TWI375554B

TWI375554B -

Info

Publication number: TWI375554B
Application number: TW96108155A
Authority: TW
Inventors: Yuuzou Tsuchida; Kotarou Tsuchida; Kunitomo Watanabe; Daisuke Sakurai; Mamoru Koketsu; Mitsuo Kawabe; Teruo Utsumi
Original assignee: Yuuzou Tsuchida
Priority date: 2006-03-10
Filing date: 2007-03-09
Publication date: 2012-11-01
Also published as: US20090012128A1; EP1994928A8; TW200800140A; KR20110069158A; KR20080103090A; RU2414818C2; EP1994928A4; EP2279662A2; US20100190846A1; WO2007105581A1; EP1994928A1; EP2279662A3; HK1133381A1; CN101442996A; KR101159699B1; RU2008136887A; CN101442996B; JPWO2007105581A1

Description

1375554 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明乃有關抗微生物劑及抗微生物性組成物。【先前技術】自古已知矮竹萃取物（sasa extract)具有抗菌性。例如據報告（參照專利文獻卜專利文獻2)指出對於引起創傷感染症之病原菌之金黃葡萄球菌（Staphyl〇c〇ccus 另 aureus)、％膿菌（pseud〇monas aeruginosa)、大腸桿菌 (Escherichia c〇li)具有抗菌效果，或對於胃潰瘍之病原菌之幽門螺旋菌（Hei ic〇bacter pylori)具有抗菌效果。' 白邊山白竹（學名為 Sasa albo marginato Makino et

Shibata，日稱隈笹）乃屬於禾本科山白竹屬之植物，一到冬天，葉綠白枯成邊者之總稱，現在由人為推廣，幾乎曰本全國可見其栽培，白邊山白竹和一般生長於山中之曰本山白竹（Kumasasa，日稱熊笹）有所不同。自古已知白邊山白竹之效用甚廣，可和中醫學上之中藥方中之印度產之森林匙#藤（Gymnema sy丨vestre)，中國產之番石榴（psidium guajava)及韓國產之枸把 barbarura)齊名並稱。在日本做為胃病、糖尿病、高血昼等之傳統民間藥方而利用（參照非專利文獻1至3)。另外，也做為竹丸子或竹訂等供食品包裝材料或保健強利用。 -次大戰後’根據動物實驗發現白邊山白竹對於老氣之肝癌具有抑制活性，其抗癌活性 — 也在注也有右干樂理學研究報 5 ( 31908) 1375554 告（參照非專利文獻4)。另夕卜，對於白邊山白竹之優里防腐效果（參照非專利文獻5)，抗菌效果（參照非專文獻6) • ^有=究報告。然而，其多數僅屬於藉氣相層析法之有機酸成分之分析，而罕見對其抗菌性化合物有關之分離精製 - 研究報告。 ..—已知薰草酸（coumaric acid)及其衍生物對於大腸桿菌金汽葡萄球菌、綠膿菌具有抗菌性（參照專利文獻3)。另外，也已知山白竹萃取物中含有薰草酸、阿魏酸、咖啡酸、香草素等苯丙素（phenyl pr〇pan〇id)化合物、3 — 經基吡啶等，這些混合物對於大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿菌具有抗菌性（參照專利文獻4)。專利文獻 1 : W0 00/067707 專利文獻2 :日本特開2003-201247 專利文獻3 :日本特開2004-359626 專利文獻4 :日本特開2006-36731 • 非專利文獻1 :柴田丸、久保恭子、小野田真：日本 . 藥學會誌，98，1436 (1978)， . 非專利文獻 2 . S· Okabe，K. Takeuch, K. Takagi, M.

Shibata， Jpn. J. Pharmacol.， 25， 608 (1975)，非專利文獻3 :柴田丸、佐藤冬惠、竹下一夫、大谷孝吉：曰本生藥學會誌，34, 274 (1 980)，非專利文獻 4 . M. Shibata, K. Kubo，M. Onoda，Fol ia Pharmacol. Jpn, 72, 531-541 (1976) 非專利文獻 5 . N. V. Chuyen，T. Kurata., H. Kato, 6 319081 1375554 J. Antibact. Antifung. Agents, 11, 69-75 (1983) 非專利文獻 6 : N. V. Chuyen, H. Kato, Agric, Biol. Chem., 46, 2795-2801 (1982) 3-1128 (2004) 【發明内容】 ·' (發明擬解決之課題）- 本發明之目的在提供抗微生物劑。本發明之另一目的在提供含有抗微生物劑之抗微生物性組成物。 (解決課題之方法）本毛明提供下列所示之抗微生物劑及含有該抗微生勒劑之抗微生物性組成物。 ^ h以選自對-羥基苯甲醛、5,7,4，_三羥基一3，，5，_二甲 : 3‘羥基°比啶及香草素所構成組群之至少-種作马有效成分之抗微生物劑。 2. 士上述第1項所記載之抗微生物劑，1中，哕料婊物係選自鏈球菌屬、腸球〃中該微生沙門氏菌屬、耶爾森氏心球囷屬 '埃希氏菌屬、杯菌屬及假絲酵母相構成組群者。早_、牙抱 3. 以選自對-羥基笨甲醛甲氧基黃酮所構成組群之至+ 三歸-3，，5，-二物劑。 ^種作為有效成分之抗微生 4.如上述第3 物係選擇自鍵球菌屬、沙門氏菌屬、項所記载之抗屬、腸球菌屬耶爾森氏菌屬

微生物劑，H '葡萄球菌屬、埃希氏菌、弧菌屬、假單胞菌屬、 319081 7 1375554 芽孢桿菌屬及假絲酵母屬所構成組群者。 5. 如上述第1項所記載之抗微生物劑，其中，含有3-羥基吡啶作為有效成分，而該微生物係選自肺炎鏈球菌 (Sterptococcus pneumoniae)、釀膿鏈球菌 .'(Sterptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌 ^ (Staphy lococcus aureus)、小腸結腸炎耶爾森氏菌 (Yersinia enterocolitica)、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa)、以及假絲酵母屬（Candida sp.)所構成組群 •者。 6. 如上述第1項所記載之抗微生物劑，其中，含有對-羥基苯甲醛作為有效成分，而該微生物係選自肺炎鏈球菌 (Streptococcus pneumoniae)、釀膿鍵球菌 (Streptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌 (Staphy lococcus aureus)、大腸埃希氏菌（Escherichia col i)、沙門氏菌屬（Salmonel la sp.)、小腸結腸炎耶爾森 φ 氏菌（Yersinia enterocol i tica)、腸炎弧菌（Vibrio . parahaemolyticus) ' 綠膿桿菌（Pseudomonas .aeruginosa)、躐狀芽孢桿菌（Baci 1 lus cereus)、枯草芽孢桿菌（Baci 1 lus subti 1 is)，以及假絲酵母屬（Candida sp.)所構成組群者。 7. 如第1項所記載之抗微生物劑，其中，含有香草素為有效成分，該微生物係選自肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)、釀膿鏈球菌（Streptococcus py〇genes)、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、大腸埃希氏菌 8 31908] 1375554 (Escherichia col i)、沙門氏菌屬（Salmonella sp.)、小腸結膠炎耶爾森氏菌（Yersinia enterocol itica)、腸炎弧菌（Vibrio parahaemolyticus)、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus)、枯草芽抱桿菌（Baciiius subtil is)，以及假絲酵母屬（Candida sp.)所構成組群者。 8. 如第1項所記載之抗微生物劑，其中，含有5,乙4，一二羥基-3，5 -二甲氧基黃酮作為有效成分，而該微生物係選自汐門氏菌屬（Salmonel la sp·)以及綠膿桿菌 (Pseudomonas aeruginosa)所構成組群者。 9. 含有上述第i項至第8項中任意—項所記載之抗微生物劑而成之抗微生物性組成物。 > f發明中’微生物乃指細菌、放線菌、氰細菌、古細囷、囷類 '酵母、藻類 '病毒等’特別是對於包括人在内的動植物有不良影響者。 (發明之效果）菌屬物劑對於各種微生物，特別是對鍵球耶爾*氏二：葡词球囷屬、埃希氏菌屬、沙門氏菌屬、耶爾林氏囷屬、弧菌屬、假單胞、酵母屬等，更且娜_ 牙I桿菌屬、假絲 + ^ 對於肺炎鏈球菌、釀脗鰱Θ 腸球菌、金普色葡兹祎# ^ θ 张膿鏈球囷、荀词球囷、大腸埃希氏菌、沙門㈡展小H切爾錢8、腸纽g 囷屬桿菌、枯草芽抱桿菌、假絲酵母屬等=固、壞狀芽孢生物活性。囷種具有優異之抗微 [實施方式】 < s) 319081 1375554 (實施本發明之最佳途徑）本發明研究者探討白邊山白竹（日稱隈笹）之抗菌效果之本貝，為瞭解其抗菌有效成分，利用各種溶劑分離 (fracti0nati0n)白邊山白竹葉片之熱水萃取物。其次，使用矽膠層析法分離後，使用以TLC製備或HpLC裝置製備用 0DS管柱分離精製，再使用各種光譜法決定所分離化合物之構造，同時藉此就13種類之菌種進行抗苴社 :現上述對-經基笨以、5,7,4、三經基_3,5,_二；：：汽酮（下文中，或稱麥黃酮（tricin))及3_羥基吡啶、反式 :對-薰草酸（反式-對㈣肉桂酸）、香草素對於各種微生物頦不知兴性之抗微生物活性，而完成本發明。具體§兒明本發明如下·· 實驗材料使用從日本鳳凰堂公司取得之白邊山白竹 ΤΓ^’ ^ alb〇'marglnat〇)之熱水萃取物（商品名為 TWEBS) ’將該熱水萃取物（館去除溶劑，而得62g之(二?：：撕以蒸散器蒸 g α形物。據此，確認原料之白邊茱片之熱水萃取物含有38%之水分。酸乙= 取物藉由各種溶劑進行分離。即，用乙基X 物㈤進行萃取，將所得之乙酸乙醋層 ==而得乙酸乙醋可溶性區分(下文簡稱為丁二=、正丁醇萃取後進行同樣處理而綱、容性二:t s广水層。將經上述處理所得之乙酸乙醋可萃取物㈤，就金〜^ =生，水層及原料之熱水、ι色葡甸球囷分別進行抗菌試驗。抗菌

319081 10 Ϊ375554 武驗採用管碟法（CUp methQd)。上述管碟法乃首培養基之中心放置直徑7. 32mm之管碟，滴下囷牙— 碟使試料溶液以管碟中心、產生同心圓狀擴散。:如官作用就能形成抑制菌種繁殖之抑菌圈。：几囷囷，之大小有正相關存在’而為可藉抑菌圈之 t囷效果強弱之方法。各區分成分對於金黃色抗菌試驗之結果示於表1中。 ®’囷之表1 試驗區抑菌圈直徑（mm)

正丁醇可溶性區分 8. 37

_抗菌效果分別以++++示相當強，++示有，+示稍有、不無等符號為其判定標準。表j中之直徑。対…之7·32_為^ 丄由上述抗菌試驗之結果’可知乙酸乙醋可溶性區分』 :與白邊山白竹熱水萃取物母液幾乎相同之抗菌活性。; :方面’正丁醇可溶性區分及水層區分僅表現稍有抗菌$ 由上述抗g試驗結果，確認抗菌活性存在於乙酸乙到可溶性區分中’所以利用白邊山白竹之葉片熱水萃取物（S •3kg進行乙酸乙醋萃取操作。所得乙酸乙酷層經館除乙 319081 11 1375554 酸乙酯而得78g之乙酸乙酯可溶性區分^^丨）。所得之Sa-Ι確認其對於金黃色葡萄球菌之抗菌活性’結果顯示具有活性。 ' 對於金黃色葡萄球菌之抗菌活性具有抗菌活性成分之離析精製乙酸乙酯可溶性區分（Sa-ΐ)之離析將呈現抗菌活性之乙酸乙醋可溶性區分（Sa_1)52g使 “用中2膠層析法進行區分。分離管之洗提溶劑採用階梯性改變溶劑混合比率之逐級洗提方式（step meth〇d)。使用正己烷/乙酸乙酯為5 : 5者2. 5L，4 : 6、3 : 1=者|1L，以及僅用甲醇2.5L進行洗提。洗提成分 :1 =依據TLC之結果’各斑點之檢測使用紫外光254抓灯、、結果’將乙酸乙s旨可溶性區分離析為7個區分。 :亥二區分分別為 • g ^Sa-l-D(3.〇〇g).Sa-l-E(ll〇mg),Sa_1_F (1.56g)、Sa-卜G(30. 〇g)。之正=r，：(3.36g)於氣仿’加入和氯仿同量静置一仪。結果分離為2層，上層（下文中摇為 ―)及下層(下文中稱為S—)(二文二經餾除溶劑可得？ 99 c ; a ba 1 C(1)

Sa+c(1)之分析. +C(2)同樣處理可得L W。石夕膠声析法、^之娜於^{(1)2.2^中使吸附，再用 /〜增析法進行離析。式，所使劑採用逐級洗提方 '成為虱仿/丙酮為20:1者2L, 7: 3及6: 319081 12 1375554 /刀別為io〇mL，僅用丙酮者500mL。其回收係使用ιι〇 ΤΤΓ i〇mL合I之官形瓶。從110個之50mL管形瓶，依據入將在相同位置有斑點之No· 21及No. 22之管形瓶混 :辰縮而得濃縮物（下文中稱為Sa-l-C(l)-a)。溶解該濃縮物於0. 5mL之曱醇中，使用高效液體層析裝置（HpL& 之製備用0DS管柱進行離析。 N〇. 21及22之管形瓶濃縮物（Sa_卜c(1)_a)之HpLc製洗提條件：刀離官.和光 si 卜 II 5C18HG prep，0 20. 〇mmx25〇mm，移動層：20%乙腈水溶液，流速：5mL/min，分離管溫度：3(TC，檢測波長：紫外光260nm，衣備34. 5份之主要波峰，而得6〇mg之白色固體（下文中稱為 Sa-l_C(l)-aa)。該白色固體（Sa-l-C(l)-aa)使用重氫曱醇測定iH，uc NMR 譜。白色固體（Sa-l-C(l)-aa)之1H，UC NMR 譜

8·6 Hz, 1H), 7.42 (d, J 'H NMR (500 MHz, CD30D) δ 3.91 (s, 3H), 6.94 (d, = 8.6 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 9.74 (s, 1H) 192. 13C NMR (125 MHz, CD3 OD) ： 6 56.3, 111.2, 116.3, 127.9, 130.6, 149.6, 154 6 IR (KBr) ： 3179, 1668 cm*1 mp : 114-1151 4 NMR譜中，觀測到5 9.74處有！個氫原子之訊號， 1<5C NMR譜中，觀測到5 192. 8處有訊號而可知醛基之存在。又，4 NMR譜中，觀測到δ 3. 91之訊號，％ NMR譜 319081 13 1375554 十’觀測到（5 56. 3之訊號可知其曱氧基之存在。又ifj丽兄譜中，觀測到 d 6_94 (d，J = 8.6Hz，1H)及 5 7. 42 (d，

.J = 8. 6Hz，1H)，6 7· 43 (s，1H)處有 3 個氫原子，i3c NMR 譜中，觀測到5 111.2至154.6處有源自芳香族環之6個訊號。更在IR譜中，3179cm-1處確認羥基之特性吸收。由上述結果可知白色固體（Sa-1 -C(l )-aa)之構造可釐定為 3-羥基甲氧基苯甲醛（香草素）。香草素為已知化合物，鲁·可以和文獻值進行比較（The Aldrich Library of 13C and I FT _ Spectra 第 1 版，第 2 卷，Aldrich Chemical △司）。另外，可能還有異香草素之異構體存在，所以使用購侍之香草素，異香草素以HPLC之分析用〇DS管柱，和作為试樂之白色固體（Sa-;i-c(l)- aa)比較，釐定該白色固體 (Sa-1-C(l)-aa)確為香草素。其次，從110個50mL之管形瓶中將依據TLC，在相同 =置有斑點之No. 48至No. 55之管形瓶混合並濃縮而得濃籲‘物（下文中稱為再用石夕膠管柱層析 ‘法進行離析。該分離管之洗提溶劑採用I級洗提方式，從 •僅用2〇〇mL之氣仿開始，繼以氣仿/丙酮為9.5 : 0.5者 200mL ’ 9 . 1、8 · 2、7 : 3及僅用丙酮者各為i〇〇mL，最後僅用200mL之甲醇進行逐級洗提。其回收使用u個5〇此管形瓶。從42個50mL管形瓶中，將依據TLC，在相同位置有斑點之No· 23至33之管形瓶加以混合，經濃縮而得1〇2邶之/辰縮物（下文中’簡稱為Sa_卜c⑴_ba)。該濃缩物使用 319081 14 1375554 製備用TLC精製。展μ田、六今丨a 展開用，谷劑使用氣仿/丙酮=7/3。檢測使用料光254nm，將收集之吩膠用丙i同洗提，經吸引過濾後’洛館去除溶劑而得86mg之淡黃色固體（下文中簡稱為

Sa 1 C (l)-baa)。該淡黃色固體以重氫 F醇測定％ 13C NMR譜。，人汽色固體（Sa-l-C(l)-baa)之〗H，13C NMR譜 9 ·76Τ Τη) MHZ，CD3〇D)： ^6·92 ^ J = 8·4 HZ* 2H)« 7·77 ^ J = 8-4 Hz, 2H) 133.4, 165.1, 192.8

C NMR (125 MHz, CD3 OD) ： δ 116. 8, 130.2 IR (KBr) : 3168, 1670 cm*1 mp : 118-119= 麵譜_，觀測到㈠.76處有1個氫原子之訊號，及UCNMR譜中，觀測到〇Μ 92 8處之訊號，可知有醛基之存在。又，4麵譜中，觀測到占6 92、7 77處有2個氣原子之8·6ΗΖ之電子對訊號，】3CNMR譜中，觀測到5ιΐ6 8 至165. 1處有4個源自芳香族之訊號，可知有對位取代之芳香族環之存在。更由IR譜中，3168cnf，處確認有羥基之 φ特f生及收。由上述結果可推論該淡黃色固體（κ (1) _ • baa)為醛基和羥基在對位取代之對-羥基苯甲醛。據此與文 .獻值（The Aldrich Library of I3C and FT NMR Spectra 第1版，第2卷，Aldrich Chemical公司）比較，而確定浹育色固體（Sa-；l-C(l)-baa)為對-羥基苯甲醛。

Sa-1-C(2)之分析將1. 14它之Sa-1-C(2)以丙酮/己烷進行2次再結晶而得478mg之淡黃綠色固體（下文中稱為Sa—卜c(2)_a)。該淡黃綠色固體（Sa—卜c(2)-a)以重氫曱醇測定〗η 13(： 15 3J9081 1375554 NMR 譜。淡黃綠色固體（Sa-1-C(2)—a)之％ uCNMR譜 Ή NMR (500 MHz, CD,〇D) : δ e, 9R τ = n „ 、 7.45 U, J = 8.6 H:，2H), 7.6f ( 二 V Z:)，"I (d，J = 8.6 HZ, 2H), ,3C NMR (125 MHz, CD3〇D) : δ η, ς ；lfi R ό IR (KBr) ： 3168, 2830, 975 cm-. ' * ., 27. 2，131. 1，146. 7，161. 1，171. 〇 mp : 213-2141 lHNMR 譜中，觀測到 56.81(d，J=8.6Hz，2H)及 5 7.45 ,(/，J-8.6Hz’ 2H)處有4個氫原子之2個電子對訊號，在 C臓譜中’觀測到占115.6及占131.1處有2個碳原子 ,2個大訊號，可推測該化合物為對位有取代之芳香族環。另外，在1H NMR譜中，分別觀測到在5 6.別（d， >16·0Ηζ，⑻及^ 7.61 (d，J = 16 〇Hz，1H)處有 i6 〇Hz 之偶合常數之氫原子2M，可知有！組反式位置取代之烯烴存在。更在13CNMR譜中，觀測到占⑺』處確認有絲之存在。更在IR譜中，3168cnfl處確認有羥基之特性吸收。由上述可判斷該淡黃綠色固體（Sa]_c⑵_a)之構造為反，一對_熏草酸。據此，和文獻值（The Aldrich Ubr^rr of C and 4 FT NMR Spectra 第 1 版，第 2 卷，Aldrich

Chenncal公司）進行比較，確定該淡黃綠色固體（Sa-卜 C(2)-a)為反式-對-黨草酸。

Sa-1-F之分析將乙酸乙酯可溶性區分用矽膠管柱層析法離析之區分中，於Sa-1-F(1.56g)中加入氯仿充分攪拌，去除溶解之液層。然後，於不溶解於氣仿者加入丙酮而得丙酮可溶性液層（下文中簡稱為Sa-l-F(l))及丙酮不溶性固形物（下 319081 16 1375554 文中簡稱為 Sa~1 M以）Sa-l-F(l)經餾除溶劑而 162呢，Sa-1-F(2)為 l.40g。

Sa-1-F(l)之分析々之Sa-H⑴中再加入丙酮溶解並靜置之。然傻二收液層上層之不混濁部分。鶴除丙酮溶劑而得⑽ 之育色固體（下文中簡稱為Sa+F(1)_a)。該化合物用 HPLC分析用㈣管柱確認其純度之結果。確知純度極高。又，可知紫外光26〇nm處有強大吸收。該黃色固體（Sa-l-F(l)-a)用重氮丙酮測定 NMR 譜。 ’ 頁色固體（Sa-1-F(l )-a)之1H，uc NMR 譜： 2·3 Hz, 1H), 6.56 (d, 'H_NMR (500 MHz, (CD3)2C0) : δ 3. 97 (s, 6H), 6.26 (d, J - 2. 3 Ης, 1H), 6.74 (s, 1H), 7.39 (s, 2H) 一， =臟（125MHz，（⑶3)2C〇) : δ 56 9, 9 0.9, 149.1，158.8, 163.4, 164.9, 165.1, 183.1 · ’，105.2, l〇5.4, 122· 4, 14 IR (KBr) ： 3357, 1615 cm'1 ’ mp ： 276-277*0 MS (FAB) : m/z = 331 [M"+l] 由C NMR譜確知有i 7個碳原子之存在，另由抓π 確知第1級碳有2個，第3級碳有5個，第4級碳有1〇個存在。】H NMR譜中，觀測到53.97(s，6Η)處有6個氫原子之單一訊號’ l3C NMR譜中，觀測到占56.9處有訊號，可知有2個等價之曱氧基存在。更在ir譜中，處確認有羥基之存在，1615cm·1處有氫鍵結合可能性之羰基之吸收。另依據質量分析之結果，分子量為33〇，推測可能為（：17心〇7。該黃色固體（％_1_1^1)_3)推測為5,7,4，〜二羥基-3，5 -二甲氧基黃酮。和文獻值（c. κ⑽g，χ. 319081 17 l375554 B. Zhou, F. Hu, C. Zhang, M. Zhang, Phytochemi 65，1123-1 1 28(2004))進行比較，由於和文獻值近似p,j/7、定該黃色固體（Sa-l-F(l)-a)為5, 7, 4, _三羥基_3,，5, 一二曱氧基黃酮。

Sa-1-F (2 )之分析加入3. 00g石夕膠於i 4〇g之Saq_F(2)中使吸附，再使用矽膠管柱層析法進行離析。分離管之洗提溶劑採用逐級洗提方式，使用氣仿/丙酮為1〇 : 1，8 : 2者各2〇〇mL , 5:5者，3:7者，僅用丙酮者各3〇〇mL，僅用曱醇者2〇〇mI 進行逐級洗提。其回收使用53個5〇roL管形瓶。攸53個50mL管形瓶將依據TLC之結果在相同位置有斑點之No. 42至48之官形瓶加以混合，經濃縮而得46則之淡黃色固體(下文中簡稱為Sa+F⑵_a)。該淡黃色固體Sa+F(2)-a)使用重氫曱醇測定其％ 13(：臓譜。次只色固體（Sa-l-F(2)-a)之1H，I3c NMR 譜：

HqNMR (500 MHz>hCD5〇D) : δ 7.21.7.28 (m> 2H)> ? gg ： = , ：〇 ? ^ 1H)( g 13c NMR (125 MHz，CD, 〇m . A IR (KBr) : 3449 cn.'1 . U4. 4’ 125· 9，既· 3，140. 8，155.9 mp : 127-128*0 lH NMR譜中，分別觀測到H.21至7.28(m，2H)及5 -99 (dd, J-4.1, 〇.7Hz, 1H), ,8<〇9(d5 j = 2>3HZj ih) 個氫原子’ UC_譜中，觀測到川4.4至1559 ::源自芳香族環之5個訊號。更在iR譜中，在3隊， "头^基之付性吸收。由上述而推測該淡黃色固體 a]-F(2)-a)為3_經基。比。定。因此，和文獻值㈣ 31908] 18 1375554

Wdrich Library 〇f 13C and 4 FT _ spectra 第！版第2卷，Aldnch Chemical公司）進行比較，由於盥文獻值近似，再加上熔點（文獻值為126至129。〇而決定該淡黃色固體（Sa-l-F(2)-a)為3-羥基吡啶。 … • 抗菌試驗 •環脂稀釋法（Agar di lution method) 對於反式-對-薰草酸、3-羥基吡啶、對-羥基苯甲醛、籲香草素，採用瓊脂稀釋法進行抗菌試驗。壤脂稀釋法乃係將預先溶解之試料溶液再稀釋成為數個階級，並與瓊脂培養基混合，而調製得不同試料濃度之平板培養基。移植菌種於該平板培養基，當試料有抗菌活性時可抑制菌之生長，並以能抑制菌生長之最低濃度為最低生長抑制濃度（Miniraum Inhibit〇ry c〇ncen打时丨加， MIC)而判斷試料抗菌效果之高低之方法。首先，溶解400mg試料於imL之二甲亞颯（DMS〇)中， •=製得彻呢/此漢度之試料溶液。取G.5mL之該彻心此 •濃度之試料溶液稀釋2倍，而調製得2〇〇mg/mL濃度之試料 .溶液，依照同樣方法’分別調製得濃度為1〇〇mg/mL、 5j. Omg/mL、25.〇mg/mL之試料溶液。另外，也備好3〇〇mg/mL 濃度之試料溶液。將〇. 2mL之上述試料溶液與丨9. 8社之 ΒΗΙίσ 養基（Brain Heart Infusion Agar, Becton

Dickinson，MD)混合，在培養皿中調製成試料濃度分別為 4. Omg/mL、3. Gmg/mL、2. 〇mg/mL ' h 〇mg/mL、〇‘ ⑽/此'、 0. 25mg/mL之平板培養基。調製同濃度之兒茶酸平板培養 319081 ]9 1375554 基作為試料之抗菌效果之比較對照。由於兒茶酸難溶於二甲亞颯，而改用滅菌水。、~ 試驗用菌種，這次選擇下列13株菌種：肺炎鏈球菌、釀膿鏈2菌、腸球菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、 .沙門氏菌屬、小腸結腸炎耶爾森氏菌、腸炎弧菌、綠腹桿 \菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌MB-32、枯草芽孢桿菌 ATCC6633、假絲酵母屬菌種。混合上述菌株於2mL之經殺菌處理過之1耶1?液體谇養基（MueUer Hinton BrothR，Bect〇n Dickins〇n，_，口調製得濁度為i之菌液（菌濃度為1GVmL)。首先，分別在微孔板之各孔中玫入小試管並施與殺菌處理。再注入卫此之菌液於微孔板之各個小試^中。使用微移植器（sak_公司衣。σ ’ MIT-P型）從微孔板之各試管中攝取1〇以l移到另外之試管中，將菌液稀釋1〇〇倍（菌濃度為1〇6/虹）。 * S使用上述微移植器將1〇“ L之該菌液（菌數為Η. 〇) 私植到扣入各種濃度之試料溶液之平板培養基中，在π。。之m中培養18小時’再評估各化合物之抗菌力。其結果示於表2至6中 3]9〇81 20 1375554 表2 反式-對-薫草酸之抗菌試驗結果 +:生長不生長囷株名稱濃度（mg/mL) MIC No. 0 0. 25 0. 5 1.0 2. 0 3. 0 4. 0 1 肺炎鏈球菌 + + + + - - - 2.0 2 釀膿鏈球菌 + + + + + - - 3.0 3 腸球菌 + + + + + + + 4 金黃色葡萄球菌 + + + + + — 4.0 5 大腸埃希菌 + + + + + + + 6 沙門氏菌屬菌種 + + + + + + + 7 小腸結腸炎耶爾森氏菌 + + + + + + - 4. 0 8 腸炎弧菌 + + + + + - - 3. 0 9 綠膿桿菌 + + + + + + + 10 蠟狀芽孢桿菌 + + + + + - - 3. 0 11 枯草芽孢桿菌 MB-32 + + + + + + + 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + + — - 3. 0 13 假絲酵母屬菌種 + + + + + - - 3. 0 319081 1375554 表 3 -輕基°比σ定之抗菌試驗結果 + :生長 - -:不生長種名稱濃度（mg/mL) MIC No. 0 0. 25 0. 5 1. 0 2. 0 3. 0 4. 0 1 肺炎鏈球菌 + + + + + + - 4.0 2 釀膿鏈球菌 + + + + + + - 4.0 3 腸球菌 + + + + + + + 4 金黃色葡萄球菌 + + + + + + - 4.0 5 大腸埃希菌 + + + + + + + 6 沙門氏菌屬菌種 + + + + + + + 7 小腸結腸炎耶爾森氏菌 + + + + + + — 4.0 8 腸炎弧菌 + + + + + - - 4. 0 9 綠膿桿菌 + + + + + + - 4.0 10 蠟狀芽孢桿菌 + + + + + + + 11 枯草芽孢桿菌 MB-32 + + + + + + 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + + + + 13 假絲酵母屬菌種 + + + + + + — 4.0 22 319081 1375554

對-沒基苯甲酸之抗fe試驗結果 + :生長 _ :不生長菌種名稱濃度（mg/mL) MIC No. 0 0. 25 0. 5 1. 0 2. 0 3. 0 4. 0 1 肺炎鏈球菌 + + + + - - - 2.0 2 釀膿鏈球菌 + + + + — 一 - 2.0 3 腸球菌 + + + + + + 4 金黃色葡萄球菌 + + + + + - — 3.0 5 大腸埃希菌 + + + + — — - 2.0 6 沙門氏菌屬菌種 + + + + - - - 2.0 7 小腸結腸炎耶爾森氏菌 + + - - - - - 0. 5 8 腸炎弧菌 + + + + — — — 2. 0 9 綠膿桿菌 + + + + - - — 2. 0 10 蠟狀芽孢桿菌 + + + + + - - 3. 0 11 枯草芽孢桿菌 MB-32 + + + + + + - 3. 0 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + - - 3. 0 13 假絲酵母屬菌種 + + + + + - 3. 0 23 319081 1375554 表5 香草素之抗菌試驗結果 +:生長不生長菌種名稱濃度（mg/mL) MIC No. 0 0. 25 0.5 1. 0 2. 0 3. 0 4. 0 1 肺炎鏈球菌 + + + + + 一 - 3. 0 2 釀膿鏈球菌 + + + + - - - 2. 0 3 腸球菌 + + + + + + + 4 金黃色葡萄球菌 + + + + + - 4. 0 5 大腸埃希菌 + + + + + - 一 3. 0 6 沙門氏菌屬菌種 + + + + + 一 — 3. 0 7 小腸結腸炎耶爾森氏菌 + + 一 — - — - 1.0 8 腸炎弧菌 + + + - — — 2. 0 9 綠膿桿菌 + + + + + + + 10 蠟狀芽孢桿菌 + + + + + + - 4. 0 11 枯草芽孢桿菌 MB-32 + + + + + + - 4. 0 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + + + - 4. 0 13 假絲酵母屬菌種 + + + + + - - 3. 0 24 319081 1375554 表兒荼酸之抗菌試驗結果 +:生長 $生長菌種名稱濃度（mg/mL)

No. 0.25 0. 0 3. 4.

MIC 肺炎鏈球菌釀膿鏈球菌腸球菌 + + 1. + + + + + + + + + + 2.0 4 金黃色葡萄球菌 + + + 1. 大腸埃希菌 + + + + 沙門氏菌屬菌種 + + + + + 2. 2.0 小腸結腸炎耶爾森氏菌腸炎弧菌綠膿桿菌 + + 1. + + + 0. 5 10 蠟狀芽孢桿菌 + + + 1. 11 括草芽孢桿菌 MB-32 + + 2. 12 括草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + 3. 0 13 假絲酵母屬菌種 + + + 1. 應上述結杲可知反式_對I草酸對於肺炎鏈球菌、二r i囷:金:色葡㈣菌、小腸結腸炎耶_森氏菌、 :^囷1狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌概6633、假考炎鏈I種Ϊ示活性。就最低生長抑制濃度㈣）而言囷0mg/mL，對於釀膿鏈球菌、腸炎弧菌、

3190SI 25 ^/^554 牙抱桿園' 括草芽孢桿菌ATCC6633、假絲酵母屬菌種為 3. Omg/ mL對於金黃色葡萄球菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌為 4.Omg/mL 。 3匕基吡啶對於肺炎鏈球菌、釀膿鏈球菌、金黃色葡萄球菌、小腸結.腸炎耶爾森氏菌、綠膿桿菌、㈣酵母屬围種顯不活性。就最低生長抑制濃度（MIC)而言，對於肺炎鏈球菌、釀膿鏈球菌、金黃色葡萄球菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、綠腹桿菌、假絲酵母屬菌種為4. Omg/mL。 ▲…對J工基苯曱酸對於肺炎鏈球菌、釀膿鏈球菌、金黃色葡萄球菌：大腸埃希氏菌、沙門氏菌屬菌種、小腸結腸炎 :爾林氏囷、腸炎弧菌、綠膿桿菌、嘴狀芽孢桿菌、枯草牙孢桿菌MB-32、枯草芽抱桿菌ATCC6633、假絲酵母屬菌種=及很多菌種顯示活性。特別是對於小腸結腸炎耶爾森氏菌顯示強大活性，其MIC為0.5mg/mL。 “香草素對於肺炎鍵球菌、釀膿鏈球菌、金黃色葡萄球囷、大腸埃希氏菌、沙門氏菌屬菌種、小腸結腸炎耶氏菌、腸炎弧菌、蠟狀芽孢桿菌、括草芽孢桿菌H、枯草芽孢桿S贏咖、假_母屬s種顥示活性素也同樣對於好㈣具有活性，其中，對於小腸，耶爾森氏菌顯示強大活性，其MIC為〇 5mg/mL。人紙片法（Paper Disk method) 5,7,4’_三經基-3’，5，-二甲氧基黃酮之抗菌試驗採备溶劑會影響時也能判別有無抗菌活性之紙月法。紙片法乃係先調製不同濃度之試料溶液，以專 31908] 26 1375554 片吸收試料溶液並乾燥之。於調配之菌液與瓊脂培養基混合而製成平之板上，放置吸收有試料溶液之紙片。當試料有抗菌活性時’以紙片為中心形成抑制菌種繁殖之抑菌| 圈。由該抑菌圈之大小判斷抗菌效果高低之方法。首先，溶解4mg之試料之5, 7, 4’-三羥基一3，，5, _二曱氧基黃酮於2G0/ZL之溶劑，調製得2Grog/mL之試料溶液0 於該j〇mg/raL之試料溶液1〇〇#L中加入1〇(^L之滅菌水，調製得lOmg/mL之試料溶液2〇0/(/ L。其中，加入6〇 //L之二曱亞硬及滅菌水，調製得5 (^此之試料溶液400 # L。當二曱亞硬漢度為繼時，試料會析出，所以設定二曱亞颯為40%。於5.0mg/mL之試料溶液35〇/^ 中，加人140杣之二曱亞石風及21〇“之滅菌水，調製成為2·5πι§/π^之試料溶液7〇〇yL。藉相同方法調製得 1.25mg/mL，0.625mg/mL之試料溶液。另外，準備4〇%二曱亞二風、6 G %滅菌水之溶液做為對照。同時，準備相同漠度之兒茶酸水溶液做為比較用之對照。使用紙片（直徑為又 8.12_)吸收上述溶液7〇#L後乾燥i日供試驗^途。使用金黃色葡萄球菌、沙門氏菌屬菌種、小腸結腸炎耶爾森氏菌、綠膿桿菌、假絲酵母屬菌種做為被檢驗菌株。混合滅菌水2mL於該菌株，調製成濁度為1(1〇8/mL)之菌液。將〇· 2mL之該菌液與BHI培養基19. δΜι混合，势成% 板培養基°該平板培養基上放置上述經乾燥之紙片，放在 37 C之恒溫器中培養’進行抗菌效果之評估。其結果示於表7。表中符號（-)示無抗菌活性。 31908] 27 Ϊ375554 菌種名稱

No. s--- 2 色葡萄球菌沙門氏菌屬菌種 3 小腸結腸炎耶爾森氏菌 4 '---- 5 綠膿桿菌假絲酵母屬菌種 5, 7, 4’-三羥基-3’，5’ 二甲氧基黃_ 濃度（mg/mL)

兒荼酸 J.25 2.5 一 - - 一 9.49 一 - — — 由上述結杲可知5, 7, 4, _r辩 —&暴-3，5 -二甲g其甚酉同對於沙門氏菌屬菌、綠膿桿菌乳土 ’、 # ^ 作国丹有抗囷活性。又，盥系余酉文相較也顯示其抗菌活性甚高。 /、白邊山白竹之葉片之熱水萃取液（Sa)23kg再用乙酸卒取，而得乙酸乙酯可溶性區分(S a -1) 7 8 g。以金音色葡萄球菌進行抗菌試驗之紝杲，3 '〜、闽、·^ I，、，D果’顯不抗菌活性存在於乙酸乙酯可溶性區分(Sa—!)中。使用中性矽膠管柱層析法將乙酸乙酯可溶性區分離析為7個部分。該7個部分分別為

Sa-l-A(9〇mg) ^ Sa-1-B(250mg) . Sa-1-C(3.36g) ^ Sa-l-D (3. OOg) ^ Sa-l-E(llOmg) . Sa-]-F(l.56g) ' Sa-l-G (30. Og)。添加氣仿及正己烷於幻中則分離而付 Sa-；l-C(l)(2. 22g)及 Sa-l-c(2)(l. 14g)之 2 層。再使用中性矽膠管柱層析法離析Sa一22g)而得Sa_卜 28 319081 ^/5554 a之結果獲得白色固體（Sa-l-C(l)-aa) 6 Omg。經光譜資料 (Sa] rn、、1 析之結果’爱定該白色固體離柄ς 7 香早素。又，再藉中性料管柱層析法析Sa+c⑴_b而得Sa+C⑴一ba’再經製備用τ 該：：:炎黃士固體㈤娜㈣㈣。由光譜資料爱定將^ HI體（Sa+c⑴-baa)4對_經基苯甲搭將 Sa-l-C(2)-(l.i4g)經 2 次在^士 s ^ 體（&+C⑵-a)478mg。由光“=綠色固 (Sa-1-C(2)-a)為反式_對_ f草、^ = H綠色固體八工耵黑早馱。其次，將Sa-1-F(1.56g) /Μ㈣可溶及丙嗣不溶性、a+F⑺U.40g)。再添加㈣於Sa+F⑴（ι 62㈣，而得黃色固體（Sa—B⑴—a)i㈣。由光譜資料屋疋該育色固體⑼小卩⑴_a)為5，？4、三絲_3, 5,一二甲氧基黃_。又，使时性驾管柱層析法離析卜F (2)(1.40g)而得淡黃色固體（Sa+F⑵一a)細。由光譜資料爱定該淡黃色固體（Sa+F⑵1)為卜經基吼。定。 ζΤ 3-羥基吡啶

COOH ΗΟ

CHO 反式-對-董草酸對-羥基苯甲醛

Me〇i? OH

香草素 5,7,4，'三經基-3，，5、二甲氣基贵明對-羥基苯曱醛、反式-。其結果’確知香草素、 3-經基吡啶皆具有抗菌使用璦脂稀釋法檢測香草素、對-薰草酸、3-羥基吡啶之抗菌活性對-經基苯曱酸、反式—對-薰草酸、 319081 29 <、 1375554 'Γ生。其中’特別是香草素、對-經基笨甲路對於食物中毒囷之小腸結腸炎：爾森氏菌具有強抗菌活性。5, U，_三經基-3，5 _二曱氧基黃_之抗菌式 -ς 7 ,,.,机囷忒鲂如用紙片法。其結果顯不5,7,4-二經基-3’ V-一甲备盆廿加处， # — ’b 一曱虱基頁酮對於沙門氏菌屬囷’綠膿桿ii具有抗菌活性兮h喆囷沽性該抗囷活性較之兒茶酸更為強大。本發明研究者就白邊山白竹以外之植物也嘗試上述有效成分之萃取。其結果，屬於禾本科之很多植物，例如稻、小麥、玉米、大麥、黑麥、甘嚴、竹、芒草、蒲草、產葦等中，也發現含有大量之5, 7, 4,—三羥基_3,，5, _二甲氧基黃酮（麥黃酮）。其具體植物名稱如下：水稻、小麥、大麥、燕麥 '黑麥、黎、粟、稗玉米、四國稗、蜀黍、竹、菱白、甘蔗、薏苡、蘆葦、芒草、山白竹、蘆竹、白銀葦、芝草。禾本科（Gramineae) 竹亞科（681111)115丨0丨(163€)(竹科（3&11113115&0636)) 山白竹屬（5a/n6i/sa):蓬萊竹、鳳凰竹（以上屬竹類）倭竹屬（Shibaiaea):阿龜笹苦竹屬（P/jynosiac/jys):孟宗竹、苦竹、淡竹業平竹屬（Semiarundinaria):業平竹、夜叉竹（以上屬竹類）多茅竹屬（PJeioWasiiys):根笹、東國根笹、女竹、琉球竹箭竹屬（尸seudosasa):矢竹、厄島竹 31908] 30 1375554 華箬竹屬（Sasa/H〇rp/7a):華箬竹雌竹屬（ylrii/7cfri/7aWa):東笹、末子笹山白竹屬（Sa sa，亦稱為矮竹屬）：都签、絲餐·、限笹、千島笹（以上屬山白竹類）黍草亞科（Poel ideae) 小麥草屬“发ropyro/O :小麥草、鶴草、青髢草看麥娘屬“iopecurus):看麥娘、瀨戶茅荻蘆竹屬“ru/jdo):蘆竹小判草屬（5riza) ··小判草、姬小判草雀麥屬（Bro/nus):雀麥、狗麥鴨茅屬（Pacis):鴨茅晝眉草屬（Era^roshs):知風草、雀茅、垂枝雀茅、晝眉草大麥屬（HorudeunO :大麥、麥草小麥屬（Tri ticum):小麥黑麥草屬（L〇·/iL//H):細麥、鼠麥、毒麥黍草屬（Poa):雀帷子、莓繫牧場草屬（Fesiuca):薙刀茅、牧場草、點火莖浮茅屬（Giyceria):田麥、浮茅米茅屬（#ehca):路芝、米茅淡竹葉屬（Lophatherum) ··淡子葉千金子屬（Lepioc/^oa):畔茅藺草屬（eec/iffia./?77ia):藺草

Ik尾粟屬（Sporobol us):氣尾票、鬚芝 319081 1375554 螺蟀草屬（Ekiisine):螺蜂草、四國稗狗牙根屬（Cy/7〇do/7):狗牙根蘆葦屬（PiiragTniies):風知草、蘆、蔓蘆顔子萆屬（Phaenosperma) 假稻屬（Leersia) 稻屬（Oryza):稻菱白屬（Zizania) ··菱白燕麥屬（he/2a):燕麥米芒屬（/)es/3a/z?psi‘a):米芒、廣葉米芒蟹釣草屬（rWseiii/n):蟹釣草、利尻蟹釣草落萆屬（Koeleria) ··落萆香茅M Ufierochloe):香茅、深山香茅草蘆屬（Salarys):草蘆、加那利草蘆糠穗草屬（krosiis):小糠草v糠穗棒頭萆屬（Polypogon) 梯牧草屬（尸/?7e·):梯牧草、大梯牧草野青茅屬（CaJa/nagrosiis):野青茅、拂子茅、山粟結縷草屬Uoysia):結縷草、高麗草、鬼芝、長鬼芝稷亞科（Pa/jicoideae) 野古草屬CArundine】Ja) 芒屬（jFdaJia):田中牛毛草、擬牛毛草柳葉著屬（/sachne):稚兒笹、這稚見笹稷屬（Pa/?ic⑽）：稷、這稷、糠稷稗屬（jEcIn’nochloa.):稗、野稗 32 319081 1375554 縮箬屬（(9pi iswe/3us):縮箬粟屬（Seiaria):笹粟、狗尾草、粱、金黃狗尾草雀稗屬（Paspa L//»):雀稗、紀州雀稗、島雀稗馬唐屬（Pigiiaria) '·馬唐、秋馬唐狼尾草屬（Pe/i/jiseiu/o):狼尾草、那比稚草鬣刺屬（Spi/ji/ex):鬣刺甘蔗屬（《Sacc/jarty/w):甘蔗、濱芒白茅屬（Imperata):白茅油芒屬（Eccoi lopus):油芒芒屬（Mi scan thus) ··芒、获、常磐芒、青茅莠竹屬（Microsie公i·):笹萱、腳細莠竹氣白茅屬（Pogonatherum) ··跑茅雁股茅屬（Dimeria):雁股茅牛鞭草屬（ee/nart/iria):牛鞭草、小葉牛鞭草束尾草屬（尸/jacehri/s):間葦鴨嘴草屬（/scAae/z/ii/z?):鴨嘴草、毛鴨嘴草蓋萆屬CArthraxon) ••小鲍草杯毛草屬:雄刈萱孔穎萆屬（Bothrioch】oa):姬油芒裂穗草屬（Schizoac/^riu/n):牛草蜀黍屬（如办叩〇尽0/7):雀刈萱萱屬（77?e/neda):刘萱高粱屬（Sorg77a/n):蜀黍、甘蜀黍、香蜀黍、蘇丹草薏μ屬（Coix):薏苡、川榖 C S ) 33 319081 1375554 玉蜀秦屬（Zea):玉米使用適當溶劑萃取上述植物等分離精製方法，可分離精製得麥普嗣=如=利用HPU =得，用醇類、含水醇類、:二物二水曱广、含“醇)萃取、溶解固形物於水中•乙，、酉交乙S曰分配等即可精穿』。再使用乙古-將白邊山白竹之乾燥葉片5g浸潰靜置於50mL之文有機溶劑中m萃取液㈣ ^各種以及該固w:含:=種卒取液中之固形物之比率’

-- ——一_之比率如下表所示溶劑萃取液中固形物之比率（％) 俨去二二使用1L之溶劑萃取白邊山白竹之葉片50g，蒸 :如時求得固形物中所含麥黃酮之量⑽），其結果 319081 34

後，邊山白竹之葉片5Gg於甲醇5GGmL中浸潰，靜置烧、=、鶴除曱醇而得萃取物5焉。其次，依序用己 1中之表:乙酸乙酿、正丁醇進行分配，求得固形物量及如下表溶劑萃取液中固形物之比率（％) 固形物中麥黃酮之比率（％)

餘除S後使=°°虬甲醇萃取响之白邊山白竹葉片得各固來你由冷71於水，再用各種溶劑進行分配之際，j 〉所含麥黃酮之量，其結果如下表所示。 319081 35

乙酸乙酯 3. 35

字白邊山白竹葉片之各種含得固形物（B)。、、六萨,〇、駟卒取及，辰縮乾炻而 κ ^ %(β)於水後，利用乙酸乙酯進行八邴再餾除溶劑而得固义日進仃刀配，乙酉旨萃取__ 形物⑻為100時，乙酸平取u形物(c)之比率如下及固形物（C)中之失龙另外固形物（B, 中中。 s酮之7刀析結果質量％也合併示於表固形物（C) (質量％)

含水乙醇中乙醇之比率 (質量％) 固形物（B) (質量％) (B)中麥黃嗣含量 (質量％)

*經過預濃縮將產葦之f'S及竹葉之各種含水乙醇萃取液⑻，館 319081 36 1375554 除溶劑而得固形物（E)。溶解固形物（E)於水中，使用乙酸乙酷進行分配而得乙酸乙酯可溶性固形物。分析使用固形物（E)l〇〇g時所得固形物（F)中之麥黃酮量，其結果厂、下表。，、、°、不如 100g固形物（E)中麥黃_含量（mg) 萃取液（D) 蘆葦莖（25%乙醇） 5 葉醇) 100g固形物（F)中麥黃酮含量（mg) 45. 本發明之抗微生物性組成物含有至少一種上述化合物（即，香草素、對_羥基苯甲醛、反式-對-薰草酸、3-羥基吡啶、5, 6,4、三羥基_3，，5，_

一甲氧基育酮）（本說明書中或稱為本發明化合物）為有t 成分之本發明之抗微生㈣可以各種形態而使用。例J適於作為黏膜保護組成物，預防及/或治療細菌感染用㈣物，防腐劑、過濾裝置等之抗微生物劑。产本發明之抗微生物劑之劑型可任意為液&、固體狀、氣體狀。本發明之抗微生物劑可任意為經口或非經口投與之形態。經口投與形態為例如鍵劑、丸劑、粉劑、液劑了 :香糖：水飴' 巧克力、麵&、餅乾、麵條類、各種飲料寻之食。σ tH 口投與形態為例如注射劑、局部投鱼 ^乳霜、軟膏等），栓劑等。局部投與劑之劑型為例如將本發明之抗微生物劑含浸於天然纖維或合成纖维製紗布等 37 319081 1375554 載體者，或含於口紅等化粧品中者。本發明之抗微生物劑固然以提供人類用途為主，但是人類以外之哺乳類、鳥類、魚類、爬蟲類等也可做為有效 ^之抗微生物劑使用。因此，本發明之抗微生物劑也可提供作為上述動物用之抗微生物劑（例如寵物用醫藥、寵物食品 •等）使用。本發明之抗微生物劑除動物以外，也可做為各種植物之抗微生物劑使用，另外，做為防腐也很有用。 φ- 本發明之各種劑型之抗微生物劑之製造除使用規定量之上述化合物之外，尚可使用一般醫藥組成物、化粧品、皮膚用組成物等所使用之油性成分等之基材成分、保濕劑、防腐劑等。 . ‘、抗微生物劑所使用之水，例如自來水、天然水、精製水等’雖無偈限，惟-般以使用離子交換水等純度高之^ 上述油性成分為例如角麗烷、牛脂、豬脂、馬油、羊毛脂、蜜蠟等動物性油脂；撖欖油、葡萄籽油 '棕櫚油、荷荷^由、胚芽油（例如米胚芽油）等植物性油脂；液狀石，、南級脂肪酸醋（例如棕櫚酸辛醋、棕搁酸異丙醋、肉豆急酸辛醋十二錢）、發酮油等合成油、半合成油等。油性成分具有保護座声，赫早矛反&賦予木叙性之效果（以薄膜包覆皮膚表面，防止乾择，π Λ φ ㈣賦予柔軟性、彈性之效果），爽快感寺品求之性能而可適声έ人 ^ ^ ^ 、度，、且s使用。例如角鯊烷、撖才見油及肉旦寇酸辛酯^ , λ 曰十—烷酯之組合乃較佳之一例。调整抗微生物劑之硬度 έ 度抓動性可使用硬脂酸、硬脂 38 3I90S1 1375554 醇 '山諸、料醇、凡士林等固態油，其中，以使用硬脂酸及鯨蠟醇之組合為較佳。 • 纟發明之抗微生物㈣於製成乳霜組成物時，可使用本：明之化合物，水、油性成分成為乳霜狀用之乳霜化一 H霜化’惟—般以使用單硬脂酸甘油醋與自身乳化型單硬脂酸 - 甘/由酉日（即’單硬脂酸甘油酯中添加乳化劑而成者）之組合為較佳。 . 柯明之抗微生物劑，必要時尚可含有安定化劑、保濕劑、創傷治癒劑、防腐劑、界面活化劑等。 ’、八、該安f化剖為例如緩基乙稀聚合物i氫氧化卸之組。一硬㈣聚乙二醇等。特別以倍半硬脂酸聚乙二醇(二單硬腊酸聚乙二醇之”1之混合一讎有效調整硬度而較佳。成物在”皮膚之際’可物二例如透明質酸納'膠原蛋白、綱取 =寸別疋源自木立蘆蒼之萃取物⑺為佳）、尿素、 - -°甘油、海藻糖、山梨糖醇酸鈉等。土文比咯烷酮羧上述創傷治癒劑為例如尿囊素、草取物、艾草萃取物等。甘早H、甘草萃上述防.腐劑則由於本發明化合物所以僅做為輔助性用途。例如苯甲酸納、對=固：用，甲酉曰、乙醋、丙醋或丁醋等稱為對經基笨甲酸 39

S 319081 ^375554 2者）、丙酸鋼、混合脂肪酸醋（例如癸酸甘油醋 ♦甘油-2、月桂酸聚甘油，之混合物）、苯氧夹光素201號（黃色色素）、】2_戍- "%、感 « △ 叹一知專，其中以對鉀其妒 ”夂酯、混合脂肪酸酯、U—戊二醇為較佳。“、 <上述界面活化劑為例如N_酿基_卜谷胺酸納乙稀山梨醇針單硬脂酸酯等。於必要時，尚可含有橙油、香氣成分。 ^皮油、香料等含有本發明之抗微生物劑之黏膜 0 im ^ ^ ψ m έθ ^ AL· 、’、、·' ，預防及 / ，可以有效㈣制感純細菌從二,：：耳朵、肛門、陰部等之點膜，或創傷染，而達成預防及/或治療之二内感染之細菌感及/或治療細菌;Ml #指保邊組成物，預防布或口腔組二成物之更具體之形態有點膜保護黏膜保護布乃係具有通氣性之載體，例如在麻，之天然纖維’聚尿院、聚乙

丙稀酸等之合成纖維、半合了明H 合物之纖維本身，或纖唯负执5 "寺種以上之混从人* I ^纖維或其織布、編布、不織布、紙蓉 :3':、噴霧等方法使含有本發明之抗微生物劑而構成 ^本說明書中之「保護布」—詞，為方便起見，^之外’亦指包括纖維本身、紗 ' 紙等者。 ’、之棉、=體！!態，例如紗布、口罩、眼帶'生理帶、衛生 w作T生紙、痒疾處理用紗布、耳栓、水性鮮創膏

319081 40 1375554 寻被分類為衛生用品之直接接觸黏膜或皮膚之保護布之 1 卜白，等衣類，手套、帽子、機子'日式布襪子等衣料品’脉早、棉被套、枕頭套、牀具用品等寢具類，布簾、壁紙、地毯等室内裝飾品及室内裝飾材料，手術用縫合線等面療材料等’可直接或間接接觸皮膚之物品也包括在内。折含有本發明之抗微生物劑之口腔組成物，例如樹膠質、果凍、含錠、糖菓、口香糖、錠劑、丸劑、洗口劑、叔口 d、牙膏、黏膜用膠膜、咽頭部炎症治療用噴霧劑等。由上述實驗例可知本發明之有效化合物，以千分之— 至十萬刀之一的濃度存在於山白竹萃取物之固形物中。發明之化合物做為抗微生物劑使用時，以固形物之使用量之大約千分之一分取物中可。兮4由、至十萬刀之一之濃度即了 °亥/辰度可視使用.目的而適當決定。例如要使本發明之化合物含浸在黏膜保護布將保護布含浸於本發明之化合物之2至20x(千分之一至萬允之-)質量%溶液(水、醇類、二甲亞砜等有機溶2 等之混合溶劑），或噴霧本發明之化合物之2至20^^乂、之一至十萬分之一）質量％溶液於保護布後乾燥即可。刀 % ’本發明化合物之含浸量或噴霧量以本發明化合你固形物計’宜為2至20x(千分之一至十萬分之之以6至15x(千分之一至十萬分之一）質 ° 19 v y貝里/0尺佳，尤以8 5 12x(千分之一至十萬分之一）質量％為最佳。 —本發明之化合物要含在例如樹膠質、果凍、含錠、：菓、口香糖 '錠劑、丸劑（例如签丹）、洗口劑、漱口劑糖 31! 41 牙膏、黏膜用膠膜等之口成物之任意階段中，對於二可以在製造口腔組合物之固形物添加2 :\:物原料計’以本發明化為佳，其中，〜至5:二:至十萬則^ 量％更佳，尤以添“至…^^-至十萬分之㈠質 %為最佳。（千刀之一至十萬分之一）質量本發明之口腔組成物隨劍成分。例可調配適度之一般慣用葡甸糖、乳糖、蔗糖、7jC飪、铷_、产铷> — : = =:ΐ甲基纖維素鈉：維= .潤滑劑，香料二::解；:,『醆鎂、蔗糖腊肪酸醋等本發明之黏=組二醇等;涼化劑等。盐鎞外取物以保護布之形態使用時，在之二物= 例Μ布等)令含有本發明術縫合線之形態使用時、左f更換即可。以手入：患處之炎症’而促進手術部位恢復正；：處仅纟明之保護黏膜組成物以保醫院等處之院内感㈣，太細 W H、使用以防止感染效果可以長::;存本::==r之防止士：戈再度以本發明之化合物含浸處理即可。 B士甘I明^膜保護組成物以d腔組成物之形態使用宁’其攝取量雖益特另丨在丨〜計，传每-少2至; 但以本發明化合物之固形物 t “母-人2至15x(千分之一至十萬分之一塒左口一日攝取U5次’通常為次即可。攝取量、攝 42 C B > 319081 ◦ ：04 取次數可配合目的而適度增減。本發明之黏膜保護組成物，含有本發明之化合物以固形物計’為2至20x(千分之一黾+ M八、 , * ., 至十禺刀之一）質量％，則對於已在抗生I無效之耐藥性菌也表現顯著效果。又’本發明之黏膜保護組成物以口腔組成物使用時，二= B:’適當地含在口中，即可極簡便地預防感染性細 :匕能抑制其增殖…’ 口香糖、糖菓等緩效 I·生形L之組成物可長時間發揮藥效而有利。 $ 組成物也能以塗㈣油之形態㈣用。錯由將3有本發明化合物以固形 )貝里％之塗液或油塗布在皮膚等之一至十萬分之、-一 Μ丁刀就能極簡便地預防感染性細g之感染，又增防腐劑 t本發明可提供含有本發明化合物為有效成分之防腐發明做為防腐劑使用時，其形態並無特別限制。防 :對象之組成物例如食品、飲料水、調味料、化粧品(包括主液或油）' 創傷部位治療用噴霧劑、咽頭霧劑等。在上述對象物中以含有太、n°療用噴計，2至-千分之物，物以含有6至15x(千分之一至十萬分貝里：為且’其中，以含有δ至12x(千分之一至十萬分佳尤過渡設備 …之-)質卿佳。本發明又可提供含有本發明化合物為有效成分之過濾、設備。其具體之形態為例如換氣扇、空調設備二 319081 43 1375554

空調設備、空氣吸入口 '空氣排出口、紗網門窗主手機等空氣流通部位所使用之滤網。濾網之材料並1 = 限制’可列舉如絲、棉、羊毛 '麻等天然纖維 '聚尿燒、’ 聚乙稀、聚丙烯、耐綸、聚醋、丙烯酸系等合成纖二合成纖維、或其等2種以上之混合物所構成之織布、編布、不織布、紙等。這些濾網可藉含浸、喷霧等方法使含有本發明化合物之稀釋水溶液，再經乾燥處理而成。渡網中之本發明化合物含量以固形物計，以2至20x(千分之一至十萬分之一）質量％為宜，其中，以6至15x(千分之一至十萬分之一）質量％為較佳，尤以8至12x(千分之一至十萬分之一）質量％為最佳。 44 319081

Claims

1375554 f 二申請專利範圍： -—^ 第096108155號專利申請案公-杏 ♦ 101年7月20曰修正替換頁：1. 一種抗微生物劑，係含有5, 7, 4’-三羥基-3’，5’-二曱氧基黃酮作為有效成分之抗微生物劑，而該微生物係選自沙門氏菌屬（Salmonella sp.)及綠膿桿菌 (Pseudomonas aeruginosa)所構成組群者。 2. —種抗微生物性組成物，其係含有5, 7,4’-三羥基-3’，5’ -二曱氧基黃酮作為有效成分之抗微生物性組成物，而該微生物係選自沙門氏菌屬（Salmonel la sp.) 及綠腹桿菌（Pseudomonas aeruginosa)所構成之組群者0 319081 (修正本） 45