1.20=0,28 и К_г для соединения 1.19=0,61 в системе ЕЮАс/гексан (1:4)] с получением соединения 1.20 (5 г, выход 60,5%) в виде бесцветного твердого соединения. В табл. 11 описывают измеряемые свойства продукта.

- 32 020806

Таблица 11

Данные 1Н ЯМР-спектроскопии (500 МГц, СОС13)	6 = 5,72 (5, 1Н), 5,04 (8, 1Н), 3,66 (8, ЗН), 2,41-2,27 (т, ЗН), 2,03 (ε, ЗН), 1,94-1,58 (т, 9Н), 1,48-1,30 (т, 11Н), 1,21 (з, ЗН), 1,02 (ό, ΰ = 6,5 Гц, ЗН), 0,91 (3, ЗН)
Данные ,3С	δ = 205,1, 174,5, 170,4, 164,2, 123,1, 70,3, 53,4,
ЯМР-спектроскопии	53,0, 51,3, 47,2, 40,2, 37,7, 37,3, 35,2, 32,1, 31,4,
(500 МГц, СЭСу	31,0, 30,6, 30,2, 27,3, 26,5, 25,9, 25,6, 24,1, 21,3, 19,4, 10,6
Масса (т/ζ)	445,0 [М+ + 1], 462,1 [М+ + 18]
ИК-спектр	3447, 2927, 2361, 2339, 1736, 1678, 1367, 1250 см'1
ТП	185,8-188,1°С (из СН2С12/Гексана)
	+62 (с = 1 в СНСу
Чистота по ВЭЖХ	94,1%; время удерживания = 23,89 (НурегзП Βϋ5 С18, 250 х 4,6 мм, 5мк, СН3СИ : 5 мМ ТЭА, рН-2,5 ννϊΐΐπ НСЮ4 (Градиент); поглощение при 240 нм

Пример 9. Метил 3в-гидрокси-5а-холан-12-он-24-оат ацетат (1.21).

10% Рк/С (30 мг, 10 мас.%) добавляют к раствору соединения 1.20 (300 мг, 0,675 ммоль) в ЕЮАс (30 мл). Полученную в результате суспензию гидрируют в аппарате Парра (50 рз1 (3600 г/см²) в течение приблизительно 16 ч. После полного исчезновения исходного материала по данным ТСХ [В_Г для соединения 1.21=0,44 и К_Г для соединения 1.20=0,44 в системе ЕЮАс/гексан (3:7); однако только соединение 1.20 представляет собой УФ-активную форму из-за своего енонового хромофора; дополнительную обработку соединения 1.20 не проводят, но 1.21 является чистым], неочищенную реакционную смесь фильтруют через маленький слой целита и растворитель удаляют под вакуумом с получением соединения 1.21 (270 мг, выход 90%) в виде бесцветного твердого соединения. В табл. 12 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 12

Данные ’Н	δ = 5,04 (ε, 1Н), 3,64 (5, ЗН), 2,52-2,47
ЯМР-спектроскопи	(т, 1Н), 2,38-2,25 (т, ЗН), 2,23-2,03 (т, 2Н), 2,02(5,
и (500 МГц, СОСУ	ЗН), 1,99-1,71 (т, 8Н), 1,49-1,11 (т, 12Н), 1,05 (5, ЗН), 1,01 (з, ЗН), 0,85-0,84 (ά, ύ = 7,0 Гц, ЗН)
Данные ,3С	δ = 214,7, 174,6, 170,5, 70,2, 58,7, 57,5, 51,4,
ЯМР-спектроскопи	46,5, 43,7, 38,4, 36,9, 35,7, 35,6, 35,5, 31,3, 30,7,
и (125 МГц, СЭСу	30,5, 27,5, 26,4, 25,9, 24,8, 24,3, 23,2, 21,4, 18,6, 11,7

Масса (т/ζ)	447,0 [М+ + 1], 464,0 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3447, 2935, 1735, 1704, 1260, 1241 см1
ТП	179,6-182,7°С (из СН2С12/Гексана)
Мо	+69 (с = 1 в СНС!3)

- 33 020806

Пример 10. Метил 5в-хола-3,12-дион-24-оат (1.22).

ΝαΟΗ (73 мг, 1,8 ммоль) добавляют к раствору соединения 2.1 (270 мг, 0,6 ммоль) в МеОН (10 мл). Полученную в результате реакционную смесь перемешивают в течение приблизительно 2 ч при температуре окружающей среды. После завершения реакции, как удостоверяются с помощью ТСХ, МеОН удаляют под вакуумом и неочищенный продукт разводят этилацетатом (20 мл). Органический слой промывают насыщенным солевым раствором (10 мл) и сушат над М§80₄ (5,0 г). Растворитель удаляют под вакуумом и неочищенный материал используют в реакции эстерификации без очистки.

З0С1₂ (0,1 мл, 1,35 ммоль) по каплям добавляют к раствору вышеуказанного неочищенного материала в МеОН (10 мл) при 0°С. Полученную в результате реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение приблизительно 1 ч. После завершения реакции МеОН удаляют под вакуумом. Неочищенную реакционную смесь разводят ЕЮАс (30 мл) и органический слой промывают водой (3x10 мл), насыщенным солевым раствором (15 мл) и сушат над М§30₄ (5 г).

Растворитель упаривают под вакуумом и неочищенный продукт используют для реакции окисления без очистки.

РСС (1,0 г, 4,6 ммоль) вводят в 3 равных порциях в раствор полученного сложного эфира в СН₂С1₂ (25 мл) в течение приблизительно 5 мин. Полученную в результате реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение приблизительно 3-4 ч. После завершения реакции, как удостоверяются с помощью ТСХ, неочищенную реакционную смесь фильтруют через слой целита. Растворитель удаляют под вакуумом и неочищенный материал очищают колоночной хроматографией [19(Д)х400(Дл) мм, силикагель 60-120 меш, 45 г], элюируя системой этилацетат/гексан (1:6) [фракции по 10 мл, элюция 5 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ с обработкой п-анисовым альдегидом; Р_£ для соединения 1.22=0,57 и Р_£ для соединения 1.21=0,71 в системе ЕЮАс/гексан (2:3)] с получением соединения 1.22 (170 мг, выход 70,8%) в виде бесцветного твердого соединения. В табл. 13 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 13

Данные 1Н	6 = 3,66 (5, ЗН), 2,64-2,57 (т, 2Н), 2,55-2,19 (т,
ЯМР-спектроскопи	4Н), 2,17-2,02 (т, ЗН), 1,99-1,21 (т, 17Н), 1,11 (8,
и (500 МГц, СОС1Э)	ЗН), 1,05 (5, ЗН), 0,86 (ΰ, ϋ = 10,0 Гц, ЗН)
Данные 13С	<5 = 213,9, 211,8, 174,5, 58,5, 57,5, 51,4, 46,5, 44,2,
ЯМР-спектроскопи	43,7, 42,1, 38,3, 36,9, 36,8, 35,6, 35,4, 31,3, 30,5,
и (125 МГц, СОС13)	27,4, 26,6, 25,4, 24,3, 22,1, 18,5, 11,7
Масса (т/ζ)	403,1 [М+ + 1], 420,2 [М+ + 18]

ИК-спектр (КВг)	3457, 2925, 1737, 1708, 1216, 1176 см’1
ТП	133,7-135,9°С (из СНгС12/Гексана) (Набл,); 136,5-137,5°С (Предст,)
Мр	+79 (с = 1 в СНСу

Пример 11. Метилдезоксихолат (1.22-сложный эфир).

ЫА1Н (О-1Би) (332 мг, 1,3 ммоль,) вводят по каплям в раствор соединения 1.22 (150 мг, 0,37 ммоль) в ТГФ (10 мл) в инертной атмосфере при температуре окружающей среды. После перемешивания в течение приблизительно 4-5 ч реакционную смесь гасят водной НС1 (2 мл, 1 Ν) и неочищенную смесь разводят ЕЮАс (30 мл), промывают водой (15 мл), насыщенным солевым раствором (10 мл) и сушат над М§30₄ (3 г). Растворитель удаляют под вакуумом и неочищенную массу очищают колоночной хроматографией [29(Д)х500(Дл) мм, силикагель 230-400 меш, 50 г], элюируя Ме0Н/СН₂С1₂ (1:20) [фракции по 5 мл, элюция 3 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ с обработкой п-анисовым альдегидом; Р_£ для соединения 1,22-сложный эфир=0,42 и Р_£ для соединения 1.22=0,85 в Ме0Н/СН₂С1₂ (1:9)] с получением метилдезоксихолата (соединение 1.22-сложный эфир) (110 мг, выход 72,8%) в виде бесцветного твердого соединения. В табл. 14 описывают измеряемые свойства продукта.

- 34 020806

Таблица 14

Данные ’Н	δ = 3,97 (5, 1Н), 3,65 (5, ЗН), 3,63-3,59 (т, 1Н),
ЯМР-спектроскопии	2,39-2,33 (т, 1Н), 2,25-2,19 (т, 1Н), 1,88-0,97
(500 МГц, СОС13)	(т, 24Н), 0,95 (й, 9 = 6,0 Гц, ЗН), 0,90 (в, ЗН), 0,67(5, ЗН)
Данные ’3С	δ = 174,7, 73,1, 71,7, 51,4, 48,2, 47,3, 46,5, 42,1,
ЯМР-спектроскопии	36,4, 36,0, 35,2, 35,1, 34,1, 33,6, 31,1, 30,9,
(125 МГц, СОС13)	30,4, 28,6, 27,4, 27,1, 26,1, 23,6, 23,1, 17,3, 12,7
Масса (т/ζ)	407,1 [М+ + 1], 424,2 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3419, 2937, 2864, 1740, 1724, 1448, 1377, 1043 см'1
ТП	58,0-60,0оС (при перекристаллизации)
Мо	+36 (с = 1 в снсу

Пример 11. Дезоксихолевая кислота.

Раствор ЫОН (23 мг, 0,55 ммоль) в Н₂О (2,0 мл) добавляют к раствору 1.22-сложного эфира (110 мг, 0,27 ммоль) в ТГФ (4 мл). Полученную в результате реакционную смесь перемешивают в течение приблизительно 2-3 ч при температуре окружающей среды. После исчезновения сложного эфира по данным ТСХ [К_£ для соединения ОСА=0,35 и К_£ для соединения 1.22-сложного эфира=0,42 в МеОН/СН₂С1₂ (1:9)] неочищенную реакционную смесь разводят этилацетатом (10 мл) и тритурируют насыщенным солевым раствором для получения ясного отделения органического слоя. Органический слой промывают насыщенным раствором Ν4₄Ο (10 мл) и сушат над М§8О₄ (3,0 г). Растворитель удаляют под вакуумом и удаляют какие-либо следы воды азеотропированием толуолом (3x5 мл) с получением дезоксихолевой кислоты (ОСА) (100 мг, выход 94,3%) в виде бесцветного твердого соединения. В табл. 15 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 15

Данные ’Н ЯМР-спектроскопии (500 МГц, ДМСО)	δ = 3.77 (в, 1Н), 3.38-3.33 (т, 1Н), 2.20-2.15 (т, 1Н), 2.08-2.02 (т, 1Н), 1.92-0.90 (т, 24Н), 0.84-083 (с), δ = 5.0 Гц, ЗН), 0.77 (а, ЗН), 0.53 (а, ЗН)
Данные 13С	δ = 175.9, 71.0, 69.9, 47.4, 46.2, 45.9, 41.6, 36.3,
ЯМР-спектроскопии	35.7, 35.1, 35.0, 33.8, 32.9, 31.2, 31.2, 30.2,
(125 МГц, ДМСО)	28.6, 27.2, 26.9, 26.1, 23.5, 23.0, 16.9, 12.4
Масса (т/ζ)	392 [М+, не определяют], 410.2 [М+ + 18]
ИК-спектр	3445, 2931, 2867, 1694, 1636, 1043 см'1
тп	173.2-175.5°С (из ТГФ/СН2С1г) (Наблюдают); 174-176°С (Представлено, АИа Аезаг) и 171-174°С (Представлено, ΑΙϋποΓι)

[σ]0	+50 [с = 1 а МеОН и СНС13 (1:1)]; +54° (с = 2 в этаноле) [АИа Аеваг]

Выход продуктов для иллюстративных способов, описанных в примерах 1-11, представлен в табл.

16.

- 35 020806

Таблица 16

Общий выход способа синтеза ЭСЛ

Соединение	тп («о (Наблюдают)	ТП(’С) Представлено	Выход %	Замечания
Гидрокорти- зон
1.13	128,9-131,1	128,0-131,0	79,00	Гидрирование, расщепление боковой цепи и окисление РСС
1.14	176,6-180,5		Неочищен- ный	Восстановление К-Селектрида ®
1.15	156,0-158,0		66,40	Ацетилирование
1.16	88,5-91,2		78,80	Виттиг
1.17			79,00	Ен
1.18	174,2-175,7		95,80	Гидрирование (Ρά/С)

1.19	188,6-191,2	174,0-175,0	85,40	Дегидратация тион илхлории/пир ИДИНОМ (выход по 2 стадиям)
1.20	185,8-188,1		60,50	Аллильное окисление триоксида хрома
1.21	179,6-182,7		90,00	Гидрирование (ра/с>
1.22	133,7-135,9	136,5-137,5	70,80	Гидролиз, эстерификация и окисление
1.22-сложный эфир	58,0-60,0		72,80	Восстановление ЦА1Н(О-‘Ви)э
ОСА	173,2-175,5	174,0-176,0	94,33	Гидролиз сложного эфира
			7,00	Общий выход

Пример 12. 9а-Гидрокси-5в-андростан-3,17-дион (2).

К раствору 9а-гидроксиандрост-4-ен-3,17-диона 1 (30,0 г, 99,3 моль) в ДМФ (150 мл) добавляют 10% Ρά/С (2,1 г) и полученную в результате суспензию гидрируют в аппарате Парра (60 ρδί (4320 г/см²)) в течение 12 ч. После полного исчезновения исходного материала, как удостоверяются с помощью ТСХ, неочищенную реакционную смесь фильтруют через маленький слой Целита® и удаляют растворитель под вакуумом с получением бесцветного твердого вещества (30,0 г). Данное твердое вещество смешивают с ацетоном (90 мл) при 0°С и полученную в результате суспензию перемешивают в течение 1 ч. Затем ее фильтруют, промывают охлажденным ацетоном (0°С) (30 мл) и сушат под вакуумом в той же самой воронке для фильтрования при комнатной температуре с получением соединения 2 (26,0 г, 86%). В табл.

- 36 020806 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 17

тех	Обработка п-анисовым альдегидом, Я, для 1.1 = 0,48 и Я, для 1.0 = 0,30
Подвижная фаза ТСХ	30% - ЕЮАс в ЭСМ
Данные ’Н	<Г= 2,37-2,40 (т, 1Н), 2,02-,2,11 (т, 2Н), 1,31-1,91
ЯМР-спектроскопии (500 МГц, СОС13)	(т, 19Н), 0,96 (5, ЗН), 0,84 (з, ЗН)
Данные 13С	δ = 221,0, 95,7, 80,1, 47,0, 43,6, 38,6, 38,5, 37,1,
ЯМР-спектроскопии	35,9, 33,41, 32,9, 32,0, 27,9, 26,9, 21,5, 20,2, 20,0,
(Т25 МГц, СОС13)	12,6
Масса (т/ζ)	305,0[М+ + 1], 322,0 [М+ + 18]

ИК-спектр (КВг)	3443, 2938, 1722, 1449, 1331, 1138 см’1
ТП	213-216°С (из ДМФ и ацетона)
[о]0	+ 116 (с= 1% в снсу
Чистота по ΕΙ_8ϋ	больше чем 99%, время удерживания = 8,15, 9-ΗΑϋ время удерживания = 3,88, 5а-изомер соединения 121 время удерживания = 4,91 (Водная симметрия 250x4,6 мм, 5 мкм, С18), Вода : АСМ (40:60)

Пример 13. 5в-Андрост-9(11)-ен-3,17-дион (3)

К раствору соединения 2 (26,0 г, 85,4 ммоль) в ЭСМ (520 мл) добавляют концентрированную серную кислоту (7,53 г, 76,8 ммоль) в течение 15 мин в инертной атмосфере при 10°С. Температуру повышают до 25°С и полученный в результате раствор перемешивают в течение 2 ч. В данный момент не остается больше исходного материала, как удостоверяются с помощью ТСХ. Реакцию гасят добавлением 10% водного раствора №НСО₃, (200 мл). Слои разделяют и водный слой экстрагируют ОСМ (2x100 мл). Органические слои объединяют и последовательно промывают водой (100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Затем органическую фазу сушат над Ыа₂8О₄ (75 г) и фильтруют. Фильтрат упаривают под вакуумом с получением соединения 3 (23,0 г, 94%) в виде твердого вещества не совсем белого цвета. Данный продукт используют в том виде, как он получен, на следующей стадии без дальнейшей очистки. В табл. 18 описывают измеряемые свойства продукта.

- 37 020806

Таблица 18

тсх	обработка п-анисовым альдегидом, А, для 1.2 = 0,76 и А, для 1.1= 0,44
подвижная фаза ТСХ	30% - ЕЮАс в ОСМ
Данные ’Н	ί = 5,61 (5 , 1Н ), 2,47-2,57 (т, 2Н), 2,24-2,42
ЯМР-спектроскопии (500	(т, 4Н), 2,05-2,20 (т, ЗН), 1,86-1,99 (т, 2Н),
МГц, сосу	1,84-1,85 (б, б = 6 Гц 1Н), 1,57-1,63 (т, 5Н), 1,37-1,40 (б, б = 13,5 Гц, 1Н) 1,25-1,28 (бб, ΰ = 4,0, 13,5 Гц, 1Н), 1,17 (5, ЗН) 0,85 (5, ЗН)
Данные 13С	4= 221,3, 212,8, 140,1, 118,5, 48,5, 45,9,
ЯМР-спектроскопии (125	44,3, 43,5, 39,0, 38,0, 37,3, 36,1, 35,8, 33,3,
мгц, сосу	28,8, 26,0, 25,5, 22,5, 13,9
Масса (т/ζ)	287 [М+ + 1 ], 304 [М+ + 18 ]
ИК-спектр (КВг)	3450, 2913, 1737, 1707,1413, 1403,1207 см·’
ТП	143,4-145,9°С (из ОСМ)

[σ]0	+ 142 (с = 1% в СНСу
Чистота по Είδϋ	99,7%, Время удерживания = 5,04, (ΙηθίΤδϊΙ СЮ5 31/ 250 х 4,6 мм, 5 мкм), АСЫ: 0,1% ТФА в воде (90:10)

Пример 14. 3а-Гидрокси-5в-андрост-9(11)-ен-17-он (4)

Раствор гидрида литий три-трет-бутоксиалюминия в ТГФ (1,0 М, 84,4 мл, 84,4 ммоль) добавляют к холодному (-40°С) раствору соединения 3 (23,0 г, 80,4 ммоль) в ТГФ (230 мл) в инертной атмосфере. Полученную в результате реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч. В данный момент определяют, что реакция завершена, как удостоверяются с помощью ТСХ, реакционную смесь гасят добавлением смеси 1 N НС1 (200 мл) и этилацетата (230 мл). Полученную в результате двухфазную смесь разделяют и водный слой дважды экстрагируют этилацетатом (2x100 мл). Органические фазы объединяют и последовательно промывают водой (150 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Затем органическую фазу сушат над Ν;·ι₂δϋ₄ (75 г) и фильтруют. Фильтрат упаривают под вакуумом с получением соединения 4 (23,0 г) в виде твердого вещества не совсем белого цвета. Вышеуказанный неочищенный продукт используют в том виде, как он получен, на следующей стадии без очистки. В табл. 19 описывают измеряемые свойства продукта.

- 38 020806

Таблица 19

ТСХ	Обработка п-анисовым альдегидом, Я, для 1.3 = 0,44 и А, для 1.2 = 0,74
подвижная фаза ТСХ	30% - ЕЮАс в ОСМ (30%)
Данные ’Н	<ί= 5,41-5,42(6, ϋ = 6,0 Гц, 1Н), 3,65-3,66
ЯМР-спектроскопии (500	(т, 1Н), 2,43-2,48 (т, 1Н), 1,98-2,18 (т,
МГц, СОС13)	6Н), 1,74 (з, 2Н), 1,48-1,56 (пл, 5Н), 1,377-1,45 (т, ЗН), 1,18-1,28 (т, ЗН), 1,08 (з, ЗН), 0,80 (з, ЗН)
Данные 13С	ί = 222,0, 140,9, 118,3, 71,9, 48,6, 45,9,
ЯМР-спектроскопии (125	41,7, 38,8, 37,8, 36,2, 36,0, 35,7, 33,4, 31,7,
мгц, сосу	29,5, 26,5, 26,0, 22,7, 13,9
Масса (т/ζ)	289,0 [М+ + 1], 306,0 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3463, 2960, 2871, 1729, 1366,1165,1084,1041 см'1
ТП	165-167,5°С (ЕЮАс/смесь гексанов)
Мв	+ 161 (с = 1% в СНСу

Чистота по Ε1_5ϋ

- 93%, Время удерживания = 5,23, (1пег1зП СЮЗ ЗУ 250 х 4,6 мм, 5 мкм), ΑΟΝ: 0,1% ΤΦΑ в воде (90:10)

Пример 15. (2)-3а-Гидрокси-53-прегна-9(11),17(20)-диен (6)

Раствор трет-бутоксида калия в ТГФ (1 М, 230 мл, 231 ммоль) добавляют по каплям к суспензии этилтрифенилфосфоний бромида (88,7 г, 239 ммоль) в ТГФ (150 мл) в течение 1 ч при 25°С. Полученную в результате смесь темно-красного цвета перемешивают в течение дополнительного 1 ч при 25°С. Раствор соединения 4 (23,0 г, 79,7 ммоль) в ТГФ (230 мл) медленно добавляют к смеси красного цвета при 25°С. Полученную в результате смесь перемешивают в течение 3-4 ч, в данный момент определяют завершение реакции по ТСХ. Реакцию гасят добавлением водного насыщенного раствора ХН₄С1 (75 мл). Фазы разделяют и водный слой трижды экстрагируют ΕΐΟЛс (3x150 мл). Органические фракции объединяют, промывают насыщенным солевым раствором (100 мл), сушат над Ыа₂8О₄ (75 г) и фильтруют. Фильтрат концентрируют под вакуумом и неочищенное твердое вещество очищают колоночной хроматографией [49 мм (В)х600 мм (Дл), силикагель 60-120 меш, 300 г], элюируя смесью этилацетат/гексаны (1:9). Фракции, содержащие продукт, объединяют и концентрируют с получением соединения 6 (19,1 г, 80,0%) в виде твердого вещества белого цвета. В табл. 20 описывают измеряемые свойства продукта.

- 39 020806

Таблица 20

ТСХ	обработка п-анисовым альдегидом, А, для 1.5 = 0,72 и А, для 1.3 = 0,46
подвижная фаза ТСХ	30% - ЕЮАс в ЭСМ
Данные 1Н	δ = 5,38 (з, 1Н), 5,18-5,19 (б, ϋ = 6,5 Гц
ЯМР-спектроскопии (500	1Н), 3,62-3,66 (т, 1Н), 2,35-2,38 (б, ϋ = 15
МГц, сосу	Гц, ЗН), 2,23-2,25 (т, 1Н), 1,97-2,07 (т, ЗН), 1,64-1,75 (т, 6Н), 1,32-1,55 (т, 6Н), 1,17-1,24 (т, 4Н), 1,06 (з, ЗН), 0,79 (з, ЗН)
Данные ,3С	δ= 150,1, 140,6, 119,6, 114,2, 72,2, 53,6,
ЯМР-спектроскопии (125	42,0, 41,9, 39,6, 38,6, 37,9, 35,7, 35,6,
МГц, СОСу	31,9, 31,8, 29,5, 26,9, 26,8, 25,5, 16,9, 13,3
Масса (т/г)	301 [М+ + 1], 318[М+ + 18]
ИК-спектр (СНС13)	3304, 3033, 2925, 2863, 1449, 1368, 1040, 823см'1
ТП	146-147,3’С (смесь ЕЮАс/гексаны)

Мв	+84,4 (с = 1% в СНС13)
Чистота по Είδϋ	99,8%, Время удерживания = 16,07, (ΙπθΓίείΙ Οϋ5 3ν 250 X 4,6 мм, 5 мкм), АСЫ: 0,1% ТФА в воде (90:10)

Пример 16. (2)-3а-Ацетокси-53-прегна-9(11),17(20)-диен (7а)

Соединение 6 (19,0 г, 63 ммоль) растворяют в СН₂С1₂ (380 мл). Последовательно добавляют триэтиламин (17,6 мл, 126,6 ммоль), ОМАР (0,772 г, 6 ммоль) и уксусный ангидрид (8,98 мл, 94 ммоль) при 25°С в атмосфере азота. Полученный в результате раствор перемешивают в течение 2 ч при 25°С, в данный момент определяют завершение реакции по ТСХ. Реакцию гасят добавлением ледяной воды (100 мл) и разделяют фазы. Водный слой трижды экстрагируют БС'М (3x150 мл). Органические фракции объединяют и промывают насыщенным солевым раствором (100 мл), сушат над безводным №-ь80₄ (50 г) и фильтруют. Фильтрат концентрируют под вакуумом с получением соединения (7а) (22.0 г, выход 95%) в виде твердого вещества не совсем белого цвета. В табл. 21 описывают измеряемые свойства продукта.

- 40 020806

Таблица 21

тех	обработка п-анисовым альдегидом, Р, для 1.6 = 0,5 и Р( для 1.5 = 0,15
подвижная фаза ТСХ	10% - ЕЮАс в гексанах
Данные 1Н	δ = 5,38 ($, 1Н). 5,18-5,20 (б, ΰ = 6,5 Гц, 1Н),
ЯМР-спектроскопии (500	4,72-4,76 (т, 1Н>, 2,35-2,40 (т, ЗН),
МГц, СОСЦ)	2,22-2,25 (т, 1Н), 2,03-2,09 (т, ЗН), 2,01 (з, ЗН), 1,49-1,98 (т, ЮН), 1,31-1,41 (т, 2Н), 1,16-1,27 (т, ЗН), 1,07 (з, ЗН), 0,79 (з, ЗН)
Данные ,3С	(5= 170,5, 150,0, 140,4, 119,6, 114,3, 74,7,
ЯМР-спектроскопии (125	53,5, 42,0, 41,7, 39,6, 38,6, 35,6, 35,3, 33,8,
мгц, сосу	31,9, 29,5, 27,8, 26,7, 26,6, 25,5, 21,3, 16,9, 13,2
Масса (т/ζ)	342,9 [М+ + 1], 360 [М+ + 18]
ИК-спектр (СНСу	3440, 3035, 1730, 1451, 1367, 1258, 1028 См’1
ТП	93,9-97,8°С (ЕЮАс/смесь гексанов)
Мо	+ 109 (с = 1% в СНС13)
Чистота по ВЭЖХ	97,62%; Время удерживания = 17,7, (гогЬах 5В, С18; 250 X 4,6 мм, 5 мкм), АСЫ: 0,1% ТФА в воде (90:10)

Пример 17. (Е)-Метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16,22-триен-24-оат (8а)

Этилалюминийдихлорид (104,5 мл, 192 ммоль, 1,8 М в толуоле) добавляют к раствору метилпропиолата (13,58 мл, 153 ммоль) в ЭСМ (100 мл) при 0°С в инертной атмосфере. Полученный в результате раствор перемешивают в течение 15 мин и затем добавляют соединение (7а) (22 г, 64,3 ммоль). После перемешивания в течение дополнительных 20 мин при 0°С температуру повышают до 25°С и выдерживают в данных условиях в течение следующих 18 ч. В данный момент определяют завершение реакции по ТСХ и смесь выливают в холодную (0°С) воду (200 мл). Фазы разделяют и водный слой экстрагируют ЭСМ (150 мл). Органические слои объединяют и последовательно промывают водой (200 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Затем их сушат над безводным Ыа₂8О₄ (40 г) и фильтруют. Фильтрат концентрируют под вакуумом и полученное в результате твердое вещество очищают суспендированием в метаноле (280 мл) с получением соединения (8а) (17,5 г, 68%) в виде твердого вещества белого цвета. В табл. 22 описывают измеряемые свойства продукта.

- 41 020806

Таблица 22

тех	обработка п-анисовым альдегидом, В, для 1.7а = 0,32 и К, для 1.6а = 0,5
подвижная фаза ТСХ	10% - ЕЮАс в гексанах
Данные ’Н	δ = 6,92-6,926 (ц, ϋ = 7,5, 15,5 Гц, 1Н), 5,80-5,83
ЯМР-спектроскопии	( б, б = 16 Гц, 1Н), 5,37-5,43 (т, 2Н), 4,73-4,75
(500 МГц, СОСу	(т, 1Н), 3,73 (з, ЗН), 3,02-3,04 (1, б = 6,5 Гц, 1Н), 2,15-2,23 (т, ЗН), 2,05-2,08 (т, ЗН), 2,01 (з, ЗН), 1,48-1,99 (т, 8Н), 1,24-1,34 (т, 2Н), 1,20-1,21 (б, б = 5 Гц, ЗН), 1,11-1,17 (т, 1Н), 1,07 (з, ЗН), 0,67 (5, ЗН)
Данные ,3С	8=170,5, 167,2, 155,0, 153,7, 141,6, 124,0, 118,8,
ЯМР-спектроскопии	118,7, 74,6, 53,9, 51,3, 45,7, 41,7, 38,8, 37,1, 35,5,
(125 МГц, СОСу	35,3, 34,6, 33,7, 31,8, 29,5, 27,7, 26,5, 26,5, 21,3, 19,7, 15,7
Масса (т/ζ)	444,0 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3443, 3030, 2930,1719,1650,1247, 1359, 1032, 1170 см 1
ТП	114-116°С (из метанола)
[σ]0	+ 102 (с = 1%вСНС13)

Чистота по ЕЬ5Э

99.7%, Время удерживания = 19.57, (ΙηβΠΒίΙ Οϋ5 3\/ 250 х 4.6 мм, 5 мкм), АСЫ: 0.1% ТФА в воде (90:10)

Пример 18. Метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11)-ен-24-оат (9а)

К раствору соединения (8а) (17,5 г, 41 ммоль) в Е!ОАс (350 мл) добавляют Р!О₂ (4,37 г) и полученную в результате суспензию гидрируют в аппарате Парра (70 рз1 (5040 г/см²)) в течение 14-16 ч. В данный момент определяют завершение реакции по ТСХ. Смесь фильтруют через маленький слой Целита® и удаляют растворитель под вакуумом с получением соединения (9а) (17,0 г, 96,0%) в виде твердого вещества белого цвета. Вышеуказанный продукт используют на следующей стадии без дальнейшей очистки. В табл. 23 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 23

ТСХ	обработка п-анисовым альдегидом, Я, для 1,8а — 0,32 и И, для 1,7а = 0,30
подвижная фаза ТСХ	10% - ЕЮАс в гексанах

- 42 020806

Данные ’Н	δ = 5,31 (в, 1Н), 4,73 (т, 1Н), 3,66 (в, ЗН),
ЯМР-спектроскопии (500	2,03-2,37 (т, 7Н), 2,01 (з, ЗН), 1,09-1,98
МГц, СОС13)	(т, 18Н), 1,06 (5, ЗН), 0,91-0,92 (6, й = 6,0 Гц, ЗН), 0,59 (з, ЗН)
Данные 13С	δ = 174,6, 170,5, 139,8, 119,5, 74,8, 56,0,
ЯМР-спектроскопии (125	53,3, 51,4, 41,9, 41,7, 40,9, 38,5, 36,4, 35,4,
МГц, СОС13)	35,2, 33,8, 31,0, 30,9, 29,5, 28,2, 27,8, 26,8, 26,7, 25,2, 21,4, 17,9, 11,5
Масса (т/ζ)	448,2 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3435, 3039, 2941, 1729, 1448, 1435, 1252, 1022 см1
ТП	122,1-123,9°С (из ЕЮАс)
Мо	+56 (с = 1% в СНСУ
Чистота по ΕΙ_3ϋ	97,7%: Время удерживания = 14,57 (ΖΟΒΒΑΧ 5В С-18 150 X 4,6 мм, 5 мкм, АСЮ: 0,1% ТФА в воде (90:10)

Пример 19. Метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16-диен-24-оат (8Ь)

Этилалюминийдихлорид (14,2 мл, 25 ммоль, 1,8 М в толуоле) добавляют к раствору метилакрилата (1,89 мл, 20 ммоль) в ЭСМ (60 мл) при 0°С в инертной атмосфере. Полученный в результате раствор перемешивают в течение 15 мин и затем добавляют соединение (7а) (3 г, 8,7 ммоль). После перемешивания в течение дополнительных 20 мин при 0°С температуру повышают до 25°С и выдерживают в данных условиях в течение следующих 18 ч. В данный момент определяют завершение реакции по ТСХ, затем смесь выливают в холодную (0°С) воду (60 мл). Фазы разделяют и водный слой экстрагируют ЭСМ (60 мл). Органические слои объединяют и последовательно промывают водой (50 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Затем их сушат над безводным Ыа₂8О₄ (5 г) и фильтруют. Фильтрат концентрируют под вакуумом, получая соединение (8Ь) (2,6 г, 70%). В табл. 24 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 24

подвижная фаза ТСХ	10% - ЕЮАс в гексанах
Данные ’Н ЯМР-спектроскопии (500 МГц, СЭС13)	δ =5,34-5,43 (τη, 2Н), 4,73-4,75 (т, 1Н), 3,73 (в, ЗН), 2,15 -2,34 (т, 6Н), 2,05-2,08 (т, ЗН), 2,01 (в, ЗН), 1,48-1,99 (т, 9Н), 1,24-1,34 (т, ЗН), 1,20-1,21 (ΰ, й = 5 Гц, ЗН), 1,11-1,17 (т, 1Н), 1,07 (в, ЗН), 0,67 (в, ЗН)

Чистота по Е1.50

93,9%, время удерживания = 4,55, (экран водной симметрии 250x4,6 мм 5 мкм),

АСЫ: 100%

- 43 020806

Пример 20. Метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11)-ен-24-оат (9а)

К раствору соединения (8а) (3 г, 7 ммоль) в ЕЮАс (60 мл) добавляют 10% Ρά/С (300 мг, 10% мас./мас.) и полученную в результате суспензию гидрируют в аппарате Парра (70 ρδί (50400 г/см²) в течение 14-16 ч. В данный момент определяют завершение реакции по ТСХ (10% этилацетат в гексанах). Смесь фильтруют через маленький слой Целита® и растворитель удаляют под вакуумом, получая соединение (9а) (2,6 г, 86%) в виде твердого вещества белого цвета. В табл. 25 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 25

Данные ’Н	δ = 5,31 (5, 1Н), 4,73(т, 1Н), 3,66 (в, ЗН),
ЯМР-спектроскопии	2,37-2,03 (т, 7Н), 2,01 (5, ЗН), 1,98-1,09(01,
(500 МГц, С0С13)	18Н), 1,06 (5, ЗН), 0,92-0,91 (ύ, ΰ = 6,0 Гц, ЗН),
	0,59 (5, ЗН)

Чистота по Εί.50

95,9%, время удерживания = 4,75, (экран водной симметрии 250x4,6 мм 5 мкм), АС14:\Л/а1ег (60:40)

Пример 21. Метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11)-ен-12-он-24-оат (10а)

СгО₃ (17,0 г, 170 ммоль) добавляют к раствору соединения (9а) (17 г, 39,5 ммоль) в АсОН (270 мл). Полученную в результате смесь нагревают при 50°С в течение 24-36 ч. После полного исчезновения исходного материала по данным ТСХ растворитель упаривают под вакуумом и неочищенный материал растворяют в этилацетате (400 мл) и воде (200 мл). Две фазы разделяют и органический слой дважды промывают водой (2x100 мл) и затем один раз насыщенным солевым раствором (100 мл). Органическую фазу сушат над безводным №₂8О₄ (40 г) и фильтруют. Фильтрат концентрируют под вакуумом и полученное в результате твердое вещество очищают колоночной хроматографией [49 мм (Д)х600 мм (Дл), силикагель 60-120 меш, 120 г], элюируя этилацетат/гексан (1:5) [фракции по 10 мл, элюция 3 мл/мин, мониторируют с помощью ТСХ и определяют с помощью лампы УФ-света (254 нм)]. Содержащие продукт фракции объединяют и концентрируют под вакуумом с получением соединения (10а) (8,8 г, выход 50%) в виде твердого вещества белого цвета. В табл. 26 описывают измеряемые свойства продукта.

- 44 020806

Таблица 26

тех	обработка п-анисовым альдегидом, Я, для 1.9а = 0,28 и Я, для 18а = 0,52
подвижная фаза ТСХ	20% - ЕЮАс в гексанах
Данные ’Н	ό = 5,71 (з, 1Н), 4,71-4,75 (т, 1Н), 3,66 (в, ЗН),
ЯМР-спектроскопии	2,37-2,42 (т, ЗН), 2,02-2,31 (т, 2Н), 2,0 (5, ЗН),
(500 МГц, СОС13)	1,67-1,98 (т, 9Н), 1,24-1,56 (т, 9Н), 1,19 (з, ЗН), 1,01-1,02 (б, б = 6,5 Гц, ЗН), 0,90 (з, ЗН)
Данные 13С	δ= 204,9, 174,5, 170,4, 163,8, 123,6, 73,7, 53,4,
ЯМР-спектроскопии	53,0, 51,3, 47,2, 41,7, 39,8, 37,7, 35,2, 35,0,
(500 МГц, СОС13)	33,9, 31,4, 30,5, 29,6, 27,6, 27,3, 26,4, 26,1, 24,1, 21,2, 19,4, 10,6
Масса (т/ζ)	445,0 [М+ + 1], 462,0 [М+ + 18]
ИК-спектр	3437, 3045, 2946, 2870, 1729, 1680, 1252, 1168, 1020, см’’
ТП	137-139°С (из смеси ЕЮАс/гексаны)
[σ]„	+93 (с = 1 % в СНС13)
Чистота по ΕΙ-δϋ	94,6%: Время удерживания = 8,68 (1пег1з|| ОЭ5 ЗУ, 250 X 4,6 ммт, 5 мкм, АСИгВода (60:40)

Пример 22. Метил 3а-ацетокси-5в-холан-12-он-24-оат (11а)

10% Рб/С (900 мг) добавляют к раствору соединения (10)а (2,0 г, 4,5 ммоль) в Е!ОАс (150 мл) и полученную в результате суспензию гидрируют в аппарате Парра (50 рк1 (3600 г/см²) при 50°С в течение 16 ч. В данный момент определяют завершение реакции по ТСХ. Смесь фильтруют через маленький слой Целита® и удаляют растворитель под вакуумом, получая соединение 11а (1,6 г, выход 80%) в виде твердого вещества белого цвета. В табл. 27 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 27

ТСХ	обработка п-анисовым альдегидом, Я, для 2.0 = 0,36 и Я, для 1.9 = 0,32
подвижная фаза ТСХ	20% - ЕЮАс в гексанах
Данные ’Н	ί = 4,67-4,71 (т, 1Н), 3,66 (з, ЗН), 2,45-2,50 (1, б
ЯМР-спектроскопии	= 15 Гц, 2Н), 2,22-2,40 (т, 1Н), 2,01 (з, ЗН),
(500 МГц, СЭСу	1,69-1,96 (т, 9Н), 1,55 (з, 4Н), 1,25-1,50 (т, 8Н), 1,07-1,19 (т, 2Н), 1,01 (з, 6Н), 0,84-0,85 (б, б = 7,0 Гц, ЗН)

- 45 020806

Данные 13С	ί = 214,4, 174,5, 170,4, 73,6, 58,5, 57,4, 51,3,
Я М Р-с пе ктрос коп и и	46,4, 43,9, 41,2, 38,0, 35,6, 35,5, 35,2, 34,8, 32,0,
(125 МГц, СОСу	31,2, 30,4, 27,4, 26,8, 26,2, 25,9, 24,2, 22,6, 21,2, 18,5, 11,6
Масса (т/ζ)	447,0 [М+ + 1], 464,0 [М+ + 18]
ИК-спектр (КВг)	3445, 2953, 2868, 1731, 1698, 1257, 1029 см'’
ТП	142,2-144,4’С (из смеси ЕЮАс/гексаны)
	+92 (с = 1 % в СНСу
Чистота по Е150	96,6%: Время удерживания = 9,93 (1пеПз|| Οϋ3 34, 250 х 4,6 мм, 5 мкм, АСИ: 0,1% ТФА в воде (90:10)

Пример 23. Метил 3а-ацетокси-12а-гидрокси-5в-холан-24-оат (12а)

Раствор в ТГФ гидрида литий три-трет-бутоксиалюминия (1 М, 22,4 мл, 22,4 ммоль) по каплям добавляют к раствору соединения 11а (2,5 г, 5,6 ммоль) в ТГФ (25 мл) при температуре окружающей среды. После перемешивания в течение дополнительных 4-5 ч определяют, что реакция завершается с помощью ТСХ. Реакцию гасят добавлением водной НС1 (1 М, 10 мл) и разводят смесь ЕЮАс (30 мл). Фазы разделяют и органическую фазу последовательно промывают водой (15 мл) и насыщенным солевым раствором (10 мл). Затем органическую фазу сушат над безводным Ыа₂8О₄ (3 г) и фильтруют. Фильтрат концентрируют под вакуумом и полученное в результате твердое вещество очищают колоночной хроматографией [29 мм (Д)х500 мм (Дл), силикагель 60-120 меш, 50 г], элюируя системой ЕЮАс/гексан (2:8) [фракции по 5 мл, мониторируют с помощью ТСХ с обработкой п-анисовым альдегидом]. Фракции, содержащие продукт, объединяют и концентрируют под вакуумом с получением соединения (12а) (2,3 г, 91%) в виде твердого вещества белого цвета. В табл. 28 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 28

ТСХ	обработка п-анисовым альдегидом. Я, для 2.1а = 0,45 и Я, для 2.0а = 0,55
подвижная фаза ТСХ	30% - ЕЮАс в гексанах
Данные ’Н	δ = 4,68-4,73 (т, 1Н), 3,98 (з, 1Н), 3,66 (з, ЗН),
ЯМР-спектроскопии	2,34-2,40 (т, 1Н), 2,21-2,26 (т, 1Н), 2,01 (з, ЗН),
(500 МГц, СОС!3)	1,75-1,89 (т, 6Н), 1,39-1,68 (т, 16Н), 1,00-1,38 (т, ЗН), 0,96-0,97 (ά, 0 = 5,5 Гц, ЗН), 0,93 (з, ЗН), 0,68 (з, ЗН)

- 46 020806

Данные 13С	6= 174,5, 170,5, 74,1, 72,9, 51,3, 48,1, 47,2, 46,4,
ЯМР-спектроскопии	41,7, 35,8, 34,9, 34,7, 34,0, 33,5, 32,0, 30,9, 30,8,
(125 МГц, СОС13)	28,6, 27,3, 26,8, 26,3, 25,9, 23,4, 22,9, 21,3, 17,2, 12,6
Масса (т/ζ)	449,0 [М+ + 1], 466,0 [М* + 18]
ИК-спектр (КВг)	3621, 2938, 2866, 1742, 1730, 1262, 1162, 1041, см'1
ТП	104,2-107,7°С (из ЕЮАс)
[До	+56 (с = 1% вСНС13)
Чистота по ΕΙ_5ϋ	97,0%: Время удерживания = 12,75 (ΙηβιΤείΙ СЮ8 ЗУ, 250 х 4,6 мм, 5 мкм,, АСЫ: Вода (60:40)

Пример 24. Дезоксихолевая кислота (ОСА)

Раствор ЫОН (187 мг, 4,4 ммоль) в Н₂О (2,0 мл) добавляют к раствору соединения (12а) (500 мг, 1,11 ммоль) в ТГФ (8 мл) и МеОН (8 мл). Полученную в результате смесь перемешивают в течение 3-4 ч при 50°С. После полного исчезновения исходного материала по данным ТСХ реакционную смесь концентрируют под вакуумом. Смесь воды (10 мл) и 3 N НС1 (1 мл) объединяют и охлаждают до 0°С и затем добавляют к неочищенному продукту. После перемешивания в течение 1 ч при 0°С осажденные твердые вещества отфильтровывают и затем промывают водой (10 мл) и гексаном (20 мл). Сушка под вакуумом при комнатной температуре дает дезоксихолевую кислоту (ЭСА, 400 мг, выход 91%) в виде твердого вещества белого цвета. В табл. 29 описывают измеряемые свойства продукта.

Таблица 29

ТСХ	обработка п-анисовым альдегидом, Я, для ЭСА = 0,32 и К, для 2.1а = 0,82
подвижная фаза ТСХ	10% Метанол в ОСМ
Данные ’Н	о = 11,92 (з, 1Н), 4,44 (з, 1Н), 4,19 (з, 1Н), 3,77
ЯМР-спектроскопии	(з, 1Н), 3,35-3,36 (т, 1Н), 2,19-2,21 (т, 1Н),
(500 МГц, СОСу	2,08-2,10 (т, 1Н), 1,73-1,80 (т, 4Н), 1,43-1,63 (т, 6Н), 1,15-1,35 (т, 12Н), 0,98-1,05 (т, 2Н), 0,89-0,90 (б, 1 = 6,0 Гц, ЗН), 0,83 (з, ЗН), 0,58 (з, ЗН)
Данные 13С	6 =174,8, 71,0, 69,9, 47,4, 46,1, 46,0, 41,6, 36,3,
ЯМР-спектроскопии	35,6, 35,1, 34,9, 33,8, 32,9, 30,8, 30,7, 30,2,
(125 МГц, ДМСО)	28,6, 27,1, 27,0, 26,1, 23,5, 23,0, 16,9, 12,4
Масса (т/ζ)	393 [М+, + 1]

- 47 020806

ИК-спектр (КВг)	3363, 2933, 2863, 1694, 1453, 1372, 1042, см’1
ТП	171,4-173,6°С (из этанола); 174-176°С (АИа Аезаг) и 171-174’С (ΑΙΟποΙι)
[σ]0	+47 (с = 1% в ЕЮН ), +54’ (с = 2% в этаноле) [АИа Аезаг]
Чистота по ΕΙ_5ϋ	99,7%: Время удерживания - 5,25 (ΙηβΗείΙ Οϋδ 31/, 250 х 4,6 мм, 5 мкм, АСЫ: 0,1% ТФА в воде (90:10)

Пример 25.

Первичные человеческие адипоциты инкубируют с различными концентрациями синтетического дезоксихолата натрия, синтезированного с использованием 9-НАЭ в качестве исходного материала или коровьего дезоксихолата натрия, полученного в фирме 81дта, как описано ниже.

Материалы.

Адипоциты (Аеп-Вю № по каталогу 8А-1096) 96-луночные планшеты (И8 8с1епкйс № по каталогу се11з1аг по. 655180).

Бессывороточная среда ВРМ1 (МеФаЮск № по каталогу 17-105-СУ).

Дезоксихолат натрия (ОС) (81дта № по каталогу Ό6750).

Синтетический гликодезоксихолат натрия (Ку!кега).

РВ8 (забуференный фосфатом солевой раствор) (1х).

Набор для анализа МТ8 (Рготеда № по каталогу 03580).

Адипоциты получают дифференцированными при густоте 13000 клеток/лунку в 96-луночном планшете. Получают два планшета и каждый обрабатывают одними и теми же образцами. Клетки инкубируют в течение 24 ч при 37°С с 5% СО₂. Получают 1% исходный раствор каждой желчной кислоты (синтетической и несинтетической ОСА) растворением 20 мг в 2 мл сред (бессывороточных). Используя 1% исходный раствор, путем разведений получают следующие 11 растворов: 0,005, 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,05, 0,06 и 0,1%, а также 0% (только среды).

Клетки промывают 2х150 мкл 1хРВ8 (забуференный фосфатом солевой раствор) при комнатной температуре. Среды и затем РВ8 удаляют из лунок в 96-луночном планшете, переворачивая планшет вверх дном и декантируя жидкость в контейнер. После последнего промывания РВ8 добавляют 80 мкл образца/лунку. Каждую концентрацию специфической желчной кислоты добавляют в 8 лунок и инкубируют в течение 1 ч при 37°С с 5% СО₂. Затем планшеты вынимают из термостата и декантируют раствор. 100 мкл раствора разбавленного (40 мкл в 1 мл ВРМ1) реагента МТ8 (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2Н-тетразолий, внутренняя соль) вносят непосредственно в каждую лунку. Планшеты инкубируют при 37°С с 5% СО₂ до тех пор, пока в контрольных лунках (без желчной кислоты) цвет не изменится на оранжево-коричневый, и затем загружают в спектрофотометр, который анализирует 96-луночные планшеты. Образцы анализируют при режиме с длиной волны 490 нм.

Выживаемость клеток оценивают, используя набор для колориметрического анализа (МТ8) фирмы Рготеда. Результаты показывают дозозависимое снижение выживаемости клеток при обработке либо зуп-ЫаЭС, либо 81дта-ЫаОС (см. фиг. 2). Обе молекулы демонстрируют близкое цитолитическое поведение в данном эксперименте, показывая, что синтетический и коровий 81дта-ЫаОС функционально идентичны в плане способности уничтожать жировые клетки.

Варианты осуществления и вышеописанный пример не предусматривают ограничения изобретения. Следует иметь в виду, что возможны многочисленные модификации и варианты, соответствующие основным положениям настоящего изобретения.

Claims (43)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ получения дезоксихолевой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, включающий проведение реакции 9а-гидроксиандрост-4-ен-3,17-диона формулы 1 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения формулы 2 проведение реакции соединения формулы 2 с кислотой с образованием соединения формулы 3

   - 48 020806 проведение реакции соединения формулы 3 с восстановителем с образованием соединения формулы 4 в виде смеси соединений формул 4 и 5 проведение реакции соединения формулы 4 с реагентом для олефинирования двух атомов углерода в условиях образования олефина с формированием соединения формулы 6 превращение соединения формулы 6 в соединение формулы 7 проведение реакции соединения формулы 7 с алкилпропиолатом СН=СС(0)0Р или алкилакрилатом СН₂=СНС(0)0Р в присутствии кислоты Льюиса с образованием соединения формулы 8 где пунктирная линия означает одинарную или двойную связь, проведение реакции соединения формулы 8 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения формулы 9 проведение реакции соединения формулы 9 с окислителем с образованием соединения формулы 10 проведение реакции соединения формулы 10 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения формулы 11 проведение реакции соединения формулы 11 с восстановителем с образованием соединения формулы 12

   - 49 020806 и воздействие на соединение формулы 12 условиями снятия защиты с образованием его сложного эфира и подходящими условиями гидролиза с образованием дезоксихолевой кислоты формулы характеризующейся синтетической боковой цепью формулы или ее фармацевтически приемлемой соли, причем в раскрытых выше соединениях Р представляет собой защитную группу, а К представляет собой С1-С₆-алкил.
2. 2. Способ по п.1, в котором при образовании соединения формулы 2 в условиях гидрирования используют катализатор Ρά/С.
3. 3. Способ по п.1, в котором в качестве кислоты, посредством которой образуют соединение формулы 3, берут минеральную кислоту.
4. 4. Способ по п.3, в котором минеральная кислота представляет собой Н₂8О₄.
5. 5. Способ по п.1, в котором восстановитель, посредством которого образуют соединение формулы 4, представляет собой ПА1(О1Ви)₃Н.
6. 6. Способ по п.1, в котором реагент для олефинирования двух атомов углерода, посредством которого формируют соединение формулы 6, представляет собой РЬ₃РСН₂СН₃+Вг^-.
7. 7. Способ по п.1, в котором защитная группа Р соединений 7-12 представляет собой -С(О)СН₃.
8. 8. Способ по п.1, в котором кислота Льюиса, посредством которой образуют соединение формулы 8, представляет собой Е!А1С1₂.
9. 9. Способ по п.1, в котором алкилпропиолат или алкилакрилат представляет собой метилпропиолат или метилакрилат.
10. 10. Способ по п.1, в котором при образовании соединения формулы 9 в условиях гидрирования используют катализатор РЮ₂.
11. 11. Способ по п.1, в котором окислитель, посредством которого образуют соединение формулы 9, представляет собой СгО₃.
12. 12. Способ по п.1, в котором при образовании соединения формулы 11 в условиях гидрирования используют катализатор Ρά/С.
13. 13. Способ по п.1, в котором восстановитель, посредством которого образуют соединение формулы 12, представляет собой ПА1(О1Ви)₃Н.
14. 14. Способ по п.1, в котором при Р, представляющем собой -С(О)СН₃, условия снятия защиты и гидролиза включают проведение реакции соединения 12 с гидроксидом щелочного металла, алкоксидом щелочно-земельного металла или смесью обоих.
15. 15. Способ по п.1, в котором при Р, представляющем собой -С(О)СН₃, условия снятия защиты и гидролиза включают проведение реакции соединения 12 с ПОН.
16. 16. Способ получения дезоксихолевой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, включающий проведение реакции соединения формулы 10 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения формулы 11

    - 50 020806 проведение реакции соединения формулы 11 с восстановителем с образованием соединения формулы 12 и воздействие на соединение формулы 12 условиями снятия защиты с образованием его сложного эфира и, необязательно, подходящими условиями гидролиза с образованием дезоксихолевой кислоты формулы характеризующейся синтетической боковой цепью формулы или ее фармацевтически приемлемой соли, причем в раскрытых выше соединениях Р представляет собой защитную группу, а К представляет собой С1-С₆-алкил.
17. 17. Способ получения дезоксихолевой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли, включающий проведение реакции 9а-гидроксиандрост-4-ен-3,17-диона 1 с Н₂ в условиях гидрирования с катализатором Рб/С с образованием соединения формулы 2 проведение реакции соединения формулы 2 с Н₂ЗО₄ с образованием соединения формулы 3 проведение реакции соединения формулы 3 с ЫА1(О1Ви)₃ с образованием соединения формулы 4 в виде смеси соединений формул 4 и 5 проведение реакции соединения формулы 4 с РЬ₃РСН₂СН₃+Вг^- для олефинирования двух атомов уг- превращение соединения формулы 6 в соединение формулы 7

    - 51 020806 проведение реакции соединения формулы 7 с метилпропиолатом СН^СС(О)ОСН₃ или метилакрилатом СН₂=СНС(О)ОСН₃ в присутствии Е(Л1С1₂ с образованием соединения формулы 8 где пунктирная линия означает одинарную или двойную связь, проведение реакции соединения формулы 8 с Н₂ в условиях гидрирования с катализатором ΡΐΟ₂ с проведение реакции соединения формулы 9 с СгО₃ с образованием соединения формулы 10 проведение реакции соединения формулы 10 с Н₂ в условиях гидрирования с Ρά/С катализатором с образованием соединения формулы 11 проведение реакции соединения 11 с ЫА1(О1Ви)₃Н с образованием соединения формулы 12 и воздействие на соединение формулы 12 условиями снятия защиты и условиями гидролиза с ЫОН с образованием дезоксихолевой кислоты формулы характеризующейся синтетической боковой цепью формулы или ее фармацевтически приемлемой соли.
18. 18. Дезоксихолевая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль, полученные способом по любому из пп.1-17.
19. 19. Фармацевтическая композиция, включающая дезоксихолевую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль по п.18 и фармацевтически приемлемый наполнитель.

    - 52 020806
20. 20. Композиция по п.19, в которой фармацевтически приемлемая соль является солью натрия.
21. 21. Композиция по п.19 или 20, в которой концентрация дезоксихолевой кислоты или фармацевтически приемлемой соли находится в диапазоне от 0,001 до 10% мас./мас., мас./об. или об./об., предпочтительно находится в диапазоне от 0,01 до 5%.
22. 22. Композиция по любому из пп.19-21, которая дополнительно содержит липид, фосфолипид, фосфатидилхолин до 5% включительно мас./мас., мас./об. или об./об.
23. 23. Композиция по любому из пп.19-22, которая дополнительно содержит по меньшей мере один активный ингредиент, выбранный из группы, включающей антимикробный агент, сосудосуживающий компонент, антитромботический агент, противосвертывающий агент, пеногаситель, противовоспалительный агент, анальгетик, диспергатор, антидиспергатор, усилитель проникновения, стероид, транквилизатор, мышечный релаксант и антидиарейный агент.
24. 24. Композиция по любому из пп.19-23, которая содержит по меньшей мере один детергент.
25. 25. Композиция по любому из пп.19-24, которая содержит по меньшей мере один дополнительный активный ингредиент, выбранный из группы, включающей антагонист рецептора нейропептида Υ (ΝΡΥ) и избирательный в отношении жира проапоптотический пептид.
26. 26. Композиция по п.25, в которой указанный антагонист рецептора нейропептида Υ (ΝΡΥ) выбран из группы, включающей ΒΙΒΡ-3226, антагонист нейропептида Υ5 (антагонисты рецептора ΝΡΥ Лтдеη). ΒΙΒΟ-3304 (антагонист рецептора ΝΡΥ ΒοеЬ^^η§е^ ПщеИепп), ΒΜ8-192548 (антагонист рецептора ΝΡΥ Б^ЮЕМуеге 8цшЪЪ), АК-Н040922 (антагонист рецептора ΝΡΥ Β^^δΐο1-Μуе^δ 8цшЪЪ), ΕΥ-357897 (антагонист рецептора ΝΡΥ Ε1Ϊ ЬШу), антагонист рецептора ΝΡΥ-Υ5 Εδΐеνе, 1229И91 (антагонисты рецептора ΝΡΥ С1аxο8т^ΐЬΚ1^ηе), С№4380148 (антагонисты рецептора ΝΡΥ С1аxο8т^ΐЬΚ1^ηе), ίΝί-5207787 (антагонист рецептора ΝΡΥ ίοΐιηδοη & ίοΐιηδοη), ^и-ЛЛ-44608 (антагонист рецептора ΝΡΥ ^иηάЪеск), МК0557 (антагонист рецептора ΝΡΥ Мегск), ЫСО-95-1 (антагонист рецептора ΝΡΥ №ω·§ο^η), ΝΌΧ-Ε201 (антагонист рецептора ΝΡΥ №ι.ΐΓο1ο§ίχ), ССΡ-71683 (антагонист рецептора ΝΡΥ ΝοναΠίδ), ΡΌ-160170 (антагонисты рецептора ΝΡΥ ΡΠ/ег), 8К-120819А (антагонисты рецептора ΝΡΥ δαηοΠ Лνеηΐ^δ), ΒΙΙΕ0246 (антагонисты рецептора ΝΡΥ δαηοΓί Лνеηΐ^δ), 8.А.0204 (антагонисты рецептора ΝΡΥ δαηοΓί Лνеηΐ^δ) и 82367 (антагонист рецептора ΝΡΥ 8!ίοη§1ί).
27. 27. Композиция по п.25, в которой избирательный в отношении жира проапоптотический пептид представляет собой пептид СКССКАКОС, который направлен на сосудистую сеть белой жировой ткани.
28. 28. Применение композиция по любому из пп.19-27 для адиполитической терапии у млекопитающих.
29. 29. Применение по п.28, в котором адиполитическая терапия направлена на патологически жировые отложения.
30. 30. Применение по п.29, в котором жировые отложения связаны с условиями, выбранными из группы, включающей ожирение, синдром перераспределения жира, образование жировой грыжи века, липому, болезнь Деркама, липодистрофию, липодистрофию горба буйвола, дорсоцервикальный жир, висцеральное ожирение, увеличение молочных желез, гиперожирение, диффузные жировые тела вокруг туловища и рук и жировые отложения, связанные с целлюлитом.
31. 31. Способ косметического безоперационного местного удаления жировых отложений из выбранных областей тела пациента, включающий введение в указанную область терапевтически эффективного количества композиции по любому из пп.19-27.
32. 32. Способ по п.31, в котором введение представляет собой подкожное, субдермальное или чрескожное введение.
33. 33. Способ по п.31 или 32, который дополнительно включает одновременное введение местного анестетика в указанную область.
34. 34. Способ по любому из пп.31-33, в котором указанную область выбирают из группы областей, включающей область под глазом, под подбородком, подмышкой, на ягодице, щеке, брови, икре, спине, бедре, лодыжке или в брюшной области под подбородком.
35. 35. Соединения, полученные по п.1 или 17 и выбранные из группы, включающей

    9а-гидрокси-5 β -андростан-3,17-дион (2),

    5в-андрост-9(11)-ен-3,17-дион (3), (2)-3а-гидрокси-5в-прегна-9(11),17(20)-диен (6), (2)-3а-ацетокси-5в-прегна-9(11),17(20)-диен (7а), (Е)-метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16,22-триен-24-оат (8а) и метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16-диен-24-оат (8Ъ).
36. 36. Соединение по п.35, которое представляет собой 9а-гидрокси-5в-андростан-3,17-дион (2).
37. 37. Соединение по п.35, которое представляет собой 5в-андрост-9(11)-ен-3,17-дион (3).
38. 38. Соединение по п.35, которое представляет собой (2)-3а-гидрокси-5в-прегна-9(11),17(20)-диен (6).
39. 39. Соединение по п.35, которое представляет собой (2)-3а-ацетокси-5в-прегна-9(11),17(20)-диен (7а).

    - 53 020806
40. 40. Соединение по п.35, которое представляет собой (Е)-метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16,22триен-24-оат (8а).
41. 41. Соединение по п.35, которое представляет 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16-диен-24-оат (8Ь).
42. 42. Способ получения соединения по формуле 10 включающий проведение реакции 9а-гидроксиандрост-4-ен-3,17-диона 1 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения формулы 2 проведение реакции соединения формулы 2 с кислотой с образованием соединения формулы 3 проведение реакции соединения формулы 3 с восстановителем с образованием соединения формулы 4 в виде смеси соединений формул 4 и 5 проведение реакции соединения формулы 4 с реагентом для олефинирования двух атомов углерода в условиях образования олефина с формированием соединения формулы 6 превращение соединения формулы 6 в соединение формулы 7 проведение реакции соединения формулы 7 с алкилпропиолатом СН=СС(0)0Р или алкилакрилатом СН₂=СНС(0)0Р в присутствии кислоты Льюиса с образованием соединения формулы 8 где пунктирная линия ςςςς. означает одинарную или двойную связь, проведение реакции соединения формулы 8 с Н₂ в условиях гидрирования с образованием соединения формулы 9 проведение реакции соединения формулы 9 с окислителем с образованием соединения формулы 10,

    - 54 020806 причем в раскрытых выше соединениях Р представляет собой защитную группу, а К представляет собой СгСб-алкил.
43. 43. Способ получения соединения (Е)-метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16,22-триен-24-оат (8а) или метил 3а-ацетокси-5в-хол-9(11),16-диен-24-оат (8Ь), включающий проведение реакции (2)-3а-ацетокси5в-прегна-9(11),17(20)-диен (7а) с алкилпропилатом СН=СС(О)ОК или алкилакрилатом СН₂=СНС(О)ОК, где К представляет собой С1-С₆-алкил в присутствии кислоты Льюиса.