TWI247608B

TWI247608B - Growth hormone formulations

Info

Publication number: TWI247608B
Application number: TW089117050A
Authority: TW
Inventors: John Stevens; Bernhard Siebold
Original assignee: Grandis Biotech Gmbh
Priority date: 1999-07-12
Filing date: 2000-08-24
Publication date: 2006-01-21
Also published as: PL353238A1; IL147253A; DE60038118D1; AU775107C; CN1360506A; AU5997500A; JP2014208656A; HUP0202189A3; SK252002A3; CA2378949C; CA2378949A1; CZ200260A3; US20060029635A1; BR0013162A; WO2001003741A1; KR20020031388A; ES2300268T3; HK1046358A1; SI1194170T1; EP1194170B1

Description

1247608 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（/ ) 本發明是有關於適合給藥至人體或動物體之生長激素 (GH)的液體配方。更特別地，本發明是有關於人類生長激素（hGH)之液體配方，其爲藥學上更可接受的及較佳的，並且更可應用於各種的製造方法步驟中’而不會有可觀的活性損失或可觀的穩定性損失。天然的人類生長激素是含有191個胺基酸之單一的多胜肽鏈蛋白質。此蛋白質是藉由雙硫橋架而內部地交聯’ 以及在單體形式中，顯示具有22仟道耳吞（kDa)的分子量。動物物種的生長激素，在胺基酸序列上’是緊密地同源於人類的生長激素，因此，在其特徵上是非常相似的。生長激素的主要生物性效應，是促進體內一系列器官及組織整體的生長。對生長激素反應的器官或組織包括肝臟、腸、腎臟、肌肉、結締組織及骨骼。腦下垂體機能不足性侏儒症是一種症狀’其可藉由給藥生長激素至罹患此症狀之病患而容易地治療。在藉由重組方式大量生產人類生長激素之前，僅可從人類屍體中的腦下垂體，藉由辛勤的萃取，而製備有限量的人類生長激素。這個方法會有關於感染性媒介的危險，例如，可對於庫兹菲德-雅各症（Creutzfeldt-Jakob disease ; CJD)反應的媒介，以及這些媒介可能會被傳遞至接受生長激素的病患。人類生長激素基因的分離，以及在細胞培養中，表現人類生長激素之轉形宿主細胞的建構，不僅已開啓腦下垂體機能不足性侏儒症之更可靠、更安全以及更節省成本的治療’並且也開啓了使用人類生長激素以治療其他疾病及 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂----------線" A7B7一 1247608 五、發明說明（a ) 症狀的可能性。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 關於藥用蛋白質（不只是人類生長激素）之水溶性液體配方，長久以來體會到的問題，是經過一段期間儲存後的不穩定性。在水溶液中的人類生長激素，已知會經過許多的降解（degradative)變化。會發生化學變化（例如，去醯胺化作用），並且這可能有與儲存期間溶液的有關。也有可能由於水解反應而產生胜肽骨架的修剪（ clipping )。此外，也有物理變化，其可包括凝集（ aggregation)，例如導致不溶物質的形成。 •線«· 早期有關於如何處理上述不穩定性的問題之建議是冷凍乾燥，但這當然是指在給藥前，所得的冷凍乾燥產物需要迅速地或立即地重建。當病患在家例行性地自我給藥的情況下，這正常地是指病患具有將冷凍乾燥的製劑，重建成爲水溶液的任務。這對病患而言是不方便的，並且可能由於不小心、缺乏注意細節及使用說明或誤解，而造成不適當的重建之危險。美國專利第4,968,299號（Kabi Pharmacia)描述一種經濟部智慧財產局員工消費合作社印製給病患使用的裝置，以進行冷凍乾燥製劑的重建，藉此尋找可減少重建錯誤的可能性。但即使如此，需要重建這件事，對於病患而言也是不方便的，況且重建的人類生長激素，當儲存在時，僅具有3週的穩定而已。因此，病患在數個月的期間之有效的給藥，仍然需要小心地注意細節及使用說明，所以，在治療的療程中，仍是有嚴重之非順從性的危險。 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1247608 A7 B7 五、發明說明（$ ) 無論如何，冷凍乾燥具有製造步驟上的高成本及浪費時間之缺點。簡化病患自我給藥的努力’也因此集中在以現成的形式，提供足夠穩定的水溶性人類生長激素配方之方法。水溶液中的蛋白質不穩定性，可理解爲一般的現象，而非特別有關於人類生長激素° ΕΡ-Α-0 131 864 (Hoechst Aktiengesellschaft)說明藉由使用界面活性劑，而避免在水溶液中之大於8.5仟道耳吞的蛋白質凝集。 ΕΡ-Α-0 211 601 (International Minerals & Chemical Corpofation)雖然或許主要是有關於持續釋放的配方，但也說明如何藉由將生長激素與非離子性的界面活性劑賦形，而使得生長激素在溶液中’以液體的形式穩定化’特別是某些聚氧乙燦-聚氧丙嫌嵌段共聚物（bl〇ck coPolymer) ，例如，PLURONIC ( BASF 之商標）或 GENAPOL (

Hoechst之商標）嵌段共聚物。 WO 94/03198 (Genentech)是依循先前教示的另一揭露，是有關於在液體配方中’使用非離子性的界面活性齊作爲人類生長激素的穩定劑。在配方中’ ο·1-5% (重量/體積）範圍的非離子性界面活性劑’據稱是使得配方暴露於剪力及表面應力’而不會引起生長激素蛋白質的變性。特別地，觀察到含有界面活性劑的配方’是有效於肺部的給藥以及無針頭的噴射注射槍。然而，界面活性劑是毒性的物質，它們的使用應儘可 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） -Llh--------— ΙΛ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂----------線一經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247608 A7 B7____ 五、發明說明（十）能的避免或至少減到最少。當此配方要每天或非常頻繁的給藥時，特別是有關於小孩及慢性治療時，這是特別重要 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 的。許多穩定水溶性人類生長激素配方的其他方法已被提出。WO 89/09614 (Genentech)教示一種包括甘胺酸、甘露糖醇及緩衝液的人類生長激素配方；其中人類生長激素 :甘胺酸的莫耳比是從1 : 50到1 : 200。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ΕΡ-Α-0 303 746 ( International Minerals & Chemical Corporation)教示水溶性的生長激素，可藉由將其與下列物質賦形而穩定：多元醇，例如，非還原性的糖類、糖醇、糖酸、乳糖、戊赤蘚糖醇（pentaerythritol)、水溶性葡聚糖以及榕醇（Ficoll);胺基酸，例如，甘胺酸、精胺酸以及甘胺酸三甲內鹽（betaine);在生理pH下，具有帶電荷端基團的胺基酸；以及最後是一膽鹼衍生物，例如，氯化膽鹼、膽鹼二氫檸檬酸鹽或二膽鹼半乳糖二酸鹽（ mucate)。許多有關上述之高分子物質，在給藥予病患時可能會帶有一些危險。藥學上的管制需求規定，必須避免任何不必要的添加物，特別是合成的添加物（例如，戊赤蘚糖醇）7以降低對病患的危險。許多在揭露中所建議的穩定劑，將是臨床上不可接受的，並因此將不可能作成藥學上可接受的配方。 WO 92/17200 (Genentech)是有關於穩定人類生長激素，不僅是在液體中，並也在冷凍乾燥的製劑中。此建議是製造穩定的鋅：人類生長激素之二聚體。鋅：人類生長 6 ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1247608 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（女）激素二聚體是由兩個鋅離子及兩個人類生長激素分子所組成。 WO 93/1281 1 ( Novo Nordisk )揭露一種液體的人類生長激素配方，其中，使用天門冬醯胺作爲穩定及緩衝的物質。 WO 93/19776 (Kabi Pharmacia)教示完全意想不到的發現，當水溶性的人類生長激素產品，與檸檬酸鹽緩衝液賦形時，則它會比與磷酸鹽緩衝液賦形時更爲穩定。本發明之一種目的，是提供一種足夠穩定的人類生長激素配方，可由病患立即使用，而不需要任何特別的準備或重建步驟。本發明的另一目的，是提供一種可以在家中，儲存在家用冰箱至少數月的配方。仍是本發明的另一目的，係提供原料藥之液體配方，其可分注並充塡至匣子（ cartridge)中給病患使用，而不會有生長激素活性之不可接受的損失或不可接受的不穩定性，特別是不會發生不可接受的凝集。還是本發明進一步的目的，是提供一種足夠穩疋的液體配方，其可避免或減少使用藥學上不可接受或不需要的成份，換句g舌說，是提供一種藥學上更加可接受的配方。仍是本發明進一步的目的，是提供液體配方，當長時間儲存在冰箱中時（例如，多達6或18個月），或是如果在冰箱外部儲存一段時間（例如，數天、數週或數月的期間），其可避免結晶形成的問題。元全相反於在此技藝中既有的知識，本發明令人意外 7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297^5^ ί ------------------------1----— I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1247608 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（έ ) 地發現，事實上，在上述的溶液中，除了人類生長激素及磷酸鹽緩衝液之外，並不需要使用各種額外的穩定作用劑，就可達成上述的目的。此外，儘管先前技藝教示有關界面活性劑對於生長激素水溶液的穩定性是如何地必要’以及相較於檸檬酸鹽緩衝液，磷酸鹽緩衝溶液是如何地無法提供優異的穩定性，本發明還是成功了。因此，本發明的第一方面係提供一種液體生長激素配方，其主要包含在磷酸鹽緩衝溶液中的生長激素。本發明的第二方面係提供一種液體生長激素配方’其主要包含在磷酸鹽緩衝溶液中的生長激素以及一防腐劑。本發明的第三方面係提供一種液體生長激素配方，其主要包含在等張的磷酸鹽緩衝溶液中的生長激素以及一防腐劑。本發明的第四方面係提供一種液體生長激素配方，其主要包含在等張的磷酸鹽緩衝溶液中的生長激素。有利地，當儲存在安瓿中時，上述不含防腐劑的配方，提供一種表現單一注射劑量之方便的途徑。對於多注射的劑量，較佳地是含有防腐劑。所有上述的配方之迄今未獲賞識並且的確令人驚訝的優點，在於它們在2-8°C範圍內的冷藏溫度中儲存是穩定的。可使用許多試驗的方法，以評估一段時間的配方穩定性。代表性的試驗方法之實施例，是提供在此處的實施例3 以及W0 94/03198中（其以參考資料方式倂入本發明），但這些方法決不是可用於評估穩定性之完全或無所不包的 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） n n vy— ϋ >^1 *11 Λ—m ί ϋ n · *- 1 n i tmt n 一口V · Ha n n fa (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線 1247608 B7 五、發明說明（》） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ，不會不利地影響儲存在容器中之生長激素配方的穩定性。儲存至少3個月，以及更長到至少6個月或12個月是可能的，而不會不適當地影響生長激素配方的功效或藥學可接受性。本發明的第五方面是提供一種液體生長激素配方，其包括在磷酸鹽緩衝溶液中的生長激素，可視需要地進一步包括一防腐劑。在本發明的上述形態中，磷酸鹽緩衝溶液較佳地是等張性的。當緩衝溶液是等張的時候，則等張性可藉由一中性的鹽類（例如，氯化鈉）、單糖（例如，乳糖）、雙糖 (例如，蔗糖）或糖醇（例如，甘露糖醇）而提供。本發明之發明者也已發現可有利地使用特定的化合物取代中性的鹽類，以使得生長激素配方成爲等張性。因此，本發明的第六方面是提供一種液體生長激素配方，其包括在等張緩衝溶液中的生長激素，可視需要地是磷酸鹽緩衝溶液，提供等張性之化合物是選擇自一種或多種的單糖（例如，乳糖）、雙糖（例如，蔗糖）或糖醇（例如，甘露糖醇）。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製至於pH，較佳的配方是落在pH 5.0到7.0的範圍內，更佳地是pH 5.6到6.5。令人驚訝地，對於此處所說明的所有配方而言，本發明之發明者已發現，在配方中的結晶形成問題，可藉由確保大約6.2或更高的pH而避免或減到最小。較佳地，配方的pH是在6.15到7.4的範圍內，更佳 10 I紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公餐) "' 1247608 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（γ) 所需要的緩衝液濃度及pH之適當量的適當水合形式的 NaH2P04及Na2HP04所組成，此爲一般熟習於此技藝者所易於了解的。在一較佳具體實施例中，生長激素是人類的生長激素〇在一特別較佳的配方中，生長激素顯示具有少於0.01 %的凝集，較佳地是少於0.1%，更佳地是少於1%，還要更佳地是少於10%的凝集。凝集可藉由標準的大小區別（ size exclusion)高效能液態色層分析法（HPLC)試驗而測量，有關其更多的細節於後節說明，但也可使用任何測量凝集之適當的方法。本發明也包括裝置，係用於將一液體藉由注射而給藥至一病患，以及爲了使用，而裝載上述任何液體生長激素配方的至少一劑量單位。這樣的裝置之實例是筆狀注射器 (pen injector)裝置。病患較佳地是人類。本發明也提供套組，其包括一注射裝置、以及含有上述任何液體生長激素配方的分離容器。此容器較佳地是適應於注射裝置，使得在使用的時候，容器中的液體配方與注射裝置的出口有液狀流通。在一特別較佳具體實施例中，注射裝置是筆狀注射器裝置，以及容器是匣子。此外，本發明提供一種包含上述任何液體配方之匣子，以用於筆狀注射器裝置。本發明之發明者的另一個令人驚訝的發現是，如果裝 12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ---“-------------------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247608 A7 B7 五、發明說明（"）滿並蓋緊生長激素的容器’使得容器內沒有空間或無法接觸到空氣，則不僅是容器的內容物之無菌性是更可信賴地確保，而且，這個因素也可減少或避免生長激素的凝集。因此，仍是本發明進一步的形態’包括一種密封的液體生長激素配方之容器，其中，在裝滿的容器中，實質上是沒有空間的存在。當給藥的病患是人類時，則較佳的生長激素是人類的生長激素。特別較佳的人類生長激素是藉由重組的方法而製造，例如，如同在歐洲專利EP-A-0 217 822 (SCI〇S NOVA)中所教示的方法。根據本發明，可單獨或結合其他使用的人類生長激素之變異體’以及天然的激素’包括已知如生長素（somatropin)之191個胺基酸的物種’以及已知如生長素（somatrem)之192個胺基酸’ fee基δ而是甲硫胺酸（Met)的物種。還有已知像是hGH-V變異體’ 其天然地在懷孕期間的胎盤中發現，並且其基因是已知的，並已製備重組蛋白質。在本發明的液體配方中，人類生長激素的量是取決於所要提供之配方的體積以及人類生長激素的劑量數而定。較佳的劑量體積是〇·4毫升，但也可使用〇·01毫升到I·0 毫升範圍內的體積。其他較佳的劑量體積可落在0·1毫升到0.6毫升的範圍內。在一較佳用於每日給藥的單位劑量中，給藥人類生長激素的量是1.3毫克，但精確的劑量可根據特定的個體而改變。可使用〇·〇33毫克到3.33毫克人類生長激素範圍內 13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） " 丨·！ ----------------訂----------線« (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1247608 A7 B7 五、發明說明（α ) 的劑量，較佳的劑量是在0.33毫克到2.0毫克的範圍內。當給藥的頻率下降時，增加的劑量是適當的。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 體積及/或劑量，可根據來自負責的臨床醫師之特定的忠告，依個體情況而改變。通常，根據本發明之配方，可包括在〇.5毫克/毫升到 20毫克/毫升範圍內的人類生長激素，較佳地是1毫克/毫升到15毫克/毫升，更佳地是2毫克/毫升到10毫克/毫升，還要更佳地是3毫克/毫升到5毫克/毫升。本發明也提供套組，其包括一注射裝置、以及含有上述任何液體生長激素配方的分離容器。當給藥裝置簡單地是一皮下注射器時，則此套組可包括注射器、針頭以及與注射器一起使用，並含有人類生長激素配方的小瓶或安瓿。在一較佳具體實施例中，注射裝置不只是一種簡單的皮下注射器，而且分離容器是適應於注射裝置，使得在使用的時候，容器中的液體配方與注射裝置的出口有液狀流通〇給藥裝置的實例包括，但並不限於，皮下注射器以及筆狀注射器裝置。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製特別較佳的注射裝置是筆狀注射器，其中，容器是一匣子，較佳地是一可拋棄式的匣子。本發明的另一形態是提供一種包含上述液體生長激素配方之匣子，以與筆狀注射器裝置一起使用。此匣子可包含單一劑量或多重劑量的生長激素。本發明較佳的具體實施例，現在將藉由以下的實施例 14 ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） " 1247608 A7 B7 五、發明說明（6 ) 以及相關的圖示而說明’其中： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 第1圖是人類生長激素配方在2_8°ci比較的穩定性數據圖，此配方額外地包含PH 5.6之磷酸鹽緩衝液、氯化鈉及苯甲醇。此比較圖是這些配方含有或不含Pluronic界面活性劑的圖。以週爲單位的時間對人類生長激素純度的對數（log)百分比作圖。第2圖是是人類生長激素配方在2_8°C之比較的穩定性數據圖，此配方額外地包含PH6.0之氯化鈉及苯甲醇’ 。此比較圖是這些配方含有檸檬酸鹽或磷酸鹽緩衝液的圖。以週爲單位的時間對人類生長激素純度的對數（1〇g)百分比作圖。第3圖是人類生長激素配方在2-8°C之比較的穩定性數據圖。此比較圖是含有等張檸檬酸鹽緩衝液及Pluronic 界面活性劑的人類生長激素配方，與僅含有等張磷酸鹽緩衝液而不含界面活性劑的人類生長激素配方之比較圖。奮施例1:大量重組的人顏牛長激素之製備及純化經濟部智慧財產局員工消費合作社印製重組的人類生長激素是在中國倉鼠卵巢（CHO)細胞的細胞培養中製造，此細胞以人類生長激素的基因轉形，在培養的條件下表現人類生長激素蛋白質。此細胞如何製得以及如何生長的細節，說明於歐洲專利ΕΡ-Α-0 217 822 (SCIOS NOVA)中，其納入此處作爲參考資料。培養條件的修飾，以用於工業或商業等級的培養物之生長，是一般熟悉於此技藝者所熟知的。 15 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1247608 A7 B7 五、發明說明（晔）一旦在培養中的細胞生產之後，人類生長激素需要萃取及純化，成爲適合於藥學上使用的形式。這是根據說明於澳洲專利AU 629177 (新南威爾斯及卡文大學醫學硏究所）之方法而實施，其納入此處作爲參考資料。實施例2 :穩定的液_體配方之製備原料藥（bulk)的配方是藉由將各種的成份一起混合而製備。混合成份之等級並不是關鍵的。此外，在混合前，各種成份之精確的狀態或形式也不是關鍵的。在較佳的製備配方之方法中，在混合前，成份是以最方便於混合的狀態存在，並且混合的等級及模式，也是選擇爲最方便的 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製配方之特別較佳的實施例是如下所示：配方」_ 人類生長激素 3.33毫克/¾升 (10國際單位/毫升） NaH2P〇4 1.05毫克/毫升 (也就是1 〇 mM磷酸鹽緩衝液） Na2HP04 0.17毫克/毫升氯化鈉 5.85毫克/¾升 (也就是0.59%重量/體積）苯甲醇 9.00毫克/毫升 (也就是0.9%重量/體積）注射用水適量 pH 6.0 16 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -----訂----------線 1247608 A7 B7 五、發明說明（fS ) 配方π 人類生長激素 3·33毫克/毫升 (10國際單位/毫升） NaH2P04 1.05毫克/毫升 (也就是10 mM磷酸鹽緩衝液） Na2HP04 〇·17毫克/毫升注射用水適量 pH 6.0

配方III 人類生長激素 3·33毫克/毫升 (10國際單位/毫升） NaH2P04 1.05毫克/毫升 (也就是1 〇 mM磷酸鹽緩衝液） Na2HP04 〇. 17毫克/毫升氯化鈉 5.85毫克/毫升 (也就是0.59%重量/體積）注射用水適量 pH 6.0

配方IV l·—.----------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂----- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製人類生長激素 3.33毫克/毫升 (10國際單位/毫升） NaH2P04 1.05毫克/毫升 (也就是10 mM磷酸鹽緩衝液） Na2HP04 〇. 17毫克/毫升苯甲醇 9.00毫克/毫升 (也就是0.9%重量/體積）注射用水適量 pH 6.0 17 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1247608 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（A )

配方V 人類生長激素 3.33毫克/毫升 (10國際單位/毫升） NaH2P04 1.05毫克/毫升 (也就是10 mM磷酸鹽緩衝液） Na2HP04 0.17毫克/毫升甘露糖醇 35毫克/毫升 (3.5%重量纖） Pluronic F-68 2毫克/毫升 (0.2%重量/體積）苯甲醇 9毫克/毫升 (0.9%重量纖）注射用水適量 pH 6.0

配方VI 人類生長激素 3.33毫克/毫升 (10國際單位/毫升） NaH2P04*2H20 0.85毫克/毫升 (也就是1 〇 mM磷酸鹽緩衝液） Na2HP04*7H20 0.31毫克/毫升甘露糖醇 35毫克/毫升 (3.5%重量/體積） Pluronic F-68 2毫克/毫升 (0.2%重量纖）苯甲醇 9·毫克/毫升 (0.9%重量/體積）注射用水適量 pH 6.2 上述作爲舉例的配方，是由以下的方法而製備： 1.雙重強度的賦形劑溶液，是藉由將所有所需的賦形劑溶於注射用水中，並使用莫耳的氫氯酸或氫氧化鈉溶液，而調整至所需的pH。 18 ---.-------------------訂---------線-j (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1247608 A7 B7_ 五、發明說明（η ) 2. 將原料藥之生長激素溶液置於一容器中，並小心攪拌地加入賦形劑溶液。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 3. 如果有需要的話，再次調整pH，並將溶液加至最終的體積。爲了裝塡與筆狀注射器一起使用的匣子，此溶液經由一無菌的濾紙而過濾，並裝塡至注射匣子中，其一端以可移動的活塞密封，另一端則以含有橡膠隔板的鋁墊密封。其他的試驗配方一般是藉由這個方法而製備，以及這些配方的細節將在以下的實施例中提供。奮施例3 :水溶忤人類生長激素配方穩定性之測試經濟部智慧財產局員工消費合作社印製產物之樣品在控制的條件下，在2-8°C中儲存，並在各個不同的時間點分析。產物的穩定性是藉由使用兩種 HPLC的方法而測定，兩者都是根據歐洲藥典對於“注射用生長素”的專題論文，其納入此處作爲參考資料。首先是一逆相HPLC法，以用於相關蛋白質之測定，也就是，由脫醯胺作用（deamidation)及氧化作用所形成的降解產物。其次是大小區別HPLC法，以用於二聚體（dimer)及相關高分子量物質之測定。逆相HPLC法是用於確認許多不同的配方，在2-8°C 中儲存至多達65週的期間之脫醯胺作用及氧化作用。數據顯示在以下的表1到表3，以及圖示於第1圖到第3圖中〇表4顯示對儲存在2-8°C之配方V所進行的穩定性實 19 i紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210>< 297公釐） "一 " 1247608 A7 B7 五、發明說明（π ) 驗之結果。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 有關於以上的大小區別HPLC法，是用於凝集的測試。在實驗期間，沒有發現可測量到的二聚體以及相關高分子量物質之數量。在所有的配方中，均少於1%的凝集（事實上，這是測試中可信賴定量的限制），也就是，沒有觀察到凝集的產生。此結果淸楚地顯示，在穩定配方這方面，磷酸鹽緩衝液是較佳於檸檬酸鹽緩衝液，以及，不含Pluronic界面活性劑的配方引起更大的穩定性。表1 穩定性實驗（2-8。(：）配方A (含有Pluronic、隣酸鹽緩衝液，pH 5.6) 人類生長激素 3.33毫克/毫升 Pluronic 0.8毫克/毫升磷酸鹽緩衝液 10mM 氯化鈉 5.9毫克/毫升苯甲醇 9毫克/毫升經濟部智慧財產局員工消費合作社印製時間（週）人類生長激素的純度人類生長激素純度的對數百分比百分比 0 98.90 1.9952 3 98.35 1.9928 9 97.84 1.9905 20 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1247608 A7 B7 五、發明說明（I?) 13 97.05 1.9870 30 96.26 1.9834 k 日-\104 -1.253 配方B (無Pluronic、憐酸鹽緩衝液，pH 5.6 ) 人類生長激素 3.33毫克/毫升磷酸鹽緩衝液 10mM 氯化鈉 5.9毫克/毫升苯甲醇 9毫克/毫升 l· ------------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製時間（週）人類生長激素的純度百分比人類生長激素純度的對數百分比 0 96.28 1.9835 0 95.88 1.9817 4 95.45 1.9798 4 95.80 1.9814 15 95.67 1.9808 15 95.89 1.9818 26 96.46 1.9752 26 93.94 1.9729 39 94.15 1.9738 52 93.21 1.9695 k 日“xlO4 -0.8272 21 訂-------！綉 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1247608 A7 B7 五、發明說明（y ) 表2 穩定性實驗（2-8°C ) 人類生長激素 3.33毫克/毫升 Pluronic 0.8毫克/毫升檸檬酸鹽緩衝液 10mM 氯化鈉 5.9毫克/毫升苯甲醇 9毫克/毫升 i 丨—------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製配方Cl及C2 (ΡΗ5·6檸檬酸鹽緩衝液+Phir〇mc) 時間（週）人類生長激素的純度百分比人類生長激素純度的對數百分比 0 97.89 1.9907 0 97.93 1.9909 4 97.12 1.9873 4 96.80 1.9859 13 95.44 1.9797 13 94.85 1.9770 26 93.19 1.9694 26 93.60 1.9713 52 91.32 1.9606 52 91.06 1.9593 0 97.48 1.9889 0 97.71 1.9899 22 ·111111. .線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1247608 A7 B7 五、發明說明（) 4 96.93 1.9865 4 96.92 1.9864 13 94.89 1.9772 13 95.38 1.9795 26 92.59 1.9666 26 92.65 1.9668 52 90.69 1.9576 52 91.11 1.9596 k 日“xlO4 -L954 表3 穩定性實驗（2-8它）配方D 人類生長激素 3.33毫克/毫升磷酸鹽緩衝液 10 mM，pH 6.0 氯化鈉 5.9毫克/毫升苯甲醇 9毫克/毫升 l· |_-----------裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製時間（週）人類生長激素的純度百分比人類生長激素純度的對數百分比 0 98.47 1.9933 4 97.82 1.9904 9 97.44 1.9887 k日-丨xlO4 -1.65 23 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1247608 A7 B7 五、發明說明（P )穩定性實驗（2-8°C) 配方El、E2及E3 (檸檬酸鹽緩衝液pH 6·0 + Plunmic) 人類生長激素 3.33毫克/毫升 Pluronic 0.8毫克/毫升檸檬酸鹽緩衝液 10 mM ^ pH 6.0 氯化鈉 5.9毫克/毫升苯甲醇 9毫克/毫升經濟部智慧財產局員工消費合作社印製時間（週）人類生長激素的純度百分比人類生長激素純度的對數百分比 0 97.75 1.9901 0 97.56 1.9893 5 96.05 1.9825 5 96.95 1.9865 9 96.29 1.9836 9 96.12 1.9828 0 97.96 1.9910 0 97.93 1.9909 5 97.09 1.9872 9 96.52 1.9846 9 96.51 1.9846 0 98.54 1.9936 0 98.47 1.9933 24 iL--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·11111 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1247608 A7 B7 五、發明說明（B ) 5 97.68 1.9898 5 97.43 1.9887 9 96.67 1.9853 9 96.77 1.9857 k 日“xlO4 -2.55 穩定性實驗；1 ί 方 V，2-8〇C 時間（週）人類生長激素的純度百分比人類生長激素純度的對數百分比 0 97.21 1.988 0 97.23 1.988 4.5 96.50 1.985 4.5 96.65 1.985 9 95.18 1.979 9 95.19 1.979 13 95.23 1.979 13 95.32 1.979 26 94.64 1.976 26 94.41 1.975 k 日“xlO4 -2.489 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製實施例4 :藉由調整液體配方之pH以避免結晶形成一系列配方VI之各種pH値（0.1單位差距），是藉由調整個別量的磷酸鹽緩衝液成份而製備。將配方的1.5 25 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1247608 A7 _ B7_ 五、發明說明（>+) 毫升分裝液裝到個別的膠囊中，以用於筆狀注射器。將膠囊儲存在15°C中達3個月。在膠囊中的結晶出現與否，是藉由眼睛在儲存的過程中測定。在低於pH 6.2 (也就是，pH 6.1)的配方中觀察到結晶形成。在pH 6.2及以上的配方中，沒有觀察到結晶形成〇經由比較，當儲存在15°C或25°C達6週時，配方V (pH 6)顯示具有結晶形成。此外，當儲存在2-8°C時，配方V ( pH 6 )在大約2-3個月內，也顯不具有結晶形成。 ------------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) • ϋ emamme n ar— 1· ϋ— n· 訂---------線rr 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 26 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐）

Claims

1247608 六、申請專利範圍 1·〜種多劑型、儲存穩定性液體人類生長激素調配 '物’其主要由在等張磷酸鹽緩衝液中的生長激素、防腐劑及非離子性界面活性劑所組成，其中磷酸鹽緩衝液的等張性是由中性鹽、單糖、雙糖或糖醇提供，該調配物的pH値在6· 2至6. 5的範圍。 2·如申請專利範圍中第1項之調配物，其在儲存期間沒有可偵測到的結晶形成。 3·如申請專利範圍第2項之調配物，其中儲存溫度爲15°C且儲存3個月。 4·如申請專利範圍第2項之調配物，其中儲存溫度在2°C至8它的範圍且儲存至少6個月。 5·如申請專利範圍第2項之調配物，其中沒有結晶开多成胃藉由在10倍放大率的光學顯微鏡下偵測。 6·如申請專利範圍第1項之調配物，其pH爲6.2。 7·如申請專利範圍第1項之調配物，其中等張性係由甘露糖醇提供。 8·如申請專利範圍第1項之調配物，其中該防腐劑是選擇自酚、苯甲醇、間甲酚、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酉文丙酉旨、氯化苯甲烴錢（benzalkonium chloride)及氣化卞乙氧錢（benzethonium chloride)。 9·如申請專利範圍第1項之調配物，其中該非離子性界面活性劑爲聚山梨酸酯或 poloxamer 〇 10·如申請專利範圍第9項之調配物，其中該非離子丨生界面活性劑爲Poloxamer 188。 27 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·% -έ 線* 1247608 A8 B8 CS D8 、申請專利範圍 11. 如申請專利範圍第1項之調配物，其中該非離子性界面活性劑濃度在〇· 05%到5% (重量/體積）範圍。 12. 如申請專利範圍第11項之調配物，其中該非離子性界面活性劑濃度爲0.2% (重量/體積）。 13. 如申請專利範圍第1項之調配物，其具有下列組成份：人類生長激素 NaH2P〇4-2H2〇 ^ 3· 33毫克/毫升（10國際單位/毫升） 10mM磷酸鹽緩衝液 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) >- Na2HP〇4*7H2〇甘露糖醇 Pluronic F-68 苯甲醇注射用水 pH 6.2 35毫克/毫升 2毫克/毫升 9毫克/毫升適量 (3.5%重量/體積） (0.2%重量/體積） (0.9%重量/體積）、II: 線本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格(210 X 297公釐〉