TWI221156B - Antithrombotic compounds - Google Patents

Description

經濟部智慧时產局員工消t合作社印製 1221156 A7 B7

其中R5獨立爲〇S〇3-或（1 — 8C)烷氧基。 ) 且本發明較佳化合物爲式I化合物，其中R 1爲苯基、 甲氧基一 2，3，6 -三甲基苯基或萘基。在較佳化 合物中，N R 3 R 4表哌啶基。較佳地，R 2爲Η。 間隔基的化學結構對本發明化合物的抗血栓活性是次 要的或不重要的，然而其不可能完全剛性。可彎曲的間隔 基較其他更適合。 再者，爲了合成原因’ 一些間隔基較其他更適合。 易被使用的適合間隔基具有’例如式（I I 1 ): -[(CH2)20]m-[(CH2VNR3-C(0)]rW-(CH2)s- (III)， 其中 W 爲[1，4-苯撐基- ΝΙ13-(：(〇）]^((：Η2；Κ-3-或 -(CH2)l-S-(CH2)u-[0(CH2)2]v-0-(CH2)w-C(0)-NR3-; 及R3獨立爲Η或（1一8C)烷基； ηι=1 — 12 ; η = 1 — 8 ; Ρ 二 0 — 4 ; Q = 0 或 1 ; r^l— 8 ; s = l - 8 ; t^l - 8 ; u=l — 8 ;v 二 1 — 1 2 ; w = 1 - 8 ;原 t 總數爲 1 0 — 7 ◦; 及—〔（C Η 2 ) 2〇〕⑴一部分爲Q連結至Z的終端。 較佳的問隔基如下： ---------------------訂·-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙张尺度適丨丨1中丨3國家標準（CNS)A 1悦格（2〗ϋ 公釐） -8- 1221156 Λ7 B7 五、發明說明6 ) -[(卿20]5仰2)2-而{(0)-(：氏各〇^2-； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -[(CH2)20]5-(CH2)2-NH-C(0)-CIVS-(CH2)2-[0(CH2)2]r〇-CH2-C(0)-NH-(C ⑹ -[((3Η2)2〇]3·*(^Η2)2~ΝΉ-0(0)-1，4-苯撼 ~NH-C(0)-CH2~S~CH?-. "在式（I )化合物的描述中，下面定義被使用。 (1 一 8 C )ί完基一詞表具有1 一 8個碳原子的直鏈 或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、第 二-丁基、特丁基、己基及辛基。甲基及乙基是較佳的烷 基。 (1 一 8 C)烷氧基一詞表具有1 一 8個碳原子的烷 氧基，烷基部分具有前述定義。甲氧基是較佳的烷氧基。 (3 - 8 C )環烷基一詞表具有3 - 8個碳原子的環 烷基，爲環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環 辛基。環戊基及環己基是較佳的環烷基。 經濟部智慧財產局員工消f合作社印袈 間隔基長度爲間隔基原子的數目，計數沿著介在Ζ及 肽部分間的最短鏈，不計數低級多糖Ζ的氧原子，其被連 接至間隔基。 前驅藥〃一詞表本發明化合物，其中眯基部分的胺 基被保護，例如藉由羥基或一（1 一 6 C )烷氧基羰基。 本發明化合物被製備，係藉由使用習知方法，衍生自 N A P A Ρ (或一 N A P A Ρ類似物）在氨基乙酸位置上 有半胱氨酸或離氨基酸，隨後，化合物（a )被偶合至低 及多糖-問隔殘留蕋或（b )被偶合至間隔莶，然後其 本紙张>1度適丨丨]屮S Η家β準（CNSM.彳规格（210 丨)7公玆〉 -9- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1221156 A7 B7 五、發明說明6 ) 用硫基加以衍生，及隨後被偶合至低及多糖殘留基。任何 適合的低級多糖可能被使用以爲此目的，例如揭示在文獻 中的低級多糖（如來自EP 0，454，220及 EP 0，529，715，但不限爲這些來源）或市售 低級多糖。低級多糖可能在適當時間藉由方法Buijsman， R. et al (摘要 of papers· 9th European Carbohydrate Symposium Utrecht 1997，摘要A1 50 )力口以磷酸化。間隔基 偶合至低級多糖可被完成，藉由使用描述在 EP 0，649，854中的方法。 肽偶合（在上述方法中的程序步驟以製備本發明化合 物）可被實施，係藉由習知方法（以爲肽片段的偶合-或 縮合-）如疊氮化物方法、混合脫水方法、活化酯方法， 或較佳地使用羰二亞胺方法，特別地，伴隨催化劑與消旋 作用的加成以抑制化合物如N -羥基琥珀醯亞胺及N -羥 基苯並三哩。槪述參考 The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol3, E. Gross and J. Meienhofer, eds. ( Academic Press, New York, 1981 ) 〇 存在化合物中的胺官能基在合成步驟中可藉由一 N -保護基而給予保護，其表示在肽化學中通常使用一族基團 以保護α —胺基，如特丁氧基羰基（Boc )族、苄氧基羰 基（Z)族、9 一苐基甲基氧基羰基（Fmoc )族或酞醯（ Phth )族。保護基的移除可以不同方式發生，依這些保護 基族的本質而決定。通常去保護作用是發生在酸化條件下 及淸除劑存在下。胺基保護基族及其移除方法的槪述可參 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -10- 1221156 A7 _ B7 五、發明說明（b ) 考上述 The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol3 ° (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明化合物以自由鹼形式存在時，可從反應混合物 中以藥學上可接受的鹽形式被單離出來。藥學上可接受的 鹽亦可能藉由用有機或無機酸處理式（I )自由鹼而被得 到，該酸如 HC1 、HBr 、HI 、H2S〇4、H3P〇4 、乙酸、丙酸、乙醇酸、馬來酸、丙二酸、甲磺酸、反丁 烯二酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、抗壞血酸及 等等。 本發明化合物具有掌性碳原子，及因此可能以一純的 對映體，或一對映體混合物，或含非對映體的混合物方式 被得到。爲了得到純的對映體的方法爲習知，例如鹽的結 晶作用，該鹽可從光學活性酸及消旋混合物，或使用掌性 管柱的層析術中被得到。對非對映體而言，正相或逆相管 柱可能被使用。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明化合物可能以經腸的或非經腸胃的方式投予。 這些化合物及其組成物的精確劑量及養生法將視患者、病 況及醫師的判斷而決定。通常非經腸胃的投予方式較其他 投予方法（其更依賴吸收作用）要求較低劑量。然而，對 於人類而言，每天的劑量較佳爲0·001—l〇〇mg /體重kg，更佳爲〇 · 01 — l〇mg/體重kg。 用本發明化合物製備的藥劑亦可能作爲急性抗凝血劑 治療中的佐劑。在此案例中，藥劑與用於治療此疾病的其 他化合物一起被投予。 與藥學上適合的輔劑，例如描述在標準文獻中， -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1221156 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明) Gennaro et al., Remington^s Pharmaceutical Sciences, ( 18th ed., Mack Publishing Company, 1990, see especially Part 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture )，混合 的化合物可能被壓縮爲固體劑量單元，如藥九、片劑，或 被製備成膠囊或栓劑。經由藥學上適合的液體，化合物亦 可以溶液、懸浮液、乳液方式被施用，例如作爲注射液， 或噴液，例如作爲鼻噴液。 爲製備劑量單元，例如片劑，考慮使用習知添加劑如 塡充料、著色劑、高分子連結劑及等等。通常，不會影響 活性化合物的功能的任何藥學上可接受的添加劑可被使用 〇 適合的載劑（其可與組成物一起被投予）包括乳糖、 澱粉、纖維素衍生物及等等，或其混合物，以適當量被使 用。 本發明藉由下面實例給予進一步的說明。 實例 使用的縮寫： DMAP = N，N —二甲基胺基吡啶 TEA二三乙基胺 Z =苯甲氧基羰基 A c =乙醯基 MMT r =單甲氧基三苯甲基 Β η二苯甲基 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

ϋ 1 is }fJ0 I ϋ ·ϋ ϋ I 訂 線申 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） -12- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1221156 Α7 _ Β7 五、發明說明（10 ) D C Η A =二環己基銨 EDC 1 = 1— (3 —二甲基胺基丙基）一 3 —乙基 _二亞胺鹽酸鹽 HOB t = 羥基苯並三唑 D i PEA=二異丙基乙基胺 P y r =吡啶基 T E G =四甘醇 Η E G =六甘醇 ΑΡΑ=脒基苯基丙氨酸 C y s =半胱氨酸 化合物的數目參考化學式單子上的化合物 4一〇— (4 —〇一（2，3 ，4，6-四一0 —乙醯基 —α — D—吡喃葡糖基）_2，3，6 —三一〇一乙醯基 — α — D -吡喃葡糖基）—2，3，6 —三_0 —乙醯基 一 α/0 — D —吡喃葡糖基三氯乙醯亞胺酯（4) 一攪拌中的麥芽三糖（1) (2.0克，4.0毫莫 耳）的吡啶（1 0 〇毫升）溶液被加入醋酸酐（6 · 2毫 升，65毫莫耳）及催化量的DMAP (〇 · 79克， 6 · 5毫莫耳）。5小時後，反應混合物被倒至碳酸氫鈉 水溶液（1Μ，250毫升）及用乙酸乙酯（200毫升 )萃取3次。結合的有機層用硫酸鎂乾燥及在真空下濃縮 。產物藉油管柱層析術（輕石油醚/乙酸乙酯，1/1至 0/1，ν/ν)純化以給與白色泡沬的2 (9 1%產率 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -13- , 了 * 1 I ·ϋ n- ϋ ϋ emmmm 1 ϋ ϋ · 1_ι ϋ I ϋ n ϋ--Γ’ · I I μη· f (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線騫- 經濟部智慧財產局，Μ工消t合作社印％ 1221156 Λ7 _____ 五、發明說明（π ) ’ 3 . 5克）。Anomeric去乙醯作用藉由用0 . 1Μ乙酸 肼酯的二甲基甲醯胺溶液（3 4毫升，3 · 4毫莫耳）處 理2 (3 · 〇克，3 . 1毫莫耳）持續1小時而被完成。 在真空下濃縮後，反應混合物用乙酸乙酯（5 〇毫升）稀 釋’用碳酸氫鈉（1 Μ，3 X 2 5毫升）洗，乾燥（硫酸 鎂）及濃縮。純化作用藉由矽膠管柱層析術（輕石油醚/ 乙酸乙酯，3/2至1/0，ν/ν)而給予3 (92% 產率，2.7克）。化合物3 (2.7克，3·1毫莫耳 )被溶於二氯甲烷（15毫升）及三氯乙腈（1 · 7毫升 )中加入一催化量的碳酸鉋（0 · 2克，0 . 6 2毫莫耳 )。1小時後，反應混合物被過濾及濾液在甲壓下被濃縮 。粗產物4的純化作用藉由管柱層析術（輕石油醚/乙酸 乙酯/TEA，50/49/1 至 0/99/1 ，ν/ν / ν )而產生純的白色泡沬4 ( 1 · 9克，7 1 % 。 Ν—苯甲氧基羰基一1一胺基六甘醇 4一〇一（4一〇 —(2 ，3 ，4 ，6 —四一〇一乙酿基一a — D — 〇比喃葡 糖基）一2，3 ，6 —三一〇一乙醯基—a — D —吡喃葡 糖基）一 2 ，3 ’ 6 —三一〇一乙酿基一/5 — D — d比喃葡 糖苷（6 ) 給予體4 (0 · 69克’ 0 . 76毫莫耳）及接受體 5 (0 . 31克，〇 · 76毫莫耳）的二氯甲烷（1 · 5 毫莫耳）溶液在活化分子篩4Λ ( 2 5 0毫克）及氮氣下 攪拌]小時。溶液被冷卻至- 2 0 t及逐滴加入三甲基矽 ---------------------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙)VI度iS用屮四因家檔卑（CNS)A1规格（210 X W7公玆） -14- 1221156 A7 __ _B7 ___ 五、發明說明) 烷基三氟甲磺醯酯（1 5 # 1 )的二氯甲烷（〇 · 6毫升 )溶液。1 〇分鐘後，T L C分析（5 %甲醇在二氯甲烷 中）顯示只有1種產物。固體的碳酸氫鈉（〇 . 3克）被 加至反應混合物，其被攪拌1 〇分鐘且然後被過濾。濾液 用二氯甲烷（5 〇毫升）稀釋，隨後用碳酸氫鈉水溶液（ 1M’ 2X25毫升）洗，乾燥（硫酸鎂），及在真空下 濃縮。殘留物用矽膠層析術產生純的6 ( 0 . 5 7克， 5 6 %產率）。 N —苯甲氧基羰基一 1 一胺基六甘醇 4 一〇一（4 一〇 一（α — D —吡喃葡糖基）一 α — D -吡喃葡糖基）一点 一 D -吡喃葡糖苷（7) 化合物6(0 · 57克，0 · 43毫莫耳）用特丁酸 鉀（43毫克，10毫克/Ac毫莫耳）的甲醇（15毫 升）溶液處理。1小時後，T L C分析（乙酸乙酯/吡啶 /乙酸/水 ’ 5/7/4/1 · 6，v/v/v/v)指 出6完全轉化至7。反應用Dowex 50 WX4 — H +樹脂中 ---I---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------^91. 經濟部智毯財產局員工消赀合作社印絮 用 使 可 ( 即 7 化 供純 提步 以 I 縮進 濃須 下無 壓其 減’ 在 } 液率 濾產 及 ％ 掉 5 濾 9 過’ 被克 脂 7 樹 3 ο · 和 ο 。 〇 二 I 一 ( 6 4 一 ， C 四 3 I 一 , 0 6 2 I ， 一 4 4) ’ 基 醇 3 糖 甘，葡 六 2 喃 基一吡 胺 } I I 基 D 1 糖 一 I 葡 a 基喃 I 羰吡} 基 I 酯 氧 D 酸 甲 I 磷 苯 aa 一 ( 甲 N 一 苯 ^^7、度適川中闷國家標準（CNsmi说格（LM〇x：^7公玆 15- 經濟部智慧財產局員工消赀合作社印¥ 1221156 ___B7___ 五、發明說明<3 ) 三（二苯甲基磷酸酯）一 y3 — D —吡喃葡糖苷2 ，3 ，6 一三（二苯甲基磷酸酯）（9 ) 1H -四唑（54毫克，0 · 77毫莫耳）的乙腈（ 1毫升）溶液被加至7 (86毫克，95 (vmo 1 )及 8 (450毫克，1 . 4毫莫耳）的乙腈/二噁烷（2/ 1 ’ v / v，2毫升）溶液。在2 0 °C攪拌1小時後，反 應混合物用冰浴冷卻及加入特丁基·過氧化物（0 . 7 5毫 升）。攪拌45分鐘，TLC分析顯示一主要產物的存在 。純化作用藉由矽膠管柱層析術（1 0 0 / 0至9 5 / 5 ，二氯甲烷/甲醇，v / v )提供純的9 ( 3 1 1毫克， 9 2 %產率）。 1 一胺基六甘醇 4一〇一（4 —〇一（α — D —吡喃葡 糖基）一 2，3，4，6 —四一碟酸酯）—α — D —卩比喃 葡糖基）一 2，3，6 —三磷酸酯）—Θ — D -吡喃葡糖 苷2，3，6 -三磷酸酯）（10) 化合物9 ( 3 1 1毫克，8 7 (// m ο 1 )被溶於含 一點乙酸的特丁醇/水（6 / 1 ，v / v，2 0毫升）中 。溶液在氫氣及10 % Pd/C (100毫克）的存在 下攪拌。3小時後，觸媒被過濾掉，且濾液在真空下濃縮 υ D 〇 w e X 5 0 W X 4 — N a —離子交換樹脂以提供1 0 ( 179毫克，98 %產率）。 N — 2 —萘磺醯基一 S — 4 一單甲氧基三苯甲基一 （L ) 一半胱氨酸（1 2 ) 本紙队、度適川屮S Η本標芈（CNSM·丨规格（2.丨◦ 公釐） .. _ 1 ϋ n m n ϋ 一a memi i_l n in ki— n I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消费合作社印於 1221156 A7 B7__ 五、發明說明（4 ) 一攪拌中的市售S — 4 一單甲氧基三苯甲基一（L) —半胱氨酸（1 1 ) ( 0 · 3 4克，1毫莫耳）、二噁烷 (5毫升）及1 0 %碳酸鈉水溶液（5毫升）被加入2 -萘磺醯氯（0 . 2 5克，1 · 1毫莫耳）。攪拌1小時後 ，反應混合物被加入5 %檸檬酸水溶液（5 0毫升）以酸 化，及用乙酸乙酯（2 X 5 0毫升）萃取。結合的有機層 被乾燥（硫酸鎂）及在減壓下濃縮。粗產物用矽膠層析術 (甲醇/二氯甲烷/三乙基胺，〇/9 9/1至4/9 5 /1 ，v/v/v)以產生 12 (76%產率，0 · 44 克）。 N— 2 —萘磺醯基一 S — 2 -吡啶硫基一（L) 一半胱氨 酸（.1 4 ) 三氟乙酸及三異丙基矽烷的二氯甲烷（1/1/1 8 ，v / v / v )溶液被加入化合物1 2 ( 0 · 4 4克， 0 · 7 6毫莫耳）。攪拌2 0分鐘後，混合物被倒至水中 及用二氯甲烷（2 X 5 0毫升）萃取。結合的有機層用硫 酸鎂乾燥及在真空下濃縮。在粗混合物中少量的三氟乙酸 藉由與甲苯的共蒸發而被移除。得到的自由硫醇1 3再次 溶於異丙醇（2 . 5毫升）中及逐滴加入Aldnthi〇lTM ( 1 · 7克’ 7 · 6毫莫耳）的異丙醇/2N乙酸水溶液（ 1 / 1 ’ V·· / v，2 0毫升）的溶液。1小時後，T L C 分析指出反應完全，及混合物在減壓下濃縮。殘留物中少 量的乙酸藉ΙΪ1與ίψι苯的共蒸發而被移除。粗產物被溶於丙 本紙ίΜ:度適川屮丨M3家標準（CNS)A：!規格（2]()xW7公觉） •17- --------訂--------- ^91 — (請先閱ti背面之注意事項再填寫本頁) 1221156 經濟部智慧財產局員工消费合作社印於 Λ7 Β7 五、發明說明纟5 ) 酮（1 0毫升）中，及加入二環己基胺（〇 . 3毫升）， 之後，化合物從反應混合物中沉澱出來作爲其D C Η A -鹽。沉澱物被單離，被溶於乙酸乙酯（5 0毫升）及用 5 %檸檬酸水溶液（2 X 3 0毫升）洗。有機層被乾燥（ 硫酸鎂）及在減壓下濃縮以提供純的1 4 ( 5 5 %產率， 〇 · 2 5 克）。 Ν (Ν (Να— 2 —萘磺醯基一 S — 2 —吡啶硫基一（L) 一半胱氨醯基）一（D，L) — 4 一脒基苯基丙氨醯基） 哌啶（1 6 ) Ν -（（D，L) 一 4 一脒基苯基丙氨醯基）哌啶二 鹽酸鹽（15) (0 .13克，0.39毫莫耳）及半胱 氨酸衍生物14 (0 · 16克，0 · 39毫莫耳）的二甲 基甲醯胺溶液被加入HOB t (58毫克，0 · 42毫莫 耳）、EDCI (82毫克，0.42毫莫耳）及N —乙 基嗎啉（1 1 0 μ 1 ，0 · 7 8毫莫耳）。攪拌1 6小時 後，混合物用二氯甲烷（2 0毫升）稀釋及用水（2 X 1 0毫升）洗。有機層被乾燥（硫酸鎂）及在減壓下濃縮 。殘留物藉由矽膠管柱層析術（首先1 0 % — 2 0 %甲醇 在二氯甲烷中以移除不純物及然後乙酸乙酯/吡啶/乙酸 / 水（1 6 / 7 / 1 · 6 / 4，ν / ν / ν / ν )以釋出 產物）及隨後在Sephadex L Η - 2 0矽膠過濾以產生均質 的 1 6 ( 7 〇 ％ ， 〇 · 1 9 克）。 本紙Α义度過;丨]屮S國家標準（CNSMI规格（210 X 297公蝥） -18- —：------------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局Μ工消t合作社印^ 1221156 Λ7 B7 五、發明說明¢6 ) 麥芽三糖-十磷酸酯1 8與肽1 6的縮合偶合 麥芽三糖一十磷酸酯1 8 ( 2 1毫克，9 . 8 β ηι ο 1 )在〇.1 Μ N a 2 Η Ρ〇4緩衝溶液（1 · 〇 毫升，ρ Η 7 · 5 )中被加入Ν -羥基琥珀醯亞胺基一 2 一溴乙酸酯的甲醇（1毫升）溶液。攪拌2小時後，反應 混合物被塗敷在Sephadex G2 5管柱上用10%乙腈水 溶液洗提。適合的部分被收集及在減壓及低溫（2 5 °C ) 下濃縮以產生化合物1 9。N A P A P類似物1 6 ( 1 0 毫克，15//mol)被溶於甲醇（1毫升）及〇· 1M Na2HP〇4緩衝溶液（〇 · 75毫升，pH7 · 0) 的混合溶液中及藉由通氨氣及sonification以去除氣體。此 溶液被加入三丁基膦（4 . 1/iL，16//mo 1 )及反 應混合物在氮氣下攪拌1小時後，Η P L C分析（ Uchrospher ® R Ρ 1 8 -管柱）指出2 —吡啶硫基完全被 切斷及化合物1 9在二甲基甲醯胺（0 · 2 5毫升）及 0 . 1 Μ N a 2 Η Ρ〇4緩衝溶液（0 · 5 0毫升， ρ Η 7 · 0 )的溶液被加至反應混合物中。混合物被攪拌 3小時後，粗混合物藉由矽膠過濾（Fractogel H W -4 0，洗提液：0 . 1 5 Μ T E A Β )給予純化。親液 作用後，適合部分的縮合及隨後Dowex 5 0 W X — N a 離子交換給與均相共軛體I ( 1 〇 . 1毫克，4 7 %產率 )。兩種非對映異構物藉由半製備Η P L C管柱層析（ L i c h r 〇 s p h e 1. ® R Ρ 1 8 —管柱，梯度：17.5%-2 2.5% C H C Ν 在 0 · 〇 5 Μ 丁 E A Α 水溶液） 本紙张叉度適川屮國®家標準（CNSM.丨规格（ιηϋ>^()7公釐） -19- ----------------11--訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1221156 A7 __________D7 五、發明說明纟7 ) 給 予 分 離 > 以 給 與 非 對映異 構物 I — a (滯 留 時間 2 8 • 6 分 鐘 ) 及 非對映異 構物 I — b (滯 留 時間 3 3 • 0 分 鐘 ) ο 兩 種異構 物藉 由 矽 膠 過濾 ( S e p h ,adex G- 25 ΌΝΑ 「grade S upe r f i n e ) 而被 去 :鹽 ^ ΓΠ3. > 使用 D o w e x 5 〇 W X — N a + 1 雛子交換樹脂以丨 轉換: 至N ; a ^ -形 '式。 非對 映 異 構 物 I 一 3 : 1 Η N Μ R ( D 2 〇， 6 0 0 Μ Η z Η Η — C 〇 S Y ) :麥 牙 二 糖 ··( 還 原的 終端） 4 • 6 5 ( b s y 1 Η，Η 1 ) 3 • 8 5 ( m , 1 Η， Η 2 ) 4 * 3 5 ( m，1 Η， Η 3 ) ，3 . 7 6 (m， 1 Η > Η 4 ) 5 • 5 0( b s j 1 Η ，Η 1 / ) 4 • 1 8 ( m 1 Η ，Η 2 / ) 3 4 • 10 ( m j 1 Η， Η 4 〆 ) * ( 非 — 還 原的終 端） 5 • 7 1 ( b s , 1 Η， Η 1 // ) 4 • 〇 9 (m， 1 Η > Η 2 〃） > 4 · 4 5( m j 1 Η > Η 3 // ) ，4 · 15 ( m r 1 Η > H 4 〃)； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局8工消赀合作社印於 經濟部智慧財產局員工消赀合作社印纪 1221156 A7 B7_ 五、發明說明（18 )

，ySCH A P A ) ，2.57(m，lH，/3CH A P A ) ，1.45 — 1.25 ( m，6H，CH2 哌 啶）；ES— MS: 〔Μ— 3Η〕3-724·1， 〔Μ- 2H〕2 1086.7 非對映異構物I — b : 1 Η N M R ( D 2〇，6 0 0 Μ Η z ，Η H — C〇S Y ):麥芽三糖：（還原的終端） 3.80(m，lH，H2) ，4.32(m，lH， Η 3 ) ，3.89(m，lH，H4) ，5.49(bs ，1H，H1” ；4.22(m，lH，H2 一）， 4 · 1 1 ( m，1 Η，H 4 / );(非還原的終端） 5.70(bs，lH，Hl〃），4.22(m，lH ，Η2") > 4 . 5 2 ( m > 1 Η > Η 3 " ) >4.24 (m，1Η 14^):3.91 - 3·84(Η5，麥 芽三糖）；間隔間：3 · 6 3 - 3 · 5 2 ( m，2 2 Η， 0 C Η 2 HEG)，3.35(t，2H，CH2NH2 )，3 . 1 7 ( A B ，2 Η，S C Η 2 (〇））；肽： 8.35(s，lH，Ha"m NAS)，8.07 — 7 · 6 5 ( m，6 Η，H a " m N A S ) ，7 · 7 7， 7 . 22 ( 2 x d，4H，Ha"mAPA，J - 7 · 8

Hz)，4.62(t，lH，aCH APA， J a c ,. . p c .1 - 7 . 3 Η z ) ，4 . 0 5 ( m，1 H， a C H Cys) ，3.05-3.00(m，4H， C H 2 N _ 啶），2 · 8 5 — 2 · 6 7 ( m ，4 H ， 5 C H 2 C y s 1 /8 C H 2 A P A ) ，1·88 — ϋ n n n n I ϋ ·ϋ n n I · ϋ l i I I I I 一· I I l I I ϋ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙张尺度適用中®四家標準（CNS)AI规格（210x297公t ) -21 - 1221156 A7 ___B7__ 五、發明說明（19 ) 1 · 2 4 ( m ，6 Η，C Η 2 ι哌啶）； ES— MS: 〔Μ— 3H〕3 - 724.0， (M-2H)2_1086.2 N -羥基琥珀醯亞胺基一 1 4 — S — 2 -吡啶硫基一 1 4 一氫硫基一 3 ，6 ，9 ，1 2 —四噁四葵酸酯（2 2 ) 間隔基2 0 ( 0 · 7 5，2 ·, 4毫莫耳）（P. Westerduin et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1 996, 35,3, p33 卜 3 3 3 )及 Aldnth1〇lTM ( 2 · 6 克，1 2 · 1 毫莫耳） 被溶於二氯甲烷（2 0毫升）中及用n — 丁基胺（4毫升 )處理。攪拌2小時後，反應混合物在真空下濃縮，再次 溶於二氯甲烷（5 0毫升）中及用5 %檸檬酸水溶液（2 X 5 0毫升）洗。有機層被乾燥及在減壓下濃縮。殘留物 用矽膠管柱層析（甲醇/乙酸/二氯甲烷，〇 / 1 / 9 9 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消赀合作社印纪 ’ 基彳後 彳使 克羥 I 時{ 2 可 ο I C 小水 2 即 {8ND1 冰與化 1 · 及 Ε 。 用給純 20 中及液，以步 的{ > }溶釋縮 一 純 1 升耳此稀濃進 生 2 毫莫至 } 及須 產物 ο 毫加升 }無 以合 1 3 被毫鎂其 } 化 彳 · > ο 酸， V 。 院 2 耳 5 硫 } \ } 甲，莫 c C 率 V 率氯克毫，烷燥產 \ 產二 6 3甲乾9'6 V % 於 2 •氯 ’ 8 ’ 8 溶 · 2 二次 9 3 8 } 〇 ， 用 3 ， 9 ，耳 { 克物洗克 \ 克莫胺毫合 } 毫 1 ο 毫亞 5 混升 8 \ 8 1 醯 4 應毫 9 6 . .¾•反 ο · 。 至 02 號 ο ， 20 用 本纸度過丨I)屮卜3國家標準（CNS)A l悦格(2Η)χ·χΥ7 公坌） -22- 經濟部智慧財產局員工消f合作社印於 1221156 五、發明說明) N ; —特一 丁氧基羰基一 N “一苯磺醯基一（L )—離氨酸 (24) 如1 2方式給予製備，使用2 3及苯磺醯氯作爲起始 物質。（0.86克，75 %產率）。 1^一（14 — S - 2 -吡啶硫基—14 —氫硫基一 3，6 ，9，1 2 —四噁四葵醯基）—N “ 一苯磺醯基一（L) 一 離氨酸（2 6 ) 化合物24 (0 · 86克，2 · 2毫莫耳）用3N氫 氯酸的乙酸乙酯溶液處理。1 5分鐘後，反應混合物在真 空下濃縮。殘留物中少量的酸用甲苯的共蒸發給予移除。 粗產物2 5被溶於二噁烷/水（4 / 1，v / v，2 · 5 毫升）的混合物中及此溶液被加入化合物2 2 ( 0 . 9 8 克，2 · 1毫莫耳）及Di PEA (1.1毫升，6. 6毫莫 耳）。1小時後，反應混合物用二氯甲烷（1 〇 〇毫升） 稀釋及用5%檸檬酸水溶液（2 X 5 0毫升）洗。有機層 被乾燥（硫酸鎂）及在真空下濃縮。殘留油藉由矽膠管柱 層析（0 - 1 0 %甲醇/乙酸乙酯）純化以給與均相的 26 (0.95克，67%產率）。 N ( N ( N 4 — ( 1 4 — S — 2 —吡啶硫基一 1 4 —氫硫基 一 3 ，6，9 ，1 2 -四噁四葵醯基）—N “ —苯磺醯基一 (L ) 一離氨醯基）一（D，L ) 一 4 一脒基苯基丙氨醯 S ) _ 啶 I 2 7 ) 本紙张尸、度適用中S國家標準（CNSM]规格（210x297公釐） -23- --------^---I----- <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1221156 A7 ___B7____ 五、發明說明h ) 如1 6方式給予製備，使用2 6及1 5作爲起始物質 。（87毫克，70%產率）。 (請先閱讀背面之>i意事項再填寫本頁) 麥芽三糖一十磷酸酯1 8與肽2 7的縮合偶合（I I ) 如I方式給予製備，使用1 8及2 7作爲起始物質。 粗I I的純化作用藉由半製備Η P L C ( liChrospher ® R P - 1 8管柱）給予實施。隨後，去鹽藉由矽膠過濾（ Sephadex G-25 DNA-grade Superfine )，使用 Dowex 50 WX 4 - N a +離子交換樹脂以轉換至N a + -形式及親液 作用提供純的I I ，其爲白色蓬鬆固體（8 . 5毫克， 23%產率來自18)。 1 H NMR (D2〇， 600MHz ，HH — COSY)

:麥芽三糖：（還原的終端）4.67(m，lH，Hl )，4.07(m，lH，H2) ，4.40(m，lH ，H3)，4.06(m，lH，H4) ; 5.49( bs，lH，Hl') ，4.24(m，lH，H2^) Η m /V 6 6 4 經濟部智慧財產局ρ'工消费合作社印纪 Η m 3 4 4 Η 3 ο 的m4 原 c ， 還 7 } 非 1 〃 ( · 3 ;4 Η • 3 4 7 ) 5 3 端 H終 o s b H ， 1 H ， IXm ，

2 H H 8 3 4 2 2 3 4 麥 5 Η κίν 2 8 // 4 基 H隔 ’ 間 Η ; -~ ，糖 m 三 (芽 Η 2 S X 2 /IV 2 ο Η 6 3m /(V 9 5 3 I 3 7 3 Η Η c c 〇 〇

C 丁

) ， 1/ G 〇 E G Ε Η 8 3 3 Η Ν 2 Η C Η 2 -24- 本紙张&度適用中國國家標準（CNS)A‘1规格（21〇χ 3)7公釐） 1221156 B7 _五、發明說明心） p Η 7 · 0 )的溶液被加入及混合物被攪拌3小時，粗混 合物被塗敷在Sephadex G— 5 〇管柱上，其用1 〇%乙 腈水溶液洗提。適合的部分被收集，被濃縮至少量及在 Superdex 30管柱上去鹽化，其用1 〇 %甲醇水溶液洗提。 濃縮及親液作用產生共軛體I I Ϊ ，其爲白色固體（9毫 克，5 2 %產率） Y 5 〇 C - Η Η ζΗ Μοο 6 〇 2 D Γν RΜ Ν Η 9 S X 3 Γν 3 4 3 3 5 3 ο 6 3 5

〇 3 Η C Η IXm /ι\ 3 5 5 D 環 Η Η

Hm’ ’ } 1 ( Η 1 2 ， 2 2 Η ΗΙΏ， ， ，( · m Η Η 8 3X11 5) 2, ， • ) ( d m 4 4 3 (( , Η *—ίο ι—/ ) 7 2 2 Η 4 . Η --»44 ) ·/ CO··9 Η m 2 Ε ) -—- ( •環 Ν ’ 6 4 ; Η m5 ， } ,—-1 C · } \ · 5 3 5 6 8 1 ， Η Η -I . \ly ， ， 2 4 3 Η 6 1 . , ~TJ 〇〇 3 Η Η τχ m ✓{V 2 6 Η IXm /IV 2 9 3 I ϋ ϋ I ϋ 1· H I 一-0J· i ϋ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 Η d 3 Η 4 7 Ίχ Η 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 m Η 2 Η m J 4 Η 5Η 9 3 5 F環 2 2 4 \)/ ζ Η 8 3 3 Η Η IX Γη ^—ν 6 5 5 ， 8 1) . . 2 9 5 η II : ， 5 G Η .環1 I—> ; > II }m 4 5( 3 no I—> ， 3 ，H . 4 14 H , ， ， m ) H ( 1 1 2H > r-H > t · H ( 4 1oo ， ， 8 ) s . z b 3 H ( H lx m κ\ IX 2 4 3 H H 1 m 6 7 3 4 H ) r-H s)/ ， 4 d H ( m /{\ o 8

H 〇 ( -—- 1 . 3 5 · • · 4 H .環} ; z )H 5 6 H . > 3 H il 本紙張&度適用中國國家標準（CNSM1規格（2】ϋχ2^Γ^ •27- 1221156 A7 B7_ 五、發明說明έ5 ) m，lH，H2) ，4.54(m，lH，H3)， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 · 2 1 ( m，1 Η，Η 4 );間隔基·· 7 · 5 1 ， 7.53.7.13，7.12(4xd，4H，Ha … S I A B ) ，3.73(m，2H，CH2CH2NH2 )，3.66(m，12H，〇CH2 TEG)， 3.31 (m，2H，CH2NH2);肽：8.27， 8.22(2xs，lH，H“。m NAS)，7.98 —7.60(m，6H，Ha"m NAS)，7.71， 7.64，7.46，7.44 (4xd，4H，Ha"m A P A ) ，4.60，4.45(2xt，lH， a C Η APA，J aCH./scH=6 . 6 H z ) ，4 · 00 ，3.97(2xm，lH，aCH Cys)， 3.1〇一2.85(m，4H，CH2N 哌啶）， 2.82 — 2.70 (m，3H，冷 CH2 Cys ， /3 C H APA)，2.61(m，lH，/3CH/ APA)，1.55—1.15(m，6H，CH2 哌啶 )； 經濟部智慧財產局員工消費合作社印$衣 ES - MS: 〔Μ — H〕— 2680.6 使用類似方法製備下面化合物： -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A.I規格（2]〇χ297公t ) 1221156 五、發明說明[6 )

0 .oso3

經濟部智慧財產局員工消費合作社印奴

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A<1規格（210x297公f ) -29- A7

1221156 五、發明說明如) 並無不利影響。 技術 試劑* 1 · Tromethamine-NaCl ( TN )緩衝溶液 緩衝溶液的組成： 丁1*〇11^11181111116(丁1^) 6.057 克（50毫莫耳） NaCl 5.844 克（1〇〇 毫莫耳） 水至 1升 溶液的pH在37°C時用HC1 (1〇 mmol .I—1)調整至 7 .4。 2 · T N P緩衝溶液 聚乙二醇6 0 0 0溶於T N緩衝溶液中以得 到濃度爲3 g · 1 — 1 3·S-2238溶液 1玻璃瓶的S — 2238 (25毫克；Kabi Diagnostica，Sweden )被溶於 2 0 毫升的丁 N 緩衝溶液中以得到濃度爲1.25〇1§· ml-1 ( 2 m m ο 1 · 1 ' 1 )。 4·凝血酶溶液 人類凝血酶（16000 nKat · vial—1 ; C e n t r a a 1 Laboraatorium voor Bloedtransfusie, Amsterdam, The Netherlands )被溶於 T N P 緩衝溶液中以得到8 3 5 η K a t · m 1 1 母液。 ----------------- C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消費合作社印纪 本紙張尺/艾適川中國國家代準（CNS)A丨规格（21() χ 297公釐） -31 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1221156 Α7 Β7 五、發明說明鉍) 使用此溶液前立刻用丁 N P緩衝溶液稀釋以 得到濃度爲3 · 3 4 η K a t / m丨母、液。 * 使用的所有成分皆爲分析級 對水溶液而言，使用極純級的水（M丨1丨i _ Q quality ) 〇 製備測試及參考化合物溶液 測試及參考化合物被溶於Milli-Q水中以給與 l〇-2mo 1/1的母液濃度。每一濃度逐 步用輔劑稀釋以給與濃度爲1 〇 - 3 ,丨〇 - 4 ，1 0 - 5 m ο 1 / 1 。包括母液的稀釋液被 用於測試中（在反應混合物中最後濃度分別 爲·3·10 3 » 1 0 3 i 3 · 1 〇 ~ 4 ; 10 一 4;3·1〇-5;1〇 - 5; 3 · 10—6&l〇-6mo 1 / 1 - 1 ) 步驟 在室溫時，0 · 075毫升及0 · 025毫升 的測試化合物或參考化合物溶液或輔劑交替地 用吸管移至一微升盤的井中及這些溶液分別用 〇· 1 15毫升及0 · 0165毫升的ΤΝΡ 緩衝溶液稀釋。能整除的0 . 0 3 0毫升S -2 2 3 8溶液被加至每一井中及盤被預熱及預 培養，係在培養器（Amersham )中3 7 ΐ：震 動1 0分鐘。接著，S - 2 2 3 8的水解藉由 加入0 · 0 3 0毫升凝血酶溶液至每一井中而 -------------裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙张尺度通川中國因家忙芈（CNS)AOlUft (1Ί0 X 297公兌） -32- 1221156 Λ7 B7 五、發明說明如) 開始。盤在3 7 t時被培養（震動3 0秒）。 開始培養1分鐘後，每一樣品的吸收在4 0 5 n m每2分鐘測量一次，持續9 0分鐘，使用 動力微升盤讀數器（Twin reader plus，Floow laboratories )。 所有數據被收集在使用LOTUS-MEASURE 的I B Μ個人電腦。對每一化合物濃度（以在 m ο 1 / 1反應混合物表示）及空白組而言， 吸收對反應時間（分鐘）作圖。 反應的倍_算:對每一最後濃度而言，最大吸收是從試驗圖 中計算得到的。I C 5 〇値（最後濃度，以（β m ο 1 / 1 表示，引起空白組最大吸收的5 0 %抑制作用）依據 Hafner et al. ( Arzneim.-Forsch./Drug Res. 1977 2 7 ( I I ) : 1 8 7 1 - 3 )使用對數轉換式計算。 I----------------訂·-----1— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消f合作社印製 抗血栓活性： 實例 I C 5 〇 ( m ο 1 · 1 - 1 ) I (非對映體） 2 X 1 0 - 7 I I 8 X 1 0 ~ 6 III 3 . 5 X 1 0 " 7 本纸张尺度適用中國國家標準（CNS)A.】規格（2】0 X 297公釐） _ 33 - 1221156 A7 B7_ 五、發明說明$2 ) 液稀釋以得到濃度爲1 . 7 7 η K a t / m 1 。稀釋必須新鮮製備。 步驟 取代S - 2 2 3 8溶液（在抗凝血酶試驗） ，上面S — 2 2 2 2溶液被加至此試驗中的 每一井中。 II---------.0^------- 丨訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 抗-因子X a活性 實例 U / m g I I I 8 8 5 經濟部智慧財產局員工消費合作社印纪 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A.彳規格（2]〇χ297公釐） -35- 1221156 A7 B7 五、發明說明h )

OR 5

化學式單子 .|— 1 r4=r5=h pr 2 R4=R5=Ac 11 Lsr 3 r4=Ac, R5=H Ui L- 4 R4=Ac, R5=C-CC13

NH iv

.!:---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

NHR 5 1T--------- 經濟部智慧財產局員工消t合作社印製 本紙张尺度適用中國0家標準（CNS)Al规格（210x297公坌） ^ 36 - 1221156 Λ7 B7 五、發明說明u ) 化學式單子2

SRf R6HN

OH Ο I— 11 R6=l I, R7=MMTr ..12R6=NAS, R7=MMTr ”卜 13 R6=NAS，R7=H 14 R6=NAS, R7=SPyr 0 hcih2n

iv

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) IT---------0. 經濟部智慧时產局員工消费合作社印纪 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)Al规格（2]〇x297公釐） -37- 1221156 A7 B7 五、發明說明的） 化學式單子

NHR9 18R9=H 19 R9=BrAc

Q (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Ο

一5J·1111111» 經濟部智慧財產局員工消赀合作社印纪 本紙張尺度適用中Θ0家標準（CNSM.彳规格（2】0>^97公玆） -38- 1221156 Λ7 B7 五、發明說明έ6 ) 化學式單子4 η R110

Ο \/^SR10 Ο Λ. ο

匚 20Rlo=Ac, Rn=M 21 R10=SPyr, Rn=H 22 Rl()=SPyr，Rn=琥珀醯亞胺 NHBoc

I— 23R,0=Boc,Rn=H ’:"卜 24R 丨0=Boc，R 丨‘BS /VL^ 25 R10=H, Rn=BS

ΗΝ

_ 27 R,2=SPyr W/L 28R,2=H

Vlll n n ϋ n n ϋ «1 ϋ · n n n 1 I n n 一δ*· · — ϋ n n n ·ϋ n I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張反度適用屮國國家標準（CNS)A.l规格（210 X 297公釐） •39- 1221156 A7 B7 五、發明說明67 ) 化學式

so. .oso -〇 ^Xo oso， 3

34 och3 oso3·

Q (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 〇r。卜 經濟部智慧財產局員工消t合作社印¾

本紙m尺度適用中國國家標準（CNS)/VU兒格（2丨0>〇97公玆） -40- IT---------μύ.

Claims (1)

1221156

正充 修補 a 9 月2 • 4 9/i ABCD 六、申請專利範圍 附件3al第88 1 0993 1號專利申請案 中文申請專利範圍、無劃·線替換本. \ 民國93年4月29日修正 1 ·式（I )化合物 Z Q

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中R1爲苯基、萘基、1，2，3，4 一四氫萘基、 (、異）喧啉基、四氫（異）π奎啉基、3 ，4 一二氫一 JL Η . i -異喧啉基、色滿基或樟腦基團，其可能任意地被1'或多/ 個選自（1 一 8 C )烷基或（1 一 _8 C ).烷氧基之取代基 所取代； R 2及R 3分別爲Η或（1 一 8 C )烷基； R4爲（1 一 8C)烷基或（3 - 8C)環烷基； 或R 3及R 4 —起與其所鍵結的氮原子形成_啶； Q爲式（I I I ) -f(CH2)2〇]nr[(CH2)irNR^C(0)]^W-(CH2)s. (m)， 其中 W爲〔1，4—苯撐基-NR3-C(0)]q-(CH2)”S- 或 -(CH2),-S(CH2)u-[0(CH2)2]v-0-(CH2)w.C(0)-NR3s ------1J----- (請先閲-¾背面之注意事項再填寫本育) 本纸張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210X297公釐）

1221156 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 及R3獨立爲Η或（1 一 8C)烷基； — ; n=l - 8 ; p = 0 - 4 ·’ Q = 〇 或 ;r = l — 8 ; s = 1 - 8 ； t = 1 - 8 ; υ = 1 - 8 v==l~12 iw=l — ;原子總數爲1 0 — 7 及一〔（C Η 2 ) 2〇〕m —部分爲Q連結至Z的終端；及

O-0-8C)a]kyl (II)， 其中R5獨立爲〇SO 3 —或（1 其中脒基部分的胺基可被羥基或（1 保護； 或其藥學上可接受的鹽。 2 ·如申請專利範圍第1項之化合物，其中r 1爲苯基 8 C )烷氧基；及 6 C )烷氧基羰基 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、tT 4 一甲氧基一2 ，3 ，6 —三甲 或萘基；R 2爲Η 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 及N R 3 R 4爲哌啶基。 3 ·如申請專利範圍第1項之化合物，其中q選自 -[(CH2)：0]r(CH2)rNH^C(0>CHrS^CHr； ^〇ΗΑ〇〕Η〇Η2νΝΉΑ(〇ΚΗββΗ士[0(CH2)2]r〇-C)VC(〇)-NVHCH2)*r;及 ►[(CH2)20]r(CH2VNH-C(〇：M，4-苯撐基，KH-QOyCHrS-CHr 4 · 一種用於治療或預防血栓形成或與凝血素相關疾 病之醫藥組成物，包括如申請專利範圍第1項之化合物及 藥學上適合的輔劑。 ^紙張尺度適用中國國家襟準（CNS )八4規格（21〇χ297公楚） 2 1221156 ABCD 六、申請專利範圍 5 .如申請專利範圍第1項之化合物，係用於治療。 6 .如申請專利範圍第1項之化合物，係作爲治療或 預防血栓形成或與凝血素相關疾病的藥物。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210乂29<7公釐）