TWI384997B - 抗酪胺酸酶相關蛋白-１（ｔｙｒｐ１）抗體 - Google Patents

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Description

抗酪胺酸酶相關蛋白-1(TYRP1)抗體
本發明係關於對人類酪胺酸酶相關蛋白-1(TYRP1)具有特異性之人類及嵌合抗體，包括其片段或部分。該等抗體可用於治療癌細胞生長且可單獨或與抗腫瘤劑或治療組合使用。
人類酪胺酸酶相關蛋白-1(TYRP1)亦稱為gp75(WO 91/14775)(SEQ ID NO:28)，其係參與黑色素生物合成之黑色素小體膜糖蛋白。其主要見於黑色素細胞之黑色素小體內且亦已發現其在黑色素細胞及人類黑色素瘤之細胞表面上表現。
TYRP1抗原具有高度免疫原性。已在黑色素瘤患者中鑒定到針對TYRP1之抗體及T-細胞。看來細胞及體液應答二者均可有效消除活體內黑色素瘤。黑色素瘤反應性T-細胞之過繼轉移亦可達成腫瘤消退。藉由TYRP1疫苗誘導之抗體應答亦可抑制動物中之黑色素瘤生長及轉移。
儘管已研究了黑色素瘤之多種治療選擇，包括小分子抑制劑、化學治療劑、包括疫苗在內之免疫療法(例如美國專利第6,168,946號)、基因療法/免疫刺激劑、及抗血管生成劑，但目前對於黑色素瘤患者仍無有效療法。針對該未滿足之醫學需要研發新穎治療方法係高度必要的。
藉由實施動物研究發現了抗體TA99。TA99(IgG2a)係對人類及鼠科動物TYRP1具有特異性之鼠科動物單株抗體(MAb)，其集中在活體內皮下人類黑色素瘤內。參見Welt等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 :4200-4204(1987)及美國專利第4,798,790號。TA99治療可抑制小鼠中之腫瘤生長及轉移。參見Takechi等人，Clin Cancer Res. 2 :1837-42(1996)。
經TA99治療之小鼠通常會毛髮褪色(色素脫失)，表明皮膚中之黑色素細胞遭到破壞。Fc受體調介之效應子激活似乎在TA99靶向細胞之消除中發揮重要作用。在FcR基因敲除小鼠中TA99之抗腫瘤效應顯著降低。參見Clynes等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 :652-656(1998)。然而，TA99之鼠科動物性質意味著由於潛在之免疫原性問題其不能用作人類治療劑且此外其激活下游免疫效應子功能之能力會受到限制。
因此需要提供可有效治療黑色素瘤之替代抗TYRP1抗體。本發明提供可有效治療黑色素瘤之替代抗TYRP1抗體。
另外，亦需要提供與熟習此項技術者習知之彼等抗體相比對TYRP1具有提高之結合親和力的替代抗TYRP1抗體。本發明提供與熟習此項技術者習知之彼等抗體相比對TYRP1具有提高之結合親和力的替代抗TYRP1抗體。
此外，亦需要提供在人類中具有降低之免疫原性及提高之激活下游免疫效應子功能(例如抗體依賴性細胞毒性(ADCC))之能力的替代抗TYRP1抗體。本發明提供嵌合及人類抗TYRP1抗體，其與熟習此項技術者習知之彼等抗體相比在人類中具有降低之免疫原性及提高之激活下游免疫效應子功能(例如抗體依賴性細胞毒性(ADCC))的能力。
亦仍需要提供經由減少蛋白質錯折疊及誤加工而具有提高之穩定性之替代抗TYRP1抗體。較佳之本發明抗體經由減少蛋白質錯折疊及誤加工而具有提高之穩定性。
本發明係關於結合黑色素瘤抗原TYRP1(SEQ ID NO:28)之人類及嵌合單株抗體、及其片段。
本發明之一個實施例係以介於0.1x10-9 M至1.5x10-9 M間之離解常數KD 特異性結合人類TYRP1之單株抗體，其中該等KD 值係藉由表面電漿共振來測定。在本發明之其他實施例中，該單株抗體係嵌合或人類抗體。保留特異性結合人類TYRP1之能力的該等抗體之片段係本發明之一部分，即使該等片段之離解常數不在指定範圍內。
在本發明之另一實施例中，該單株抗體以約2.8x10-10 M之KD 特異性結合人類TYRP1。
本發明之一個實施例係結合TYRP1之抗體或其片段，其包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3，CDRH1具有序列GYTFTSYAMN(SEQ ID NO:1)，CDRH2具有序列WINTNTGNPTYAQGFTG(SEQ ID NO:2)，CDRH3具有序列RYSSSWYLDY(SEQ ID NO:3)，CDRL1具有序列RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:4)，CDRL2具有序列DASNRAT(SEQ ID NO:5)，且CDRL3具有序列QQRSNWLMYT(SEQ ID NO:6)，其中該抗體在該等CDR序列之一內進一步包含胺基酸取代。在另一實施例中，上述CDR在該等CDR序列之一內不具有胺基酸取代。在再一實施例中，具有上述CDR之抗體以介於0.1x10-9 M至1.5x10-9 M間之離解常數KD 特異性結合人類TYRP1。
在本發明之另一實施例中，特異性結合TYRP1之該抗體或其片段包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及CDRL3，CDRH1具有序列GFNIKDYFLH(SEQ ID NO:7)，CDRH2具有序列WINPDNGNTVYDPKFQG(SEQ ID NO:8)，CDRH3具有序列DYTYEKAALDY(SEQ ID NO:9)，CDRL1具有序列RASGNIYNYLA(SEQ ID NO:10)，CDRL2具有序列DAKTLAD(SEQ ID NO:11)，且CDRL3具有序列QHFWSLPFT(SEQ ID NO:12)，其在該等CDR序列之一內進一步包含胺基酸取代。在另一實施例中，上述CDR(SEQ ID NO:7-12)不具有任何胺基酸取代。
本發明之另一實施例係結合TYRP1且包含VL及VH之抗體或其片段，VL具有序列：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWLMYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:16)且VH具有序列：QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTSYAMNWVRQAPGQGLECMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSMDTSVSTAYLQISSLKAEDTAIYYCAPRYSSSWYLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:13)或QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTSYAMNWVRQAPGQGLESMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSMDTSVSTAYLQISSLKAEDTAIYYCAPRYSSSWYLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:14)。
本發明之另一實施例係單株抗體或其TYRP1結合片段，其包含SEQ ID NO:29重鏈及SEQ ID NO:32輕鏈；或SEQ ID NO:30重鏈及SEQ ID NO:32輕鏈。
在一個實施例中，抗體包含兩條SEQ ID NO:29重鏈及兩條SEQ ID NO:32輕鏈，或包含兩條SEQ ID NO:30重鏈及兩條SEQ ID NO:32輕鏈。該等抗體之TYRP1結合片段係本發明之一部分。
本發明亦係關於編碼該等抗體及其部分之經分離DNA。本發明之其他實施例包括：包含編碼該抗體或其片段之核苷酸序列的經分離聚核酸；包含與表現序列連接之該核苷酸序列的表現載體；或包含該表現載體之重組宿主細胞；或表現該抗體或其片段之重組宿主細胞或其子代。本發明之再一實施例係產生或純化抗體或其片段之方法，其包含在容許表現該抗體或其片段之條件下培養該等細胞。
另外，本發明係關於抑制癌細胞生長之方法、及治療黑色素瘤之方法，所有該等方法皆在哺乳動物中藉由投與有效量之抗體來實施。本發明之一個實施例係使用先前所述抗體或其片段作為藥劑。在再一實施例中，先前所述抗體或其片段擬用於治療癌症，包括但不限於惡性黑色素瘤。
在另一實施例中，本發明提供本發明抗體用以製造用於治療癌症之藥劑的用途。在一較佳實施例中，癌症係惡性黑色素瘤。
該等抗體可單獨或與抗腫瘤劑或治療組合使用。本發明之一個實施例係與額外抗癌劑或治療組合來使用先前所述抗體。在再一實施例中，抗癌劑係達卡巴嗪(dacarbazine)。
本發明提供對TYRP1抗原具有特異性之人類及嵌合抗體、及其片段、以及編碼該等抗體之經分離或經純化聚核苷酸序列。本發明抗體可用於治療腫瘤性疾病(包括實體及非實體腫瘤)、及用於治療過度增殖性病症。除非另外說明，否則術語抗體包括結合TYRP-1之片段。本文之結合參數係針對全長抗體，而非片段，由於大小不同，全長抗體與片段必然具有不同結合參數。
天然存在之抗體通常具有兩條相同重鏈及兩條相同輕鏈，每條輕鏈藉由鏈間二硫鍵與重鏈共價連接。多個二硫鍵進一步將該兩條重鏈相互連接。本文所用之術語「抗體」包括包含藉由二硫鍵相互連接之4條多肽鏈(兩條重鏈(H)及兩條輕鏈(L))之免疫球蛋白分子。各鏈可折疊成具有類似大小(110-125個胺基酸)及結構但不同功能之結構域。
輕鏈可包含一個可變結構域(在本文中縮寫為VL)及/或一個恆定結構域(在本文中縮寫為CL)。抗體(免疫球蛋白)之輕鏈為卡帕(K)輕鏈或蘭姆達(λ)輕鏈。本文所用之措詞VL意欲包括來自K型輕鏈之可變區(VK)及來自λ型輕鏈之可變區(Vλ)二者。輕鏈恆定區包含一個結構域CL。
重鏈亦可包含一個可變結構域(在本文中縮寫為VH)及/或端視抗體類型或同種型而包含三個或四個恆定結構域(CH1、CH2、CH3及CH4)(在本文中共同縮寫為CH)。在人類中，同種型為IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM，其中IgA及IgG進一步再分成數個亞類或亞型(IgA1-2 及IgG1-4 )。本發明包括任何上述類型或亞類(同種型)之抗體。人類IgG1 係本發明抗體之較佳同種型。
通常而言，可變結構域顯示各抗體間具有相當大之胺基酸序列可變性，尤其在抗原結合位點位置處。在每一VL及VH中可以看到三個稱為超變區或互補決定區(CDR)之區域，其由稱為框架區(FR)之較不變化區域所支撐。根據Kabat條約將胺基酸分配至特定CDR區或結構域(Kabat等人，Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93(1971)；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，美國健康及人類服務部(U.S. Department of Health and Human Services)，NIH公開案第91-3242號(1991))。每一VH及VL由3個CDR及4個FR構成，其自胺基末端至羧基末端之排列順序如下：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
由VL及VH結構域組成之抗體部分稱為Fv(可變片段)且構成抗原結合位點。單鏈Fv(scFv)係在一條多肽鏈上含有VL結構域及VH結構域之抗體片段，其中一個結構域之N末端與另一結構域之C末端藉由撓性連接體連接(參見，例如，美國專利第4,946,778號(Ladner等人)；WO 88/09344(Huston等人)；WO 92/01047(McCafferty等人)闡述了在可溶重組基因展示封包(例如噬菌體)表面上展示scFv片段)。
用於產生單鏈抗體之肽連接體可為撓性肽，其經選擇以確保VL及VH結構域發生適當三維折疊。連接體通常為10至50個胺基酸殘基。較佳地，連接體為10至30個胺基酸殘基。更佳地，連接體為12至30個胺基酸殘基。最佳之連接體為15至25個胺基酸殘基。該等連接體肽之實例包括(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3 。
「經分離抗體」係具有如下性質之抗體：(1)已自組份混合物部分、基本上、或完全純化；(2)已得到鑒定並自其天然環境組份分離及/或回收；(3)單株；(4)不含來自相同物種之其他蛋白質；(5)由來自不同物種之細胞表現；或(6)非天然存在。其天然環境之污染組份係會干擾抗體診斷或治療用途之物質，且可包括酶、激素、及其他蛋白質或非蛋白質溶質。經分離抗體之實例包括經親和純化之抗體、藉由雜交瘤或其他活體外細胞系製得之抗體、及衍生自轉基因小鼠之人類抗體。
本文所用之術語「單株抗體」係指自一群實質上同源之抗體獲得的抗體，例如，構成該抗體群的單個抗體除了可存在可能天然存在之突變或較少轉譯後變異外實質上相同。單株抗體具有高度特異性，其針對單個抗原位點(亦稱為決定簇或表位)。此外，與通常包括針對不同決定簇之不同抗體之習用(多株)抗體製品相反，每一單株抗體僅針對抗原上之單個決定簇。修飾詞「單株」表明該抗體係自實質上同源之抗體群獲得之特徵，且不能理解為需要藉助任一特定方法來產生該抗體。
本文所用之術語「抗體」亦包括「嵌合」抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體種類或亞類之抗體的對應序列相同或同源，而各鏈之其餘部分與衍生自另一物種(例如，小鼠或大鼠)或屬於另一抗體種類或亞類之抗體的對應序列相同或同源；以及該等抗體之片段，只要其呈現期望生物活性即可。參見，例如，Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA81 :6851-6855(1984)。因此，本發明包括(例如)包含嵌合重鏈及/或嵌合輕鏈之嵌合抗體。嵌合重鏈可包含與非人類抗體之重鏈恆定區融合之本文所述之任何重鏈可變(VH)區或其突變體或變體。嵌合輕鏈可包含與非人類抗體之輕鏈恆定區融合之本文所述之任何輕鏈可變(VL)區或其突變體或變體。
本文所用之術語「人類抗體」包括具有對應於人類種系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體(如Kabat等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，美國健康及人類服務部，NIH公開案第91-3242號中所述)。本發明之人類抗體在(例如)CDR內可包括非由人類種系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(舉例而言，藉由活體外隨機誘變或定點誘變或藉由活體內體細胞突變引入之突變)。該人類抗體之至少一個位置由胺基酸殘基、例如非由人類種系免疫球蛋白序列編碼之活性增強胺基酸殘基所置換。然而，本文所用之術語「人類抗體」不欲包括其中衍生自另一哺乳動物物種(例如小鼠)種系之CDR序列接枝到人類框架序列上之抗體。
片語「重組人類抗體」包括藉由重組手段製備、表現、產生或分離之人類抗體，例如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體、分離自重組、組合人類抗體文庫之抗體、分離自人類免疫球蛋白基因轉基因動物之抗體、或藉由涉及將人類免疫球蛋白基因序列拼接至其他DNA序列之任何其他手段而製備、表現、產生或分離之抗體。此等重組人類抗體具有衍生自人類種系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區(參見，Kabat等人，見上文)。
Fc(可結晶片段)係指包含成對重鏈恆定結構域之抗體部分或片段。例如，在IgG抗體中，Fc包含CH2及CH3結構域。IgA或IgM抗體之Fc進一步包含CH4結構域。Fc與Fc受體結合、補體調介之細胞毒性及ADCC之激活有關。對於諸如IgA及IgM等抗體(其為多種IgG樣蛋白質之複合物)而言，複合物形成需要Fc恆定結構域。
因此，本發明抗體包括但不限於天然存在之抗體、抗體、人類抗體、人類化抗體、重組人類抗體、單株抗體、消化片段、其指定部分及變體，包括抗體模擬物或包含模擬抗體或其指定片段或部分之結構及/或功能的抗體部分；每一含有至少一個CDR。功能片段包括結合TYRP1抗原之抗原結合片段。例如，能夠結合TYRP1或其一部分且為本發明所涵蓋之抗體片段包括二價片段，例如具有完整鏈間二硫鍵之(Fab')2 ；單價片段，例如Fab(抗原結合片段)，其係指由VL CL VL CH1結構域組成且不保留重鏈鉸鏈區之抗體片段(例如，藉由木瓜蛋白酶消化)；保留重鏈鉸鏈區之fab、facb(例如，藉由纖溶酶消化)、F(ab')2 、缺少二硫鍵之Fab'、pFc'(例如，藉由胃蛋白酶或纖溶酶消化)、Fd(例如，藉由胃蛋白酶消化、部分還原及重聚合)及Fv或scFv(例如，藉由分子生物學技術)。抗體片段亦意欲包括(例如)結構域缺失型抗體、線性抗體、單鏈抗體、scFv、單結構域抗體、多價單鏈抗體、自抗體片段形成之多特異性抗體，包括雙特異性抗體、三特異性抗體、及與抗原特異性結合之諸如此類抗體。
鉸鏈區使抗體之Fab與Fc部分分開，使Fab相對於彼此及相對於Fc具有活動性、以及包括用於使兩條重鏈共價連接之多個二硫鍵。
本發明之抗體或其片段對TYRP1具有特異性。抗體特異性係指抗體選擇性識別抗原之特定表位。例如，本發明之抗體或其片段可為單特異性、雙特異性、或多特異性的。雙特異性抗體(BsAb)係具有兩種不同抗原結合特異性或位點的抗體。多特異性抗體具有兩種以上不同抗原結合特異性或位點。在抗體具有一種以上特異性之情形下，所識別之表位可能與單一抗原或與一種以上抗原有關。因此，本發明提供結合兩種不同抗原、至少一種特異性針對TYRP1之雙特異性抗體或其片段。
本發明提供對TYRP1具有特異性之經分離抗體或其片段。TYRP1蛋白質係哺乳動物的，且較佳為人類的。本發明抗體具有一或多種以下活性：1)展示專一地對TYRP1之高親和力結合；及2)在活體外及活體內抑制腫瘤生長。
本發明抗體或其片段對TYRP1之特異性可基於親和力及/或親合力來測定。藉由抗原與抗體之離解平衡常數(KD )表示之親和力量測抗原決定簇與抗體結合位點間之結合強度。
本發明之抗體或其片段亦包括彼等結合特徵已藉由定向突變、親和力成熟、噬菌體呈現(phage display)、或鏈改組方法改良者。親合力及特異性可藉由使CDR突變並篩選具有期望特徵之抗原結合位點來改變或改良(參見，例如，Yang等人，J. Mol. Biol.，(1995)254:392-403)。可以多種方式使CDR突變。一種方式係使各殘基或殘基組合隨機化以使在其他方面相同之抗原結合位點群體中所有二十種胺基酸皆可見於特定位置。或者，藉由易錯PCR方法在多個CDR殘基內引入突變(參見，例如，Hawkins等人，J. Mol. Biol.，(1992)226:889-896)。例如，含有重鏈及輕鏈可變區基因之噬菌體呈現載體可在大腸桿菌(E. coli )增變菌株中實施繁殖(參見，例如，Low等人，J. Mol. Biol.，(1996)250:359-368)。該等誘變方法作為熟習此項技術者所習知之許多方法的例子。
一種產生取代變體之方便方式係使用噬菌體呈現之親和力成熟。簡言之，使數個CDR區之位點突變以在各位點產生所有可能之胺基酸取代。由此產生之抗體變體，當融合至各絲狀噬菌體顆粒中所包裹之M13基因III產物時，以單價形式自絲狀噬菌體顆粒呈現。隨後噬菌體呈現之變體以本文所揭示之變體生物活性(例如結合親和力、特異性、IC50、EC50、KD )篩選。為鑒定用於修飾之候選CDR區位點，可實施丙胺酸掃描誘變劑以鑒定明顯促進抗原結合之CDR區殘基。或者，或另外，可對一或多種CDR序列在一或多個殘基位置上實施隨機誘變，使CDR可操作地連接於可變區，或使CDR獨立於其他可變區序列，隨後使用重組DNA技術使經改變之CDR返回可變區。一旦產生並表現此等變體抗體，使該組變體進行本文所述之篩選，可選擇在一或多種相關分析中具有優異特性之抗體用於進一步研發。
如本文所述，除本文特別闡述之抗體外，其他經「實質上同源」修飾之抗體可輕易地利用熟習此項技術者所熟知之多種重組DNA技術來設計及製造。例如，可藉由數種胺基酸取代、末端及中間添加及缺失、及諸如此類，使框架區在主結構層面上不同於原始序列。而且，可單獨或組合使用多種不同人類框架區作為本發明人類化免疫球蛋白之基礎。通常而言，基因修飾可藉由多種熟知技術諸如定點誘變輕易地達成。
本發明包括胺基酸序列與所述全長抗TYRP1抗體之可變區或超變區胺基酸序列實質上相同之TYRP1結合多肽。實質上相同之胺基酸序列在本文中定義為與另一胺基酸序列具有至少70%、較佳至少80%、且更佳至少約90%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性之序列，如根據Pearson及Lipman(Proc. NatL. Acad. Sci. USA (1988)85:2444-8)藉由FASTA搜索方法所測定。
本發明抗體或其片段包括具有1個、2個、3個、4個、5個、及/或6個選自由表1中所述CDR之胺基酸序列組成之群的互補決定區(CDR)的人類抗體。
在另一實施例中，本發明抗體或其片段可具有下文所述之20D7或20D7S之重鏈可變區及/或20D7或20D7S之輕鏈可變區。20D7及20D7S係本發明之尤佳抗體。該等抗體具有人類VH及VL框架區(FR)以及人類CDR。
本發明包括編碼抗TYRP1抗體重鏈之核酸序列，其包含任一VH區或其一部分、或任一VH CDR，包括本文所揭示之其任何變體。本發明亦包括編碼抗TYRP1抗體輕鏈之核酸分子，其包含任一VL區或其一部分或任一VL CDR，包括本文所揭示之其任何變體。
本發明抗體之每一結構域可為具有重鏈或輕鏈可變結構域之完全抗體，或其可為天然存在結構域之功能等效物或突變體或衍生物、或(例如)在活體外使用例如闡述於WO 93/11236(Griffiths等人)中之一種技術所構建之合成結構域。例如，可將失去至少一種胺基酸之對應於抗體可變結構域之結構域連接在一起。亦包括在一種CDR序列內具有一或多種胺基酸取代、突變或缺失之抗體。重要特徵係每一結構域能夠與互補結構域結合形成抗原結合位點。因此，術語可變重鏈及輕鏈片段不應理解為排除對特異性無實質效應之變體，包括CDR變體。
本發明抗體可藉由熟習此項技術者所習知之方法來產生。該等方法包括Kohler及Milstein，Nature 256 :495-497(1975)及Campbell，Monoclonal Antibody Technology，The Production and Characterization of Rodent and Human Hybridomas，Burdon等人編輯，Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology，第13卷，Elsevier Science Publishers，Amsterdam(1985)所述之免疫學方法；以及Huse等人，Science 246 :1275-1281(1989)所述之重組DNA方法。
抗體片段可藉由裂解全抗體或藉由表現編碼該片段之DNA來產生。抗體片段可藉由Lamoyi等人，J. Immunol .Methods 56:235-243(1983)及Parham，J. Immunol. 131:2895-2902(1983)所述之方法來製備。該等片段可含有Fab片段或F(ab')2 片段中的一種或兩種。該等片段亦可含有單鏈片段可變區抗體，即scFv、雙特異性抗體、或其他抗體片段。產生該等功能等效物之方法揭示於PCT申請案WO 93/21319、歐洲專利申請案第239,400號；PCT申請案WO 89/09622；歐洲專利申請案第338,745號；及歐洲專利申請案第EP 332,424號中。
用於轉化載體及表現本發明抗體之較佳宿主細胞係哺乳動物細胞，例如，NSO細胞(非分泌型(0)小鼠骨髓瘤細胞)、293及CHO細胞及其他淋巴樣來源細胞系，例如淋巴瘤、骨髓瘤、或雜交瘤細胞。或者，可使用諸如酵母等其他真核宿主。
可藉由熟習此項技術者所習知之方法在含有可同化碳(碳水化合物，例如葡萄糖或乳糖)、氮(胺基酸、肽、蛋白質或其降解產物，例如蛋白腖、銨鹽或諸如此類)、及無機鹽(鈉、鉀、鎂及鈣之硫酸鹽、磷酸鹽及/或碳酸鹽)來源之液體培養基中培養經轉化宿主細胞。該培養基進一步含有(例如)生長促進物質，例如痕量元素，例如鐵、鋅、錳及諸如此類。
在期望於酵母中表現基因構建體之情形下，適宜用於酵母中之選擇基因係存在於酵母質粒YRp7中之trp1基因。Stinchcomb等人，Nature ，282:39(1979)；Kingsman等人，Gene ，7:141(1979)。trp 1基因可為缺乏在色胺酸中生長之能力之酵母突變體菌株(例如，ATCC第44076號或PEP4-1)提供選擇標記。Jones，Genetics ，85:12(1977)。隨後酵母宿主細胞基因組中trp1損傷的存在可提供有效環境以檢測不存在色胺酸時生長導致之轉化。類似地，Leu2缺陷型酵母菌株(ATCC 20,622或38,626)係藉由具有Leu2基因之已知質粒來補足。
本發明抗體可藉由熟習此項技術者所習知之任何方法來分離或純化，包括藉由硫酸銨或硫酸鈉沉澱繼之對水透析、離子交換層析、親和層析或免疫親和層析以及凝膠過濾或區帶電泳。純化本發明抗體之較佳方法係蛋白質-A親和層析。
編碼人類抗體之DNA可藉由重組編碼實質上或專一地衍生自對應人類抗體區之人類恆定區及可變區(除CDR外)的DNA與編碼衍生自人類之CDR的DNA來製備。
編碼抗體片段之DNA的適宜來源包括表現全長抗體之任何細胞，例如雜交瘤及脾細胞。該等片段本身可作為抗體等效物使用，或可如上所述重組成等效物。該部分中所述之DNA缺失及重組可藉由熟知方法來實施。如熟習此項技術者所習知，DNA之另一來源係抗體之噬菌體呈現文庫。本發明之例示性抗體係經由雜交瘤技術來製得。
另外，本發明提供含有先前所述與表現序列、啟動子及增強子序列可操作連接之聚核苷酸序列的表現載體。已研發出多種用於在諸如細菌等原核系統及包括但不限於酵母及哺乳動物細胞培養系統在內之真核系統中有效合成抗體多肽的表現載體。本發明載體可包含染色體、非染色體及合成DNA序列的區段。
可使用任何適宜表現載體。例如，原核選殖載體包括來自大腸桿菌之質粒，例如colE1 、pCR1 、pBR322 、pMB9 、pUC 、pKSM 、及RP4 。原核載體亦包括噬菌體DNA之衍生物(例如M13 )及其他絲狀單鏈DNA噬菌體。可在酵母中使用之載體的一個實例係2μ質粒。適於在哺乳動物細胞中表現之載體包括SV-40之熟知衍生物、腺病毒、逆轉錄病毒衍生DNA序列及衍生自功能哺乳動物載體組合之穿梭載體(例如彼等上文所述者)、及功能質粒及噬菌體DNA。
額外真核表現載體已為熟習此項技術者所習知(例如，P.J. Southern及P. Berg，J. Mol. Appl. Genet. 1 :327-341(1982)；Subramani等人，Mol. Cell. Biol. 1 :854-864(1981)；Kaufmann及Sharp，J. Mol. Biol. 159 :601-664(1982)；Scahill等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 0:4654-4659(1983)；及Urlaub及Chasin，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 :4216-4220(1980))。
可用於本發明之表現載體含有與擬表現DNA序列或片段可操作連接之至少一種表現控制序列。將控制序列插入或體中以控制及調節選殖DNA序列之表現。可用表現控制序列之實例係lac 系統、trp 系統、tac 系統、trc 系統、噬菌體λ之主要操縱基因及啟動子區域、fd外殼蛋白之控制區域、酵母之糖酵解啟動子，例如，3-磷酸甘油酸酯激酶之啟動子、酵母酸性磷酸酶之啟動子(例如，Pho5)、酵母α-交配因子之啟動子、及衍生自多瘤病毒、腺病毒、逆轉錄病毒、及猿猴病毒之啟動子，例如，早期及晚期啟動子或SV40、及已知可控制原核或真核細胞及其病毒或其組合之基因表現的其他序列。
本發明亦提供含有先前所述表現載體之重組宿主細胞。本發明抗體可在非雜交瘤細胞系中表現。可使用包含編碼本發明多肽之序列的核酸來轉化適宜哺乳動物宿主細胞。
基於高表現程度、所關注蛋白質之組成型表現及受宿主蛋白質最少污染來選擇尤佳之細胞系。可用作用於表現之宿主的哺乳動物細胞系已為熟習此項技術者所熟知且包括許多永生化細胞系，例如但不限於NSO細胞(非分泌型(0)小鼠骨髓瘤細胞)、小鼠骨髓瘤細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞及許多其他細胞。適宜額外真核細胞包括酵母及其他真菌。可用原核宿主包括例如大腸桿菌，例如大腸桿菌SG-936、大腸桿菌HB 101、大腸桿菌W3110、大腸桿菌X1776、大腸桿菌X2282、大腸桿菌DHI、及大腸桿菌MRCl、假單胞菌屬(Pseudomonas )、芽孢桿菌屬(Bacillus )(例如枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis ))、及鏈黴菌屬(Streptomyces )。
可使用該等本發明重組宿主細胞來產生抗體或其片段，此係藉由在容許抗體或其片段表現之條件下培養細胞並自宿主細胞或包圍宿主細胞之培養基純化抗體或其片段來實施。可藉由在所關注抗體編碼基因之5'端插入信號或分泌型前導肽編碼序列(參見，Shokri等人，(2003)Appl Microbiol Biotechnol. 60(6):654-64；Nielsen等人，Prot. Eng.(1997)10:1-6及von Heinje等人，(1986)Nucl. Acids Res. 14:4683-4690)來靶向擬在重組宿主細胞中分泌的所表現抗體或片段。該等分泌型前導肽元件可衍生自原核或真核序列。因此，可使用適宜分泌型前導肽，其為結合至多肽之N末端的胺基酸，用以引導多肽移動出宿主細胞胞質溶膠並分泌至培養基中。
可使本發明抗體與額外胺基酸殘基融合。該等胺基酸殘基可為肽標籤，其或許能促進分離。亦涵蓋使抗體尋靶特定器官或組織之其他胺基酸殘基。
用於製備抗體之本發明之另一實施例係在已插入人類抗體產生基因組之實質部分且在產生內源性抗體方面具有缺陷之轉基因動物中表現編碼本發明抗體之核酸。轉基因動物包括但不限於小鼠、山羊、及兔。本發明之又一實施例包括在例如泌乳期間分泌多肽之動物乳腺中表現抗體編碼基因。
本發明亦提供藉由向哺乳動物投與有效量之抗體來治療哺乳動物腫瘤生長的方法。擬根據本發明治療之適宜腫瘤較佳表現TYRP1。儘管不欲受限於任何特定機理，但本發明方法可治療癌細胞(包括惡性黑色素瘤)生長。在本發明上下文中，「治療(treatment或treat)」係指治療性治療，包括抑制、減緩、減輕潛在病狀或與疾病或病症有關之不期望生理變化或逆轉其進展、改善病狀之臨床症狀或預防出現病狀之臨床症狀。有益或期望臨床結果包括但不限於緩和症狀、降低疾病或病症之程度、穩定疾病或病症(即，疾病或病症不惡化)、延遲或減緩疾病或病症之進展、改善或減輕疾病或病症、及使疾病或病症好轉(部分或完全)，此等可檢測或不可檢測。「治療(treatment)」亦可意味著與預期未接受治療者之存活期相比存活期延長。彼等需要治療者包括彼等已患有疾病者。在一個實施例中，本發明可用作藥劑。
術語「黑色素瘤」包括但不限於黑色素瘤、轉移性黑色素瘤、衍生自黑色素細胞或黑色素細胞相關痣細胞之黑色素瘤、黑色素細胞癌、黑色素上皮瘤、黑色素肉瘤、原位黑色素瘤、淺表擴散性黑色素瘤、組合型黑色素瘤(modular melanoma)、惡性雀斑樣痣黑色素瘤、肢端著色斑性黑色素瘤、侵襲性黑色素瘤及家族性非典型胎塊及黑色素瘤(FAM-M)症候群。在本發明之一個實施例中，黑色素瘤係癌症之特定形式。在另一實施例中，黑色素瘤可為惡性的。如下文所述，本發明之一個實施例將使用當前闡述之抗TYRP1抗體來一線治療黑色素瘤。在另一實施例中，當前闡述之抗TYRP1抗體將一線治療轉移性黑色素瘤，即其將用於最近診斷之轉移性黑色素瘤之第一輪治療。
在本發明方法中，將治療有效量之本發明抗體投與至需要其之哺乳動物中。用於治療本文所述病症之本發明組合物之有效劑量端視許多不同因素而有所變化，包括投與手段、目標位點、患者之生理學狀態、患者是人類還是動物、投與之其他藥物、及治療是預防性的還是治療性的。本文所用之術語投與意指藉由可達成所尋求結果之任何方法將本發明抗體遞送至哺乳動物中。其可經例如靜脈內或肌內投與。儘管本發明之人類抗體尤其可用於投與給人類，但亦可將其投與給其他哺乳動物。本文所用之術語哺乳動物意欲包括(但不限於)人類、實驗室動物、馴養寵物及農場動物。治療有效量意指當將本發明抗體投與給哺乳動物時其可有效產生期望治療效應(例如，抑制腫瘤生長)的量。治療劑量可使用彼等熟習此項技術者所習知之常規方法來滴定量測以使安全性及功效最優化。
本發明之醫藥組合物可包括「治療有效量」之本發明抗TYRP1抗體。「治療有效量」係指在所需時間段內以所需劑量有效達成期望治療效應的量。抗體之治療有效量可根據下述因素而有所變化：例如疾病狀態、年齡、性別、及個體體重、以及抗體或抗體部分於該個體內引發期望應答之能力。治療有效量亦為其中抗體或抗體部分之治療有益效應勝過其任何毒性或有害效應的量。可對劑量方案加以調節以提供最佳期望應答(例如，治療性或預防性應答)。
該疾病之確定在熟習此項技術者之能力及知識範圍內。例如，患有惡性黑色素瘤或具有發生臨床明顯症狀風險之人類個體適於投與本發明之抗TYRP1抗體。
將本發明抗TYRP1抗體以足以抑制或減少腫瘤或病理學病狀進展的量投與給患有惡性黑色素瘤之患者來實施治療性治療。進展包括(例如)腫瘤或病理學病狀之生長、侵襲力、轉移及/或復發。足以達成此目的之量定義為治療有效劑量。對此用途有效之量將端視疾病之嚴重程度及患者自身免疫系統之總體狀態而定。投藥方案亦隨疾病狀態及患者狀況而有所變化，且通常自單次濃注劑量或連續輸注至每天多次投與(例如，每4-6小時一次)變化，或如治療醫師及患者病狀所指示。本發明抗體之治療有效量之例示性非限制性範圍係0.1-50mg/kg，更佳為3-35mg/kg，且更佳為5-20mg/kg。投藥量及頻率將由治療患者之醫師來確定且可包括每天一次、每週三次、每週一次、每兩週一次、或更為不經常地給與自小於1mg/kg至大於100mg/kg之劑量。每次投與之劑量可介於1-100、2-75、或5-60mg/kg範圍內。然而，應注意，本發明不應限於任何特定劑量。
在本發明之一實施例中，可將抗TYRP1抗體與一或多種其他抗腫瘤劑組合投與。可使用任何適宜抗腫瘤劑，例如化學治療劑、放射或其組合。抗腫瘤劑可為烷基化劑或抗代謝物。烷基化劑之實例包括(但不限於)順鉑、環磷醯胺、美法侖(melphalan)、及達卡巴嗪(DTIC)。活體內研究表明，對於人類624mel異種移植物投與20D7與達卡巴嗪(DTIC)之組合展示與單一療法相比較強之抗腫瘤活性。在本發明之一個實施例中，當前闡述之抗TYRP1抗體係與達卡巴嗪組合給與。抗代謝物之實例包括(但不限於)多柔比星(doxorubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、紫杉醇(paclitaxel)、伊立替康(irinotecan)(CPT-11)、及托泊替康(topotecan)。當抗腫瘤劑係放射時，放射來源相對於所治療之患者可為外部的(外部射線束放射療法-EBRT)或內部的(近距離放射療法-BT)。所投與抗腫瘤劑之劑量端視許多因素而定，包括例如藥劑類型、所治療腫瘤之類型及嚴重程度及藥劑之投與途徑。然而，應強調，本發明並不限於任何特定劑量。
在本發明中，可使用任何適宜方法或途徑來投與本發明之抗TYRP1抗體，且視情況共投與抗腫瘤劑及/或其他受體之拮抗劑。本發明使用之抗腫瘤劑方案包括咸信最佳適於治療患者腫瘤病狀之任何方案。不同惡性腫瘤可能需要使用特定抗腫瘤抗體及特定抗腫瘤劑，此應基於患者來確定。投與途徑包括例如經口、靜脈內、腹膜內、皮下、或肌內投與。非經腸途徑較佳。然而，應強調，本發明並不限於任何特定投與方法或途徑。
在本發明之另一態樣中，可以化學方式或生物合成方式將本發明之抗TYRP1抗體連接至一或多種抗腫瘤或抗血管生成劑上。
本發明進一步涵蓋在可檢測信號產生劑與抗體結合之診斷系統中連接至靶或報告分子部分之抗TYRP1抗體，靶或報告分子部分包括例如僅抗腫瘤劑、其他抗體或報告分子，例如經放射標記之同位素。
應瞭解，當本發明之抗TYRP1抗體在哺乳動物中使用以實施預防或治療時，其將以另外包含醫藥上可接受之載劑之組合物形式投與。適宜醫藥上可接受之載劑包括(例如)水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、右旋糖、甘油、乙醇及諸如此類中之一或多種、以及其組合。醫藥上可接受之載劑可進一步包含少量輔助物質，例如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩衝劑，此等輔助物質可延長結合蛋白質之存架壽命或提高其效力。如熟習此項技術者所熟知，注射組合物可經調配以在投與至哺乳動物後快速、持續或延遲釋放活性成份。
而且，本發明範圍亦包括本發明抗體在活體內及活體外用於研究或診斷方法之用途，此等方法已為熟習此項技術者所熟知。診斷方法包括含有本發明抗體之套組。
在一個實施例中，本發明係對TYRP1具有特異性之人類單株抗體或其片段。在另一實施例中，本發明係對TYRP1具有特異性之嵌合單株抗體或其片段。在另一實施例中，該抗體之CDR區與CTA99之CDR區相同。在一不同實施例中，該抗體之CDR區與20D7或20D7S之CDR區相同。
在一個實施例中，該抗體係以介於1.7x10-4 1/s(sec-1 ，1/秒)與5x10-4 1/s間之離解速率常數(Kd 或k off )結合TYRP1，此係藉由本文所述之表面電漿共振來量測。在另一實施例中，該抗體係以介於1.7x10-4 1/s與3.5x10-4 1/s間之Kd 或k off 結合TYRP1。在又一實施例中，該抗體係以藉由表面電漿共振量測為相同條件下測定之20D7、20D7S、或CTA99之離解速率常數之10%以內的離解速率常數結合TYRP1。
本發明之一個實施例包含對TYRP1具有特異性之單株抗體或其片段，其包含選自由表1及2中之互補決定區(CDR)組成之群的一或多個CDR。在另一實施例中，本發明係對TYRP1具有特異性之單株抗體或其片段，其具有序列為RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:4)之輕鏈CDR1區。在另一實施例中，本發明係對TYRP1具有特異性之單株抗體或其片段，其具有序列為RYSSSWYLDY(SEQ ID NO:3)之重鏈CDR3。在一不同實施例中，本發明係包含以下之單株抗體或其片段：(i)選自由20D7、20D7S及CTA99組成之群之輕鏈可變區及(ii)選自由20D7、20D7S及CTA99組成之群之重鏈可變區。在另一實施例中，本發明係對TYRP1具有特異性之單株抗體或其片段，其包含(i)CTA99之輕鏈可變區、(ii)CTA99之重鏈可變區、及(iii)人類免疫球蛋白G1 (hIgG1 )恆定區。
本發明之另一實施例係一種治療哺乳動物癌症之方法，其包含向該哺乳動物投與有效量之先前所述任何實施例之抗體或其片段。本發明亦提供一種治療惡性黑色素瘤之方法。本發明提供之另一治療方法組合使用本發明之抗體或其片段與投與另一抗癌劑或治療。在一種治療方法中，抗癌劑係達卡巴嗪(DTIC)。
應瞭解且預期，熟習此項技術者可對本文所揭示之本發明原理作出改變且該等修飾意欲包括在本發明範圍內。
本文所提及之所有參考文獻之全部內容皆併入本文中。
實例
以下實例進一步闡釋本發明，但不應理解為以任何方式限制其範圍。然而，其決不應理解為限制本發明之寬廣範圍。習知方法例如用於構建載體及質粒、將編碼多肽之基因插入該等載體及質粒中、將質粒引入宿主細胞中、及表現及測定基因及基因產物者之詳細說明可獲自許多刊物，包括Sambrook,J.等人，(1989)Molecular Cloning:A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Labora-tory Press。
動物及細胞系
將SKmel28、SKmel23、624mel、1102mel及A375保持在含有10%熱不活化胎牛血清(HyClone Laboratories,Logan,UT)之RPMI 1640(Invitrogen Life Technologies)中並常規測試黴漿菌屬(Mycoplasma)污染。SKmel23及Skmel28係由Dr. Alan Houghton(Memorial Sloan-Kettering Cancer Center,New York,NY)提供。624mel及1102mel係自Dr.Steve Rosenberg(National Cancer Institute,Bethesda,MD)獲得。A375係自美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection)(Manassas,V A)購得。6-8週齡之雌性Nu/Nu小鼠係自Taconic Farms(Germantown,NY)購得。
人類及嵌合抗TYRP1抗體之表現及純化
對於每一抗體，藉由諸如PCR選殖等適宜方法將適宜重鏈核苷酸序列、例如SEQ ID NO 21、22或23(分別對於20D7、20D7S及CTA99)設計於適宜表現質粒(例如pGSHC)中，並將適宜輕鏈核苷酸序列、例如SEQ ID No. 26或27(分別對於20D7/20D7S及CTA99)設計於適宜表現質粒(例如pGSLC)中。為建立穩定細胞系，在諸如NSO細胞等適宜宿主細胞系中藉由電穿孔與線性化重鏈及輕鏈質粒共轉染，並在適宜培養基中進行培養，適宜培養基係例如不含麩胺醯胺之含有經透析胎牛血清及麩胺醯胺合成酶補充物之杜貝克改良鷹氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)。藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)針對抗體表現來篩選純系並選擇出最高生產者在旋轉燒瓶中實施培養。藉由諸如蛋白質-A親和層析等適宜方法來純化抗體。
本發明之一個實施例係重組人類單株抗體20D7，其為靶向表現酪胺酸酶相關蛋白-1(TYRP1或TRP1)之細胞表面的全長IgG1κ。該抗體係由人類γ-1重鏈(HC)(亞型I)及人類κ輕鏈(亞型III)構成。已顯示，20D7在異種移植物模型中藉由涉及免疫效應子功能激活之機理以高親和力及中等強效抗腫瘤活性選擇性結合人類TYRP1。
本發明之一個實施例係重組人類單株抗體20D7S，其為靶向表現酪胺酸酶相關蛋白-1(TYRP1或TRP1)之細胞表面的全長IgG1κ。該抗體係由人類γ-1重鏈(HC)(亞型I)及人類κ輕鏈(亞型III)構成。20D7S係在努力產生甚至更穩定之分子中產生；藉由定點誘變將重鏈可變區中之游離半胱胺酸殘基(C47)轉化成絲胺酸殘基。該未成對或游離半胱胺酸可能與參與重鏈及輕鏈多肽之鏈內及鏈間二硫鍵之其他半胱胺酸錯配。錯配可能導致不適當折疊及加工，增加產物異質性並可能影響其穩定性。本文所述之SDS PAGE凝膠分析證實，在20D7製品中存在游離輕鏈及游離重鏈，但在20D7S製品中游離輕鏈及游離重鏈之存在被減少或消除。
本發明之另一實施例係CTA99，其為具有人類恆定區之嵌合抗體。鼠科動物抗體TA99(美國專利第4,798,790號)含有兩條輕鏈；一條TA99輕鏈對TYRP1具有特異性且另一條係來自親代小鼠骨髓瘤細胞。由於受污染之輕鏈不能結合TYRP1，其活性降低。對CTA99實施構建以補救此缺點並由此改良活性。在本發明之一個實施例中，CTA99經設計具有兩條相同重鏈及兩條相同輕鏈。本文所述之研究闡釋CTA99具有增加之活性及結合親和力、以及更適於人類之效應子功能。
表1及2提供本發明多種CDR之胺基酸序列及SEQ ID NO。表3提供與本發明相關之多種序列的SEQ ID NO。編碼下文所揭示胺基酸序列之聚核酸序列亦包括在本發明範圍內。
表4係下文實驗中之數據的概述。
競爭酶聯免疫吸附分析(ELISA)
在4℃下用重組人類TYRP(0.5μg/mLx50μL)將falcon撓性96孔平底板塗敷過夜。第二天，在室溫下用存於含有0.1% Tween-20之PBS中的5% FBS將該板阻斷2h。添加存於100μL樣品中之不同量抗體。用PBS/Tween洗滌該板3次並向該板中添加100μL偶合辣根過氧化物酶之山羊抗人類抗體(Biosource,Camarillo,CA)(以1:5000稀釋於100μL中)並在室溫(20-25℃)下培育1小時。洗滌該板3次並向該板中添加50μL/孔3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB;KPL,Gaithersburg,MD)受質。使用微量板讀數器(例如Molecular Devices)在450nm下讀取該等板。
半數最小效應濃度(EC50 )係以莫耳(Molar)(M)來量測。在ELISA分析中包括人類20D7、人類20D7S及CTA99在內之抗體呈現與人類TYRP1特異性結合。
流式細胞術
在冰上用存於1% BSA/PBS中之5μg/mL人類IgG或抗TYRP1 MAb處理624mel細胞1小時。在1% BSA/PBS中洗滌細胞3次並與經異硫氰酸螢光素(FITC)標記之山羊抗人類IgG一起培育1小時。洗滌細胞並藉由諸如Epics XL流式細胞儀(Coulter)等適宜流式細胞儀進行分析。流式細胞術分析顯示，與對照人類IgG1 相比，本文例示之20D7S抗體呈現與在人類細胞系SKmel28及SKmel23中表現之天然TYRP1結合。類似地，流式細胞術分析顯示，與對照人類IgG1 相比，本文例示之CTA99及20D7抗體呈現與在人類細胞系624mel中表現之天然TYRP1結合。
表面電漿共振/Biacore分析
使用諸如Biacore生物感測器(Pharmacia)等表面電漿共振來量測抗體與重組人類TYRP1之結合動力學。將TYRP1蛋白質固定至CM5研究級感測晶片上並注射自0.5nM至100nM不等濃度之抗體。獲取每一濃度之感測圖譜並使用BIA Evaluations 3.2程式實施評價以測定速率常數k on 及k off 。Kd 亦稱為k off ，其為離解反應速率常數。Ka 亦稱為k on ，其為締合反應速率常數。KD 係結合親和力之量度；自以莫耳(Molar)(M)量測之速率常數比k off /k on 來計算KD 。本文例示抗體TA99、CTA99、20D7、及20D7S之Ka 、Kd 及KD 概述於下文表6中。
20D7及20D7S與人類TYRP1結合之Biacore分析揭示相當大的特異性結合親和力；因此，20D7及20D7S係治療性抗體之有效候選者。
補體依賴性細胞毒性(CDC)分析
洗滌人類黑色素瘤細胞系624mel 3次並使濃度為每毫升適宜培養基(例如AIM V培養基(Invitrogen Life Technologies))106 個存活細胞。將100微升細胞鋪板於96孔圓底Falcon板中並與自3.7μg/mL開始以1:3稀釋之MAb 20D7或hIgG(Jackson Immunoresearch,West Grove,PA)一起在37℃下培育1hr。以50μl/孔添加以1:5稀釋於AIM V中之低-Tox-M兔補體(Cedarlane Labs,Westbury,NY)並在37℃下培育1hr。使用錐蟲藍(Invitrogen Life Technologies)來計數存活細胞。
表7顯示CDC分析中不同抗體濃度下之細胞毒性百分比。數據展示，20D7及CTA99抗體可在活體外誘導對抗TYRP1(+)人類624mel細胞之CDC。20D7觸發624mel細胞之劑量依賴性補體調介之細胞溶解，在該分析中抗體濃度為3.7μg/mL時可達成完全細胞溶解。因此，20D7及CTA99之CDC具有強免疫效應應答。%特異性溶解=測試%細胞毒性-陰性對照%細胞毒性。
活體外對抗人類黑色素瘤之抗體依賴性細胞毒性(ADCC)
收集624mel細胞並用諸如AIM V培養基(Invitrogen Life Technologies)等適宜培養基進行洗滌並將100μL體積該等細胞以10,000個細胞/孔密度鋪板於96孔Falcon U形底板中。添加50μL體積之5μg/mL抗體並在37℃下與靶細胞一起培育0.5hr。以不同E:T(效應子：靶)比添加50μL體積之效應細胞。將板在37℃下再培育4hr。培育後，將板在800g下離心，並將100μL上清液輕輕轉移至96孔平底板中。按照製造商(Roche)說明添加乳酸脫氫酶分析試劑並在490nm下讀取板。分析中之對照：靶自發值及靶最大值(藉由添加50μL 4%曲利通(triton))。
溶解依賴於效應子與靶濃度之比，在E:T比為100:1下50%之靶細胞發生溶解。固定濃度(5μg/mL)下，20D7及CTA99可激活624mel細胞溶解。表8顯示在ADCC分析中於存在多種效應細胞與腫瘤細胞比(E:T比)下之細胞毒性百分比。20D7S、20D7及CTA99抗體可在活體外誘導對抗TYRP1(+)人類624mel細胞之ADCC。20D7S、20D7及CTA99之ADCC具有強免疫效應應答。
%細胞毒性=(實驗值-靶自發值)/(靶最大值-靶自發值)X 100
20D7S及20D7穩定性分析
將20D7及20D7S裝載至SDS-PAGE凝膠(十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳)上。使用BioRad裝置實施凝膠電泳，直至溴酚藍染料恰好離開。使用考馬斯染料使分離之蛋白質顯色。
在SDS PAGE分析中，更穩定分子認定為單帶形式，即便有亦含有很少游離輕鏈及/或重鏈；存在游離輕鏈及游離重鏈係較不穩定分子之根據。20D7之SDS PAGE凝膠顯示存在明顯游離輕鏈及重鏈。20D7S之SDS PAGE凝膠顯示非常少游離輕鏈及重鏈。因此，20D7S係比20D7更為穩定之IgGl分子。
CTA99及20D7可有效治療人類黑色素瘤異種移植物
對於以下皮下研究，藉由下式來計算腫瘤體積：[π/6(W1xW2xW2)]，其中W1代表最大腫瘤直徑且W2代表最小腫瘤直徑。%T/C=100 x(治療體積/起始體積)/(對照體積/起始體積)。使用傳統p值技術來實施統計學分析。對於皮下研究，基於接受抗TYPR抗體之動物的腫瘤體積相對於對照動物之腫瘤體積來計算p值。
對於以下轉移研究，藉由計數肺表面小結來量測腫瘤抑制。%抑制=100 x(對照小結#-治療小結#)/(對照小結#)。使用傳統p值技術來實施統計學分析。對於轉移研究，基於接受抗TYPR抗體之動物中觀察到之小結相對於對照動物中觀察到之小結來計算p值。
抗TYRP1抗體對人類黑色素瘤異種移植物模型之活體內單一藥劑活性
收穫、洗滌624mel經培養細胞並將其再懸浮於基質膠(Matrigel)與RPMI 1640培養基(10%熱不活化FBS)之50/50溶液中。對於皮下腫瘤模型，將2x106 個細胞經皮下注射至裸小鼠之左側腹中。當腫瘤達到200mm3 時，用抗TYRP1抗體或對照人類IgG治療小鼠；每週投與三次抗體(1mg/小鼠)。每週用卡尺量測兩次腫瘤並計算% T/C。
對於抗TYRP1抗體對人類黑色素瘤異種移植物模型之活體內單一藥劑活性，藉由20D7治療來抑制SKmel28異種移植物之生長，與人類IgG對照進行比較(T/C=51%；P =0.01，在第43天)。亦顯示，20D7治療可顯著抑制建立之624mel腫瘤。腫瘤生長受到抑制且在開始抗體治療後第16天達到統計學顯著(T/C=44%；P =0.01)。亦評價額外人類黑色素瘤異種移植物之20D7抗腫瘤活性。已顯示，在抗體治療後11天單一藥劑20D7可顯著抑制細胞系A375及1102mel(對於A375及1102mel分別為T/C=42%；P =0.01及T/C=43%；P =0.004)。20D7容易與小鼠TYRP1交叉反應。然而，在用20D7治療之任何動物中皆未發現明顯毒性。相對於人類IgG對照治療之小鼠，在20D7治療之動物中體重及總體外觀無顯著差異。
抗TYRP1抗體對人類黑色素瘤異種移植物模型之活體內單一藥劑劑量應答活性
將Skmel28細胞混合於基質膠與RPMI 1640培養基(10%熱不活化FBS)之50/50溶液中。將2 x 106 個細胞經皮下注射至裸小鼠之左側腹中。當腫瘤達到200mm3 時，用抗TYRP1抗體(6mg/kg、20mg/kg、或60mg/kg)或對照人類IgG每週三次治療小鼠。每週用卡尺量測兩次腫瘤並計算% T/C。
20D7對SKmel28異種移植物之劑量應答研究表明劑量依賴性抗腫瘤應答。即使在6mg/kg劑量下，20D7亦顯著抑制腫瘤(T/C=69%；P<0.0001)。每一劑量下之抗腫瘤效應皆具有統計學顯著性：6mg/kg及20mg/kg(T/C=50%；P=0.04)、6mg/kg及60mg/kg(T/C=19%；P<0.003)。
在兩種轉移性黑色素瘤模型中抗TYRP1抗體之活體內單一藥劑活性
B16BL6係侵襲性且自發出現之鼠科動物黑色素瘤。其在靜脈內投與後於裸小鼠中形成肺轉移灶。收穫、洗滌經培養之SKme123及B16BL6細胞黑色素瘤細胞並再懸浮於RPMI 1640培養基(10%熱不活化FBS)中。
模型1：經靜脈內注射1x105 個B16BL6細胞。在腫瘤注射後第2天，給小鼠投與三種不同劑量濃度(200μg/小鼠、500μg/小鼠、及1mg/小鼠)之抗TYRP1抗體或對照人類IgG。在第20天屠宰小鼠，取出肺，計數肺表面小結並計算抑制百分比。
在人類IgG治療之小鼠中在肺表面上檢測到大量轉移灶；在20D7治療之動物中觀察到顯著較少的轉移灶。所有三種濃度之20D7皆降低肺轉移灶的量(抑制分別為65%、74%、及95%)。
模型2：經靜脈內注射1x105 個人類SKme123細胞。在腫瘤注射後第2天，給小鼠投與兩種不同劑量濃度(200μg/小鼠及500μg/小鼠)之抗TYRP1抗體或對照人類IgG。在第20天屠宰小鼠，取出肺，計數肺表面小結並計算抑制百分比。
用200μg/劑量及500μg/劑量之20D7或CTA99實施治療可顯著減少轉移性小結。20D7分別使轉移降低58%及73%。CTA99分別使轉移降低63%及75%。該等結果展示，在兩種單獨模型中，20D7及CTA99可抑制黑色素瘤轉移。
在皮下異種移植物及人類黑色素瘤轉移模型中20D7及20D7S抑制腫瘤生長之活體內比較研究
對於皮下腫瘤模型，收穫、洗滌624mel經培養細胞並再懸浮於基質膠與RPMI 1640培養基(10%熱不活化FBS)之50/50溶液中，隨後將2x106 個624mel細胞經皮下注射至裸小鼠之左側腹中。當腫瘤達到200mm3 時，每週兩次用20D7或20D7S以40mg/kg治療小鼠。每週用卡尺量測兩次腫瘤並計算% T/C。在624mel皮下異種移植物模型中，20D7抑制腫瘤生長，T/C=21%且對於20D7S，T/C=25%。20D7及20D7S二者均可在異種移植物模型中抑制腫瘤生長。
對於轉移模型，收穫、洗滌888mel經培養細胞並再懸浮於RPMI 1640培養基(10%熱不活化FBS)中，經靜脈內注射888mel細胞。在腫瘤注射後第2天，給小鼠投與抗TYRP1抗體或對照人類IgG。在第20天屠宰小鼠，取出肺，計數肺表面小結並計算抑制百分比。在裸小鼠之888mel轉移模型中，20D7及20D7S二者均顯著抑制肺表面轉移：20D7抑制=77%，p=0.0005；20D7S抑制=80%，p=0.0005。20D7及20D7S二者均降低轉移模型中之黑色素瘤轉移。
與單一療法相比20D7與達卡巴嗪(DTIC)組合治療展示較強之對人類異種移植物之抗腫瘤活性
對於皮下模型，收穫、洗滌經培養624mel細胞並將其再懸浮於基質膠與RPMI 1640培養基(10%熱不活化FBS)之50/50溶液中。將2x106 個624mel細胞注射至裸小鼠之左側腹中。當腫瘤達到200mm3 時，用抗TYRP1抗體或DTIC治療小鼠。每週投與一次40mg/kg抗體。每週投與一次5mg/kg DTIC。每週用卡尺量測兩次腫瘤並計算% T/C。對於轉移模型，收穫，洗滌經培養之SKmel23、888mel及B16黑色素瘤細胞並再懸浮於RPMI 1640培養基(10%熱不活化FBS)中。經靜脈內注射SKmel23、888mel及B16黑色素瘤細胞。在腫瘤注射後第2天，給小鼠投與抗TYRP1抗體或對照人類IgG。在第20天屠宰小鼠，取出肺，計數肺表面小結並計算抑制百分比。
20D7與DTIC組合治療顯著抑制腫瘤生長，其優於單獨20D7(p<0.001)或DTIC(p<0.001)。
表9概述20D7S在4種模型中之活體內抗腫瘤活性。20D7之活體內抗腫瘤活性在轉移模型中係藉由百分比抑制來顯示(*表示統計學顯著；ND表示未檢測到)。20D7之活體內抗腫瘤活性在皮下模型中係藉由百分比T/C來顯示。用20D7與達卡巴嗪(DTIC)組合治療展示與單一療法相比較強之抗腫瘤活性。

Claims (16)

  1. 一種特異性結合人類TYRP1(SEQ ID NO：28)之單株抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其包含胺基酸序列：QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTSYAMNWVRQAPGQGLESMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSMDTSVSTAYLQISSLKAEDTAIYYCAPRYSSSWYLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)；CDRL1，其具有序列RASQSVSSYLA(SEQ ID NO：4)；CDRL2，其具有序列DASNRAT(SEQ ID NO：5)；及CDRL3，其具有序列QQRSNWLMYT(SEQ ID NO：6)。
  2. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其包含VL，其包含胺基酸序列：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWLMYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：16)；及VH，其包含胺基酸序列：QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTSYAMNWVRQAPGQGLESMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSMDTSVSTAYLQISSLKAEDTAIYYCAPRYSSSWYLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)。
  3. 如請求項1或2之抗體或其抗原結合片段，其包含人類恆定區。
  4. 如請求項1或2之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈恆定區係人類IgG1或其衍生物。
  5. 如請求項1或2之抗體或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO：30之重鏈及SEQ ID NO：32之輕鏈。
  6. 如請求項5之抗體或其抗原結合片段，其包含兩條SEQ ID NO：30之重鏈及兩條SEQ ID NO：32之輕鏈。
  7. 一種如請求項1至6中任一項之抗體之抗原結合片段，該片段特異性結合人類TYRP1(SEQ ID NO：28)。
  8. 一種分離之聚核酸，其包含編碼如請求項1至6中任一項之抗體或如請求項7之抗原結合片段的核苷酸序列。
  9. 一種表現載體，其包含如請求項8之聚核酸，其可操作地連接於表現控制元件，由此可表現所編碼之抗體或抗原結合片段。
  10. 一種重組細胞，其包含如請求項9之表現載體，該重組細胞能夠產生如請求項1至6中任一項之抗體或如請求項7之抗原結合片段。
  11. 一種抗體或抗原結合片段，其係由培養如請求項10之重組細胞使其產生該抗體或抗原結合片段，並將由此產生的抗體或抗原結合片段自培養物回收而製得。
  12. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至6中任一項之抗體或如請求項7之抗原結合片段及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  13. 一種如請求項1至6中任一項之抗體或如請求項7之抗原結合片段之用途，其係用於製備治療癌症之醫藥品。
  14. 如請求項13之用途，其中該癌症係惡性黑色素瘤。
  15. 如請求項13或14之用途，其中該醫藥品係與另一種抗腫瘤劑或抗腫瘤治療併用。
  16. 如請求項15之用途，其中該抗腫瘤劑係達卡巴嗪(dacarbazine)。
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5512514B2 (ja) * 2007-06-29 2014-06-04 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 改善された免疫グロブリンの産生をもたらす重鎖変異体
MX2016010177A (es) 2014-02-07 2017-01-09 Dong Wha Pharm Co Ltd Composicion adyuvante anticancerosa que contiene promotor de la expresion de rip3 como principio activo, metodo para la deteccion de adyuvante anticanceroso que potencia la sensibilidad al farmaco anticanceroso mediante la estimulacion de la expresion de rip3 y metodo para controlar la sensibilidad del farmaco anticanceroso.
DK3233907T3 (da) 2014-12-19 2021-06-07 Genmab As Bispecifikke heterodimeriske proteiner hos gnavere
RU2630647C1 (ru) * 2016-05-27 2017-09-11 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства ГУМАНИЗИРОВАННОЕ АНТИТЕЛО К КОНФОРМАЦИОННОМУ ЭПИТОПУ С3 КОМПОНЕНТА КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА, ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК (ВАРИАНТЫ), ЭКСПРЕССИОННЫЙ ВЕКТОР, СОДЕРЖАЩИЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК (ВАРИАНТЫ), И ШТАММ КЛЕТОК ЯИЧНИКОВ КИТАЙСКОГО ХОМЯЧКА CHO-humC34-ПРОДУЦЕНТ ДАННОГО ГУМАНИЗИРОВАННОГО АНТИТЕЛА
GB201613167D0 (en) 2016-07-29 2016-09-14 Univ Southampton Cancer and b-cell related disease therapy
WO2018075586A1 (en) * 2016-10-18 2018-04-26 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antigen-binding proteins targeting melanoma differentiation antigens and uses thereof
WO2018229530A1 (en) * 2017-06-14 2018-12-20 Adicet Bio Inc. Antibodies capable of binding hla-a2/tyrd in an hla restricted manner and uses thereof
RU2687609C1 (ru) * 2018-05-30 2019-05-15 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства Гуманизированное антитело к конформационному эпитопу сз компонента комплемента человека
JP7458382B2 (ja) 2018-09-27 2024-03-29 オートラス リミテッド キメラ抗原受容体
US20220119545A1 (en) * 2018-11-09 2022-04-21 Beth Israel Deaconess Medical Center Cdcp1-targeted therapies
KR20220077127A (ko) * 2019-09-06 2022-06-08 더 리전츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 암 치료를 위한 키메라 항원 수용체 및 관련 방법 및 조성물
WO2023094569A1 (en) * 2021-11-26 2023-06-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of anti-tyrp1/anti-cd3 bispecific antibodies and tyrp1-specific antibodies

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4798790A (en) 1985-07-18 1989-01-17 Sloan-Kettering Institute Monoclonal antibody specific for a pigmentation associated antigen
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
ATE243754T1 (de) 1987-05-21 2003-07-15 Micromet Ag Multifunktionelle proteine mit vorbestimmter zielsetzung
IL89489A0 (en) 1988-03-09 1989-09-10 Hybritech Inc Chimeric antibodies directed against human carcinoembryonic antigen
WO1989009622A1 (en) 1988-04-15 1989-10-19 Protein Design Labs, Inc. Il-2 receptor-specific chimeric antibodies
WO1989009825A1 (en) 1988-04-16 1989-10-19 Celltech Limited Method for producing recombinant dna proteins
IE20000918A1 (en) 1990-03-22 2001-05-30 Sloan Kettering Inst Cancer GP75 As a Tumor Vaccine for Melanoma
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
AU4025193A (en) 1992-04-08 1993-11-18 Cetus Oncology Corporation Humanized C-erbB-2 specific antibodies
WO1996040249A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Therapeutic uses of ta99
US5840839A (en) 1996-02-09 1998-11-24 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Alternative open reading frame DNA of a normal gene and a novel human cancer antigen encoded therein
WO2001087925A2 (en) * 2000-05-16 2001-11-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for refolding proteins containing free cysteine residues
JP2001526021A (ja) * 1997-11-14 2001-12-18 ユーロ−セルティーク，エス．エイ． 合成の可変領域と改変された特異性を有する免疫グロブリン分子
JP5553963B2 (ja) * 2004-10-22 2014-07-23 アムジエン・インコーポレーテツド 組換え抗体をリフォールディングする方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
2002年02月，Metastatic melanoma: Chemotherapy to Biochemotherapy，O’DAY Steve J et al，cancer control 2002 JAN-FEB 9(1)31-38 *
2006年02月01日，The high-affinity IgG receptor, FcgammaRI, plays a central role in antibody therapy of experimental melanoma，Lisette Bevaart et al，Cancer Res. 2006 Feb 1 66(3):1261-4. *
2007年01月01日，Generation and characterization of a therapeutic human antibody to melanoma antigen TYRP1，HUMAN ANTIBODY，PATEL DIPA et al，Hum Antibodies. 2007;16(3-4):127-36. *

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