TWI465241B - 圓柏（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）萃取物或木酚素（ｌｉｇｎａｎ）用於製造抑制血管新生之藥物的用途 - Google Patents

圓柏（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）萃取物或木酚素（ｌｉｇｎａｎ）用於製造抑制血管新生之藥物的用途 Download PDF

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Description

圓柏( Juniperus chinensis )萃取物或木酚素(lignan)用於 製造抑制血管新生之藥物的用途
本發明係關於一種抑制血管新生之醫藥組成物，且特別關於一種以圓柏(Juniperus chinensis )萃取物為有效成分之抑制血管新生之醫藥組成物。
血管新生係指在原來已存在的血管旁附近，長出新生的血管的過程。在正常生理機制下，可以藉由促進血管新生傳遞訊息刺激下所產生的反應。例如，在傷口癒合或女性生理週期的過程當中，會有可控制性且大約維持1-2週的血管新生反應。然而，病理性的血管新生則不受正常生理機轉所控制。血管新生的調控在人體具有相當重要平衡的角色，在強烈的血管新生的作用下，可能會造成糖尿病視網膜病變、風濕性關節炎，或是加速腫瘤的惡化與轉移。此外，當過度抑制血管新生作用時，也可能會因為凝血功能的缺損導致出血、中風、心血管疾病等的出現，甚至影響病患的傷口癒合。
目前約有19種具抗血管新生的藥物(angiogenesis inhibitor)在臨床上使用，而這些藥物所包含的適應症包含有：各種固態癌症(solid tumors)、老年性黃班性退化(age related macular degeneration)、脈絡膜新生血管(choroidal neovascularization)、糖尿病性黃斑水腫(diabetic macular edema)、糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy)、眼部腫瘤(ocular neoplasm)、視網膜靜脈阻塞(retinal venous occlusion)、微血管擴張(telangiectasis)等相關疾病。由於血管新生與多種疾病相關，因此血管新生的抑制劑開發在目前與未來都是相當重要的研究方向與開發領域。
本發明提供一種用於抑制血管新生之醫藥組成物，包括：一有效量之圓柏(Juniperus chinensis )萃取物為抑制血管新生的有效成分。
本發明也提供一種圓柏萃取物用於製造抑制血管新生之藥物的用途。
本發明還提供一種用於抑制血管新生之醫藥組成物，包括：一有效量之木酚素(lignan)為抑制血管新生的有效成分，其中該木酚素之分子式如式(I)所示： 其中R1 為-H或-OCH3 ，R2 為-H或-OH，R3 為-H、-OH或β -O-葡萄糖苷(glucoside)，R4 為-H或-OCH3 。
為了讓本發明之上述和其他目的、特徵、和優點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例，並配合所附圖示，作詳 細說明如下：
本發明提供一種以圓柏(Juniperus chinensis )萃取物為主要有效成分之用於抑制血管新生的醫藥組合物，其具有抑制血管新生之功效。
上述本發明之用於抑制血管新生的醫藥組合物，可包括，但不限於一有效量之圓柏萃取物，其中圓柏萃取物為抑制血管新生的活性成分。在一實施例中，本發明之用於抑制血管新生的醫藥組合物可更包括一藥學上可接受之載體或鹽類。
於本發明中，用於萃取圓柏萃取物之圓柏(Juniperus chinensis )的例子，可包括，但不限於真柏(Juniperus chinensis var.Shimpaku)、偃柏(Juniperus chinensis L.var.sargentii Henry)、圓柏(原變種)(Juniperus chinensis L.var.chinensis )、清水圓柏(Juniperus chinensis L.var.taiwanensis R.P.Adams & C.F.Hsieh)、龍柏(Juniperus chinensis L.var.kaizuka Hort.ex Endl.)、塔柏(Juniperus chinensis L.var.pyramidalis (Carr.)Hort.ex Rehd.)及/或銀柏(Juniperus chinensis cv.Pfitzeriana Glauca)。在一實施例中，用於萃取圓柏萃取物之圓柏(Juniperus chinensis )為偃柏。
上述圓柏萃取物可萃取自圓柏的根、莖/幹、枝、葉及/或其組合，但不限於此。在一實施例中，圓柏萃取物可萃取自圓柏的細枝葉。
於本發明中，用於萃取上述圓柏萃取物的一溶劑可包 括醇類(例如，甲醇、乙醇或丙醇)、酯類(例如，乙酸乙酯)、烷類(例如，己烷)或鹵烷(例如，氯甲烷、氯乙烷)，但並不以此為限。在一實施例中，萃取溶劑為乙醇。
在一實施例中，本發明之圓柏萃取物的成分可至少包括一種指標成分，為亞太因(yatein)，具有抑制血管新生之功效。在另一實施例中，本發明之圓柏萃取物的成分可至少包括亞太因，具有抑制血管新生之功效。
於一實施例中，圓柏萃取物係萃取自偃柏，又此圓柏萃取物係以乙醇萃取而得。於此實施例中，上述圓柏萃取物的成分至少包括亞太因。於另一實施例中，圓柏萃取物係以乙醇萃取自偃柏的細枝葉而得。而於此實施例中，上述圓柏萃取物的成分至少包括亞太因。
本發明用於抑制血管新生之醫藥組成物係用於治療一血管新生相關疾病。血管新生相關疾病的例子可包括固態癌症(solid tumors)、老年性黃班性退化(age related macular degeneration)、脈絡膜新生血管(choroidal neovascularization)、糖尿病性黃斑水腫(diabetic macular edema)、糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy)、眼部腫瘤(ocular neoplasm)、視網膜靜脈阻塞(retinal venous occlusion)、微血管擴張(telangiectasis)等，但不限於此。
本發明也提供一種以木酚素為主要有效成分之用於抑制血管新生的醫藥組合物。上述本發明之用於抑制血管新生的醫藥組合物，可包括，但不限於一有效量之木酚素， 其中上述木酚素之分子式如式(I)所示： 其中R1 為-H或-OCH3 ，R2 為-H或-OH，R3 為-H、-OH或β -O-葡萄糖苷(glucoside)，R4 為-H或-OCH3 。
在一實施例中，上述本發明之用於抑制血管新生的醫藥組合物，可包括更包括一藥學上可接受之載體或鹽類。
在一實施例中，上述木酚素可包括，但不限於亞太因、裂欖質素(5’-desmethoxyyatein或bursehernin)、7’,7’-dihydroxy bursehernin(7’,7’二羥基裂欖質素)、5’-甲氧基亞太因(5’-methoxyyatein)、西藏鬼臼脂醇(podorhizol)及西藏鬼臼脂醇4’-o-β-D-吡喃葡萄糖苷(podorhizol 4’-o-β-D-glucopyranoside)。在一示範實施例中，上述木酚素為亞太因。
於上述本發明用於抑制血管新生之醫藥組成物中，前述藥學上可接受之載體可包括，但不限於溶劑、分散媒(dispersion medium)、套膜(coating)、抗菌與抗真菌試劑與一等滲透壓與吸收延遲(absorption delaying)試劑等與藥學 投予相容者。對於不同的給藥方式，可利用一般方法將藥學組合物配置成劑型(dosage form)。
又，上述藥學上可接受之鹽類可包括，但不限於鹽類包括無機陽離子，例如，鹼金屬鹽類，如鈉、鉀或胺鹽，鹼土金族鹽類，如鎂、鈣鹽，含二價或四價陽離子之鹽類，如鋅、鋁或鋯鹽。此外，也可是為有機鹽類，如二環己胺鹽類、甲基-D-葡糖胺，胺基酸鹽類，如精胺酸、離胺酸、組織胺酸、麩胺酸醯胺。
本發明所製備出藥物給藥可以口服、非口服、經由吸入噴霧(inhalation spray)或藉由植入貯存器(implanted reservoir)的方式。非口服可包括(subcutaneous)、皮內(intracutaneous)靜脈內(intravenous)、肌肉內(intramuscular)、關節內(intraarticular)動脈(intraarterial)、滑囊(腔)內(intrasynovial)、胸骨內(intrasternal)蜘蛛膜下腔(intrathecal)、疾病部位內(intralesional)注射以及灌注技術。
口服成分的形式可包括，但不限定於，藥錠、膠囊、乳劑(emulsions)、水性懸浮液(aqueous suspensions)、分散液(dispersions)與溶液。
再者，本發明還提供一種圓柏萃取物用於製造用以抑制血管新生之藥物的用途。
上述圓柏萃取物係萃取自一圓柏，而此圓柏可包括，真柏、偃柏、圓柏(原變種)、清水圓柏、龍柏、塔柏及/或銀柏，但不限於此。在一實施例中，上述圓柏為偃柏。
於本發明中，上述圓柏的萃取部位可包括根、莖/幹、枝、葉及/或其組合，但不限於此。在一實施例中，上述圓柏萃取物可萃取自圓柏的細枝葉。
此外，在一實施例中，適合用於萃取上述圓柏萃取物的溶劑的例子可包括醇類(例如，甲醇、乙醇或丙醇)、酯類(例如，乙酸乙酯)、烷類(例如，己烷)或鹵烷(例如，氯甲烷、氯乙烷)，但並不以此為限。在一實施例中，萃取溶劑為乙醇。
在一實施例中，上述圓柏萃取物的成分包含亞太因，其具有抑制血管新生之功效。
於一實施例中，圓柏萃取物係萃取自偃柏，又此圓柏萃取物係以乙醇萃取而得。於此實施例中，上述圓柏萃取物的成分至少包括亞太因。於另一實施例中，圓柏萃取物係以乙醇萃取自偃柏的細枝葉而得。而於此實施例中，上述圓柏萃取物的成分至少包括亞太因。
另外，本發明更提供一種木酚素用於製造用以抑制血管新生之藥物的用途，其中該木酚素之分子式如式(I)所示： 其中R1 為-H或-OCH3 ，R2 為-H或-OH，R3 為-H、-OH或β -O-葡萄糖苷，R4 為-H或-OCH3 ；以及一藥學上可接受之載體或鹽類。
在一實施例中，上述木酚素可包括，但不限於亞太因(yatein)、裂欖質素(5’-desmethoxyyatein或bursehernin)、7’,7’-dihydroxy bursehernin(7’,7’二羥基裂欖質素)、5’-甲氧基亞太因(5’-methoxyyatein)、西藏鬼臼脂醇(podorhizol)及西藏鬼臼脂醇4’-o-β-D-吡喃葡萄糖苷(podorhizol 4’-o-β-D-glucopyranoside)。在一示範實施例中，上述木酚素為亞太因。
【實施例】
A.偃柏(Jnniperus chinensis L.var.sargentii Henry)之活性部位探討與確認
將約10 g之乾燥偃柏細枝葉，潤浸於8至10倍重量之溶劑(如：水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或己烷)中，並將潤浸之藥材以沸點溫度萃取1小時獲得萃取液。之後，將萃取液以濾紙過濾，且濃縮到乾後，混合純水並以超音波震盪致成為懸浮液。然後將懸浮液進行凍乾工程。
將上述凍亁之粉末溶於適當之溶劑中，並進行體外抑制內皮細胞血管新生試驗(in vitro anti-angiogenesis assay)。分析萃取物對於人類臍帶靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)在細胞外基質(extracellular matrix,ECM)或生長因子減少(Growth factor reduced)Matrigel中形成網狀結構的抑制能力，並根據其小管結構形成的程度進行積分以作為量化指標。結果如表1所示。
結果顯示除了水萃取物無法抑制網狀結構之形成(管柱形成(tube formation))，其他溶劑萃取物皆可具抑制內皮細胞管柱形成的能力。
B. 偃柏之乙醇萃取物的製備
1.粗萃物(CBT-143-S)萃取製程
由上述結果，選擇偃柏之細枝葉作為萃取標的物，並選擇乙醇作為萃取溶劑。將所獲得之粗萃物命名為 CBT-143-S，其製備方法如下：(1)將偃柏細枝葉100公克潤浸於8至10倍重量之95%乙醇溶劑；(2)將步驟(1)潤浸之藥材及溶劑以沸點溫度萃取1小時，以金屬篩網(孔徑230網目(mesh))過濾以獲得萃取液；(3)將步驟(2)所得之萃取液以濾紙[型號：5A(直徑9 CM，孔徑7 μM，厚度0.22 mm)；TOYO ROSHI CO.,LTD]過濾；(4)將步驟(3)所得之濾液以迴旋濃縮機濃縮至乾，可得萃取物浸膏；(5)將步驟(4)所得之浸膏混合純水並以超音波震盪致成為懸浮液；(6)將步驟(5)所得之懸浮液利用液態氮冷凍並進行冷凍乾燥工程；(7)冷凍乾燥完成後收集產物，此產物即為粗萃物CBT-143-S。
2.分萃物(CBT-143-S-F6F7)之製備
為增加粗萃物的活性，將上述粗萃物CBT-143-S進行分離純化。分離純化方法如下，分萃物之製備流程參見第1圖：(1)將CBT-143-S樣品30克，利用乾式充填法固定(即，CBT-143-S利用適當之溶劑溶解後，加入2倍重量 (60克)之矽凝膠，混合均勻後利用真空迴旋濃縮器將CBT-143-S均勻的固定至矽凝膠表面)(步驟S1)；(2)以所含矽凝膠為CBT-143-S樣品之15倍重的矽凝膠管柱(管柱矽凝膠為450克，充填於內徑6公分之玻璃管柱，充填完後矽凝膠高28公分，乾式充填基質充填至管柱後高4.5公分)來對CBT-143-S樣品進行分離(步驟S2)；(3)以丙酮：正己烷=1：2為起始移動相對管柱進行沖提，沖提3300 mL結束，以試管每20 ml分段收集沖提液(步驟S3)(F1~F7管)；(4)以丙酮對矽膠管柱進行清洗(步驟S3’)(F8管)；(5)以甲醇對矽膠管柱進行清洗(步驟S3”)(F9管)；(6)利用正相(normal phase)薄層分析監測分段收集之沖提液，以丙酮：正己烷=2：3作為移動相，展開後利用10% H2 SO4 ( EtOAc )染色並加熱至105℃呈色，計算其主要呈色斑點之Rf 值(步驟S4)；(7)收集Rf 值介於0.35~0.55之間之沖提液(步驟S4’)；(8)將沖提液合併並以迴旋濃縮機濃縮至乾得到分萃物浸膏；(9)將分萃物浸膏加入等重純水，經由超音波震盪懸浮後以液態氮進行冷凍；(10)進行冷凍乾燥，產物冷凍乾燥粉末即為分萃物CBT-143-S-F6F7；(11)將所獲得之分萃物CBT-143-S-F6F7進行細胞及 動物活體活性評估。
3.活性成分之分離純化與鑑定
利用層析管柱及活性導引方式將前述之分萃物CBT-143-F6F7進行活性物質的分離純化。製備流程請參閱第2圖。參照流程第2圖，將CBT-143-S-F6F7作為原料，以條件P1進行分離並以條件P’進行檢測合併濃縮乾燥，可得含有JC-5活性成分的分劃CBT-143-S-F6F7-A2；將此分劃以條件P2進行分離並以條件P’進行檢測合併濃縮乾燥之後，可得主要含JC-5的分劃CBT-143-S-F6F7-A2-B2；分劃CBT-143-S-F6F7-A2-B2再經由條件P3的條件進行分離並以條件P’進行檢測合併濃縮乾燥及條件P4再結晶可得純物質JC-5。條件P1至P4以及條件P’的說明如下：
P1：快速效能層析(flash performance liquid chromatography,FPLC)：管柱：矽膠(silica gel)管柱(0.015~0.040 μm)，2.0 cm(內徑)＊ 30 cm(長度)；移動相(mobile phase)：乙酸乙酯(EtOAc)：正己烷(n-hexane)=1：1；流速：5 mL/分鐘；分劃收集器(fraction collector)：10 mL/管。
P2：快速效能層析：管柱：矽膠管柱(0.015~0.040 μm),2.0 cm(內徑)＊ 30 cm(長度)；移動相：乙酸乙酯(EtOAc)：正己烷=1：1.5；流速：5 mL/分鐘；分劃收集器：10 mL/管。
P3：快速效能層析：管柱：矽膠管柱(0.015~0.040 μm),1.5 cm(內徑)＊ 30 cm(長度)；移動相：乙酸乙酯(EtOAc)：正己烷=1：1.5；流速：5 mL/分鐘；分劃收集器：10 mL/管。
P4：以甲醇再結晶。
P’：薄層色層分析(thin layer chromatography,TLC)：將正相薄層色層分析鋁片(TLC Silica gel 60 F254,Merck)裁切為長度5公分，寬度7公分，並於離底部1公分之處以定量毛細管充填樣品1 uL。樣品充填完成並乾燥後置入展開槽中展開4公分(展開液：乙酸乙酯：正己烷=1：1)，展開完成乾燥後均勻噴灑呈色劑(10% H2 SO4(EtOAc) 並加熱(105℃，5分鐘)，呈色完成後觀察JC-5所在區間(Rf 值：0.55~0.61，黑色斑點)，收集含有此斑點的部分並進行濃縮乾燥。
將純物質JC-5以核磁共振光譜(NMR)方法進行鑑定。結果如第3A至3B圖所示。第3A圖為化合物JC-5的1 H光譜，此光譜揭示化合物JC-5結構中所含氫原子的數目，由其出現的位置(δ值)及積分值比值可推斷出此結構中共含有24氫原子。而第3B圖為化合物JC-5的13 C光譜，此光譜揭示化合物JC-5結構中共含有22碳原子。
將第3A圖及第3B圖所得之資訊和文獻[Ikeda,R.；Nagao,T.；Okabe,H.；Nakano,Y.；Matsunaga,H.；Katano,M.；Mori,M.Chem.Pharm.Bull. 1998 ,46,871-874.]中有關亞太因的敘述及資料作比對，並將資料整理如表2，經由 上述比對，確認化合物JC-5為亞太因。而亞太因之結構如第4圖所示。
又，藉由使用Matrigel(BD,Cat.No.356231)作為基質，並觀察HUVEC細胞於此基質上網狀結構組合情形， 來分析JC-5(亞太因)對於HUVEC網狀結構的抑制情形。分析基準與條件如下所述。經由NIS element影像分析軟體(Nikon，代理商：國祥儀器)，來計算網狀結構總長，其中以未加藥組所形成的網狀結構作為100%，來分析JC-5對於HUVEC形成網狀結構的抑制情形。
而經由上述抑制血管網狀結構形成之活性分析結果發現，亞太因對於抑制管柱形成之IC50 為0.335 μM(第5圖)。因此確認亞太因為活性成份。
4.粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)之高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)指紋圖譜
分析方法：檢品配置：將各約10 mg之CBT-143-S及CBT-143-S-F6F67粉末，分別置於10 ml之定量瓶中，之後添加95%乙醇定量至10 ml，以超音波震盪使其完全溶解。
HPLC分析條件：層析管柱種類：Cosmosil 5C18-MS-II 4.6＊ 250；流速：0.8 ml/分鐘；觀測波長：280 nm；移動相：A：0.1% H3 PO4 ；B：CH3 CN；C：MeOH
梯度：A/B/C=65/25/10(60分鐘)→A/B/C=25/60/15(1分鐘)→A/B/C=65/25/10(9分鐘)。
分析結果：第6A圖與第6B圖分別顯示粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)之HPLC品管分析圖，可作為本發明標的物品管的參考。
利用上述純化之亞太因(JC-5)純物質，當作對照標準品，進行粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)之HPLC定性/定量分析方法開發，並與亞太因(yatein)對照標準品的HPLC指紋圖譜(參見第6C圖)進行比對，由第6A圖與第6B圖可知，粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)皆具有JC-5活性成分之主要波峰。另外，一併對前述以不同溶劑萃取之偃柏之細枝葉的萃取物進行分析，其亞太因的含量顯示於上方表1中。
5.粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)之體外(in vitro )活性評估
(1)抑制血管網狀結構之形成(tube formation)
藉由使用Matrigel(BD,Cat.No.356231)作為基質，並觀察HUVEC細胞於此基質上網狀結構組合情形，來分析粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)對於HUVEC網狀結構的抑制情形。分析基準與條件如下所述。經由NIS element影像分析軟體(Nikon，代理商：國祥儀器)，來計算網狀結構總長，其中以未加藥組所形成的網狀結構作為100%，來分析粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)對於HUVEC形成網狀結構的抑制情形。
由實驗結果顯示，隨著測試濃度增加，粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)對於抑制管柱形成(tube formation)的效果亦隨之增加，並具有明顯劑量依循性(dose-dependent)的效應(第7圖與第8圖)。
又，經計算後確認，粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)對於抑制管柱形成之IC50 分別為0.221 μg/ml與0.0123 μg/ml(第9圖與第10圖)。此結果顯示，透過純化的方法，相較於粗萃物(CBT-143-S)，分萃物(CBT-143-S-F6F7)的活性可增加20.3倍。
(2)抑制內皮細胞移動之評估(HUVEC migration assay)
於BD transwell系統中，觀察在有營養物質驅動下，HUVEC往下穿越膜(membrane)之移動情形。以不含血清物驅動為負控制組，並以含血清物趨動作為正控制組，來觀察本發明萃取物對於內皮細胞移動的抑制情形，其中以結晶紫(crystal violet)進行細胞染色，以易於觀察細胞移動的情形。結果顯示，分萃物CBT-143-S-F6F7的確可抑制內皮細胞移動(第11圖)。
(3)抑制肝癌細胞移動之評估(Wound healing migration assay)
挑選具有高移動能力的肝癌細胞株SK-Hep-1進行測試。首先，將細胞接種在6-孔盤中。待細胞貼附後，利用200 ul微量吸管頭(tip)。於盤內刮出一條直線，且洗去直線內被刮除掉的細胞後，觀察位於直線兩側細胞在24小時及 48小時之後移動填補回來的情形(第12圖)。結果顯示，在處以不同濃度的粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)時，細胞移動量皆會有所減少。
在第48小時結束觀察，並立即將盤內的細胞進行MTT assay確認細胞存活率。經由將細胞移動的比率與細胞的存活率相互比較，可得知粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)是否有抑制SK-Hep-1移動能力的效果存在。
根據本分析方法評估的結果，可以得知，隨著測試時間增加時，粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)對於抑制SK-Hep-1細胞移動的效果亦隨之增加(第12圖)。
6.粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)之活體(in vivo )抗血管新生實驗
藉由皮下注射(subcutaneous injection)至BALB/c小鼠皮下，形成Matrigel拴子(plugs)，以評估試驗物質能否抑制血管生長因子或Hep-3B條件培養液所誘發的血管新生的作用。
(1)活體抗血管新生實驗(Matrigel plugs assay)
Matrigel由Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠肉瘤(mouse sarcoma)純化出來，含有豐富的細胞外基質(extracellular matrix,ECM)蛋白，且含有血管生長所需的多種因子。Matrigel在室溫及37℃的狀態下，能聚合成固態膠狀，可提供血管內皮細胞較佳的生長環境。
將Matrigel與血管生長因子(FGFb+VEGF)或是Hep-3B條件培養液(conditional medium,CM)(內含多種血管生長因子)混和後，再將試驗物質混合入Matrigel內。
實施方法簡述如下：
(a)動物品系：雌性BALB/c小鼠(BALB/cAnNCrlBltw，購自樂斯科公司)，週齡6-8週。
(b)以Matrigel混合PBS處理之組別作為負控制組，並以Matrigel混合血管生長因子FGFb(500 ng/ml)+VEGF(500 ng/ml)或是Hep-3B條件培養液(CM)處理之組別作為正控制組。將試驗物質混合至含有血管生長因子的Matrigel後，藉由皮下注射注入小鼠(BALB/c mice)皮下，並觀察試驗物質是否能夠抑制Matrigel拴子內的血管新生作用。
(c)實驗最後以QuantiChromTM Hemoglobin Assay Kit定量Matrigel中血紅素含量以評估血管新生的數量。
經過14天後取下小鼠皮下之Matrigel拴子，並加入等量中性蛋白酶(dispase)於37℃反應16小時，以溶解細胞間質膠，之後離心14,000 rpm 10分鐘，吸取上清液至另一微量試管。將50 μl上清液與200 μl Hemoglobin Assay Kit內附的反應試劑混合後，於室溫反應5分鐘後，測定OD400 nm吸光值。單位濃度換算為((OD樣本 -OD空白組 )/(OD校準 -OD空白組 ))×100×n(mg/dL)，100是校準(calibrator)濃度100 μg/dL，n是稀釋的倍數。
實驗結果：
(a)生長因子誘導的活體血管新生的評估試驗
在上述生長因子誘導的活體血管新生的評估試驗中，在僅以PBS處理的負控制組中，植入小鼠皮下14天的Matrigel拴子，其中的血紅素(hemoglobin)濃度接近背景值17.68±11.64(mg/dL)；然而在加入生長因子FGFb(500 ng/mL)+VEGF(500 ng/mL)後，於Matrigel拴子中可以發現明顯血管新生的作用，且血紅素濃度可達到52.64±26.18(mg/dL)。於口服每天投與Nexavar(30 mg/kg/天)之組別中，血紅素的含量有明顯的減少至27.09±5.88(mg/dL)。於以粗萃物(CBT-143-S)(100 μg/mL)處理之組別中，在Matrigel拴子中之血紅素濃度為27.92±9.62(mg/dL)。而於分別以分萃物(CBT-143-S-F6F7)30 μg/mL以及100 μg/mL處理之組別中，Matrigel拴子所測得的血紅素含量分別為56.70±5.58(mg/dL)以及25.08±9.59(mg/dL)。
結果顯示，在較高濃度中粗萃物(CBT-143-S)以及分萃物(CBT-143-S-F6F7)具有血管新生的抑制作用潛力(第13圖)。
(b)Hep-3B人類肝癌細胞的濃縮培養液(CM)誘導的活體血管新生的評估試驗
在Hep-3B人類肝癌細胞的條件培養液(CM)誘導的活體血管新生的評估試驗中，在僅以PBS處理的負控制組中，植入小鼠皮下14天的Matrigel拴子，其中的血紅素濃 度為16.23±11.64(mg/dL)；然而在加入條件培養液後，於Matrigel拴子中可以發現明顯血管新生的作用，且血紅素濃度可達到52.61±13.14(mg/dL)。於口服每天投與Nexavar(30 mg/kg/天)之組別中，血紅素的含量有明顯的減少至25.05±17.59(mg/dL)。於以粗萃物(CBT-143-S)(100 μg/mL)處理之組別中，在Matrigel拴子中之血紅素濃度為22.91±15.95(mg/dL)。而於分別以分萃物(CBT-143-S-F6F7)30 μg/mL以及100 μg/mL處理之組別中，Matrigel拴子所測得的血紅素含量分別為51.49±8.97(mg/dL)以及20.61±7.52(mg/dL)。
結果顯示，在較高濃度中粗萃物(CBT-143-S)以及分萃物(CBT-143-S-F6F7)具有血管新生的抑制作用潛力(第14圖)。
(2)活體(in vivo )抗血管新生實驗(CAM assay)
將濾紙吸附待測藥物或者PBS之後，放置於雞胚胎的絨毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)上，觀察絨毛尿囊膜上血管的生長。
將無特定病原(specific-pathogen-free,SPF)之白色亨來雞(White Leghorn)的雞胚胎橫向置於孵蛋器(37.3℃，RH 55-60%)。於孵化期第4天(D4)以20G針吸出2.5 mL蛋白，並於胚胎上方製造偽氣室，之後將針孔及偽氣室開口以3M透氣膠帶封住。於第七天(D7)以DMSO溶解待測藥物，再以PBS稀釋，各組別包括PBS對照組最終之DMSO濃度 皆為1%，並以圓形濾紙Advantec® Filter paper(直徑6mm)(Toyo Roshi Kaisha,Ltd)吸附已稀釋之待測藥物，吸附體積為25 μL。每個待測藥物配製3個劑量別，分別為50、25及10 μg/胚胎(embryo)。且於第七天(D7)將濾紙放置於尿絨毛膜上，而之後於第9天(D9)將尿絨毛膜以解剖顯微鏡SZX16(Olympus)物鏡1.25倍照相。以濾紙為中心，在照片上標記4個同心圓(直徑分別為7、8、9及10 mm，4個同心圓圓周總長106.8 mm，其即代表靠近濾紙的區域。藉由肉眼判讀與同心圓交叉的血管總數(即為血管密度指數(vascular density index,VDI))以評估血管新生。VDI越高表示血管越密集。同一照片之VDI分別由3個人判讀後取平均值，各給藥組之VDI分別與對照組比對以觀察是否有顯著差異。血管型態異常處則以物鏡4倍與8倍照相觀察。
實驗結果：
由表2及第15圖得知，分萃物CBT-143-S-F6F7(25 μg/胚胎)及粗萃物CBT-143-S(50 μg/胚胎)皆會造成尿絨毛膜的血管新生明顯減少。而由第16圖發現，中、高劑量組(50及25 μg/胚胎)的分萃物CBT-143-S-F6F7，的確會造成微血管結構改變。
表2、活體抗血管新生實驗(CAM assay)的結果
7.粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)之在正常細胞之毒性測試
為探討粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)之上述抑制活性效果是否因其本身的毒性所造成，將粗萃物(CBT-143-S)及分萃物(CBT-143-S-F6F7)進行正常細胞PBMC存活率分析及HUVEC之生長抑制分析，並以市售臨床用藥蕾莎瓦(sorafenib)等作比較，以作為參考。
(1)對PBMC正常細胞之毒性試驗(Alamarblue細胞存活率試驗)
Alamarblue為一種植物染劑，通常成藍色，在細胞增殖時該染料被降解，由藍色還原變成粉紅色，在570 nm可測得O.D值升高，反之，細胞死亡越多則測得之O.D值越低。
將PBMC細胞(1x 105 細胞/孔)接種於96孔盤，分別加 入不同濃度(300、100、30、10、3與1μ g/ml)之不同CBT-143-S及CBT-143-S-F6F7等樣本。培養72小時後，再加入alamarblue試劑置於37℃，培養24小時，再以ELISAreader O.D 570 nm/600nm波長測吸光值。然後將側得之O.D.值代入下列計算公式中，
λ1 =570
λ2 =600
(εOX )λ2 =117,216(OX意指氧化反應)
(εOX )λ1 =80,586
A λ1 =0.65測試孔洞之觀察吸收值
A λ2 =0.36測試孔洞之觀察吸收值
A0 λ2 =0.78正控制組孔洞之觀察吸收值
A0 λ1 =0.19正控制組孔洞之觀察吸收值
結果顯示，在CBT-143-S及CBT-143-S-F6F7濃度為30 ug/ml時，PBMC細胞的存活率(viability)仍然高於50%，顯示其IC50 大於30 ug/ml(表3)。
表3、粗萃物CBT-143-S及分萃物CBT-143-S-F6F7對PBMC正常細胞之毒性試驗
(2)對HUVEC生長之抑制分析
同樣以Alarmablue分析方法評估細胞存活率。將HUVEC細胞(1x 104 細胞/孔)接種於96孔培養盤中。分別加入不同濃度之CBT-143-S及CBT-143-S-F6F7等樣品於培養盤中，並紀錄0小時及48小時後的吸光值以評估細胞生長是否受到測試物的影響。結果顯示，CBT-143-S及CBT-143-S-F6F7對於HUVEC細胞生長的半抑制劑量(GI50 )分別為0.52 ug/ml及0.006 ug/ml(第17圖)。根據上述可以得知，偃柏萃取物對於HUVEC的生長抑制現象甚為明顯。
雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
S1‧‧‧使粗萃物CBT-143-S固定於矽膠表面上
S2‧‧‧載入矽膠管柱中
S3‧‧‧以丙酮與正己烷(丙酮：正己烷=1：2)對矽膠管柱進行沖提(F1~F7管)
S3’‧‧‧於S3之後以丙酮對矽膠管柱進行洗(F8管)
S3”‧‧‧於S3之後以甲醇對矽膠管柱進行洗(F9管)
S4‧‧‧利用正相(normal phase)薄層分析監測分段收集之沖提液，以丙酮：正己烷=2：3作為移動相，展開後利用10% H2S O4 (EtOAc)染色並加熱至105℃呈色，計算其主要呈色斑點之Rf 值
S4’‧‧‧收集Rf為0.35~0.55之F6與F7管
P1、P2、P3‧‧‧快速效能層析
P4‧‧‧以甲醇再結晶
P’‧‧‧薄層色層分析
1301、1401‧‧‧含藥濾紙
第1圖顯示分萃物CBT-143-S-F6F7的製備流程。
第2圖利用層析管柱及活性導引方式將分萃物CBT-143-F6F7進行活性物質之分離純化的製備流程。
第3A圖為化合物JC-5的1 H光譜。
第3B圖為化合物JC-5的13 C光譜。
第4圖顯示亞太因之結構。
第5圖顯示JC-5亞太因抑制血管網狀結構形成之活性分析的結果。
第6A圖顯示粗萃物CBT-143-S的HPLC指紋圖譜。
第6B圖顯示分萃物CBT-143-S-F6F7的HPLC指紋圖譜。
第6C圖顯示亞太因之標準品的HPLC指紋圖譜。
第7圖顯示粗萃物CBT-143-S對於HUVEC形成網狀結構的抑制情形。
第8圖顯示分萃物CBT-143-S-F6F7對於HUVEC形成網狀結構的抑制情形。
第9圖顯示粗萃物CBT-143-S之濃度與HUVEC之管柱形成的相對關係。
第10圖顯示分萃物CBT-143-S-F6F7之濃度與HUVEC之管柱形成的相對關係。
第11圖顯示分萃物CBT-143-S-F6F7對於HUVEC之移動的影響。
第12圖顯示粗萃物CBT-143-S及分萃物CBT-143-S-F6F對於SK-Hep-1細胞之移動的影響。
第13圖顯示粗萃物CBT-143-S及分萃物CBT-143-S-F6F7對於生長因子誘發的活體抗血管新生作用的影響。數據以平均值±標準差表示，p<0.05：＊ 指與生長因子處理組相比較。
第14圖顯示粗萃物CBT-143-S及分萃物CBT-143-S-F6F7對細胞培養液誘發的活體抗血管新生作用的影響。數據以平均值±標準差表示，p<0.05：＊ 指與生長因子處理組相比較。
第15圖顯示分萃物CBT-143-S-F6F7及粗萃物CBT-143-S對於活體內血管新生作用的影響(1.25倍放大)。
第16圖顯示分萃物CBT-143-S-F6F7對於活體內血管新生作用的影響(4與8倍放大)。
第17圖顯示粗萃物CBT-143-S及分萃物CBT-143-S-F6F7對於HUVEC細胞的增生的影響。

Claims (10)

  1. 一種圓柏(Juniperus chinensis )萃取物用於製造抑制血管新生之藥物的用途。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之圓柏萃取物用於製造抑制血管新生之藥物的用途，其中該圓柏包括真柏(Juniperus chinensis var.Shimpaku)、偃柏(Juniperus chinensis L.var.sargentii Henry)、圓柏(Juniperus chinensis L.var.chinensis )(原變種)、清水圓柏(Juniperus chinensis L.var.taiwanensis R.P.Adams & C.F.Hsieh)、龍柏(Juniperus chinensis L.var.kaizuka Hort.ex Endl.)、塔柏(Juniperus chinensis L.var.pyramidalis (Carr.)Hort.ex Rehd.)及/或銀柏(Juniperus chinensis cv.Pfitzeriana Glauca)。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之圓柏萃取物用於製造抑制血管新生之藥物的用途，其中該萃取物萃取自該圓柏的根、莖/幹、枝、葉及/或其組合。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之圓柏萃取物用於製造抑制血管新生之藥物的用途，其中該萃取物係以醇類、酯類、烷類或鹵烷溶劑萃取而得。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之圓柏萃取物用於製造抑制血管新生之藥物的用途，其中該萃取物的成分包括亞太因(yatein)。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之圓柏萃取物用於製造用以抑制血管新生之藥物的用途，其中該圓柏為偃柏，而該萃取物係以乙醇萃取而得。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之圓柏萃取物用於製造用以抑制血管新生之藥物的用途，其中該萃取物係以乙醇萃取自該偃柏的細枝葉而得。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之圓柏萃取物用於製造用以抑制血管新生之藥物的用途，其中該用以抑制血管新生之藥物係用於治療一血管新生相關疾病，該血管新生相關疾病包括固態癌症(solid tumors)、老年性黃班性退化(age related macular degeneration)、脈絡膜新生血管(choroidal neovascularization)、糖尿病性黃斑水腫(diabetic macular edema)、糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy)、眼部腫瘤(ocular neoplasm)、視網膜靜脈阻塞(retinal venous occlusion)或微血管擴張(telangiectasis)。
  9. 一種木酚素(lignan)用於製造用以抑制血管新生之藥物的用途，其中該木酚素之分子式如式(I)所示： 其中R1 為-H或-OCH3 ，R2 為-H或-OH，R3 為-H、-OH或β -O-葡萄糖苷(glucoside)，R4 為-H或-OCH3 。
  10. 如申請專利範圍第9項所述之木酚素用於製造用以抑制血管新生之藥物的用途，其中該木酚素包括亞太因、裂欖質素(5’-desmethoxyyatein或bursehernin)、7’,7’-dihydroxy bursehernin(7’,7’二羥基裂欖質素)、5’-甲氧基亞太因(5’-methoxyyatein)、西藏鬼臼脂醇(podorhizol)或西藏鬼臼脂醇4’-o-β-D-吡喃葡萄糖苷(podorhizol 4’-o-β-D-glucopyranoside)。
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JP2013257009A JP6185830B2 (ja) 2012-12-19 2013-12-12 医薬組成物および血管新生の阻害方法
US14/133,213 US9682062B2 (en) 2012-12-19 2013-12-18 Pharmaceutical compositions and method for inhibiting angiogenesis
US14/864,203 US20160008319A1 (en) 2012-12-19 2015-09-24 Pharmaceutical compositions for inhibiting angiogenesis
JP2016020388A JP6266666B2 (ja) 2012-12-19 2016-02-05 医薬組成物および血管新生に関係する眼疾患の治療方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070008230A (ko) * 2005-07-13 2007-01-17 한국생명공학연구원 향나무 추출물 또는 세드롤을 포함하는 비만 및 제2형당뇨병 예방 및 치료용 조성물

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US7807803B2 (en) 2002-07-03 2010-10-05 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
WO2006039807A1 (en) 2004-10-15 2006-04-20 Biopharmacopae Design International Inc. Methods and therapeutic compositions comprising plant extracts for the treatment of cancer
EP1539204A1 (en) 2002-08-30 2005-06-15 Biopharmacopae Design International Inc. Plant extracts for treatment of angiogenesis and metastasis
TW200503738A (en) * 2003-07-16 2005-02-01 Tzu Chi Buddhist General Hospital Method for extracting antineoplastic components from bupleurum scorzonerifolium
KR100673574B1 (ko) 2005-12-19 2007-01-24 학교법인 동의학원 향나무로부터 분리된 세드롤을 함유하는 암 예방 및치료용 조성물
KR100799266B1 (ko) 2006-11-02 2008-01-30 학교법인 동의학원 향나무 추출물로부터 분리된 위드롤을 유효성분으로함유하는 암 예방 및 치료용 조성물
KR20090106274A (ko) * 2008-04-04 2009-10-08 연세대학교 산학협력단 노송나무 추출물을 포함하는 고지혈증 또는 지방간의 예방또는 치료용 조성물
KR100911623B1 (ko) * 2008-05-19 2009-08-12 연세대학교 산학협력단 비만, 고지혈 또는 당뇨의 예방 또는 치료용 분획물
EP3301176B1 (en) * 2011-02-11 2019-09-25 The Rockefeller University Method for identifying nucleic acids regulating metastasation
CN102329228A (zh) * 2011-05-31 2012-01-25 苏州派腾生物医药科技有限公司 一种从龙柏中提取璎珞柏酸的方法
WO2014086379A1 (en) * 2012-12-03 2014-06-12 Alpinia Laudanum Institute Of Phytopharmaceutical Sciences Ag Lignan compositions
TWI465241B (zh) 2012-12-19 2014-12-21 Ind Tech Res Inst 圓柏（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）萃取物或木酚素（ｌｉｇｎａｎ）用於製造抑制血管新生之藥物的用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070008230A (ko) * 2005-07-13 2007-01-17 한국생명공학연구원 향나무 추출물 또는 세드롤을 포함하는 비만 및 제2형당뇨병 예방 및 치료용 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Miyata, L et al, "Extractives of Juniperus chinensis L. - I: Isolation of podophyllotoxin and yatein from the leaves of J-chinensis", JOURNAL OF WOOD SCIENCE, 44(5), 397-400, 1998. Kuo, YC et al, "Yatein from Chamaecyparis obtusa suppresses herpes simplex virus type 1 replication in HeLa cells by interruption the immediate-early gene expression", ANTIVIRAL RESEARCH, 70(3), 112-120, 2006. *

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