TW200800140A

TW200800140A - Antimicrobial agent and antimicrobial composition

Info

Publication number: TW200800140A
Application number: TW96108155A
Authority: TW
Inventors: Yuuzou Tsuchida; Kotarou Tsuchida; Kunitomo Watanabe; Daisuke Sakurai; Mamoru Koketsu; Mitsuo Kawabe; Teruo Utsumi
Original assignee: Yuuzou Tsuchida
Priority date: 2006-03-10
Filing date: 2007-03-09
Publication date: 2008-01-01
Also published as: KR20110069158A; KR20080103090A; EP1994928A1; RU2008136887A; JPWO2007105581A1; TWI375554B; EP2279662A3; WO2007105581A1; KR101159699B1; CN101442996A; EP1994928A4; US20100190846A1; RU2414818C2; EP1994928A8; CN101442996B; EP2279662A2; HK1133381A1; US20090012128A1

Description

200800140 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】 ^ 本發明乃有關抗微生物劑及抗微生物性組成物。【先前技術】自古已知矮竹萃取物（sasa extract)具有抗菌性。例如據報告（參照專利文獻i、專利文獻2)指出對於引起創傷，感朵症之病原菌之金黃葡萄球菌（Staphyl〇c〇CCus ⑩ aureus)、綠膿菌（pseucj⑽onas aerugin〇sa)、大腸桿菌 (jscherichia c〇li)具有抗菌效果，或對於胃潰瘍之病原菌之幽門螺旋菌（Helicobacter pylori)具有抗菌效果。白邊山白竹（學名為 Sasa albo marginato Makino et

Shibata，日稱隈笹）乃屬於禾本科山白竹屬之植物，一到冬天，葉綠白枯成邊者之總稱，現在由人為推廣，幾乎曰本全國可見其栽培，白邊山白竹和一般生長於山中之日本山白竹（Kumasasa，日稱熊笹）有所不同。 • 自古已知白邊山白竹之效用甚廣，可和中醫學上之中藥方中之印度產之森林匙羹藤（Gy顧ema sylvestre)，中國產之番石榴（psidium gua java)及韓國產之枸杞疆 barbarum)齊名並稱。在日本做為胃病、糖尿病、高血壓等之傳統民間藥方而利用（參照非專利文獻】至3)。另外，也做為竹丸子或竹粽子等供食品包裝材料或保健強壯劑等利甩。一次大戰後，根據動物實驗發現白邊山白竹對於老鼠之肝癌具有抑制活性，其抗癌活性也有若干藥理學研究^ 319081 5 200800140 告（參照非專利文獻4)。另外，對於白邊山白竹之優異防腐效果（參照非專利文獻5)，抗菌效果（參照非專文獻6) 也有研究報告。然而，其多數僅屬於藉氣相層析法之有機酸成分之分析，而罕見對其抗菌性化合物有關之分離精製研究報告。已知薰草酸（coumaric acid)及其衍生物對於大腸桿菌、金黃葡萄球菌、綠膿菌具有抗菌性（參照專利文獻3)。另外，也已知山白竹萃取物中含有薰草酸、阿魏酸、咖啡酸、香草素等苯丙素（phenyi pr〇pan〇id)化合物、3-羥基吼啶等，這些混合物對於大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿菌具有抗菌性（參照專利文獻4)。專利文獻 1 : W0 00/067707 專利文獻2:日本特開2003-201247 專利文獻3:日本特開2004-359626 專利文獻4 :日本特開2006-36731 非專利文獻1 :病田丸 '久保恭子、小野田真：日本藥學會誌，98，1436 (1978)，非專利文獻 2 : S. Okabe，L Takeuch，L Takagi，M. Shibata， Jpn· J· Pharmacol·， 25， 608 (1975)，非專利文獻3 :柴田丸、佐藤冬惠、竹下一夫、大谷孝吉：曰本生藥學會誌，34，274 (1980)，非專利文獻 4:M. Shibata，K· Kubo，M· Onoda，Folia Pharmacol· Jpn， 72， 531-541 (1976) 非專利文獻 5 : N. V. Chuyen，Τ· Kurata，Η· Kato, 6 319081 200800140 J· Antibact· Antifung· Agents， 11， 69-75 (1983) 非專利文獻 6 : N. V. Chuyen, H. Kato，Agric，Biol·

Chem·， 46， 2795-2801 (1982) 3-1128 (2004) 【發明内容】 (發明擬解決之課題）本發明之目的在提供抗微生物劑。本發明之另一目的在提供含有抗微生物劑之抗微生物性組成物。 (解決課題之方法）本么日月提供下列所不之抗微生物劑及含有該抗微生物背i之抗微生物性組成物。 2以選自對-羥基苯甲醛、5,7,4、三羥基_3，，5，_二甲 3::二1—Γ基吼。定及香草素所構成組群之至少-種作馮有效成分之抗微生物劑。 2·如上述第i項所記载之抗微生，物係選自鏈球菌屬、腸球菌萄二中韻生沙門氏菌屬、耶爾森氏鬥戸 *表囷屬、涘希氏菌屬、浐-P 氏屬、弧菌屬、假單胞菌屬、耷为才干國屬及假絲酵母屬所構成組群者。早U⑧牙抱 3·以選自對一羥基苯甲。甲氧基黃酮所構成組群之至I，7,4、-三經基-3’，5，-二物劑。 ^ 種作為有效成分之抗微生 ύ項所記載物係選擇自鏈球菌屬、腸球言=瓜生物劑，其中，該微生屬 '沙門氏菌屬、耶爾森氏葡萄球菌屬、埃希氏菌蜀、弧菌屬、假單胞菌屬、 319081 7 200800140 芽抱桿菌屬及假絲酵母屬所構成組群者。 5 ·如上述第1項所記載之抗微生物劑，其中，含有3 -經基π比咬作為有效成分，而該微生物係選自肺炎鏈球菌

W (Sterptococcus pneumoniae)、釀膿鏈球菌 % (Sterptococcus pyogenes) ' 金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、小腸結腸炎耳p爾森氏菌 (Yersinia enterocolitica)、綠膿桿菌（pseud〇monas aeruginosa)、以及假絲酵母屬（Candida sp )所構成组群 •，者。 6·如上述第1項所記載之抗微生物劑，其中，含有對一羥基苯甲醛作為有效成分，而該微生物係選自肺炎鏈球菌 (Streptococcus pneumoniae)、釀膿鏈球菌 (Streptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、大腸埃希氏菌（Escherichia col i )、沙門氏菌屬（Salmonel la sp.)、小腸結腸炎耶爾森肇氏菌（Yersinia enterocol itica)、腸炎弧菌（Vibrio parahaemolyticus)、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa)、蠟狀芽孢桿菌（Baci 1 lus cereus)、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)，以及假絲酵母屬（Candida s p ·)所構成組群者。 7.如第1項所記載之抗微生物劑，其中，含有香草素為有效成分，該微生物係選自肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)、釀膿鏈球菌（Streptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌（Staphy lococcus aureus)、大腸埃希氏菌 8 319081 200800140 (Escherichia c〇li)、沙門氏菌屬（Salm〇nella sp )、小腸結谬炎耶爾錢g (Yersinia ent⑽eQlitiea)、腸炎弧 -囷（Vlbri〇 Parahaemolyticus)、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus 、cereus)、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtiUs)，以及假絲酵母屬（Candida sp·)所構成組群者。 8·如第1項所記载之抗微生物劑，其中，含有5,乃4, 一三經基-3，，5，-二甲氧基黃嗣作為有效成分，而該微生物係 •選自沙門氏菌屬（Saimonella sp )以及綠膿桿菌 (Pseudomonas aeruginosa)所構成組群者。 9.含有上述第〗項至第8項中任意—項所記載之抗微生物劑而成之抗微生物性組成物。 “本發明中，微生物乃指細菌、放線菌、氛細菌、古細 =、囷類、酵母、蒸類、病毒等，特別是對於包括人在内的動植物有不.良影響者。 (發明之效果）本發明之抗微生物劑對於各種微生物’特別是對鍵球囷屬、腸球菌屬、葡萄球菌屬、埃希氏菌弧菌屬、假單胞菌屬、芽抱腸^寺^具體言之，對於肺炎鏈球菌、釀膿鏈球菌、知球囷、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、沙严、小腸結腸炎耶爾森氏菌、腸炎弧菌、蜀桿菌、妊苜#叫拍- ，、眾版#园、壤狀芽孢囷枯早牙抱什囷、假絲酵母屬等菌種且右俱田, 生物活性。㈣具有優異之抗微【實施方式】 319081 9 200800140 (實施本發明之最佳途徑）本發明研究者探討白邊山白竹（日稱隈笹）之抗菌效果 w之本質，4瞭解其抗菌有效成分’ W用各種溶劑分離、(iiractionation)白邊山白竹葉片之熱水萃取物。其次，使用石夕膠層析法分離後，使用以ΤΙΧ製備或Ηριχ裝置製備用〇此管柱分㈣製，再使肖各縣譜法蚊所分離化合物 .之構造’同時藉此就13髓之菌種進行抗菌試驗。其結果嫌，現上述對-經基苯甲越、5,7,4’_三經基_3,5，_二甲氧基尹、酮(一下*文中，或稱麥黃酮（tricin))及3_羥基吡啶、反式 :對-薰草酸（反式_對經基肉桂酸）、香草素對於各種微生物頌不知異性之抗微生物活性，而完成本發明。具體說明本發明如下·· 貫％材料使用從日本鳳凰堂公司取得之白邊山白竹二VSasa aibo，rginato)之熱水萃取物(商品名為

侧S)，將該熱水萃取物（下文簡稱為Sa)叫以哭德去除溶劍，而θ β 〇 " — 于· 2g之固形物。據此，確認原料之白山白竹葉片之熱水萃取物含有38%之水分。使用該熱水萃取物藉由各種溶㈣行分離。即，用, 熱水萃取物(Sa)進行萃取，將所得之乙酸乙醋, =除溶劑而得乙酸乙醋可溶性區分(下文簡稱為… a 。水層再用正丁醇萃取後進行同樣處理而分處理所得之乙酸乙- 萃跑q、」丁缽了洛性區分，水層及原料之熱水 a ’就金黃色®萄球菌分別進行抗菌試驗。抗菌 319081 10 200800140 试驗採用管碟法（cup methc)d)。上述管法 4iL ^ ^ , "自无在囷種 :養基之中心放置直徑7.32mm之管碟，滴下試碟使試料溶液以管碟中心產生同心圓狀古；s 己2形成抑制菌種繁殖之抑菌圈。即，抗菌作用及抑二：小有正相關存在，而為可藉抑菌圈之大小而判斷強弱之方法。各區分成分對於金黃色葡萄球菌之

才几囷试驗之結果示於表1中。表1 广-— __ 試驗區 ~:---- 抑菌圈直經fmm、對照 ^ " — -——— i -a* V, ill ΙΠ ) Ύ7ΪΪ — 判i 原料（Sa) ------ 乙酸乙酯可溶性區分（s n ΓΓδΐ~ 一~-—- 1 〇 o 〇 ++++ ~ ----- 1 — /4 \ vj CL 1 J £^丁醇可溶性區分水層 1Z. z3 ------ 8· 37 ++++ + 9· 64 ++~~ 一彳几菌效果分別以++++示相當強，++示有，+示稍有、一示無等符號為其歡標準。表i中，對照之7 32_為管碟之直徑。由上述抗菌試驗之結果，可知乙酸乙酯可溶性區分具有與白邊山白竹熱水萃取物母液幾乎相同之抗菌活性。另一方面，正丁醇可溶性區分及水層區分僅表現稍有抗菌活性。由上述抗菌試驗結果，綠認抗菌活性存在於乙酸乙酯可溶性區分中，所以利用白邊山白竹之葉片熱水萃取物（Sa) 2· 3kg進行乙酸乙酯萃取操作。所得乙酸乙酯層經餾除乙 319081 11 200800140 酸乙S旨而得78g之乙酸乙酯可溶性區分⑺七丨）。所得之Sa-l確認其對於金黃色葡萄球菌之抗菌活、性，結果顯示具有活性。 &對於金黃色葡萄球菌之抗菌活性具有抗菌活性成分之離析精製乙酸乙醋可溶性區分（Sa-1)之離析

將呈現抗菌活性之乙酸乙酯可溶性區分（Sa-l)52g使用中！生秒膠層析法進行區分。分離管之洗提溶劑採用階梯性改變溶劑混合比率之逐級洗提方式（step method)。使用正己烷/乙酸乙醋為5: 5者2. 5l，4: 6、3: =:8者各1 L，以及僅用甲醇2. 5 L進行洗提。洗提成分、隹依據TLC之結果，各斑點之檢測使用紫外光况⑽ ^丁、、結果’將乙酸乙料溶性區分離析為了個區分。

Sa-l-A(90mg).Sa-l-B(250„1g).Sa-l-C

.g)、Sa-卜D(3. 00g)、Sa]-E(ll〇mg)、Sa+F (1. 56g)、Sa-：l-G(30· 0g)。之正It溶解Sa—1_c(3為）於氯仿’加入和氯仿同量之正己烧靜置一夜。社果分雜炎

Sa-1 、、，°果刀離為2層，上層(下文中稱為卜C⑴及下層（下文中稱為Sa+C(2))。 :餾除溶劑可得2. 22g，Sa+C⑵ 以+C⑴之分析、里了侍1.1½。 # = ㈣於〜七⑴2. ^巾_，制式，之洗提溶劑採用逐級洗提方用之,、且成為乳仿岣酮為2〇:1者社，7:3及6: 339081 12 200800140 4者分別為i〇〇mL，僅用丙酮者5〇〇mL。其回收係使用ιι〇個之5〇mL容量之管形瓶。從11〇個之5〇扰管形瓶，依據 ^ TLC，再將在相同位置有斑點之Ν〇·21及Ν〇·22之管形瓶混 •合亚濃縮而得濃縮物（下文中稱為c(1)—C。溶解該濃縮物於0.5mL之曱醇中，使用高效液體層析裝置（HpLc) 之製備用0DS管柱進行離析。 • No· 21及22之管形瓶濃縮物（Sa—卜以^—^之HpLc製備、洗提條件： i 刀離官·和光 sU-Π 5C18HG prep，$ 2〇· 〇賴乂25〇麵，移動層：20%乙腈水溶液，流速：5mL/miη，分離管溫度：3(TC，檢測波長：紫外光260nm，製備34· 5份之主要波峰，而得6〇mg之白色固體文中稱為 Sa-l-C(〇-aa)。 _ 該白色固體（Sa-1 -c(l)-aa)使用重氫曱醇測定％ uc NMR 譜。白色固體（Sa-1 -C(l)-aa)之1u，13c NMR 譜 NMR (500 MHz, CDvOD) . A q / ,, T n U HZ，，7.43 j 1H)H ((:: : 6.94 (d，】=8.6 HZ，晚 7.42 (d，J 麵（12〇 MHz, CD3 ⑽：δ56· 3, m 2, 116 3, 127 9, 13〇 6’刚 6, 154 6，脱 IR (KBr) ： 3179, 1668 cm*1 即：114- 115t：。H NMR譜中，觀測到占9· 74處有】個氫原子之訊號， C f\MR。曰中觀測到δ 192· 8處有訊號而可知搭基之存在。又，4 NMR譜中，觀測到5 3. 91之訊號，Uc NMR譜 319081 13 200800140

中，觀測到5 56· 3之訊號可知其甲氧基之存在。又1η NMR

碏中，觀測到 3 6· 94 (d，J = 8· 6Hz，1H)及 5 7· 42 (d， v J = 8· 6Hz，1H)，3 7· 43 (s，1H)處有 3 個氫原子，]3C NMR

譜中，觀測到占111· 2至154· δ處有源自芳香族環之6個訊號。更在IR譜中，3179cm-i處確認羥基之特性吸收。由上述結果可知白色固體（Sa—卜C(1)-aa)之構造可釐定為 3-羥基-4-甲氧基苯曱醛（香草素）。香草素為已知化合物， •，可以和文獻值進行比較（The Aldrich Library 〇f % aM 4 FT NMR Spectra 第 1 版，第 2 卷，Aldrich Chemical 公司）。另外，可能還有異香草素之異構體存在，所以使用購付之香萆素，異香草素以HPLC之分析用〇DS管柱，和作為试藥之白色固體（Sa—i-c(l)- aa)比較，釐定該白色固體 (Sa-l-C(l)-aa)確為香草素。其次’從110個5〇mL之管形瓶中將依據tlC，在相同位置有斑點之No. 48至No· 55之管形瓶混合並濃縮而得濃馨鈿物（下文中稱為Sa-l-c(l)-b)152mg。再用矽膠管柱層析法進行離析。該分離管之洗提溶劑採用逐級洗提方式，從僅用200mL之氯仿開始，繼以氯仿/丙酮為9· 5 : 〇· 5者 200mL，9 : 1、8 : 2、7 : 3及僅用丙酮者各為i〇0mL，最後僅用200mL之曱醇進行逐級洗提。其回收使用42個5〇此管形瓶。從42個50mL管形瓶中，將依據TLC，在相同位置有斑點之No· 23至33之管形瓶加以混合，經濃縮而得1〇2邶之濃縮物（下文中，簡稱為Sa 一卜c(1)—ba)。該濃縮物使用 ]4 319081 200800140 製備用TLC精製。展開用溶劑使用氯仿/丙酮=7/3。檢測使用紫外光254nm，將收集之矽膠用丙酮洗提，經吸引過濾後，瘵餾去除溶劑而得86mg之淡黃色固體（下文中簡稱為 Sa-l-C (l)-baa)。該淡黃色固體以重氫曱醇測定1H，13C NMR譜。淡黃色固體（Sa-l-C(l)-baa)之1H，13C NMR 譜 6.92 (d, J = 8. 4 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 9 1 H NMR (500 MHz, CD3 0D)： • 76 (s, 1H) C NMR (125 MHz, CD30D) ： δ 116.8, 130.2, 133.4, 165 1 192 8 IR (KBr) : 3168, 1670 cirfi ，助.1，192.8 mp ： 118-119Τ：㈠H NMR譜中，觀測到δ 9· 76處省j個氫原子之訊號，及C NMR瑨中，觀測到占192· 8處之訊號，可知有醛基之存在。又’ H NMR譜中’觀測到（5 6· 92、7. 77處有2個氫原子之8.6112之電子對訊號，13(^題譜中，觀測到（5116.8 至165· 1處有4個源自芳香族之訊號，可知.有對位取代之芳香族環之存在。更由IR譜中，3168〇^處確認有羥基之 ⑩4寸性吸收。由上述結果可推論該淡黃色固體（Sa—卜c(d一 baa)為醛基和羥基在對位取代之對-經基苯甲膝。據此與文獻值（The Aldrich Library of 13C and j FT 丽R Spectra 第1版，第2卷，Aldrich Chemical公司）比較，而確定 A汽巴固體（Sa-1 -C( 1)-baa)為對-經基苯曱酸。

Sa - 1-C(2)之分析將1· 14g之Sa_l-C(2)以丙酮/己烷進行2次再結晶，而得478mg之淡黃綠色固體（下文中稱為Sa—丨―c(2)—a)。該淡黃綠色固體（Sa—丨―c(2)一&)以重氫曱醇測定lH，uc 15 319081 200800140 NMR 譜。淡黃綠色固體（Sa-1 -C(2)-a)之1H，UC NMR譜 -^.Γ^50? Π：βΤLi, 6·81 (d> J = 8*6 Hz*2H)- .IR^oVί1lΓ 2830ODs75 13L ^ 16L ^ 1?L °

Πφ : 213-214〇C lHN腿譜中，觀測到 56.81(d，J=8.6Hz，2H)及（5 7·45 =，J=8.6Hz，2H)處有4個氫原子之2個電子對訊號，在 ·，]3C NMR譜中，觀測到^5 6及51311處有2個碳原子 *之2個大訊號，可推測該化合物為對位有取代之芳香族袞另外在H NMR譜中，分別觀測到在占6· 28 (d， J = 16.0Hz，7.61 (d，J = l6.0Hz，1H)處有 16 〇Hz 之偶合常數之氫原子2個，可知有i組反式位置取代之稀 =在。更在％歸譜中，觀測❹171〇處確認有幾基之卄在。更在IR譜中，3168cnfl處確認有羥基之特性吸收。 =上料判斷該淡黃綠色固體⑻以⑵⑷之構造為反 _ ^對-熏草酸。據此’和文獻值（TheAldrichUbrary〇f an H FT職加伽第丨版，第2卷，川— Γ;1/司)進行比較，衫該淡黃綠色固體(Sa+ LU)-a)為反式-對—薰草酸。

Sa-1-F之分析中，=酸乙醋可溶性區分用石夕膠管柱層析法離析之區分、广F(1.56g)中加入氯仿充分攪拌，去除溶解之液層。然後，於不溶解於氯仿者加入丙 ^；肸液層（下文中筠經盔、 ^而侍丙酮可溶性曰1 '、、、 a — (1))及丙酮不溶性固形物（下 319081 16 200800140 文中簡稱為Sa-1-F(2))。Sa-l-F(l)經餾除溶劑而得 162mg，Sa-l·-F(2)為 1·40g。

Sa-l-F(l)之分析 162mg之Sa-l-F(l)中再加入丙酮溶解並靜置之。然後，回收液層上層之不混濁部分。餾除丙酮溶劑而得1〇邺之黃色固體（下文中簡稱為仏一卜F(1)—a)。該化合物用 HPLC分析用〇DS管柱確認其純度之結果。確知純度極高。又’可知紫外光26Onm處有強大吸收。該黃色固體（3&-14(1)-幻用重氮丙酮測定111，13(： NMR 譜。黃色固體（Sa-l-F(l)-a)之1H，13C NMR 言普 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6, 56 (d, 104. 7, 105. 2, 105. 4, 122. 4, 14 ^NMR (500 MHz, (CD3)2CO) : δ 3.97 (s> 6H) 6 26 J = 2·3 Hz，1H)，6· 74 (s，1H)，7· 39 (s，2H)’ 13CNMR (125 MHz, (CD3)2CO) : 6 56.9, 94.9, 99.7, 〇, 9, 149.1，158.8，163.4，164. 9, 165. 1, 183· 1 IR (KBr) ： 3357, 1615 cm'1 ’ · mp ： 276-277°C MS (FAB) ： m/z = 331 [M++l]

由13C NMR譜確知有17個碳原子之存在，另由DEpT 確知第1級碳有2個，第3級碳有5個，第4級礙有ι〇個存在。1H NMR譜中，觀測到53.970, 6H)處有6個氫原子之單一訊號，13C NMR譜中，觀測到5 56· 9處有訊號，可知有2個等價之曱氧基存在。更在IR譜中，3357cm_] 處確認有羥基之存在，1615cm—1處有氫鍵結合可能性之羰基之吸收。另依據質量分析之結果，分子量為33〇，推^ :能為⑸祕。該黃色固體（Sa+F⑴_a)推測為5, 7, 4,、二羥基_3’，5 -二曱氧基黃酮。和文獻值（c. κ⑽& X. 319081 17 200800140 Β· Zhou，F· Hu，C· Zhang，Μ· Zhang，Phytochemistry， 65，1123-1 128(2004))進行比較，由於和文獻值近似而決定該黃色固體（3&-1-？（1)-&)為5,7,4，一三羥基—3，，5，一二曱氧基黃酮。

Sa-1-F(2)之分析

加入3.00g矽膠於i.40g之Sa—pFu)中使吸附，再使用石夕勝、f柱層析法進行離析。分離管之洗提溶劑採用逐級洗提方式，使用氣仿/丙酮為1〇 : 1，8 : 2者各200mL， 5: 5者，3: 7者，僅用丙酮者各3〇〇mL，僅用曱醇者2〇〇吡進行逐級洗提。其回收使用53個5〇mL管形瓶。從53個50mL管形瓶將依據TLC之結果在相同位置有斑點之Νσ· 42至48之管形瓶加以混合，經濃縮而得46mg 之谈黃色固體（下文中簡稱為Sa—。該淡黃色固體Sa-1-F(2)-a)使用重氫曱醇測定其iH，uc NMR譜。淡黃色固體（Sa- 1-F(2)-a)之1H，13C NMR 譜：

!H NMR (500 MHz> CD3OD) •的（d, J = 2. 3 Hz, 1H) 13 C NMR (125 MHz, CD30D) IR (KBr) : 3449 cnf1 呵> :127-1281 δ 7.21-7.28 (m，2H)，7·99 (dd，J = 4·1·0·7 Hz，1H) , 8 δ 124.4，125.9，138. 3，l4〇· 8，155.9 H NMR譜中，分別觀測到5 7·^至728(m，謂）及. 7；99 (dd5 1^4.1, 0.7Hz, 1H) ^ ο 8. 〇9(d, J=2. 3Ηζ5 1H) 處有4個氫原子，％ NMR譜中，觀測到5124.4至155 9 處有源自芳香族環之5個訊號。更在ir譜中，在3168cnfl 處確知羥基之特性吸收，由上述而推測該淡黃色固體 (Sa-Ι-F(2)-a)為3-羥基吡啶。因此，和文獻值（The 319081 18 200800140

Aldrich Library of 13C and FT 丽R Spectra 第 1 版，第2卷，Aldrich Chemical公司）進行比較，由於與文獻值近似，再加上熔點（文獻值為126至129T：)而決定該淡黃色固體（Sa-卜F(2)-a)為3-羥基吼啶。抗®試驗瓊脂稀釋法（Agar dilution method) 對於反式-對-薰草酸、3_羥基吡啶、對-羥基苯曱醛、 1 香草素，採用瓊脂稀釋法進行抗菌試驗。 m 瓊脂稀釋法乃係將預先溶解之試料溶液再稀釋成為數個階級，並與瓊脂培養基混合，而調製得不同試料濃度之平板培養基。移植菌種於該平板培養基，當試料有抗菌活性時可抑制菌之生長，並以能抑制菌生長之最低濃度為最低生長抑制濃度（Minimum Inhibitory Concentration， MIC)而判斷試料抗菌效果之高低之方法。首先，溶解400mg試料於ImL之二曱亞砜（DMS0)中， ⑩調製得400mg/mL濃度之試料溶液。取0. 5mL之該400mg/mL 濃度之試料溶液稀釋2倍，而調製得200mg/mL濃度之試料溶液，依照同樣方法，分別調製得濃度為lOOmg/mL、 50. Omg/mL' 25. Omg/mL之試料溶液。另外，也備好300mg/mL 濃度之試料溶液。將0. 2mL之上述試料溶液與19. 8mL之 BHI 培養基（Brain Heart Infusion Agar, Bee ton Dickinson，MD)混合，在培養皿中調製成試料濃度分別為 4. Omg/mL、3. Omg/mL、2. Omg/mL、1· Omg/mL、0·5mg/mL、 0 · 2 5 m g / mL之平板培養基。調製同濃度之兒茶酸平板培養 19 319081 200800140 基作為試料之抗菌效果之比較對照。由於兒茶酸難溶於二曱亞颯，而改用滅菌水。 . 試驗用菌種，這次選擇下列13株菌種：肺炎鏈球菌、 %釀膿鏈球菌、腸球菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、沙門氏菌屬、小腸結腸炎耶爾森氏菌、腸炎弧菌、綠膿桿菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌MB_32、枯草芽孢桿菌 ATCC6633、假絲酵母屬菌種。籲，混合上述菌株於2mL之經殺菌處理過之1耶8液體培養 -基（Mueller Hinton BrothR，Bect〇n Dickins〇n，MD)，口調製得濁度為i之菌液（菌濃度為1GVinL)。首先，分別在微孔板之各孔中放入小試管並施與殺菌處理。再注入之菌液於微孔板之各個小試#中。使用微移植器（公司衣〇口 M IT P型）從微孔板之各試管中攝取移到另外之試管中，將菌液稀釋刚倍（菌濃度為ι〇6/此）。再使用上述微移植器將1〇4之該菌液（菌數為i4 籲私植到混入各種濃度之試料溶液之平板培養基中，在阶之恆溫器中培養ΓΜ、時，再評估各化合物之抗菌力。其結果示於表2至6中 319081 20 200800140 表2 反式-對-薰草酸之抗菌試驗結果 + :生長-:不生長菌株名稱濃度（mg/mL) MIC No. 0 0. 25 0.5 1. 0 2.0 3.0 4.0 1 肺炎鏈球菌 + + + + — 一 — 2.0 2 釀膿鏈球菌 + + + + + 一 - 3.0 3 腸球菌 + + + + + + + 4 金黃色葡萄球菌 + + + + + + — 4.0 5 大腸埃希菌 + + + + + + + 6 沙門氏菌屬菌種 + + + + + + + 7 小腸結腸炎耶爾森氏菌 + + + + + + - 4. 0 8 腸炎弧菌 + + + + + 一 — 3.0 9 綠膿桿菌 + + + + + + + 10 蠟狀芽孢桿菌 + + + + + - — 3. 0 11 枯草芽孢桿菌 MB-32 + + + + + + + 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + + 一一 3.0 13 假絲酵母屬菌種 + + + + + — 3.0 21 319081 200800140 表 3-羥基吡啶之抗菌試驗結果 + :生長-：不生長菌種名稱濃度（mg/mL) MIC No. 0 0.25 0.5 1.0 2.0 3. 0 4.0 1 肺炎鏈球菌 + + + + + + — 4.0 2 釀膿鏈球菌 + + + + + + 一 4.0 3 腸球菌 + + + + + + + 4 金黃色葡萄球菌 + + + + + + — 4. 0 5 大腸埃希菌 + + + + + + + 6 沙門氏菌屬菌種 + + + + + + + 7 小腸結腸炎耶爾森氏菌 + + + + + + - 4.0 8 腸炎弧菌 + + + + + - 一 4.0 9 綠膿桿菌 + + + + + + - 4.0 10 堪狀芽孢桿菌 + + + + + + + 11 枯草芽孢桿菌 MB-32 + + + + + + + 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + + + + 13 假絲酵母屬菌種 + + + + + + - 4. 0 22 319081 200800140 表對-羥基苯曱醛之抗菌試驗結果 + :生長-:不生長菌種名稱濃度（mg/mL) MIC No. 0 0. 25 0.5 1.0 2. 0 3.0 4. 0 1 肺炎鏈球菌 + + + + - 一一 2.0 2 釀膿鏈球菌 + + + + 一 — 一 2.0 3 腸球菌 + + + + + + + 4 金黃色葡萄球菌 + + + + + - - 3· 0 5 大腸埃希菌 + + + + 一 - - 2.0 6 沙門氏菌屬菌種 + + + + - — 一 2.0 7 小腸結腸炎耶爾森氏菌 + + — — 一 - — 0.5 8 腸炎弧菌 + + + + — - 2.0 9 綠膿桿菌 + + + + 一一 — 2.0 10 蠟狀芽孢桿菌 + + + + + — 一 3.0 11 枯草芽孢桿菌 MB-32 + + + + + + - 3.0 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + + 一 - 3. 0 13 假絲酵母屬菌種 + + + + + - - 3.0 23 319081 200800140 表香草素之抗菌試驗結果 +:生長-:不生長菌種名稱濃度（mg/mL) MIC No. 0 0.25 0.5 L0 2.0 3.0 4. 0 1 肺炎鏈球菌 + + + + + - 一 3.0 2 釀膿鏈球菌 + + + + — 一 - 2.0 3 腸球菌 + + + + + + + 4 金黃色葡萄球菌 + + + + + + - 4. 0 5 大腸埃希菌 + + + + + - — 3.0 6 沙門氏菌屬菌種 + + + + + 一 - 3.0 7 小腸結腸炎耶爾森氏菌 + + 一 - - - 一 1.0 8 腸炎弧菌 + + + + 一 - - 2.0 9 綠膿桿菌 + + + + + + + 10 蠟狀芽孢桿菌 + + + + + + — 4.0 11 枯草芽孢桿菌 MB-32 + + + + + + — 4.0 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + + + + + + 一 4.0 13 假絲酵母屬菌種 + + + + + - - 3.0 24 319081 200800140 表

囷種名稱 No· 肺炎鏈球菌 j生長濃度（mg/mL) 0.25 〇· 1· 2· 3. + 4.

MIC 釀膿鏈球菌腸球菌金黃色葡萄球菌 + + + + 1. + + + + + + 2· + + + + + + 1· + + 大腸埃希菌沙門氏菌屬菌種 + + + +

綠膿桿菌菌枯草芽孢桿菌 MB-32 + + 11 + + 2.0 2.0 1· 0.5

L 1. 12 枯草芽孢桿菌 ATCC6633 + 13 假絲酵母屬菌種 + + + +

由上述結果可知反式~對_董草酸螻砝社-Α …、早欠對於肺炎鏈球菌、釀版鏈球囷、金黃色葡萄球菌、 $璐并^ 概、、、口 ~炎耶爾森氏菌、腸火囷、纖狀芽抱桿菌、枯草芽 ^ ^ ^ 很早牙孢仟囷ATCC6633、假絲酵 :薦活性。就最低生長抑制濃度（隊）而言，對肺炎鏈球菌為2. Omg/mL，對於釀膿鏈球菌 '腸炎弧菌、蠟狀 319081 25 200800140 牙孢杯囷、枯草芽孢桿菌ATCC6633 3.〇mg/mL，對於金普假、、糸酵母屬囷種為為4.0mg/mL。，、甸球因、小％結腸炎耶爾森氏菌基Μ對於肺炎鏈判、釀膿鏈球g 小腸結腸炎耶爾森氏菌、綠膿桿菌酵母】咖不活性。就最低生長抑制：：鏈球菌、釀膿鏈球g、金普色葡萄^ 對於肺炎森氏菌m… ，、色匍甸球囷、小腸結腸炎耶爾氏口 /版杯囷、假絲酵母屬菌種為4〇mg/roL。 V I，基本甲駿對於肺炎鏈球菌、釀膿鏈球菌、金普色 ”球囷、大腸埃希氏菌、沙η氏菌屬菌種、小腸结腸火色 ^森氏8、腸炎耗、賴㈣、敎芽孢桿g、枯ί :孢桿菌μβ-32、枯草芽孢桿菌ΑΤ⑽633、假屬 ::及很多菌種顯示活性。特別是對於小腸結腸心氏菌顯示強大活性，其MIC為0 5mg/mL。 w林从香草素對於肺炎鏈球菌、釀膿鏈球菌、金黃色葡萄域 =大腸i矢布氏菌、沙門氏菌屬菌種、小腸結腸炎耶爾森氏腸炎弧菌、雜芽孢桿g、枯草芽孢桿_ n、枯草牙孢;t干菌ATCC6633、假絲酵母屬菌種顥示活性。香“ 素也同樣對於很多菌種具有活性，其中，對於小腸結ς = 耶爾森氏菌顯示強大活性，其MIC為〇 5mg/inL。久紙片法（Paper Disk method) 去汾5—，^-三經基—3,，5’一二甲氧基黃嗣之抗菌試驗採用田溶务彳會景> 響時也能判別有無抗菌活性之紙片法。紙片法乃係先調製不同濃度之試料溶液，以專用 319081 26 200800140 片吸收試料溶液並乾燥之。於調配之菌液與瓊脂培養基混合而製成平之板上，放置吸收有試料溶液之紙片。當試料有抗菌活性時，以紙片為中心形成抑制菌種繁殖之二菌^ •圈。由該抑菌圈之大小判斷抗菌效果高低之方法。首先，溶解4mg之試料之5,7,4’-三羥基_3，，5，_二曱氧基黃酮於200 # L之溶劑，調製得20mg/mL之試料溶液。於該20rog/mL之試料溶液100yaL中加入100/zL之滅菌修水，調製得10rog/mL之試料溶液2〇〇#L。其中，加入固6() 之二曱亞砜及滅菌水140//L，調製得5 〇mg/乩之試料溶液400 # L。當二甲亞砜濃度為3〇%時，試料會析出，所以設定二甲亞颯為40%。於5. Omg/mL之試料溶液35〇以L 中，加入140/zL之二曱亞砜及210#L之滅菌水，調製成為2.5mg/mL之試料溶液700 /zL。藉相同方法調製得 1. 25mg/mL，0.625mg/mL之試料溶液。另外，準備4〇%二曱亞石風、6 0%滅菌水之溶液做為對照。同時，準備相同潆产之 #兒茶酸水溶液做為比較用之對照。使用紙片（直徑為署又 8. 12mm)吸收上述溶液70" L後乾燥！供:，使用金黃色葡萄球菌、沙門氏菌屬菌種=^ 耶爾森氏菌、綠膿桿菌、假絲酵母屬菌種做為被檢驗菌株。混合滅菌水2mL於該菌株，調製成濁度為1(1〇S/mL)之菌液。將0. 2mL之該菌液與BHI培養基19. 8鼢混合，製成平板培養基。該平板培養基上放置上述經乾燥之紙片f放在 371之怪溫器中培養’進行抗菌效果之評估。其結果示於表7。表中符號（-）示無抗菌活性。 319081 27 200800140 表7

No. 菌種名稱 5, 7, 4’ -三羥基—3,，5’ 甲氧基黃酮濃度（rag/mL) 兒荼酸濃度（mg/niL) 金黃色葡萄球菌沙門氏菌屬菌種小腸結腸炎耶爾森氏菌綠腹桿菌假絲酵母屬菌種

由上述結果可知5,7,4，_三經基_3，，5，_二甲氧基黃，對於沙Η氏菌屬g、綠膿桿菌具有抗菌活性。又，與兒茶酸相較也顯示其抗菌活性甚高。白迻山白竹之葉片之熱水萃取液（Sa)2· 再用乙酸乙酯萃取，而得乙酸乙酯可溶性區分（Sa-l)78g。以金音色葡萄球菌進行抗菌試驗之結果，顯示抗菌活性存在於^酸乙酯可溶性區分（Sa一1)t。使用中性矽膠管柱層析法將乙酸乙酯可溶性區分離析為7個部分。該7個部分分別為

Sa-1-A(90mg)、Sa-1-B(250mg)、Sa-：l-C(3.36g)、Sa〜l一D (3· OOg)、Sa-l-E(ll〇mg)、Sa+F(L 56g)、Sa-1 -G (30. 〇g)。添加氯仿及正己烷於c(3· 36g)中則分離而得 Sa-1-C(l)(2· 22g)及 Sa-卜C(2)(l· 14g)之 2 層。再使用中性矽膠管柱層析法離析SaKU Xi 22g)而得Sa一p 28 319081 200800140 C(l)-a及Sa-l-C(l)一b。再利用HPLC之製備用〇Ds管柱離析Sa-l-C(l)-a之結果獲得白色固體（Sa_卜 • 60mg。經光譜資料及HpLC分析之結果，釐定該白色固體 • 為香草素。又，再藉中性矽膠管柱層析法離析ja+C⑴-b而得Sa+C⑴七，再經製備用曰批離析而付’火汽色固體（Sa—KdhhaMWg。由光譜資料釐定该淡育色固體（Sa-i-C(1)_baa)為對_羥基苯甲酸。另外，將Sa 1 C(2)-(i.i4g)經2次再結晶處理而得淡黃綠色固體（Sa+C(2)-a)478mg。由光譜資料愛定該淡黃綠色固體 (^^-l-C(2)-a)為反式_對_薰草酸。其次，將Sa_卜分離成為丙s同可溶性Sa+F(1)(162mg)及丙明不溶性

Sa 1 F(2)(1.4〇g)。再添加丙酮於 Sa-1-F(l)(l· 62mg)，分離液層，而得黃色固體（Sa_卜F(1)_a)i〇mg。由光譜資料釐定該黃2固體（Sa+F⑴_a)為5,7,4，_三經基_3，，5，— 二甲氧基黃酉同。又，使用中性石夕谬管柱層析法離析Sa+F 籲（）（.4Gg)而知/炎頁色固體（Sa_卜F(2)_a)46mg。由光譜資料釐定該淡黃色固體m⑵為n&n 、

3瘦基°比咬反式~~對-蒼草酸對-羥基苯甲醛

OMe MeO

香草素 5,7,4’-三羥基-3’，5’-二甲氧基黃蜩一使用瓊脂稀釋法檢測香草素D基苯甲_、反式_ 對-薰草酸、3-經基^定之抗菌活性。其結果，確知香草素、對#工基苯曱盤、反式_對_養草酸、3 —經基吼咬皆具有抗菌 319081 29 200800140 活性。其中，特別是香草素、對一經基苯甲酸對於食物中毒菌之小腸結腸炎耶爾森氏菌具有強抗菌活性。5, 7, 4、三羥，基一3’，5’-二曱氧基黃酮之抗菌試驗採用紙片法。其結果顯 # : 5, 7, 4’-三羥基〜3’，5，—二曱氧基黃酮對於沙門氏菌屬园，綠膿桿菌具有抗菌活性。該抗菌活性較之兒茶酸更強大。 . 本發明研究者就白邊山白竹以外之植物也嘗試上述有 _效成为之卒取。其結果，屬於禾本科之很多植物，例如稻、小麥、玉米、大麥、黑麥、甘蔗、竹、芒草、㈣、董葦等中，也發現含有大量之5, 7, 4,-三羥基-3,，5,-二曱氧基黃酮（麥黃酮）。其具體植物名稱如下：水稻、小麥、大麥、燕麥、黑麥、黍、粟、稗、玉米、四國稗、蜀黍、竹、焚白、甘嚴H、蘆葦、芒草、山白竹、蘆竹 '白銀葦、芝草。禾本科（Gramineae) • 竹亞科（Bambusioideae)(竹科（Bambusaceae)) 山白竹屬:蓬萊竹、鳳凰竹（以上屬竹類）倭竹屬（S/jifoataea) ··阿龜笹苦竹屬（尸:孟宗竹、苦竹、淡竹業平竹屬（Semiarundinaria):業平竹、夜叉竹（以上屬竹類）多茅竹屬（FieioWasius):根笹、東國根笹、女竹、琉球竹箭竹屬（Pseudosasa) ··矢竹、厄島竹 319081 30 200800140 華箬竹屬（Sasa/norpha) ··華箬竹雌竹屬（yirundriimria):東笹、末子笹山白竹屬（Ss S 3 ’亦稱為矮竹屬）·都签、綜整、限整、千島笹（以上屬山白竹類）黍草亞科（Poel ideae) 小麥草屬“《ropyroi]):小麥草、鷂草、青髢草看麥娘屬（Wopecurus):看麥娘、瀨戶茅 ' 荻蘆竹屬（Irundo):蘆竹 — 小判草屬（5riza):小判草、姬小判草雀麥屬（5r〇ffliis):雀麥、狗麥鴨茅屬（Dactyiis):鴨茅晝眉草屬（五ra公rosiis):知風草、雀茅、垂枝雀茅、晝眉草大麥屬UJorudeum) ··大麥、麥萆小麥屬（Tri ticum) ··小麥 φ 黑麥草屬（Loiit/zn):細麥、鼠麥、毒麥黍草屬（Poa):雀帷子、莓繫牧場草屬（Fesiuca):薙刀茅、牧場草、點火莖浮茅屬（Giyceria):田麥、浮茅米茅屬（#eiica):路芝、米茅淡竹葉屬（Lophatherum) ··淡子葉千金子屬（Leptochioa):畔茅藺草屬（jBecinna/inia.):藺草鼠尾粟屬（SporoboJus) ·•鼠尾粟、鬚芝 31 319081 200800140 四國稗蟠蜱草屬（J^eusine):蟋蟀草、狗牙根屬（Cy/3〇do/3):狗牙根蘆葦屬ies):風知草、蘆、蔓蘆顯'子草屬（Phaenosperma) 假稻屬CLeersia) 稻屬（):稻茭白屬（Zizania):茭白燕麥屬vena):燕麥米芒屬（Desiiafflpsia):米芒、廣葉米芒蟹釣草屬（rrisetii/H):蟹釣草、利尼蟹釣草落萆 Λ (Koeleria) ··落萆香茅屬（ffierochloe) ··香茅、深山香茅草蘆屬（/Safaris):草蘆、加那利草蘆糠穗草屬U公rostis) ·•小糠草、糠穗棒頭草屬（尸oJypO^O/]) 、山粟長鬼芝梯牧草屬（Pi^eii/H):梯牧草、大梯牧草野青茅屬（ CaJafflagrostis):野青茅、拂子茅結縷草屬（Zoysia):結縷草、高麗草、鬼芝、 sk (Panicoideae) 野古萆屬（Arundinel la) 芒屬UuJaJia):田中牛毛草、擬牛毛草柳葉著屬（/sac/iiie):稚兒笹、這稚見笹稷屬（Pa/iicii/n):稷、這稷、糠稷稗屬（Echinochloa) ··稗、野稗 319081 200800140 縮箬屬（Opnsffle/ifis) ··縮箬粟屬（Setaria):笹粟、狗尾草、粱、金黃狗尾草雀稗屬（PaspaJLi/H):雀禅、紀州雀稗、島雀稗馬唐屬（Pigi taria):馬唐、秋馬唐 _ 狼尾草屬（Peniiiset·):狼尾草、那比稚草鬣刺屬（Spi/ii/ez):鬣刺甘蔗屬（Sacciiar·):甘蔗、濱芒 • 白茅屬（Imperata):白茅 • 油芒屬（Eccoilopus) ··油芒芒屬（[scau幼ι/s):芒、荻、常磐芒、青茅莠竹屬（#icroste《i腦）：笹萱、腳細莠竹 ίί 白茅屬（Pogonatherum) ··跑茅雁股茅屬（Dimeria) ··雁股茅牛鞭草屬（iiefflartiiria):牛鞭草、小葉牛鞭草束尾草屬:間葦 φ 鴨嘴草屬（Jsci}ae/〇L//B):鴨嘴草、毛鴨嘴草藎草屬（irti?raxo/2):小鲥草杯毛草屬（ :雄刈萱孔穎草屬（Boiijriocijioa) ··姬油芒裂穗草屬（Sciiizoaciiyri liffi):牛草蜀黍屬Odropo^Ofi):雀刈萱萱屬（ Themeda):刈萱高粱屬（Sor呈hais):蜀黍、甘蜀黍、香蜀黍、蘇丹草薏苡屬（Coix):薏苡、川穀 319081 200800140 玉蜀黍屬（Zea):玉米 k用適當溶劑萃取上述植物之荦贫

等分離精箩方& π、茱 Λ夸，再利用HPLC 雕猜衣方法，可分離精製濃縮，所得固形物具例如將水萃取物人，物再用知類、含水醇類（例如田^ . 酸乙,分配等溶解固形物於水中，再使用乙有機二；山:::::葉片5g浸潰靜置於5GmL之各種茱片貝量為100時， — 白与：山白竹之 ~~~~下表所溶劑卒取液中固形物之示

其次’使用1L之a w — 顧去除溶劑時求得;^萃取白邊山白竹之葉片50g’邊示如下表。 V 所含麥黃酮之量（mg)，其結澤以及該固形物令：種卒取液中之固形物之比率，固形物中麥黃_之 ^~4,^ :玄C 广 fl/、〇. 048 339081 34 200800140 溶劑 ®升，物中麥黃酮合景一一乙醇 2. 02 — ------ 1 1 —--- S^ 甲醇 4. 10 —~ 正丁醇 1. 37 異丙醇 1. 54 乙酸乙酯 1. 62 丙酉同 1· 71 ~ 己烷 0 ~ —--—--- 將白邊山白竹之葉片50g於甲醇500mL中浸潰，靜置後，過濾、餾除甲醇而得萃取物5· 05g。其次，依序用己烷、氯仿、乙酸乙醋、正丁醇進行分配’求得固形物量及其中之麥黃酮量。其結果示如下表。溶劑卒取液中固形物之比率（％) 固形物中麥黃酮之比率（％)

'~'~~-Γ~—— ----- -、久’使用500mL甲醇萃取5〇g之白餾除溶劑後，、、容結认t 白邊山白竹葉片， ^. 解於水，再用各種溶劑進杆八亦 . 侍各固形物中所人仃刀配之際，未斤δ麥頁酮之量，其結果如 319081 35 200800140 溶劑 - 固」^色土免黃酮之比率（％) 乙酸乙酯正丁醇

己烷氯仿水層將白邊山白竹葉片之各種含水乙醇萃取液濃縮乾焊而得固形物⑻。溶解⑻於水後，利用乙酸乙醋進行分配，再德除溶劑而得固形物⑹。以固形物⑻為議時，乙酸乙醋萃取固形物(C)之比率如下表所示。另外，固形物⑻ 及固形物⑹中之麥相之分析結果也合併示中。今

含水乙醇中乙醇之比率 (質量％) 將蘆葦之葉里及竹葉之各種含水W萃取液（D)，鶴 319083 36 200800140 除溶劑而得固形物（E)。溶解固形物（E)於水中，使用乙酽乙酯進行分配而得乙酸乙酯可溶性固形物（F)。分析使用= 形物（E) 1 OOg時所得固形物（f)中之麥黃酮量，其纟士茅八下表。，、、、、〇、不如萃取液（D) 100g固形物（E)t~ 麥黃顏I含量（mg) ' ----—_ ___ 100g固形物（F)中麥黃酮含量（mcr、蘆葦葉（25%乙醇） 31 45.T — 蘆葦莖（25%乙醇） 28 竹葉（70%乙醇） 110 Λ------ 64 fl 竹葉（90%乙醇） ------- 150 ---------- V/ Tt · \J T〇9?2~ 本發明之抗微生物性組成物含有至少一種上述化合物（即，香草素、對-羥基笨甲醛、反式-對-薰草酸、3-羥基吡啶、5, 6, 4, _三羥基5, =甲氧基黃酮）（本說明書中或稱為本發明化合二為有效_ 成分之本發明之抗微生物劑可以各種㈣㈣❹ :作為黏膜保護組成物’預防及/或治療細菌感染用组成物，防腐劑' 過濾裝置等之抗微生物劑。本發裂抗微生㈣之_可任“液狀。本發明之抗微生_可任意為經口轉經口投盘之开九"口投與形態為例如錠劑、丸劑、粉劑、：水餘、巧克力、麵包、餅乾、麵條類、各種飲料 ^艮口口形態。非、經口投舆形態為例如注射劑盘 =霜、軟膏等)’检劑等。局部投與劑之劑型為例如將努明之k微生物劑含浸於天_維或合成纖維製紗布等 319081 37 200800140 載體者，或含於口紅等化粧品中者。本發明之抗微生物劑固然以提供人類用途為主，但是人類以外之哺乳類、鳥類、魚類、爬蟲類等也可做為有效之抗微生物劑使用。因此，本發明之抗微生物劑也可提供作為上述動物用之抗微生物劑（例如寵物用醫藥、寵物食品等）使用。本發明之抗微生物劑除動物以外，也可做為各種植物之抗微生物劑使用，另外，做為防腐也很有用。本發明之各種劑型之抗微生物劑之製造除使用規定量之上述化合物之外，尚可使用一般醫藥組成物、化粧品、皮膚用組成物等所使用之油性成分等之基材成分、保濕 •劑、防腐劑等。，、抗微生物劑所使用之水，例如自來水、天然水、精製水等，雖無侷限，惟一般以使用離子交換水等純度高之^ 為佳。上述油性成分為例如角鯊烷、牛脂、豬脂、馬油、羊，蜜蠟等動物性油月旨；撖欖油、葡萄籽油、棕櫚油、 =荷=油、胚芽油（例如米胚芽油）等植物性油脂；液狀石 = '高級脂肪酸酯（例如棕櫚酸辛酯、棕櫚酸異丙酯、肉豆蔻酸辛酯十二烷酯）、矽酮油等合成油、丰入，油性成分具有保護皮膚，賦予柔軟性之效果（以薄膜包覆皮膚表面’防止乾燥，同時賦予柔軟性、彈性之效果)， =快感等需求之性能而可適度组合使用。例如^、烧、撤見油及肉豆蔻酸辛酯十二烷酯之組合乃較佳之一例。調整抗微生物劑之硬度，流動性可使用硬脂酸、硬脂 31908! 38 200800140 =山則酉夂、知故醇、凡士林等固態油，苴中，以庐用硬脂酸及録蝶醇之組合為較佳。 -中以使用硬 - 本發明之抗微生物劑用^V制# q $ ，使本發明之化合物，水、油性成物時’可使用劑。該乳霜化劑雖無特別限制成;=孔霜㈣之乳霜化油醋與自身乳化型單硬脂酸即又用早硬脂酸甘 r 甘油§曰（即，早硬脂酸甘油酯中 ,从、加礼化劑而成者）之組合為較佳。、”，本f明之抗微生物劑，必要時尚可含有安定化劑、保 ⑽卜，治癒劑、防腐劑、界面活化劑等。人該石=1匕劑為例如緩基乙烤聚合物及氫氧化鉀之組口、-更月“夂聚乙二醇等。特別以硬脂酸聚乙二醇及單硬脂义承乙一醉（一 r θ _之1:1之混合物）（聚私之刀子置在丨，000至2〇, 000範圍），因1安定性高，不會分離成水及油，又，荀兩έ日士私+ 口/、女疋f土回有效調整硬度而較佳。相、、、成物在塗布皮膚之際，可上述保濕劑為例如透明質酸納、膠原蛋白、彦蒼萃取物^別是源自木立產蒼之萃取物⑵為佳）、尿素-、^一酉。'甘油'海藻糖、山梨糖醇、胺基酸、料炫嗣幾上述創傷治癒劑為例如尿囊素、甘草酸二卸、萃取物、艾草萃取物等。」述防腐劑則由於本發明化合物本身具有抗菌作用，所以，做為辅助性用途。例如苯甲酸鋼、對經基苯〒酸低級炫醋（例如甲酯、乙酯、丙醋或丁酯等稱為對經基苯甲酸 319081 39 200800140 酯者）、丙酸鈉、混合脂肪酸酯（例如癸酸甘油酯、月桂酸聚甘油-2、月桂酸聚甘油-ίο之混合物）、苯氧基乙醇二^ ,光素201號（黃色色素）、1，2-戊二醇等，其中以對羥基苯 ^甲酸酯、混合脂肪酸酯、1，2-戊二醇為較.佳。上述界面活化劑為例如N-醯基谷胺酸鈉、聚氧化乙烯山梨醇酐單硬脂酸酯等。於必要時，尚可含有橙油、檸檬油、橙皮油、香料等 ” 香氣成分。 ' 含有本發明之抗微生物劑之黏膜保護組成物，預防及/ 或治療細菌感染用組成物，可以有效的抑制感染性細菌從嚴睛、鼻子、喉嚨'耳朵、肛門、陰部等之黏膜，或創傷部位及皮膚侵入體内，有效預防包括醫院内感染之細菌感染，而達成預防及/或治療之目的。黏膜保護組成物，預防及/或治療細菌感染用組成物之更具體之形態有黏膜保護布或口腔組成物。籲 /膜保護布乃係具有通氣性之載體，例如在絲、棉、麻=之天然纖維，聚尿统、聚乙烯、聚丙烯、耐論、聚醋、丙稀酸等之合成纖維、半合成纖維、或該等2種以上之混合物之纖維本身，或纖維或其織布、編布、不織布、紙等藉含浸、喷霧等方法使含有本發明之抗微生物劑而構成者。本說明書中之「保護布」—詞，為方便起見，除布之外，亦指包括纖維本身、紗、紙等者。· 其^體形態，例如紗布、口罩、眼帶、生理帶、衛生棉匕f Μ生、、’氏痒疾處理用紗布、耳栓、水性絆創膏 31908] 40 200800140 等被刀六員為姑生用品之直接接觸黏膜或皮膚之保護布之 1 卜白，等衣類，手套、帽子、襪子、日式布襪子等衣料 -，牀單、棉被套、枕頭套、牀具用品等寢具類，布簾、 5壁紙、地毯等室内裝飾品及室内㈣材料，手術甩縫合線等醫=材料等，可直接或間接接觸皮膚之物品也包括在内。含有本發明之抗微生物劑之口腔組成物，例如樹膠 g =、果凍、含錠、糖菓、口香糖、錠劑、丸劑、洗口劑、 _漱口劑、牙膏、黏膜用膠膜、咽頭部炎症治療用噴霧劑等。由上述實驗例可知本發明之有效化合物，以千分之一至十萬刀之一的濃度存在於山白竹萃取物之固形物中。本發明之化合物做為抗微生物劑使用時，以山白竹萃取物中固形物之使用量之大約千分之一至十萬分之一之濃度即可。该濃度可視使用目的而適當決定。例如要使本發明之化合物含浸在黏膜保護布時，例如將保護布含浸於本發明之化合物之2至20x(千分之一至十 _ ，分之一）質量％溶液（水、醇類、二甲亞颯等有機溶劑或其等之混合溶劑），或噴霧本發明之化合物之2至20x(千分、之一至十萬分之一）質量％溶液於保護布後乾燥即可。該 B守，本發明化合物之含浸量或噴霧量，以本發明化合物之固形物計，宜為2至2〇x(千分之一至十萬分之一）^量％，以6至15x(千分之一至十萬分之一）質量％更佳，尤以8至 12x(千分之一至十.萬分之一）質量％為最佳。本發明之化合物要含在例如樹膠質、果凍、含錠、糖菓、口香糖、錠劑、丸劑（例如笹丹）、洗口劑、漱口劑' 319081 41 200800140 膠膜等之口腔組成物時，可以在製造口腔組入物中’對於口腔級成物原料計，以本發明化 „合物之固形物添加2至20 ( 糸社甘+ ⑼八干刀之一至十萬分之一）質量％量％更佳，/u^。 bX(千刀之—至十萬分之一）質 %為最佳。 2X(千刀之—至十萬分之一）質量，成八。月組或物隨劑型尚可調配適度之一般慣用 •賦开1 Ρ Γ ^S糖、水餘、糊精、環糊精等材等;伯膠、”基纖維細、結晶纖維素、橡膠材寺結合劑，澱粉等崩 .潤滑劑，香料、料I、二欠鎂、魏脂肪酸醋等 ,^ 溥何、卜薄荷醇等清涼化劑等。嗲觸气ΙΓ之黏膜保護組成物以保護布之形態使用時，在部位之保護布(例如紗布等)中含 =:，然後以一天更換1至3次左右更換即可。以手 _ 形態使用時，可有效抑制細菌自缝合患處侵 • Μ心處之炎症，而促進手術部位恢復正常。 ^日狀保護黏膜組成物以保護布之形態使用以防止元内感染時’本發明之保護黏膜組成物之防止感木效果可以長期間續存。者時，宜適當更換咬再产以^ 呆作而其效果減低士、切度財發明之化合物含浸處理即可。時賴W腔級成物之形態使用計，係每次2至15χ(千八夕— 明化合物之固形物如-日攝取！至5_大，、甬刀至十萬分之―)呢左右，例 k吊為1至3次即可。攝取量、攝 319081 42 200800140 取-人數可配合目的而適度增減。 ^本發明之黏膜保護組成物，含有本發明之化合物以固、形物汁’為2至2〇χ(千分之一至十萬分之一）質量％，則對 ^於已往抗生素無效之耐藥性菌也表現顧著效果。又本發明之黏膜保護組成物以口腔組成物使用時， =必要時’適當地含在口中，即可極簡便地預防感染性細 •囷之^染’又能抑制其增殖。另外，口香糖、糖菜等緩效傷随形恶之組成物可長時間發揮藥效而有利。 *本發明之保護黏膜組成物也能以塗液或油之形態供利用。藉由將含有本發明化合物以固形物計為2至20χ(千分之:至十萬分之一)質量％之塗液或油塗布在皮膚等，就能極簡便地予員防感染性細菌之感染，又能抑财增殖。防腐劑本發明可提供含有本發明化合物為有效成分之防腐躑。本發明做為防腐劑使用時，其形態並無特別限制。防 •腐對象之組成物例如食品、飲料水、調味料、化粧品（包括 f液，油）、創傷部位治療用喷霧劑、咽頭部炎症治療用喷務劑寺。在上述對象物中以含有本發明化合物以固形物十_ 2至20x(千分之—至十萬分之一）質量％為宜，其中，以含有6至15X(千分之一至十萬分之-)質量％為較佳’尤乂 3有8至12x(千分之一至十萬分之一）質量％為最佳。過濾設備、本發明又可提供含有本發明化合物為有效成分之空氣過慮設備。其具體之形態為例如換氣扇、空調設備、車内 319081 200800140 空調設備、空氣吸入口、空氣排出口淨機等空氣流通部位所使用之遽網。濟網之」窗、空氣清 ~限制，可列舉如絲、棉、羊毛、麻等^缺纖^料並無特別聚乙烯、聚丙烯、耐m……、纖維、聚尿烷、合成纖維、或其#2種以上un 緘維、+ 不婢右、Μ楚一上之犯。物所構成之織布、編布、 9 、毛些濾網可藉含浸、噴霧等方法使含有本 t明化合物之稀釋水溶液，再經乾燥處理而成。濾網籲本备明化合物含量以固形物計，以2至2〇χ(千分之一至十萬刀之一）貝1%為宜，其中，以6至ΐ5χ(千分之一至 /刀之-）質！％為較佳，尤以8至12χ(千分之一至十萬分之一）質量％為最佳。 319081 44

Claims

200800140 十、申請專利範圍：

0 2.

4·

—種抗微生物劑，係以選自對七基苯甲駿中3至V二甲氧基黃嗣、3，基°比°定及香草素所構成群中至少一種為有效成分。範圍第1項之抗微生物劑，其中，該微生物鏈球菌屬、腸球菌屬、葡萄球菌屬、埃希氏菌屬、匕、門氏菌屬、耶爾森氏菌屬、孤菌屬、假單胞菌屬、芽孢桿菌屬及假絲酵母屬所構成組群者。如申請專利範圍第！項之抗微生物劑，其t，以選自對 -經基苯甲酸及5,7,4，-三經基_3，，5，一二甲氧基黃_ 所構成組群之至少一種為其有效成分者。如申明專利範圍第3項之抗微生物劑，其中，該微生物係選自鏈球菌屬、腸球菌屬、葡萄球菌屬、埃希氏菌屬、沙門氏菌屬、耶爾森氏菌屬、孤菌屬、假單胞菌屬、芽孢桿菌屬及假絲酵母屬所構成組群者。如申請專利範圍第1項之抗微生物劑，其中，含有3一楚基11比咬為有效成分，而該微生物係選自肺炎鏈球菌 (Sterptococciis pneumoniae)、釀膿鏈球菌 (Sterptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、小腸結腸炎耶爾森氏菌 (Yersinia enterocoli tica)、綠膿桿菌（pseud⑽onas aeruginosa)、以及假絲酵母屬（Candida sp·)所構成組群者。 6 ·如申請專利範圍第1項之抗微生物劑’其中，含有對一 319081 45 200800140 羥基苯曱醛作為有效成分，而該微生物係選自肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)、釀膿鏈球菌 (Streptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌 m (Staphylococcus aureus)、大腸埃希氏菌 (Escherichia col i )、沙門氏菌屬（Salmonel la sp.)、小腸結腸炎耶爾森氏菌（Yersinia enterocol itica)、腸炎弧菌（Vibrio parahaemolyticus)、綠膿桿菌 ’ (Pseudomonas aeruginosa)、填狀芽孢桿菌（Bacillus ^ cereus)、枯草芽孢桿菌（Baci 1 lus subti 1 is)，以及假絲酵母屬（Candida sp.)所構成組群者。 7·如申請專利範圍第1項之抗微生物劑，其中，含有香草素為有效成分，而該微生物係選自肺炎鏈球菌 (Streptococcus pneumoniae)、釀膿鏈球菌 (Streptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、大腸埃希氏菌 ❿ （Escherichia coli)、沙門氏菌屬（salmoneiia sp.)、小版結膠炎耶爾森氏囷（Yersini a enteroco 1 i t i ca)、腸炎弧菌（Vibrio parahaemolyticus)、蠟狀芽孢桿菌 (Bacillus cereus)、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtil is)，以及假絲酵母屬（Candida sp.)所構成組群者。 8·如申請專利範圍第1項之抗微生物劑，其中，含有 5, 7, 4’ _三羥基-3’，5’ -二甲氧基黃酮作為有效成分，而 δ玄被生物係選自沙門氏0屬（Salmonella sp.)以及綠 319081 46 200800140 膿桿菌（Pseud⑽onas aeruginosa)所構成組群者。 9· 一種抗微生物性組成物，其係含有如申請專利範圍第1 •項至第8項中任一項之抗微生物劑者。 ❿ 47 319081 200800140 七、指定代表圖··無 (一）本案指定代表圖為：第（）圖。 (二）本代表圖之元件符號簡單說明：

八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：本案無代表之化學式。

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