TWI364260B - Nutritional formula comprising l-(+) lactic acid, its preparation method, and uses of l-(+) lactic acid therein - Google Patents

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Description

1364260 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於-種營養配方、一種製造可復水營養配方 之方法及將L(+)-乳酸用於製備營養配方之用途。 【先前技術】 腸胃感染會引起腹滇，其仍爲導致嬰兒期死亡的主要原， 因之-。由病原體或其毒素所引起之細菌感染主要歸因於· ’ 水或食物的細菌污染。 若5染不能被大體上排除或若外部因素（例如，熱帶或亞 H 熱帶地區之溫濕季節）有利於感染劑（infective牦6价）之生 長，則配方餵養可增加腸胃感染的危險性。典型的細菌性 病原體爲腸病及産腸毒素之菌株，例如大腸桿菌 (Escherichia coli)、沙門氏菌（Salm〇nella)、志贺氏菌 (Shigella)。然而，病毒（輪狀病毒、卡力西病毒（caHcivirus)) 及諸如隱孢子蟲的原生寄生物亦常與嬰兒腹瀉相關聯。 母乳餵養減少了曝露於該等病原體之風險，且爲嬰兒提 供了對抗由食物所帶來之病原體的保護抗體，產生更低的 ® 腹瀉發生率。然而’（例如）若母親必須在工作期間將其孩子 留在家中或留給兒童保健工作者，則母乳餵養並非總有可 · 能。此外，若存在HIV傳播危險則不建議進行母乳假養（生 u 育2000 ’ 27(3)中Weinberg G·之「產後HIV母-嬰傳染之兩難 問題.母乳館養或非母乳银養？」（Weinberg G. The dilemma of postnatal mother-to-child transmission 〇f jjIV. to breastfeed or not? Birth 2000; 27(3)) ) 〇
O:\90\90067.DOC 1364260 一種解決此問題之方法爲添加特定的抗微生物劑，如w〇 96/25054所教不。然而’對於嬰兒來說，應避免在常規基礎 上的抗微生物劑之消耗，因爲其對肝臟存在潛在損傷，且 此外因爲抗微生物劑通常展示不良副作用。 可抑制細g在經復水之嬰兒配方中生長的營養學上安全 有效的方式係I化。商標⑧、Bi〇nan⑧及 Bioguigoz⑧（SOCIETEE DES pR〇mjITS 耶抓幻下的粉狀 嬰兒配方被商業化’在復水時，該等配方具有相對較低之 pH值，因此減小了腸胃感染的危險。 然而，達成該等配方之酸化的製程係耗時且耗資的：嬰 兒配方之基礎成份經乳酸菌發酵直至達成特定的pH值，中 斷該發酵過程’對液體進行巴氏殺菌㈣ewe)並加工成 粉末。該發酵過程必須受到謹慎控制，因爲其可爲病原菌 且亦爲巫菌體提供生長之可能性，此可妨礙發酵過程。 此外ί尤最終産品而言，難以對目前技術發展水平中的 配方之pH值進行十分精叙調節，且不能將其標準化爲十 分特定之值。 ’ 無論營養配方之發酵多麼耗時，但其具有在—延長之日 間内酸化發生緩慢且穩固之益處，只要涉及産品本身之鹿
化’此即爲一優勢。複合組合物(諸如具有-系列完全不F 的、，且如（蛋白質、碳水化合物、脂類）之營養配方）之快速s
化極爲精密且通常會導致某些組份之沈澱、相位分: 直不合要求之配方。 < fE 因此本發明之目的係提供-種具有抑g活性之營養酉
O:\90\90067.DOC 1364260 方，藉此該配方可被更經濟的（無需發酵）製備，該配方爲營 養予上女全且除了乳酸不包含其他抗微生物劑。 此外，本發明之目的係提供一種具有類似於藉由發酵而 酸化之配方的抑制細菌生長之效應的營養配方。 本發明之再一目的係提供一種可復水之營養配方，其包 含自各種來源（如牛乳亦及大豆、稻来、稻子豆種、胚芽粉 及其他蛋白質源）的蛋白質，其尤其適用於嬰孩及嬰兒且其 蛋白質源提供平衡的胺基酸剖析圖，較佳類似於人乳的胺 基酸剖析圖。 本叙明之另一目的係獲得一種嬰兒配方，其經對嬰兒無 副作用之酸而酸化。 【發明内容】 值得注意地是，已發現一種基於以L(+)4t酸之直接酸化 來製備營養配方之方式，該營養配方具有抑菌活性且營養 學上對嬰兒安全。 因此，在第一態樣中’本發明提供一種營養配方，其中 該配方在其液態之PH值範圍爲3.5至ό，其中該配方包含乳 酸且藉此至少7〇重量❶/◦的該乳酸作爲L(+)-乳酸之對映異構 體而存在’其特徵在於該配方被直接酸化。 在第二態樣中，本發明提供一種液體配方，其可藉由對 根據本發明之配方以水來復水而獲得。 在第三態樣中，本發明提供一種製備根據本發明之粉狀 營養配方之方法，其包含以下步驟： 一混合並水解碳水化合物源及/或蛋白質源，
O:\90\90067.DOC I364260 一添加經稀釋之L-(+)乳酸，直至獲得約3·5·6的pH值。 在第四態樣中，本發明提供一種將經單離之L(+)·乳酸用 於酸化營養配方之製備的用途。 在另一態樣中，本發明提供一種將經單離或純化之以十). 乳酸用於防止病原體在營養配方中生長的用途。 本發明之一優勢在於：該可復水之配方顯示了抑菌活 性’且可避免發酵步驟。 本發明之另一優勢在於：其首次提供了一種直接酸化之 營養配方，該營養配方包含L(+)乳酸對映異構物且其適合 於嬰兒營養。 本發明之又一優勢還在於其提供一種可快速製造的酸化 營養配方。 【貪施方式】 在本說明書之上下文中，詞語"包含•，被認爲係指"其中包 括”。不應將其理解爲指"僅由……組成”。 在本發明之上下文中，應將L(+)-乳酸理解作s(+)-2-羥基 丙酸的均等物。 術语"直接酸化"係指在營養配方之製備過程中，將酸直 接添加至營養配方中的事實。L(+)-乳酸之酸性並非藉由配 方之發酵過程而獲得，其中乳酸菌産生乳酸而因此該配方 紅通* 2-1〇小時的時間間隔被連續酸化。 術°。蛋白質源”非意欲被理解爲僅包括蛋白質，而亦包 爲蛋白原的任何物質，意即，可被人類或動物體利用以 成蛋白貝。除了完整蛋白質（intact protein)之外，實例還
O:\90\90067.DOC -9- 1364260 有經水解之蛋白質及游離胺基酸。 藉由分析法來偵測活的或死的乳酸菌之存在或該等酸化 用細菌之代謝物之存在，可容易地測定配方經直接酸化之 事實。 舉例而言’定量DNA分析可適用於測定配方是否已藉由 礼I菌發酵或被直接酸化^乳酸菌之物種特異性探針 (species-specific DNApr〇be)已於科學文獻中被描述且可 爲熟悉此項技術者所瞭解並使用。 若營養配方包含發酵細菌之細菌DNA之量高於對應於 1 〇5細菌/g配方（乾物質）的DNA，則配方已經發酵。 可根據營養配方之剩餘成份來選擇心測定該營養配方 ’是否已經受發酵過程的其他方法。舉例而言，若配方係基 於完整蛋白f，則可測定_體游離胺基酸、小肽（small W)及/或非蛋白質氣，因爲發酵用之乳酸菌的活性改變 了該等化合物之濃度。 對發酵細菌之特定轉的發酵活性或新陳代謝而言，游 離胺基酸、肤及其他代謝物通常爲特定，且在已藉由疆 分析測定k後，將對料代謝物之存在進行分析以確定 (例如）何種乳酸囷已經使該配方發酵。 在本發明之上下文中，術言£， 们以其液態”係指配 =方（例如耐儲存或料液體配方），或者可爲粉狀配方戈 曰 ”〜心即 <曰1¾常藉 置的水添加至預定量的輪_此财十丄 經 妁杨狀配方中而獲得之液態
O:\90\90067.DOC 1364260 或經復水之營養配方。通常，對於特定粉狀配方而言，水 及/或粉末的量爲特定。 關於營養配方之總乳酸，主要存在L(+)-乳酸，意指以重 量計至少70%、較佳至少80%、更佳至少90%、更佳至少95% 的乳酸以L(+)形態存在。例如，總乳酸之96%、97%、98% 或99%以L(+)-乳酸之形態存在。 術語"經單離之”或”經純化之，，L(+)_乳酸係指其中L(+)對 映異構物相對於另一乳酸對映異構物以上述重量百分比而 存在的乳酸。 在本發明之上下文中，術語"可復水，，之配方係指配方可 基本上以粉狀或其他主要乾燥結構之形態存在且可尤其藉 由添加界定量的液體(如水)並視情況(例如)攪拌而製備的 事貪。 在本發明之上下文中’於本發明之製造之上下文中的術 語，，溶液"不應被理解爲其中所有成份均完全溶解的液體。 二反戈，=方便起見，術語”溶液”㈣於當實際上存在乳液 5.5之 5.0之 該嬰兒时m在復权後的跑較佳在 =内，更佳在峨5.3之範_，甚Μ佳在45至 把圍内，例如4.6至4.8。 在本發明之—實施例中，該營養配方爲 舉例而言，其絲狀且可復水，< / S養 在1 以次者爲液態即飲之配方。 貫也例中，根據本發明之營養 在另一音# & + 货aG万爲嬰兒配方。 在另貫施例中，根據本發明 臀配方進一步包含蛋
O:\90\90067.DOC -11- 1364260 白質源、碳水化合物源 在包含蛋白質源之營 含選自下列之群的蛋白 乳清蛋白、大豆蛋白、 蛋白，及/或其混合物。 及脂類源。 :配方的實施例中’該蛋白質源包 質源··全脂或脫脂乳粉、酪蛋白、 稻米蛋白、稻子豆種蛋白、胚芽粉 在根據其令蛋白質源包含乳清及/ 營養配方之又-實施例中，，敗以京白之實轭例的 例中該酪蛋白及/或乳清蛋白係完敕 或未經水解。 、夂 該配方亦可包含例如經水解之蛋白質源或植 2源’ Μ該等經水解之蛋白質源爲例如部分或 水解之乳清及/或酪蛋白。 、·'二 在一實施例中，根據本發明之方法 μ t万法包含添加脂類源的另 —步驟。在一較佳實施例中，兮 Τ Μ加脂㈣、之步驟在添加 L_(+)乳酸之前執行。 較佳地，該配方不包含用於酸化嗜总 敗1G邊管養配方之細菌的剩 餘物、廢棄物或殘餘物。相反，該配方包含活的益生菌 (㈣bi0tics) ’例如可以粉末形態添加至粉狀營養配方之以 膠囊密封、經喷霧乾燥之益生微生物。 根據本發明之產品可以任何合適的方式獲得。原則上， 適用於營養配方之成份可係選自若干不同源。 例如，蛋白質源可選自動物及/或植物來源。可使用（例如） 來自豆莢（如大豆蛋白）、縠類、肉類、或奶類之蛋白質。可 選擇例如全脂乳及/或脫脂乳及/或其各自的粉劑。該蛋白質 源較佳包含乳清及/或路蛋白。絡蛋白可爲鹽（路蛋白納或
O:\90\90067.DOC •12· 1364260 鉀）、微胞（micellar)、經酶促水解的形態或為另外經加工之 路蛋白。乳清蛋白可爲甜或酸乳清，且可爲經水解或未經 水解。若使用甜乳清，則可將其處理至最終移除CGMp片斷 (參看，例如EP 0880 902卜可藉由酶促或藉由酸的輔助來 執仃水解。其可爲完全或部分水解，生成聚_、寡$ _肽或游 離胺基酸。較佳將未經水解之路蛋白及/或乳清蛋白用於製 備根據本發明之配方。 若將乳蛋白用作蛋白源，則該乳蛋白可爲（例如）酪蛋 白、乳清或進一步純化之片斷（fracti〇n)，如乳白蛋白 (lactalbumin)。該營養配方較佳包含以總蛋白質源之重量百 分比計30-70%、較佳40-60%的乳清及70-30%、較佳6〇_4〇% 的路蛋白’更佳爲45-55%的乳清及55-45%的路蛋白。 舉例而言，該配方可以牛乳爲基礎，其中酪蛋白與乳清 蛋白的比例不變。在此實施例中’該配方爲以酪蛋白爲主 的配方。在替代實施例中，其可具有經改變之酪蛋白與乳 清蛋白的比例，意即，一種經修改之配方，其中乳清蛋白 之比例等於酪蛋白或顯著多於酪蛋白。或者，根據本發明 之配方可爲”全乳清"配方，其中乳清蛋白可爲（例如）唯一的 蛋白質源。 該蛋白質源可提供8-20%的該營養配方之能量。該蛋白質 源較佳提供9-17%、更佳10-15%(例如12%)的該配方之能 量0 若欲製備嬰兒配方，則該營養配方中的碳水化合物源可 爲適用於嬰兒配方之碳水化合物。典型的碳水化合物源包
O:\90\90067.DOC 13- 1364260 括薦糖、麥芽糖糊精、麥芽糖、乳糖、澱粉糖漿、澱粉糖 聚乾粉、稻米糖漿乾粉、殿粉、及其類似物。該碳水化合 物源較佳包括嬰兒容易消化並吸收的乳糖及澱粉或其衍生 物殿私及/或麥芽糖糊精源可爲（例如）穀類粉或其衍生 物’尤其小麥、大麥、稻米及/或玉米粉；及/或殿粉，尤其 J麥大麥、稻米、木薯、馬龄箸及/或玉米殿粉。亦可存 在匍萄糖及/或果糖。 對於足月（full term)配方而言，碳水化合物源較佳包含乳 糖’其可至少部分地由（例如）全脂、較佳脫脂乳粉提供。 例如，嬰兒配方可包含以重量百分比計5 25%、較佳 10-20%、更佳12-18%的麥芽糖糊精。 可消化之碳水化合物源可提供例如5〇_7〇%的該配方之能 置。該碳水化合物源較佳可提供55_65%、更佳57·63%(例如 60%)的該配方之能量。 脂類源可包含例如任何脂肪、油類或其他脂類，其適用 於諸如嬰兒配方之營養配方。典型的脂類源包括乳脂、紅 化子油、蛋黃脂、芥花子油（Can〇la 〇il)、撖欖油、椰子油、 棕櫚油、棕橺仁油、棕櫚油精、低芥酸菜籽油、豆油、葵 花籽油、魚油、及含有長鏈、多不飽和脂肪酸的微生物發 酵油。該等油類可爲高油酸形態，諸如高油酸葵花籽油及 尚油酸紅花子油。該脂類源之形態亦可爲自該等油類（諸如 棕櫊油精、中鏈甘油三酯（MCT))及脂肪酸之酯衍生之片 斷，其中§亥等脂肪酸爲諸如花生四稀酸、油酸亞油酸、棕 櫚酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸、亞麻酸、油酸、月桂酸、 O:\90\90067.DOC -14- 1364260 癸酸、辛酸、己酸及其類似物。 若欲將配方用於早產嬰兒，則脂類源較佳含有中鏈甘油 二酯；舉例而言，其含量爲以脂類源之重量計1〇_4〇%、較 佳 15-35%。 脂類源可提供18-40%的配方之能量，例如，該脂類源較 佳提供20-35%、更佳25-30%(例如27%)的配方之能量。 嬰兒配方可進一步含有經設計以滿足人嬰之營養需要的 成份。詳言之，嬰兒配方較佳爲”營養學上完整"；意即其 包含充分的營Μ以在-延長之時期峰持健康人類生 命。該酉己方較#包含推薦量之維他命、㈣質及微量元素 (trace element) 〇 例如，該配方可包含較佳以生物可利用之鹽爲形態之 鎮、鋅、鐵、銅、填、石西。此外，該酡古 Γ成配方可包含例如維他 命 C、A、Ε、Β卜 Β2、Β6、Β12、D3、们/私一 K1(葉綠職）pp(煙酿 胺）、1)-泛酸鈣（(^1(^111-〇1抓11^1^6)、〇-生物素、牛磺酸 (Taurin)及其在營養學上合適之混合物。 此外，該配方進一步包含（例如）食品級乳化劑，如卵磷 脂0 例如具有特定營養益 該配方可進一步包含另外之成份 處或其他所要之效果的成份。 方式，且製造 依據特定偏好 爲製備可復水之配方，存在有大量合適的 者具有各種可能來使製程適合於特定要求並 來修改最終產品。 爲本說明之㈣’下文示例性地描繪兩種替代程序
O:\90\90067.DOC -15· 1364260 例如，可以給定順序執行下列步驟： 、此合非脂肪固體（主要爲蛋白質源及/或碳水化合物源） 並添加水以獲得溶液， 添加礦物質， 將該溶液預熱至30-70、較佳4〇_6〇〇c， 添加脂類昆合，例如内後（in-line)入該經預熱 之溶液， 在间壓下使包含該脂類源之溶液均化， 將該溶液冷卻至15°C以下， 添加L(+)-乳酸， 加熱該溶液加熱以充分減少細菌負載量咖价如1〇叫， 視情況：蒸發步驟，以增加乾物質並便於乾燥， 乾燥’譬如藉由喷霧乾燥， 添加另外的礦物質及/或維他命， 根據本發明之製程可包含另外的步驟’例如，在添加 L(+)-乳酸之後，以食品級鹼及/或酸將pH值調節至3 5_6之 間。此步驟可有利於更精確地將該pH值（精密）調節至選定 良好的產品特徵，下文給出一替代 儘管上述程序產生了 順序，例如： 混合非脂肪固體（主要爲}白質源及/或碳水化合物源）並 添加水以獲得溶液， 添加礦物質， 將該溶液冷卻至15cc以下，
O:\90\90067.DOC •16- 1364260 添加L(+)-乳酸， 將該溶液預熱至30_70、較佳4〇_6〇〇c， k加知類扣合（hpid_mix)，例如内嵌入該經預熱之溶液， 在高壓下使包含該脂類源之溶液均化， 加熱該溶液以充分減少細菌負载量（bacterial load)， 視情況：蒸發步驟，以增加乾物質並便於乾燥， 乾燥，譬如藉由喷霧乾燥， 視情況：添加另外的礦物質及/或維他命， 下文將以更詳細的方式描述上文所給出的該等兩個示例 性替代製程中的第二個。 相應地冑蛋白質及碳水化合物源（例如脫脂乳粉、路蛋 白、乳清及/或麥芽糖糊精）可被水解或分散於水中，以獲得 =重量計乾物f含量爲1 8_33%、較佳爲23·28%的分散液或 >谷液。爲溶液提供時間以使蛋白質完全水解。 = ν驟中，可將礦物質添加至該溶液中。然而，可 在最後添加等量的礦物質及維他命。 此後，較佳可將溶液冷卻至低於15。〇、較佳低於1〇。匸之 溫度。 可以任何合適的方式添加L(十)-乳酸。例如，可以濃縮粉 末之开y心添加足夠置的L(+)_乳酸。較佳地，以水稀釋L(+)_ 礼西文直至獲知5-20重量％、較佳5_12重量％的L⑴乳酸溶 液L()乳馱在市面上有售，例如在商標puRAC⑧FCc 5〇 (PURAC biochem, Arkelsedijk 46, P〇 Box 21, 4200 AA Gorinchem，荷蘭）之下。
O:\90\90067.DOC -17- 1^04260 可將L⑴-乳酸溶液緩慢地添加至包含蛋白質源（如牛乳 蛋白質）及/或碳水化合物的溶液。較佳在低於i5〇c、更佳低 於10°C的溫度下進行該添加/混合。 所添加之L(+)-礼酸的量取決於欲獲得之確切的阳值。較 佳地是，基於該配方之乾重量，其可包含〇5_35%，較佳 1-3%，更佳 1.7-2.3%的 L(+)·乳酸。 在另一步驟中，可以一種或多種食用酸或鹼將pH值調節 =所要之水平。實例爲檸檬酸及/或〖加。該沖值較佳被調 或至4.0至5.0，更佳爲4.2至4.8，更佳爲4.3至4.6。 可在此時添加脂類源（若存在）。較佳在溶液被預熱至 .歡、較佳45_55γ之後可將其以内嵌式添加。藉此， 可將包括大豆㈣脂（SGy leeithin)之脂類源直接添加至該 具有在預熱器及高壓均化器之間流動之溶液的管中。 該/奋液可經受熱處理，以減少細菌負載量或便於均化或 乾燥例如，可（例如）藉由以K〇rec〇蒸汽喷射器進行直接蒸 /飞喷射將冷液於95-120。(：、較佳ι〇〇_ι1〇〇(：：加熱2至15秒， 較佳3至8秒。 舉例而言，亦可在乾燥之前執行均化步驟，以獲得均勻、 規則的粕末。因此，可將該濃縮溶液預熱至65_8〇。匸、較佳 7〇_75°C，並在（例如）1〇〇_2〇〇巴、較佳ΐ3〇 ΐ7〇巴的壓力下 均化。合適的設備之實例可爲Tetra_Laval高壓均化器。 爲&加乾物質含量’在乾燥溶液之前執行蒸發步驟係有 利的。舉例而言’可將受熱溶液快速放入（flash into)蒸發器 中，例如放於Scheffers或Niro降膜式蒸發器中，於其中該
O:\90\90067.DOC -18- 1^64260 溶液被濃縮至高達3GJ_6G%'較佳4G_5q%的乾物質。 &在噴2乾燥之前，可向溶液中添加大豆卵磷脂，尤其於 夂化之則已L添加脂類源且無大豆卵磷脂的情況下。 例如，可執行噴霧乾燥以獲得適用於以水來復水之粉 末亦可此有並選擇其他乾燥方法，例如流化床乾燥、冷 滚乾燥、捲筒式乾燥。 若需要，（例如）可在最後將額外成份直接添加至粉末而 非溶液中。例如，對於感熱性成份，例如某些維他命、其 他有盈代謝物、例如胺基酸（例如牛續酸（Taudne)、l-肉驗 (、身ltine))之必須或非必須分子、及某些生物活性分子 (若尚未被添加至溶液）而言尤其如此。因此，該粉末可由能 提，一定量的基本維他命之維他命預先混合物而完成，該 等置足以涵蓋基於所推薦之該復水配方之日常消費而計算 的基本需要。 * /粕末以1 〇〇· 1 50 g/9〇〇 mi的水而被復水，則可獲得 3.5-6、較佳3.5-5.5、更佳4-5的卩11值。 &僅以例示方式給出下列實例而不應將其理解爲限制本申 請案之標的物。除非另外說明，否則百分比及分數㈣)係 以重量計。 實例1 : -藉由使用下列表1所給出之成份，製備一種經直接酸化、 含乙-(+)乳酸之粉狀嬰兒配方。
O:\90\90067.DOC -19- 1364260 表1 :以百分比計的用於嬰兒配方之成份 ------------ 粉末 43 糊精1 15 棕櫚油 13 脫脂乳粉 5.4 菜籽油（低芬酸） 4.7 椰子油 — - 4.4 酿·蛋白鉀 4.4 葵花籽油 2.7 乳酸2 2 大豆卵磷脂（於62%) 1 水 3 選擇具有D.E.(葡萄糖當量）24-32之1麥芽糖糊精。 L(+)-乳酸獲自PURAC®，作爲具有至少95%(L-異構體） 的立體化學純度之5 0重量％的水溶液。 根據所推薦的值添加維他命及礦物質。 爲製備粉狀、可復水嬰兒配方，使麥芽糖糊精、κ_酪蛋 白及脫脂乳粉在約50-60。(：的自來水中水解，以獲得溶液。 該溶液被標準化成總固體含量（1[3)爲25%。調節水解時間以 獲得良好的蛋白質水解。 向該溶液添加一些礦物質（檸檬酸鈣、κα、檸檬酸鉀、 檸檬酸鈉及MgCh)，接著將該溶液冷卻至8。匸。 在約4°C的自來水中將L(+)_乳酸稀釋至約1〇%的濃度。
O:\90\90067.DOC -20- 1364260 在低於8°C的溫度下，向經水解成份之溶液中緩慢添加 L(+)-乳酸。 以KOH及檸檬酸將pH值調節至介於43_44之間的值。 在雙罩貯油槽（double-jacket oil tank)中將溶液以及包含 棕搁油、椰子油、低芥酸菜籽油、葵花籽油及大豆卵磷脂 的脂類源預熱至50〇C。接著將該脂類源以内嵌式添加，意 即，直接加入該於高壓均化器之前具有流動産品之管中。 藉由蒸汽喷射閥進行直接蒸汽噴射而將包括所添加之脂 類源的溶液加熱至105°C，並保持在該溫度5秒。 接著，直接將產品快速放入蒸發器中，於其中該産品藉 由Scheffers降膜式蒸發器被濃縮至高達4〇_5〇%的總固體 (乾物質）。 此後，該濃縮溶液被引導至用於均化之緩衝貯槽（buffer tank)中，其中將該溶液預熱至75〇c’藉由高壓泵在丨5〇巴下 均化，並接著進行喷霧乾燥。 接著向該粉狀溶液供應維他命預先混合物、礦物質預先 混合物及少部分的麥芽糖糊精。 所獲得之粉末爲尤其適用於嬰兒的配方，其可以自來水 (例如，20 g粉末137如水）而復水。所推薦之用於三個月大 I孩的日常服用量可爲Η〗^的粉末及9〇〇 W的水。 該經復水之配方的pH值爲4.5。 實例2:酸化營養配方之替代製備 以根據實例1之步驟及成份來製備嬰兒配方，其不同之處 在於該製程步驟具有一不同的順序：
O:\90\90067.DOC -21- 1364260 混合並水解碳水化合物及蛋白質 添力α —除大豆卵構脂之外 -將該分散液預熱至約50°C -將該脂類源預熱至約50°C 的脂類源（内嵌式）， ••均化該混合物， -添加L( + )-乳酸， •將pH值調節至4.3-4.4， -將該混合物加熱以減少微生物負载量， -將該混合物快速放入蒸發器中， •添加大豆卵磷脂（内嵌式）， ••喷霧乾燥該混合物以獲得粉狀配方。 所獲得之配方基本上與實例丨中的配方相同 實例3 : 使實例1之嬰兒配方及不同的商業上可獲得之嬰兒配方 糟由各種腸胃病原體而接受微生物學測試。表i列出了不同 的配方並顯示在復水之後所獲得之pH值。 表1 ··不同嬰兒配方之比較 産品 主要特徵 pH1 A 經礼清修汶(Whey-adapterf、 6.8 B 酪蛋白佔優勢 ~~-- 6.8 C 基於大丑 6.9 D L經乳清修改、經發酵 4.7 E 經直接酸化 4.5 F 經直接酸化 5.0 G 經直接酸化 5.2 O:\9_067.DOC -22· 1364260 微生物培養(MICROBIAL CULTURES) 大腸桿菌（Escherichia coli)〇157:H7、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa)、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、仙人掌桿 菌（Bacillus cereus)、鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium)、 志賀氏痛]疾桿菌（Shigella dysenteriae)FSM 1、2及3、歧氏腸桿菌 (Enterobacter sakazakii)，霍亂弧菌（Vibrio cholerae)0:139、白色念 珠菌（Candida albicans)及輪狀病毒（R〇tavirus)WA(人類輪狀病毒 血清型1)、Hochi(人類輪狀病毒血清型4)及SA11(對應於人類輪 狀病毒血清型3的猿輪狀病毒）均爲來自Nestle研究中心 (Nestl6 Research Centre)的菌株屬類。位於該等物種名之後 的數字表示菌株的血清型。該等菌株很可能代表相同物種 的其他病原體菌株。自該等物種之任何病原體（其未經特 定選擇或在基因上被修改）將可能在下文所給定之試驗裝 置中相應地作出反應。 挑戰測試（CHALLENGE TEST) 使細菌菌株於37°C在腦心浸液（BHI，Oxoid CM225)中單 獨生長18至20小時。在以Tryptone Salt (0· 1%膜腺（〇x〇id LR42 + 0.85% NaCl)稀釋至 ca.105 CFU/ml 的濃度之後，屬 於相同物種之菌株的懸浮液被放入池中，並隨後將1 ml的 等分試樣（aliquot)添加至含有100 ml的新製備之復水婴兒 配方的瓶中，因此産生ca· 103 cfu/ml的初始濃度。對於念珠 菌屬按照相同的步驟，除了其係生長於Yeast及Malt萃出物 培養皿（extract broth)(YM，Difco 0711-17-1)中。 在接種之後，將該等瓶於4、25或37°C的水槽中進行孵 O:\90\90067.DOC -23· 1364260 化，並藉由在0、3及6小時之後進行計數來監控生長或失活 (inactivation)。爲此目的，採用下列媒質：用於腸桿菌科之 紫紅膽汁葡萄糖培養基（VRBG、〇x〇id CM 485)、用於B· cereus(仙人掌桿菌）之MYP (Merck 5267)、用於s· aureus(鼠 傷寒沙門氏菌）之Baird-Parker Agar (Oxoid CM 275)、用於 V_ cholerae(霍亂弧菌）之霍亂媒質（TCBS、〇x〇id cm 333)、
用於Ent. Faecalis(乳酸球菌）之KF鏈球菌培養基（〇x〇id CM 701)、用於C. albicans(白色念珠菌）之〇〇18 (〇x〇idCM729) 及用於Ps. aeruginosa(綠膿桿菌）之假單胞菌屬培養基 (Oxoid CM559)。爲測定該等結果之可複製性，一式三份地 執行部分挑戰測試。 結果及討論 微生物特性(MICROBIOLOGICAL QUALITY) 爲證實該等起始材料本身未受污染，執行幾個微生物測 試。結果（資料未圖示）表明所有嬰兒配方都不含有（< 1 cfu/ml 的復水產品）Enterobacteriacae(腸桿菌科）、Ps aeruginosa(綠膿桿菌）、Β· cereus(仙人掌桿菌）、s·犯代⑽（鼠 傷寒沙門氏菌）、Enterococci(腸球菌）、酵母及黴菌。總平 板計數（Total plate count)小於 50 cfu/ml。 微生物病原體在經復水之嬰兒配方中的遭遇 在第一挑戰測試中’分別以八種不同的細菌性病原體及 一種腐敗酵母（spoilage yeast)來接種四種商業上可購得之 嬰兒配方。吾人發現，溫度對各種病原體之行爲起主要影 響。在4°C，所測試之病原體於復水後6小時内在任何産品
O:\9O\90O67.DOC -24- 1364260 中明顯不生長亦不死亡。在25〇c，多數細菌在中性pH産品 中表現出些（儘官較緩慢）生長，但在酸化産品”D"中未發 生生長。酵母白色念珠菌（yeast C. albicans)在任何該等産 品中不生長亦不相繼死亡。 在37〇c，所有細菌在甲性{)11産品中均生長得很好，但是 在具有較低PH值的嬰兒配方t未發生生長或僅發生了極小 的生長。對於綠膿桿菌而言，於37〇c曝露至該經酸化之產 品具有明顯的殺g效果。白色念珠料數再次顯示出極小 的變化。 隨著該等結果顯# 了經發酵之産品對病原菌具有明顯的 抑菌作用’引發了是否此僅由於存在乳酸及減小之阳值而 導致抑或是否涉及其他抑制因子的問題。爲弄清此問題， 執灯了第二挑戰測試，其中將已發酵之産品（"d")之抗菌特 性與經酸化之未發酵産品（"E")(實例1中所獲得之配方）之 抗菌特性進行比較。 吾人發現，就病原體之遭遇而言，其是否曝露於非發酵 經酸化産品或曝露於經發酵之産品並無任何區另。腸桿菌 科（既傷寒沙門氏菌、志賀氏痢疾桿菌及大腸桿菌〇 在所測試之條件（於25及37%下6小時）下抵抗性非常好，而 對於霍亂弧菌而言，曝露於此環境下在兩種溫度下均报快 會死亡。在三小時之内就已不再能檢測到霍亂弧菌。 在相同的試驗中，進一步調查pH值之影響；經發現，在 pH值5.0時沙門氏菌及大腸桿菌〇157已不再受到抑制’而志 賀氏菌在pH值5.2時開始生長。另一方面，對於弧菌而言二
O:\90\90067.DOC -25- 1364260 此pH值仍具有殺菌性。 此實例研究顯示，當在復水之後被儲存於25或37。〔時， 中性ΡΗ嬰兒配方可支持腸病原體之迅速生長。爲防止該等 產品變得有害，應將其僅儲存較短時間或置於冷凍條件 下。對酸化配方而言，最相關的病原體在5〇或更低的？11值 下不能生長。藉由乳酸菌發酵而酸化之產品具有與藉由直 接添加乳酸而酸化之配方相同的特性，且在不能進行母乳 餵養的情況下，兩者均可提供用於嬰兒餵養的安全替代物。 此外，若與藉由發酵而酸化之配方相比，以L(+)_乳酸對 粉狀嬰兒配方進行直接酸化充分地縮短了製造時間及損 失。 O:\90\90067.DOC -26-

Claims (1)

  1. 2 4 5 7. 8. 。昨π 第092135828號專利申請案 中文申請專利範圍替換|公告表1 备、申請專利範圍： •種營養配方，其包含乳酸、一蛋白質|源；—一碳水化合 原及知類源，其特徵在於將乳酸添加入該配方以 直接酸化該配方，其中至少70重量％的乳酸以[_⑴乳酸 對映異構體存在，其中該配方在其液態中之pH值範圍爲 3.5至6，且其中該配方不含額外之穩定劑。 如申請專利範圍第！項之營養配方，其爲粉狀營養配方。 如申請專利範圍第2項之營養配方，其特徵在於其爲一嬰 兒配方。 如申請專利範圍第i項之營養配方，其中該蛋白質源包含 j自下列之群的蛋白質源：全脂或脫脂乳粉、赂蛋白、 乳/耷蛋白、大豆香白發本蛋白稻未蛋白、稻子豆種蛋白'胚芽 杨蛋白，及/或其混合物。 如申請專利範圍第4項之營卷配太# 士 、，主疋… 呂養配方’其中該路蛋白及/或乳 /月蛋白係完整的或未經水解。 —種製備如申請專利範圍第 方冰甘A 固乐14項中任一項之營養配方的 万法’其包含以下步驟： -水解-蛋白質源及/或一碳水化合物源， -將經稀釋之]^(+)乳酸… 加❹水解之碳水化合物源及/或該經水解之蛋白質源， 獍仵一約 3.5-6 的 pH 值》 如甲。月專利範圍第6項之方法 再一步步驟。 、I 3該添加一脂類源的 如申請專利範圍第7項之 热θ m T在添加L-(+)乳酸之前 執仃該添加一脂類源的步驟。 夂 90067-I0I03Q5.doc 1.364260 9. 一種將經單離或純化之L(+)-乳酸用於製備酸化營養配方 之用途。 10. —種將經單離或純化之L( + )-乳酸用於防止病原體在營養 配方中生長的用途。
    90067-1010305.doc S
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