TWI415630B - 具有自由硫醇部份的蛋白質的安定化組合物 - Google Patents

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Description

具有自由硫醇部份的蛋白質的安定化組合物
本發明有關於具有自由硫醇的蛋白質的組合物，以及製造與使用此類組合物的方法。本發明的組合物具有最佳化的安定性。
藥物產品，例如具有蛋白質者，可以用液體或凍乾(lyophilized，亦即冷凍乾燥，freeze－dried)的型態保存。凍乾的藥物產品通常在病患使用前，以添加適當劑量稀釋劑的方式還原。
可能會因為物理上的不安定性，包括變性(denaturation)與聚合(aggregation)，以及化學上的不安定性，例如水解(hydrolysis)、脫醯胺作用(deamidation)與氧化作用(oxidation)的結果而失去活性的蛋白質。特殊形式的蛋白質藥物，例如液體或凍乾類型，可被慎重考慮做為藥品形式的選擇。
一般而言，本發明係有關於一組合物，其包括具有自由硫醇(free thiol,－S－H)的蛋白質(例如胱胺酸殘基,cysteine residue)，及/或其他氧化作用標的部分(例如酪氨酸(Tyr)、色胺酸(Trp)、或甲硫胺酸(Met))，以及碳水化合物，其中該碳水化合物的含量足以維持該蛋白值的安定性，從而成為組合物。在一實施例中，需要被保護的部分是自由硫醇。
此處所述之組合物與方法係用於增加安定性與儲存期間，係藉由增加其中所包含的蛋白質的安定性而達成。
此處所稱之組合物，例如具有蛋白質的液體組合物，具有特別長的安定性。例如，在預先選定的條件下，如儲存於氣密容器中，溫度為2至8℃、期間為3、6、9、12或24個月以上(在某些實施例的時間更長)，組合物的蛋白質可維持儲存前的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、或100%。此處所指的安定性，包括參數如蛋白質結構(例如，減少或預防蛋白質結構的改變，如蛋白質聚合(protein aggregation)或蛋白質降解，如片段化)，及/或蛋白質的生物活性，如將受質轉變為產物的能力。
蛋白質安定性是可以被測量的，如藉由測量蛋白質聚合、蛋白質降解、或是蛋白質生物活性的程度。蛋白質聚合可以被決定，例如，分子大小排斥層析(size exclusion chromatography)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、或其他可決定大小等方法。例如，相較於儲存之前(例如，儲存溫度為2至8℃，期間至3、6、9、12、或24個月或更久)，組合物可具有少於1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、或50%的蛋白質聚合的增加量(例如以分子大小排斥層析測量)。蛋白質降解可以被決定，例如，藉由逆相高效能液相層析(reverse phase HPLC)、原態電泳(non-denaturing PAGE)、離子交換層析(ion-exchange chromatography)、胜肽圖譜(peptide mapping)、或類似的方法。舉例來說，相較於儲存之前(例如，儲存溫度為2至8℃，期間至3、6、9、12、或24個月或更久)，組合物可具有少於1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、或50%的蛋白質降解量的增加量(例如，以逆相高效能液相層析測量)。蛋白質的生物活性可以被測量，例如藉由體外或體內的測試(in vitro or in vivo assays)，如ELISA(例如測量結合或酵素活性)以及其他酵素學的測試(例如，分光光度計的(spectrophotometric)、螢光的(fluorimetric)、熱量的(calorimetric)、化學發光的(chemiluminescent)、輻射的(radiometric)、或層析法的(chromatographic)測試)、動力學測試(kinase assays)、以及其他試驗。例如，相較於儲存之前(例如，儲存溫度為2至8℃，期間至3、6、9、12、或24個月或更久)，組合物可具有少於1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50%的蛋白質生物活性的降低量(如酵素活性，例如以活體外方法測試)。
一方面，組合物的蛋白質並未被修飾任何部分，例如切割。例如，在一實施例中，以具有葡萄糖腦甘酯酶(glucocerebrosidase，以下簡稱GCB)，但不包含聚山梨醇酯(polysorbate)的組成物作為界面活性劑(surfactant)，因為GCB會辨識聚山梨醇酯為受質，並可將聚山梨醇酯切割以釋放自由脂肪酸。
本發明之實施例具有與相同蛋白質的凍乾組合物的安定性比較。此處所描述的液體組合物可具有至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、或100%凍乾組合物在儲存3、6、12、18、或24個月之後的蛋白質安定性(例如，活性保留(retained activity))，例如，若凍乾組合物在儲存18個月之後保有90%活性，本發明之組合物可保有至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、或100%程度的活性。
另一方面，以組合物為特點的揭露包括具有自由硫醇的蛋白質與碳水化合物，其中此碳水化合物的含量足以維持該蛋白質的安定性，且該組合物的pH值小於7.0。在某些實施例中，組合物亦包括抗氧化劑，此抗氧化劑與碳水化合物的含量足以維持該蛋白質的安定性，並形成該組合物，且此組合物的pH值小於7.0。例如，該抗氧化劑可為胱胺酸(cysteine)、胱胺酸-鹽酸(cysteine hydrochloride,cysteine-HCl)、或甲硫丁氨酸(methionine)，例如，體積重量比濃度(wt/vol)係介於約0.001至約10%之間，以及碳水化合物可為蔗糖(sucrose)與海藻糖(trehalose)，例如體積重量比容度係介於約1至約40%之間。在有些實施例中，pH值的範圍在約4.5至約6.5之間，例如，較佳為介於約5.0及約6.0之間，例如，更佳為介於約5.5及約5.8之間(例如，約5.7)。在一較佳實施例中，該組合物包含一界面活性劑，例如，泊洛沙姆188(poloxamer 188)。
在一較佳實施例中，組合物的pH值為，例如，介於約4.5及約6.5之間，例如介於約5.0及約6.0之間，例如，介於約5.5及約5.8之間(例如約5.7)。
在某些實施例中，在預先選定的條件下，安定性至少高於5至80%(例如，至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、或至少高於約80%)，其係相較於缺少碳水化合物(及抗氧化劑，如果有使用的話)的組合物的安定性。
某些實施例中，碳水化合物(以即可選擇地，抗氧化劑)的含量足以安定該蛋白質的自由硫醇(如，蛋白質顯現較少的聚合產生)，例如蛋白質在預先選定的條件下，相較於其他不具有碳水化合物(及抗氧化劑，若有使用的話)的相同蛋白質組合物，顯示少於約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、或約99%的聚合產生。
在某些實施例，碳水化合物(以及，可選擇地，抗氧化劑)的含量足以增加該蛋白質的安定性(如蛋白質表現較少的聚合產生)，例如蛋白質在預先選定的條件下，相較於其他不具有碳水化合物(及抗氧化劑，若有使用的話)的相同蛋白質組合物，表現少於約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、或約99%的聚合產生。
在某些實施例中，碳水化合物(以及，可選擇地，抗氧化劑)的含量的含量係足以抑制該蛋白質的第一分子上的自由硫醇與該蛋白質的第二分子上的自由硫醇反應產生聚合。
某些實施例中，在預先選定的條件下，碳水化合物(以及，可選擇地，抗氧化劑)的含量的含量係足以抑制該蛋白質的第一分子上的自由硫醇與該蛋白質的第二分子上的自由硫醇反應產生聚合達至少5至80%，例如至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、或至少約80%以上，其係相較於缺少碳水化合物(以及抗氧化劑，如果有的話)的相同組合物。
在某些實施例中，碳水化合物(以及，可選擇地，抗氧化劑)的含量係足以使組合物儲存於氣密容器，溫度2－8℃，期間為6個月之儲存過程中，該組合物仍維持該組合物被儲存前至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、或100%的安定性。在一較佳實施例中，該儲存係發生於黑暗中。
某些實施例中，碳水化合物(以及，可選擇地，抗氧化劑)的含量係足以具有相較於冷凍乾燥的組合物的安定性，該組合物包含0.01%聚山梨醇酯20(polysorbate－20)、與pH 6.0,50 mM檸檬酸鹽(Citrate)。在某些實施例中，該組合物更包括體積重量比約約1－40%的碳水化合物，例如約5至約30%、約8至約24%、約16%，例如約3至5%，前述碳水化合物例如蔗糖或海藻糖。在部分實施例中，該碳水化合物較佳為蔗糖。
於一較佳實施例中，該組合物係為液體。
於某些實施例中，該組合物包含少於約10%氧氣(O2 )，例如，少於約5% O2 ，例如少於約2% O2 。於一較佳實施例中，溶解的O2 含量係少於該組合物中惰性氣體所溶解的含量。
某些實施例中，該組合物係以包含由該組合物中物理性移除O2 的方法所製成，例如使該組合物排氣，以氧氣之外的氣體清洗(purging)液體(例如氮氣(N2 )或氬氣(Ar)等惰性氣體)，以氧氣之外的氣體對組合物充氣(bubbling)。
在有些實施例中，組合物中具有自由硫醇的蛋白質含有0、2、4、6、或更多個硫醇基，這些硫醇基可形成硫氫基鍵結(sulfhydryl bridges)。在部分實施例中，每活性單位的蛋白質有2、3、或更多個自由硫醇基，以及0、2、4、或更多個硫醇基以形成硫氫基鍵結。
有些實施例中，具有自由硫醇的蛋白質係選自由葡萄糖腦甘酯酶(glucocerebrosidase,GCB)、鹼性纖維母細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、血紅素(hemoglobin)、硫氧還蛋白(thioredoxin)、鈣與整合素結合蛋白1(calcium－and integrin－binding protein 1,CIB1)、β乳球蛋白B(beta－lactoglobulin B)、β乳球蛋白AB、血清蛋白(serum albumin)、抗體(如，人類抗體，例如IgA(例如，二聚體IgA(dimeric IgA)、IgG(如IgG2)、與IgM；重組人類抗體、抗體片段(antibody fragments)，如Fab’片段、F(ab’)2 片段、單股Fv片段(single－chain Fv fragments,scFv))、抗體與抗體片段(antibodies and antibody fragments)，如Fab’、單株抗體片段(monoclonal antibody fragment，如C46.3與scFv)、重組(使抗體或抗體片段可被99mTc標示以作為臨床顯像用)誘導的胱胺酸殘基(如在第三中鍊保守區EU/OU計數第442的位置；單株抗體MN－14(一種高親合性的抗癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)單株抗體))、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－M(core 2 beta 1,6－N－acetylglucosaminyltransferase－M,C2GnT－M)、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－I(C2GnT－I)、血小板源生長因子β(platelet－derived growth factor receptor－beta,PDGF－beta)、腺苷酸轉移酶(adenine nucleotide translocase,ANT)、p53腫瘤抑制蛋白(p53 tumor suppressor protein)、麩蛋白(gluten proteins)、酸性鞘磷脂酶/重組酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,acid sphingomyelinase)、頭孢噻呋(desfuroylceftiofur,DFC)、載體蛋白B100(apolipoprotein B100,apoB)及其他低密度脂蛋白區域(low density lipoprotein domains)、載體蛋白A－I變異物(apolipoprotein A－I variants，例如載體蛋白A－I(Milano)以及載體蛋白A－I(Paris))、低氧誘導因子－1 α(hypoxia－inducible factor－1 alpha,HIF－1 alpha)、溫韋伯氏因子(von Willebrand factor,VWF)、具有如Ras的CAAX部分(CAAX motif)的蛋白質與胜肽仿效物(mimetics)、黏液溶解劑(mucolytics)、羧肽酶Y(carboxypeptidase Y)、細胞自溶酵素B(cathepsin B)、細胞自溶酵素C、骨骼肌鈣離子釋放通道/理阿諾鹼受體(skeletal muscle Ca2＋release channel/ryanodine receptor,RyR1)、核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF－KB)、激活蛋白1(AP－1)、蛋白質二硫鍵異構酶(protein－disulfide isomerase,PDI)、糖蛋白1b alpha(glycoprotein 1b alpha,GP1b alpha)、局部磷酸酶(calcineurin,CaN)、肌絲蛋白1(fibrillin－1)、CD4、S100A3(亦稱為S100E)、離子性穀氨酸受體(ionotropic glutamate receptors)、人類內－α－抑制素重鏈1(human inter－alpha－inhibitor heavy chain 1)、α 2－抗纖溶酶(alpha2－antiplasmin,alpha2AP)、凝血酶敏感蛋白(thrombospondin，亦稱為糖蛋白G(glycoprotein G))、寧蝕溶素(gelsolin)、黏蛋白(mucins)、肌酸激酶(creatine kinase)，例如S－硫甲基修飾之肌酸激酶(S－thiomethyl－modified creatine kinase)、因子VIII(Factor VIII)、磷酯酶D(phospholipase D,PLD)、胰島素受體β次單元(insulin receptor beta subunit)、乙醯膽鹼酯酶(acetylcholinesterase)、凝乳酶原(prochymosin)、修飾的α 2巨球蛋白(modified alpha 2－macroglobulin,alpha 2M，如蛋白酶或甲胺(methylamine)作用的alpha 2M)、穀胱甘肽還原酶(glutathione reductase,GR)、補體C2(complement component C2，例如2a)、補體C3(如C3b)、補體4(如4d)、補體因子B(complement Factor B，如Bb)、α乳蛋白(alpha－lactalbumin)、β－D－半乳糖甘酶(beta－D－galactosidase)、內質網鈣離子腺苷三磷酸酶(endoplasmic reticulum Ca2＋－ATPase)、核糖核酸酶抑制素(RNase inhibitor)、脂皮素1(lipocortin 1，亦稱為annexin 1)、增生細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、肌動蛋白(actin)，如球狀肌動蛋白(globular actin)、輔酶A(coenzyme A,CoA)、醯基輔酶A合成酶(acyl－CoA synthetase)，如丁醯基輔酶A合成酶(butyryl－coenzyme A synthetase)、3－2－逆式－醯基－輔酶A－異構酶前驅物(3－2trans－enoyl－CoA－isomerase precursor)、血管促尿因子敏感鳥嘌呤核甘酸環化酶(atrial natriuretic factor(ANF)－sensitive guanylate cyclase)、Pz－胜肽酶(Pz－peptidase)、醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase)，例如醯化醛脫氫酶(acylated aldehyde dehydrogenase)、P－450與NADPH－P－450還原酶(NADPH－P－450 reductase)、甘油醛－3－磷酸脫氫酶(glyceraldehydes－3－phosphate dehydrogenase,GAPDH)、6－丙酮醯－四氫蝶呤合成酶(6－pyruvoyl tetrahydropterin synthetase)、促黃體素受體(lutropin receptor)、低分子量酸性磷酸酶(low moleculat weight acid phosphatase)、血清膽鹼酯酶(serum cholinesterase,BChE)、腎上腺素(adrenodoxin)、透明質酸酶(hyaluronidase)、肉毒鹼乙醯基轉移酶(carnitine acyltransferases)、介白素－2(interleukin－2,IL－2)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase)、胰島素降解酶(insulin－degrading enzyme,IDE)、胞色素c1血基質次單元(cytochrome c1 heme subunit)、S－蛋白(S－protein)、纈氨醯－tRNA合成酶(valyl－tRNA synthetase,VRS)、α澱粉酶I(alpha－amylase I)、肌肉腺苷酸脫氨酶(muscle AMP deaminase)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase)、以及生長抑素結合蛋白(somatostatin－binding protein)所組成之群組。
在一較佳實施例中，該具有自由硫醇的蛋白質為GCB。
在另一較佳實施例中，該具有自由硫醇的蛋白質為bFGF。
在一觀點，本發明揭露之特徵在於一種GCB的液體組合物，該組合物包含GCB與一碳水化合物，pH值少於7.0，該組合物將該組合物暴露於惰性氣體(例如氮氣)中所製得，且惰性氣體存在的濃度係高於周遭的大氣，例如該組合物包含至少約85%、90%、95%、或99%、或較佳地100%的惰性氣體。在某些實施例中，該組合物亦包括一抗氧化劑。例如，該抗氧化劑係為胱胺酸、胱胺酸-鹽酸、或甲硫丁氨酸(例如，其體積重量比濃度(wt/vol)係介於約0.001至約10%之間)，以及該碳水化合物係為蔗糖或海藻糖(例如其體積重量比濃度係介於約1至約40%之間)。在某些實施例中，該pH值介於約4.5與約6.5的範圍之間，例如較佳為介於約5.0與約6.0之間，例如更較佳為介於約5.5與約5.8之間(如約5.7)。於某些實施例中，該組合物亦包括一界面活性劑泊洛沙姆188(poloxamer 188)。
在本發明之一形態中，本發明揭露之特徵在於包含具有自由硫醇之蛋白質與碳水化合物之組合物，而其pH值低於蛋白質上自由硫醇的pKa值，其中碳水化合物的含量足以增加蛋白質在該pH值下的安定性。
在某些實施例中，在預先選定的條件下，安定性至少為5-80%高於缺乏碳水化合物，以及其pH值在蛋白質的自由硫醇的pKa之上的碳水化合物，例如至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%或至少高於約80%以上。
在某些實施例中，碳水化合物的含量係足以安定該蛋白質的自由硫醇。
在某些實施例，碳水化合物的含量係足以抑制該蛋白質的第一分子上的自由硫醇與該蛋白質的第二分子上的自由硫醇反應產生聚合。
在部分實施例中，相較於缺少碳水化合物的相同組合物，該碳水化合物的含量在預先選定的條件下係足以抑制至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、或100%，由該蛋白質的第一分子上的自由硫醇與該蛋白質的第二分子上的自由硫醇反應產生的聚合。
在一較佳實施例中，碳水化合物的含量係足以使組合物儲存於黑暗、氣密容器、溫度為2－8℃、期間為3、6、9、12、或24個月之儲存過程中，該組合物仍維持該組合物被儲存前至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、或100%的安定性。
在某些實施例中，該碳水化合物的含量足以具有相較於冷凍乾燥的組合物的安定性。
在一較佳實施例中，該組合物係為液體。
在部分實施例中，該組合物包含少於10%的氧氣(例如，少於5%、或少於2%)。在有些實施例中，溶解的氧氣的含量係少於組合物中所溶解的惰性氣體的含量。
某些實施例中，該組合物係以包含由該組合物中物理性移除O2 的方法所製成，例如使該組合物排氣，以氧氣之外的氣體清洗(purging)液體(例如氮氣(N2 )或氬氣(Ar)等惰性氣體)，以氧氣之外的氣體(如氮氣或氬氣)對組合物充氣(bubbling)。
在部分實施例中，每活性單位的蛋白質有2、3、4、5、或更多個自由硫醇基。
在有些實施例中，組合物中具有自由硫醇的蛋白質含有0、2、4、6、或更多個硫醇基，每個活性單位的蛋白質(例如二聚體)的硫醇基可形成硫氫基鍵結(sulfhydryl bridges)。在部分實施例中，每活性單位的蛋白質有2、3、或更多個自由硫醇基，以及0、2、4、或更多個硫醇基以形成硫氫基鍵結。
有些實施例中，具有自由硫醇的蛋白質係選自由葡萄糖腦甘酯酶(glucocerebrosidase,GCB)、鹼性纖維母細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、血紅素(hemoglobin)、硫氧還蛋白(thioredoxin)、鈣與整合素結合蛋白1(calcium－and integrin－binding protein 1,CIB1)、β乳球蛋白B(beta－lactoglobulin B)、β乳球蛋白AB、血清蛋白(serum albumin)、抗體(如，人類抗體，例如IgA(例如，二聚體IgA(dimeric IgA)、IgG(如IgG2)、與IgM；重組人類抗體、抗體片段(antibody fragments)，如Fab’片段、F(ab’)2 片段、單股Fv片段(single－chain Fv fragments,scFv))、抗體與抗體片段(antibodies and antibody fragments)，如Fab’、單株抗體片段(monoclonal antibody fragment，如C46.3與scFv)、重組(使抗體或抗體片段可被99mTc標示以作為臨床顯像用)誘導的胱胺酸殘基(如在第三中鍊保守區EU/OU計數第442的位置；單株抗體MN－14(一種高親合性的抗癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)單株抗體))、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－M(core 2 beta 1,6－N－acetylglucosaminyltransferase－M,C2GnT－M)、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－I(C2GnT－I)、血小板源生長因子β(platelet－derived growth factor receptor－beta,PDGF－beta)、腺苷酸轉移酶(adenine nucleotide translocase,ANT)、p53腫瘤抑制蛋白(p53 tumor suppressor protein)、麩蛋白(gluten proteins)、酸性鞘磷脂酶/重組酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,acid sphingomyelinase)、頭孢噻呋(desfuroylceftiofur,DFC)、載體蛋白B100(apolipoprotein B100,apoB)及其他低密度脂蛋白區域(low density lipoprotein domains)、載體蛋白A－I變異物(apolipoprotein A－I variants，例如載體蛋白A－I(Milano)以及載體蛋白A－I(Paris))、低氧誘導因子－1 α(hypoxia－inducible factor－1 alpha,HIF－1 alpha)、溫韋伯氏因子(von Willebrand factor,VWF)、具有如Ras的CAAX部分(CAAX motif)的蛋白質與胜肽仿效物(mimetics)、黏液溶解劑(mucolytics)、羧肽酶Y(carboxypeptidase Y)、細胞自溶酵素B(cathepsin B)、細胞自溶酵素C、骨骼肌鈣離子釋放通道/理阿諾鹼受體(skeletal muscle Ca2＋release channel/ryanodine receptor,RyR1)、核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF－KB)、激活蛋白1(AP－1)、蛋白質二硫鍵異構酶(protein－disulfide isomerase,PDI)、糖蛋白1b alpha(glycoprotein 1b alpha,GP1b alpha)、局部磷酸酶(calcineurin,CaN)、肌絲蛋白1(fibrillin－1)、CD4、s100A3(亦稱為S100E)、離子性穀氨酸受體(ionotropic glutamate receptors)、人類內－α－抑制素重鏈1(human inter－alpha－inhibitor heavy chain 1)、α 2－抗纖溶酶(alpha2－antiplasmin,alpha2AP)、凝血酶敏感蛋白(thrombospondin，亦稱為糖蛋白G(glycoprotein G))、寧蝕溶素(gelsolin)、黏蛋白(mucins)、肌酸激酶(creatine kinase)，例如S－硫甲基修飾之肌酸激酶(S－thiomethyl－modified creatine kinase)、因子VIII(Factor VIII)、磷酯酶D(phospholipase D,PLD)、胰島素受體β次單元(insulin receptor beta subunit)、乙醯膽鹼酯酶(acetylcholinesterase)、凝乳酶原(prochymosin)、修飾的α 2巨球蛋白(modified alpha 2－macroglobulin,alpha 2M，如蛋白酶或甲胺(methylamine)作用的alpha 2M)、穀胱甘肽還原酶(glutathione reductase,GR)、補體C2(complement component C2，例如2a)、補體C3(如C3b)、補體4(如4d)、補體因子B(complement Factor B，如Bb)、α乳蛋白(alpha－lactalbumin)、β－D－半乳糖甘酶(beta－D－galactosidase)、內質網鈣離子腺苷三磷酸酶(endoplasmic reticulum Ca2＋－ATPase)、核糖核酸酶抑制素(RNase inhibitor)、脂皮素1(lipocortin 1，亦稱為annexin 1)、增生細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、肌動蛋白(actin)，如球狀肌動蛋白(globular actin)、輔酶A(coenzyme A,CoA)、醯基輔酶A合成酶(acyl－CoA synthetase)，如丁醯基輔酶A合成酶(butyryl－coenzyme A synthetase)、3－2－逆式－醯基－輔酶A－異構酶前驅物(3－2trans－enoyl－CoA－isomerase precursor)、血管促尿因子敏感鳥嘌呤核甘酸環化酶(atrial natriuretic factor(ANF)－sensitive guanylate cyclase)、Pz－胜肽酶(Pz－peptidase)、醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase)，例如醯化醛脫氫酶(acylated aldehyde dehydrogenase)、P－450與NADPH－P－450還原酶(NADPH－P－450 reductase)、甘油醛－3－磷酸脫氫酶(glyceraldehydes－3－phosphate dehydrogenase,GAPDH)、6－丙酮醯－四氫蝶呤合成酶(6－pyruvoyl tetrahydropterin synthetase)、促黃體素受體(lutropin receptor)、低分子量酸性磷酸酶(low moleculat weight acid phosphatase)、血清膽鹼酯酶(serum cholinesterase,BChE)、腎上腺素(adrenodoxin)、透明質酸酶(hyaluronidase)、肉毒鹼乙醯基轉移酶(carnitine acyltransferases)、介白素－2(interleukin－2,IL－2)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase)、胰島素降解酶(insulin－degrading enzyme,IDE)、胞色素c1血基質次單元(cytochrome c1 heme subunit)、S－蛋白(S－protein)、纈氨醯－tRNA合成酶(valyl－tRNA synthetase,VRS)、α澱粉酶I(alpha－amylase I)、肌肉腺苷酸脫氨酶(muscle AMP deaminase)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase)、以及生長抑素結合蛋白(somatostatin－binding protein)所組成之群組。
在一較佳實施例中，該具有自由硫醇的蛋白質為GCB。
在另一較佳實施例中，該具有自由硫醇的蛋白質為bFGF。
在本發明另一形態中，本發明揭露之特徵在於GCB的液體組合物，該組合物包括GCB與碳水化合物，而其pH值係介於約0與約7之間，以及該碳水化合物的含量係足以維持該pH值的GCB的生物物理/生物化學完整性(如分子量、電荷分佈)與生物活性/特徵。例如，該化合物維持至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、或100%儲存前的生物活性(例如，儲存於溫度2至8℃，期間為3、6、9、12、或24個月或以上)。如另一實施例，至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99、或100%組合物的蛋白質維持該蛋白質儲存前的平均分子量或平均電荷分佈(例如，儲存於溫度2至8℃，期間為3、6、9、12、或24個月或以上)。
在部分實施例中，pH值係介於約4.5至約6.5的範圍之間，例如約5.0至約6.0(例如該pH值係為約5.5至約5.8，例如約5.7)。
在一較佳實施例中，該碳水化合物係為蔗糖或海藻糖(例如，體積重量比濃度(wt/vol)係介於約1與約40%之間，如約3%與約5%之間)。
在一方面，本發明揭露之特徵在於GCB的液體組合物，包括GCB、抗氧化劑、碳水化合物、pH值在4.5至6.5之間，以及該組合物係由將組合物暴露在惰性氣體(如氮氣或氬氣)中所製備。在有些實施例中，pH值的範圍在約4.5至約6.5之間，例如約5.0至約6.0之間(如pH值為約5.5至約5.8，例如約5.7)。
在部分實施例中，液體組合物包括濃度為約0.1-40毫克/毫升的GCB(例如，更佳為約0.5至約10毫克/毫升，如約2至約8毫克/毫升或約5毫克/毫升，或如約2毫克/毫升)、約0.001-10%胱胺酸(如，約0.075%)、約1-40%蔗糖(如，約16%)、pH值為約5.5至6.0(例如，約5.7)、以及氧氣的溶解量少於約10%(例如，少於約5%，如少於約2%)。
在一較佳實施例中，該組合物亦包括界面活性劑，如泊洛沙姆188(poloxamer 188)。
在一方面，本發明揭露之特徵在於一氣密容器(gas tight container)，具有蛋白質成分(protein component)與頂部空間(headspace)，其中該蛋白質成分為具有自由硫醇的蛋白質，以及該頂份空間為體積比(vol/vol)至少90%、95%或99%的惰性氣體。
在部分實施例中，該氣密容器為預先充填的注射器(prefilled syringe)、試管(vial)或安瓶(ampoule)。在一更佳實施例中，該預先充填的注射器係為無針注射器(needleless syringe)。
有些實施例中，具有自由硫醇的蛋白質係選自由葡萄糖腦甘酯酶(glucocerebrosidase,GCB)、鹼性纖維母細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、血紅素(hemoglobin)、硫氧還蛋白(thioredoxin)、鈣與整合素結合蛋白1(calcium－and integrin－binding protein 1,CIB1)、β乳球蛋白B(beta－lactoglobulin B)、β乳球蛋白AB、血清蛋白(serum albumin)、抗體(如，人類抗體，例如IgA(例如，二聚體IgA(dimeric IgA)、IgG(如IgG2)、與IgM；重組人類抗體、抗體片段(antibody fragments)，如Fab’片段、F(ab’)2 片段、單股Fv片段(single－chain Fv fragments,scFv))、抗體與抗體片段(antibodies and antibody fragments)，如Fab’、單株抗體片段(monoclonal antibody fragment，如C46.3與scFv)、重組(使抗體或抗體片段可被99mTc標示以作為臨床顯像用)誘導的胱胺酸殘基(如在第三中鍊保守區EU/OU計數第442的位置；單株抗體MN－14(一種高親合性的抗癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)單株抗體))、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－M(core 2 beta 1,6－N－acetylglucosaminyltransferase－M,C2GnT－M)、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－I(C2GnT－I)、血小板源生長因子β(platelet－derived growth factor receptor－beta,PDGF－beta)、腺苷酸轉移酶(adenine nucleotide translocase,ANT)、p53腫瘤抑制蛋白(p53 tumor suppressor protein)、麩蛋白(gluten proteins)、酸性鞘磷脂酶/重組酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,acid sphingomyelinase)、頭孢噻呋(desfuroylceftiofur,DFC)、載體蛋白B100(apolipoprotein B100,apoB)及其他低密度脂蛋白區域(low density lipoprotein domains)、載體蛋白A－I變異物(apolipoprotein A－I variants，例如載體蛋白A－I(Milano)以及載體蛋白A－I(Paris))、低氧誘導因子－1 α(hypoxia－inducible factor－1 alpha,HIF－1 alpha)、溫韋伯氏因子(von Willebrand factor,VWF)、具有如Ras的CAAX部分(CAAX motif)的蛋白質與胜肽仿效物(mimetics)、黏液溶解劑(mucolytics)、羧肽酶Y(carboxypeptidase Y)、細胞自溶酵素B(cathepsin B)、細胞自溶酵素C、骨骼肌鈣離子釋放通道/理阿諾鹼受體(skeletal muscle Ca2＋release channel/ryanodine receptor,RyR1)、核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF－KB)、激活蛋白1(AP－1)、蛋白質二硫鍵異構酶(protein－disulfide isomerase,PDI)、糖蛋白1b alpha(glycoprotein 1b alpha,GP1b alpha)、局部磷酸酶(calcineurin,CaN)、肌絲蛋白1(fibrillin－1)、CD4、S100A3(亦稱為S100E)、離子性穀氨酸受體(ionotropic glutamate receptors)、人類內－α－抑制素重鏈1(human inter－alpha－inhibitor heavy chain 1)、α 2－抗纖溶酶(alpha2－antiplasmin,alpha2AP)、凝血酶敏感蛋白(thrombospondin，亦稱為糖蛋白G(glycoprotein G))、寧蝕溶素(gelsolin)、黏蛋白(mucins)、肌酸激酶(creatine kinase)，例如S－硫甲基修飾之肌酸激酶(S－thiomethyl－modified creatine kinase)、因子VIII(Factor VIII)、磷酯酶D(phospholipase D,PLD)、胰島素受體β次單元(insulin receptor beta subunit)、乙醯膽鹼酯酶(acetylcholinesterase)、凝乳酶原(prochymosin)、修飾的α 2巨球蛋白(modified alpha 2－macroglobulin,alpha 2M，如蛋白酶或甲胺(methylamine)作用的alpha 2M)、穀胱甘肽還原酶(glutathione reductase,GR)、補體C2(complement component C2，例如2a)、補體C3(如C3b)、補體4(如4d)、補體因子B(complement Factor B，如Bb)、α乳蛋白(alpha－lactalbumin)、β－D－半乳糖甘酶(beta－D－galactosidase)、內質網鈣離子腺苷三磷酸酶(endoplasmic reticulum Ca2＋－ATPase)、核糖核酸酶抑制素(RNase inhibitor)、脂皮素1(lipocortin 1，亦稱為annexin 1)、增生細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、肌動蛋白(actin)，如球狀肌動蛋白(globular actin)、輔酶A(coenzyme A,CoA)、醯基輔酶A合成酶(acyl－CoA synthetase)，如丁醯基輔酶A合成酶(butyryl－coenzyme A synthetase)、3－2－逆式－醯基－輔酶A－異構酶前驅物(3－2trans－enoyl－CoA－isomerase precursor)、血管促尿因子敏感鳥嘌呤核甘酸環化酶(atrial natriuretic factor(ANF)－sensitive guanylate cyclase)、Pz－胜狀酶(Pz－peptidase)、醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase)，例如醯化醛脫氫酶(acylated aldehyde dehydrogenase)、P－450與NADPH－P－450還原酶(NADPH－P－450 reductase)、甘油醛－3－磷酸脫氫酶(glyceraldehydes－3－phosphate dehydrogenase,GAPDH)、6－丙酮醯－四氫蝶呤合成酶(6－pyruvoyl tetrahydropterin synthetase)、促黃體素受體(lutropin receptor)、低分子量酸性磷酸酶(low moleculat weight acid phosphatase)、血清膽鹼酯酶(serum cholinesterase,BChE)、腎上腺素(adrenodoxin)、透明質酸酶(hyaluronidase)、肉毒鹼乙醯基轉移酶(carnitine acyltransferases)、介白素－2(interleukin－2,IL－2)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase)、胰島素降解酶(insulin－degrading enzyme,IDE)、胞色素c1血基質次單元(cytochrome c1 heme subunit)、S－蛋白(S－protein)、纈氨醯－tRNA合成酶(valyl－tRNA synthetase,VRS)、α澱粉酶I(alpha－amylase I)、肌肉腺苷酸脫氨酶(muscle AMP deaminase)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase)、以及生長抑素結合蛋白(somatostatin－binding protein)所組成之群組。
在一較佳實施例中，該具有自由硫醇的蛋白質係為GCB。
在另一較佳實施例中，該具有自由硫醇的蛋白質係為bFGF。
在一方面，本發明揭露之特徵在於一種包裝組合物的方法，包括使具有自由硫醇的蛋白質與惰性氣體(如氮氣或氬氣)接觸以降低反應分子(reactive species，如氧氣)的含量，以及將該蛋白質與該惰性氣體導入一氣密容器中。名詞「反應分子」包括由氧氣的不完全的單電子還原所產生的分子或離子。這些反應分子包括氧氣、超氧化物(superoxides)、過氧化物(peroxides)、羥自由基(hydroxyl radical)、以及次氯酸(hypochlorous acid)。
在一較佳實施例中，惰性氣體為氮氣或氬氣，以及反應分子為氧氣。
有些實施例中，具有自由硫醇的蛋白質係選自由葡萄糖腦甘酯酶(glucocerebrosidase,GCB)、鹼性纖維母細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、血紅素(hemoglobin)、硫氧還蛋白(thioredoxin)、鈣與整合素結合蛋白1(calcium－and integrin－binding protein 1,CIB1)、β乳球蛋白B(beta－lactoglobulin B)、β乳球蛋白AB、血清蛋白(serum albumin)、抗體(如，人類抗體，例如IgA(例如，二聚體IgA(dimeric IgA)、IgG(如IgG2)、與IgM；重組人類抗體、抗體片段(antibody fragments)，如Fab’片段、F(ab’)2 片段、單股Fv片段(single－chain Fv fragments,scFv))、抗體與抗體片段(antibodies and antibody fragments)，如Fab’、單株抗體片段(monoclonal antibody fragment，如C46.3與scFv)、重組(使抗體或抗體片段可被99mTc標示以作為臨床顯像用)誘導的胱胺酸殘基(如在第三中鍊保守區EU/OU計數第442的位置；單株抗體MN－14(一種高親合性的抗癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)單株抗體))、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－M(core 2 beta 1,6－N－acetylglucosaminyltransferase－M,C2GnT－M)、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－I(C2GnT－I)、血小板源生長因子β(platelet－derived growth factor receptor－beta,PDGF－beta)、腺苷酸轉移酶(adenine nucleotide translocase,ANT)、p53腫瘤抑制蛋白(p53 tumor suppressor protein)、麩蛋白(gluten proteins)、酸性鞘磷脂酶/重組酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,acid sphingomyelinase)、頭孢噻呋(desfuroylceftiofur,DFC)、載體蛋白B100(apolipoprotein B100,apoB)及其他低密度脂蛋白區域(low density lipoprotein domains)、載體蛋白A－I變異物(apolipoprotein A－I variants，例如載體蛋白A－I(Milano)以及載體蛋白A－I(Paris))、低氧誘導因子－1 α(hypoxia－inducible factor－1 alpha,HIF－1 alpha)、溫韋伯氏因子(von Willebrand factor,VWF)、具有如Ras的CAAX部分(CAAX motif)的蛋白質與胜肽仿效物(mimetics)、黏液溶解劑(mucolytics)、羧肽酶Y(carboxypeptidase Y)、細胞自溶酵素B(cathepsin B)、細胞自溶酵素C、骨骼肌鈣離子釋放通道/理阿諾鹼受體(skeletal muscle Ca2＋release channel/ryanodine receptor,RyR1)、核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF－KB)、激活蛋白1(AP－1)、蛋白質二硫鍵異構酶(protein－disulfide isomerase,PDI)、糖蛋白1b alpha (glycoprotein 1b alpha,GP1b alpha)、局部磷酸酶(calcineurin,CaN)、肌絲蛋白1(fibrillin－1)、CD4、s100A3(亦稱為S100E)、離子性穀氨酸受體(ionotropic glutamate receptors)、人類內－α－抑制素重鏈1(human inter－alpha－inhibitor heavy chain 1)、α 2－抗纖溶酶(alpha2－antiplasmin,alpha2AP)、凝血酶敏感蛋白(thrombospondin，亦稱為糖蛋白G(glycoprotein G))、寧蝕溶素(gelsolin)、黏蛋白(mucins)、肌酸激酶(creatine kinase)，例如S－硫甲基修飾之肌酸激酶(S－thiomethyl－modified creatine kinase)、因子VIII(Factor VIII)、磷酯酶D(phospholipase D,PLD)、胰島素受體β次單元(insulin receptor beta subunit)、乙醯膽鹼酯酶(acetylcholinesterase)、凝乳酶原(prochymosin)、修飾的α 2巨球蛋白(modified alpha 2－macroglobulin,alpha 2M，如蛋白酶或甲胺(methylamine)作用的alpha 2M)、穀胱甘肽還原酶(glutathione reductase,GR)、補體C2(complement component C2，例如2a)、補體C3(如C3b)、補體4(如4d)、補體因子B(complement Factor B，如Bb)、α乳蛋白(alpha－lactalbumin)、β－D－半乳糖甘酶(beta－D－galactosidase)、內質網鈣離子腺苷三磷酸酶(endoplasmic reticulum Ca2＋－ATPase)、核糖核酸酶抑制素(RNase inhibitor)、脂皮素1(lipocortin 1，亦稱為annexin 1)、增生細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、肌動蛋白(actin)，如球狀肌動蛋白(globular actin)、輔酶A(coenzyme A,CoA)、醯基輔酶A合成酶(acyl－CoA synthetase)，如丁醯基輔酶A合成酶(butyryl－coenzyme A synthetase)、3－2－逆式－醯基－輔酶A－異構酶前驅物(3－2trans－enoyl－CoA－isomerase precursor)、血管促尿因子敏感鳥嘌呤核甘酸環化酶(atrial natriuretic factor(ANF)－sensitive guanylate cyclase)、Pz－胜肽酶(Pz－peptidase)、醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase)，例如醯化醛脫氫酶(acylated aldehyde dehydrogenase)、P－450與NADPH－P－450還原酶(NADPH－P－450 reductase)、甘油醛－3－磷酸脫氫酶(glyceraldehydes－3－phosphate dehydrogenase,GAPDH)、6－丙酮醯－四氫蝶呤合成酶(6－pyruvoyl tetrahydropterin synthetase)、促黃體素受體(lutropin receptor)、低分子量酸性磷酸酶(low moleculat weight acid phosphatase)、血清膽鹼酯酶(serum cholinesterase,BChE)、腎上腺素(adrenodoxin)、透明質酸酶(hyaluronidase)、肉毒鹼乙醯基轉移酶(carnitine acyltransferases)、介白素－2(interleukin－2,IL－2)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase)、胰島素降解酶(insulin－degrading enzyme,IDE)、胞色素c1血基質次單元(cytochrome c1 heme subunit)、S－蛋白(S－protein)、纈氨醯－tRNA合成酶(valyl－tRNA synthetase,VRS)、α澱粉酶I(alpha－amylase I)、肌肉腺苷酸脫氨酶(muscle AMP deaminase)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase)、以及生長抑素結合蛋白(somatostatin－binding protein)所組成之群組。
在一較佳實施例中，該具有自由硫醇的蛋白質為GCB。
在另一較佳實施例中，該具有自由硫醇的蛋白質為bFGF。
在一觀點，本發明揭露之特徵在於治療病患的方法，例如需要以含有自由硫醇的蛋白質治療的病患，如缺乏自由硫醇蛋白質的病患，前述方法包括，對病患施用本發明所稱之組合物，例如具有自由硫醇的蛋白質(如GCB)的組合物。例如，一種對病患施用的醫藥組合物，可包括本發明所稱之組合物，係以有療效的劑量加以使用。
在一較佳實施例中，該施用方法係為靜脈注射(IV infusion)或皮下注射(subcutaneous)。
在一實施例中，此處所稱之組合物係使用於治療，該組合物包含自有硫醇的蛋白質(如GCB)。
在一實施例中，此處所稱之組合物，其含有具自由硫醇的蛋白質(如GCB)，是用於製造用於治療病症的藥劑，其中需要具有自由硫醇的蛋白質；例如使用此處所稱之GCB組合物用於治療葡萄糖腦甘酯酶缺乏症(glucocerebrosidase deficiency)，如高雪氏症(Gaucher disease)。例如，對病患施用的藥劑可包括此處所稱之組合物，例如以有療效的劑量使用。
在一觀點，本發明揭露之特徵在於治療具有葡萄糖腦甘酯酶缺乏症(glucocerebrosidase deficiency)病患的方法，該方法包含對病患施用此處所描述的組合物。
在某些實施例中，該葡萄糖腦甘酯酶缺乏症係為高雪氏症(Gaucher disease)。
除非另有定義，本發明使用之所有技術與科學名詞均與本發明所屬技術領域之熟悉技藝人士一般所瞭解者具有相同的意義。因此方法與材料近似或相同於本發明所描述者，可用於實施或測試本發明，適合的材料與方法將敘述如下。所有引用的文獻、專利公報、專利、以及其他參考資料在此均作為本案的參考文獻。若有爭議，悉依本發明之說明書與定義為準。此外，本發明所用之材料、方法、與實施例，僅為例示本發明，而非加以限制其範圍。
本發明其他的特徵、目標與優點將由以下的說明與申請專利範圍所揭露。
 概述
具有自由硫醇之蛋白質(如GCB)的組合物，做為液體組合物相對較不穩定。GCB所露出的3個自由硫醇基會進行反應，導致安定性的降低，例如GCB分子的聚合(aggregation)。例如，在pH值6的緩衝液中，基本上1至2%的蛋白質會在儲存1個月之後聚合，而約15%會在儲存6個月後聚合。儘管不希望因為理論或機制而緊密地結合，一般相信下列因子與蛋白質的不安定性，例如聚合反映有關。例如，溶液中的自由氧氣會加速自由硫醇基的交互連結，而導致聚合。若自由硫醇基的反應可以減少，及/或若蛋白質可以製造的更緊密，例如，將胱胺酸殘基包埋在斥水性區域中，可減少蛋白質的聚合。此外，可以減少蛋白質的降解，例如片段化。
此處所敘述之實施例，包括一或多種測量以探討一或多種這些問題。例如，不同因子被用來探討增加具有自由硫醇的蛋白質組合物(如液體組合物)的安定性；如，溶液中存在反應分子(例如自由的氧氣)、蛋白質的自由硫氫基(如自由硫醇)的可利用性(availability)、蛋白質的構形(conformation)、以及pH值。1、2、3、4、或這些因子的全部，可用來改變或控制以增加有益蛋白質的安定性。
具有自由硫醇的蛋白質(Free Thiol－Containing Proteins)
帶有自由硫醇的蛋白質係指具有一或多個活性－S－H部分(－S－H moiety)的蛋白質。在一較佳實施例中，在適合安定性的條件下，該－S－H部分可被反應劑接觸，且會與反應劑作用，例如反應劑是胱胺酸之類的還原劑。二者擇一地，該－S－H部分在與一或多種生物液體接觸的生理條件下會與反應劑作用，例如當該－S－H部分對病患施用時，該部分在血液中係為可接觸以進行反應的。
較佳的具有自由硫醇的蛋白質為葡萄糖腦甘酯酶(g1ucocerebrosidase,GCB)。相較於被包埋或隱藏的－S－H部分，溶液中GCB的結構提供相對可接觸的自由－S－H部分，可促成－S－H部分的反應。
另一較佳的具有自由硫醇的蛋白質為鹼性纖維母細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)。
其他具有自由硫醇的蛋白質的例子包括：酸性纖維母細胞生長因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)、血紅素(hemoglobin)、硫氧還蛋白(thioredoxin)、鈣與整合素結合蛋白1(calcium－and integrin－binding protein 1,CIB1)、β乳球蛋白B(beta－lactoglobulin B)、β乳球蛋白AB、血清蛋白(serum albumin)、抗體(antibodies)、抗體片段(antibody fragments)、抗體與抗體片段重組誘導的胱胺酸殘基(antibodies and antibody fragments engineered to introduce cysteine residues)、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－M(core 2 beta 1,6－N－acetylglucosaminyltransferase－M,C2GnT－M)、核心2 β 1,6－N－乙醯氨基葡萄糖轉移酶－I(C2GnT－I)、血小板源生長因子β(platelet－derived growth factor receptor－beta,PDGF－beta)、腺苷酸轉移酶(adenine nucleotide translocase,ANT)、p53腫瘤抑制蛋白(p53 tumor suppressor protein)、麩蛋白(gluten proteins)、酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase)、頭孢噻呋(desfuroylceftiofur,DFC)、載體蛋白B100(apolipoprotein B100,apoB)及其他低密度脂蛋白區域(low density lipoprotein domains)、載體蛋白A－I變異物(apolipoprotein A－I variants)、低氧誘導因子－1 α(hypoxia－inducible factor－1 alpha,HIF－1 alpha)、溫韋伯氏因子(von Willebrand factor,VWF)、具有CAAX部分(CAAX motif)的蛋白質與胜肽仿效物(mimetics)、黏液溶解劑(mucolytics)、羧肽酶Y(carboxypeptidase Y)、細胞自溶酵素B(cathepsin B)、細胞自溶酵素C、骨骼肌鈣離子釋放通道/理阿諾鹼受體(skeletal muscle Ca2＋release channel/ryanodine receptor,RyR1)、核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF－KB)、激活蛋白1(AP－1)、蛋白質二硫鍵異構酶(protein－disulfide isomerase,PDI)、糖蛋白1b alpha(glycoprotein 1b alpha,GP1b alpha)、局部磷酸酶(calcineurin,CaN)、肌絲蛋白1(fibrillin－1)、CD4、S100A3、離子性穀氨酸受體(ionotropic glutamate receptors)、人類內－α－抑制素重鏈1(human inter－alpha－inhibitor heavy chain 1)、α 2－抗纖溶酶(alpha2－antiplasmin,alpha2AP)、凝血酶敏感蛋白(thrombospondin)、寧蝕溶素(gelsolin)、黏蛋白(mucins)、肌酸激酶(creatine kinase)、因子VIII(Factor VIII)、磷酯酶D(phospholipase D,PLD)、胰島素受體β次單元(insulin receptor beta subunit)、乙醯膽鹼酯酶(acetylcholinesterase)、凝乳酶原(prochymosin)、修飾的α 2巨球蛋白(modified alpha 2－macroglobulin,alpha 2M)、穀胱甘狀還原酶(glutathione reductase,GR)、補體C2(complement component C2)、補體C3、補體4、補體因子B(complement Factor B)、α乳蛋白(alpha－lactalbumin)、β－D－半乳糖甘酶(beta－D－galactosidase)、內質網鈣離子腺苷三磷酸酶(endoplasmic reticulum Ca2＋－ATPase)、核糖核酸酶抑制素(RNase inhibitor)、脂皮素1(lipocortin 1)、增生細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、肌動蛋白(actin)、輔酶A(coenzyme A,CoA)、醯基輔酶A合成酶(acyl－CoA synthetase)、3－2－逆式－醯基－輔酶A－異構酶前驅物(3－2trans－enoyl－CoA－isomerase precursor)、血管促尿因子敏感鳥嘌呤核甘酸環化酶(atrial natriuretic factor(ANF)－sensitive guanylate cyclase)、Pz－胜肽酶(Pz－peptidase)、醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase)、P－450、NADPH－P－450還原酶(NADPH－P－450 reductase)、甘油醛－3－磷酸脫氫酶(glyceraldehydes－3－phosphate dehydrogenase,GAPDH)、6－丙酮醯－四氫蝶呤合成酶(6－pyruvoyl tetrahydropterin synthetase)、促黃體素受體(lutropin receptor)、低分子量酸性磷酸酶(lowmoleculat weight acid phosphatase)、血清膽鹼酯酶(serum cholinesterase,BChE)、腎上腺素(adrenodoxin)、透明質酸酶(hyaluronidase)、肉毒鹼乙醯基轉移酶(carnitine acyltransferases)、介白素－2(interleukin－2,IL－2)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase)、胰島素降解酶(insulin－degrading enzyme,IDE)、細胞色素c1血基質次單元(cytochrome c1 heme subunit)、S－蛋白(S－protein)、纈氨醯－tRNA合成酶(valyl－tRNA synthetase,VRS)、α澱粉酶I(alpha－amylase I)、肌肉腺苷酸脫氨酶(muscle AMP deaminase)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase)、以及生長抑素結合蛋白(somatostatin－binding protein)。亦包括這些蛋白質的片段，例如活性區域(active domains)、結構區域(structural domains)、顯性抑制片段(dominant negative fragments)、以及其他的片段。具有自由硫醇基的蛋白質可為自然產生的蛋白質、重組蛋白質、如重組DNA技術修飾的蛋白質，以具有胱胺酸殘基，或是經過蛋白質化學地、或酵素學地處理，使胱胺酸殘基上的硫氫基部分成為還原態，亦即，具有自由－S－H部分。
在一些實施例中，此處所描述之組合物，包括具有自然產生的序列的蛋白質。在其他實施例中，蛋白質的序列將與自然產生的序列有1、2、3、4、5、或到達10個胺基酸殘基的不同。其他實施例中，蛋白質的胺基酸序列與自然產生的序列有著1、2、3、4、5個、或到達10%以上的不同。
反應分子的去除(Reactive Species Removal)
溶解於溶液中的反應分子，例如氧氣或過氧化物，會降低組合物中的蛋白質的安定性，例如促成蛋白質的聚合。然而，即使沒有氧氣的存在，自由－S－H部分也會產生交互連結。
為了增加蛋白質的安定性，需要去除溶液中的反應分子(如氧氣)，例如化學性方法，藉由使用氧氣清除劑(O2 scavengers)，如亞硫酸鹽(sulfites)。化學清除劑通常較不令人滿意，因為他們會造成蛋白質的降解。亦可用物理性方法從溶液中去除氧氣，例如，藉由對溶液除氣，如對溶液加真空以除去氧氣，並以惰性氣體(如氮氣或氬氣)替換。氧氣含量的降低亦可由物理性方法達成，藉由以氧氣之外的氣體清洗(purging)液體，例如以惰性氣體(如氮氣或氬氣)。清洗可藉由以氣體對溶液充氣(bubbling)以排出氧氣而達成。
對於蛋白質組合物(如GCB)進行充氣或其他操作會在氣體與含有蛋白質的溶液之間產生界面，通常在處理蛋白質的過程中要避免，因為會使蛋白質變性(denature)。然而，這些操作被發現對於此處所描述的GCB方法是可以被忍受的。
氧氣的移除可以結合溶液與氧氣的最少接觸，例如藉由在最少氧氣存在的條件下操作與儲存，如以氧氣之外的惰性氣體，如氮氣或氬氣充填容器，或是以這類氣體密封容器。通常，較佳為對病人施用之前，使溶液與氧氣的接觸降至最低程度。頂部空間的氧氣含量應至少降低至約10%，較佳地少於約5%，以及更佳地少於約2%。
反應分子的去除亦會導致蛋白質安定性的增加，例如藉由最小化其他部分的氧化反應，例如酪氨酸、色胺酸、或甲硫胺酸殘基。特別是，較佳為使GCB中這些殘基的氧化反應最小化。
可測試移除氧氣的候選方法，藉由提供組合物(含有濃度為2毫克/毫升的GCB、0.075%的胱胺酸(作為抗氧化劑)、16%的蔗糖(用於降低－S－H可利用性)，調節pH值為5.7，以及使用候選方法。在預定的時間量測由候選方法製備的GCB組合物的安定性，例如聚合或降解的百分比，以與一或多種標準比較。例如，適當的標準可為與測試條件相似的組合物，除了未施加去除氧氣的方法。比較測試組(其中使用了候選的氧氣去除方法)與對照組(未使用氧氣去除方法)的組合物安定性。安定性可藉由經過測試處理相較於對照的標準所增加的安定性來表示。其他的標準可為與的標準可為與測試組合物相似的組合物，除了候選去除方法，氧氣可用如下的方法去除，例如以惰性氣體清洗或排氣。安定性可藉由經過測試處理相較於對照的標準所增加的安定性來表示。
蛋白質安定性可以被量測，例如，藉由測量蛋白質的聚合或降解。蛋白質聚合可以被決定，例如，藉由分子大小排斥層析(size exclusion chromatography)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、或其他可決定大小等方法。蛋白質降解可以被決定，例如，藉由逆相高效能液相層析(reverse phase HPLC)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、離子交換層析(ion－exchange chromatography)、胜肽圖譜(peptide mapping)、或類似的方法。
抗氧化劑(Antioxidants)
組合物中蛋白質的安定性可增加(例如可降低自由－S－H部分調節的交互連結)，其係藉由抗氧化劑的添加，尤其是，抗氧化劑具有與自由－S－H部分作用的部分，例如，胱胺酸、胱胺酸－鹽酸(cysteine－HCl)、或甲硫丁氨酸(methionine)。對同時具有自由硫醇基與內部的雙硫鍵結的蛋白質(如GCB)而言，所使用抗氧化劑(如胱胺酸)的含量需要夠高以使自由硫醇鍵結的交互連結最小化，但也需要夠低才不會產生片段化、及/或降解(例如，可用逆相高效能液相層析偵測)。以胱胺酸為例，尤其是使用於GCB，包含約0.001%至約10%、例如約0.01%至約0.15%、例如約0.05%至約0.1%是適當的。高於10%的含量可能不適合。
例如，可測試候選抗氧化劑(其可為任何能去除或降低溶液中溶氧量的物質)，其方法係為提供組合物(含有濃度為2毫克/毫升的GCB、16%的蔗糖(用於降低－S－H可利用性)，調節pH值為5.7，添加候選抗氧化劑(力如此處所描述的含量，如0.075%)，以及排出組合物的氧氣。在預定時間量測具有候選抗氧化劑的GCB組合物的安定性(例如聚合或降解的百分比)，以和一或多種標準比較。例如，適當的標準可為與測試條件相似的組合物，除了並未在組合物添加抗氧化劑。比較測試組(含抗氧化劑)與對照組(缺少抗氧化劑)組合物的安定性。安定性可藉由候選抗氧化物相較於此處所述之抗氧化劑對安定性具有可比較或較佳效果來表示。若該候選抗氧化劑被決定為適合的(例如相較於標準之一，增加了組合物的安定性)，會重新界定候選抗氧化劑的濃度。例如，濃度會依參數範圍增加或減少，並與標準以及其他測試的濃度相比，以決定可最大量增加安定性的濃度。
蛋白質安定性可以被量測，例如，藉由測量蛋白質的聚合或降解。蛋白質聚合可以被決定，例如，藉由分子大小排斥層析(size exclusion chromatography)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、或其他可決定大小等方法。蛋白質降解可以被決定，例如，藉由逆相高效能液相層析(reverse phase HPLC)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、離子交換層析(ion－exchange chromatography)、胜肽圖譜(peptide mapping)、或類似的方法。
較佳的抗氧化劑為胱胺酸。其他適用的抗氧化劑包括：胱胺酸－鹽酸、還原的穀胱甘肽(reduced glutathione)、硫代乙醯胺(thioethanolamine)、硫代乙二醇(thiodiglycol)、硫代乙酸(thioacetic acid)、硫代甘油(monothioglycerol)、N－乙醯胱胺酸(N－acetylcysteine)、二硫蘇糖醇(dithiothreitol)、DL－硫辛酸(DL－thioctic acid)、乙基硫醇(mercaptoethanol)、二乙基硫醇(dimercaptopropanol)、亞硫酸氫鹽(bisulfite)、二氫抗壞血酸鹽(dihydroascorbate)、重亞硫酸鹽(metabisulfite)、亞硫酸鹽(sulfite)、甲醛次硫酸氫鹽(formaldehyde sulfoxylate)、硫代硫酸鹽(thiosulfate)、以及丙酮亞硫酸氫鹽(acetone bisulfite)。在有些實施例中，二或多種這些抗氧化劑的組合可用於此處所述之組合物。組合物的安定性可由二或多種這些抗氧化劑的組合可用於此處所述之組合物。抗氧化劑組合的安定性可由前述測試候選抗氧化劑的方法測試。
抗氧化劑的添加可導致蛋白質安定性的提升，例如，藉由最小化其他部分的氧化反應，例如酪氨酸、色胺酸、或甲硫胺酸殘基。特別是，較佳為使GCB中這些殘基的氧化反應最小化。
碳水化合物(Carbohydrates)
在有些實施例中，組合物亦包含碳水化合物。例如，碳水化合物可使蛋白質更緊密，以及，例如包埋或其他方式隱藏接觸部分，例如胱胺酸(如胱胺酸殘基上的自由－S－H部分)、斥水區域的胱胺酸殘基。如此可增加蛋白質(如GCB)的安定性，例如降低蛋白質聚合。
碳水化合物包括非還原糖(non－reducing sugars)，例如非還原雙糖適合此用途，如蔗糖或海藻糖。組合物中糖的含量很重要。例如，用於GCB時，適合的糖含量的重量體積比(w/v)在約1至約40%、例如約5至約30%、例如約8至約24%、例如約16%。糖含量在約3至約5%亦很合適。
可測試用於降低－S－H可利用性的候選物質，例如候選碳水化合物，藉由提供含有濃度為2毫克/毫升的GCB與作為抗氧化劑的0.075%胱胺酸的組合物、添加候選物質(例如此處所述之含量，如16%)、以及排除組合物的氧氣。在預先決定的時間量測含有候選物質的組合物的安定性，例如聚合或降解的百分比，以和一或多種標準比較。例如，標準可為與測試條件相似的組合物，除了在組合物中並未添加物質。比較測試組(具有物質)與對照組(缺乏物質)組合物的安定性。安定性可藉由測試處理相較於標準所增加的安定性來表示。另一種標準可為與除了候選物質與測試組合物相似的組合物，此處所述之物質，例如蔗糖係添加於組合物中(如此處所述之含量，如16%)。安定性可藉由候選物質對於安定性具有與此處所述之物質相同或更好的效果來表示。若候選物質被決定是適合的(例如相較於標準之一，其可增加組合物的安定性)，會重新界定候選物質的濃度。例如，濃度可在參數範圍內增加或減少，並與標準以及其他測試過的濃度比較，以決定可最大量增加安定性的濃度。
蛋白質安定性可以被量測，例如，藉由測量蛋白質的聚合或降解。蛋白質聚合可以被決定，例如，藉由分子大小排斥層析(size exclusion chromatography)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、或其他可決定大小等方法。蛋白質降解可以被決定，例如，藉由逆相高效能液相層析(reverse phase HPLC)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、離子交換層析(ion－exchange chromatography)、胜肽圖譜(peptide mapping)、或類似的方法。
較佳的碳水化合物為海藻糖或蔗糖。其他可用的較佳物質包括：麥芽糖(maltose)、棉子糖(raffinose)、葡萄糖、山梨糖醇(sorbitol)。其他可用於安定蛋白質的合適物質包括：碳水化合物，例如乳糖(lactose)與阿拉伯糖(arabinose)、多元醇(polyols)，例如甘露醇(mannitol)、甘油、以及木糖醇(xylitol)、胺基酸，例如甘胺酸(glycine)、精胺酸(arginine)、離胺酸(lysine)、組胺酸(histidine)、丙胺酸(alanine)、甲硫胺酸(methionine)、以及白胺酸(leucine)、以及聚合物，例如PEG、喃氟啶從(poloxamers)、葡聚醣(dextran)、聚丙二醇(polypropylene glycol)、多糖(polysaccharides)、甲基纖維素(methylcellulose)、羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethyl cellulose)、聚乙烯基吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone,PVP)、水解的凝膠(hydrolyzed gelatin)、以及人類血清蛋白(human albumin)。在某些實施例中，二或多種這些碳水化合物(例如蔗糖與海藻糖)的組合可用於此處所述之組合物。碳水化合物組合的安定性可由前述用於候選碳水化合物之方法測試。
pH值
在組成與最佳化蛋白質組合物時，例如具有提升的安定性之液體蛋白質組合物，pH值可說是最關鍵的部分。pH值可作用於影響構形及/或聚合及/或蛋白質的反應性。例如，在較高pH值下，氧氣可能會更活躍。pH值較佳為少於7.0，更佳為在約4.5至約6.5的範圍，再更佳為約5.0至約6.0，以及更佳為約5.5至約5.8在更佳為約5.7。有些蛋白質，如GCB，在pH值7.0以上時聚合會到達不良的程度，以及在pH值低於4.5或5.0、或pH值高於6.5或7.0時，降解(如片段化)會到達不良的程度。
可測試候選pH值，藉由提供含有濃度為2毫克/毫升的GCB、作為抗氧化劑的0.075%胱胺酸、16%蔗糖(以降低－S－H的可利用性)的組合物，調整組合物至候選的pH值，以及排除組合物的氧氣。在預定時間量測候選pH值下的GCB組合物的安定性，例如聚合或降解的百分比，以和一或多種標準比較。例如，合適的標準可為與測試條件相似的組合物，除了該組合物的pH值並未被調整之外。比較測試組(組合物調整為候選pH值)與對照組(未調整pH值)組合物的安定性。安定性可藉由測試處理相較於標準所增加的安定性來表示。另一標準係為與測試組合物相似的組合物，除了候選pH值，此處所述之該組合物的pH值，舉例來說，為5.7。安定性可藉由候選pH值的組合物具有與pH值為5.7的組合物對於安定性有相當或更好的效果來表示。
蛋白質安定性可以被量測，例如，藉由測量蛋白質的聚合或降解。蛋白質聚合可以被決定，例如，藉由分子大小排斥層析(size exclusion chromatography)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、或其他可決定大小等方法。蛋白質降解可以被決定，例如，藉由逆相高效能液相層析(reverse phase HPLC)、原態電泳(non－denaturing PAGE)、離子交換層析(ion－exchange chromatography)、胜肽圖譜(peptide mapping)、或類似的方法。
可用於調節蛋白質組合物的緩衝液包括：組胺酸(histidine)、檸檬酸鹽(citrate)、磷酸鹽(phosphate)、甘胺酸(glycine)、琥珀酸鹽(succinate)、醋酸鹽(acetate)、穀氨酸(glutamate)、tris緩衝液(Tris)、酒石酸鹽(tartrate)、天冬氨酸(aspartate)、馬來酸(maleate)、以及乳酸鹽(lactate)。較佳的緩衝液為檸檬酸鹽。
蛋白質濃度(Protein Concentration)
如GCB的較佳蛋白質濃度可介於約0.1至約40毫克/毫升之間，更佳為介於約0.5至約10毫克/毫升，例如約2至約8毫克/毫升，或約5毫克/毫升。
可測試適合的蛋白質濃度，藉由提供含有作為抗氧化劑的0.075%胱胺酸、與16%蔗糖(以降低－S－H的可利用性)的組合物，調整pH值為5.7，調整蛋白質(如GCB)為候選濃度，以及排除組合物的氧氣。在預先決定的時間量測如GCB之蛋白質組合物在候選濃度的安定性，如聚合或降解的百分比，以和一或多種標準比較。例如，適合的標準可為與測試條件相似的組合物，除了該蛋白質(如GCB)濃度係為此處所述之濃度，例如2毫克/毫升。比較蛋白質(如GCB)在每個濃度下的安定性。安定性可藉由候選濃度對於安定性，相較於此處所稱之濃度具有相當或更好之效果。
蛋白質安定性可以被量測，例如，藉由測量蛋白質的聚合或降解。蛋白質聚合可以被決定，例如，藉由分子大小排斥層析(size exclusion chromatography)、原態電泳(non-denaturing PAGE)、或其他可決定大小等方法。蛋白質降解可以被決定，例如，藉由逆相高效能液相層析(reverse phase HPLC)、原態電泳(non-denaturing PAGE)、離子交換層析(ion-exchange chromatography)、胜肽圖譜(peptide mapping)、或類似的方法。
界面活性劑(Surfactants)
界面活性劑可添加於液體蛋白質(如GCB)組合物中。在一較佳實施例，可增加蛋白質安定性，例如降低蛋白質降解，例如因為在震動/運送的氣/液界面。選擇在液體組合物中可增加蛋白質安定性的界面活性劑，例如不會產生蛋白質降解。適用的界面活性劑如，泊洛沙姆188(poloxamer 188)，如普流尼克F68(PLURONIC® F68)。界面活性劑可用的含量係介於約0.005%及約5%之間，例如介於約0.01%及約1%之間，如約0.025%及約0.5%，如約0.03%及約0.25%，如約0.04至約0.1%，如約0.05%至約0.075%，如0.05%。
理想中選用於此處所述之蛋白質組合物的界面活性劑，係為不會被蛋白質修飾者，例如不會被切割。
例如，可測試候選界面活性劑，藉由提供含有2毫克/毫升的GCB、作為抗氧化劑的0.075%胱胺酸、與16%蔗糖(以降低-S-H的可利用性)的組合物，調整pH值為5.7，以此處所述之含量添加界面活性劑(如0.05%)，以及排除組合物的氧氣。在預先決定的時間量測具有候選界面活性劑之GCB組合物的安定性，如聚合或降解的百分比，以和一或多種標準比較。例如，適合的標準可為與測試條件相似的組合物，除了該組合物中並無添加界面活性劑。比較測試組與對照組組合物在模擬「真實世界」場景下之條件，例如船運時的安定性。安定性可藉由測試處理相較於此標準所增加的安定性來表示。另一種標準可為與測試組合物相似之組合物，除了候選界面活性劑不同，此處所述之界面活性劑，例如為泊洛沙姆188(poloxamer 188)，係添加於組合物中，含量係為如此處所述之含量，例如0.05%。安定性可藉由候選界面活性劑相較於此處所述之界面活性劑對於安定性有相當或更好的效果。若該候選界面活性劑被決定為適合的(例如相較於標準之一，其增加組合物的安定性)，該候選界面活性劑的濃度會被重新界定。例如，濃度可以參數為範圍而增加或減少，並與標準以及其他測試過的濃度比較，以決定可最大量增加安定性的濃度。
在有些實施例中，二或多種界面活性劑的結合係用於 此處所述之組合物中。界面活性劑結合的安定性可以前述用於候選界面活性劑的方法來測試。
蛋白質安定性可以被量測，例如，藉由測量蛋白質的聚合或降解。蛋白質聚合可以被決定，例如，藉由分子大小排斥層析(size exclusion chromatography)、原態電泳(non-denaturing PAGE)、或其他可決定大小等方法。蛋白質降解可以被決定，例如，藉由逆相高效能液相層析(reverse phase HPLC)、原態電泳(non-denaturing PAGE)、離子交換層析(ion-exchange chromatography)、胜肽圖譜(peptide mapping)、或類似的方法。
葡萄糖腦甘酯酶(glucocerebrosidase,GCB)
高雪氏症(Gaucher disease)係為一種自體隱性溶酶體儲存疾病(autosomal recessive lysosomal storage disorder)，其特徵為溶酶體酵素的缺乏，該酵素即為葡萄糖腦甘酯酶(glucocerebrosidase,GCB)。GCB係水解由白血球與紅血球細胞膜的糖酯(glycosphingolipids)降解所產生之糖脂葡萄糖腦甘酯(glycolipid glucocerebroside)。缺乏此酵素會造成葡萄糖腦甘酯大量堆積於高雪氏症患者的肝、脾、以及骨髓的巨嗜細胞的溶酶體中。這些分子的累積所造成的臨床表現範圍包括：脾腫大(splenomegaly)、肝腫大(hepatomegaly)、骨骼疾病(skeletal disorder)、血小板減少(thrombocytopenia)、以及貧血(anemia)。(Beutler et al.Gaucher disease；In：The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease(McGraw－Hill,Inc,New York,1995)pp.2625－2639)
使病患免於此種疾病的治療，包括施用止痛藥(analgesics)以舒緩骨骼疼痛、血液與血小板輸血，以及某些情形下，脾臟切除(splenectomy)。對於經歷骨骼損壞的患者而言，有時需要替換關節。GCB的酵素置換治療(enzyme replacement therapy)已被用於治療高雪氏症。
溶液中GCB的結構提供相對容易接觸(相對於被包埋或被隱藏)的自由－S－H部分，可促進與－S－H的反應。
可用習知技術之方法獲得GCB。例如，WO02/15927、WO2005/089047、WO03/056897、WO01/77307、WO01/07078以及WO90/07573；歐洲專利公開號EP1392826；美國專利公開號2005－0026249、2005－0019861、2002－0168750、2005－0265988、2004－0043457、2003－0215435、以及2003－0133924；與美國專利申請號10/968,870；美國專利7,138,262、6,451,600、6,074,864、5,879,680、5,549,892、5,236,838、以及3,910,822，描述用於製備GCB蛋白質的方法。任何這些專利或申請案所描述之GCB蛋白質的製備，可用於此處所述之組合物的配置。
GCB的酵素活性可用此處所提供之實施例或是如習知技藝所述之方法測量，如美國專利第7,138,262號所示。
包裝與運送(Packaging and Delivery)
蛋白質組合物，例如GCB組合物，例如此處所述之組合物，以及如WO02/15927、美國專利公開號2005－0026249、2005－0019861與2002－0168750、以及美國專利申請號09/641,471與10/968,870所述之組合物，可以用二室注射器(two chamber syringe)包裝。例如，凍乾形式的組合物可置於第一注射室(syringe chamber)，而液體可存於第二注射室(參照美國專利公開號2004－0249339)。
蛋白質組合物，例如GCB組合物，例如此處所述之組合物，以及如WO02/15927、美國專利公開號2005－0026249、2005－0019861與2002－0168750、以及美國專利申請號09/641,471與10/968,870所述之組合物，可以包裝於無針注射器(needleless syringe)(參照例如美國專利6,406,455與6,939,324號)。簡言之，舉例來說，注射裝置包括：據有氣體或氣體來源的氣體室(gas chamber)；可容許氣體由氣體室釋出的接口(port)；在氣體由氣體室釋出時，可引起至少第一活塞(piston)運動的柱塞(plunger)；第一活塞；第二活塞；例如用於藥物儲存與混合的第一室(first chamber)；配置第一活塞、第二活塞與第一室的活塞罩(piston housing)；獨立於氣體室的氣體動力的置換元件，其可造成第一與第二活塞之一或兩者的運動，該置換元件可為柱塞或分開元件；適合無針注射時與第一室連結的開口(orifice)；其中第一與第二活塞係配置於活塞罩的兩側，以及置換元件、氣體來源與柱塞係如下配置：在活塞的第一位置，第二室例如液體儲存室(fluid reservoir)，係定義為位於活塞罩中的第一活塞、活塞罩與第二活塞旁，置換元件可移動活塞之一或兩者至第二位置，其中第一活塞所在位置為第二室，其可為液體儲存室，係與第一室連結，該第一室可為藥物儲存與混合室，以及第二活塞係沿第一活塞的方向移動，因此，減少第二室的容量，並使液體由第二室轉移至第一室；氣體由氣體室釋放時，柱塞造成第一活塞移動，致使第一室的容量減少，使得物質可從第一室室穿過開口排出，以及例如，傳至個體。
無針注射器可包括第一成分的分開組件，例如乾或液體成分，以及第二成份，例如液體成分。組件可被提供為兩分開成分，以及組裝，例如由要對自己使用成分的個體組裝，或是尤其他人組裝，例如由提供或傳遞健康看護的個人組裝。合起來，組件可形成此處所述之裝置的活塞罩的全部或一部。該裝置可用於提供任何第一與第二成份，當需要分別儲存或提供各成分，而在對個體使用前將他們組合時。
此處所述之蛋白質(如GCB)組合物，可作為對個體，例如人類，施用的適當醫藥組合物。GCB組合物可包括足夠劑量的GCB以治療患有高雪氏症的患者。醫藥組合物可包括一或多種藥學上可接受載體(pharmaceutically acceptable carrier)。如此處所使用之名詞「藥學上可接受載體」係傾向於包括可相容於藥學使用之任何以及全部的溶液、賦形劑(excipients)、分散劑(dispersion media)、塗層(coatings)、抗菌與抗真菌劑、等壓與吸附遲延劑(isotonic and adsorption delaying agents)、以及類似物。藥學配方是很成熟的技術，以及進一步敘述如下，如：Gennaro(ed.),Remington：The Science and Practice of Pharmacy,20th ed.,Lippincott,Williams & Wilkins(2000)(ISBN：0683306472)；Ansel et al.,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,7th Ed.,Lippincott Williams & Wilkins Publishers(1999)(ISBN：0683305727)；and Kibbe(ed.),Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association,3rd ed.(2000)(ISBN：091733096X)。除了任何不相容於活性化合物以外的一般媒介(media)或試劑(agent)，這些媒介可用於本發明的組合物中。補充的活性化合物亦可被加入組合物中。
藥學組合物可能包括「有療效劑量」(therapeutically effective amount)的此處所述之組合物。此有效劑量可基於所施用的組合物的效果來決定。組合物的有療效劑量亦可能基於不同因子而改變，例如：疾病狀態、年紀、性別、與個體的體重，以及組合物在個體引起預期反應的能力，例如徵候或疾病的至少一種症狀的改善，前述疾病例如葡萄糖腦甘酯酶缺乏症，如高雪氏症。有療效劑量亦為在該劑量時，治療有益的效果較組合物的任何毒性或不利作用更重要。
本發明之藥學組合物係配方為相容於其正常施用的路徑。例如，組合物可為非腸胃道方式(parenteral mode)施用，例如靜脈注射(intravenous injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、腹腔內注射(intraperitoneal injection)或肌肉注射(intramuscular injection)。此處所使用的名詞「非腸胃道的施用」(parenteral administration,administered parenterally)係指施用的方法並非腸道內與局部的施用(enteral and topical administration)，通常為注射方式，以及包括但不限於，靜脈內(intravenous)、肌肉內(intramuscular)、動脈內(intraarterial)、蜘蛛膜下腔的(intrathecal)、囊內(intracapsular)、眼眶內(intraorbital)、心內(intracardiac)、真皮內(intradermal)、腹腔內(intraperitoneal)、經氣管的(transtracheal)、皮下的(subcutaneous)、表皮下的(subcuticular)、關節內的(intraarticular)、膜下的(subcapsular)、蛛網膜下的(subarachnoid)、椎管內的(intraspinal)、硬脊膜上的(epidural)、以及胸骨內的(intrasternal)注射與注入(infusion)。較佳地，施用的路徑為靜脈內。用於非腸道性應用的溶液或懸浮液可包括下列成分：用於注射的無菌稀釋劑，例如水；生理食鹽水溶液；非揮發性油(fixed oils)；聚乙二醇(polyethylene glycols)；甘油(glycerine)；丙二醇(propylene glycol)或其他合成溶劑；抗菌劑，例如or other synthetic solvents；antibacterial agents such as苯甲醇(benzyl alcohol)或苯甲酸甲脂(methyl parabens)；抗氧化劑，例如抗壞血酸(ascorbic acid)或亞硫酸氫鈉(sodium bisulfite)；螯合劑(chelating agents)，例如乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid)；緩衝液，例如醋酸鹽(acetates)、檸檬酸鹽(citrates)或硫酸鹽(phosphates)，以及用於強度(tonicity)調整之物質，例如氯化鈉或右旋糖(dextrose)。pH值可用酸或鹼調整，例如氯酸或氫氧化鈉。非腸道製劑可包覆於安瓶(ampoule)、可拋棄的注射器、或玻璃或塑膠製的多劑量試管(multiple dose vials)。
適合注射使用的藥學組合物包含無菌水溶液(水溶性的)或分散液(dispersion)，以及無菌粉末，例如凍乾製劑，以作為無菌可注射溶液或分散液的臨時製劑(extemporaneous preparation)。為了靜脈內施用，適當的載體包括生理食鹽水、抑菌水(bacteriostatic water)、助溶劑CREMOPHOR ELTM (BASF,Parsippany,NJ)、或磷酸生理食鹽水(phosphate buffered saline,PBS)。在全部的例子中，組合物必須為無菌的，且應該為流動的以達到容易注射的程度。在製造與保存的條件下必須要安定，而且必須保存於對抗微生物污染反應之下，該微生物例如為細菌或真菌。載體可為溶液或分散劑，具有例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、以及液體丙二醇、及類似物)，及其適合的混合物。適合的流動性可以被維持，例如，藉由使用卵磷脂(lecithin)之類的塗裝，藉由分散液中所需粒子尺寸的維持，及藉由使用界面活性劑。可以藉由各種抗菌劑與抗真菌劑，達成防止微生物的活動的目標，例如苯甲酸酯(parabens)、氯丁醇(chlorobutanol)、酚(phenol)、抗壞血酸、硫柳汞(thimerosal)、以及類似物。許多情形下，較佳為在組合物中包含等壓劑(isotonic agents)，例如糖、聚合醇(polyalcohols)，例如甘露醇(mannitol)、山梨糖醇(sorbitol)、氯化鈉。可注射組合物被延長的安定性可藉由包含在組合物中能延緩吸附的試劑所產生，該試劑係為，例如單硬脂酸鋁(aluminum monostearate)、人類血清蛋白與凝膠。
無菌的可注射溶液的製備，可為加入需要劑量的此處所述之GCB組合物，與合適的溶液以及一或前述所列舉成分的組合，按照需要，再進行過濾消毒。通常，藉由將活性化合物加入無菌容器中以製備分散液，該無菌容器具有鹼性分散劑，並需要其他前面所列舉的成分。在用於無菌可注射溶液組合物的無菌粉末的情形下，製備組合物的較佳方法為真空乾燥與冷凍乾燥法，例如冷凍乾燥法可由先前過濾滅菌溶液中，產生活性成分與任何額外有益成分的粉末。
活性化合物，例如此處所述之GCB組合物，可加上載體製備，可保護化合物免於由體內快速排出，例如控制釋放配方，包括植入物與微膠囊運送系統(microencapsulated delivery systems)。可使用生物可降解的、或生物相容性的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯(ethylene vinyl acetate)、聚酸酐(polyanhydrides)、聚羥基乙酸(polyglycolic acid)、膠原蛋白(collagen)、聚原酸酯(polyorthoesters)、以及聚乳酸(polylactic acid)。用於製備這類配方的方法對熟悉該項技藝人士而言是很清楚的。材料亦可購買自Alza Corporation與Nova Pharmaceuticals,Inc.。微脂體懸浮液(liposomal suspensions)，包括以單株抗體對病毒抗原標記至感染細胞的微脂體，亦可作為藥學上可接受載體。這些可依熟悉該項技藝人士所知的方法製備，例如，如美國專利第4,522,811號所述。
此處所描述的蛋白質組合物，例如GCB組合物，可用習知方法以醫療器材施用。例如，此處所描述的蛋白質組合物(如GCB)可用無針皮下注射裝置，例如美國專利第5,399,163、5,383,851、5,312,335、5,064,413、4,941,880、4,790,824、或4,596,556號所揭露的裝置。可用於本發明的已知植入物與組件的例子包括：.美國專利第4,487,603號，其揭露一種可植入的微滴入泵，以在控制速度下分散藥品；美國專利第4,486,194號，其揭露一種透過皮膚給藥的治療裝置；美國專利第4,447,233號，其揭露一種藥品滴入泵，以在精確的速度下傳輸藥品；美國專利第4,447,224號，其揭露一種可變流速的植入式滴入裝置，以持續地輸送藥品；美國專利第4,439,196號，其揭露一種滲透性的藥品傳輸系統，其具有多腔分隔(multi－chamber compartments)；以及美國專利第4,475,196號，其揭露一種滲透性藥品傳輸系統。當然，許多其他這類的如植入物、傳輸系統以及組件亦為已知的。
實施例 實施例1：材料與設備
以下的試劑係用於產生實施例2至6所示的結果：GCB：葡萄糖腦甘酯酶使用國際專利申請案PCT/US01/25882所述的方法製備，但不限於此。其他具本技術領域通常知識人士所知的，使用重組DNA技術的方法亦可使用，例如國際專利申請案PCT/US88/04314、PCT/US89/05801、及PCT/US92/00431，以及美國專利5,236,838B1、5,641,670B1、5,549,892B1、與6,270,989B1所述之方法。
蔗糖：貨品編號為P/N S－124－01或S－124－02，購自PfanStiehl(Waukegen,IL)。
胱胺酸－鹽酸(Cysteine HCl)：貨品編號為2071－05，購自JTBaker(Phillipsburg,NJ)。
泊洛沙姆188(Poloxamer 188)：貨品編號為P1169，購自Spectrum(New Brunswick,NJ)。
檸檬酸鈉(Sodium Citrate)：貨品編號為3649－01，購自JTBaker(Phillipsburg,NJ)。
20毫升試管(vials)：貨品編號為6800－0321，購自West Pharmaceuticals Services(Lionville,PA)。
2毫升試管(vials)：貨品編號為6800－0314，購自West Pharmaceuticals Services(Lionville,PA)。
20毫米塞子(stoppers)：貨品編號為1950－0414，購自West Pharmaceuticals Services(Lionville,PA)。
13毫米塞子：貨品編號為1950－0412，購自West Pharmaceuticals Services(Lionville,PA)。
氮氣：貨品編號為UN1066，購自Airgas(Salem,NH)。
冷凍乾燥器(Lyophilizer)：Genesis 35EL，購自SP Industries(Warminster,PA)。
實施例2：GCB安定性(GCB Stability)
GCB配製為濃度2.5毫克/毫升、16%蔗糖、0.03%胱胺酸－鹽酸、0.05%泊洛沙姆188、50 mM檸檬酸鈉、pH值為6.0。20毫升玻璃試管充填配製的溶液各4.5毫升。充填的試管置於冷凍乾燥器的架子上，並以500 mT真空排氣，架子的溫度為20℃、維持3分鐘，接著以氮氣回充至950 mBar，並立即以20釐米灰色塞子塞住。樣品置於2至8℃的安定性室(stability chamber)。在儲存0、6、12、18、及24個月後，取出樣品，並測試酵素活性；以SE－HPLC測聚合，並以RP－HPLC測降解變化。利用呈色反應檢測酵素活性，以對硝基苯吡喃葡萄糖苷(p－nitrophenyl－D－glucopyranoside)作為受質。活性亦可利用美國專利第7,138,262號所述之方法加以測試。
結果摘要於表1。此組合物的GCB儲存24個月、2至8℃後，安定性較基準降低了5%。
實施例3：氧氣程度的影響(Effect of O2 Levels)
GCB配製為濃度2.5毫克/毫升、16%蔗糖、0.03%胱胺酸－鹽酸、0.05%泊洛沙姆188、50 mM檸檬酸鈉、pH值為6.0。2毫升的玻璃試管充填配製的溶液各1毫升。試管頂部空間以冷凍乾燥器處理，使氧氣濃度為3%、6%、或14%。將樣本置於2至8℃的安定性室(stability chamber)。在6個月的時候，將樣本取出，並以SE－HPLC測試聚合變化，以RP－HPLC測試降解變化。結果係摘要於表2。這些組合物的GCB對於試管頂部空間的氧氣含量十分敏感。在氧氣少於3%時，基本上在2至8℃儲存6個月後不會觀察到變化。
實施例4：蔗糖程度的影響(Effect of Sucrose Levels)
GCB配製為濃度2.5毫克/毫升、0.05%胱胺酸－鹽酸、0.05%泊洛沙姆188、50 mM檸檬酸鈉、pH值為6.0，包含蔗糖濃度為0%、5%、8%、或16%。2毫升的玻璃試管充填配製的溶液各1毫升。試管以冷凍乾燥器真空排氣，並以氮氣覆蓋至950 mBar，接著以13釐米塞子封閉。樣品置於2至8℃的安定性室(stability chamber)。在6個月的時候，將樣本取出，並以SE－HPLC測試聚合變化，以RP－HPLC測試降解變化。結果係摘要於表3。
實施例5：胱胺酸程度的影響(Effect of Cysteine Levels)
GCB配製為濃度2.5毫克/毫升、16%蔗糖、0.05%泊洛沙姆188、50 mM檸檬酸鈉、pH值為6.0，包含0%或0.05%的胱胺酸－鹽酸。2毫升的玻璃試管充填配製的溶液各1毫升。將樣本置於2至8℃的安定性室(stability chamber)。試管以冷凍乾燥器真空排氣，並於頂部空間以氮氣覆蓋至950 mBar，接著以13釐米塞子封閉。樣品置於2至8℃的安定性室(stability chamber)。在6個月的時候，將樣本取出，並以SE－HPLC測試聚合變化，以RP－HPLC測試降解變化。結果係摘要於表4。胱胺酸－鹽酸的添加，降低聚合的程度，但增加RP－HPLC所偵測到的降解的程度。
實施例6：pH值程度的影響
GCB配製為濃度2.5毫克/毫升、16%蔗糖、0.05%胱胺酸－鹽酸、0.05%泊洛沙姆188、50 mM檸檬酸鈉、pH值為6.0、5.8或5.5。2毫升的玻璃試管充填配製的溶液各1毫升。將樣本置於2至8℃的安定性室(stability chamber)。試管以冷凍乾燥器真空排氣，並於頂部空間以氮氣覆蓋至950 mBar，接著以13釐米塞子封閉。樣品置於13至17℃的安定性室(stability chamber)。在3個月的時候，將樣本取出，並以SE－HPLC測試聚合變化，以RP－HPLC測試降解變化。結果係摘要於表5。pH值的降低可以減少聚合的程度與降解的程度。
其他實施例
可以瞭解，當本發明說明詳細的敘述，前述說明係用於例示而非限制隨附的申請專利範圍。其他觀點、優點與修飾皆在以下的申請專利範圍的範圍之內。

Claims (38)

  1. 一種藥學組合物，包括一具有自由硫醇(thiol)的葡萄糖腦甘酯酶(glucocerebrosidase,GCB)與一碳水化合物(carbohydrate)，其中該碳水化合物的含量足以維持該葡萄糖腦甘酯酶的安定性，其中該藥學組合物的pH值介於約4.5與約6.5之間，且其中該碳水化合物為蔗糖或海藻糖。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，更包括一抗氧化劑，其中該抗氧化劑與該碳水化合物的含量足以維持該葡萄糖腦甘酯酶的安定性。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，更包括一界面活性劑。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該安定性在預先選定的條件下，比缺少碳水化合物的不同組合物至少高5至80%以上。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該碳水化合物的含量足以增加該葡萄糖腦甘酯酶的安定性。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該碳水化合物的含量足以抑制該葡萄糖腦甘酯酶之第一分子上之自由硫醇與該葡萄糖腦甘酯酶之第二分子上之自由硫醇反應產生聚合物。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該碳水化合物的含量在預先選定的條件下，比缺少碳水化 合物的相同組合物足以抑制至少5至80%由該葡萄糖腦甘酯酶之第一分子上之自由硫醇與該葡萄糖腦甘酯酶之第二分子上之自由硫醇反應產生的聚合。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該碳水化合物的含量在氣密容器，溫度2-8℃，期間為6個月的儲存過程中仍維持該藥學組合物儲存前至少85%的安定性。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之藥學組合物，其中該儲存發生於黑暗中。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，包括約1至40%的碳水化合物。
  11. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該藥學組合物為液體。
  12. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該藥學組合物的氧氣少於約10%。
  13. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該藥學組合物係以包含由該藥學組合物中物理性移除氧氣的方法所製成。
  14. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該組合物為葡萄糖腦甘酯酶之一液體組合物，其中該組合物以暴露於惰性氣體中製得，且該惰性氣體的濃度高於周遭的大氣。
  15. 如申請專利範圍第14項所述之藥學組合物，更包括一抗氧化劑。
  16. 如申請專利範圍第15項所述之藥學組合物，其中該抗氧化劑為胱胺酸(cysteine)、胱胺酸-鹽酸(cysteine-HCl)、或甲硫丁氨酸(methionine)，且該碳水化合物為蔗糖。
  17. 如申請專利範圍第16項所述之藥學組合物，其中該抗氧化劑為胱胺酸、胱胺酸-鹽酸、或甲硫丁氨酸，體積重量比濃度(wt/vol)介於約0.001與約10%之間，以及該碳水化合物為蔗糖或海藻糖，體積重量比濃度介於約1與約40%之間。
  18. 如申請專利範圍第14項所述之藥學組合物，更包括一界面活性劑。
  19. 如申請專利範圍第18項所述之藥學組合物，其中該界面活性劑為泊洛沙姆188(poloxamer 188)。
  20. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該組合物為葡萄糖腦甘酯酶之一液體組合物，其中該組合物的pH值介於約4.5與6.5之間，且該碳水化合物的含量足以維持葡萄糖腦甘酯酶在該pH值時的生物化學完整性與生物活性特徵。
  21. 如申請專利範圍第20項所述之藥學組合物，其中該pH值的範圍介於約5.0至約6.0之間。
  22. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該碳水化合物為蔗糖，且體積重量比濃度(wt/vol)介於約1至約40%之間。
  23. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其 中該組合物為葡萄糖腦甘酯酶之一液體組合物，其包括葡萄糖腦甘酯酶、一抗氧化劑及一碳水化合物，且其中該組合物係將該組合物暴露於惰性氣體中所製得。
  24. 如申請專利範圍第23項所述之藥學組合物，包括約0.1至40mg/ml的葡萄糖腦甘酯酶、約0.001至10%的胱胺酸(cysteine)、約1至40%的蔗糖，約5.5至6.0的pH值，且其中溶解的O2 含量少於約10%。
  25. 如申請專利範圍第23項所述之藥學組合物，更包括一界面活性劑。
  26. 如申請專利範圍第25項所述之藥學組合物，其中該界面活性劑為泊洛沙姆188(poloxamer 188)。
  27. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物，其中該藥學組合物不包含聚山梨醇酯(polysorbate)。
  28. 一種氣密容器(gas tight container)，包括如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物及一頂部空間，其中該頂部空間為至少90%(vol/vol)的惰性氣體。
  29. 如申請專利範圍第28項所述之氣密容器，其中該容器為預先充填的注射器(syringe)、試管(vial)或安瓶(ampoule)。
  30. 如申請專利範圍第29項所述之氣密容器，其中該預先充填的注射器為無針注射器(needleless syringe)。
  31. 如申請專利範圍第28項所述之氣密容器，其中該葡萄糖腦甘酯酶為溶液形式。
  32. 一種包裝申請專利範圍第1項所述之藥學組合物的方法，包括使葡萄糖腦甘酯酶與惰性氣體接觸以降低反應分子(reactive species)的量，並將該蛋白質與該惰性氣體導入一氣密容器中。
  33. 如申請專利範圍第32項所述之方法，其中該惰性氣體為氮氣(N2 )或氬氣(Ar)，且該反應分子為氧氣(O2 )。
  34. 如申請專利範圍第1項所述之藥學組合物於製造一用以治療病患之藥劑中的用途。
  35. 如申請專利範圍第34項所述之用途，其中該藥劑之投予方法為靜脈注射(IV infusion)或皮下注射(subcutaneous administration)。
  36. 如申請專利範圍第14項所述之藥學組合物於製造一用以治療具有葡萄糖腦甘酯酶缺乏症(glucocerebrosidase deficiency)病患之藥劑中的用途。
  37. 如申請專利範圍第36項的用途，其中該葡萄糖腦甘酯酶缺乏症為高雪氏症(Gaucher disease)。
  38. 如申請專利範圍第11項所述之藥學組合物，其中該碳水化合物存在的含量足以使該藥學組合物具有可相較於一冷凍乾燥組合物之安定性的安定性，該冷凍乾燥組合物包括葡萄糖腦甘酯酶、蔗糖、0.01%聚山梨醇酯20(polysorbate-20)與pH 6.0,50mM檸檬酸鹽(Citrate)。
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Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7138262B1 (en) 2000-08-18 2006-11-21 Shire Human Genetic Therapies, Inc. High mannose proteins and methods of making high mannose proteins
DK1986612T3 (da) 2006-02-07 2012-10-29 Shire Human Genetic Therapies Stabiliserede proteinsammensætninger med en fri thioldel
US20110021980A1 (en) * 2007-08-27 2011-01-27 Ablynx N.V. Needle-free delivery device for therapeutic proteins based on single antigen-binding domains such as nanobodies®
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
NZ586383A (en) 2007-12-28 2012-11-30 Baxter Int Recombinant vwf formulations
US11197916B2 (en) 2007-12-28 2021-12-14 Takeda Pharmaceutical Company Limited Lyophilized recombinant VWF formulations
AU2009205995B2 (en) * 2008-01-18 2014-04-03 Medimmune, Llc Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation
EP2113564A1 (en) * 2008-05-01 2009-11-04 Arecor Limited Protein formulation
US8980254B2 (en) 2008-08-21 2015-03-17 Alvine Pharmaceuticals, Inc. Formulation for oral administration of proteins
US9017667B2 (en) * 2008-10-10 2015-04-28 Alvine Pharmaceuticals, Inc. Dosage forms that facilitate rapid activation of barley protease zymogen
BRPI0919693A2 (pt) 2008-10-21 2020-08-11 Baxter Healthcare S.A formulação farmacêutica estável liofilizada
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
RU2733466C2 (ru) * 2009-07-28 2020-10-01 Шайр Хьюман Дженетик Терапиз Композиции и способы для лечения болезни гоше
EP2325194A1 (en) 2009-11-24 2011-05-25 Glycotope GmbH Process for the purification of glycoproteins
US20120294866A1 (en) * 2010-01-19 2012-11-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical formulation for proteins
EP2361636A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 CSL Behring AG Immunoglobulin preparation and storage system for an immunoglobulin preparation
WO2011127426A1 (en) * 2010-04-08 2011-10-13 Baxter International Inc. Methods for modeling protein stability
CA2815689C (en) 2010-11-11 2016-11-22 Abbvie Biotechnology Ltd. Improved high concentration anti-tnf.alpha. antibody liquid formulations
TWI527590B (zh) 2011-06-17 2016-04-01 艾瑞斯貿易公司 Ｆｇｆ－１８之凍乾調配物
JP5990880B2 (ja) * 2011-08-31 2016-09-14 東レ株式会社 有用タンパク質組成物およびその製造方法
JP6230160B2 (ja) 2012-03-02 2017-11-15 シャイア ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド Ｉｉｉ型ゴーシェ病を治療するための組成物および方法
ES2524516B1 (es) * 2014-05-29 2015-03-31 Grifols Worldwide Operations Limited Procedimiento de preparación de albúmina humana con nivel de oxígeno disuelto reducido
SG11201700550YA (en) 2014-08-04 2017-02-27 Csl Ltd Factor viii formulation
US9575064B2 (en) * 2014-09-02 2017-02-21 Perkinelmer Health Sciences, Inc. Methods relating to testing for lysosomal storage disorders
AR103172A1 (es) * 2014-12-22 2017-04-19 Novartis Ag Reducción selectiva de residuos de cisteina en anticuerpos il-17
CN107952064B (zh) * 2016-10-14 2023-10-20 江苏豪森药业集团有限公司 含有聚乙二醇洛塞那肽的药物制剂及其制备方法
UY38238A (es) * 2018-05-25 2019-12-31 Genzyme Corp Composiciones farmacéuticas para el tratamiento de la deficiencia de esfingomielinasa ácida
KR20220029733A (ko) 2019-07-04 2022-03-08 체에스엘 베링 렝나우 아게 응고 인자 viii의 시험관내 안정성을 증가시키기 위한 절단된 폰 빌레브란트 인자 (vwf)
BR112022006698A2 (pt) * 2019-10-09 2022-09-06 Phoenix Eagle Company Pty Ltd Aprimoramento e estabilização da atividade proteolítica das proteases
EP4240757A2 (en) 2020-11-09 2023-09-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited Purification of fviii from plasma using silicon oxide adsorption

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997032591A1 (en) * 1996-03-05 1997-09-12 Orquest, Inc. Method of promoting bone growth with hyaluronic acid and growth factors
US5670132A (en) * 1994-09-20 1997-09-23 Immunomedics, Inc. Modified radioantibody fragments for reduced renal uptake
WO1998022136A2 (de) * 1996-11-19 1998-05-28 Roche Diagnostics Gmbh Stabile lyophilisierte pharmazeutische zubereitungen von mono- oder polyklonalen antikörpern
WO2000076480A2 (en) * 1999-06-11 2000-12-21 Eli Lilly And Company Pharmaceutical materials and methods for their preparation and use
US20040063639A1 (en) * 1997-12-22 2004-04-01 Human Genome Sciences, Inc. Keratinocyte growth factor-2 formulations

Family Cites Families (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3910822A (en) 1974-03-14 1975-10-07 Us Health Isolation of glucocerebrosidase from human placental tissue
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US5272066A (en) 1986-03-07 1993-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Synthetic method for enhancing glycoprotein stability
US4925796A (en) 1986-03-07 1990-05-15 Massachusetts Institute Of Technology Method for enhancing glycoprotein stability
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
EP0393143A4 (en) 1987-12-23 1991-09-11 Us Commerce Cloned dna for synthesizing unique glucocerebrosidase
US5879680A (en) 1987-12-23 1999-03-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Cloned DNA for synthesizing unique glucocerebrosidase
US20020168750A1 (en) 1988-12-23 2002-11-14 James Rasmussen Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase
US5236838A (en) 1988-12-23 1993-08-17 Genzyme Corporation Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase
US5549892A (en) 1988-12-23 1996-08-27 Genzyme Corporation Enhanced in vivo uptake of glucocerebrosidase
US6451600B1 (en) 1989-12-22 2002-09-17 Genzyme Corporation Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase
WO1990007573A1 (en) 1988-12-23 1990-07-12 Genzyme Corporation Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase
JPH03503721A (ja) 1988-12-23 1991-08-22 ジェンザイム　コーポレイション 酵素的に活性な組換えグルコセレブロシダーゼ
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5401650A (en) 1990-10-24 1995-03-28 The Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Cloning and expression of biologically active α-galactosidase A
CA2099876C (en) 1991-01-21 2002-03-26 Michael L. Hayes Production of enzymatically active glucocerebrosidase from recombinant cells
US5641670A (en) 1991-11-05 1997-06-24 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US6270989B1 (en) 1991-11-05 2001-08-07 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and delivery
US5911983A (en) 1992-06-26 1999-06-15 University Of Pittsburgh Gene therapy for Gaucher disease using retroviral vectors
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
CA2150956A1 (en) 1992-12-10 1994-06-23 Robert G. L. Shorr Glycolipid enzyme-polymer conjugates
AU6809494A (en) 1992-12-21 1994-07-19 Enzon, Inc. Purification of proteinaceous material
EP0675204B1 (en) 1994-03-30 2001-05-30 Takara Shuzo Co. Ltd. Transglycosylating process for producing carbohydrates or glycoconjugates
JP3002113B2 (ja) 1994-03-30 2000-01-24 寳酒造株式会社 糖質又は複合糖質の製造方法
AU693329B2 (en) 1995-04-13 1998-06-25 Corning Incorporated Dispersion managed optical waveguide
JPH11510170A (ja) * 1995-07-27 1999-09-07 ジェネンテック インコーポレーテッド タンパク質の処方
AU7071196A (en) 1995-09-14 1997-04-01 Croptech Development Corporation Production of lysosomal enzymes in plant-based expression systems
CA2260790C (en) 1996-07-15 2007-01-09 Universiteit Van Amsterdam Deoxynojirimycin derivatives and their uses as glucosylceramidase inhibitors
KR20050084473A (ko) 1996-09-13 2005-08-26 트랜스케리오틱 쎄러피스, 인코포레이티드 α-갈락토시다아제 Ａ 결핍을 치료하는 방법
JPH10273500A (ja) 1997-03-03 1998-10-13 Noguchi Inst 複合糖ペプチド及びその製造法
JPH10306099A (ja) 1997-03-04 1998-11-17 Noguchi Inst 新規複合糖ペプチドおよびその製法
TW542721B (en) * 1997-08-06 2003-07-21 Melaleuca Inc Dietary supplements containing natural ingredients
DE69825288D1 (de) * 1997-08-07 2004-09-02 Univ Utah Prodrugs und konjugate von selenolenthaltenden verbindungen und ihre verwendung
US5939279A (en) 1997-09-18 1999-08-17 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Inhibition of bacterial binding by high-mannose oligosaccharides
GB9802249D0 (en) 1998-02-03 1998-04-01 Ciba Geigy Ag Organic compounds
GB9807464D0 (en) 1998-04-07 1998-06-10 Pharming Bv Purification of human acid µ-glucosidase
EP0976838A1 (en) 1998-05-06 2000-02-02 Rhone-Poulenc Nutrition Animale Enzymes mixture
JPH11318441A (ja) 1998-05-14 1999-11-24 Nagase & Co Ltd 超耐熱耐酸性アミロプルラナーゼ
KR19990086271A (ko) 1998-05-27 1999-12-15 손경식 면역세포의 신규한 엔도뉴클레아제 및 이를 사용한 면역보조제
AU4045599A (en) 1998-06-05 1999-12-30 Aventis Pharma S.A. Polypeptides with beta-secretase type activity
PT1137789E (pt) 1998-12-09 2010-10-21 Phyton Holdings Llc Um método para produzir glicoproteínas possuindo glicosilação de tipo humano
US6406455B1 (en) 1998-12-18 2002-06-18 Biovalve Technologies, Inc. Injection devices
GB9909066D0 (en) 1999-04-20 1999-06-16 Oxford Glycosciences Uk Ltd Therapies
EP1196190B1 (en) * 1999-07-26 2003-03-19 G.D. SEARLE & CO. Use of long-chain n-alkyl derivatives of deoxynojirimycin and a glucocerebrosidase enzyme for the manufacture of a medicament for the treatment of glycolipid storage diseases
US6770468B1 (en) 1999-09-14 2004-08-03 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. Phosphodiester-α-GlcNAcase of the lysosomal targeting pathway
US6642038B1 (en) 1999-09-14 2003-11-04 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. GlcNAc phosphotransferase of the lysosomal targeting pathway
WO2001049830A2 (en) 1999-12-30 2001-07-12 Maxygen Aps Improved lysosomal enzymes and lysosomal enzyme activators
WO2001077307A2 (en) 2000-04-06 2001-10-18 Exegenics, Inc. Expression system for efficiently producing clinically effective lysosomal enzymes (glucocerebrosidase)
US20040204379A1 (en) 2000-06-19 2004-10-14 Cheng Seng H. Combination enzyme replacement, gene therapy and small molecule therapy for lysosomal storage diseases
WO2001097829A2 (en) 2000-06-19 2001-12-27 Genzyme Corporation Combination enzyme replacement, gene therapy and small molecule therapy for lysosomal storage diseases
US7138262B1 (en) 2000-08-18 2006-11-21 Shire Human Genetic Therapies, Inc. High mannose proteins and methods of making high mannose proteins
EP1412017B1 (en) 2000-11-30 2016-04-13 Valeritas, Inc. Fluid delivery and measurement systems and methods
JP2004525621A (ja) 2001-01-18 2004-08-26 メルク　パテント　ゲゼルシャフト　ミット　ベシュレンクテル　ハフトング グルコセレブロシダーゼ活性を有する二機能性融合タンパク質
CN1156702C (zh) 2001-07-11 2004-07-07 上海晶泰生物技术有限公司 采用标记链霉亲和素-生物素技术的蛋白质芯片
US20030133924A1 (en) 2001-12-21 2003-07-17 Novazyme Pharmaceuticals, Inc. Highly phosphorylated acid beta-glucocerebrosidase and methods of treating gaucher's disease
US20050276823A1 (en) * 2002-07-12 2005-12-15 Cini John K Methods and compositions for preventing oxidative degradation of proteins
US7194924B2 (en) * 2002-07-31 2007-03-27 Lockheed Martin Corporation System and method for biohazard detection using compression
US20040202666A1 (en) * 2003-01-24 2004-10-14 Immunomedics, Inc. Anti-cancer anthracycline drug-antibody conjugates
CA2814767C (en) * 2003-01-31 2016-03-15 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Combination therapy for treating protein deficiency disorders
US20050265988A1 (en) 2004-03-18 2005-12-01 Byung-Kwon Choi Glycosylated glucocerebrosidase expression in fungal hosts
TW200606080A (en) * 2004-05-26 2006-02-16 Bristol Myers Squibb Co Container
US20060008415A1 (en) * 2004-06-25 2006-01-12 Protein Design Labs, Inc. Stable liquid and lyophilized formulation of proteins
JP5425398B2 (ja) * 2004-12-22 2014-02-26 アンブレツクス・インコーポレイテツド 非天然アミノ酸及びポリペプチドを含む組成物、非天然アミノ酸及びポリペプチドに関連する方法並び非天然アミノ酸及びポリペプチドその使用
DK1986612T3 (da) * 2006-02-07 2012-10-29 Shire Human Genetic Therapies Stabiliserede proteinsammensætninger med en fri thioldel
CA2644343A1 (en) 2006-03-17 2007-09-27 Biomarin Pharmaceutical Inc. Assays for detection of antibodies to lysosomal enzymes
US8905801B1 (en) 2007-12-31 2014-12-09 Brp Us Inc. Marine outboard motor
RU2733466C2 (ru) 2009-07-28 2020-10-01 Шайр Хьюман Дженетик Терапиз Композиции и способы для лечения болезни гоше
US20120328589A1 (en) 2010-03-02 2012-12-27 Ilya Ruderfer Glucocerebrosidase multimers and uses thereof
JP5383591B2 (ja) 2010-05-24 2014-01-08 日立建機株式会社 建設機械の油圧駆動装置
WO2012012461A2 (en) 2010-07-19 2012-01-26 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mannose receptor c type 1 (mrc1) codon optimized cell line and uses thereof
JP5806015B2 (ja) 2011-06-30 2015-11-10 矢崎総業株式会社 電気接続箱

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5670132A (en) * 1994-09-20 1997-09-23 Immunomedics, Inc. Modified radioantibody fragments for reduced renal uptake
WO1997032591A1 (en) * 1996-03-05 1997-09-12 Orquest, Inc. Method of promoting bone growth with hyaluronic acid and growth factors
WO1998022136A2 (de) * 1996-11-19 1998-05-28 Roche Diagnostics Gmbh Stabile lyophilisierte pharmazeutische zubereitungen von mono- oder polyklonalen antikörpern
US20040063639A1 (en) * 1997-12-22 2004-04-01 Human Genome Sciences, Inc. Keratinocyte growth factor-2 formulations
WO2000076480A2 (en) * 1999-06-11 2000-12-21 Eli Lilly And Company Pharmaceutical materials and methods for their preparation and use

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Cleland JL et al. "A specific molar ratio of stabilizer to protein is required for storage stability of a lyophilized monoclonal antibody" Journal of Pharmaceutical Sciences 2001;90(3):310-321 *
Tsitsimpikou C et al. "Studies of the effect of organic solvents on the stability of beta-glucosidase from Fusarium oxysporum" Biotechnology Letters 1994;16(1):57-62 *

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