TW555558B - Freeze-dried composition containing glycosphingolipid and process for producing the same - Google Patents

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1 五、發明説明（ 技術範疇 本1明係_於一種含有神經鞘糖脂質之冷;東乾燥組合物 及其製法，更詳細而言，係關於將原本對水為低溶解性或 難4 f生之神經鞘糖脂質，在提昇其對水溶解性之後，形成 <神經鞘糖脂質之冷凍乾燥組合物。 背景技術 =-神經鞘糖脂質由於在身體中呈現種種有用之生理活性 ，可用來做為抗腫瘤劑、免疫活化劑、骨髓細胞增殖促進 劑等多種醫藥。 斤神經鞘糖脂質中，糖部份為單糖類所構成之神經鞘糖脂 ί尺多為低4解性或難溶性。為將此種神經鞘糖脂質之 =解性提高，雖有種種方法被檢討過，但能稍令人滿意之 /合解丨生卻仍未得到，又即使能—度溶解，也在保存期間產 生析出物，因而有所謂溶解性隨時間經過而降低之問題。 發明之揭示 本發明鑑於上述之情況，乃以提供一種糖部份為單糖類 構成之低落解性或難溶性神經鞘糖脂質，即使在長期保存 後也能維持高度再溶解性之冷凍乾燥組合物為目的。 t發明人等發現將具有糖部份為單糖類之α_葡萄糖結合 構造而對水溶解性低之神經鞘糖脂質（α _糖基醯基鞘胺醇Κ a -giyc〇Syiceramide)與聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯及蔗 糖（白糖）、甘露醇或葡萄糖摻合，或更進而與去氧膽酸鈉或 組胺酸摻合，並溶解於溶劑後冷凍乾燥時，即使長期保存 後再溶解性也極高，基於此種發現而完成本發明。

亦即，本發明係關於含有以 分之〇: 醯基㈣醇^1結構（A)所示做為活性成 酸酉旨及Μ(白糖露醇或聚氧化山梨糖醇奸脂肪 酸鋼或組胺酸之冷;東乾燥組合物。糖’或更進而含有去氧膽

[式中之1^9及X各為下列所述特定基及特定範圍之整數。] 再者纟發明亦係關於該冷;東乾燥組合物之製法，其特 徵為將上逑組合物之摻合成分加溫後在水性溶劑中溶解， 繼而於冷卻後進行冷凍乾燥工程。 逼式之簡單i»明 圖1為本發明使用之α _糖基醯基鞘胺醇之代表例 (KRN7000)之合成反應路徑說明圖。 該反應路徑中，pyr係指柔啶、Brpph3(CH2)12CH^j 十二坑基二苯鳞溴化物、η - B u L i係指正丁基Ιι、μ s C 1係 指甲磺醯氯、BnBr係指溴化芊基、1 - ρΓ〇Η係指丙醇。 圖2為繼續圖1之合成反應路徑說明圖。 該反應路徑中，WSC-HC1為1-乙基-3-(3，-二甲胺丙基 )-碳化二亞胺·鹽酸鹽、MS4A為分子篩4A、Hex4NBr為 四己基錄溴化物。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 555558 A7 ------- B7 五、發明説明（3 ) 貫施本發明之最佳形態 [式（A)所示之化合物] 本發明組合物中所使用之化合物，如上述為具有式（A)所 示α -半乳糖基醯基鞘胺醇（a - galactoceramide)構造之 化合物，而上述式（A)中之X及尺广!^為如下文所定義者。 [式中，1^為11或0H ; X為7^25中之任一整數； R2為下列（a)〜（e)所定義之取代基中之任一者（此處，γ為 5〜17中之任一整數）·· U) - CH2(CH2)YCH3， (b) - CH(OH)(CH2)YCH3， (c) - CH(〇H)(CH2)YCH(CH3)2， (d) - CH = CH(CH2)YCH3 ,及 (e) - CH(OH)(CH2)YCH(CH3) CH2CH3 ; R3及R4之任一者為H，且另一者為H、OH、NH24 NHCOCH3 ; 115及116之任一者為H，且另一者為OH ; 117及118之任一者為Η，且另一者為〇H ; R9 為 Η、CH3 或 CH2OH]。 上述化合物之較佳形態如下式（A，）所示之α -葡萄糖基醯 基鞘胺醇（ α-glucosylceramide) 〇 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公着) 5^5558 A7 B7 五、發明説明（4 )

F?1 OH (C l·^) x—C H3 [式中，Ri、R2及X與上述定義相同， R3〜R9為下述i)〜v)所定義之取代基： i) R3、116及118為11 時 114為11、0H、NH2*NHCOCH3 ; 115為011 ; 117為011 ; 119為^[、CH3 或 CH2OH ; ii) R3、R6 及R7 為 Η 時 114為11、OH、NH2*NHCOCH3 ; R^OH ; RAOH ; 119為11、CH3 或 CH2OH ; iii) R4、R6及R7為 H 時 R3 為 H、OH、NH2*NHCOCH3 ; R^OH ; RAOH ; R9為H、CH34CH2OH ; iv) R4、115及117為11 時 、紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 555558 A7

R3、R6 及 118為 OH ; R9 為 Η、CH3 或 CH2OH ; v)R3、115及117為11時 R4、R6 及 118為011 ; R9為 Η、CH3 或 CH2〇H]。 本發明中所使用之較佳α •糖基醯基鞘胺醇，如式之 糖部分中R3、R^R8表示η，r4、R^R7表示OH，心表 示CH2〇H之化合物，又醯基鞘胺醇（ceramide)部份中， R2表π具有OH取代基之（b)、（C)或（e)，特別為（b)之化合 物。上述之較佳化合物中，驢基鞘胺醇部份以r 1表示Η , I表示（b)為更佳。更且，醯基鞘胺醇部份之烷基中，亞甲 基之數目X以11〜25之整數為較佳，而以21〜25為更佳； R2基中之Y以9〜17之整數為較佳，而以η〜15為更佳。 本發明所用之α -葡萄糖基醯基鞘胺醇中，（2S、3S、 4 R) -1 - ( a - D -吡喃型半乳糖氧）_ 2 -廿六醯胺基-3，4 -十八燒 二醇為特佳之化合物，此種化合物以下稱為Krn7〇〇〇(其 構造式請參閱圖2)。 、 式（A)所示之化合物，可能為酸加成鹽類。本發明所使用 之化合物也包含該鹽類。 、硝酸、 、油酸、 、毅胺酸 可形成鹽類之酸，例如無機酸，如鹽酸、硫酸 磷酸等，或有機酸，如醋酸、丙酸、順丁烯二酸 棕櫚酸、擰檬酸、琥珀酸、酒石酸、反丁晞二酸 、泛酸、月桂磺酸、甲磺酸及酞酸等。 再者，酸加成鹽類用做醫藥之場合，不用說當然必須θ -9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 555558 五、發明説明（6 ) 醫藥上容許使用者。 本發明所使用之活性成分化合物，可使用符合合成α •糖 醯基鞘胺醇之目的之任何方法製造。 上述α -糖 醯基鞘胺醇化合物，在WO93/5055號、 109 4/2 1 68號及冒094/9020號等各公報中皆記載有合成 方法，可以依照此合成方法製備。再者，關於較佳之合成 方法，下文所述之實施例例示化合物KRN7000之合成方法 X即以D -來蘇糖為開始物質合成醯基销胺醇部分，然 後將為糖部分之半乳糖連接至此醯基鞘胺醇部分上（詳細情 形請參閱後述實施例及圖丨〜2),依照此方法可可合成目標 化合物。再者，關於α -糖醯基鞘胺醇之一般合成方法可 參考如 J· Med.Chem·，38，2 1 76( 1 995)。 [冷凍乾燥組合物及其製法] 依據本發明之冷凍乾燥組合物，可用在以水、緩衝液等 水性媒體為溶劑之注射用及細胞醫療用培養基之用途。 人本發明組合物所用做為活性成分之α-糖醯基鞘胺醇化 口物具有種種生理活性，因而本發明組合物可用來做為 杬腫瘤劑、免疫活化劑（參考w〇93/5〇55號公報）、骨髓細 胞增=促進劑（參考特開昭W094/2 1 68號公報）、自體免疫 疾病冶療劑、及末梢血管細胞增加劑等注射用（包含點滴用 醫藥。 ，再者據本發明之冷;東乾燥組合物可做為細胞醫療用 ，例如在將抗原提示細胞或癌細胞等體外培養，並於活性 再返回身祖内進行抗原提示細胞療法（Yamaguchi，Y· 555558 五、發明説明（7 et al·’ 〇nc〇i· Res，8，3 99( 1 997))或腫瘤療法等時，做 為細胞之大容量懸浮液或培養媒體。 依據本發明之冷凍乾燥組合物，為上述之α _葡萄糖基醯 基稍胺醇或其鹽類與聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯及雙糖或 單糖（包含併用二者）摻合而成者，冷凍乾燥後及長期保存後 對水溶解性甚優。再者，在上述摻合物中，藉著再摻合去 氧膽酸鈉或組胺酸（包含併用），可在長期保存後進一步提高 再溶解性。 聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯，如吐溫（p〇lys〇rbate)2(3 、吐溫40、吐溫60、吐溫8〇，而以吐溫為2〇較佳。其摻合 量為相對於1重量份活性化合物，較佳摻合1〇〜1〇〇〇重量份 ，而以20〜1〇〇為更佳。雙糖者有蔗糖、乳糖、麥芽糖等， 而以蔗糖為特佳，又單糖者有葡萄糖、果糖、木糖醇、山 梨醇、甘露醇等，而以葡萄糖及甘露醇為特佳。這些糖之 摻合量（併用場合以總量計），相對於丨重量份活性化合物， 較佳摻合100〜1 0000重量份，而以200〜2000重量份為更 佳。又去氧膽酸鈉及組胺酸之摻合量（併用場合以總量計）以 10〜1 000重量份較佳，而以20〜4〇〇重量份為更佳。 Θ有關摻合成分，除i述基本成分之外，按照、需要也可適 量地加入溶解補助劑（例如聚氧化乙烯硬化蓖麻子油60)、 緩衝劑（例如磷酸）、等張劑（例如氯化鈉）、止痛劑（例如苯 甲醇）等添加劑。 於製造本發明之冷凍乾燥组合物方面，基本上係將上述 各摻合成分在適當溶劑（例如蒸餾水等）中加熱混合攪拌，2 11 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 555558 五、發明説明（8 ) 其溶解後，進行冷卻冷凌乾燥。#即，依據本發明， 乾燥組合物製法之特徵係將上述各摻合成分加溫後在：性 溶劑中溶解，冷卻之後，再予以進行冷滚乾燥之工程。 水性溶劑有蒸餾水、生理食鹽水、緩衝溶液等。 在上述製法中，摻合成分在溶劑中通常於65〜9〇。〔〕（而以 70〜85 C較佳）加溫溶解。若加溫溫度過高，摻合成分的保 存性會降低，過低則成分溶解困難。所得到的溶液通常以 每分鐘0.5°C〜l.(TC以上之降溫速度冷卻，而以每分鐘玉$ °c以上為較佳，又以每分鐘2_0t以上為更佳，最佳則是每 刀！里4 · G C以上之急速冷卻。落液之冷卻通常使用悝溫循環 裝置冷卻至溫度為50〜40t以下，最好為2〇〜3〇它之程度 ，隨後將溶液在過濾器過濾後進行冷凍乾燥工程。藉著= 時間之冷卻，使長期保存後之再溶解性更安定。 東乾燥1程’依照通常之方法，雖可使用钱或小瓶 等谷咨及冷凍乾燥裝置來進行，但以冷凍溫度為_2〇它以下 、真2度為〇 · 1托以下之條件進行為較佳。 以上述方法製造之本發明組合物，在注射用途中使用時 在適I之/主射用溶劑（通常為蒸餘水、生理食鹽水等）中再 溶解（通常α_糖基醯基鞘胺醇之濃度為〇1〜1〇〇〇#g/ mi) ’以做為注射藥劑投與人體。 本發明組合物可經合乎目的之任何投與途徑投與，具體 而言，在動物之場合，可採用腹腔内投與、皮下投與、靜 脈或動脈之血管内投與、局部投與等方法，而在人之場合 ，可採用靜脈内投與、動脈内投與、局部投與、經腹腔或 -12- 紙張尺度適财關雜準(CNS) A4規格⑽χ 297公董) 555558 五、發明説明（9 ) 胸腔投與、皮下投與、肌肉内投與等投 本發明之組合物供注射用之投與量，视：個狀 地或間歇地投與後且總投與量不超過規定之 ，投：量、不用說按照投與方法、患者等之狀況，例：； 齡、植重、性別、感受性、食物（食斜）投與時間、併用之藥 物、患者或其病情程度而變化 i各 夂1G再者在一疋條件下之適杏 量及投與次數，必須以上述指南為基礎，依據專門醫學之 適量決钱驗來決t使本發明組合物中有效成分之活性 出現之必要投與量’例如在靜脈内投與之場合，成人平均 一日劑量為約0.0 0 1〜1 〇 m g。 再者在非供注射之用途中，例如抗原提示細胞療法、腫 瘤療法等，以水性媒體（蒸餾水·、生理食鹽水、緩衝溶液等） 為落劑之培養基中，將本發明組合物再溶解，在此種溶液 中，抗原提示細胞（例如樹狀細胞等）或意圖使免疫原性增強 之細胞（例如腫瘤細胞等）經培養後，該細胞與本發明之組合 物在體外接觸’使仔其抗原提示活性或免疫原性增強。例 如在細胞培養基中，添加本發明之組合物並使α -糖基醯基 鞘胺醇之最終濃度為0·1〜1〇〇〇〇 ng/ml (以10〜1000 ng/ml為較佳），該細胞經12小時〜14日之培養，可使得細 胞之抗原提示活性或免疫原性增強。抗原提示活性或免疫 原性增高之細胞，根據一般方法，可以用注射劑、懸浮劑 、乳化劑等之形態，經由各種一般投與途徑（靜脈、動脈、 皮下投與等）進行投與。 實施例 -13- \張尺度通用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 裝 訂 線 555558 A7 B7 五、發明説明（10 ) 以下雖以本發明之實施例為示範，然而本發明之範圍並 不為其所限。 本發明之冷凍乾燥組合物所用做為活性成分之α -葡萄糖 基醯基鞘胺醇具有如前述之抗腫瘤活性、免疫活化活性、 骨髓細胞增殖促進活性或抗原提示活性增強作用等種種生 理活性。 [化合物之製造例] G -糖基醯基鞘胺醇之製造例 以下所示為α _糖基醯基鞘胺醇代表例KRN7000之合成 例（請參閱圖1及2 )。 (1)化合物G 1之合成 在D -來蘇糖（2 0 0 g，1 · 3 3莫耳）溶於經氯化鈣乾燥之丙 酉同之溶液（3.0 L)中，加入硫酸（0 · 5 m L)，在室溫攪拌1 8 小時。加入分子篩4 A之粉末（1 0 0 g )，反應中和後，以碎 藻土過濾，殘渣以丙酮洗淨。濾液及洗液合併後進行減壓 濃縮，可得到G 1之粗生成物。產量為2 4 0 g (9 5 %)。以上 產物不需精製，直接用於下一步驟。分析用樣本以己院： 丙酮（9 : 1)為溶出溶劑，而用矽凝膠層析法精製。 mp76^78°C;FDMS m/z 1 9 X (M+X) ^; 1 H-Nmr (5 0 0MHz, CDC13) c55. 45 (1H. d, j=1· 8Hz), 4. 83 (1H, dd，J = 3. 7, 5. 5HZ)，4. 64 (1H, d,’= 6. 1Hz), 4. 27-4, 30 (1H, m), 3, My· 99 (2h, m) , 1·. 48 (3H, s) , 1. 3 2, (3H, s)。 ’ -14· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公爱) 555558

(2) 化合物G2之合成 化合物G 1 (23 9 g，約1 ·2 6亳莫耳）之-备田、 夭吁X 一虱甲烷溶液（1 ό 8 mi)中，加入啶（lOmi)、氯化三苯甲基（39〇§),在32 °C揽拌4小時。滴人乙醇（8 ml)，在室溫下攪拌2小時。以 飽和氯化銨水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、食鹽水洗淨後 ，進行減壓濃縮。將殘渣溶解於醋酸乙酯中，冷卻至〇它以 進行結晶化。產量為501 g (相對於D-來蘇糖之產率為 8 7%) 〇 mP174 - imFDMS m/2 4 3 2M 十；1H — nmr(5〇| OMHz, CDC13) 2 1-7. 4 9 (15H, m) , 5. 3 8 (ΙΗ,ΐ d. J =2. 4Hz)，4. 75 (1H，d d，J = 3. 7> 6· 1Hz) : 4· 5 9 (1H, d, J = 6. 1Hz), 4· 31 — 4· 35 Qh m) 3· 43 (1H, dd，J=4. 9，9· 8Hz), 3· 39 (1H, dd, J = 6. 7，9· 8Hz), 1· 29 (3H, s), l· 28 (3H, s)。 (3) 化合物G3之合成 在十三垸基三苯鳞溴化物（962 g，莫耳；將丨_澳十 二烷、二苯膦在1 4 0 °C加熱4 · 5小時調製而得）之T H F溶液 ( 1 5 00 ml)中，氬之氛圍氣下，將正丁基鋰之2 $ M己烷溶 液（462 ml ; 3 66亳莫耳）在〇t：滴入。滴入終了後，攪摔 15分鐘，繼而滴入化合物G2(250 g，5 79毫莫耳）之thf 溶液（45 0 ml)。慢慢將溫度升到室溫，同時攪拌18小時。 將反應液減壓濃縮，殘渣中加入己燒：甲醇：水（1 〇 : 7 3 ，1 000 ml)之混合液，以飽和氯化銨水溶液洗淨。水層以 己燒（5 00 ml)萃取，將全部有機層合併，以無水硫酸鎂乾 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNs) A4規格(210X 297公釐) 555558 A7 B7 五、發明説明（12 ) 燥後，減壓濃縮’得到G 3之粗生成物。以上產物不需精製 ，直接用於下一步驟。產量為3 3 9 g(9 8%)。分析用樣本以 己燒：醋酸乙酯（9 : 1)為溶出溶劑’而用梦凝膠層析法精 製。 FDMS m/z 5 9 8M+ ； 1H~NMR (500 MHz, CDC1 ) (57. 21-7. 45 (1 5 H, m) , 5，4 8 - 5· 5 9 (2 H, m) · 4 91 (◦· 7H, t, J=7. 3Hz), 4· 44 (0· 3 H, t, J = 7· 3

Hz), 4· 26 (0· 3Hf dd，J=4· 3, 7· 3Hz), 4· 21 (〇 7H· dd, J = 4· 3, 6· 7Hz)，3· 75 (0· 7H, m), 3. 69 (0 · 3 in) , 3. 24(0，3H· dd, J=4* 9, 9 8Hz) 3

1 7 (0· 7 H, d d, J = 4· 9, 9, 8 H z) , 3. 〇 9 一 3 14 [1H (3. 11，d d? J = 4. 9，9. 2Hz), HI b；重疊：]χ ? 5-2. 03(2 Hfm), i. 49(3 H, s), 1. 39andl 38 (3H, ·各s )，1. 21—.1· 34(20H, m), 〇. 8 8 (3 H, t, J =6. THz) 〇 (4)化合物G4之合成 在化合物G3 (3 3 8 g ’約5 6 5毫莫耳）之二氣甲烷溶液 (1500 ml)中，加入吡啶（500 ml)，滴入甲續酿氯（49 μ ，63 3毫莫耳），在31°C攪拌24小時。滴入乙醇（4〇 mi)m 在室溫下攪拌1小時。減壓濃縮後，在殘渣中Λ1 、 且τ刀口入己:甲 -16- --— 本紙張尺度適用中國囷家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 555558 A7 B7 五、發明説明（l3 ) 醇：水（1 0 : 7 : 3，1 0 0 0 m 1)之混合液，並分離水層及有 機層。水層以己烷（200 ml)萃取3回，合併全部有機層，以 無水硫酸鑊乾燥後，減壓濃縮，得到G 4之粗生成物。以上 產物不需精製，直接用於下一步騾。產量為363 g(95%)。 分析用樣本以己烷：醋酸乙酯（9 : 1)為溶出溶劑，而用矽 凝膠層析法精製。 FDMS m/z 6-76M1 ; 1 H-NMR (5 0 0 ΜΗ z, CDClg) δ T, 21 - Ί· 4 7 C1 5 H, m) , 5. 4 1 CO, 7 Hf d d d, J = 5, 5, 9. 2，11，〇Hz), 5· 32 (0. 7H，bt, J=ll· 0Hz), 5. 22 (0· 3H，b.dd, J = 9，2, 15. 〇Hz), 5. 02 (0· 3 丨 H，dt，3Hz, Jd =1 5. 0Hz) , 4. 8 (0, 7H, d d ! d, J = 3· 1, 5· 5, 7. 9 H z) , 4· 7 3 (〇· 7 H, d d, J = 5. 5, 9· 8Hz), 4· 64 - 4· 67 (0. 3H, m) , 4. 6 1 (0· 3H, d d, J = 5. 5, 9· 2Hz) · 4· 4 8 (0· 7H，d d, J = 5· 7· 9Hz), 4. 22(0, 3H, d d, J = 5. 5,9. 2Hz)· 3. 5 5.; (0· 3H, d d, J -2. 4，11· 6Hz) , 3. 4 5 (0. 7H, d d, J;3· 2. 11· OH z) , 3. 0 6-3. 12 [4H. (3. 12，s), (3_ 1 1， s) , (3/ 0 9， d d· J = 3· 1· 1 l. ,〇 Hz) ] ， 1· 6 6-1. 82 (2H, m), 1. 4 7 a n d 1, 4 6 (3 H,各 s ·)， 1. 39 (3H, s) , 1· 1 3-1. 3 5 (2 〇Hf m) . 0, 88 (3H, t, J = 6. 8 H z) 〇 (5 )化合物G 5之合成 在化合物G 4 (3 6 2 g，約5 3 6毫莫耳）之二氯甲烷溶液 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) """""

裝 訂

555558 A7 _____B7_ 五、發明説明（Μ ) (1500 ml)中，加入甲醇（350 ml)、並滴入濃鹽酸（2〇〇 ml)，在室溫下攪拌5小時。反應液中，加入碳酸氫鈉中和 後’進行過濾。濾液經減壓濃縮，殘渣中加入醋酸乙酯， 再以食鹽水洗淨。水層以醋酸乙酿萃取，合併全部有機層 ，以無水硫酸鎂乾燥後，進行減壓濃縮。再以己烷結晶化 。產量為16 1 g (相對於G2之產率為70%)。 mp 6 6-6 7PC ; FDMS m/z 3 7 7 (Μ-Η 2 Ο) + ; 1 H-NM R (5 0 0MHz, CDCi 3+D2〇) (?5· 8 6 (0· 3Η, d t, Jt 7· 3Hz, Jd -=14. 7Hz) , 5· 7 7 (0· 7H, d t, J =7. 3

V

Jd=10· 4Hz), 5· 55 (0· 3H，br. d.d，J=7· 3, 14. 7Hz), 5. 49 (0. 7H, b t, J = 9. 8Hz), 4· 9 1-4. 9 7 (1H, m), 4, 51 (0· 7H, b t, J = 9. 8Hz), 4· 11 (〇· 3H, bt，J =7. 3Hz), 3. 9 4-4. 0 3 (2 H, m) , 3. 67-3. 7 3 [1 H, (3· 7 0, d d, J = 3· 1，6·. 7 H 2:) , (3, 69， dd，J = 3· 1· 7· 3Hz) ] ,3, 20and3· 19 (3H,各二 s)，2· 0 5 — 2. 2 2 (2 H, m) f 1· 22 -1· 4 3 (2 0 H, m), 〇. 88 (3H. t, J =6· 7Hz)。 (6)化合物G6之合成 在化合物G5(160 g，約405毫莫耳）之thF溶液（780 m 1)中，加入5 %鈀-硫酸鋇（1 6 g)’並將反應容器以氫氣置 換後，在室溫下攪拌2 0小時。反應液以矽藻土進行過滤， 再以氯仿：甲醇（1 : 1)混合液洗淨。將濾液與洗液合併， 進行減壓濃縮。殘渣以醋酸乙酯結晶化。產量為丨4 6 g -18- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 555558 A7 —_B7 五、發明説明（I5 ) (9 1% ) 〇

[a] 23D + 1 2° (cl, CHC 1 g/MeOH-l : 1) ;mpl24-1 2 6cC ; FDMS m/z 3 9 7 (M+1) + ; 1 H-NMR (5 0 OMH ^ · l z, CDC 1 g/CD3〇D = l ： 1) 6 4. 9 3-4. 9·β (1H. m, H2) ,3. 91 (1H，dd, J = 6. 7, 12· 2Hz)、，3. 8 5 (1H, d d, ) = 4, 9，12，2Hz), 3, 54 — 3· 60 (1H, m), 3· 50(1 H, dd, J=l.,8, 8· 5Hz), 3· 19 (3H, s)，1· 75 -1· 8 3 (1H, m) f L 5 3- 1. 6 2 (1 H, m), 1, 21 -1· 45 (2 4H, m) , 0· 8 9 (3H，t, J = 6· 7Hz)。 (7)化合物G7之合成 在化合物G6(145 g，3 65毫莫耳）之DMF溶液（looo ml)中，加入疊氮化鈉（47 g，73 0毫莫耳），在95 °C攪掉4 小時。將反應液濃縮後，在殘渣中加入醋酸乙酯（4 5 0 ml) ’並用水洗。水層以醋酸乙酯再度萃取。合併全部有機層 ，以食鹽水洗淨後，以無水硫酸鎂乾燥，再減壓濃縮，得 到G7之粗生成物。產量為122 g(97%)。以上產物不需精 製，直接用於下一步騾。產量為1 2 6 g (9 5 %)。分析用樣本 以己燒：醋酸乙酯（9 : 1)為溶出溶劑，而用♦凝膠層析法 精製。 ία]· d + 16. 5° (c〇, 5, CHCl3-Me〇H, 1:1) ;mp 92-93°C; FDMS m/z 3 4 4 (M+ 1) + ; —(5 〇 〇 MHz, CD3〇D) J3. 91 (1H, d d, J = 3. 7, ! l, 6Hz), 3· 75 (1H, dd，J;7· 9, 11· 6Hz), 3· 49 一 3· 6丄（3 1· 50 -1· 71 (2H, m)· 1· 22 — 1· 4 6 (2 4H, m) ，〇· 90 (3Hr t, J = G，7 H z) 〇 -19- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) -----

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(8) 化合物G8之合成 在化合物G 7 (1 2 1 g ’約3 5 2毫莫耳）之二氣甲烷溶液 (750 ml)中，加入吡啶（250 ml)、氯化三苯甲基（i24 g， 4 4 5毫莫耳），在室溫攪拌1 6小時。滴入乙醇（3 〇 m丨），在 ▲溫下攪:拌3 0分鐘後’以飽和碳酸氫鋼水溶液、飽和氯化 銨水溶液、食鹽水洗淨後，以無水硫酸鎂乾燥，再減壓濃 縮。殘渣以己烷：醋酸乙酯（1 〇 : 1)為溶出溶劑，而用碎凝 膠層析法精製。產量為34.4 g(相對於G6之產率為52%)。 [a”D+ll· 9。（cO· 9, CHCi3), FDMS m/z 58 5M+ ； XH-NMR (5 0 0MHz, CDC 1 3+D2〇) δΊ. 24-7· 61 (15 H，m), 3· 62 - 3，66 (2.H，m), 3· 51 - 3· 57 (2 H, m) , 3. 4 2 (1 Η» d d, J — 6. 0, 10. 4Hz), 1. 23 -1· 5 6 (2 6H, m), 0. 88 (3H, t，J=6, 7Hz)0 (9) 化合物G9之合成 在化合物G8(33.5 g，57.3毫莫耳）之DMF溶液（300 ml)中，加入60%氫化鈉（5.5 g，NaH約138毫莫耳），在 室溫攪捽4 0分鐘。反應液在〇 °C冷卻，並滴入溴化节（i 5 ml，120毫莫耳）。慢慢升溫回到室溫，同時攪拌18小時。 反應液中加入冰水（1 0 0 m 1 )，反應停止後以醋酸乙酯萃取 。萃取液以食鹽水清洗三次，合併全部的有機層，以無水 硫酸鎂乾燥，再減壓濃縮，得到G 9之粗生成物。以上產物 不需精製，直接用於下一步驟。產量為42.2 g(9 6%)。分 析用樣本以己烷：醋酸乙酯（1 00 : 1)為溶出溶劑，而用碎 -20- 本紙張尺度通用中國國家橾準(CNS) A4規格(210X 297公釐)

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線 555558 A7 ----- —_______B7 _ 五、發明説明（I7 ) 凝膠層析法精製。 C^]24d + 9- 8° (cl, 〇, CHC13), FDMS m/τ 738 (M-N2) + ; 1H-NMR (500MHz, CDClg) δΐ. 07~7, 4 8 (2 5H, m) , 4. 5 7 (1H； d, J = 1 1. 6 H z) , 4· 4 4 (1 H，d，J = 1 1· 6Hz)，4· 4 ! (2H，s), 3· 7 3-3. 7 9 (1 H，m)，3· 4 6 — 3· 5 6 (2H, m) , 3. 3 7 (1H，dd,. Ji=8. 6，10. 4Hz)，1· 2 0- 1, 6 4 (2 6H，m) , 〇· 8 8 (3H，t, J =6. 7Hz) 〇 (10)化合物G10及Gil之合成 在化合物G9(4 1.2 g，約54毫莫耳）之i-丙醇溶液（25〇 ml)中，加入甲醇（3〇 ml)、更進而加入5%鈀-碳（41 g)、 乙酸銨（27.1 g，4·3莫耳）。b室溫攪拌16小時後，以乙 酸乙酯稀釋，以矽藻土過濾。將濾液減壓濃縮，以醋酸乙 酯溶解後，再以飽和碳酸氫鈉水溶液、食鹽水洗淨三回。 全部的有機層合併，以無水硫酸鎂乾燥後，再減壓濃縮， 得到G10之粗生成物。收量38·9 g(98%)。以上產物不需 精製，即用於下一工程。 化合物G10之二氣甲烷溶液（3 00 ml)中，加入廿六烷酸 (22.4 g，56.5 毫莫耳）、WSC 酸鹽（12 6 g，M 6 毫莫 耳），加熱回流2小時。冷卻到室溫後’減壓濃縮。殘渣中 加入醋酸已酯（500 ml)，並用〇.5M鹽酸水溶液、食鹽水、 飽和碳酸氫勤水溶液、食鹽水依次洗淨。合併全部^機層 ’以拱水硫酸鎂乾燥後，再減壓濃縮，得到G 1 1之粗生成 -21- 本紙張尺度適用中國S豕標準(CNS) A4規格(210X297公Θ ------

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555558 A7 B7 五、發明説明（is ) 物。產量為53.2 g(88%)。以上產物不需精製，直接用於 下一步驟。分析用樣本以己烷：醋酸乙酯（丨〇 〇 :丨）為溶出 溶劑，而用碎凝膠層析法精製。 [a] 24d+5. 3。(c 0. 4，CHC1 3) ； FDMS m/z 111 8M+ ; ^-H-NMR (5 0 0MHz, CDC1 3) c?7. 2 0 一了· 3 8 (2 5H, m) , 5· 5 了（1H, d, J =9· 1Hz)，4. 8 0 (1Η· d, J = 11, 6 H z) , 4，4 8 -4. 50 (3 H, m), 4. 24 - 4，32(1 H, m) , 3, 8 3 (1H, dd, J-3, 0； 6. 7Hz) , 3, 4 3-3. 51 (2H, m, HI a) , 3· 29 (1H, d d, J=4，3，9. 8Hz), I, 9 2 (2 H, t，J=7, 3Hz), 1. 28 — 1* 60 (72 H, m), 0· 8 8 (6H, t, J=6. 7 Hz) 〇 (1 1)化合物G 1 2之合成 在化合物Gll(52.2 g，約47毫莫耳）之二氯甲烷溶液 (1 8 0 m 1)中，加入甲醇（3 6 m 1)，繼而滴入1 〇 〇/〇鹽酸甲醇 溶液（3.0 ml)，在室溫下攪拌2小時。反應液以碳酸氫鈉 (18克）中和後，進行矽藻土過濾。殘渣以二氣甲烷洗淨。 濾液與洗液合併，再以食鹽水洗淨，有機層以無水硫酸鎂 乾燥後，進行減壓濃縮。殘渣在丙酮中加熱溶解，冷卻至〇 C以沉澱化而精製。產量為38.6 g (相對於〇9之產率為 77%) 〇 W2V29· 7。（c〇, 7, CHC13) ;mp75_76· %

FipMS m/z 8 7 6M+ ; — NMR C5〇〇MHz, CDC 1 )5 7· 30 - 7· 47 (10H, m), 6. 03 (1H, d· Jy. 9Hz), -22-

555558 A7 B7 五、發明説明（i9 )

4· 72 (1H，d，卜 ι1α 6Ηζ),.4· 66 (1H, d. J = ll· 6 Hz)1, 4· 61 (1H, d，J = ii, 6Hz), 4· 45 (1H, d· J = 11· 6Hz), 4· 12 — 4. 17 (1H· m), 4, 00 (1H, dtL

Jt = 4. 3, Jd =7. 3 Hz) , 3. 6 7-3. 7 2 *(2H, m) , 3. 6 1 (1H, ddd, J=4· 3, s/6, 11· 6Hz),、1· 94 一 2· 05 (2H，m), 1· 1 5-1· 69 (72H, m) , 0, 88 (6H, t, J = 6. 1Hz)。 (1 2)化合物G 1 3之合成 1) 將2,3,4,6-四半乳糖吡喃糖基醋酸酯（79.8 g)在甲苯（160 ml)及異丙醚（52〇 mi)之混合液中溶解後， 於-10〜0°C冷卻。於其中，加入含有2·〇當量HBr之異丙醚 溶液（2.8毫莫耳/ml，約100以）。在-ίο〜〇。(：攪拌約9〇 分鐘後，在反應液中注入5 %碳酸氫鈉水溶液，攪拌以將過 剩<HB r中和。將全量移往分液漏斗分液後，將水層廢棄 ’再以1 0 %氯化鈉水溶液洗淨二次。減壓濃縮後得到 2,3，4,6 -四-〇-苄-a _D -吡喃型半乳糖基溴化物（GaiBr)之 漿液。 2) 在化合物G12(60.0 g，68.6亳莫耳）、四己基銨溴化 物（89.4g，2 06毫莫耳）、分子篩4a(60 g)之甲苯溶液（ 420 ml)中，加入 DMF(140 ml)，繼而加入 GalBr(約 137 毫莫耳）之甲苯（250 ml)溶液，b室溫攪拌72小時。在反 應液中加入甲醇（1 2 m 1 )，攪拌2小時。以矽藻土過濾後， 再經飽和碳酸氫鈉水溶液、食鹽水洗淨後，以無水硫酸鎂 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 555558 A7 -------^B7 五、發5説明（20—) 〜" —------ 乾燥，再減壓濃縮。在殘渣中加入乙赌，檀拌2小時以產生 沉毅。所得到之沉澱物經減壓乾燥，得到乾燥粉體。將其 以己燒：醋酸乙酿（8:1)為溶出落劑’而用碎凝膠層析法 精製。產量為70.9 g(74%)。

Ca]24D + 18< 8〇 (c〇. 9> CHcis) ;mp?4_75〇c；FD MS m/z 1 3 9 9 (M+l)+ ； 1 H-NMR (5 〇 〇 ΜΗ z, CDC1 3) (57· 2 1 — 7, 3 7 (3 0H，m)，6· 12 (1H, d, J = 9· 〇h 〇，4· 9 1 (1H，d，J = ll. 6Hz)，4. 84 (1H, d· j = 3· ?Hz), 4, 72^4. 80 (4H, m) , 4. 35^4. 65 (7¾ m). 4· 12 - 4. 18 (1H, m)，3，99 — 4· 05 (2H, m), 3· 84 —3· 93 (4H，m), 3· 73 (1H· dd, J=3, 7, 11· qhz)· 3· 47 - 3· 51 (2H, m), 3· 42 (1H, dd· J=6· 1, 9· 1 Hz), 1. 87 -1- 99 (2H，in) , l: 18 -1. 了〇 (72H, m), 0· 8 8 (6H，t，J =7. 4Hz)。 (1 3)化合物KRN7 000之合成· 將化合物G1 3(60.0 g，42·9毫莫耳）加入乙醇（mo ml) 中使之懸浮，再在其中加入20%氫氧化鈀（6·〇 g)之乙醇懸 浮液。繼而加入為氫元素來源之4 -甲基環己烷（丨2 〇 m 1， 9 3 · 5耄莫耳）’加熱回流4小時後，過滤除去觸媒。殘逢以 加溫之乙醇洗淨。將濾液置於室溫所產生之白色沉澱物過 濾，及減壓乾燥。所得到之粉體在乙醇：水（9 2 : 8，3 . 5 L)中懸浮，一邊攪捽一邊加熱溶解後，置於室溫以再度產 生白色沉澱物。將沉澱物過濾，並將濾取之餅塊進行減壓 乾燥，可得到白色粉末。產量為3 5.0 g (9 5 %)。 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公爱) 555558 A7 B7 五、發明説明（2l [a] ^j^ + 43. 6。（cl· 〇. 口比淀）；mpl89. 5 —190· 5°C ; ·負-FABMS m/z 8 5 7 (M-H) " ; I R (cm'\ KB |

I r) 330 0, 293 0, 285 0, 164 0, 154 0, 147 0，1070 ; 1H~NMR (5 0 0MHz, C r D Γ N) (58. 47 (1H, dr J.=='8. 5 Hz) , 5, 58 (1H, d，J-3. 7Hz) , 5. 2 7 (1H, m) , 4， 6 3 - 4. 7 0 (2 H，m) , 4, 5 6 (1H，m) , 4· 5 2 (1H, t，J =6· 1Hz), 4· 3 7-4. 4 7 (4H, m), 4. 3 3 (2H, in) , 2. 45 (2H, t, J -7. 3Hz) , 2. 2 5 -2. 3 4 (1H, m)，1. 8 7 — 1, 97(2H, m), 1, 7 8 - 1. 85 (2 H, m)· 1. 62-1· 7 2 (1H, m)，1. 2 6-1· 4 5 (6 6 H· m) , 0. 88 (6H. t， J=6· 7Hz),13c-NMR(125MHz, C^DgN) 5173. 2 (s) , 101. 5 (d) , 7 6· 7 Cd) , 7 3. 0 (d)，7 2· 5 (d), 71. 6 (d) , 71. 0 (d) , 70. 3 (d) , 68, 7 (t), 6 2. 7 (t) , 5 1. 4 (d) , 3 6, 8 (t) , 3 4, 4 (t) , 3 2. 1 (t), 30· 4 (t), 30. 2 (t), 30· 03 (t)· 30. 00,(t), 29· 9 3 (t) / 2 9. 8 7 (t) , 2 9. 8 1 (t) , 2 9, 7 6 (t) , 2 9. 6 (t)，26· 5 (t), 26. 4 (t), 22，9 (t), 14· 3 (q)。 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 555558 A7

[冷凍乾燥組合物；I (1)活性成分之溶劑之選擇 實驗條件 首先，稱取使濃度成為10 " g/ml之、舌 (KRN700〇)1 mg，在1〇〇 ml之各種溶劑（表3’)中4成分 。0恆溫浴中，攪拌20分鐘以測試其溶解情形。對於’於 旎溶解而得到1 〇 “ g/ml濃度之溶劑，以同樣的方法、麪疋 其疋否具有使濃度達到丨〇 〇 # g / m 1之溶解力。對於被岁I弋 具有使濃度達到1 〇 〇 # g / m 1之溶解力之溶劑，以同樣的、 法，測試其是否具有使濃度達到2〇〇 # g/ml<溶解力，Z 流水冷卻後判定溶解性。 溶解性之判定，係以後面所述之試驗判定。首先，將各 樣本裝入5 ml容量之無色透明玻璃小瓶中約15 ml後密封 。將容器之外部清理乾淨，在暗室中白色光源之正下方， 照明度約5 0 0 0米燭光之位置，以肉眼觀察時，澄清且認不 出析出物’則判定為溶解。 結果如表3所示。 表3 活性成分（K R N 7 0 0 〇)之濃度 溶劑名 l〇//g/ml 100^g/ml 蒸餾水 + IN HC1 + IN NaOH + -26- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 200 β g/ml

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k 555558 A7 ------ 五、發明説明（23 ) 丙二醇 一 + 聚乙二醇400 — + 油_- + 一乙醇_- — — 〇. 5 % 吐溫 2 0 一 — _ 〇 · 5 % 吐溫 8 0 一 + 〇.5%Clemofoa + 〇 . 5 % H C Ο 50 + 〇.5%HCO 60 + 〇 . 5 %Pol〇xamer + :188_____ 註）溶解性之判斷（目視）：+不溶解（或析出） 〜溶解 由以上之結果，雖然乙醇或〇·5%吐溫20可被考慮做為溶 劑，但100。/。乙醇實用上不適合，故選擇以〇·5〇/〇吐溫2〇水 溶液做為溶劑。 (2 )溶劑最適添加量之檢討 實驗條件 首先’將吐溫2 0依表4所列各濃度以蒸餘水溶解。其次將 活性成分（K RN 7 0 0 0)各秤取2 0 m g，將各濃度之吐溫溶液 1 0 0 m 1，於8 0 °C恆溫浴中，攪拌2 0分鐘以測試其溶解情形 。用流水冷卻後以0.22 // m之過濾器過濾，所得到的各種 溶液各取2 ml裝入5 ml容量之無色透明玻璃小瓶中後密封。 此種樣本在2 5 °C保存，2週後判定溶解性，溶解性判定之 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 555558 五、發明説明（μ 後繼續保存個月之後再度判定溶解性 溶解性之判定，你脱1 洛解性。 色光源之正下彳昭…卜部清理乾淨，在暗室中白 察時，澄清且-不二明度約5000米濁光之位置’以肉眼觀 妹吳“ 出析出物，則判定為溶解。 肩Μ #所7^。表中，保存後之經時變化，係以溶液在 原樣保存情況下之溶解性表示。 表4 KRN7〇〇〇 吐溫2 0 (β g/ml) (%) 200 200 0.2 200 0.3 200 0.5 200 1.0 200 2.0 200 4.0 200 8.0 由以上之結果，雖可判 2週 25°C，1個月 所必要’但只由25t，1個月之數據，也不足以充分判定吐 溫2〇可做為實用上之製劑。因此，為能維持保存下之溶解 性’乃進行冷凍乾燥製劑之檢討。 (3 )冷凍乾燥製劑化之檢討 首先，將吐溫20依表5所列各濃度以蒸餾水溶解。其次將 -28- 本紙適用中國國—家標準(CNS) A.4規格(210X297公I) 555558

活性成分（KRN7000)各秤取20 mg ,將各濃度之吐溫溶液 1〇〇 ml，於80。(：恆溫浴中，攪摔2〇分鐘以測試其溶解情形 。用流水冷卻後以0.22 # m之過濾器過濾，所得到的各種 溶液各取1 ml裝入5 ml容量之無色透明玻璃小瓶中冷凍乾 燥。冷凍乾燥條件：-4 0t之2小時預備冷凍後，在_2〇它 24小時、l〇°c 12小時，最後進行25t之5小時乾燥，於是 可得到冷凍乾燥產物。這期間之真空度為〇丨托以下。疋 冷凍乾燥步驟終了後，所得到之冷凍乾燥組合物以注射 用蒸館水1 m 1再溶解，放置3 〇分鐘使再溶解時的氣泡消失 後，判定溶解性。 溶解性之判定，係將容器之外部清理乾淨，在暗室中白 色光源之正下方，照明度約5000米濁光之位置，以肉眼觀 察時’澄清且認不出析出物，則判定為溶解。 結果如表5所示。 表5 活性成分(KRN7000；) (β g/ml) 吐溫2 0 剛冷康乾燥後之再溶解性 (%) (目視） 200_ 0.5 + 200_ 1.0 + 200_2J_+ 由以上結果判定只使用吐溫20不適合做成冷凍乾燥製劑。 (4 )適合冷凍乾燥賦形劑之檢討1 實驗條件 冷凍乾燥製劑之賦形劑可使用種種單糖及雙糖來檢討。 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 555558 A7 B7 五、發明説明（26 ) 再者’以後之檢討係將活性成分（K RN 7 0 0 0)濃度固定在 200 # g/ml，又吐溫20由於安全性上不能添加過多量，濃 度固定在0.5 %。 首先，將吐溫2 0配製0 · 5 %、糖類依表6所列各濃度，以 蒸餘水將兩者溶解。其次將活性成分（KRN7000)各秤取20 m g ’將各溶劑1 〇 〇 m 1於8 〇它恆溫浴中，攪拌2 〇分鐘以測 4其落解情形。用流水冷卻後以〇 · 2 2 # m之過濾器過濾， 所4于到的各種溶液各取1 m 1裝入5 m 1容量之無色透明玻璃 小瓶中冷凍乾燥。冷凍乾燥條件：_4(rCi2小時預備冷凍 後’在-2 0 C 2 4小時、1 〇。〇 1 2小時，最後進行2 5 °C之5小 時乾燥，於是可得到冷凍乾燥產物。這期間之真空度為 托以下。 冷凍乾燥步驟終了後，所得到之冷凍乾燥組合物以注射 用蒸餾水1 m 1再溶解，放置3 〇分鐘使再溶解時的氣泡消失 後，判定溶解性。 落解性之判定，係將容器之外部清理乾淨，在暗室中白 色光源之正下方，照明度約5〇〇〇米燭光之位置，以肉眼觀 祭時’澄清且認不出析出物，則判定為溶解。 結果如表6所示。 表6 賦形劑 果糖5 % 果糖1 0 % 剛冷凍後之再溶賦形劑 解性 + 乳糖5 % + 乳糖1 0 % 剛冷凍後之再溶 解性 + + -30-

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5|4.3% 醇 8·60/〇 土梨醇5 % 山梨醇1 Ο % 麥芽糖1.5%

(5 )適合冷凍乾燥賦形劑之檢討2 實驗锋^ 觀察添加甘露醇及蔗糖之冷凍乾燥製劑之經時變化。 』首先，將吐溫20配製0·5%、糖類依表7所列各濃度，以 蒸餾水將兩者溶解。其次將活性成分（KRN7〇〇〇)各秤取2〇 mg，將各溶劑10〇 mls8〇t恆溫浴中，攪拌2〇分鐘以測 試f溶解情形。用流水冷卻後以0.22" m之過滤器過滤， 所得到的各種落液各取1 ml裝入5 ml容量之無色透明玻璃 小瓶中冷凍乾燥。冷凍乾燥條件^4〇ti2小時預備冷凍 後’在-20 t 24小時、lot 12小時，最後進行2 5之5小 時乾燥，於是可得到冷凍乾燥產物。這期間之真空度為〇 · i 托以下。 ' 冷凍乾燥步驟終了後，所得到之冷凍乾燥組合物在25。〇 保存。經一個月保存後將該冷凍乾燥組合物以注射用蒸餾 水1 m 1再溶解，放置3 〇分鐘使再溶解時的氣泡消失後，判 定溶解性。溶解性判定之後繼續保存，四個月之後再度判

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k：

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定溶解性。 溶解性之判定， 色光源之正下方， 察時，澄清且認不 結果如表7所示 係將容器之外部清理乾淨，在暗室中白 照明度約5000米濁光 〒白 屮姑山t 不螂尤又位置，以肉眼觀 出析出物’ _定為溶解。

、薦糖之冷束乾燥製劑 即使2 5 °C、一個月後也 由以上之結果，可知添加甘露醇 ，也比0 · 5 %吐溫2 0溶液製劑安定， 可溶解。 再者，為了檢討可能長期保存之處方，以下將進行添加 劑之檢討。 (6)添加劑之檢討：保存時使再溶解性改善之添加劑之檢討 (i)賦形劑中選擇甘露醇之情況 實驗條件 首先，將吐溫2 0配製〇 · 5 %、甘露醇及各種添加劑依表8 所列各濃度配製，以蒸餾水將各個溶解。其次將活性成分 (KRN7000)各秤取20 mg，將各溶劑1〇〇 mw8〇t恆溫 浴中’攪捽20分鐘以測試其溶解情形。用流水冷卻後以 〇 · 2 2 # m之過滤器過滤，所得到的各種溶液各取1 m 1裝入5 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 555558 五、發明説明（29 ml。谷K無色透明玻璃小瓶中冷康乾燥。冷 40C之2小時預備冷;東後，在小時 ^件··- ’最後進行加之5小時乾燥，於是可得到料 ^争 這期間之真空度為0 · 1托以下。 物。 =隸燥步料了後，所制切純燥以物在 :存。=月保存後將該冷; 東乾燥組合物以注射用蒸館 iL: 放置30分鐘使再溶解時的氣泡消失後，判 疋浴解性。溶解性判定之後繼續保存，四 定溶解性。 1瓦丹反α 裝 溶解性之判^，係將容器之外部清理乾淨，在暗室中白 色光源之正下方’照明度約5000米燭光之位置，以肉眼觀 察時，澄清且認不出析出物，則判定為溶解。 結果如表8所示。 表8 訂 1 0〇/〇 去氧膽酸鈉1 % 線 15% + 15% 15% 15% 15% 去氧膽酸鈉1 % 甘油1 % 甘油0 . 1 % PEG400 1 % ++ .33-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 555558 A7 B7

由以上之結果判定，甘露醇1〇%為賦形劑時，由於去氧 膽酸鈉之添加，保存下之再溶解性有所改善。 (ii)賦形劑中選擇蔗糖之情況 實驗條件 首先，將吐溫20配製0.5%、蔗糖及各種添加劑依表9所 列各濃度配製，以蒸館水將各個溶解。其次將活性成分 (KRN7000)各秤取20 mg，將各溶劑1〇〇刎於“力恆田 浴中’攪拌20分鐘以測試其溶解情形。用流水冷卻後二 0.22㈣之過遽器職’所得到的各種溶液各取i μ裝入$ ml容量之無色透明玻璃小瓶中冷;東乾燥。冷;東乾燥條件：_ 40°C之2小時預備冷康後，在_2〇t24小時、小時 ，最後進行25。(；之5㈣乾燥’於是可得到 這期間之真空度為0.1托以下。 冷凍乾燥步驟終了後，所得到之冷凍乾燥組合物在价 f4或兼以此兩種度度保存。2 5它經-個月或5 0。°經 3曰保存後將該冷凍乾燥組合物 射用錢水1 ml再溶解 ，放置3〇分鐘使再溶解時的氣泡消失後

解性判定之後繼續保#，2^Cm Y 週後再度狀溶解性。 保存四個月，或5代保存2 溶解性之判定，係將容器之外 ^ ^ ^ T nr ' 邵β理乾淨，在暗室中白 = 万，照明度約5_米濁光之位置，〃肉眼觀 察時，泣且認不出析出物，則判定為溶 結果如表9所示。 ’

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555558 A7 B7 五、發明説明（3i ) 表9 蔗糖 添加劑 保存後之再溶解性（目視） 2 5〇C 2 5〇C 5 0°C 50°C 1個月 4個月 3日 2週 9.6% — 一 + + 9.6% 去氧膽酸鈉1 % 一 9.6% 去氧膽酸鈉0.1 % 一 + 9.6% PluronicF68 1% -— + 9.6% Pluronic F68 0.1% _ + 9.6% 丙二醇1% + 9.6% 甘油1 % + 9.6% 海藻酸0.1 % + 9.6% 甘胺酸0.1 % + 9.6% 甘胺酸1 % + 9.6% 組胺酸2 % 由以上之結果判定，蔗糖為賦形劑時，由於去氧膽酸鈉 、組胺酸之添加，保存下之再溶解性有所改善。 (i i i)去氧膽酸鈉和組胺酸之添加效果 實驗條件 不含糖作為賦形劑之情況下，去氧膽酸鈉和組胺酸添加 效果之調查。 首先，將吐溫20配製0.5%、及組胺酸或去氧膽酸鈉配製 1 ·〇%，以蒸餾水將各個添加劑溶解。其次將活性成分 -35- 本故張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X2970) "' ----

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(KRN7000)各秤取20 mg，將各溶劑⑽…於㈣伍溫 浴中’㈣20分鐘以測試其溶解㈣。用流水冷卻後以 〇.22/zm之過滤器過濾'’所得到的各種溶液各取} w裝入$ nU容量之無色透明玻璃小瓶中冷;東乾燥。冷;東乾燥條件：_ 4〇t之2小時預備冷;東後，在，。⑶小時、i〇ti2小時 ’最後進行25t之5小時乾燥’於是可得料隸燥產物。 這期間之真空度為0.1托以下。 冷;東乾燥步驟終了後’所得到之冷;東乾燥组合物在㈣ 保存。保存3日或2週後將該冷凍乾燥組合物以注射用蒸餾 水1 mi再溶解，放置30分鐘使再溶解時的氣泡消失後，判 定溶解性。 溶解性之判定，係將容器之外部清理乾淨，在暗室中白 色光源之正下方，照明度約5_米濁光之位置，以肉眼觀 察時’澄清且認不出析出物，則判定為溶解。 結果如表1 0所示。 表10 添加劑 保存後之再溶解性（目視） 5〇°C、3 日 50〇C、2週 組胺酸1 % + 去氧膽酸鈉1 % + 由以上結果，證明只有組胺酸、去氧膽酸鈉時並沒有效 果。 (7)最適處方之檢討 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公爱) 555558 A7 B7 五、發明説明（33 ) 實驗條# 首先，將吐溫20配製0.5%、蔗糖及組胺酸或去氧膽酸鈉 依表1 1所列各濃度配製，以蒸餾水將各個溶解。其次將活 性成分（KRN7000)各秤取20 mg，將各溶劑1〇〇⑹於“ °C恆溫浴中，攪摔20分鐘以測試其溶解情形。用流水冷卻 後以0.22/zm之過濾器過濾，所得到的各種溶液各取1 mi 裝入5 ml容量之無色透明玻璃小瓶中冷凍乾燥。冷凍乾燥 條件：-40°C之2小時預備冷凍後，在_2()它24小時、1〇ct 1 2小時，最後進行2 5 C之5小時乾燥，於是可得到冷凍乾 燥產物。這期間之真空度為〇 . 1托以下。 冷凍乾燥步驟終了後，所得到之冷凍乾燥組合物在以它 或50°C保存。25°C經2個月或50°C經2週保存後將該冷凍乾 燥組合物以注射用蒸餾水i ml再溶解，放置3〇分鐘使再、、容 解時的氣泡消失後，判定溶解性。25。㈣存2個月判定溶二 性之後繼續保存，4個月後再度判定溶解性。 溶解性之判定，係將容器之外部清理乾淨，在暗室中白 色光源之正下方，照明度約5 000米燭光之位置，以肉眼觀 察時，澄清且認不出析出物，則判定為溶解。 結果如表1 1所示。 表1 1 蔗糖 添加劑

裴 訂 保存後之再溶解性（目視） 25〇C 25°C 50°c 2個月4個$ 2週 -37-

555558 A7 B7 五、發明説明（ 34 ) 19.2% 去氧膽酸鈉0.1% + 19.2% 去氧膽酸鈉0.2 % + 19.2% 去氧膽酸鈉0.5 % + 19.2% 去氧膽酸鈉1 % + 19.2% 去氧膽酸鈉2 % + 9.6% 去氧膽酸鈉0.2 % + 9.6% 去氧膽酸鈉0.5 % — 一 9.6% 去氧膽酸鈉1 % — — 9.6% 去氧膽酸鈉2 % 一 — 4.8% 去氧膽酸鈉0.2 % + 4.8% 去氧膽酸鈉0.5 % 一 — 4.8% 去氧膽酸鈉1 % — — 4.8% 去氧膽酸鈉2 % — — 9.6% 組胺酸2 % — 7.9% 組胺酸0.5% + 6.9% 組胺酸1 % — 5.0% 組胺酸2% — 3.1% 組胺酸3 % — 1.1% 組胺酸4% + 5.1% 組胺酸1 % — 3.2% 組胺酸2 % 一 由以上之結果，證明在聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯及白 糖中，更進而適量摻合去氧膽酸鈉或組胺酸， 可使活性成 -38- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐)

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分冷凍保存後之經時再溶解性提昇。 (8)加熱溶解後冷卻條件之檢討1 首先，配製0.5%吐溫20、〇·75%組胺酸及5.6%蔗糖， 在蒸餾水中溶解。其次秤取活性成分（KrN70〇(〇8()〇 mg ，在先前溶劑4 L中，73 t加熱下，經3 〇分鐘攪拌，試將 其落解。溶解後分別取約5〇〇 mL，在攪拌下進行73— 3〇〇C(6^) ^ 73〇C-30〇C(23^) ^ 7 3 °C - 3 0 °C (1 2 0 ^) ^ 冷卻。冷卻後之各種溶液以〇.22/Zm之過濾器過濾，各取ι ml裝入5 ml容量之無色透明玻璃小瓶中冷凍乾燥。冷凍乾 燥條件：-50°C之5小時預備冷凍後，在_15〇C48小時、1〇 °C 1 2小時，最後進行2 5它之7小時乾燥，於是可得到冷束 乾燥產物。這期間之真空度為〇 . i托以下。 在各種冷卻條件下調製、過濾器過濾前後及冷凍乾燥步 驟終了後’所得到之冷凍乾燥組合物在室溫（2 5它）靜置3小 時後再溶解’測定濁度。再者，冷束乾燥組合物之濁度測 定，係以注射用蒸餾水1 m 1再溶解，放置3 〇分鐘使再溶解 時的氣泡消失再使用。 濁度測疋’首先’將濁度標準液（南嶺土 〇 · 1 m g / m L)以 蒸餾水稀釋50倍（高嶺土 2/zg/mL、濁度2·00)、稀釋loo 倍（高嶺土 Ι/zg/mL、濁度1.00)、稀釋200倍（高嶺土 〇5 # g / m L、濁度0 · 5 0)，調製各種稀釋液，再以蒸餾水為對 照，使用分光光度計（日立U-3 210)，在660 nm波長下測 疋吸光度’並由此求仔檢量線（Calibration curve)。接著 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

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以同樣條件求得各種溶液之吸光度，由先前之檢量線算出 各種溶液之濁度。 結果如表1 2所示。 表12 濁度 _冷卻條件 過濾前 過濾後 冷凍乾燥物 73°C — 30°C、6分 0.23 0.1 3 0.24 73°C->30°C、23 分 0.5 8 0.1 5 0.3 6 _ 73°C — 30°C、120 分 0.64 0.1 6 0.3 6 由以上之結果，證明冷卻條件為急冷時，可使活性成分 冷凍保存後之再溶解性提昇。 (9)加熱溶解後冷卻條件之檢討2 t驗條件 首先，配製0 · 5 %吐溫2 0、0 · 7 5 °/。組胺酸及5 · 6 %薦糖， 在蒸餾水中溶解。其次秤取活性成分（KRN7 00 0)8 00 mg ’在先前溶劑4 L中，7 3 °C加熱下，經3 0分鐘攪拌，試將 其溶解。溶解後分別取約5 00 mL，在攪拌下依下列所示進 行由急冷至徐冷六個速度之冷卻。 冷卻條件 降溫時間（平均降溫速度） ① 7 3 〇C — 3 0 〇C 4 分鐘（1 〇 · 7 5 °C / 分） ② 7 3 t — 3 0 〇C 6 分鐘（7 · 1 7 °C / 分） ③ 7 3 °C — 3 0 °C 7 分鐘（6 · 1 4 °C / 分） • 40- 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS) A4规格(210 x 297公釐) 555558 A7

Φ 7 3 °C 3 0 °C 1 〇 分鐘（4 · 3 0 °C / 分）7 3 °C 3 0 °C 2 3 分鐘（1 . 8 7 °C / 分） —空7 3 °C — 3 0 °C 1 2 0 分鐘（〇 , 3 6。^分、 冷卻後之各種溶液以〇.22/Zm之過滤器過滤，各取i m =入5 ml容量之無色透明玻璃小瓶中冷;東乾燥。冷;東乾燦 知件.-50。(：之5小時預備冷;東後，在]5<t48小時、1〇^ ^小時，最後進行25ti7小時乾燥，於是可得到冷凍乾 燥產物。這期間之真空度為0.1托以下。 冷凍乾燥步驟終了後，所得到之冷凍乾燥組合物在5 0 °c 保存2週後，測定再溶解液濁度。再者，冷凍乾燥組合物之 濁度測定，係以注射用蒸餾水丨ml再溶解，放置3〇分鐘使 再溶解時的氣泡消失再使用。 濁度測定’首先，將濁度標準液（高嶺土〇.1 mg/mL)以 蒸麵水稀釋50倍（高嶺土 2// g/mL、濁度2.00)、稀釋100 倍（高嶺土 1 # g/mL、濁度丨.〇0)、稀釋2〇〇倍（高嶺土 〇·5 # g/mL、濁度〇·5〇)，調製各種稀釋液，再以蒸餾水為對 照’使用分光光度計（日立υ·3 21〇)，在660 nm波長下測 疋吸光度’並由此求得檢量線（Calibration curve)。接著 以同樣條件求得各種溶液之吸光度，由先前之檢量線算出 各種溶液之濁度。 結果如表1 3所示。 -41- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公釐)

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表1 3 冷卻條件 濁度 ①_ 2.0 8 ②_ 2.67 _〇_ 3.3 1 _Φ_ 3.80 ⑤ 6.44 ⑥__18.84 由以上之結果，證明冷卻條件為急冷 冷凍保存後之經時再溶解性提昇。 [注射用冷凍乾燥組合物] 組合物1 可使活性成分

裝 • 葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 〇 ) •甘露醇 •溶劑（注射用墓餾永、_ 0.2 mg 5 mg 10 0 mg 適量 依照上述處方’在8 0 C加溫2 0分鐘，使α -葡萄糖基酿美 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著用流水冷卻15分& 後’以0 · 2 2 // m之過滤器過滤，進行冷;東乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物2 • 葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0 ) -42- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) ^ ------ 訂

555558 A7 B7 五、發明説明（39 ) •甘露醇 10 0 mg •去氧膽酸鈉 10 mg •溶劑ί注射用篡餾水） 合計 --- -USL Μ. 1 ml 依照上述處方，在8 0 °C加溫2 0分鐘， 使α -葡萄糖基醯基 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0 · 2 2 # m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物3 • «-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) 0 · 2mg •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 〇 ) 5 mg •蔗糖 10 0 mg 二(注射用基餾水） i商暑 合計 1 ml 依照上述處方，在8 0 °c加溫2 0分鐘， 使a -葡萄糖基醯基 鞘胺醇（K R N 7 0 0 0)完全順利溶解，接著以流水冷卻1 5分鐘 後，以0.22 // m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物4 • 葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) 0.2 mg •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0) 5 mg •蔗糖 96 mg •去氧膽酸鈉 5 mg 二-Μΐϋέ射用蒸餾； i齑吾 -43- 本紙張尺度適财® g家標準(CNS) 44規格( χ 297公爱)

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合計 ,、 1 ml 依照上述處方，在8 Ο X：加溫2 0分鐘，使π & , % α _匍萄糖基醯基 鞘胺醇（K R Ν 7 0 0 0)完全順利溶解，接著以 後 流水冷卻1 5分鐘 ’以0 · 2 2 # m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物5 • α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) 0.2 mg •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0) 5 mg •蔗糖 96 mg •去氧膽酸鈉 10 mg _•溶劑（注射用蒸餾水） 適量 合計 1ml 依照上述處方，在8 (TC加溫2 0分鐘，使α -葡萄糖基醯基 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0 · 2 2 # m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷束乾燥製劑。 組合物6 • α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) 0.2 mg •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0) 5 mg •蔗糖 96 mg •去氧膽酸鈉 20 mg •溶劍ί注射用蒸德水） 適量_ 合計 1ml 依照上述處方，在8 0 °C加溫2 0分鐘， 使α -葡萄糖基龜基 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 555558 A7 B7 五、發明説明（41 ) 銷胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0.22# m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物7• α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 〇)•蔗糖 •去氧膽酸鈉 溶劑（注射用蒸合計 依照上述處方，在801加溫20分鐘，使葡萄糖基酿基 鞠胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0.22# m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成 組合物8• α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 〇)•蔗糖 0.2 mg 5 mg 4 8 mg mg

ml 0.2 mg 5 mg 4 8 mg 〇 mg •去氧膽酸鈉

合計 1 ml 依照上述處方，在8 0 °C加溫2 0分鐘，佶& α _葡萄糖基醯其鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接薯η、、 ^$ Α况水冷卻丨5分4奢 後，以0.22 // m之過濾器過濾，進行洽洁紅 刀裡 果乾燥以製成注射 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

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用冷凍乾燥製劑。 組合物9 • 葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2〇) •蔗糖 •去氧膽酸鈉 _•溶劍Π主射用蒸飽水） 0.2 mg 5 mg 4 8 mg 2 0 mg 合計 ---— JgJ 1 ml 依照上述處方，在8 0 C加溫2 0分鐘，使α _葡萄糖基醯基 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0 · 2 2 # m之過滤器過滤，進行冷滚乾燥以製成注射 用冷柬乾燥製劑。 組合物1 0 0.2 mg 5 mg 7 5.2 mg 5 mg _適量 1 ml • α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0) •蔗糖 •去氧膽酸鈉 •溶劑（注射用蒸餾水)___ 合計 依照上述處方’在8 0 C加溫2 0分鐘’使α •葡萄糖基醯基 稍胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0.22 之過滤器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物1 1 • 46- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 555558

• α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN 7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0 ) •蔗糖 •去氧膽酸鈉 二溶劑（注射用蒸餾水） _ 0.2 mg 5 mg 72.9 mg 1 0 mg 一滴量 & 一计 1 ml 依照上述處方，在80 °C加溫20分鐘，使α-葡萄糖基醯基 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後’以0 · 2 2 # m之過濾器過濾’進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物1 2 • α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0) •蔗糖 •組胺酸 二溶劑Π主射用蒸餾永)___ 合計 0.2 mg 5 mg 96 mg 2 0 mg i高量 — 1 ml 依照上述處方，在8 0 °C加溫2 0分鐘，使α -葡萄糖基醯基 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0 · 2 2 β m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物1 3 • α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0 ) -47- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)

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555558 發明説明（44 •蔗糖 6 9 mg •組胺酸 10 mg —洛齋1 (注射用蒸i留7jc ) 高 合計 --- -iiSL 至： 1ml 依照上述處方’在8 〇 加溫2 〇分鐘， 使α -葡萄糖基醯基 鞘胺醇（K RN 7 0 0 0 )冗全順利溶解，接著以流水冷卻丨5分鐘 後，以0.2 2 # m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物1 4 • 葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) 0.2 mg •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 〇) 5 mg •蔗糖 5 1 mg •組胺酸 10 mg •溶劑Π主射用蒸餾；ίΟ 搞暑 合計 1 ml 依照上述處方，在8 0 °C加溫2 0分鐘， 使α -葡萄糖基醯基 雜胺醇（K R N 7 0 0 0)完全順利溶解，接著以流水冷卻1 5分鐘 後’以0 · 2 2 // m之過滤器過滤，進行冷柬乾燥以製成注射 用冷來乾燥製劑。 組合物1 5 • α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) 0.2 mg •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0) 5 mg •蔑糖 5 0 mg •組胺酸 2 0 mg -48- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 555558 A7 B7 五 發明説明（45 )

溶劍（注射用蒸雀留水） 合計 量 ml • A 111 1 依照上述處方，在8 0 °C加溫2 0分鐘，估 ^ .χ Α -葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接菩以、、 伐者以况水冷卻15分鐘 後，以0.22 // m之過濾器過濾，進行Α& ▽ /東乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物1 6 • 葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 0 ) •蔗糖 •組胺酸 •溶劑Π主射用蒸餾水)__ 合計 0.2 mg 5 mg 3 2 mg 20 mg 摘量 — 1 ml 依照上述處方’在8 0 C加溫2 0分鐘’使q ·葡萄糖基酿基 鞘胺醇（KRN7 000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0 · 2 2 // m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物1 7 • α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) 0.2 mg •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫20) 5 mg •庶糖 3 1 in g •組胺酸 30 mg •溶劑（注射用蒸餾水)____適量__ 合計 1 m 1 -49- 本紙張尺度適用中囷國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)

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線 555558

依照上述處方，在80。0加溫20分鐘，使α_葡萄糖基酿基 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後，以0.22 之過濾器過濾，進行冷凍乾燥Ζ製成注射 用冷凍乾燥製劑。

組合物1 S α -葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) 聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2〇) 蔗糖 組胺酸 0.2 mg 5 mg 6 8.8 mg

合計 1 ml 依照上述處方，在80 °C加溫20分鐘，使 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻^分二 後，以0.22 /zm之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 組合物1 9

裝 訂 • α-葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 〇 ) •蔗糖 0.2 mg

威. •組胺酸 5 mg 5 6 mg

mg 適量 合計 1 ml 使α -葡萄糖基醯基 依照上述處方，在8 0 °C加溫2 0分鐘， 鞘胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 -50· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 555558 555558 A7 B7

五、發明説明 乾燥以製成注射 0.2 mg 5 mg 5 1.2 mg 後’以0.22 // m之過濾器過濾，進行冷;東 用冷凍乾燥製劑。 組合物2 0 • α -葡萄糖基醯基鞘胺醇（KRN7000) •聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯（吐溫2 〇) •蔗糖 •組胺酸

…丨 1 ml 依照上述處方，在80 t加溫20分鐘，使葡萄糖基醯基 稍胺醇（KRN7000)完全順利溶解，接著以流水冷卻15分鐘 後以0 · 2 2 # m之過濾器過濾，進行冷凍乾燥以製成注射 用冷凍乾燥製劑。 冷凍乾燥製劑之滚解拇 有關組合物1〜20之冷凍乾燥製劑，在進行剛冷凍乾燥後 及經時保存後之溶解性評價時，如下表14所示者，任何一 個均得到良好之溶解性。 表14 組合物 保存後之再溶解性（目視） 編號 2 5t：

4 0°C

5 0°C 丄個月2個月!個月2個月4個月2週

555558 A7 B7 五、發明説明（48 ) 3 — 4 一一 6 — 一 — _ 7 —— — — 8 - - - - 9 —— —— —— —— 12 一 1 3 - 14 - 15 — 16 — 17 — 18 — 一 一 19—— —— 一一 — 2 0 — _ 一 — 一：澄清而看不見析出物 產業上之利用性 依據本發明，在對水溶解性低之活性成分神經鞘糖脂質（ 糖部份為單糖所形成之α-葡萄糖基醯基鞘胺醇）中，以聚氧 化山梨糖醇酐脂肪酸酯及雙糖（蔗糖等）或單糖（葡萄糖或甘 露醇等）摻合而進行冷柬乾燥，活性成分在溶劑中之溶解性 -52- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂

Claims (1)

1. 555558 第087101523號專利申請案 g 土文申請專利範圍替換本（92年3月）D8 六、申請專利範圍 /,. 。，' ’ 扣年月曰 _充 1. 一種冷凍乾燥組合物，含有下列結構式（A)所示之活性化 合物（α -糖基醯基鞘胺醇）、相對於活性化合物1重量份之 聚氧化山梨糖醇酐脂肪酸酯100〜1000重量份、以及雙糖 或單糖100〜10000重量份：

   [式中，Ri為Η或ΟΗ ; X為21〜25中之任一整數； 為一 CH(OH)(CH2)YCH3 (此處，Υ為 5〜17 中之任一 整數）； R3及R4之任一者為Η，且另一者為Η、〇H、NH2或 NHCOCH3 ; 民5及116之任一者為Η，且另一者為OH ; 117及118之任一者為Η，且另一者為OH ; 為 Η、CH3 或 CH20H]。 2·根據申請專利範圍第1項之冷;東乾燥組合物，其含有下歹】 結構式（A’）所示之α -糖基醯基鞘胺醇、聚氧化山梨糖哮 酐脂肪酸酯、以及雙糖或單糖：

   本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 555558 8 8 8 8 A BCD 々、申請專利範圍

   [式中， ^^為^!或0H ; X為7〜25中之任一整數； R 2為下列（a)〜（e)所定義之取代基中之任一者（此處，γ 為5〜17中之任一整數）： (a) - CH2(CH2)YCH3， (b) — CH(OH)(CH2)YCH3， (c) 一 CH(OH)(CH2)yCH(CH3)2， ⑷ 一 CH = CH(CH2)yCH3，及 (e) —CH(OH)(CH2)YCH(CH3) CH2CH3 ;以及 R3〜R9為下述i)〜v)所定義之取代基： i) R3、R6 及 118為11 時 114為11、OH、NH2*NHCOCH3 ; 115為011 ; RAOH ; 119為11、CH34CH2OH ; ii) R3、R6 及 117為11 時 R4為 Η、OH、NH2*NHCOCH3 ; R5 為 OH ; R^OH ; 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 555558 A8 B8 C8

   R9為Η、ch3或ch2oh ; iii) R4、R6及R7為 H 時 為Η、OH、NH2*NHCOCH3 ; R5 為 OH ; R^OH ; R9 為 H、CH3 或 CH2OH ; iv) R4、R5 及 R7為 H 時 R3、R6 及R8 為 OH ; R9 為 H、CH3 或 CH2OH ; v) R3、R5&R7為 H 時 、R6 及 RA〇H ; R9 為 H、CH3 或 CH2OH]。 3·根據申請專利範圍第i項之冷凍乾燥組合物，其中該a _糖 基酿基鞘胺醇之R;、R0及代表Η，I、r5&R7代表 OH，且 R9 代表 ch2oh。 4·根據申請專利範圍第3項之冷凍乾燥組合物，其中該〇_糖 基醯基鞘胺醇之112代表取代基（b)、（c)或（e)。 5·根據申請專利範圍第4項之冷凍乾燥組合物，其中該α _糖 基醯基鞘胺醇之1^為11，且R2為取代基（b)。 6·根據申請專利範圍第5項之冷凍乾燥組合物，其中該烷基 中亞甲基之數目X為21〜25之整數，而R2基中之γ為 1 1 〜1 5。 7·根據申請專利範圍第6項之冷凍乾燥組合物，其中該α -糖 基醯基鞘胺醇為（2 S、3 S、4R) -1 - ( a - D -吡喃型半乳糖 氧基）-2 -廿六醯胺基-3,4 -十八虎二醇。 8.根據申請專利範圍第1項之冷凍乾燥組合物，其中該雙糖 -3- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x297公釐） 555558 六 、申請專利範圍 或單糖為蔗糖、甘露醇或葡萄糖。 其中該雙糖 其中該雙糖 其中該雙糖 更進而含有· 9.根據申請專利範圍第7項之冷凍乾燥組合物 或單糖為蔗糖、甘露醇或葡萄糖。 讪根據申請專利範圍第丨項之冷凍乾燥組合物 或單糖為蔗糖。 11·根據中請專利範圍第7項之冷凍乾燥組合物 或單糖為蔗糖。 12·根據申請專利範圍第8項之冷凍乾燥組合物 去氧膽酸鋼或組胺酸。 13.根據申請專利範圍第n項之冷凍乾燥组合物，更進而▲ 有去氧膽酸鈉或組胺酸。 s 14·根據申請專利範圍第8項之冷凍乾燥組合物，其中相對於 1重量份之α_糖基醯基鞘胺醇，含有聚氧化山梨糖醇轩= 肪酸酯10〜1 000重量份及雙糖或單糖1〇〇〜1〇〇〇〇重量= 15.根據申請專利範圍第1 1項之冷凍乾燥組合物，其中相對 於1重量伤之α -糖基醯基鞘胺醇’含有聚氧化山梨糖醇奸 脂肪酸酯10〜1000重量份及雙糖或單糖1〇〇〜1〇〇〇〇重量 份。 16·根據申請專利範圍第1 2項之冷凍乾燥組合物，其中相斜 於1重量份之α -糖基醯基鞘胺醇，含有聚氧化山梨糖醇奸 脂肪酸酯10〜1 000重量份、雙糖或單糖100〜1〇〇〇〇重量 份、去氧膽酸鈉或組胺酸1 0〜1 0 0 0重量份。 17·根據申請專利範圍第1 3項之冷凍乾燥組合物，其中相對 於1重量份之α -糖基醯基鞘胺醇，含有聚氧化山梨糖醇肝 脂肪酸酯10〜1000重量份、雙糖或單糖100〜10000重量 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公董) 555558 AS B8 C8 _____ D8 六 申請專利範圍 份、去氧膽酸鈉或組胺酸10〜1000重量份。 18·根據申請專利範圍第1至1 7項中任一項之冷凍乾燥組合物 ’其為注射用組合物。 19· 一種冷凍乾燥組合物之製造方法，其係將申請專利範圍第 1至1 7項中任一項之組合物的各成分於6 5〜9 〇 t溶解於水 性落劑’再將所得之溶液以每分鐘1 · 〇 °C以上之降溫速度 冷卻後’進行冷凍乾燥之步騾。 2〇·根據申請專利範圍第1 9項之方法，其中係將該溶液以每 分鐘1 · 5 °C以上之降溫速度急速冷卻。 21·根據申請專利範圍第1 9項之方法，其中係將該溶液以每 分鐘2.0°C以上之降溫速度急速冷卻。 22·根據申請專利範圍第丨9項之方法’其中係將該溶液以每 分鐘4 · 0 °C以上之降溫速度急速冷卻。 本紙張尺度適州中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）