TWI233932B

TWI233932B - Process for purifying glycopeptide phosphonate derivatives

Info

Publication number: TWI233932B
Application number: TW091118800A
Authority: TW
Inventors: Donald E Schmidt Jr; Jeanmarie Donovan Sganga
Original assignee: Theravance Inc
Priority date: 2001-08-24
Filing date: 2002-08-20
Publication date: 2005-06-11
Also published as: US7468420B2; EP1487863B1; US20060100415A1; CN1671732A; KR20040028998A; CA2457218A1; US20080103290A1; JP2005505542A; US7858583B2; ES2324771T3; NO20040768L; US20030119722A1; US20090215673A1; US7015307B2; CN100418980C; DK1487863T3; DE60232197D1; US20110257364A1; US7375181B2; EP1487863A2

Description

1233932 A7 B7 五、發明説明（1 ) 相關申請案之交叉參考本申請案主張在2001年8月24日提出申請之美國臨時申請案第60/3 14,712號的利益，將其整個揭示文併入本文以供參考其全文。發明背景本發明的範圍本發明係專注於醣肽抗體之新穎膦酸化物衍生物及相關化合物的純化作用。本發明特別專注於以樹脂色層分離法純化醋肤膦酸化物衍生物之作用。背景醋肽（例如，戴伯t肽（dalbaheptide)係一種熟知的抗體種類，其係以各種微有機體生產的抗體（參考紐約Marcel Dekker公司以R.納加拉珍（Nagarajan)編輯之醋肽抗體 (Glycopeptide Antibiotics))。這些複合多環肽化合物係非常有效的抗多數革蘭氏正性菌的抗細菌劑。雖然未使用潛效性抗細菌劑（醣肽抗體）如其它抗體種類（如半合成之青霉素、頭孢菌素及林肯霉素）一樣常用於治療細菌疾病，這是由於憂慮關於毒性的問題。但是，在最近幾年已進展出對許多常使用的抗體有抵抗性的細菌（參考J. E·葛拉西（Geraci)等人之1^^>^〇(1；1丨11.?1*〇(：· 1983，58，88-91 及 M·佛迪斯（Foldes)之 J· Antimicrob. Chemother 1983，11，21-26)。因為醣肽抗體常有效抵抗這些細菌的抗性菌株，所以如萬古霉素之類的醣肽變成治療以這些有機體引起的感染的最新手段。但是，最近已在各種微有機體 -4 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1233932 A7 B7 五、發明説明（2 ) 中出現抗萬古霉素性，如抗萬古霉素之腸球菌（VRE)，造成增成關於未來有效治療細菌感染的憂慮（參考醫院感染控制業務諮詢委員會（HosPital Infection Control Practices Advisory Committee)之感染控制醫院傳染病學（Infection Control Hospital Epidemiology)，1995，17，364-369; Α· Ρ·強森 (Johnson)等人之 Clinical Microbiology Rev·，1990，3，280-291; G. M.依利歐寶羅斯（Eliopoulos)之 European J. Clinical Microbiol·，Infection Disease，1993，12，409-412及 P.寇凡林 (Courvalin)之 Antimicrob. Agents Chemother，1990，34，2291-2296) 〇在此項技藝中已知萬古霉素及其它醣肽的衍生物。例如，參考美國專利申請案第4,639,433號；第4,643,987號；第 4,497,802號；第 4,698,327號；第 5,591，714號；第 5,840,684 號及第 5,843,889號。在 EP 0 802 199 ; EP 0 801 075 ; EP 0 667 353 ； WO 97/28812 ； WO 97/38702 ； WO 98/52589 ； WO 98/52592 及在 J. Amer· Chem. Soc·，1996，118，13 107-13 108、J. Amer. Chem. Soc·，1997，119，12041-12047 及 J· Amer. Chem. Soc·， 1994, 116, 4573-4590中揭示其它的衍生物。醣肽抗體之製備作用通常包括純化步驟。在例如美國專利申請案第4,440,753號、第4,845,194號、第4,874,843號、第 5，149,784號、第5,258,495及第5,853,720號中說明適合於純化醣肽（特別是萬古霉素及相關的化合物）之方法。在 WO 91/08300及WO 93/21207中揭示其它的方法。除了以上參考的揭示文之外，目前對具有有效的抗細菌 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1233932 A7

活性及改進P翁受丨t A x t 、 ★員女王性矢布的新穎it肽衍生物仍有需 ^。特別對有效抗寬光譜病原微有機體（包括抗萬古霉素之，有機體）及降低組織累積及/或腎毒性_肽衍生物仍有 “ 一' 者為了這些有效的新穎衍生物，故對純化該化 a物有效方法仍有需求，以回收適合於醫藥產物合成作用的高純度形式之產物。本發明的概述本發月係&供純化具有鬲有效的抗細菌活性及改進哺乳類安全性分布的新穎醣肽膦酸化物衍生物之方法。更特定。之，本發明係提供以樹脂色層分離法純化_肽衍生物之方法。根據本發明的方法純化的醣肽膦酸化物衍生物在投予哺礼類時展現出經降低之組織累積及/或腎毒性。將醣肽化合物以一或多個（例如，1、2或3個）含有一或多個（例如，1、 2或3個）亞磷幾基（—po#2)之取代基取代；或以其在醫藥上可接受之鹽、立體異構物或前體藥物取代。將醣肽化合物以一或兩個含有一或兩個亞磷羧基之取代基取代較佳。將醣肽化合物以一個含有一或兩個亞磷獲基（以一個亞鱗叛基較佳）之取代基取代更佳。也可將醣肽化合物視需要以其它不包含亞磷羧基之取代基取代，其先決條件係至少一個取代基包含一或多個亞磷羧基。因此，在一種較佳的衍生物中，將醣肽化合物在c-末端上以含有一或兩個亞磷羧基（·Ρ〇3Η2)之取代基取代；或以其在醫藥上可接受之鹽、立體異構物或前體藥物取代。將含 -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 1233932 A7 ______Β7 五、發明説明（4 ) 亞磷幾基之取代基以經由醯胺鍵、酯鍵或硫酯鍵（以經由醯胺鍵更佳）附著於C-末端上的羰基上較佳。含亞磷羧基之取代基以包含一個亞磷羧基較佳。在c-末端上特別佳的含亞磷幾基之取代基包括亞磷羧基甲基胺基、3-亞磷羧基丙基胺基及2-經基-2-亞磷幾基乙基胺基。在另一種較佳的衍生物中，將醣肽化合物在末端上（在間苯二酴環上）以含有一或兩個亞磷羧基（-p〇3h2)之取代基取代；或以其在醫藥上可接受之鹽、立體異構物或前體藥物取代。將含亞磷羧基之取代基以經由附著於R—末端之胺基甲基之氮原子附著於R-末端上較佳。含亞磷羧基之取代基以包含一個亞磷羧基較佳。在R•末端上特別佳的含亞磷羧基之取代基包括N-(亞磷羧基甲基）胺基甲基、_(2_羥基-2_ 亞磷羧基乙基）胺基甲基、N-羧甲基(亞磷羧基甲基）胺基甲基、N，N-雙（亞磷羧基甲基）胺基甲基及Ν·(3_亞磷叛基丙基）胺基曱基。在還有另一種較佳的衍生物中，將醣肽化合物在C-末端上及R-末端上以含有一或兩個亞磷羧基（-P〇3H2)之取代基取代；或以其在醫藥上可接受之鹽、立體異構物或前體藥物取代。含亞磷叛基之取代基以各自包含一個亞鱗複基較佳。較佳的醣肤衍生物係式I之_肤：本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（5 )

(I) 其中： R19係氫； R 係-dRb-(Z)x、Rf、-C(0)Rf或-C(0)-Ra-Y-Rb-(Z)x ; ΚΊ^ -0RC > -NRCRC > -〇.Ra.Y-Rb.(Z)x ^ -NRc-Ra-Y.Rb-(Z)x ^ -NR R或-0-Rc ;或r3係包含一或多個亞磷羧基之以氮連接、以氧連接或以硫連接之取代基； R5 係選自由氫、基、-CH(Rc)-NRCRC、_CH(RC)_NRcRe、 -CH(Rc)-NRc-Ra.Y-Rb.(Z)x. -CH(Rc)-Rx' -CH(Rc)-NRc-Ra-C(=0)-

Rx及含有一或多個亞磷羧基之取代基所構成的群組；每一個Ra係獨立選自由伸烷基、取代之伸烷基、伸晞基、取代之伸晞基、伸炔基及取代之伸炔基所構成的群組；每一個Rb係獨立選自由共價鍵、伸烷基、取代之伸烷 -8 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（6 ) 基、伸晞基、取代之伸晞基、伸块基及取代之伸決基所構成的群組，其先決條件係在Z是氫時，則Rb不是共價鍵；每一個1^係獨立選自由氫、烷基、取代之烷基、晞基、取代之晞基、炔基、取代之炔基、環烷基、取代之環烷基、環晞基、取代之環烯基、芳基、雜芳基、雜環系及-C(0)Rd 所構成的群組；每一個Rd係獨立選自由烷基、取代之烷基、晞基、取代之晞基、炔基、取代之炔基、環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環晞基、芳基、雜芳基及雜環系所構成的群組；

Re係糖化物基；每一個以係獨立是烷基、取代之烷基、晞基、取代之晞基、炔基、取代之炔基、環烷基、取代之環烷基、環埽基、取代之環烯基、芳基、雜芳基或雜環系所構成的群組；

Rx係以N·連接之糖化物或以N-連接之雜環；每一個Y係獨立選自由氧、硫、-S-S-、-NRC-、-S(0)-、 -S02-、-NRcC(0)-、-0S02-、-0C(0)-、-NRcS02-、-C(0)NRc-、 -C(0)0-、-S02NRc-、_S020-、-P(0)(0Rc)0-、-P(〇)(〇Rc)NRc-、 -0P(0)(0Rc)0-、-0P(0)(0Rc)NRc-、-0C(0)0-、-NRcC(0)0-、 -NRcC(0)NRe-、-0C(0)NRc-、-C(=0)-及-NRcS02NRc-所構成的群組；每一個z係獨立選自氫、芳基、環烷基、環晞基、雜芳基及雜環系；及 X係1或2 ; -9 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1233932 A7 B7_____ 五、發明説明（7 ) 或其在醫藥上可接受之鹽、立體異構物或前體藥物；其先決條件係至少其中一個R3及R5係含有一或多個亞磷羧基之取代基。 R20 .a-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3;-CH2CH2CH2-NH- (ch2)8ch3;-ch2ch2ch2ch2-nh-(ch2)7ch3;-ch2ch2-nhso2- (CH2)9CH3 ； -CH2CH2-NHS〇2-(CH2)iiCH3 ； -CH2CH2-S-(CH2)8CH3 ; -CH2CH2-S-(CH2)9CH3 ; -CH2CH2-S-(CH2)10CH3 ; -CH2CH2CH2-S-(CH2)8CH3 ; -ch2ch2ch2-s-(ch2)9ch3 ; -ch2ch2ch2-s-(ch2)3-ch=ch(ch2)4ch3(&s);-ch2ch2ch2ch2-s-(ch2)7ch3;-ch2ch2-s(o)-(ch2)9ch3;-ch2ch2-s- (CH2)6Ph ; -CH2CH2-S-(CH2)8Ph ; -CH2CH2CH2-S-(CH2)8Ph ; -CH2CH2-NH-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph ; -CH2CH2-NH-CH2-4-[4-(CH3)2CHCH2-]-Ph ; -CH2CH2_NH-CH2-4-(4-CF3-Ph)-Ph ; -CH2CH2-S-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph;-CH2CH2-S(0)-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph;-CH2CH2CH2-S-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph;-CH2CH2CH2-S(0)-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph ; -CH2CH2CH2-S-CH2-4-[3,4-二-Cl-PhCH2〇-]-Ph ； -CH2CH2-NHS〇2-CH2-4-[4-(4-Ph)-Ph]-Ph ； -CH2CH2CH2-NHS02-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph ; -CH2CH2CH2-NHS02-CH2-4-(Ph-C 三 C-)-Ph ; -CH2CH2CH2-NHS02-4-(4-Cl-Ph)-Ph;或-CH2CH2CH2-NHS02-4-(茶-2-基）-Ph較佳。R20也以 4-(4-氯苯基）节基或4-(4-氯辛氧基）爷基較佳。替代選擇之醋肽衍生物係其中R19係氫；R20係 -CH2CH2NH-(CH2)9CH3 ; R3係-0H及R5係含亞嶙竣基之取代基的式I化合物；或其在醫藥上可接受之鹽。 -10 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1233932 A7 B7

五、發明説明（8 ) 在還有另一個替代選擇中，醣肽衍生物係中氫；

Rf. -C(G)R^-C(0).R,Y.Rb.(Z)x； R^ -OH及R5係-CH2-NH-CH2-P(〇)(〇h)2之式I化合物；或其在醫藥上可接受之鹽。八上述的化合物係高度有效的抗細菌劑。在2001年5月1日提出申請的共同審理之美國專利中請序號第讀47,〇42號中進「步說明本發明的醣肽化合物及治療具有細菌疾病之哺乳類的方法，其包含以有效的治療劑量之本發明化合物投予哺乳類，將其揭示文併入本文以供參考。一種製備在C-末端上以包含一或多個亞磷羧基之取代基取代之醣肽的方法，其包含以其+c_末端係羧基之對應膽肽原料與適合的含亞磷羧基之化合物偶合。一種製備在R-末端上以包含一或多個亞磷羧基之取代基取代足醣肽的方法，其包含以其中末端未被取代之對應St肽原料與適合的含亞磷羧基之化合物偶合。在萬古胺 (vancosamine)胺基末端上取代_肽原料時，則這樣的方法可進一步視需要包含以還原垸基化對應醣肽（其中萬古胺末端係對應胺）製備醣肽原料。一種製備在C-末端上被取代之醣肽的方法包含衍生其中C-末端係羧基之對應醣肽原料。一種製備在R-末端上被取代之醣肽的方法包含衍生其中R-末端未被取代（即氫）之對應醣肽原料。此外，一種製備其中R3係-OH ; R5係-CH2-NH-Ra-P(0)(0H)2 ; R19係氫及 R20係-Ra-Y_R、(z)x4 -Rf(Ra、Rb、Rf、 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇X 297公釐） A7 B7 1233932 五、發明説明（9 ) Y、Z及X係如本文的定義）之式I化合物或其鹽之方法包含以下的步驟： (a) 將其中R3係-0H ;及R5、R19和R2G係氫之式I化合物或其鹽以式HC(0)-Ra’-Y-Rb-(Z)x4HC(0)Rf’（其中 Ra’及 Rf’分別代表少一個-CH2-基之Ra&Rf)之醛還原烷基化，以形成其中 R3係-OH ; R5和 R19係氫及 R2G係-Ra-Y-Rb-(Z)X* -Rf之式 I化合物或其鹽；及 (b) 將步驟（a)之產物與醛及H2N-Ra-P(0)(0H)2反應，以形成其中 R3係-OH ; R5係-CH2NH-Ra-P(0)(0H)2 ; R19係氫及 R20 係-Ra-Y-Rb-(Z)X* -Rf之式I化合物或其鹽。在以下的表I中展示較佳的式I之醣肽化合物，其中R19係氫。表I :較佳的式I化合物化合物 R3 R5 R20 1 亞磷羧基甲基胺基 Η CH3(CH2)9NHCH2CHr 2 亞鱗叛基乙基胺基 Η CH3(CH2)9〇CH2CHr 3 亞磷羧基甲基胺基 Η CH3(CH2)9SCH2CHr 4 亞磷羧基甲基胺基 Η CH3(CH2)ir 5 亞磷羧基甲基胺基 Η 4-(4-氯苯基)芊基 6 亞磷羧基乙基胺基 Η 2-(4-(4-氯苯基)芊基胺基) 乙基 7 亞磷羧基甲基胺基 Η 4-(4’-氯基聯苯基)丁基 8 亞磷羧基甲基胺基 Η 5-(4’-氯基聯苯基)戊基 -12 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（1〇 ) 9 3·亞磷羧基丙基胺基 Η CH3(CH2)9SCH2CHr 10 2-羥基-2-亞磷羧基乙基胺基 Η 4-(4-氯苯基)芊基 11 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 ch3(ch2)9nhch2ch2- 12 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 CH3(CH2)9SCH2CH2- 13 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 CH3(CH2)9OCH2CHr 14 OH (亞磷羧基曱基)胺基甲基 CH3(CH2)lr 15 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 4-(4-氣冬基)节基 16 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 2-(4-(4-氯苯基）；基胺基) 乙基 17 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 4-(4’-氯基聯苯基)丁基 18 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 5-(4’-氯基聯苯基)戊基 19 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 3-[4-(4-氣基芊氧基）芊硫基]丙基 -13 - ^纸張尺度適用τ閥家_i^(CNS) A4規格(21GX297公爱) 1233932 A7 B7 五、發明説明（11 ) 20 OH N-(2-羥基-2-亞磷羧基乙基）胺基甲基 CH3(CH2)9SCH2CHr 21 OH N-(羧甲基)-Ν·(2· 亞磷羧基甲基)胺基甲基 ch3(ch2)9sch2ch2- 22 OH Ν，Ν-雙（亞磷羧基甲基）胺基甲基 ch3(ch2)9nhch2ch2- 23 OH 3-亞磷羧基丙基胺基甲基 ch3(ch2)9sch2ch2- 24 OH 3-亞磷羧基丙基胺基甲基 4-(4-氯苯基)卞基 25 亞磷羧基甲基胺基 -CHrN-(N-CHrD- 甲葡胺 CH3(CH2)9NHCH2CHr 26 OH (亞磷羧基甲基)胺基甲基 -(CH2)3NH-S02-4-(4-氯苯基)苯基在投予哺乳類時，已發現以本文說明的亞磷羧基化合物意外展現降低之組織累積及/或腎毒性。雖然不想以理論限制’但是咸信亞磷羧基部份在生理條件下具有增加醣肽的整個負電荷的功能，因此加速在投藥之後的哺乳類分泌。與缺乏亞磷羧基官能性之對應化合物比較，本發明的亞磷羧基化合物意外增加的分泌作用可能成為發現這些化合物 -14 - 1233932 A7 B7 五、發明説明（12 ) 會降低組織累積及/或減低腎毒性的原因。根據本發明較佳的具體實施例，以使用以聚苯乙晞與二乙烯基苯之共聚物為主之樹脂的樹脂色層分離法純化醣、月太的亞磷複基衍生物。在市場上以例如TosoHaas(賓州蒙哥馬利（Montgomery))、Rohm&Haas(賓州費城）、Mitsubishi Chemical Industries Ltd.(曰本東京）及 Dow Chemical Co.(MI 米特蘭（Miland))提供各種廣泛有用的聚苯乙烯樹脂。樹脂典型係由具有介於約20微米至約800微米之範圍内的特性尺寸之多孔珠所組成的，具有介於約50埃至約1000 埃之範圍内的直徑孔。本發明的純化方法包含：將含有醣肽膦酸化物衍生物及極性有機溶劑的第一個酸化水溶液與聚苯乙晞二乙晞基苯樹脂接觸；將接觸之樹脂以含有極性有機溶劑的第二個酸化水溶液溶離，以形成溶離液；及將純化之醣肽膦酸化物衍生物與溶離液分離。如本文使用的“極性有機溶劑”術語包括甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、丙酮、正丙醇、正丁醇、異丁醇、甲乙酮、四氫呋喃及類似的溶劑，其具有少許的水溶解度或與水互溶。較佳的極性有機溶劑係甲醇、乙醇、異丙醇及乙腈。適合於第一及第二個水溶液酸化的酸包括醋酸、三氟醋酸、氫氯酸、硫酸、磷酸及類似的酸。醋酸及氫氯酸係以本發明而言較佳的酸。以此項技藝已知的方法分離純化產物，如以凍乾或沉澱 -15 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1233932 A7 ___B7 五、發明説明（13 ) 及接著以蒸發及/或過濾作用。分離法視需要包括第一個濃縮步驟，其中使用樹脂（以聚苯乙烯二乙晞基苯樹脂較佳）處理溶離液，以形成具有濃度較高的純化產物溶液，自其分離出產物。在一種純化法中，將樹脂裝載在管柱上及收集餾份中的溶離液，以薄層色層分離法（TLC)及高壓液相色層分離法 (HPLC)監控存在的醣肽。在分離產物之前，先匯集含有產物濃度及純度比預期門檻更高的餾份。使用本發明的方法獲得具有純度超過80%之亞磷羧基醣肽樣品。本發明的詳細說明本發明係關於新穎化合物之純化作用，其係含有一或多個含有一或多個亞磷羧基之取代基的醣肽抗體衍生物。在說明化合物時，以下的術語具有以下的意義，除非有其它另外的指示。定義基”術語表示單基支鏈或非支鏈飽和烴鏈，以具有從1 至40個碳原子較佳，以1至10個碳原子更佳，並以1至6個碳原子甚至更佳。以如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、正己基、正癸基、十四燒基及類似物之類的基為實例說明該術語。 “取代之烷基”術語表示具有從1至8個選自由烷氧基、取代之烷氧基、環烷基、取代之環烷基、環晞基、取代之環晞基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、取代之胺基、胺基酿基、胺基臨氧基、氧胺基臨基、疊氮基、氛基、函素、 -16 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1233932 A7 B7 五、發明説明（14 ) 經基、嗣基、硫嗣基、複基、複基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-SO-烷基、-S0-取代之烷基、-so-芳基、-so-雜芳基、-so2·烷基、-so2-取代之烷基、-so2-芳基、-S03H、胍基及-so2·雜芳基所構成的群組之取代基之如以上定義之烷基，以1至5個取代基較佳，並以1至3個取代基更佳。 “伸烷基”術語表示二基支鏈或非支鏈飽和烴鏈，以具有從1至40個碳原子較佳，以1-10個碳原子較佳，並以1-6個碳原子更佳。以如亞甲基（-CH2-)、伸乙基（-CH2CH2-)、伸丙基 (例如，-CH2CH2CH2-)及-CH(CH3)CH2-)及類似物之類的基為實例說明該術語。 “取代之伸烷基”術語表示具有從1至5個選自由烷氧基、取代之烷氧基、環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環晞基、si基、si基胺基、醯氧基、胺基、取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、羧基、羧烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、起胺基、燒乳基胺基、硝基、-SO-燒基、-SO-取代之坑基、 -so-芳基、-so·雜芳基、-so2-烷基、-so2-取代之烷基、-so2-芳基及-so2-雜芳基所構成的群組之取代基之如以上定義之伸烷基，並以1至3個取代基較佳。此外，這些取代之烷 -17 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1233932五、發明説明（15 A7 B7

撐基包括那些以伸烷基上的2個取代基稠合形成稠合成伸燒基的一或多個環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環晞基、芳基、雜環系或雜芳基之基。這些稠合基以包括從1至3個稠合環結構較佳。此外，取代之伸烷基術語包括其中以氧、硫或-NR_置換從1至5個伸烷基碳原子之伸燒基’在此R係氫或烷基。取代之伸烷基的實例係氯基亞甲基（-CH(Cl)-)、胺基亞甲基（_CH(NH2)CH2_)、2-羧基伸丙基異構物（-ch2ch(co2h)ch2-)、乙氧基乙基（-CH2CH20-CH2CH2-) 及類似物。 “芳烷基”術語表示·伸烷基-芳基及-取代之伸烷基-芳基，在此伸烷基、取代之伸烷基及芳基係本文的定義。以 #基、苯乙基及類似物為實例說明這些烷芳基。 “烷氧基”術語表示烷基_0-、晞基-0-、環烷基-〇-、環晞基及炔基-0-，在此烷基、埽基、環烷基、環烯基及炔基係如本文的定義。較佳的烷氧基係烷基-〇-及包括以實例方式的甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、特丁氧基、第二丁氧基、正戊氧基、正己氧基、丨，2-二甲基丁氧基及類似物。 “取代之烷氧基，，術語表示取代之烷基-ο-、取代之締基 -〇-、取代之環烷基-〇-、取代之環晞基-〇-及取代之決基 -〇-，在此取代之烷基、取代之晞基、取代之環燒基、取代之環晞基及取代之炔基係如本文的定義。 “烷基烷氧基，，術語表示-伸烷基-0-烷基、伸烷基取代之烷基、取代之伸烷基-ο-烷基及取代之伸虎基-ο-取代之 -18 - 張尺度適财@ @家標A4規格(210X297公爱） 1233932 A7 __B7_______ 五、發明説明（16 ) 烷基，在此烷基、取代之烷基、伸烷基及取代之伸烷基係如本文的定義。較佳的烷基烷氧基係伸烷基烷基及包括以實例方式的亞甲基甲氧基（-ch2och3)、伸乙基甲氧基 (-CH2CH2OCH3)、正伸丙基異丙氧基（-CH2CH2CH2OCH(CH3)2)、亞甲基特丁氧基（-ch2-o-c(ch3)3)及類似物。 “烷基硫代烷氧基”術語表示-伸烷基-S-烷基、伸烷基-S-取代之烷基、取代之伸烷基-S-烷基及取代之伸烷基-S-取代之烷基，在此烷基、取代之烷基、伸烷基及取代之伸烷基係如本文的定義。較佳的烷基硫代烷氧基係伸烷基烷基及包括以實例方式的亞甲基硫代甲氧基（-CH2SCH3)、伸乙基硫代甲氧基（-CH2CH2SCH3)、正伸丙基異硫代丙氧基 (ch2ch2ch2sch(ch3)2)、亞甲基特硫代丁氧基（-CH2SC(CH3)3) 及類似物。 “締基’’術語表示單基支鍵或非支鍵不飽和煙基，以具有從2至40個碳原子較佳，以2至10個碳原子更佳，並以2至6 個碳原子甚至更佳，以及具有至少1個乙晞基不飽和位置，並以從1-6個該位置較佳。較佳的晞基包括乙晞基 (-ch=ch2)、正丙烯基（-CH2CH=CH2)、異丙烯基（-C(CH3)=CH2) 及類似物。 “取代之晞基”術語表示具有從1至5個選自由烷氧基、取代之烷氧基、環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環締基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧胺基醯基、疊氮基、氰基、函素、羥基、酮基、硫酮基、羧基、羧烷基、硫代芳氧基、硫代 -19 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公爱) 1233932 A7 B7 五、發明説明（17 ) 雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-so-烷基、_so-取代之烷基、_so-芳基、-so-雜芳基、-so2-烷基、-so2-取代之烷基、-so2-芳基及-so2-雜芳基所構成的群組之取代基之如以上定義之烯基，並以1至3個取代基較佳。 “伸晞基”術語表示二基支鏈或非支鏈不飽和烴基，以具有從2至40個碳原子較佳，以2至10個碳原子更佳，並以2 至6個碳原子甚至更佳，以及具有至少1個乙晞基不飽和位置，並以從1-6個該位置較佳。以如伸乙烯基（-CH=CH-)、伸丙烯基異構物（例如，-CH2CH=CH-)及-C(CH3)=CH-)及類似物之類的基為實例說明該術語。 “取代之伸烯基”術語表示具有從1至5個選自由烷氧基、取代之烷氧基、環烷基、取代之環烷基、環晞基、取代之環晞基、si基、§&基胺基、驢氧基、胺基、取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、羧基、羧烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-so-烷基、-so-取代之烷基、 -so-芳基、-so-雜芳基、-so2-烷基、以-so2-取代之烷基、 -so2-芳基及-so2-雜芳基所構成的群組之取代基之如以上定義之伸烯基，並以從1至3個取代基較佳。此外，這些取代之伸烯基包括那些以伸烯基上的2個取代基稠合形成稠 -20 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（18 ) 合成伸烯基的一或多個環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環烯基、芳基、雜環系或雜芳基之基。 “炔基’’術語表示單基不飽和烴基，以具有從2至40個碳原子較佳，以2至20個碳原子更佳，並以2至6個碳原子甚至更佳，以及具有至少1個乙炔（參鍵）不飽和位置，並以從1_6 個該位置較佳。較佳的炔基包括乙炔基卜C三CH)、丙炔基 (CHzCe CH)及類似物。 “取代之炔基”術語表示具有從1至5個選自由烷氧基、取代之燒氧基、環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環晞基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、取代之胺基、胺基酸基、胺基醯氧基、氧胺基醯基、疊氮基、氰基、卣素、我基、竣基、羧燒基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、羥胺基、燒氧基胺基、硝基、-SO-烷基、取代之烷基、_s〇_ 芳基、-SO-雜芳基、_s〇2·垸基、_s〇2-取代之燒基、-s〇2- 芳基及-S〇2·雜芳基所構成的群組之取代基之如以上定義之炔基，並以1至3個取代基較佳。 ‘‘伸決基’’術語表示二基不飽和烴基，以具有從2至4〇個碳原子較佳，以2至10個碳原子更佳，並以2至6個碳原子甚至更佳，以及具有至少1個乙炔（參鍵）不飽和位置，並以從U 個該位置較佳。較佳的伸炔基包括伸乙炔基（_c三c_)、伸丙块基（例如，-CHaCEC-)及類似物。 “取代又伸炔基”術語表示具有從丨至5個選自由烷氧基、 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）

纛 1233932 A7 B7 五、發明説明（19 ) 取代之烷氧基、環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環晞基、酿基、驢基胺基、酿氧基、胺基、取代之胺基、胺基龜基、胺基臨氧基、氧胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫酮基、羧基、羧烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-SO-烷基、 -SO·取代之烷基、-SO-芳基、-S0_雜芳基、-S02-烷基、-so2_ 取代之烷基、-so2-芳基及-so2-雜芳基所構成的群組之取代基之如以上定義之伸炔基，並以1至3個取代基較佳。 “醯基”術語表示HC(O)-基、烷基-C(0)_、取代之烷基 -C(0)-、環烷基·(：(0)·、取代之環烷基·<：(0)-、環烯基-C(0)-、取代之環烯基-C(0)-、芳基-C(0)-、雜芳基-C(0)-及雜環系 -c(o)-，在此烷基、取代之烷基、環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環烯基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定義。 “醯基胺基”或”胺基羰基”術語表示-C(0)NRR基，在此每一個R係獨立是氫、烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基、雜環系或將兩個R基以接合形成雜環系基（例如，嗎琳代），其中烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定義。 “胺基醯基’’術語表示-NRC(0)R基，在此每一個R係獨立是氫、烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基或雜環系，其中烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定 -22 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1233932 A7 B7 五、發明説明（20 ) 義。 “胺基醯氧基”或”烷氧基羰基胺基”術語表示-NRC(0)0R 基，在此每一個R係獨立是氫、烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基或雜環系，其中烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定義。 “醯氧基”術語表示烷基_C(0)0-、取代之烷基-C(0)0-、環烷基-C(0)0-、取代之環烷基-C(0)0-、芳基-C(0)0-、雜芳基-c(o)o-及雜環系-c(o)o-，其中烷基、取代之烷基、環烷基、取代之環烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定義。 “芳基”術語表示從6至20個碳原子之不飽和芳族碳環系基，具有單環（例如，苯基）或多濃縮（稠合）環，其中至少一個環係芳族（例如，萘基、二氫菲基、芴基或蒽基）。較佳的芳基包括苯基、茶基及類似物。除非受到另外不同於芳基取代基之定義所限制，否則可將這些芳基視需要以從1至5個選自由醯氧基、羥基、硫赶基、酿基、垸基、燒氧基、晞基、決基、環燒基、環烯基、取代之烷基、取代之烷氧基、取代之晞基、取代之炔基、取代之環烷基、取代之環晞基、胺基、取代之胺基、胺基醯基、醯基胺基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧烷基、氰基、齒基、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、胺基酿氧基、氧酿基胺基、績驢胺基、硫代燒氧基、取代之硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、 -SO·烷基、-SO-取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-s〇2- -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1233932 A7 __B7 五、發明説明（21 ) 烷基、-s〇2_取代之烷基、-S〇2_芳基、-s〇2-雜芳基及三函甲基所構成的群組之取代基取代，以丨至3個取代基較佳。較佳的芳基取代基包括烷基、烷氧基、_基、氰基、硝基、三鹵甲基及硫代烷氧基。方氧基”術語表示芳基-〇-，其中芳基係如以上的定義，其包括也如以上定義之視需要取代之芳基。 “芳撐”術語表示自如以上定義之芳基（包括取代之芳基）衍生之二基，並以1，2-苯撐、苯撐、丨，4_苯撐、12-苯撐及類似物為實例說明。 “胺基”術語表示-NH2基。取代之胺基術語表示-NRR基，在此每一個R係獨立選自由氫、烷基、取代之烷基、環烷基、取代之環烷基、烯基、取代之烯基、環晞基、取代之環浠基、炔基、取代之 %炔基、芳基、雜芳基及雜環系所構成的群組，其先決條件係兩個R’係不是氫。 ‘‘胺基酸’’表示任何天然生成之D、l或DL形式之胺基酸 (例如，Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gin、Gly、His、 Hy卜 Hyp、lie、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、丁yr及Val)。在本技藝中熟知天然生成之胺基酸的側鏈，並包括例如氫（例如，如在甘胺酸中）、烷基（例如，如在丙胺故、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸中）、取代之烷基 (例如，如在蘇胺酸、絲胺酸、蛋胺酸、半胱胺酸、天冬胺馱、天冬醯胺、谷胺酸、谷胺醯胺、精胺酸及賴胺酸中）、境芳基（例如，如在苯基丙胺酸及色胺酸中）、取代之芳基 -24 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNs) A4規格(210X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（22 ) 垸基（例如，如在酵胺酸中）及雜芳基垸基（例如，如在組胺酸中）。 “羧基”術語表示-COOH。在本技藝中完全暸解與醣肽有關的“C·末端”術語。例如，關於式I之_肽，C-末端係以R3基取代之位置。 “以二羧基取代之烷基”術語表示以兩個羧基取代之烷基。該術語包括以實例方式的-CH2(COOH)CH2COOH及 -CH2(COOH)CH2CH2COOH。 “羧烷基”或“烷氧基羰基”術語表示基“-c(o)o-烷基，’、 “-C(0)0-取代之烷基”、“·(：（0)0-環烷基”、“-c(0)0-取代之烷基”、“-C(0)0-晞基”、“-C(0)0-取代之婦基，，、“-c(0)0-炔基”及“-c(o)o-取代之炔基”，在此烷基、取代之烷基、環烷基、取代之烷基、埽基、取代之晞基、块基及取代之炔:基係如本文的定義。 “環烷基”術語表示具有單環系環或多濃縮環之從3至20 個碳原子之環系烷基。這些環烷基包括以實例方式的單環結構（如環丙基、環丁基、環戊基、環辛基及類似物）或多環結構（如金鋼烷基及類似物）。 “取代之環烷基”術語表示具有從1至5個選自由烷氧基、取代之烷氧基、環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環烯基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫酮基、羧基、羧烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取 -25 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）

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1233932 五、發明説明（代之硫代烷氧基、芳基 '芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、完基、 SO·取代之燒基、-so-芳基、-so-雜芳基、·s〇2•燒基_、二二· 取代之烷基、-s〇2-芳基及-S〇2_雜芳基所構成的群二之取^ 基之環烷基，並以1至3個取代基較佳。 “環烯基”術語表示具有單環系環及至少一點内部不飽和之從4至20個碳原子之環系埽基。適合的環烯基實例包括例如環丁-2-晞基、環戊晞基、環辛埽基及類似物。 “取代之環埽基”術語表示具有從1至5個選自由燒氧基、取代之燒氧基、環烷基、取代之環烷基、環烯基、取代之環晞基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基 '氧胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫酮基、羧基、羧烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取代之硫代燒氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、經胺基、烷氧基胺基、硝基、烷基、 -SO-取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-S02-垸基、-S〇2-取代之统基、-S02-芳基及-S〇2-雜芳基所構成的群組之取代基之環晞基，並以1至3個取代基較佳。 “鹵基”或“鹵素”術語表示氟基、氯基、溴基及碘基。 “鹵烷基”表示以可相同或不相同的1-4個如本文定義之鹵基取代之如本文定義之烷基。代表性卣烷基包括以實例方式的三氟甲基、3-氟基十二烷基、12，12,12-三氟十二烷基、2·溴辛基、3-溴基-6-氯庚基及類似物。 26 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)

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1233932 A7 B7 五、發明説明（24 ) “雜芳基”術語表示從1至15個碳原子及在至少一個環内 (如果有一個以上的環時）有1至4個選自氧、氮及硫之雜原子的芳族基。除非受到另外不同於雜芳基取代基之定義所限制，否則可將這些雜芳基視需要以1至5個選自由醯氧基、羥基、硫赶基、醯基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、環烯基 '取代之烷基、取代之烷氧基、取代之烯基、取代之炔基、取代之環烷基、取代之環婦基、胺基、取代之胺基、胺基醯基、醯基胺基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧烷基、氰基、函基、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、胺基醯氧基、氧醯基胺基、硫代烷氧基、取代之硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、-S〇_ 烷基、-SO-取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SCV烷基、-SCV取代之烷基、-S〇2_芳基、-S02-雜芳基及三鹵甲基所構成的群組之取代基取代，以1至3個取代基較佳。較佳的雜芳基取代基包括烷基、烷氧基、卣基、氰基、硝基、三鹵甲基及硫代烷氧基。這些雜芳基可以具有單環（例如，外匕啶基或呋喃基）或多濃縮環（例如，啕哚嗪基或苯并嘧嗯基）。較佳的雜芳基包括吡啶基、吡咯基及呋喃基。 “雜芳基烷基”表示（雜芳基）烷基-，在此雜芳基及烷基係如本文的定義。代表性實例包括2_吡啶甲基及類似物。 “雜芳氧基”術語表示雜芳基。 “雜芳撐”術語表示自如以上定義之雜芳基（包括取代之雜芳基）衍生之二基’並以2,6-伸p比咬基、2,4-伸ρ比症基、1，2- __ - 27 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ297公釐）

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發明説明伸峻淋基、伸喳啉基、丨，‘苯并伸呋喃基、2,5_伸吡啶基、 2,5_啕哚啉基（indolenyl)及類似物為實例說明。 “雜環”或“雜環系，，術語表示具有單環或多濃縮環之單基飽和或不飽和基，具有從1至40個碳原子及在環内具有從j 土 1〇個選自氮、硫、磷及/或氧之雜原子，以1至4個雜原子較佳。除非受到另外不同於雜環系取代基之定義所限制，否則可將這些雜環系基視需要以丨至5個選自由烷氧基、取代之烷氧基、環烷基、取代之環烷基、環埽基、取代之環晞基、酿基、醯基胺基、醯氧基、胺基、取代之胺基、胺基醯基、胺基酿氧基、氧胺基醯基、疊氮基、氰基、函素、經基、酮基、硫酮基、羧基、羧烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫赶基、硫代烷氧基、取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環系、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-S0_烷基、取代之烷基、-SO-芳基、-so-雜芳基、-S02-燒基、_s〇2-取代之燒基、-S〇2_芳基 '氧基（=0)及-S〇2-雜芳基所構成的群組之取代基取代’以1至3個取代基較佳。這些雜環系基可以具有單或多濃縮環。較佳的雜環系包括嗎琳代、喊咬基及類似物。氮雜環及雜芳基之實例包括（但不限於此）吡略、咪σ坐、吡唑、吡啶、哌嗪、嘧啶、噠嗪、吲哚嗪、異ρ朵、丨嗓、㈣唑、嘌呤、喳嗪、異喹啉、喹啉、酞嗪、莕吡啶、喳唑啉、噌〃林、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲繞琳、異 -28 - 度適用中關轉準(CNS) Α4規格(⑽χ 297公爱) " 1233932 A7 ________B7_______ 五、發明説明（26 ) 口塞吐、々嘻、異α亏峻、吩巧嗔、吩p塞嗪、味吐燒、咪吐淋、峰咳：、六氫p比畊、吲哚滿、嗎啉代、哌啶烷基、四氫呋喃基及類似物與含N-烷氧基-氮之雜環。已知另一種雜環系種類係“冠狀化合物，，，以其表示具有一或多個式[_(CH2-)aA-]之重複單元之雜環系化合物的特殊種類’在此a等於或大於2及每一個單獨情況的a可以是0、 N、S或P。冠狀化合物之實例包括只做為實例方式的 [-(CH2)3-NH_]3、[-((CH2)2_〇)4_((CH2)2_NH)2]及類似物。典型的這些冠狀化合物可以具有從4至1〇個雜原子及8至40個碳原子。 ‘‘雜環氧基”術語表示雜環系_〇_基。 “硫代雜環氧基”術語表示雜環系-S-基。在本技藝中完全瞭解與醣肽有關的“N_末端，，術語。例如’關於式II之醋肽，N·末端係以R19及R2G基取代之位置。 ‘‘氧醯基胺基”或“胺基羰氧基，，術語表示_〇c(〇)Nrr基，在此每一個R係獨立是氫、烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基或雜環系，其中烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系晞係如本文的說明。 “亞磷羧基”術語表示-P〇3H2。 “亞磷羧基甲基胺基，，術語表示-NH_CH2-P(〇)(〇H)2。 “亞轉羧基甲基胺基甲基，，術語表示·CHrNH-d- p(o)(oh)2。在此項技藝中完全瞭解“前體藥物，，術語，其包括在哺乳類中轉化成本發明的醫藥活性化合物之化合物。例如，參 -29 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1233932

考肩州伊斯頓（East〇n)之 Mack Publishing Company 的

Remington’s Pharmaceutical Science, 1980年第 16冊，61 及 424 頁。在此項技藝中完全瞭解與醣肽有關的“R_末端，，術語。例如’關於式I之醣肽，R-末端係以R5基取代之位置。糖化物基”術語表示經由糖化合物部份的任何原子（以經由配質碳原子較佳）以共價附著於醣肽或其它化合物之氧化、還原或取代之糖化物單基。該術語包括含胺基之糖化物基。代表性糖化物包括以例證方式的己糖（如D_葡萄糖D-甘路糖、D-木糖、D-半乳糖、萬古胺、3-脫甲基萬古胺、3-表-萬古胺、仁表-萬古胺、烏頭胺、放線胺、道諾胺％表-道語胺、瑞斯托胺（ristosamine)、D-甲葡胺、N-甲基-D_甲葡胺、D-葡糖醛酸、N_乙醯基_D_葡糖胺、N-乙醯基-D-半胱糖胺、唾液酸（sialyic acid)、艾杜糖醛酸、l-岩藻糖及類似物）、戊糖（如D_核糖或〇-阿拉伯糖）、酮糖（如d_ 核酮糖或D-果糖）、二糖化物（如孓〇-(α丄_萬古胺基）·卢七_ 1匕喃葡糖、2-0-(3-脫甲基-α _L·萬古胺基）吡喃葡糖、蔗糖' 乳糖或麥芽糖）、衍生物（如縮醛、胺、醯化、硫酸化及磷酸化糖）、具有從2至1〇個糖化物單元之寡糖化物。使用熟知的三個字母命名法參考以該定義為目的的這些糖化物，並且糖化物可以具有或彼的開放形狀或彼較佳的喃糖形狀。含胺基（糖化物基”術語表示具有胺基取代基之糖化物基代表性含胺基之糖化物包括L-萬古胺、3-脫甲基萬古 -30 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公酱)

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1233932 A7 B7 五、發明説明（28 ) 胺、3-表-萬古胺、4-表-萬古胺、烏頭胺、放線胺、道語胺、 3-表-道諾胺、瑞斯托胺、N-甲基-D-甲葡胺及類似物。 “以螺旋附著之環烷基”術語表示經由一個兩環共有的碳原子附著至另一個環的環烷基。在此項技藝中完全瞭解與既定化合物有關的“立體異構物’’術語，並表示另一種具有相同的分子量之化合物，其中組成其它化合物的原子以不同的方式在空間定向，但是其中在其它化合物中的原子具有類似於在關於以原子與其它原子接合之既定化合物中的原子（例如，對映異構物、非對映異構物或幾何異構物）。參考例如麻州波士頓市之Allyn and Bacon Inc·以摩瑞森（Morrison)及波迪（Boyde)之 Organic Chemistry，1983 年第四版，第 123 頁。 “磺醯胺”術語表示式-S02NRR基，在此每一個R係獨立是氫、烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基或雜環系，其中烷基、取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系烯係如本文的說明。 “硫赶基”術語表示-SH基。 “硫代烷氧基”術語表示-S-烷基。 “取代之硫代烷氧基”術語表示以-S-取代之烷基。 “硫代芳氧基”術語表示芳基-S-，其中芳基係如以上的定義，其包括也如以上定義之視需要取代之芳基。 “硫代雜芳氧基”術語表示雜芳基-S-，其中雜芳基係如以上的定義，其包括也如以上定義之視需要取代之芳基。在使用”硫醚衍生物”術語表示本發明的醣肽化合物 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（29 ) 時’則其包括硫醜（-s-)、亞鐵（-S0-)及>?風（-S〇2-)。關於任何包括一或多個取代基之以上的基，當然應瞭解的是這些基不包括任何不當的阻擋及/或不易達成合成之取代作用或取代圖案。此外，本發明的化合物包括源自於這些化合物的取代作用的全部立體化學異構物。 “醣肽’’表示以視需要以糖化物基（如萬古霉素）取代之多環肽核心為特徵之寡肽（七肽）抗體（dalbaheptide)。可在以雷蒙（Raymond)C.拉歐（Rao)及路易斯（Louise)W.克蘭戴爾 (Crandall)之 “Glycopeptides Classification, Occurrence, and Discovery”（以 Marcal Dekker，Inc_ 發表由 Ramakrishnan Nagarajan 編輯之第 63 冊 “Drugs and the Pharmaceutical Science”）中發現内含在該定義中的醣肽實例。在美國專利申請案第4,639,433號；第4,643,987號；第4,497,802號；第 4,698,327號；第 5,591，714號；第 5,840,684號及第 5,843,889 號；在 EP 0 802 199 ； EP 0 801 075 ； EP 0 667 353 ； WO 97/28812 ; WO 97/38702 ; WO 98/52589 ; WO 98/52592及在 J· Amer. Chem. Soc·，1996，118，13107-13108; J. Amer. Chem. Soc·， 1997，119，12041-12047 及 J· Amer. Chem· Soc.，1994，116, 4573-4590中揭示另外的醣肽實例。代表性醣肽包括那些證實為 A477、A35512、A40926、A41030、A42867、A47934、 A80407、A82846、A83850、A84575、AB-65、阿克他菌素、類放線菌素、阿地辛（ardacin)、安巴素、阿入瑞爾霉素 (azureomycin)、巴爾亥霉素（balhimycin)、氯歐瑞提安 (chloroorientiein)、氣多孢素、迪卡霉素（decaplanin)、N-脫 -32 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1233932 A7 B7____ 五、發明説明（30 ) 甲基萬古霉素、艾里莫霉素（eremomycin)、佳拉卡丁 (galacardin)、亥維卡丁（helvecardin)、依入派丁（izupeptin)、金伯雷（kibdlein)、LL-AM374、漫農派丁（mannopeptin)、 MM45289、MM47756 ' MM47761、MM49721 ' MM47766、 MM55260、MM55266、MM55270、MM56597、MM56598、 OA-7653、歐瑞提辛（orenticin)、帕佛迪辛（parvodicin)、瑞斯托菌素（ristocetin)、瑞斯托霉素（ristomycin)、赛蒙辛 (synmonicin)、泰古黴素（teicoplanin)、UK-68597、UK-69542、 UK-7205 1、萬古霉素及類似物之醣肽。也希望如本文使用的“醣肽”術語包括在其上沒有糖部份的以上揭示之肽的概括種類，即醣肽的配質系列。例如，以溫和的水解作用除去附加在萬古霉素上的酚上的二糖化物部份，以得到萬古霉素配質。以類似於萬古胺的方式進一步附加另外的糖化物殘基之醣肽也在本發明的範圍内，尤其是胺基醣肽。 ‘‘視需要的（optional)”或“視需要地”(〇pti〇nally)代表可能或不可能發生接著經說明的事件或環境，並且以該說明包括會發生事件或環境的情況及不會發生的情況。例如，“視需要取代”代表可能或不可能以說明的鍵取代。如本文使用的“惰性有機溶劑，，或“惰性溶劑，，或，，惰性稀釋劑”術語代表在使用其作為溶劑或稀釋劑之反應條件下基本上具有惰性之溶劑或稀釋劑。可作為溶劑或稀釋劑使用的物質之代表性實例包括以例證方式的苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃（“THF”）、二甲基甲醯胺（“DMF”）、氣仿（“CHC13”）、二氯甲虎（或二氯甲烷或“CH2C12，，）、二乙醚、醋酸乙酯、丙 -33 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐）

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酮、甲乙_、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、特丁醇…号烷、吡哫及類似物。除非有另外的指冑，否則在本發明的反應中所使用的溶劑係惰性溶劑。 ‘‘以氮連接，，或“以N-連接，，術語代表將基或取代基經由愈基或取代基的氮之鍵結附著於化合物(例如，式Z化合物)的其餘部份。“以氧連接，，術語代表將基或取代基經由與基或取代基的氧之鍵結附著於化合物（例如，式丨化合物）的其餘部份。“以硯連接”術語代表將基或取代基經由與基或取代基的硫之鍵結附著於化合物（例如，式〗化合物）的其餘部份。 “在藥學上可接受之鹽”代表那些保留母體化合物的效率及特性之鹽類，並作為劑量投藥時不具有生物或另外其它的傷害。本發明的化合物能夠由於胺基及羧基的存在而分別形成酸及驗鹽兩種。以無機及有機鹼可以製備在醫藥上可接受之鹼加成鹽類。自無機驗衍生的鹽類包括（但不限於此）鈉、鉀、鋰、銨、鈣及鎂鹽。自有機鹼衍生的鹽類包括（但不限於此）一級、二級及三級胺、取代之胺（包括天然生成之取代之胺）及環系胺（包括異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基胺基乙醇、胺基丁三醇、賴胺酸、精胺酉父、組酸、咖啡因、普魯因、哈胺（hydrabamine)、膽驗、甜菜鹼、乙撐二胺、葡糖胺、N-烷基甲葡胺、可可鹼、嘌呤、六氫吡畊、哌啶及N-乙基哌啶）之鹽類。也應該瞭解的是其它的羧酸衍生物在本發明的實地應用中可以是有用的衍生物，例如，羧酸醯胺，包括羧醯胺、低碳烷基羧醯胺、 -34 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（32 ) 二（低碳燒基）複酿胺及類似物。以無機及有機酸可以製備在醫藥上可接受之酸加成鹽類。自無機酸衍生的鹽類包括氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似物。自有機酸衍生的鹽類包括醋酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、擰檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、對-甲苯磺酸、水楊酸及類似物。本文說明的化合物典型係包括一或多個對掌性中心。因此’希望以新♦頁醣肤化合物包括外消旋性混合物、非對映異構物、對映異構物及富集一或多個立體異構物之混合物。 “保護基”或“封閉基”術語表示以任何在與本發明的一或多個羥基、硫赶基、胺基、羧基或其它基結合時的基避免在這些基上發生非預期反應，並可以熟知的化學或酵素步風除去遠保護基’以建立技基、硫赶基、胺基、叛基或其它基。所使用的特別可除去之封閉基不重要，並且較佳的可除去之喪基封閉基包括熟知的取代基，如烯丙基、节基、乙醯基、氯乙醯基、硫代苄基、芊叉、苯醯甲基、特丁基二苯基甲矽烷基、及其它可在羥基官能性上以化學方式引入及隨後在與產物本性相容的溫和條件下或以化學法或以酵素法可以選擇性除去的基。在紐約J〇hn Wiley and s〇ns之 τ· W.葛林（Greene)及 P.G.M.烏茲（Wuts)的第三版 “Pr〇tective Groups in 〇rganic Synthesis”（1999年）中更詳細揭示保護基。較佳的可除去之胺基封閉基包括熟知的取代基，如特丁氧基羰基（t-B〇C)、字氧基羰基（CBZ)、苟基甲氧基羰基 -35 - 本紙張尺度適财a s家標準(CNS) μ規格(21QX297公爱)— ----—— 1233932 A7 B7 五、發明説明（33 ) (FMOC)、晞丙氧基羰基（ALOC)及類似物，可將其以與產物本性相容的熟知條件除去。較佳的幾基保護基包括S旨類，如甲基、乙基、丙基、特丁基等，可將其以與產物本性相容的溫和條件除去。 “萬古霉素”表示具有下式之醣肽抗體： an NH ‘

Nv;

Η Η

戶,ch3 N丨eu •丨丨Ν’一Η -pCH3 ch3 在說明萬古霉素衍生物時，以“Nvan-”術語表示將取代基以共價附著於萬古霉素的萬古胺部份的胺基上。同樣以 “Nleu-”術語表示將取代基以共價附著於萬古霉素的亮胺酸部份的胺基上。通用的合成步驟使用以下的通用方法及步驟，以可輕易取得的原料可以製備fit肽化合物。應認知的是在提出典型或較佳的處理條 -36 - 冢紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1233932 A7 B7 五、發明説明（34 ) 件時（即反應溫度、時間、反應物的莫耳比、溶劑、壓力等），也可以使用其它的處理條件，除非有其它另外的說明。最適宜的反應條件可以隨所使用的特殊反應物或溶劑而改變，但是以熟悉此項技藝的人可以最適宜的慣例步驟測定這些條件。此外，因為那些熟悉此項技藝的人將會明白熟知的保護基是必要的，以保護特定的官能基免於進行不預期反應。在此項技藝中熟知適合於特定的官能基之保護基與適合於保護及去保護條件的選擇。例如，在紐約John Wiley and Sons 之Τ· W·葛林及P.G.M·烏兹的第三版“Protective Groups in Organic Synthesis”（1999年）中說明許多保護基及彼之引入與除去，並在本文引證參考。在以下的反應方程式中，以如下的盒形G之簡化形式描述醣肽化合物，其展示以[C]標記之羧基末端，以[V]標記之萬古胺胺基末端，以[N]標記之“無糖化物，，胺基末端（亮胺酸胺部份）及視需要以[R]標記之間苯二酚部份：

[R] NH2 [V] 以對應醣肽化合物（其中C-末端係羧基）與適合的含亞磷基之化合物偶合’可以製備在C -末端上以含有一或多個 (例如’ 1、2、3、4或5個）亞磷羧基（-P〇3H2)之取代基取代的本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1233932 A7 B7 五、發明説明（35 ) 醣肽化合物。例如，可將醣肽化合物（其中C·末端係羧基）與含亞磷羧基之胺、醇或硫赶化合物偶合，分別形成醯胺、酯或硫酯。例如，以式I之對應醣肽化合物（其中R3係羥基）與必要的含亞磷羧基之胺偶合，以形成含有一或多個亞磷羧基之式1(其中R3係以氮連接之部份），可以製備含有一或多個亞磷幾基之式I之酷肽化合物（其中R3係以氮連接之部份）。先將對應醣肽化合物（其中萬古胺胺基末端（V)係自由胺 (NH2))還原烷基化及接著將對應醣肽化合物與必要的含亞磷幾基之化合物（例如，含亞磷複基之胺、醇或硫赶）偶合，可以製備在C-末端上以含有一或多個（例如，1、2、3、4或 5個）亞磷羧基（-P03H2)之取代基取代及其中將萬古胺胺基末端（V)取代之醣肽化合物。可以先將醣肽化合物（如萬古霉素）還原烷基化，如以例證方式在以下的反應中的展示：

還原烷基化作用人

CH, I 3 HN

Rb-(Z)X

G ΌΗ /Ra>

Rb-(Z)X 在此A代表少一個碳原子之Ra，以及Ra、Rb、γ、Z及x係如本文的定義。典型係先將1當量醣肽（即萬古霉素）與過量（以從1_1至1.3當量較佳）的預期醛在過量（以約2.0當量較佳）三級胺（如二異丙基乙胺（DIPEA)及類似物）的存在下接觸，以 -38 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1233932 A7 ------ B7 五、發明説明（36 ) --— 進仃孩反應。該反應典型係在室溫下的惰性稀釋劑中（如難或乙腈/水）進行約〇25至2小日寺，直到幾乎完全形成對應亞胺及/或半胺為止。典型係不將所得亞胺及/或半胺分離’但是當場與還原劑（如氰基硼氫化納”比淀甲硼燒或類似，）反應，以供給對應胺。以亞胺及/或半胺與過量（以約\ 較佳）的二氟醋酸接觸及接著在室溫下以在甲醇或乙腈/水中約1至L2當量之還原劑接觸，以進行該反應較佳。以熟知的步驟可輕易純化所得烷基化產物，如以沉澱及/ 或反相HPLC。令人驚野的是以在n完基胺的存在下形成亞胺及/或半胺，並在與還原劑接觸之前，先以三氟醋酸酸化，使還原烷基化反應的選擇性有明顯的改進，即在糖化物的胺基上（例如’萬固霉素）的還原烷基化作用以至少 10 : 1(以20 : 1較佳）的優勢超越在N-末端上（例如，亮胺酸基）的還原烷基化作用。以上以選擇烷基化醣肽抗體的胺基糖化物基的方法具有明顯的改進，超越先前的方法。一種將含有糖化物·胺之醋肽燒基化的方法包含：將醛或酮、適合的鹼與醣肽組合，以提供反應混合物；將反應混合物酸化；及將反應混合物與適合的還原劑組合，以提供在糖化物― 胺上烷基化之醣肽。醣肽以包含至少一個除了糖化物-胺之外的胺基較佳。在糖化物-胺上的還原烷基化作用以至少約10 : 1 (並以至少約15 : 1或約20 : 1更佳）的優勢超越在醣肽的另一個胺基 -39 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1233932

上的還原烷基化作用。還原烷基化法典型倍下進行，如例如由化烴（例4 k δ_的溶劑或併用的溶劑存在如，二乙趟、πκ;二’/氯甲垸）、直鏈或支鏈例醇、乙醇或異丙醇）、二甲(例如，苯或甲苯）、醇（甲胺、乙腈、水、i 3 土亞颯（DMS0)、n，n-二甲基甲醯甲基尿素^甲—/7基_3,4,5,6-四氯-2(叫口密咬銅、四甲基怖比咬酮、丁‘亞：胺廿二乙基甲酿胺_F)、丨-酯、n，n-二甲Μ 甘油、醋酸乙酯、醋酸異丙土丙故尿素（DMPU)或二α号垸。以在？ k $ D贿甲醇中進料基化較佳。U A 〃在⑽/水或鲈杜在免子'合劑的存在下進行還原作用(即以還原劑處理) :’如例如醇(例如’甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇或丁醇)、水或類似物。旧可在從冷凍點至反應混合物的回流溫度的任何適合的 ’皿度下進行本發明的還原烷基化法。以在約(TC至約loot：之知圍内的溫度下進行反應較佳。以在約(TC至約50°C之範圍内或在約2(TC至约3(rc之範圍内的溫度更佳。可在本發明的還原烷基化法中使用任何適合的鹼。適合的驗包括三級胺（例如，二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉或三乙胺）及類似物。可以使用任何的酸酸化反應混合物。適合的酸包括羧酸 (例如’醋酸、三氣醋酸、擰檬酸、甲酸或三氟醋酸）、無機紅（例如，氫氯酸、硫酸或磷酸）及類似物。較佳的酸係一'氣醋酸。 __ - 40 - 本紙張尺度適Jf]中g輯標準(cns) Μ規格(21() χ 297公爱) 1233932 A7 B7 38 五、發明説明（在此項技藝中已知適合於進行本發明的還原烷基化法的還原劑。可在本發明的方法中使用任何適合的還原劑，其先決條件係與在醣肽中存在的官能性相容。例如，適合的還原劑包括氰基测氫化鋼、三乙醯氧基硼氫化鈉、p比淀/ 甲侧烷、硼氫化鈉及硼氫化鋅。也可以在氫來源（例如，氫氣或環己二晞）存在下的過渡金屬觸媒（例如，免或鉑）的存在下進行還原作用。參考例如紐約John Wiley & Sons第四版的 Advanced Organic Chemistry (1992年），899-900 頁。接著將還原烷基化生成之醣肽衍生物與含亞磷幾基之胺（R3-H)偶合，以形成醯胺鍵。由以下的反應例證該反應：产3 〇严〇 Η_Ν\Λοη Ιθ-Η 偶合 ^ H-N\AR3

G 2.去保護作用 G ~^ Ra、γ〆 Rb— (Z)x ~^ R、Y〆 Rb— (Z)x

I I

Η H 在此R3係含有一或多個亞磷羧基之以氮連接之基。在該反應中，典型係將醣肽衍生物與胺在肽偶合劑（如pyB〇p及 HOBT)的存在下接觸，以提供醯胺。該反應典型係在從約 0 C至約60 C為範圍之溫度下的惰性溶劑中（如dmf)進行約 1至約24小時或直到偶合反應幾乎完全為止。以使用熟知的步驟及試劑之後續的去保護作用供給本發明的化合物。若必要，可以先進行上述的胺偶合步驟，以提供醯胺，接著以還原燒基化及去保護作用供給本發明的化合物。若必要，也可以逐步方式製備醣肽化合物，其中先將 -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） A7 B7 1233932 五、發明説明（39 ) -Ra-Y-Rb-(Z)X基之前軀體以還原烷基化附著於醣肽上’接著係使用熟知的試劑及步驟進行附著之前軀體的後續加工’ 以形成-Ra-Y-Rb-(Z)XS。此外，也可以在上述的還原烷基化反應中使用酮，以供給以α -取代之胺。在這些還原烷基化反應中可以使用具有胺基之任何醣肽。在此項技藝中熟知這些醣肽，其或是市售商品’或可以使用熟知的步驟分離。在美國專利申請案第3,067,099 號；第 3,338,786 號；第 3,803,306 號；第 3,928,571 號；第 3,952,095號；第 4,029,769號；第 4,051，237號；第 4,064,233號；第 4，122，168號；第 4,239,751號；第 4,303,646號；第 4,322,343 號；第 4,378,348 號；第 4,497,802 號；第 4,504,467 號；第 4,542,018號；第 4,547,488號；第 4,548,925號；第 4,548,974號；第 4,552,701號；第 4,558,008號；第 4,639,433號；第 4,643,987 號；第 4,661，470 號；第 4,694,069 號；第 4,698,327 號；第 4,782,042號；第 4,914，187號；第 4,935,238號；第 4,946,941 號；第 4,994,555號；第 4,996，148號；第 5，187,082號；第 5，192,742 號；第 5,312,738 號；第 5,451，570 號；第 5,591，714號；第 5,721，208號；第 5,750,509號；第 5,840,684號及第 5,843,889號中以實例方式揭示適合的醣肽。在以上的反應中使用的酷肽係以萬古霉素較佳。如以下方程式的例證，可經由曼里奇（Mannich)反應在糖肽的間苯二酚部份上引入含亞磷羧基之胺基烷基側鏈（為了明確起見，在該方程式中例證醣肽的間苯二酚部份）。在該反應中，將式NHRR，之胺（其中R及R，的其中之一或兩者 -42 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（40 ) 係含有一或多個亞磷羧基之基）及醛（例如，CH20)(如福馬林，甲醛的來源）與醣肽在鹼性條件下反應，以得到醣肽衍生物。

OH R Η Ν ο 2 Η

OH

OH 使用熟知的試劑及步驟，以對應硫代化合物可以製備含有亞减或ί風之本發明化合物。適合於使硫代化合物氧化成亞颯之試劑包括以實例方式的過氧化氫、過酸（如3_氯基過氧苯甲酸（MCPBA)、高碘酸鈉、亞氯酸鈉、次氯酸鈉、次氯酸鈣、次氯酸特丁酯及類似物。也可以使用對掌性氧化劑（旋光活性劑）提供對掌性亞颯。在此項技藝中熟知這些旋光活性劑，並包括例如在康吉（Kagen)等人之Synlett. 1990 年，643-650頁中說明的試劑。在此項技藝中也熟知在以上的反應性烷基化反應中使用的醛及酮，其或是市售商品，或可以使用市售的原料及熟知的試劑以熟知的方法製備（例如，參考紐約John Wiley & Sons 第四版的 March，Advanced Organic Chemistry (1992 年），並在本文引證參考）。以亞磷羧基取代之化合物（例如，以亞磷羧基取代之胺、 -43 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1233932 A7 B7 五、發明説明（41 ) 越或硫赶）或是市售商品，或可以使用市售的原料及試劑以熟知的方法製備。參考例如紐約John Wiley & Sons第四版的 Jerry March之 Advanced Organic Chemistry(1992 年），第 959 頁；及紐約John Wiley & Sons第1-4冊的法蘭克（Frank)R·哈特雷（Hartley)編輯之 The Chemistry of Organophosphorous Compounds (1996年）。胺基甲基膦酸係威斯康辛州米爾瓦基 (Milwaukee)之 Aldrich Chemical Company 的市售商品。在以下的實例中說明用於製備本發明的化合物另外的細節及其它的方法。純化方法本發明係提供純化上述醣肽的亞磷羧基衍生物之方法，其係使用以聚苯乙晞與二乙烯基苯之共聚物為主之樹脂之樹脂色層分離法。在市場上提供許多以具有孔尺寸從約30埃至約1000埃之多孔珠為特徵的這些樹脂實例。以本發明而言，較佳的樹脂孔尺寸係從约50埃至約1000埃。在以下的表II中提供在本發明的方法中有用的樹脂之實例名單，其包括製造商、孔尺寸及珠尺寸。表II :聚笨乙烯一二乙烯基苯樹脂樹脂孔尺寸珠尺寸製造商 (埃） (微米） Amberchrome 300 50-100 TosoHaas CG-300m Amberchrome 300 20-50 TosoHaas CG-300s Amberchrome 1000 20-50 TosoHaas CG-lOOOs -44 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（42 )

Amberchrome CG-71m 250 50-100 TosoHaas Amberlite XAD-2010 280 200-800 Rohm & Haas Amberlite XAD 1600 〜100 350-450 Rohm & Haas Amberlite XAD 16 100 200-800 Rohm & Haas Amberlite XAD 16HP 100 200-800 Rohm & Haas CHP-20P 260 37-75 Mitsubishi HP-20 260 200-600 Mitsubishi HP-20SS 260 63-150 Mitsubishi SP-20SS 260 63-75 Mitsubishi CHP55Y 260 25-35 Mitsubishi Optipore L-323 100 200-800 Dow SD-2 50 200-800 Dow 在以實例說明的純化方法中，以在過量的水中濕潤及以水清洗，視需要酸化，及/或以極性有機溶劑之水溶液清洗，視需要酸化及裝載在色層分離管柱上，以製備聚苯乙烯樹脂，如在表II中陳列的樹脂。將欲純化之醣肽樣品溶 -45 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1233932 A7 __ B7 _ 五、發明説明（43 ) 解在含有極性有機溶劑之酸化水中。樣品溶液之pH以介於約2至5之間較佳。取出少量的樣品溶液及作為HpLC分析之標準品使用。將樣品溶液裝載在管柱上，並以第二個極性有機溶劑之酸化水落液溶離，收集來自管柱餾份中的樣品。第二個酸化水落液以具有約10毫克分子量酸之濃度及在比例上具有從約1 : 4至約1 : 15之極性有機溶劑：水之比例較佳。以薄層色層分離法監控存在於每一個餾份中的樣品。在溶離液中未發現尚有任何樣品時，則使用有機含量較高的落離溶液清洗來自管柱的殘餘樣品。以酸化之極性有機溶劑及酸化水清洗，以再生管柱。以HPLC分析含樣品之餾份的樣品濃度及純度。匯集含有樣品濃度比預期門檻更高的餾份，並將純化產物與溶離液分離。如實例的說明，以凍乾匯集之餾份可自溶離液回收純化產物。另一選擇係以沉澱及過濾作用可將純化產物與溶離液分離。例如，可將過量的極性有機溶劑（如乙腈）加入溶離液中’以產生純化產物之固體沉澱物，接著將其分離。在分離法的第一個步驟中，可視需要自溶離液形成比溶離液更濃縮的純化產物溶液。接著將產物與更濃縮的溶液为離。例如，以NaCl加入組合的溶離液館份中，將所得溶液裝載在含有聚苯乙烯二乙缔基苯樹脂（如上述的樹脂）之色層分離管柱上及以含有極性有機溶劑濃度比在先前的色層分離步驟中的有機溶劑濃度更高的溶液溶離，可以形成 -46 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1233932 A7 _______B7 五、發明説明（44 ) 更濃縮的溶液。另-選擇係在使用聚苯乙埽二乙缔脂之分批法可以形成更濃縮的溶液，其係以樹脂^在低溫下的溶離液中，使得產物吸收在樹脂上，過濾樹脂及以 ▲ /32L的極性有機水溶液自樹脂解吸醣肽。如以下實例4的說明，使用本發明的方法將具有膦酸化醣肽初濃度介於67至74%之間的樣品純化成濃度介於約以至94%之間。雖然已說明使用管柱色層分離法的純化方法，但是如此項技蟄已知，可將樣品溶液與另外選擇排列的樹脂接觸，如使用分批處理容器。 k供以下的實例例證本發明，並不是以任何方式將其解釋成對本發明範圍的限制。實例在以下的實例中，以下的縮寫具有以下的意義。任何未定義的縮寫具有彼一般所公認的意義。除非有其它另外的說明’否則所有的溫度係以攝氏度數計。 ACN =乙腈 BOC, Boc =特丁氧基羰基 DIBAL-H =氫化二異丁基鋁 dipea =二異丙基乙胺 DMF =N，N-二甲基甲醯胺 DMSO =二甲基亞颯 eq· =當量 EtOAc =醋酸乙酉旨 -47 - 本纸張尺度相中g g家標準(CNS) A4規格⑽χ 297公 1233932 A7 B7 五、發明説明（45 )

Fmoc =9-苟基甲氧基羰基 HOBT = 1-羥基苯并三唑水合物

Me =甲基 MS =質譜儀

PyBOP =六氟磷酸苯并三嗅-1-基氧基參〇比嘻淀并）鳞 TEMPO = 2,2,6,6-四甲基哌啶氧基，自由基 TFA =三氟醋酸 THF =四氫吱喃 TLC，tic =薄層色層分離法在以下的實例中，萬古霉素氫氯酸鹽半水合物係購自 Alpharma, Inc. Fort Lee, NJ 07024(Alpharma AS, Oslo Norway)0 其它的試劑及反應物可取自威斯康辛州米爾瓦基53201之 Aldrich Chemical Co. 〇

通用步驟A 萬古霉素之還原烷基化反應將DIPEA(2當量）加入在DMF中的萬古霉素（1當量）與預期的醛（1.3當量）之混合物中。將反應在室溫下攪拌1-2小時及以反相HPLC監控。將甲醇及NaCNBH3(l當量）加入溶液中，接著加入TFA(3當量）。在室溫下再持續攪拌1小時。在完成反應之後，在真空中除去甲醇。將殘餘物在乙腈中沉澱。以過濾作用得到粗產物，接著將其以反相HPLC純化。若必要，可在本步驟中使用其它的醣肽抗體。

通用步驟B 2-(癸硫基）乙醛之合成作用 -48 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1233932

將癸基溴（10毫升，50毫莫耳）及氫硫乙醇（4·4毫升，63毫莫耳）在氮氣下加入在丙嗣（1〇〇毫升）中的碳酸卸（27公克， 200¾莫耳）之懸浮液中。將懸浮液在室溫下攪拌2天，接著分溶在水與80%己烷/醋酸乙酯之間。將有機相以2當量氫氧化鈉清洗，經硫酸鎂乾燥及在真空下除去揮發物，以得到成為無色液體之2-(癸硫基）乙醇（ι〇·2公克，47毫莫耳），使用未進一步純化之該液體。將2-(癸硫基）乙醇（50公克，23〇毫莫耳）、N，N•二異丙基乙胺（128毫升，730毫莫耳）及二氯甲烷（4〇〇亳升）在氮氣下冷卻至-40 C。將在二甲基亞砜（600亳升）及二氣甲烷（2〇〇毫升）中的三氧化硫吡啶複合物（116公克，730毫莫耳）之溶液經15 分鐘加入該溶液中。在加完之後，將混合物在_4〇t下再攪拌15分鐘，接著加入600毫升冰水。自冰浴取出混合物，加入1公升水及將液體分溶。將有機相以丨公升之丨當量氫氯酸清洗及經硫酸鎂乾燥。以過濾作用得到6〇〇亳升液體，將其以600毫升己烷稀釋及通過200毫升二氧化矽。將二&氧化矽以HH)毫升之5〇%二氯甲燒/己烷清洗，接著以3〇〇毫升二氯甲烷清洗。將合併的有機物在真空中濃縮，以得到成為益色液體之2-(癸硫基）乙醛（48公克，220毫莫耳），使用未進二步純化之該液體。

通用步驟C

Nvan-2-(癸硫基）乙基萬古霉素之合成作用免將萬古霉素氫氯酸鹽水合物（1公克，〇·64毫莫耳）在氮氣下加入在Ν，Ν-二甲基甲酿胺（8毫升）中的2(癸硫基） -49 -

1233932 A7 B7 五、發明説明（47 ) 乙醛（139毫克，0.64毫莫耳）中。加入N，N-二異丙基乙胺（336 微升，1.9毫莫耳），並將懸浮液劇烈攪拌2.5小時，在此期間内溶解所有的萬古霉素。加入氰基硼氫化鈉固體（60毫克，0.96毫莫耳），接著加入甲醇（5毫升）及三氟醋酸（250微升，3.2毫莫耳）。將反應在室溫下攪拌55分鐘及以反相HPLC 分析。在以280毫微米時的uv吸收為基準之產物分布如下：溶離時間(分鐘) 面積％產物 2.0 29% 萬古霉素 3.1 50 Nvan-2_(癸硫基)乙基萬古霉素 3.2 2 — 3.3 7 Nleu-2-(癸硫基)乙基萬古霉素 3.9 13 Nvan，Nleu·雙-[2·(癸硫基)乙基]萬古霉素 4.0 0.5 ... 步驟B ：將萬古霉素氫氯酸鹽水合物固體（173公克，110 毫莫耳）在氮氣下加入在N，N-二甲基甲醯胺（1·4公升）中的 2-(癸硫基）乙醛（粗，48公克，220毫莫耳）之溶液中，接著加入Ν，Ν-二異丙基乙胺（58毫升，330毫莫耳）。將懸浮液在室溫下劇烈攪拌2小時，在此期間内完全溶解所有的萬古霉素，接著加入三氟醋酸（53毫升，690毫莫耳）。將溶液再攪拌90分鐘，接著加入氰基硼氫化鈉固體（10.5公克，170毫莫耳），接著加入甲醇（800毫升）。在3小時之後，將反應以反相HPLC分析。在以280毫微米時的uv吸收為基準之產物分布如下： -50 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 1233932

溶離時間（分锆、 2.0 3.2 3.3 3.4 4.0 4.1 缝 15 萬古霉素 77 NVan-2-(癸硫基）乙基萬古霉素 3

Nleu-2_(癸硫基）乙基萬古霉素 Nvan，Nleu-雙-[2-(癸硫基)乙基]萬古霉素將^自任何一個以上步驟之反應混合物倒入水（7公升） 2 ’仔到輕微混濁的溶液。將溶液的pH以飽和碳酸氫鈉調整成5,，成白色沉澱物的形成。以過濾收集該沉澱物，以接著以醋酸乙酿清洗，並在真空下乾燥，以供給 2 (夭&基）乙基萬古霉素，使用未進一步純化之該產物0 △免將在ACN/H2〇(1 : 1，3〇毫升）中的萬古霉素氫氯酸鹽（3.〇公克，2·1毫莫耳）之溶液在25°CT以二異丙基乙胺 (〇·54公克，〇·72毫升，4·2毫莫耳）及接著以2-(癸硫基）乙醛 (0.91公克，4.2毫莫耳）處理。在3〇分鐘之後，將反應混合物以TFA(1.92公克，129毫升，16 8毫莫耳）及接著以

NaCNBH3(0.132公克，2.1毫莫耳）處理。在5至10分鐘之後，在乙赌（300毫升）中沉澱Nvan_2_(癸硫基）乙基萬古霉素粗產物0 實例1 化合物3之製備作用 (其中R3係N-(亞磷羧基甲基）胺基；R5係氫；Ri9係氫及r2〇 -51 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ 297公釐） 1233932 A7 _ _B7 五、發明説明（49 ) 係-CH2CH2-S-(CH2)9CH3之式 I) 將Nvan-2-(癸硫基）乙基萬古霉素雙三氟醋酸酯（丨公克，〇·53毫莫耳）與二異丙基乙胺（0·23亳升，1.33毫莫耳）在 DMF(10毫升）中組合及攪拌，直到均勻為止。接著將 HOBt(0.080公克，0.58毫莫耳）及 ΒΥΒΟΡ(0·300公克，0.58 毫莫耳）加入反應混合物中。在5-10分鐘之後，加入在水（3毫升）中含有（胺基甲基）膦酸（0.060公克，0.53毫莫耳）及二異丙基乙胺（0.23毫升’ 1.33毫莫耳）之均勾溶液。將反應在室溫下攪拌及以MS監控。在判斷反應完成時，則將反應混合物以乙腈（40毫升）稀釋及離心。將上層清液棄置，並將含有預期產物之殘餘片狀物溶解在50%水性乙腈（1 〇毫升）中及以反相製備性HPLC純化，以得到標題化合物。MS計算值 (M+) 1742.7 ;實驗值（MH+) 1743.6。實例2 化合物11之製備作用 (其中R3係-OH ; R5係N-(亞磷羧基甲基）胺基甲基；Ri9係氫及 R20係-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3之式 I) 將（胺基甲基）膦酸（3.88公克，35亳莫耳）與二異丙基乙胺 (6· 1毫升’ 35¾莫耳）在水（40毫升）中組合及攪摔，直到均勻為止。接著將乙腈（50毫升）及甲醛（在h2〇中的37%溶液；0.42 毫升’ 05.6毫莫耳）加入反應混合物中。在約15分鐘之後，將nvan-癸胺基乙基萬古霉素參三氟醋酸酯（1〇〇公克，51 笔莫耳）及二異丙基乙胺（6.1毫升，35毫莫耳）加入反應混合物中。將反應在室溫下攪拌約18小時，在此時將pH以20% -52 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1233932 A7 _____B7 五、發明説明（50 ) TFA凋整至約7 ,在真艾下除去乙腈及將殘餘物凍乾。將所知固體以水（100毫升）濕磨，以過濾收集，在真空中乾燥及以反相製備性HPLC純化，以得到標題化合物。MS計算值 (MH+) 1756.6 ;實驗值（MH+) 1756.6。也如以下製備化合物U。將N -(癸胺基乙基）萬古霉素之奎寧環鹽（5〇〇毫克，0.28 毫莫耳，以下的副屬部份）及胺基甲基膦酸（155毫克，h4 毫莫耳）在50%水性乙腈（10毫升）中製成泥漿。加入二異丙基乙胺（972微升，720毫克，5.6毫莫耳），並將混合物在室溫下攪拌，直到固體溶解為止。接著將反應混合物在冰浴中冷卻’並加入福馬林（3.7%，以50% ACN/水以1:9稀釋市售的37%福馬林製得的，220微升，8.8毫克，0.29毫莫耳）。將反應混合物在〇°C下攪拌15小時，在此時完成反應。在 0C下加入3當量HC1至約pH 2,以中止反應。將混合物以50% ACN/水稀釋成50毫升，並接著加入乙腈（75毫升，接著以5 分鐘間隔加入5x10毫升，總共125毫升），以沉澱產物。以真2過滤作用收集固體及在真空中乾燥。以反相製備性 HPLC之純化作用得到標題化合物。中間物Nvan-癸胺基乙基萬古霉素參三氟醋酸酯之製備如下。 a· N-Fmoc-2-(癸胺基）乙醇。將2·(正癸胺基）乙醇（2·3公克， 11毫莫耳，1.1當量）及DIPEA(2.0毫升，11毫莫耳，1.1當量）落解在二氯甲烷（15毫升）中及在冰浴中冷卻。加入在二氯甲燒（15毫升）中的氯基甲酸9-芴基甲酯（2.6公克，1〇毫莫 -53 - 本紙張尺度適用中國國冬標準(CNS) A4規格(210X 297公爱） 1233932 A7 ___B7_ 五、發明説明（51 ) 耳，1·0當量），將混合物攪拌30分鐘，接著以3當量氫氯酸 (50毫升）清洗兩次及以飽和碳酸氫鈉（50毫升）清洗。將有機物經硫酸巍乾燥及在減壓下除去溶劑◎使用未進一步純化之N_Fmoc-2-(癸胺基）乙醇（4.6公克，11毫莫耳，108%)。 b. N-Fmoc-癸胺基乙醛。將在二氯甲烷（25毫升）中的 DMSO(14.75公克）在-35至-45 °C下經20分鐘加入草醯氯 (12.24毫升）及二氯甲燒（50毫升）之溶液中。將反應混合物在 -35至-45°C下攪拌10分鐘。經25分鐘加入在二氯甲烷（7〇毫升）中的N-Fmoc-2_(癸胺基）乙醇（20·0公克）之溶液及接著在 -35至-45。(：下攪拌40分鐘。接著加入三乙胺（21·49公克）及將混合物在_10至-20°C下攪拌30分鐘。將反應混合物以水（12〇毫升）及接著以濃縮硫酸（20.0公克）中止，同時將内溫維持在〇-5°C。將有機層分離，並以2%硫酸（1〇〇毫升）及接著以水（2 X 1 〇〇當升洗。將有機落液在gQt之真空下蒸餘成約 100毫升。加入庚烷（1〇〇毫升），將油浴溫度上升至8〇〇c ,並持續蒸餾，直到殘餘體積具有1〇〇毫升為止。再加入庚烷 (1〇〇毫升），並重複蒸餾至體積約100毫升。以15<t的冷水浴代替加熱浴。將冷水浴經20分鐘緩慢冷卻至rc，產物開始沉澱。接著將泥漿冷卻至-5至-l〇t及將泥漿攪拌2小時。接著在瓷漏斗上收集固體及以冷（_5t)庚烷（2 X 15毫升）清洗。在真空中乾燥濕固體，以產生醛。 c· N -(财111〇〇2-正癸胺基乙基）萬古霉素三氟醋酸醋。將萬古霉素氫氯酸鹽（12公克，7.7毫莫耳，ι·〇當量）、财_-2-(正癸胺基）乙酸（3·2公克，以毫莫耳，J當量）及 54 -

1233932 A7 B7 五、發明説明（52 ) DIPEA(2.6毫升，14.9毫莫耳，2.0當量）在室溫下的DMF(120 毫升）中攪拌90分鐘。加入氰基硼氫化鈉（1.4公克，22毫莫耳，3.0當量），接著加入甲醇（120毫升）及接著加入三氟醋酸（1.8毫升，23毫莫耳，3.0當量）。將混合物在室溫下攪拌 60分鐘，接著在減壓下除去甲醇。將所得溶液加入600毫升二乙醚中，得到沉澱物，將其過濾，以醚清洗及在真空下乾燥。將粗產物在反相閃蒸管柱上純化，以在水中（含有 0· 1%三氟醋酸）的10、20、30%乙腈溶離，以除去極性雜質（如殘餘的萬古霉素），接著將產物以在水中（含有0.1%三氟醋酸）的70%乙腈溶離，以得到9公克成為其三氟醋酸酯鹽之 Nvan-(N_Fmoc-2-正癸胺基乙基）萬古霉素（4.3毫莫耳，56%)。 d· Nvan-2-(正癸胺基）乙基萬古霉素三氟醋酸酯。將 Nvan-(N-Fmoc-2-正癸胺基乙基）萬古霉素（100毫克）溶解在1 毫升DMF(1毫升）中，並以哌啶（200微升）處理30分鐘。將混合物沉澱成醚，離心及以乙腈清洗。以反相製備性HPLC(在含有0.1%三氟醋酸之水中的10-70%乙腈，經120分鐘）得到成為其TFA鹽之Nvan-2-(正癸胺基）乙基萬古霉素。

Nvan-癸胺基乙基萬古霉素的中間物奎寧環鹽之製備如下。 e· Nvan-(N’-Fmoc-癸胺基乙基）萬古霉素。將萬古霉素氫氯酸鹽（50·0公克）、N-Fmoc-癸胺基乙醛（13.5公克）、DMF(400毫升）及N，N-二異丙基乙胺（11.7毫升）加入配備機械攪拌器之2 公升燒瓶中。將懸浮液在室溫下攪拌2小時，在此時已將固體溶解。加入甲醇（190毫升）及接著加入三氟醋酸（10.4毫 -55 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1233932 A7 B7 五、發明説明（53 ) 升）。在將反應混合物攪拌5分鐘之後，加入一份甲硼烷4匕啶複合物（3.33公克），並以甲醇（10亳升）沖洗。在攪拌4小時之後’將反應以冰浴冷卻至5_l〇°C，並將水（675毫升）以維持溫度小於20°C的速度加入。將反應混合物溫熱至室溫，並以加入10% NaOH(約15毫升）使其成為ρΗ 4 2-4·3。將所得泥漿在冰浴中冷卻1小時，並接著以真空過濾作用收集產物及以冷水（2 X 100毫升）清洗。在5(rc的真空中乾燥濕固體，以得到成為灰白色至淺粉紅色固體之標題化合物。 f· N ·(癸胺基乙基）萬古霉素奎寧環鹽。將Nvan-(N，-Fmoc_ 癸胺基乙基）萬古霉素（88公克’ 42亳莫耳）在室溫下以揽拌1 小時的方式溶解在DMF(500毫升）中。加入奎寧環（9·4公克， 84毫莫耳），並將反應混合物攪拌18小時。在真空中除去 DMF，並將固體以乙腈（700毫升）濕磨3小時。在瓷漏斗上收集固體及以乙腈（200毫升）濕磨16小時。在此時再加入乙腈 (700毫升），並在瓷漏斗上收集固體，以乙腈（5〇〇毫升）清洗及接著再懸浮在乙腈（500毫升）中。在攪拌2小時之後，在资漏斗上收集固體及在真空中乾燥，以得到標題化合物。實例3 化合物12之製備作用 (其中R3係-OH ; R5係Ν-(亞磷羧基甲基）胺基甲基；Ri9係氫及 R2G係-CH2CH2-S-(CH2)9CH3之式 I) 將（胺基甲基）膦酸（0.295公克，266毫莫耳）與二異丙基乙胺（0.649亳升，3·72毫莫耳）在水（5毫升）中組合及攪拌，直到均勻為止。接著將甲醛（在Ηβ中的37%溶液；0.044毫升， · 56 - 本紙張尺度適用中關家標準(CNS) Α4規格(21G X 297公爱) 1233932 A7 B7 五、發明説明（54 ) 0.585毫莫耳）及乙腈（5毫升）加入反應混合物中。在約15分鐘之後，同時將Nvan-(2-癸硫基）乙基萬古霉素雙三氟醋酸酯（1公克，0.53毫莫耳）及二異丙基乙胺（0.649毫升，3.72毫莫耳）加入反應混合物中。將反應在室溫下攪拌約18小時，在此時將反應混合物以ACN(40毫升）稀釋及離心。將上層清液棄置，並將含有預期產物之殘餘片狀物溶解在50%水性乙腈（10毫升）中，並以反相製備性HPLC純化，以得到標題化合物。MS計算值（M+) 1772.7 ;實驗值（MH+) 1773.4。使用以上的步驟及適當的原料製備在表1中展示的化合物。這些化合物的質譜數據如下：化合物編號 MW(自由鹼）觀察值MH+ 1 1725.63 1726.6 2 1726.62 1727.5 3 1742.68 1743.6 4 1724.64 1725.6 5 1742.96 1743.6 6 1786.03 1786.4 7 1785.04 1785.8 8 1799.07 1799.7 9 1770.74 1771.8 10 1772.99 1774.3 11 1755.66 1756.6 12 1772.71 1773.4 13 1756.64 1757.6 -57 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（55 ) 14 1754.67 1755.7 15 1772.99 1773.7 16 1816.06 1816.5 17 1815.01 1816.2 18 1829.10 1829.8 19 1878.1 1878.2 _ 20 1802.74 1803.5 21 1830.75 1831.7 22 1849.66 1850.6 23 1800.76 1801.6 — 24 1801.04 1801.6 25 1932.86 1934.0 26 1880.12 1880.7 實例4 化合物11之純化作用 (其中R3係-OH ; R5係N-(亞磷羧基甲基）胺基甲基；Rl9係氫及 R2G係-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3之式 I) 將2公克Amberlite XAD 1600與過量的HPLC等級的水組合 4小時。除去過量的水，並將樹脂以（1)過量的HPLC等級的水；（2)過量的在甲醇中的10毫克分子量醋酸；（3)過量的在 50/50(體積/體積）之ACN/水中的10毫克分子量醋酸；（4)過量的5/95(體積/體積）之醋酸/水及（5)過量的10/90(體積/體積）之醋酸/水連續清洗。 -58 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐） 1233932 A7 B7 五、發明説明（56 ) 將樹脂裝載在配備20磅/平方英吋回壓調節器（Upchurch P-791)、螺動果（Ranin Dynamax型RP-1)及館份收集器 (BioRad 2110)之1公分内直徑之管柱上（Omnifit #56001)，將其調整成以每小時提供1床體積之溶離劑溶液之流速，以產生1毫升餾份。將50毫克粗化合物11溶解在5毫升之10/90(體積/體積）之醋酸/水中，以製備樣品。將溶液以聲波振動5分鐘，並裝載在1床體積/小時之流速的管柱上。以水以1 : 50(體積/體積）稀釋20微升之裝載溶液，並將其作為HPLC分析之標準品使用。將裝載之樣品以在17.5/82.5(體積/體積）之ACN/水中的10 毫克分子量醋酸溶離。收集每一個餾份及以薄層色層分離法（TLC)測試樣品的存在。將每一個餾份點在TLC片上（EM Science # 15341)及比較裝載溶液之參考點，以確定化合物11 的存在。收集餾份，直到以TLC不再偵測出化合物11為止。接著將溶離劑溶液改變成在50/50(體積/體積）之ACN/水中的10毫克分子量醋酸，以清除任何仍在管柱上的殘餘樣品。也以TLC測試在清除餾份中存在的樣品。一旦在清除液中不再發現樣品時，則結束餾份的收集。接著將管柱分別以5床體積之在甲醇中的10毫克分子量醋酸、在50/50(體積/體積）之ACN/水中的10毫克分子量醋酸及10/90(體積/體積）之醋酸/水清洗。將每一個餾份渦旋及以水以1: 10稀釋至自動取樣器小瓶中。將自動取樣器小瓶渦旋及在以214毫微米之紫外線偵測 -59 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1233932 A7 _____ B7 五、發明説明（57 ) 之Varian HPLC系統上分析。將2〇微升的每一個稀釋餾份注射在室溫Zorbax Bonus-RP，4·6 X 15〇毫米之管柱上。將樣品以從 82%A(5/95(體積 / 體積）之 ACN/水，〇1% tfA)/18% B(95/5(體積 / 體積）之 ACN/水，〇·ι% TFA)至 6〇% A/4〇B之 7 分鐘梯度溶離管柱。匯集包括超過89%純化合物丨丨之餾份。將匯集的餾份在 VirTis桌上型凍乾器上以隔夜凍乾及稱重，以測定產量。將固體化合物11溶解在10/90(體積/體積）之醋酸/水中及在水中稀釋成100微克/毫升。以以上的HPLC法分析1〇〇微克/毫升之純化合物11，以證實其純度。自以下的公式測定校正的產量：化合物11之產量％=馳化物之毫克规錄^的化合物此⑽χ 1〇〇% [懷蚊物質愛克X在粗物質中的化絲^ 1之％)] 如以下表III第一行的展示，將74%起始濃度之化合物u 純化成在59%產量時的90%濃度。實例5-13 以多種樹脂及溶離劑溶液純化化合物^ 使用各種樹脂及溶離劑溶液以實例4的方法純化化合物 11。將結果陳列在表III中。盘—ΠΙ :化合物11的妯化作同實例樹脂 P二.· ：~” Ίυ TF ) 溶離劑相 η 初最終產量％ % % 4 Amberlite XAD 1600 17.5/82.5 之 ACN/水，1〇毫克分子量醋酸 74 90 59 _ - 60 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（58 ) 5 Amberlite XAD 16 17.5/82.5 之 ACN/水，10 毫克分子量醋酸 74 84 69 6 Amberchrome CG-300S 12/88之IPA/水，2毫克分子量 HC1 67 86 78 7 Diaion HP 20 17.5/82.5 之 ACN/水，10 毫克分子量醋酸 74 85 39 8 Amberlite XAD 16HP 17.5/82.5 之 ACN/水，10 毫克分子量醋酸 74 87 27 9 Amberlite XAD 1600 17.5/82.5之ACN/水，2毫克分子量HC1 74 85 48 10 \mberlite XAD 1600 17.5/82.5 之 ACN/ 水， 0.05%TFA 74 94 36 11 Dptipore SD-2 17.5/82.5 之 ACN/水，10 毫克分子量醋酸 74 83 70 12 Amberchrome ：G1000s 12/88之IPA/水，2毫克分子量 HC1 70 90 42 13 CHP-20P 12/88之ACN/水，2毫克分子量HC1 68 83 11 由以上的結果明白本發明的方法係提供達到純度超過 80%的膦酸化醣肽衍生物之純化作用。雖然以參考其特殊的具體實施例說明本發明，但是那些熟悉此項技藝的人應暸解可以不達背本發明實際的精神及範圍下進行各種改變及以同等物取代。此外，可以進行許 -61 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1233932 A7 B7 五、發明説明（59 ) 多修改，以適應本發明的特殊情況、材料、組成物物質、處理方法、處理步驟或步驟等、目的、精神及範圍。計劃將所有的這些修改納入本文所附的申請專利範圍内。此外，將本文以上引證的所有發表案及專利文件詳細併入本文以供參考，雖然以單獨併入以供參考。 -62 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）

Claims

I233$3(3111880〇號專利申請案中文申請專利範圍替換本(93年7月) 日! 、申請專利範圍祕 1. 一種純化式I化合物或其在醫藥上可接受之鹽或立體異構物之方法， HO HO,

,ΟΗ R19 N- R2〇 HO ··〇··. 丫 / 0> -o/ 〇、 /〇， C1 V 〇 .OH ,ΟΗ 〇 Η CH, ,Νη 〇〇 nh J ’Th HO> ΌΗ R5 η2ν ：0 CH〇其中： R19係氫； R20 為-Ra-Y-Rb-(Z)X，Rf，-C(〇)Rf，或-C(〇)-Ra-Y-Rb-(Z)X ; 及 R3為-〇H、-NHKCk)伸烷基-P(〇)(OH)2或 -NHCH2CH(0H)P(0)(0H)2 ； R5為選自由氫、-CHrNIHCu)伸烷基-P(〇)(〇H)2、 -ch2nhch2ch(oh)p(o)(oh)2、 -CH2N(CH2COOH)CH2P(〇)(OH)2、CH2N[CH2P(〇)(OH)2]2 及 -CH2N(CH3)-D-還原葡糖胺所組成之群組；本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐） A B c D 1233932 六、申請專利範圍每個伸烷基；每個Rb為共價鍵或（C^q)伸烷基，但當z為氫時Rb不為共價鍵；每個Rf分別為（C^n)烷基或經4_(心氯苯基）苯基基團取代之（CN0)烷基；每個Y分別為選自由氧、硫、_NR、及-NRcs〇r所組成之群組；每個Re為氫；每個z分別為選自由氫、氯苯基）苯基及4_(4_氣苯甲基氧基）苯基所組成之群組；且 X為1 ; 該方法包含步驟： (a) 將含有式I化合物的第一個酸化水溶液與含有聚苯乙晞及二乙烯基苯之樹脂接觸； (b) 將接觸之樹脂以含有極性有機溶劑的第二個酸化水溶液溶離，以形成溶離液；及 (c) 將式I化合物與溶離液分離。 2.:據申請專利範圍第η之方法，其中在第二個酸化水溶液中存在的極性有機溶劑包含乙腈。根據申#專利範圍第1項之方法，其中在第二個酸化水溶液中存在的極性有機溶劑们：❿：15之比例的極性有機溶劑：水。 4.根據申請專利範圚第]須> 士 a、、摩囷罘1 /、艾万法，其中在第二個酸化水落液中存在的酸包含醋酸。 80088-930719 1233932 A B c D 申請專利範圍 .，據申請專利範圍第丨項之方法，其中在第二個酸化水落液中存在的酸包含氫氯酸。 6.根據申請專利範圍第α之方法，其中在第二個酸化水落液中存在的極性有機溶劑的溶液中的酸具有從5毫莫耳至50毫莫耳的濃度。 7· 2據申請專利範圍第”貝之方法，其中在步驟⑷中的聚 +乙缔二乙締基苯樹脂具有從5〇埃至1〇〇〇埃之孔尺寸。 8 ·根據申請專利範圍第丨項之方法，其中步驟⑷包含以凍乾作用分離式I化合物。 9·根據申請專利範圍第:^頁之方法，其中步驟⑷包含以含沉殿作用之方法分離式工化合物。 1〇·根據申凊專利範圍第1項之方法，其中步驟（C)尚包含形成具有式I化合物濃度比溶離液濃度更高的溶液。 η·根據申凊專利範圍第1項之方法，其中在步驟（C)之產物中的式I化合物純度大於80%。 12·根據申請專利範圍第1項之方法，其中步驟㈨包含以含有極性有機溶劑的水溶液清洗接觸之樹脂數次，以形成許多餾份，並將餾份合併，以形成溶離液。 13. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中在式τ化合物中的 R3係-ΟΗ。 14. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中在式I化合物中的 R'係式-ΝΗ-((ν6)伸烷基-Ρ(〇)(〇Η)2之基。 15·根據申請專利範圍第1項之方法，其中在式〖化合物中的 R5係氫。 80088-930719 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）裝訂 8 8 8 8 A B c D 1233932 、申請專利範圍 &根據申請專利範圍第1項之方法，其中在式J化合物中的 R5係式-CHrNHKCu)伸烷基_P(〇)(OH)2之基。 17.根據申請專利範圍第1項之方法，其中在式j化合物中的 R20係-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3 ; -CH2CH2CH2-NH-(CH2)8CH3 ; -CH2CH2CH2CH2-NH-(CH2)7CH3 ； -CH2CH2-NHS02-(CH2)9CH3 ； "CH2CH2-NHS02-(CH2)nCH3 ； -CH2CH2-S-(CH2)8CH3 ； -CH2CH2.S-(CH2)9CH3 ； -CH2CH2-S-(CH2)10CH3 ； -CH2CH2CH2. S-(CH2)8CH3; -CH2CH2CHr S-(CH2)9CH3; -CH2CH2CH2CHr S-(CH2)7CH3 ；-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph ； -CH2CH2-S-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph ； -CH2CH2CH2-S-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph ； -CH2CH2CH2.NHS02 -CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph ;或-CH2CH2CH2-NHS02-4-(4-Cl-Ph)-Ph。 18·根據申請專利範圍第i項之方法，其中在式〗化合物中的 R3係-OH ; R5係N-(亞磷羧基甲基）胺基甲基；Ri9係氫及 R20係-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3 ;或其在醫藥上可接受之鹽〇 19.根據申請專利範圍第1項之方法，其中在式〗化合物中的 R3係-OH ; R5係N-(亞磷羧基甲基）胺基甲基；Ri9係氫及 R20係-CH2CH2-NH-(CH2)9CH3。 80088-930719 _ 4 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公董）