CN107668721A - 包含乳铁蛋白的营养组合物在支持抵抗疾病和状况中的用途 - Google Patents
包含乳铁蛋白的营养组合物在支持抵抗疾病和状况中的用途 Download PDFInfo
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Abstract
本公开涉及包含乳铁蛋白的营养组合物在支持抵抗疾病和状况中的用途,具体地包含来自非人来源的乳铁蛋白的营养组合物在支持抵抗疾病或状况中的用途。所述方法包括向人施用包含脂肪或脂类来源、蛋白来源、和由非人来源产生的乳铁蛋白的营养组合物。
Description
本申请是申请日为2011年12月15日的中国专利申请201180062708.4“包含乳铁蛋白的营养组合物在支持抵抗疾病和状况中的用途”的分案申请。
技术领域
本公开一般性地涉及具有乳铁蛋白、特别是由非人来源产生的乳铁蛋白的营养组合物领域,例如婴儿配方(infant formulas),人乳强化剂,儿童膳食补充剂等。更具体地,本公开涉及通过向人施用包含乳铁蛋白的营养组合物,支持抵抗由细菌和病毒病原体导致的疾病或状况的方法。
背景技术
目前有各种用于人、尤其是年轻人的膳食组合物,在特定生命阶段提供补充或者基本营养。一般来说,用于婴儿的商品化的膳食组合物力图尽可能模拟人乳的组成和相关功能。通过其中一些具有生理活性的蛋白和掺合的脂肪成分的组合,膳食组合物得以配制为它们模拟人乳,用作完全或部分替代品。其它经常在用于婴儿的膳食组合物中使用的成分可包括碳水化合物来源如乳糖以及其它维生素、矿物质和元素,认为它们存在于人乳中用于被婴儿吸收。
乳铁蛋白是人乳中的基本蛋白之一,认为它是具有大约80千道尔顿平均分子量的糖蛋白。其为铁结合蛋白,具有以可逆的方式结合两分子的铁的能力,并能促进人肠道内铁的吸收。在功能上,乳铁蛋白调节铁吸收,并且如此地,能够结合基于铁的自由基以及提供铁用于免疫应答。
在获取商品化的有活力的(viable)膳食组合物中,由于在加工过程中活性的预期丧失,乳铁蛋白的添加通常受到限制。例如,一般来说,加工婴儿配方和其它产品如人乳强化剂和各种儿童产品中的温度和pH需求降低乳铁蛋白的特定功能,导致乳铁蛋白不包含在最终的制剂中。另外,乳铁蛋白通常仅被考虑其铁结合性质,因此在认为该性质被加工条件所减少的情况下,乳铁蛋白可能通常被排除在制剂之外。
进一步地,如现有技术已知,人母乳的铁相对低,每升母乳含约0.3毫克铁。虽然该量低,但是人婴儿具有高的吸收率,从母乳中吸收大约一半的铁。然而,当人婴儿被给予具有高水平铁强化例如每升从约10毫克到约12毫克的现有技术配方时,婴儿吸收小于约5%的总铁。应用现有技术配方中如此增加水平的铁,事实上所有的铁结合位点会预期被占据,因为乳铁蛋白是已知的铁转运蛋白。
现有技术配方的其它问题包括不能提供抑菌效果。这部分是由于使用具有被封闭或损坏的结合位点的乳铁蛋白,因为抑菌效果至少部分与配方中存在的乳铁蛋白结合铁的程度有关。
相应地,提供含有乳铁蛋白特别是由非人来源产生的乳铁蛋白的营养组合物例如婴儿配方、人乳强化剂、儿童膳食补充剂等将是有益的。鉴于在人,尤其是婴儿和儿童中病毒性呼吸道感染的流行,提供支持抵抗病毒性呼吸道感染的营养组合物将是特别有益的。优选地,组合物中包含的乳铁蛋白即使在高温和低pH条件下加工后,也能够支持抵抗由细菌和病毒病原体导致的疾病或状况。
发明内容
简而言之,在一个实施方案中,本公开涉及支持抵抗人中疾病或状况例如病毒性呼吸道感染的方法。在另一个实施方案中,本公开涉及在人中支持抵抗由至少一种选自产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza)、产志贺毒素大肠杆菌(STEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC)、鼠伤寒沙门氏菌血清型(Salmonella ser. Typhimurium)、福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)、轮状病毒、诺如病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒及其组合的病原体导致的疾病或状况的方法。所述方法包括向人施用包含(1)脂肪或脂类来源、(2)蛋白来源、和(3)由非人来源产生的乳铁蛋白的营养组合物。在某些实施方案中,疾病或状况为病毒性的下呼吸道感染。
在一个实施方案中,营养组合物包含:
a. 至多约7g/100kal的脂肪或脂类来源,更优选约3g/100kcal到约7g/100kcal的脂肪或脂类来源;
b. 至多约5g/100kcal的蛋白来源,更优选约1g/100kcal到约5g/100kcal的蛋白来源;和
c. 至少约10mg/100kCal的乳铁蛋白,更优选约70mg到约220mg/100kCal的乳铁蛋白,并且最优选约90mg到约190mg/100kCal的乳铁蛋白。任选地,在某些实施方案中,营养组合物可以进一步包含约0.1g/100kcal到约1g/100kcal的益生元组合物,例如包含聚葡萄糖和/或低聚半乳糖的益生元组合物。更优选地,营养组合物包含约0.3g/100kcal到约0.7g/100kcal包含聚葡萄糖和低聚半乳糖组合的益生元组合物。在某些实施方案中,本公开涉及在人中支持抵抗由至少一种选自ETEC、EPEC、产志贺毒素大肠杆菌、EAEC、鼠伤寒沙门氏菌血清型、福氏志贺氏菌或其组合的病原体导致的疾病或状况的方法。
优选地,乳铁蛋白是非人乳铁蛋白和/或通过遗传修饰的生物产生的人乳铁蛋白。在一个特别优选的实施方案中,所使用的乳铁蛋白使有效量的含乳铁蛋白的营养组合物可以施用于个体以支持抵抗由病毒或细菌病原体导致的疾病或状况,即使在加工过程中,营养组合物曾暴露于某些加工条件如巴氏灭菌中典型的pH和温度波动。
具体实施方式
在一个实施方案中,本公开提供了通过向人施用包含脂类或脂肪来源、蛋白来源和来自非人来源的乳铁蛋白的营养组合物,支持抵抗由细菌或病毒病原体导致的人中的疾病或状况例如病毒性呼吸道感染的方法。
如本文所用,“由非人来源产生的乳铁蛋白”和“来自非人来源的乳铁蛋白”各自指由人母乳之外的来源产生或者获得的乳铁蛋白。例如,本公开所使用的乳铁蛋白包括通过遗传修饰的生物产生的人乳铁蛋白和非人乳铁蛋白。本文所使用的术语“生物”指任何连续生存的系统,例如动物、植物、真菌或微生物。本文所使用的术语“非人乳铁蛋白”指具有不同于人乳铁蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列的乳铁蛋白。
乳铁蛋白是约80kD,根据物种含有1-4个聚糖的单链多肽。不同物种乳铁蛋白的3D结构非常类似,但不相同。每个乳铁蛋白包含两个同源的叶,称为N-和C-叶,分别指分子的N-末端和C-末端部分。每叶进一步由两个亚叶或结构域组成,它们形成裂缝,在裂缝处铁离子(Fe3+)与碳酸(碳酸氢根)阴离子协同作用紧密结合。这些结构域分别称为N1,N2,C1和C2。乳铁蛋白的N末端具有强阳离子肽区域,其负责许多重要的结合特性。乳铁蛋白具有非常高的等电点(~pI9),且其阳离子性质在其抵御细菌、病毒和真菌病原体的能力中发挥主要作用。在乳铁蛋白的N末端区域中有几个阳离子氨基酸残基簇,介导乳铁蛋白对广范围微生物的生物学活性。例如,人乳铁蛋白的N末端残基1-47(牛乳铁蛋白的1-48)对于乳铁蛋白的铁非依赖性的生物学活性是关键的。在人乳铁蛋白中,残基2到5(RRRR)和28到31(RKVR)是N末端中富含精氨酸的阳离子结构域,对乳铁蛋白的抗微生物活性是尤其关键的。在牛乳铁蛋白中发现了N末端中的类似区域(残基17到42,FKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAFA)。
如在出版物Biochemistry and Cell Biology, pp 275-281 (2006)中出现的“Perspectives on Interactions Between Lactoferrin and Bacteria” 中所述,来自不同宿主物种的乳铁蛋白,其氨基酸序列可能不同,尽管它们在内叶的末端区域带有带正电荷的氨基酸而共同具有相对高的等电点。用于本公开的合适的乳铁蛋白包括与HLf(349-364)片段处的氨基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少48%同源性的那些。在一些实施方案中,乳铁蛋白与HLf(349-364)片段处的氨基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少65%的同源性,并且在一些实施方案中,至少75%的同源性。例如,可被接受用于本公开的非人乳铁蛋白包括但不限于,牛乳铁蛋白,猪乳铁蛋白,马乳铁蛋白,水牛乳铁蛋白,山羊乳铁蛋白,鼠乳铁蛋白和骆驼乳铁蛋白。
用于本公开的乳铁蛋白可以例如从非人动物的奶中分离,或者通过遗传修饰的生物产生。例如,在通过引用整体并入本文的美国专利号4,791,193中,Okonogi等公开了生产高纯度牛乳铁蛋白的方法。通常,所公开的方法包括3步。原料奶首先与弱酸性阳离子交换剂接触吸附乳铁蛋白,然后是第二步,其中进行清洗除去非吸附的物质。随后是解吸步骤,其中将乳铁蛋白除去产生纯化的牛乳铁蛋白。其它方法可包括如在美国专利号7,368,141、5,849,885、5,919,913 和 5,861,491中描述的步骤,它们的公开内容均通过引用整体并入。
乳铁蛋白的益处,如用于本公开的某些实施方案中,是其支持抵抗由某些细菌和病毒病原体导致的疾病或状况的能力,所述病原体包括ETEC、EPEC、流感嗜血杆菌、STEC、EAEC、鼠伤寒沙门氏菌血清型、福氏志贺氏菌、轮状病毒、诺如病毒、RSV、腺病毒及其组合。
在一个实施方案中,乳铁蛋白在营养组合物中以至少约10mg/100kCal的量存在,尤其当所述营养组合物意图由儿童应用时。在某些实施方案中,乳铁蛋白的上限是约240mg/100kCal。在另一个实施方案中,营养组合物是婴儿配方时,乳铁蛋白在营养组合物中以从约70mg到约220mg/100kCal的量存在;在另一个实施方案中,乳铁蛋白以约90mg到约190mg/100kCal的量存在。用于婴儿的营养组合物可以包含从每毫升配方约0.5mg到约1.5mg的量的乳铁蛋白。在替代人乳的营养组合物中,乳铁蛋白可以从每毫升配方约0.6mg到约1.3 mg的量存在。
如所述,在一个实施方案中,营养组合物支持抵抗病毒性呼吸道感染。人、特别是婴儿和儿童易发生病毒性呼吸道感染。病毒性的下呼吸道感染、尤其是那些由呼吸道合胞病毒导致的那些,可以是特别成问题的。事实上,呼吸道合胞病毒是婴儿和儿童住院的主要原因,并且可以导致例如,支气管炎、肺炎、和长期并发症例如喘鸣。因此,在一个优选的实施方案中,本公开涉及支持抵抗病毒性下呼吸道感染的方法。在又一个优选的实施方案中,本公开涉及支持抵抗呼吸道合胞体病毒感染的方法。例如,本公开的营养组合物可用于支持免疫发育,更好地使机体对抗病毒性呼吸道感染,或是预防这种感染或是减少它们的严重程度。
在某些实施方案中,营养组合物预防性地施用于不具有疾病或状况例如病毒性呼吸道感染和/或由至少一种选自ETEC、EPEC、流感嗜血杆菌、STEC、EAEC、鼠伤寒沙门氏菌血清型、福氏志贺氏菌、轮状病毒、诺如病毒、RSV、腺病毒及其组合的病原体导致的疾病或状况的人。在其它实施方案中,被施用营养组合物的人在营养组合物被施用时,具有病毒性呼吸道感染或由至少一种病原体导致的疾病或状况。
优选地,营养组合物被施用的人是婴儿或儿童。如本文所用,术语“婴儿”通常定义为从出生到12个月年龄的人。“儿童”和“儿童们”定义为年龄超过12个月到约12岁大的人。
优选地,营养组合物中的乳铁蛋白对疾病或状况具有与游离形式的乳铁蛋白的活性同样或类似的活性。换句话说,优选地,乳铁蛋白的活性没有通过包含在营养组合物中而显著地减少。还优选组合物中包含的乳铁蛋白即使在高温和低pH条件下加工后,也能够支持抵抗由细菌和病毒病原体导致的疾病或状况。在本公开的一个实施方案中,所用的乳铁蛋白为非人乳铁蛋白。
例如,令人惊讶地,牛乳铁蛋白即使暴露于会预期破坏或严重限制人乳铁蛋白的稳定性或活性的条件即低pH(即低于7,并且甚至低如约4.6或更低)和/或高温(即高于约65℃,并且高如约120℃)也保持某些杀菌活性。这些低pH和/或高温条件在本文所述类型的营养组合物的某些加工方案、例如巴氏灭菌期间可以预期。然而,虽然牛乳铁蛋白具有与人乳铁蛋白具有约70%序列同源性的氨基酸组成,并且在人乳铁蛋白变得不稳定或失活的条件下稳定并且保持活性,牛乳铁蛋白对人肠道中发现的不期望的细菌病原体具有杀菌活性。
在一些实施方案中,本公开的营养组合物可以是婴儿配方。术语“婴儿配方”适用于通过作为人乳替代品满足婴儿营养需求的液体或粉末形式的组合物。在美国,婴儿配方的含量由21 C.F.R. §§100, 106和107下列出的联邦法规规定。这些法规定义了常量营养素、维生素、矿物质和其它成分水平,以努力模拟人母乳的营养和其它性质。在一个单独的实施方案中,营养产品可以是人乳强化剂,意味着它是加入人乳以增加人乳营养价值的组合物。作为人乳强化剂,公开的组合物可以是粉末或者液体形式。在另一个实施方案中,公开的营养产品可以是儿童营养组合物。
本公开的营养组合物可以提供最低、部分或全部的营养支持。营养组合物可以是营养补充剂或膳食替代品。在一些实施方案中,营养组合物可以连同食物或另外的营养组合物施用。在本实施方案中,营养组合物可以在对象摄取前与食物或其它营养组合物互相混合,或可以在摄取食物或营养组合物之前或之后施用给对象。营养组合物可以施用于接受婴儿配方、人乳、人乳强化剂或其组合的早产婴儿。对于本公开的目的,“早产婴儿”是少于37周妊娠后出生的婴儿,而“足月婴儿”是至少37周妊娠后出生的婴儿。
营养组合物可以但不需要是营养全面的。技术人员将认识到“营养全面”取决于许多因素而变化,包括但不限于适用该术语的对象的年龄、临床状况和膳食摄入。通常,“营养全面”指本公开的营养组合物提供正常生长所需的足量的所有碳水化合物,脂类,必需脂肪酸,蛋白质,必需氨基酸,条件必需氨基酸,维生素,矿物质和能量。如用于营养物的,术语“必需”指不能由机体以足以用于正常生长和保持健康的量合成且从而必需通过饮食补充的任何营养物。如用于营养物的,术语“条件必需”指在机体得不到足量的前体化合物用于发生内源合成时的条件下必须通过饮食补充的营养物。
通过限定,对于早产婴儿为“营养全面”的组合物将提供早产婴儿生长所需的定性和定量上足量的所有碳水化合物,脂类,必需脂肪酸,蛋白质,必需氨基酸,条件必需氨基酸,维生素,矿物质和能量。通过限定,对于足月婴儿为“营养全面”的组合物将提供足月婴儿生长所需的定性和定量上足量的所有碳水化合物,脂类,必需脂肪酸,蛋白质,必需氨基酸,条件必需氨基酸,维生素,矿物质和能量。通过限定,对于儿童为“营养全面”的组合物将提供儿童生长所需的定性和定量上足量的所有碳水化合物,脂类,必需脂肪酸,蛋白质,必需氨基酸,条件必需氨基酸,维生素,矿物质和能量。
营养组合物可以以本领域已知的任何形式提供,包括粉末,凝胶,悬液,膏(paste),固体,液体,液体浓缩物或即用产品。在一个优选实施方案中,营养组合物是婴儿配方,尤其是适于用作婴儿唯一营养源的婴儿配方。
在优选实施方案中,本文公开的营养产品可以经肠道施用。如本文所述,“经肠道”指通过胃肠道或消化道或在胃肠道或消化道内,“经肠道施用”包括口服喂食、胃内喂食、经幽门施用或者向消化道内的任何其它导入。
用于实施本公开的合适的脂肪或脂类来源可以是本领域中任何已知或使用的来源,包括但不限于,动物来源,例如乳脂,黄油,奶油,卵黄脂质;海洋来源,例如鱼油,海洋油(marine oils),单细胞油;蔬菜和植物油,例如玉米油,低芥酸菜籽油,葵花油,大豆油,棕榈油精,椰子油,高油酸葵花油,月见草油,菜籽油,橄榄油,亚麻子(亚麻籽)油,棉籽油,高油酸红花油,棕榈硬脂(palm stearin),棕榈仁油,小麦胚芽油;中链甘油三酯油和乳液和脂肪酸的酯,及其任意组合。
在某些实施方案中,营养组合物中包含的蛋白来源包括牛奶蛋白。可用于实施本公开的牛奶蛋白来源包括但不限于,乳蛋白粉,乳蛋白浓缩物,乳蛋白分离物,脱脂奶固体,脱脂奶,脱脂奶粉,乳清蛋白,乳清蛋白分离物,乳清蛋白浓缩物,甜乳清,酸乳清,酪蛋白,酸酪蛋白,酪蛋白酸盐(如酪蛋白酸钠,酪蛋白酸钠钙,酪蛋白酸钙)及其任意组合。
在一个实施方案中,蛋白以完整蛋白提供。在其它实施方案中,蛋白以完整蛋白和水解程度在约4%和10%之间的部分水解蛋白的组合提供。在又一个实施方案中,蛋白来源可以补充以含谷氨酰胺肽。
在本公开的一个具体实施方案中,蛋白来源包含乳清和酪蛋白,且乳清对酪蛋白的比例与人母乳中发现的比例类似。例如,在某些实施方案中,乳清与酪蛋白的重量比从约20%乳清:80%酪蛋白到约80%乳清:20%酪蛋白。
在本公开的一个实施方案中,营养组合物可以包含一种或多种益生菌。术语“益生菌”指具有低病原性或无病原性、对宿主健康发挥有益效果的微生物。只要其实现意图的结果,任何本领域已知的益生菌在本实施方案中都是可接受的。在一个具体的实施方案中,益生菌可以选自乳杆菌属(Lactobacillus)物种,鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG),双歧杆菌属(Bifidobacterium)物种,短双歧杆菌(Bifidobacterium brevis),长双歧杆菌(Bifidobacterium longum),和动物双歧杆菌乳亚种BB-12(Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB-12)。
如果包括在组合物内,益生菌的量可以从每kg体重每天约104到约1010个菌落形成单位(cfu)变化。在另一个实施方案中,益生菌的量可以从每kg体重每天约106到约109个菌落形成单位变化。在又一个实施方案中,益生菌的量可以是每kg体重每天至少约106个菌落形成单位。并且,公开的组合物还可以包括益生菌条件培养基成分。
在一个实施方案中,益生菌中的一种或多种是有活力的。在另一个实施方案中,益生菌中的一种或多种是无活力的。如本文所述,术语“有活力的”指活微生物。术语“无活力的”或“无活力的益生菌”指非活的益生菌微生物、其细胞成分和其代谢物。这些无活力的益生菌可以已被热杀灭或以其它方式灭活,但是保持有益影响宿主健康的能力。用于本公开的益生菌可以是天然发生的、合成的或通过遗传操作生物开发的,无论这些新的来源是目前已知的或后来开发的。
在本公开的一个实施方案中,营养组合物可以包括包含一种或多种益生元的益生元组合物。如本文所述,术语“益生元”指通过选择性刺激结肠中一种或有限数目的能改善宿主健康的细菌的生长和/或活性而有益影响宿主的不可消化的食物成分。“益生元组合物”是包含一种或多种益生元的组合物。这些益生元可以是天然发生的、合成的或通过遗传操作生物和/或植物开发的,无论这些新的来源是目前已知的或后来开发的。在某些实施方案中,本公开组合物中包含的益生元包括美国专利号7,572,474中教导的那些,该专利的公开内容通过引用并入本文。
用于本公开的益生元可以是天然发生的、合成的或通过遗传操作生物和/或植物开发的,无论这些新的来源是目前已知的或后来开发的。用于本公开的益生元可以包括寡糖,聚糖,和包含果糖、木糖、大豆、半乳糖、葡萄糖和甘露糖的其它益生元。更具体地,用于本公开的益生元可以包括乳果糖,低聚乳果糖,棉子糖,葡寡糖,菊粉,聚葡萄糖,聚葡萄糖粉,低聚半乳糖,低聚果糖,低聚异麦芽糖,大豆低聚糖,低聚乳果糖,低聚木糖,壳寡糖,低聚甘露糖,低聚阿拉伯糖,低聚唾液酸糖,低聚岩藻糖,和低聚龙胆糖。优选地,营养组合物包含聚葡萄糖(PDX)和/或低聚半乳糖(GOS)。任选地,除了聚葡萄糖和/或低聚半乳糖之外,营养组合物还包含一种或多种附加的益生元。
如果包含在营养组合物内,营养组合物中存在的益生元的总量可以是从约0.1g/100kcal到约1g/100kcal。更优选地,营养组合物中存在的益生元的总量可以是从约0.3 g/100kcal到约0.7 g/100kcal。至少20%的益生元应当包含低聚半乳糖和/或聚葡萄糖。
如果聚葡萄糖用于益生元组合物中,在一个实施方案中,营养组合物中聚葡萄糖的量可以为约0.1g/100kcal到约1g/100kcal的范围。在另一个实施方案中,营养组合物内的聚葡萄糖的量是从约0.2 g/100kcal到约0.6 g/100kcal的范围内。
如果低聚半乳糖用于益生元组合物中,在一个实施方案中,营养组合物中低聚半乳糖的量可以从约0.1g/100kcal到约1g/100kcal。在另一个实施方案中,营养组合物中的低聚半乳糖的量是从约0.2 g/100kcal到约0.5 g/100kcal。在某些实施方案中,益生元组合物中聚葡萄糖与低聚半乳糖的比例为约9:1到约1:9。
在一些实施方案中,本公开的营养制剂可以进一步包含长链多不饱和脂肪酸(LCPUFAs)来源。优选地,LCPUFAs的来源包含二十二碳六烯酸(DHA)。其它合适的LCPUFAs包括,但不限于α-亚油酸,γ-亚油酸,亚油酸,亚麻酸,二十碳五烯酸(EPA)和花生四烯酸(ARA)。
在一个实施方案中,营养组合物补充以DHA和ARA二者。在此实施方案中,ARA:DHA的重量比可以从约1:3到约9:1。在本发明的一个实施方案中,ARA:DHA的重量比是约1:2到约4:1。
营养组合物中长链多不饱和脂肪酸的量可以从约5 mg/100 kcal到约100 mg/100kcal变化,更优选从约10 mg/100 kcal到约50 mg/100 kcal。
营养组合物可以使用本领域已知的标准技术补充以含DHA和ARA的油。例如,DHA和ARA可以通过替换组合物中正常存在的等量油例如高油酸葵花油来加入组合物。作为另一个实例,含有DHA和ARA的油可以通过替换不含DHA和ARA的组合物中正常存在的总脂肪掺合物的等量剩余部分(rest)来加入组合物。
如果使用,DHA和ARA的来源可以是本领域已知的任何来源,例如海洋油,鱼油,单细胞油,卵黄脂质和脑脂质。在一些实施方案中,DHA和ARA分别来源于单细胞Martek油,DHASCO® 和ARASCO®,或其变体。DHA和ARA可以是天然形式,前提是LCPUFA来源的其余部分对婴儿不造成任何实质的有害效果。可选地,DHA和ARA可以以精炼的形式应用。
在本公开的一个实施方案中,DHA和ARA的来源是美国专利号5,374,567、5,550,156和5,397,591中教导的单细胞油,这些专利的公开内容通过引用整体并入本文。但是,本公开并不仅限于这些油。
在某些实施方案中,营养组合物包含从约0.5mg/100kcal到约5mg/100kcal的铁,包括结合到乳铁蛋白上的铁。
实施例
提供下面的实施例来阐释本公开的营养组合物的实施方案,但是其不应解释为对本公开的任何限制。基于对说明书或本文公开的营养组合物或方法的实施的考虑,在本文权利要求范围之内的其它实施方案对本领域技术人员是显而易见的。意图说明书连同实施例仅考虑为示例性的,本公开的范围和精神由所附权利要求表明。
实施例1
本实施例示例乳铁蛋白和婴儿配方在体外对致腹泻性大肠杆菌(diarrengic E. coli)菌株生长的影响。
获得来自每个DEC种群(产肠毒素大肠杆菌(ETEC),肠致病性大肠杆菌(EPEC),产志贺毒素大肠杆菌(STEC),肠聚集性大肠杆菌(EAEC))的15个临床致腹泻性大肠杆菌(diarrheageanic E. coli,DEC)菌株。如先前所述,菌株分离自来自具有腹泻的儿童的Peruvian队列研究,并通过实时PCR鉴定致腹泻性大肠杆菌(diaheagenic E. coli)种群。另外,还获得15个鼠伤寒沙门氏菌血清型的临床分离物和15个福氏志贺氏菌分离物。
所有临床菌株和标准实验室对照菌株在37℃在McConkey琼脂培养基中生长超过24小时。对于活力分析,菌株在37℃在溶源性肉汤中生长18小时。菌株然后在PBS中清洗两次,并在4500×g离心5 min。仅对数中期的细菌被使用。
在蒸馏水中配制0、0.6、1、2、4、6、8和10 mg/ml乳铁蛋白母液和0、0.6、1、2、4、6、8和10 mg/ml含2.1 g/100 kcal乳蛋白和1.8 mg/100 kcal铁的婴儿配方母液。
含大约2×108 对数期细胞的临床菌株培养物接种到含1%细菌用蛋白胨的96孔板中。每板还通过微量稀释接种婴儿配方或乳铁蛋白母液,使每种菌株得以对0、0.6、1、2、4、6、8 或10 mg/ml乳铁蛋白或婴儿配方进行测试。通过10倍稀释的系列培养,板在37℃孵育并每30分钟监测生长动力学。然后在分光光度计和/或ELISA读数器中监测生长。孵育18-20小时后,每个菌株的MIC记录为导致完全细菌抑制的婴儿配方或乳铁蛋白的最低浓度。
还进行测试乳铁蛋白和婴儿配方对每个菌株的活性的协同分析,并且如上文所述测量乳铁蛋白/婴儿配方组合对细菌生长的影响。对于这些协同分析,基于MIC研究和生长动力学的结果,对每种试剂单独确定乳铁蛋白和婴儿配方的浓度。
实施例2
本实施例示例乳铁蛋白和婴儿配方在体外对致腹泻性大肠杆菌菌株对人肠上皮细胞黏附的影响。
Hep2细胞的分会合层(在24孔板中大约5×104 细胞/孔)用实施例1中描述的产肠毒素大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、产志贺毒素大肠杆菌、肠聚集性大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌血清型或福氏志贺氏菌分离物感染。然后将含或不含10mg/ml乳铁蛋白的婴儿配方加入其中,使细菌对婴儿配方的浓度为100:1的比例。然后,感染的Hep2细胞层在37℃、5% CO2中孵育4小时。然后强力清洗Hep2细胞以去除非黏附细菌。细胞用70%甲醇固定,用10%吉姆萨溶液染色,并在显微镜下检查。另外,对于产肠毒素大肠杆菌、产志贺毒素大肠杆菌、福氏志贺氏菌和鼠伤寒沙门氏菌血清型如先前报道进行荧光肌动蛋白染色法(FAS)分析。
实施例3
本实施例示例了乳铁蛋白和婴儿配方在体外在支持抵抗由细菌病原体导致的状况或疾病中的效果。
获得6至8周龄、体重20至24g、健康的雌性Balb/c品系小鼠,并分入实验组和对照组。实验组然后在感染前饲以200 µl含75或165 mg/ml乳铁蛋白的婴儿配方,并且对照组在感染前饲以200 µl婴儿配方。调整所施用的婴儿配方的量,使小鼠接受的量相当于每天600mg/kg和1333 mg/kg乳铁蛋白。小鼠然后用 300 µL 108 菌落形成单位(cfu)的鼠伤寒沙门氏菌血清型,200 µL 108 cfu的柠檬酸杆菌(Citrobacter rodentium)(EPEC的鼠模型)或200 µL 108 cfu福氏志贺氏菌感染。对于感染和处理前接种,使用管饲针。感染后,小鼠分别随意接受含75或165 mg/ml乳铁蛋白的婴儿配方或单独婴儿配方7天。再次地,调整所施用的婴儿配方的量,使小鼠接受的量相当于每天600 mg/kg和1333 mg/kg乳铁蛋白。感染后,每天监测所有小鼠中的死亡率、体重和临床体征(竖毛、驼背姿态和运动减少),监测7天。通过比较每个感染的小鼠的行为15分钟来确定临床体征的发生率。在感染后第10天,小鼠被处死,进行心脏穿刺获得血液培养物。对于组织病理学分析,摘除器官(结肠、肝脏和脾脏)。由对组别分配设盲以防止偏见的病理学家对器官中的炎症和坏死程度进行研究。
实施例4
本实施例示例了乳铁蛋白和婴儿配方在体外在支持抵抗由病毒病原体导致的状况或疾病中的效果。
如上述进行实施例3,除了小鼠被轮状病毒、诺如病毒、星状病毒、腺病毒和杯状病毒(Calicivus)株而不是细菌菌株感染。小鼠如上述被监测和研究。
实施例5
本实施例阐释根据本公开的营养产品的一个实施方案。
实施例6
本实施例阐释根据本公开的营养产品的另一个实施方案。
实施例7
本实施例阐释了可用于制备根据本公开营养产品的成分的一个实施方案。
实施例8
本实施例阐释了可用于制备根据本公开营养产品的成分的另一个实施方案。
优选地,该营养组合物施用于人并支持抵抗人中由细菌或病毒病原体导致的疾病或状况,包括病毒性呼吸道感染。
本说明书所引用的所有参考文献,包括但不限于所有论文、出版物、专利、专利申请、演讲、课文、报告、手稿、手册、书籍、网络发表物、杂志论文、期刊等,在此通过引用整体并入本说明书。对本文参考文献的讨论仅是为了总结其作者作出的观点,并不是承认任何参考文献构成现有技术。申请人保留质疑所引用的参考文献的准确性和相关性的权利。
虽然本公开的优选实施方案已经使用特定术语、工具和方法进行了描述,但是这些描述仅用于示例性目的。所使用的词语是说明性词语而不是限制的。可以理解,在不偏离所附权利要求列出的本公开的精神或范围的情况下,本领域技术人员可以进行改变和变化。另外,应当理解各实施方案的各个方面可以全部或部分地相互替换。例如,虽然示例了生产根据那些方法制备的商品化无菌液体营养补充剂的方法,其它的用途也是预期的。因此,所附权利要求的精神和范围不应限于本文包含的优选形式的描述。
Claims (15)
1.在人中支持抵抗疾病或状况的方法,包括向人施用营养组合物,所述营养组合物包含:
a) 脂肪或脂类来源;
b) 蛋白来源;和
c)由非人来源产生的乳铁蛋白,其中所述乳铁蛋白与HLf(349-364)片段处的氨基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少48%的同源性。
2.权利要求1的方法,其中所述疾病或状况是由至少一种选自产肠毒素大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza)、产志贺毒素大肠杆菌、肠聚集性大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌血清型(Salmonella ser. Typhimurium)、福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)、轮状病毒、诺如病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒及其组合的病原体导致的疾病或状况。
3.根据权利要求1的方法,其中所述疾病或状况是病毒性呼吸道感染。
4.根据权利要求1的方法,其中所述人是婴儿或儿童。
5.根据权利要求1的方法,其中所述脂肪或脂类来源以约3g/100 kcal到约7 g/100kcal的水平存在,以及所述蛋白来源以约1 g/100 kcal到约5 g/100 kcal的水平存在。
6.根据权利要求1的方法,其中所述乳铁蛋白以至少约10mg/100kcal的水平存在。
7.根据权利要求6的方法,其中所述乳铁蛋白以约70 mg/100kcal到约220 mg/100kcal的水平存在。
8.根据权利要求1的方法,其中所述乳铁蛋白选自非人乳铁蛋白、通过遗传修饰的生物产生的人乳铁蛋白及其组合。
9.根据权利要求1的方法,其中所述乳铁蛋白在人乳铁蛋白变得不稳定或失活的条件下是稳定的并且保持活性。
10.根据权利要求9的方法,其中所述营养组合物经历过巴氏灭菌条件。
11.根据权利要求1的方法,其中所述营养组合物进一步包含益生元组合物,所述益生元组合物包括选自低聚半乳糖、聚葡萄糖及其组合的化合物。
12.根据权利要求1的方法,其中所述营养组合物包含约0.5mg/100kcal到约5mg/100kcal的铁,包括结合到乳铁蛋白上的铁。
13.根据权利要求1的方法,其中所述乳铁蛋白与HLf(349-364)片段处的氨基酸序列AVGEQELRKCNQWSGL具有至少65%的同源性。
14.根据权利要求1的方法,其中所述人在所述营养组合物被施用时具有所述疾病或状况。
15.根据权利要求1的方法,其中所述营养组合物被预防性地施用,并且所述人在所述营养组合物被施用时不具有所述疾病或状况。
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